CZ288434B6 - Dihydrochloride trihydrate of (R)-3-(1H-indol-3-yl)-1-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-piperid-1-yl)piperid-1-yl)acetyl/-amino]propane, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof - Google Patents

Description

Oblast techniky

Tento vynález poskytuje novou heterocyklickou sloučeninu a farmaceutický prostředek s jeho obsahem a použití takové sloučeniny k ošetřování nebo prevenci stavů spojených s přebytkem tachykininu.

Dosavadní stav techniky

Tachykininy tvoří skupinu peptidů, které sdílejí obecný amidátovaný karboxylový koncový řetězec vzorce

Phe-Xaa-Gly-Leu-Met-NH₂, kteiý je zde dále označován jako SEQ ID č. 1. Substance P byla prvním peptidem z této skupiny, který byl izolován, třebaže jeho čištění a určení jeho prvotního řetězce se nepodařilo dříve než v roce 1970. Substance P obsahuje řetězec aminokyseliny vzorce

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly—Leu-Met-NH₂, který je zde dále označován jako SEQ ID č. 2.

Mezi rokem 1983 a 1984 několik výzkumných skupin uvedlo, že izolovalo dva nové savčí tachykininy, nyní označované jako neurokinin A (také známý jako substance K, neuromedin L a neurokinin a) a neurokinin B (také známý jako neuromedin K a neurokinin β), viz J. E. Maggio, Peptides, 6 (Supplement 3), 237-243 /1985/, kde se uvádí přehled těchto objevů. Neurokinin A obsahuje dále uvedený řetězec aminokyselin vzorce

His-Lys-Thr-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH₂, který se zde v následující části označuje jako SEQ ID č. 3. Struktura neurokininu B je tvořena dále uvedeným řetězcem aminokyselin vzorce

Asp-Met-His-Asp-Phe-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH₂, který je v následující části označován jako SEQ ID č. 4.

Tachykininy, které jsou široce distribuovány jak v centrálním nervovém systému, tak v periferním nervovém systému, se uvolňují z nervů a uplatňují se při různých biologických akcích, které, ve většině případů, závisí na aktivaci specifických receptorů exprimovaných na membráně cílových buněk. Tachykininy jsou také produkovány řadou ne-neurálních tkání.

Savčí tachykininy, substance P, neurokinin A a neurokinin B, působí třemi hlavními receptorovými podtypy, označovanými jako NK-1, NK-2 a NK-3. Tyto receptory jsou přítomny v různých druzích orgánů.

Substance P se pokládá mimo jiné za zapojenou do neurotransmise vjemů bolesti, mezi které se zahrnuje bolest spojená s migrénou hlavy a s artritidou. Tyto peptidy se také účastní při gastrointestinálních poruchách a při chorobách gastrointestinálního traktu, jako při zánětlivém

-1CZ 288434 B6 onemocnění tlustého střeva. Tachykininy také hrají úlohu v řadě jiných nemocí, jak bude diskutováno dále.

Při pohledu na široký počet klinických nemocí spojených s přebytkem tachykininu, vývoj 5 antagonistů tachykininového receptorů bude sloužit ke kontrole těchto klinických stavů. Prvními antagonisty tachykininového receptorů byly peptidové deriváty. U těchto antagonistů bylo odzkoušeno, že nacházejí omezené farmaceutické použití, pro jejich metabolickou nestabilitu.

Nedávné publikace popisují nově skupiny antagonistů nepeptidylového tachykininového recep10 toru, které obecně mají větší orální biologickou použitelnost a metabolickou stabilitu než dřívější skupiny antagonistů tachykininového receptorů. Příklady takových novějších antagonistů nepeptidylového tachykininového receptorů se nacházejí v US patentu č. 5 328 927, který byl vydán dne 12. července 1994, US patentu č. 5 360 820, který byl vydán dne 1. listopadu 1994, US patentu č. 5 344 830, který byl vydán dne 6. září 1994, US patentu č. 5 331 089, kteiý byl vydán dne 19. července 1994, evropské patentové publikaci č. 591 040 Al, zveřejněné dne 6. dubna 1994, v publikaci podle smlouvy o patentové spolupráci (PCT) WO 94/01402, zveřejněné dne 20. ledna 1994, v publikaci podle smlouvy o patentové spolupráci (PCT) WO 94/04494, zveřejněné dne 3. března 1994 a také v publikaci podle smlouvy o patentové spolupráci (PCT) WO 93/011609, zveřejněné dne 21. ledna 1993.

V podstatě tento vynález skýtá způsoby přípravy účinného antagonisty nepeptidových tachykininových receptorů. Na základě své nepeptidové povahy, sloučenina podle tohoto vynálezu netrpí nedostatky v důsledku své metabolické nestability, která je známa u antagonistů tachykininového receptorů na bázi peptidu.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je nová sloučenina, kterou je trihydrát dihydrochloridu (R)-3-(lH30 indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu vzorce

• 3 H₂O

Předmětem tohoto vynálezu je také farmaceutický prostředek, jenž spočívá v tom, že jako aktivní složku obsahuje trihydrát dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)-piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu zmíněný výše, dohromady s alespoň jednóu farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, ředidlem nebo pomocnou látkou pro tuto sloučeninu.

Předmětem tohoto vynálezu je konečně trihydrát dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu zmíněný výše, k výrobě léčiva pro použití při ošetřování nebo prevenci stavů spojených s přebytkem tachykininů.

Dále se uvádí podrobnější popis tohoto vynálezu v širších souvislostech.

Předmětná sloučenina představuje nejvýhodnější ze sloučenin dále uvedeného obecného vzorce I. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I

(I) \—/ ve kterém m a n jsou navzájem nezávisle čísla od 0 do 6,

Z znamená skupinu vzorce -(CHR⁴)p-(CHR⁶)_q-, kde p znamená číslo 0 nebo 1, q představuje číslo 0 nebo 1 a

R⁴ a R⁶ jsou nezávisle na sobě vybrány ze souboru sestávajícího z atomu vodíku a alkylové skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

, CH—, CH-AA

N-R^anebo CH-NR^bR^c, kde R^a, R^b a R^c jsou nezávisle na sobě vybrány ze souboru sestávajícího z atomu vodíku a alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, a

R¹ a R² znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, atom halogenu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinu, trifluormethylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu,

-3CZ 288434 B6 spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce Ha

Y N. ^.c JL <Ci-Cj alkyl) vy \<ch₅< ^xo^z v (Ila) nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce III

nebo její solí, popřípadě v přítomnosti báze.

Byl nalezen nový způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I

(i), ve kterém m a n jsou navzájem nezávisle čísla od 0 do 6,

Z znamená skupinu vzorce -(CHR⁴)p-(CHR⁶)q-, kde p znamená číslo 0 nebo 1, q představuje číslo 0 nebo 1 a

R⁴ a R⁶ jsou nezávisle na sobě vybrány ze souboru sestávajícího z atomu vodíku a alkylové skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

-4CZ 288434 B6 ~O' ·Ό· ~Ο·

-Ο “7D' --Q.

N-R^anebo CH-NR^bR^c, kde R^a, R^b a R^c jsou nezávisle na sobě vybrány ze souboru sestávajícího z atomu vodíku a alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, a

R¹ a R² znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, atom halogenu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinu, trifluormethylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, kteiý spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II

(II) nebo její sůl, nechá reagovat s vhodným halogenformiátem a potom se výsledný meziprodukt nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce III

(III) nebo její solí, popřípadě v přítomnosti báze.

V souvislosti s výše uvedeným způsobem se používají nové meziprodukty obecného vzorce

ve kterém m představuje číslo od 0 do 6,

-5CZ 288434 B6 znamená skupinu vzorce -(CHR⁴)p-(CHR⁶)_q-, kde p znamená číslo 0 nebo 1, q představuje číslo 0 nebo 1 a

R⁴ a R⁶ jsou nezávisle na sobě vybrány ze souboru sestávajícího z atomu vodíku a alkylové skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a

R¹ a R² znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, atom halogenu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinu, trifluormethylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Při jiném provedení se také vyskytují nové meziprodukty obecného vzorce II nebo jejich soli.

Výrazy a zkratky případně používané v připojených příkladech mají své obvyklé významy, pokud není uvedeno jinak. Tak například „°C“ se vztahuje ke stupňům Celsia, „N“ se vztahuje k normálnímu nebo normalitě, „mol“ se týká molámího nebo molů, „mmol“ se vztahuje k milimolámímu nebo milimolům, „g“ označuje gram nebo gramy, „kg“ se vztahuje ke kilogramu nebo kilogramům, „1“ se týká litru nebo litrů, „ml“ znamená mililitr nebo mililitry, „M“ se týká molámího nebo molarity, „MS“ se vztahuje k hmotnostní spektrometrii a „NMR“ se týká nukleární magnetické rezonanční spektroskopie.

Pokud se zde používá výraz „alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku“, týká se přímého nebo rozvětveného monovalentního nasyceného alifatického řetězce, který obsahuje od 1 až do 6 atomů uhlíku a zahrnuje methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terc.-butyl, pentyl, isopentyl a hexyl, přičemž výčet není na ně omezen. Výraz „alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku“ zahrnuje ve své definici výraz „alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku“.

Pod výraz „atom halogenu“, popřípadě halogen, se zahrnuje atom chloru, fluoru, bromu a jodu.

Výraz „halogenformiát“, jak se zde používá, se týká esteru kyseliny halogenmravenčí, přičemž tato sloučenina má obecný vzorec ve kterém

X znamená atom halogenu a

R^d představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Výhodné halogenformiáty jsou bromformiáty a chlorformiáty, přičemž obzvláště výhodné jsou chlorformiáty. Takové halogenformiáty, kde R^d znamená skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku jsou obzvláště výhodné. Nej výhodnější sloučeninou je isobutylchlorformiát.

Výraz „alkylthioskupina s 1 až 6 atomy uhlíku“ představuje přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec, který obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku, připojený k atomu síry. Mezi obvyklé alkylthioskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku se zahrnuje methylthioskupina, ethylthioskupina, propylthioskupina, isopropylthioskupina, butylthioskupina a podobně.

-6CZ 288434 B6

Výraz „alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku“ představuje přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec, který obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku, připojený k atomu kyslíku. Mezi obvyklé alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku se zahrnuje methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyaminoskupina je stabilní za podmínek následujících reakcí v jiných polohách intermediámí molekuly a může se selektivně odstranit ve vhodném okamžiku bez narušení zbytku molekuly zahrnující libovolné jiné skupiny chránící aminoskupinu. Výhodné skupiny chránící aminoskupinu jsou trityl, terc.-butoxykarbonyl (t-BOC), allyloxykarbonyl a benzyloxykarbonyl. Další příklady skupin vztahujících se k výše uvedenému výrazu popisuje E. Haslam v „Protective Groups in Organic Chemistry“, vyd. J. g. W. McOmie /1973/, kap. 2 a T. W. Greebe a P. G. M. Wuts v „Protective Groups in Organic Synthesis“ /1991/, kap. 7.

V přípravách a diskuzi uvedené dále je často popisována tritylace neboli adice tritylové (trifenylmethylové) skupiny. Tento popis je toliko ilustrativní a odborně vzdělaný praktik je seznámen s tím, že jiné skupiny chránící aminoskupinu, které jsou popsány výše, se mohou použit na místo toho.

Sloučeniny zde popsané mohou mít větší počet asymetrických středů. Důsledkem těchto chirálních center je, že se sloučeniny vyskytují jako racemáty, směsi enantiomerů a jako jednotlivé enantiomery, stejně jako diastereomery a směsi diastereomerů.

Výrazy „R“ a „S“ se zde používají jak je běžné je používat v organické chemii k označování zvláštní konfigurace chirálních center. Výraz „R“ (rectus) se vztahuje ke konfiguraci chirálního centra se vztahem prioritních skupin ve směru otáčení hodinové ručičky (nejvyšší k druhé nejnižší), pokud se posuzuje vazba směrem k nejnižší prioritní skupině. Výraz „S“ (sinister) se vztahuje ke konfiguraci chirálního centra se vztahem prioritních skupin proti směru otáčení hodinových ručiček (nejvyšší k druhé nejnižší), pokud se posuzuje vazba směrem k nejnižší prioritní skupině. Priorita skupin je založena na jejich atomovém čísle (v pořadí klesajících atomových čísel). Částečný soupis priorit a rozbor stereochemie je obsažen v publikaci „Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Practice“ (vyd. J. H. Fletcher a kol. /1974/), na str. 103 až 120.

Kromě systému (R)-(S) se v tomto dokumentu také používá starší systém D-L, k označení absolutní konfigurace, zvláště v souvislosti s aminokyselinami. V tomto systému Fischerova projekce vzorce je orientována tak, že uhlík číslo 1 hlavního řetězce je nahoře. Prefix „D“ se používá k uvedení absolutní konfigurace izomeru, ve kterém funkční (determinující) skupina je na pravé straně od atomu uhlíku v chirálním centru a „L“ označuje izomer, který je nalevo.

Jak je uvedeno svrchu, jsou zahrnuty také způsoby přípravy solí sloučenin obecného vzorce I, stejně jako solí sloučenin obecného vzorce II a obecného vzorce III. Sloučeniny zde používané nebo připravované mohou obsahovat dostatečné kyselé skupiny, dostatečně bazické skupiny nebo oba druhy těchto funkčních skupin, a proto reagují s některou z řady organických nebo anorganických bází a anorganických nebo organických kyselin, za vzniku farmaceuticky přijatelné soli.

Výraz „farmaceuticky přijatelná sůl“, jak se zde používá, se vztahuje k solím, které jsou v podstatě netoxické pro žijící organismy. Běžné farmaceuticky přijatelné soli zahrnují takové soli, které se připravují reakcí příslušné sloučeniny s farmaceuticky přijatelnou minerální nebo organickou kyselinou nebo organickou nebo anorganickou bází. Takové soli jsou známé jako adiční soli s kyselinami a adiční soli s bázemi.

Kyseliny obecně používané pro přípravu adičních solí s kyselinami jsou anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a podobně, a organické kyseliny, jako je kyselina p-toluensulfonová, kyselina methansulfonová, kyselina oxalová, kyselina p-bromfenylsulfonová, kyselina uhličitá, kyselina jantarová, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina octová a podobně. Příklady

-7CZ 288434 B6 takových farmaceuticky přijatelných solí jsou sulfáty, pyrosulfáty, hydrogensulfáty, sulfity, hydrogensulfity, fosfáty, monohydrogenfosfáty, dihydrogenfosfáty, metafosfáty, pyrofosfáty, bromidy, jodidy, acetáty, propionáty, dekanoáty, kapryláty, akryláty, formiáty, hydrochloridy, dihydrochloridy, isobutyráty, kaproáty, heptanoáty, propioláty, oxaláty, malonáty, sukcináty, suberáty, sebakáty, fumaráty, maleáty, butin-l,4-dioáty, hexin-l,6-dioáty, benzoáty, chlorbenzoáty, methylbenzoáty, hydroxybenzoáty, methoxybenzoáty, ftaláty, xylensulfonáty, fenylacetáty, fenylpropionáty, fenylbutyráty, citráty, laktáty, T-hydroxybutyráty, glykoláty, tartráty, methansulfonáty, propansulfonáty, naftalen-l-sulfonáty, naftalen-2-sulfonáty, mandláty a podobně. Výhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami jsou adiční soli vytvořené s minerálními kyselinami, jako s kyselinou chlorovodíkovou a kyselinou bromovodíkovou, a adiční soli vzniklé s organickými kyselinami, jako s kyselinou maleinovou a kyselinou methansulfonovou.

Mělo by se vzít v úvahu, že zvláštní protiion, tvořící část libovolné soli, nemá obvykle rozhodující povahu, pokud protiion nepřispívá k nežádoucí jakosti soli jako celku.

Farmaceuticky přijatelné solváty sloučenin obecného vzorce I spočívají v kombinaci sloučenin obecného vzorce, I s rozpouštědly, jako je voda, methanol, ethanol a acetonitril. Farmaceuticky přijatelné solváty v takovém případě odpovídají hydrátu, methanolátu, ethanolátu a acetonitrilátu.

Výraz „popřípadě v přítomnosti báze“ ukazuje, že se reakce může provádět v přítomnosti báze, avšak taková báze není vyžadována k provedení reakce. Mezi výhodné báze se zahrnují báze organické, které obsahují jeden nebo větší počet atomů dusíku, jako je N-methylmorfolin, ethylamin, diethylamin, triethylamin, ethyldiisopropylamin, polyvinylpyridin, pyridin a podobné sloučeniny. Obzvláště výhodný je N-methylmorfolin a pyridin. Nejvýhodnější však je, pokud není přítomna báze.

Výhodné způsoby vedou k syntéze sloučenin obecného vzorce I, ve kterých alespoň jeden ze substituentů R^l a R² je atom halogenu, methyl, ethyl, trifluormethyl, methoxyskupina nebo ethoxyskupina. Při obzvláště výhodném provedení způsobu je výsledkem syntéza sloučenin, kde jeden ze substituentů R¹ a R² znamená atom vodíku a druhý představuje methoxyskupinu, atom chloru, trifluormethyl nebo methyl. Jiné výhodné ztělesnění představují takové způsoby, jejichž výsledkem je syntéza sloučenin, kde jak R¹, tak R² znamenají nezávisle na sobě skupinu zvolenou z atomu chloru, methylu, methoxyskupiny a trifluormethylu.

Obzvláště výhodné provedení představují způsoby, jejichž výsledkem je syntéza sloučenin, kde jeden ze substituentů R¹ a R² je atom vodíku a druhý představuje atom chloru, methyl, methoxyskupinu nebo trifluormethyl, které jsou jako substituenty v poloze 2 fenylové skupiny. Jinými souboiy zvláště výhodných provedení jsou způsoby, jejichž výsledkem je syntéza sloučenin obecného vzorce I, ve kterém jak R¹, tak R² jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru zahrnujícího atom chloru, methyl, methoxyskupinu a trifluormethyl a tyto skupiny jsou substituenty v poloze 3 a 5 fenylové skupiny.

Výhodné jsou také způsoby, jejichž výsledkem při syntéze jsou takové sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Y, pokud je kombinován se zbytkem heterocyklu obsahujícím dusík, ke kterému je připojen, vede ke vzniku bočního řetězce, zvoleného ze souboru zahrnujícího 4-(piperid-l-yl)piperidin, 4-fenylpiperidin, 4-fenylpiperazin, 4-cyklohexylpiperazin, 4-cyklohexylpiperidin, 4-(N,N-dimethylamino)piperidin a 4-(N,N- diethylamino)piperidin.

Svrchu uvedené způsoby se obvykle provádějí v nereaktivním rozpouštědle, které je vhodné pro teploty používané při reakcích. Všeobecně výhodné jsou nepolární rozpouštědla, přičemž methylenchlorid je obzvláště výhodný.

Sloučeniny obecného vzorce III se mohou připravit různými způsoby, které jsou známé v oboru. Dva takové pracovní postupy pro syntézu jsou popsány ve schématech I a II, uvedených dále.

-8CZ 288434 B6

Schéma I

NHj chránění

OH

IndHCHí).

b) í '

NH

I

APG

OH ————>

kondenzace

C) lnd4CHj)_B

Ind-lCHpB,

I “

NH

I

APG redukce

odstraněni chránící skupiny přičemž v těchto vzorcích

APG znamená skupinu chránící aminoskupinu, Ph představuje R¹, R²-substituovaný fenyl a

Ind znamená indolylovou skupinu.

-9CZ 288434 B6

Schéma II

a) in<J-<CH₂)

NH1 chráněni

b) nh₂

Ind-ICH,)

NH I APC redukce

NH I APC j ^NH1 NH I

APC

Kondenzace substituovaného aminu se může provádět řadou prostředků známých v oboru, přičemž zvláštní používané způsoby jsou závislé na jednotlivé sloučenině použité jako výchozí látka a na typu substituovaného aminu použitého při kondenzační reakci. Tyto kondenzační reakce často používají obecně užívaná kondenzační činidla, jako je 1,1-karbonyldiimidazol, 10 monohydrát l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu, dicyklohexylkarbodiimid, diethyl-azodikarboxylát, 1-hydroxybenzotriazol, alkylchlorformiát a aminové báze, fenyldichlorfosfát a chlorsulfonylisokyanát. Příklady těchto způsobů jsou popsány dále.

Intermediámí amidy se redukují na aminy za použití způsobů, které jsou dobře známé v oboru. 15 Tyto redukce se mohou provádět za použití lithiumaluminiumhydridu, stejně jako za použití řady jiných odlišných hydridů na bázi hliníku. Obzvláště výhodným reakčním činidlem používaným při této redukci je RED-AL^(R), co je ochranná známka pro 3,4-molámí roztok natrium-bis(2methoxyethoxy)aluminiumhydridu v toluenu. Podle jiného provedení se amidy mohou redukovat

-10CZ 288434 B6 katalytickou hydrogenaci, k čemuž se obvykle vyžadují vysoké teploty a tlaky. K redukci amidu se může použít natriumborhydrid v kombinaci s jinými reakčními činidly. K této redukční reakci jsou obzvláště vhodné boranové komplexy, jako je komplex boranu s dimethylsulfídem.

Acylace sekundárního aminu se může provádět za použití velikého počtu technických postupů, které pravidelně používají odborníci v oblasti organické chemie. Podle jednoho takového reakčního schématu se používá anhydridu, jako je anhydrid kyseliny octové. Podle jiného reakčního schématu, často používaného k acylaci sekundárního aminu, se užívá karboxylová kyselina, výhodně s aktivujícím prostředkem. Amino-dealkoxylační typ reakce používá estery jako prostředky pro acylaci aminu. Aktivované estery, které jsou určeny k dosažení zvýšené selektivity, jsou velmi účinnými acylačními prostředky. Takovým výhodným aktivovaným esterem je p-nitrofenylester, jako je p-nitrofenylacetát.

Za účelem preferenční přípravy jednoho optického izomeru ze svého enantiomeru, odborný pracovník může postupovat jednou nebo dvěma cestami. Odborník může nejprve připravit směs enantiomerů a potom dělit dva enantiomery. Obecně používanou metodou pro štěpení racemické směsi (nebo směsi enantiomerů) na jednotlivé enantiomery je nejprve konverze enantiomerů na diastereomery cestou vytvoření soli s opticky aktivní kyselinou nebo bází. Tyto diastereomery se mohou potom dělit za využití rozdílné rozpustnosti, frakcionované krystalizace, chromatografíe nebo podobných metod. Další podrobnosti týkající se štěpení enantiomemích směsi se dají najít v publikaci J. Jacques a kol., „Enantiomers, Racemates, and Resolutions“ (1991).

Kromě schematických postupů popsaných výše, odborník při provádění tohoto vynálezu může také zvolit enantiospecifický pracovní postup pro přípravu sloučenin obecného vzorce III. Takový pracovní postup používá vzoru pro syntetickou reakci, který zachovává chirální střed přítomný ve výchozí látce v požadované orientaci. Podle těchto reakčních schémat se obvykle připravují sloučeniny, ve kterých více než 95 % titulní sloučeniny je požadovaným enantiomerem. Takový pracovní postup začíná se specifickým enantiomerem, jako je ((R)-(+)-tryptofan (také znám pod označením D-tryptofan). Následující reakční stupně se provádějí tak, že se nenaruší chiralita. Takovéto enantiospecifícké syntézy jsou výhodnými provedeními tohoto vynálezu. Jeden z takových pracovních postupů je znázorněn ve schématu III uvedeném dále.

-11 CZ 288434 B6

Schéma III

tritylace

Á trityl (R)-trityltryptof an kondenzace

H tri tyl ^R (R)-trityltryptofananid acylace sekundárního aminu

trityl aminoacetamid

H (R)-tritylacetamid jji odstraněni chránící skupiny

Příklady provedení vynálezu

Dále uvedené přípravy a příklady jsou ilustrací způsobů a meziproduktů podle tohoto vynálezu. Tyto přípravy a příklady však žádným způsobem neomezují rozsah přítomného vynálezu.

Příprava 1

Tritylace

-12CZ 288434 B6

Způsob přípravy 3-( 1 H-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)-propanamidu

Tryptofanamid (26,43 g, 0,230 mol) se suspenduje ve 260 ml methylenchloridu, vzniklá suspenze se propláchne dusíkem a potom uloží pod argonovou atmosféru. Tritylchlorid (38,06 g, 0,136 mol) se rozpustí v 75 ml methylenchloridu. Tritylchloridový roztok se pomalu, během 25 minut, přidá k míchanému roztoku tryptofanamidu, který je umístěn na ledové lázni. Reakční směs se potom nechá míchat za teploty místnosti přes noc.

Reakční směs se přenese do dělicí nálevky a promyje 250 ml vody a potom 250 ml roztoku chloridu sodného. Jakmile se organická vrstva vysuší filtrací přes vrstvu síranu sodného, vysráží se tuhá látka. Filtrát se zachytí a rozpouštědlo se odpaří.

Ke spojeným tuhým látkám se potom přidá ethylacetát a směs se míchá a potom ochlazuje přes noc. Následujícího dne se výsledná tuhá látka odfiltruje, několikrát promyje studeným ethylacetátem a potom vysuší za sníženého tlaku. Výtěžek činí 49,76 g (85,9 %).

Příprava 2

Redukce karbonylu

Způsob přípravy l-amino-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethyIamino)propanu

Pod argonovou atmosférou se 3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanamid (48,46 g, 0,108 mol) suspenduje ve 270 ml tetrahydrofuranu. Vzniklá směs se vaří pod zpětným chladičem. K této reakční směsi se potom pomalu přidá komplex boranu s methylsulfídem (41,3 g, 0,543 mol). Během přidávání komplexu boranu s methylsulfídem se rozpustí veškeiý výchozí amid. Vzniklý roztok se potom míchá za teploty 83 °C na olejové lázni.

Po ochlazení na teplotu místnosti se k roztoku přidá směs tetrahydrofuranu a vody v poměru 1:1 (celkem 75 ml). K reakční směsi se potom přidá hydroxid sodný (230 ml, 5-normální) a vše se vaří pod zpětným chladičem po dobu přibližně 30 minut.

Po rozdělení vodné a organické vrstvy se organická vrstva zachytí. Vodná vrstva se extrahuje tetrahydrofuranem. Organické vrstvy se spojí a rozpouštědla se potom odstraní odpařením. Výsledná kapalina se poté rozdělí mezi ethylacetát a roztok chloridu sodného a podruhé promyje roztokem chloridu sodného. Roztok se potom vysuší síranem sodným a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se 48,08 g požadovaného meziproduktu.

Příprava 3

Alkylace primárního aminu

-13CZ 288434 B6

Způsob přípravy l-[N-(2-methoxybenzyl)amino]-3-( lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanu

Ke směsi l-amino-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanu (48,68 g, 0,109 mol) rozpuštěnému v toluenu (1,13 litru), se přidá 2-methoxybenzaldehyd (23,12 g, 0,169 mol), který byl předtím vyčištěn promytím bází. Reakční směs se míchá přes noc a rozpouštědla se potom odpaří za sníženého tlaku.

Zachycená tuhá látka se rozpustí v 376 ml směsi tetrahydrofuranu a methanolu v poměru 1:1. K tomuto roztoku se přidá natriumborhydrid (6,83 g, 0,180 mol). Získaná směs se míchá na ledové lázni po dobu přibližně 4 hodin. Rozpouštědla se odpaří a zbývající kapalina se rozdělí mezi 1200 ml ethylacetátu a 1000 ml směsi roztoku chloridu sodného a 2-normálního roztoku hydroxidu sodného v poměru 1:1. Vzniklý roztok se dvakrát extrahuje vždy 500 ml ethylacetátu a potom vysuší bezvodým síranem sodným přes noc. Rozpouštědla se potom odpařují přes noc. Dostane se 67,60 g požadované sloučeniny. Výtěžek odpovídá více než 98 %. FDMS 552 (NT¹).

Příprava 4

Tritylace

Způsob přípravy kyseliny (R)-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanové [N-trityltryptofanu]

Chlortrimethylsilan (70,0 ml, 0,527 mol) se přidá k suspenzi D-tryptofanu (100,0 g, 0,490 mol) v bezvodém methylenchloridu (800 ml), míchané střední rychlosti, která je udržována pod dusíkovou atmosférou. Vzniklá směs se nepřetržitě míchá po dobu 4,25 hodiny. K reakční směsi se přidá triethylamin (147,0 ml, 1,055 mol) a poté se z přikapávací nálevky zavede roztok trifenylmethylchloridu (147,0 g, 0,552 mol) v methylenchloridu (400 ml). Směs se míchá za teploty místnosti pod dusíkovou atmosférou po dobu alespoň 20 hodin. Reakce se přeruší přidáním methanolu (500 ml).

Roztok se odpaří na rotační odparce skoro dosucha a směs znovu rozpustí v methylenchloridu a ethylacetátu. Potom se provede vodné zpracování zahrnující dvakrát použití 5% roztoku kyseliny citrónové a dvakrát roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří dosucha na rotační odparce. Tuhá látka se rozpustí v horkém diethyletheru a poté se přidají hexany, aby se napomohlo krystalizaci. Tímto způsobem se izoluje 173,6 g (0,389 mol) analyticky čisté kyseliny (R)-2-(lH-indol-3-yl)-2-H(N-trifenylmethylamino)propanové, jako bílé tuhé látky ve dvou podílech. Celkový výtěžek odpovídá 79 %.

FDMS 446 (M⁺).

Ή NMR (DMSO-d<;) δ 2,70 (m, IH), 2,83 (m, 2H), 3,35 (m, IH), 6,92-7,20 (m, 12H), 7,30-7,41 (m, 8H), 10,83 (s, IH), 11,73 (široký singlet, IH) ppm.

Analýza pro C30H26N2O2: vypočteno: C 80,69%, H5,87%, N6,27%, nalezeno: C 80,47%, H5,92%, N6,10%.

-14CZ 288434 B6

Příprava 5

Kondenzace

K crityl

Způsob přípravy (R)-3-( 1 H-mdol-3-yl)-N-(2-methoxybenzyl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanamidu

K míchanému roztoku kyseliny (R)-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanové (179,8 g, 0,403 mol), 2-methoxybenzylaminu (56,0 ml, 0,429 mol) a hydrátu hydroxybenzotriazolu (57,97 g, 0,429 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (1,7 litru) a bezvodém N,Ndimethylformamidu (500 ml) se pod dusíkovou atmosférou za teploty 0°C přidá triethylamin (60,0 ml, 0,430 mol) a hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethoxykarbodiimidu (82,25 g, 0,429 mol). Směs se nechá ohřívat na teplotu místnosti pod dusíkovou atmosférou alespoň po dobu 20 hodin. Reakční směs se odpaří na rotační odparce a potom znovu rozpustí v methylenchloridu a podrobí vodnému zpracování dvakrát za použití 5% roztoku kyseliny citrónové, dvakrát za použití nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát za použití roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří dosucha na rotační odparce. Tuhá látka se poté rekrystaluje z horkého ethylacetátu. Tímto způsobem se dostane 215,8 g (0,381 mol) analyticky čisté sloučeniny. Výtěžek odpovídá 95 %.

FDMS 565 (M⁺).

'HNMR (CDClj) δ 2,19 (dd, J = 6,4 Hz, Δν = 14,4 Hz, 1H), 2,64 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 4,3 Hz, Δν = 14,4 Hz, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,99 (dd, J = 5,4 Hz, Δν = 14,2 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 7,1 Hz, Δν = 14,2 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,06 - 7,38 (m, 21H), 7,49 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H) ppm.

Analýza pro C38H35N3O2: vypočteno: C 80,68 %, H6,24%, N7,43%, nalezeno: C 80,65 %, H6,46%, N7,50%.

Příprava 6

Redukce karbonylu

Způsob přípravy (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-l -[N-(2-methoxybenzyl)-amino]-2-(N-trifenylmethylamino)propanu

RED-AL^ [3,4-molámí roztok natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminumhydridu v toluenu] (535 ml, 1,819 mol), rozpuštěný v bezvodém tetrahydrofuranu (400 ml) se pomalu přidá, za použití přikapávací nálevky, k za varu pod zpětným chladičem udržovanému roztoku acylované

-15CZ 288434 B6 sloučeniny, (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-N-(2-methoxybenzyl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanamidu (228,6 g, 0,404 mol), připravené jak popsáno výše, v bezvodém tetrahydrofuranu (1,0 litru) pod dusíkovou atmosférou. Reakce se přeruší po nejméně 20 hodinách pomalým přidáním přebytku nasyceného roztoku Rochelleovy soli (tetrahydrát vínanu sodno draselného). Organická vrstva se izoluje, dvakrát promyje roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří na olej na rotační odparce. Žádné další čištění se neprovádí a sloučenina se použije přímo v následujícím stupni.

Příprava 7

Acylace sekundárního aminu

Způsob přípravy (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)-acetylamino]-2-(Ntrifenylmethylamino)propanu

K míchanému roztoku (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)amino)-3-(N-trÍfenylmethylamino)propanu (0,404 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (1,2 litru) se pod dusíkovou atmosférou za teploty 0 °C přidá triethylamin (66,5 ml, 0,477 mol) a anhydrid kyseliny octové (45,0 ml, 0,477 mol). Po 4 hodinách se směs odpaří na rotační odparce, znovu rozpustí v methylenchloridu a ethylacetátu, promyje dvakrát vodou a dvakrát roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří na tuhou látku na rotační odparce. Výsledná tuhá látka se znovu rozpustí v chloroformu, vnese na silikagel (velikost částic 0,038 až 0,066 mm) a eluuje směsí ethylacetátu a hexanů v poměru 1:1. Získaná látka se potom krystaluje ze směsi ethylacetátu a hexanů. Výsledná sloučenina, (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2methoxybenzyl)acetylamino]-2-{N-trifenylmethylamino)propan, se krystaluje a izoluje ve třech dávkách. Dostane se 208,97 g analyticky čisté sloučeniny. Výtěžek odpovídá 87 %.

Analýza pro C40H39N3O2: vypočteno: C 80,91%, H6,62%, N7,08%, nalezeno: C 81,00%, H5,69%, N6,94%

Příprava 8

Odstranění chránící skupiny

Způsob přípravy (R)-2-amino-3-( 1 H-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propanu

Kyselina mravenčí (9,0 ml, 238,540 mmol) se přidá k míchanému roztoku (R)-3-(lH-indol-3yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino)-2-(N-trifenylmethylamino)propanu (14,11 g,

23,763 mmol) v bezvodém methylenchloridu pod dusíkovou atmosférou za teploty 0 °C. Po 4 hodinách se reakční směs odpaří na olej na rotační odparce a znovu rozpustí v diethyletheru

16CZ 288434 B6 a 1,0-normální kyselině chlorovodíkové. Vodná vrstva se dvakrát promyje diethyletherem azalkalizuje hydroxidem sodným na hodnotu pH vyšší než 12. Látka se čtyřikrát extrahuje methylenchloridem. Organické extrakty se spojí, vysuší bezvodým síranem sodným, filtrují a odpaří na rotační odparce na bílou pěnu. Připravovaná sloučenina, (R)-2-amino-3-(lH-indol-

3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propan, (7,52 g, 21,397 mmol) se izoluje ve výtěžku 90 %. Žádné další čistění není nezbytné.

Příklad 1

Způsob přípravy dihydrochloridu (R)-2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylaminojpropanu

Míchaný roztok (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-(N-trifenylmethylamino)propanu ve 2 objemech methylenchloridu se ochladí na teplotu od -40 do -50 °C. Do roztoku se zavádí bezvodý chlorovodík v plynném stavu takovou rychlostí, že teplota reakční směsi nepřekročí 0 °C. Reakční směs se potom míchá za teploty 0 až 10 °C po dobu 30 minut až 1 hodiny.

K této reakční směsi se přidají 2 objemy methyl-terc.-butyletheru a výsledná směs se nechá míchat za teploty 0 až 10 °C po dobu 30 minut až 1 hodiny. Výsledná krystalická tuhá látka se odfiltruje a potom promyje methyl-terc.-butyletherem. Reakční produkt se vysuší za teploty 50 °C při sníženém tlaku. Výtěžek odpovídá více než 90 %.

Analýza pro C21H25N3O2.2HC1: vypočteno: C 59,44%, H6,41%, N9,90%, nalezeno: C 60,40 %, H6,60%, N9,99%.

Příklad 2

Způsob přípravy hydrátu draselné soli kyseliny 2-[(4-cyklohexyl)piperazin-l-yI]octové

Cyklohexylpiperazin (10,0 g, 0,059 mol) se přidá k 10 objemům methylenchloridu za teploty místnosti. K této směsi se přidá hydroxid sodný (36 ml 2-normálního roztoku, 0,072 mol) a tetrabutylamoniumbromid (1,3 g, 0,004 mol). Po přidání hydroxidu sodného a tetrabutylamoniumbromidu se do reakční směsi vnese methylbromacetát (7,0 ml, 0,073 mol) a reakční směs se míchá po dobu 4 až 6 hodin. Průběh reakce se sleduje plynovou chromatografií.

Organická frakce se oddělí a vodná fáze se znovu extrahuje methylenchloridem. Organické fáze se spojí a promyjí dvakrát deionizovanou vodou, jednou nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Tak se jako nažloutlý olej dostane methyl-[2-/(4-cyklohexyl)piperazin-l-yl/acetát).

Sloučenina pojmenovaná v nadpise se připraví rozpuštěním methyl-[2-/(4-cyklohexyl)piperazin-l-yl/acetátu] (10,0 g, 0,042 mol) v 10 objemech diethyletheru. Tento roztok se ochladí na teplotu 15 °C a potom se přidá trimethylsilanoát (5,9 g, 0,044 mol). Vzniklá směs se potom

-17CZ 288434 B6 míchá po dobu 4 až 6 hodin. Připravená látka se odfiltruje, promyje dvakrát vždy 5 objemy diethyletheru, potom promyje dvakrát vždy 5 objemy hexanů a nato vysuší ve vakuové sušárně za teploty 50 °C během 12 až 24 hodin.

Analýza pro Ci₂H₂iKN₂O₂.1,5H₂O:

vypočteno: C 49,63%, H 7,98%, N9,65%, nalezeno: C 49,54%, H7,72%, N9,ll%.

Příklad 3

Způsob přípravy (R)-2-[N-/2-((4-cyklohexyl)piperazin-l -yl)-acetyl/amino]-3-( 1 H-indol-3yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propanu

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se připraví tím, že se nejprve ochladí draselná sůl kyseliny 2-[(4~cyklohexyl)piperazin-l-yl]octové na teplotu od -8 do -15 °C v 5 objemech bezvodého methylenchloridu. K tomuto roztoku se přidává isobutylchlorformiát takovou rychlostí, že teplota nepřekročí -8 °C. Výsledná reakční směs se míchá po dobu zhruba 1 hodiny, přičemž teplota se udržuje od -8 do -15 °C.

K získané směsi se potom přidá dihydrochlorid (R)-2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-?-[N-(2methoxybenzyl)acetylamino]propanu takovou rychlostí, že teplota nepřekročí 0°C. Nato se k získané směsi přidává N-methylmorfolin lychlostí, při které teplota nepřekročí 0 °C. Tato směs se potom míchá ze teploty od -15 do -8 °C po dobu přibližně 1 hodiny.

Reakce se rychle ukončí přidáním 5 objemů vody. Organická vrstva se jednou promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se potom vysuší bezvodým uhličitanem draselným a filtruje, aby se odstranilo činidlo použité k vysušení. K filtrátu se přidají 2 ekvivalenty koncentrované kyseliny chlorovodíkové a potom 1 objem isopropylalkoholu. Za sníženého tlaku při destilaci se potom nahradí methylenchlorid isopropylalkoholem.

Konečný objem isopropylalkoholu se potom odpaří na 3 objemy za sníženého tlaku. Reakční směs se ochladí na teplotu 20 až 25 °C a látka se nechá krystalovat alespoň jednu hodinu. Požadovaná sloučenina se potom odfiltruje a promyje dostatečným množstvím isopropylalkoholu, až se získá bezbarvý filtrát. Krystalický koláč se potom vysuší při teplotě 50 °C za sníženého tlaku.

MS 560(M+l⁺).

*HNMR (CDC1₃) δ 1,09 - 1,28 (m, 5H), 1,64 (d, J = 10 Hz, 1H), 1,80 - 1,89 (m, 4H), 2,10 (s, 3H), 2,24 - 2,52 (m, 9H), 2,90 (s, 2H), 2,95 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,02 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,12 (dd, J = 5,14 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,01 (dd, J = 10,14 Hz, 1H), 4,49 (ABq, J = 17, 43 Hz, 2H), 4,56 (m, 1H), 6,79 - 6,87 (m, 3H), 7,05 - 7,24 (m, 4H), 7,34 - 7,41 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H) ppm.

Analýza pro C₃₃H4₅N₅O₃: vypočteno: C 70,81%, H8,10%, N 12,51 %, nalezeno: C 70,71 %, H8,21%, N 12,42 %.

-18CZ 288434 B6

Příklad 4

Způsob přípravy (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)-acetylamino]-2-[N-/2-(4(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se připraví tím, že se nejprve smíchá dihydrochlorid (R)—2— amino-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propanu (50,0 g, 0,118 mol) se 100 ml methylenchloridu pod dusíkovou atmosférou.

ίο V druhé baňce, pod dusíkovou atmosférou, se vnese draselná sůl kyseliny 2—[4—(piperid—1— yl)piperid-l-yl]octové (62,3 g, 0,236 mol) do 600 ml methylenchloridu. Vzniklá směs se ochladí na teplotu přibližně -10 °C a v míchání se pokračuje. K této směsi se přikapává isobutylchlorformiát (23 ml, 0,177 mol) tak, že teplota draselné soli kyseliny 2-[4-(piperid-l-yl)piperid-lyljoctové nikdy znatelně nestoupne.

Tato reakční směs se míchá za teploty -10 °C po dobu přibližně 90 minut a po této době se pomalu přidá směs dihydrochloridu (R)-2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propanu v methylenchloridu, připravená výše, k roztoku draselné soli kyseliny 2-[4~(piperid-l-yl)-piperid-l-yl]octové, isobutylchlorformiátu a methylenchloridu.

Výsledná směs se potom míchá za teploty od -15 do -8 °C po dobu přibližně 1 hodiny.

Reakční směs se vyjme z ledové lázně a nechá ohřát na teplotu od 15 do 20 °C. Reakce se přeruší přidáním 200 ml vody. Hodnota pH roztoku se upraví na 2,3 až 2,7 přidáním 1-normální kyseliny sírové. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje 100 ml methylenchloridu.

Organické frakce se spojí a promyjí vodou (100 ml). Promývací voda se znovu extrahuje methylenchloridem (50 ml) a spojí s vodnou frakcí z výše popsaného procesu. Ke spojeným vodným vrstvám se přidá methylenchlorid (500 ml) a směs se míchá za teploty místnosti po dobu 15 minut při zalkalizování 2-normálním roztokem hydroxidu sodného, k dosažení konečné 30 hodnoty pH 9,8 až 10,2.

Organická a vodná frakce se oddělí. Vodná frakce se promyje methylenchloridem a methylenchlorid se přidá k organické frakci. Organická frakce se potom promyje směsí nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a vody (50 ml). Promývací kapalina s obsahem 35 hydrogenuhličitanu se oddělí od organické frakce a znovu extrahuje methylenchloridem (50 ml).

Methylenchlorid z této nově extrakce se spojí s methylenchloridovou frakcí a spojené frakce se vysuší síranem hořečnatým. Síran hořečnatý se odfiltruje a těkavé podíly se oddestilují za sníženého tlaku. Ve formě pěny se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu (72,5 g). Výtěžek odpovídá více než 98 %.

MS 559 (M⁺¹).

NMR (DMSO-d6, směs amidových rotamerů v poměru 3:2) δ 1,25 - 1,70 (m, 10H), 1,77 - 2,00 (m, 2H), 1,95 (s, 3/5.3H), 2,04 (s, 2/5.3H), 2,10 - 2,97 (m, 9H), 3,10 - 3,65 (m, 3H), 3,72 45 (s, 2/5.3H), 3,74 (s, 3/5.3H), 4,26 - 4,58 (m, 3H), 6,76 - 7,12 (m, 6H), 7,13 - 7,35 (m, 2H), 7,42 7,66 (m, 2H), 10,80 (široký singlet, 1H) ppm.

Analýza pro C33H45N5O3: vypočteno: C 70,81%, H8,10%, N 12,51%, nalezeno: C 70,57%, H8,05%, N 12,39%.

-19CZ 288434 B6

Příklad 5

Způsob přípravy dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu

Pod dusíkovou atmosférou se draselná sůl kyseliny 2-[4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl]octové v 10 objemech bezvodého methylenchloridu ochladí na teplotu od -8 do -15 °Č. K této směsi se přidává isobutylchlorformiát takovou rychlostí, že teplota reakční směsi nikdy nepřekročí -8 °C. Po přidání isobutylchlorformiátu se reakční směs míchá po dobu přibližně 90 minut, přičemž se udržuje teplota od -15 do -8 °C.

Reakční směs se potom ochladí na teplotu od -37 do -32 °C. K této studené směsi se přidá (R)-2amino-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]propan jako tuhá látka takovou lychlostí, že teplota reakční směsi nepřekročí -20 °C. Poté co je přidávání ukončeno, reakční směs se míchá přibližně 1 hodinu, přičemž teplota se udržuje od -30 do -20 °C.

Reakce se přeruší přidáním 5 objemů deionizované vody. Hodnota pH reakční směsi se potom upraví na 12,8 až 13,2 přidáním 5-normálního roztoku hydroxidu sodného. Vodná frakce se odstraní a extrahuje 1 objemem methylenchloridu. Methylenchloridové frakce se spojí a přidá se k nim 5 objemů vody. Hodnota pH se znovu upraví na 12,8 až 13,2 přidáním 5-normálního roztoku hydroxidu sodného.

Po důkladném smíchání methylenchloridu a vodných vrstev se fáze oddělí a vodná frakce se promyje methylenchloridem. Promývací kapalina obsahující methylenchlorid se přidá k organické frakci z výše popsaného procesu a výsledná organická frakce se promyje čtyřikrát deionizovanou vodou a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, který se potom odfiltruje. Destilační výměnou se nahradí methylenchlorid acetonem. K reakční směsi se přidá 6-normální kyselina chlorovodíková a při naočkování se pomalu přidává 13 objemů acetonu. Suspenze krystalů se míchá přibližně 1 hodinu. Výsledná suspenze krystalů se odfiltruje a promyje acetonem. Dihydrochloridová sůl sloučeniny pojmenované v nadpisu se potom vysuší při teplotě 50 °C za sníženého tlaku. Výtěžek odpovídá více než 98 %.

Sloučenina z příkladu 4, dihydrochloridová sůl, se může snadno konvertovat na volnou bázi za použití normalizovaného technického postupu. Při výhodném provedení tohoto postupu se přidává hydroxid sodný k roztoku obsahujícímu dihydrochloridovou sůl, až hodnota pH roztoku činí od 11 do 12. Volná báze se potom extrahuje organickými rozpouštědly, jak již bylo popsáno dříve.

Příprava 8 9

Tritylace

-20CZ 288434 B6

Způsob přípravy kyseliny (R)-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylniethylamino)propanové

D-Tiyptofan (1,75 kg, 8,57 mol) a chlortrimethylsilan (1196 ml, 9,43 mol) se přidají k tetrahydrofuranu (8,75 litrů) pod dusíkovou atmosférou. Vzniklá směs se vaří pod zpětným chladičem a míchá nepřetržitě po dobu zhruba 4 hodin. Potom se roztok ochladí na teplotu 25 °C a přidá se k němu triethylamin (2,51 litrů, 17,9 mol) a potom tritylchlorid (2,63 kg, 9,43 mol). Tento roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 12 až 24 hodin. Reakce se přeruší přidáním methanolu (385 ml) a reakční směs se dále míchá po dobu 15 minut.

K tomuto roztoku se přidá methyl-terc.-butylether (8,75 litrů), kyselina citrónová (437,5 g, 2,27 mol) a deionizovaná voda (8,75 litrů). Získaná směs se míchá za teploty místnosti po dobu 15 minut, vrstvy se oddělí a organická frakce se promyje dvakrát kyselinou citrónovou (437,5 g, 2,27 mol) a deionizovanou vodou (8,75 litrů). Vodné frakce se odloží.

Organická frakce se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje a odpaří na rotační odparce na pěnu. K této pěně se za teploty místnosti přidá rafinovaný technický ether (8,75 litrů) a heptan (8,75 litrů). Výsledné tuhé látky se odfiltrují a propláchnou heptanem (5,0 litrů). Druhý podíl sloučeniny se dostane odpařením filtrátu dosucha na rotační odparce, přidáním rafinovaného technického etheru (1,0 litr) a heptanu (1,5 litru) a potom odfiltrováním výsledných tuhých látek. Každý podíl se potom vysuší a dostane se 3688,6 g kyseliny (R)-3-(lH-indol-3-yl)-2-(N-trifenylmethylamino)-propanové jako bílé tuhé látky. Výtěžek odpovídá 96,6 %.

Příprava 10

Kondenzace

Způsob přípravy (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-N-(2-methoxybenzyl)-2-(N-trifenylmethylamino)· propanamidu

Pod dusíkovou atmosférou se k tetrahydrofuranu (12 litrů) přidá kyselina (R)-3-(lH-indol-3yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanová (1,6 kg, 3,58 mol), monohydrát 1-hydroxybenzotriazolu (522,45 g, 3,87 mol), 2-methoxybenzylamin (505,14 ml, 3,87 mol), triethylamin (539,35 ml, 3,87 mol) a hydrochlorid l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (741,9 g, 3,87 mol). Výsledný roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 20 až 28 hodin. Rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku a zbyde olejovitý odparek.

Odparek se znovu rozpustí v methylenchloridu (10,5 litrů). Tento roztok se dvakrát promyje 0,26-molámí kyselinou citrónovou (vždy 4,0 litry), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokem chloridu sodného. Organické fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Tuhý odparek se rozpustí v ethylacetátu (6,4 litrů), míchá za teploty místnosti po dobu 15 až 30 minut a potom za teploty -5 až -10 °C po dobu 1 až 24 hodin. Výsledné tuhé látky se zachytí filtrací, promyjí studeným ethylacetátem (2,0 litry) a potom vysuší. Tak se dostane 1809,7 g (R)-3-(lH-indol-3-yl)-N-(2-methoxybenzyl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanamidu. Výtěžek odpovídá 89,6 %.

-21 CZ 288434 B6

Příprava 11

Redukce karbonylu a acylace sekundárního aminu

Způsob přípravy 3-( 1 H-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)-acetylamino]-2-(N-trifenylmethylamino)propanu

Pod dusíkovou atmosférou se (R)-3-(lH-indol-3-yl)-N-(2-methoxyben2yl)-2-(N-trifenylmethylamino)propanamid (1166 g, 2,06 mol) přidá k toluenu (8,25 litrů) a do vzniklého roztoku se pomalu vnese RED-AL^(R) (3,4-molámí roztok natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminumhydridu v toluenu) (2728 ml, 9,27 mol). Získaný roztok se vaří pod zpětným chladičem za míchání po dobu 1 až 8 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu 0 až 10 °C a reakce se přeruší přidáním deionizované vody (1,4 litru). Výsledná směs se míchá po dobu 15 až 30 minut za teploty mezi 0 °C a teplotou místnosti. Výsledné tuhé látky se odfiltrují, propláchnou toluenem (1,0 litr) a odloží.

Filtrát a kapalina použitá k propláchnutí se spojí a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Výsledný roztok se ochladí na teplotu 0 až 5 °C a poté se pomalu přidá triethylamin (311,7 ml, 2,25 mol) a anhydrid kyseliny octové (211,1 ml, 2,25 mol) za teploty od 0°C do teploty místnosti. Poté co je přidávání ukončeno, roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá při teplotě místnosti po dobu 1 až 24 hodin. Reakce se přeruší přidáním deionizované vody (2,0 litry). Vrstvy se oddělí a vodná frakce se odloží.

Organická frakce se dvakrát promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (vždy 2,0 litry) a potom nasyceným roztokem chloridu sodného (2,0 litry). Organická frakce se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku, aby se dostal olej. Výsledný odparek se rozpustí v ethylacetátu (5,0 litrů) a míchá za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Po této době se přidá heptan (0,5 litru). Získané tuhé látky se odfiltrují, propláchnou směsí studeného ethylacetátu a heptanu v poměru 2:1 (celkový objem 1,5 litru) a potom vysuší. Dostane se 976,7 g (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)amino]-2-(N-trifenylmethylamino)propanu. Výtěžek odpovídá 80,1 %.

-22CZ 288434 B6

Příklad 6

Detritylace

Způsob přípravy dihydrochloridu (R)-2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)aminojpropanu

Pod dusíkovou atmosférou se (R)-3-(lH-indol-9-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)amino]-2-(Ntrifenylmethylamino)propan (975 g, 1,64 mol) přidá k methylenchloridu (1,95 litru) a ochladí na teplotu -40 až -50 °C. Do získaného roztoku se pomalu zavede bezvodý chlorovodík (0,28 kg, 7,67 mol) a vše se potom míchá za teploty -10 až 0 °C po dobu 30 až 60 minut. K roztoku se přidá methyl-terc.-butylether (1,95 litru) a vše se míchá za teploty -10 až 0 °C dalších 30 až 60 minut. Výsledné tuhé látky se odfiltrují a propláchnou methyl-terc.-butyletherem (1,5 litru) a potom vysuší. Tak se dostane 559,4 g dihydrochloridu (R)-2-amino-3-(lH-indol-3-yl)-l[N-(2-methoxybenzyl)amino]propanu. Výtěžek odpovídá 94,6 %.

Příklad 7

Způsob přípravy draselné soli kyseliny 2-[4—(piperid-l-yl)-piperid-l-yl]octové

-23CZ 288434 B6

4-(Piperid-l-yl)piperidin (1,20 kg, 7,13 mol) se vnese do methylenchloridu (12,0 litrů) pod dusíkovou atmosférou a potom se k získané směsi přidá tetrabutylamoniumbromid (0,150 kg, 0,47 mol) a hydroxid sodný (1,7 litru 5-normálního roztoku, 8,5 mol). Reakční směs se ochladí na teplotu 10 až 15 °C, poté se k ní přidá methylbromacetát (1,17 kg, 7,65 mol) a výsledná směs se míchá nejméně 16 hodin.

K reakční směsi se potom přidá deionizovaná voda (1,2 litru) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se znovu extrahuje methylenchloridem (2,4 litrů). Organické frakce se spojí a třikrát promyjí deionizovanou vodou (vždy 1,2 litru), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1,1 litru) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1,1 litru). Organická frakce se potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým a odpaří na rotační odparce na olej. Dostane se 1,613 kg methyl[2-/4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl/acetátu]. Výtěžek odpovídá 93,5 %.

Roztok methyl-[2-74-(piperid-l-yl)piperid-l-yl/acetátu] (2,395 kg, 9,96 mol) v methanolu (2,4 litrů) se přidá k roztoku hydroxidu draselného (0,662 kg, 10,0 mol, čistota 85 %) v methanolu (10,5 litrů) pod dusíkovou atmosférou. Reakční směs se zahřívá na teplotu 45 až 50 °C po dobu nejméně 16 hodin.

V roztoku se vymění methanol za aceton (15,0 litrů) na rotační odparce. Získaný roztok se pomalu ochladí na teplotu místnosti během 16 hodin. Výsledné tuhé látky se odfiltrují, propláchnou acetonem (5,0 litrů) a potom vysuší. Získá se 2,471 kg draselné soli kyseliny 2-[4(piperid-1-yl)piperid-1- yl)octové. Výtěžek odpovídá 93,8 %.

MS 265 (M⁺¹).

Příklad 8

Způsob přípravy trihydrátu dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu /ossvt OCHj • 2 HC1 • 3 H₂O

Pod dusíkovou atmosférou se vnese draselná sůl kyseliny 2-[4-(piperid-l-yl)piperid-lyljoctové (0,75 kg, 2,84 mol) do methylenchloridu (7,5 litrů). Výsledná směs se ochladí na teplotu od -15 do -8 °C a k této směsi se přidává isobutylchlorformiát (0,29 kg, 2,12 mol) takovou rychlostí, že se udrží teplota reakční směsi pod -8 °C. Poté co je přidávání ukončeno, výsledná reakční směs se míchá za teploty od -15 do -8 °C po dobu 90 minut.

Reakční směs se ochladí na teplotu -35 °C a přidává se k ní tuhý dihydrochlorid (R)-2-amino-3(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)amino]propanu takovou rychlostí, že se reakční

-24CZ 288434 B6 teplota udržuje nižší než -20 °C. Poté co je přidávání ukončeno, reakční směs se míchá za teploty udržované od -37 do -20 °C po dobu přibližně 1 hodiny. Reakce se přeruší přidáním deionizované vody (7,5 litrů). Reakční směs se zalkalizuje na hodnotu pH 12,8 až 13,2 přidáním 5normálního roztoku hydroxidu sodného. Vodné frakce se odstraní a odloží. K organické frakci se přidá další deionizovaná voda (3,75 litrů), stejně jako dostatečné množství 5-normálního roztoku hydroxidu sodného, k opětovné úpravě hodnoty pH na 12,8 až 13,2.

Obě vodné frakce se spojí, znovu extrahují methylenchloridem (1,5 litru) a potom odloží. Organické frakce se kombinují a čtyřikrát promyjí deionizovanou vodou (vždy 3,5 litrů). Tyto extrakty se smíchají dohromady, znovu extrahují methylenchloridem (1,5 litru) a potom odloží. Obě organické vrstvy se spojí a promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného (3,7 litrů).

Organická frakce se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a na rotační odparce se vymění methylenchlorid za aceton (3,75 litrů). K reakční směsi se přidá vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,48 litru 6-normálního roztoku, 2,88 mol) a očkovací krystaly (2 g) a směs se dále míchá po dobu 30 až 90 minut. K reakční směsi se přidá aceton (13,2 litrů) a potom se suspenze míchá po dobu 1 hodiny. Výsledná tuhá látka se potom odfiltruje, dvakrát promyje acetonem (vždy 1,4 litru) a vysuší. Tak se dostane 633 g trihydrátu dihydrochloridu (R)-3-(lHindol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/aminojpropanu. Výtěžek odpovídá 90 %.

Sloučeniny připravené podle tohoto vynálezu jsou vhodné jako sloučeniny vázající tachikininový receptor a stejně tak se mohou používat jako antagonisty nebo agonisty různých tachikininů. Tyto sloučeniny jsou proto vhodné pro ošetřování nebo prevenci stavů spojených s přebytkem nebo nedostatkem tachykininů. Výraz „fyziologická porucha spojená s přebytkem nebo nedostatkem tachykininu“ zahrnuje takové choroby, které jsou spojeny s nepřiměřenou stimulací tachykininových receptorů, bez ohledu na skutečné množství tachykininu, které je přítomno v místě.

Tyto fyziologické poruchy mohou zahrnovat poruchy centrálního nervového systému, jako jsou stavy úzkosti, deprese, psychóza a schizofrenie, neurodegenerativní poruchy, jako je demence, včetně senilní demence Alzheimerova typu, Alzheimerova choroba, demence spojená s AIDS aDownův syndrom, onemocnění demyelinizací, jako je rozptýlená skleróza a amyotrofhí laterální skleróza, a jiné neuropatologické choroby, jako je periferní neuropatie, stejně jako diabetická a chemoterapií vyvolaná neuropatie, a postherpetické a jiné neuralgie, akutní a chronické obstruktivní choroby dýchacích cest, jako je respirační syndrom úzkosti u dospělých, bronchopneumonie, bronchospasmus, chronická bronchitida, kašel a astma, zánětlivé choroby, jako je zánětlivá choroba střev, psoriáza, fibrositida, osteoartritida a revmatická artritida, choroby muskuloskeletálního systému, jako je osteoporóza, alergie, jako jsou ekzemy a rinitida, hypersensitivní choroby, jako je vyvolává škrumpa jedovatá, choroby zraku, jako je konjunktivitida, vemální konjunktivitida a podobně, kožní choroby, jako je kontaktní dermatitida, atopická dermatitida, urtikarie a jiné ekzematoidní choroby, návyková onemocnění, jako je alkoholismus, somatické choroby související se stresem, reflexní sympatetická dystrofie, jako je syndrom rameno-ruka, dystymové choroby, nepříznivé imunologické reakce, jako je odmítnutí transplantovaných tkání a choroby související se zvýšenou nebo sníženou imunitou, jako systémový lupus erythenotosis, gastrointestinální poruchy nebo nemoci spojené s neuronální kontrolou vnitřností, jako je ulcerativní kolitida, Crohnova choroba a syndrom podráždění střev, chorobná funkce měchýře, jako je hyperreflexe a nedostatečnost svalu stěny močového měchýře, arteroskleróza, fibrózující a kolagenová onemocnění, jako je sklerodermie a eosinofilní fasciolióza, příznaky podráždění ze začínající prostatické hypertrofíe, choroby krevního oběhu způsobené vasodilatačním a vasospastickým onemocněním, jako je angína, migréna a Reynaudova choroba, a bolest nebo reakce na bolestivé podněty, například přičítaná nebo spojená s některým z dříve uvedených stavů, zvláště s přenosem bolesti při migréně. Například sloučeniny obecného vzorce I se mohou účelně používat při ošetřování poruch centrálního nervového systému, jako pocitu strachu, psychózy a schizofrenie, neurodegenerativních chorob, jako je Alzheimerova choroba a Downův syndrom, respiračních chorob, jako je bronchospasmus a astma, zánětlivých stavů, jako je

-25CZ 288434 B6 zánětlivé onemocnění střev, osteoartritida a revmatická artritida, nepříznivé imunologické poruchy, jako je odmítnutí transplantovaných tkání, gastrointestinální poruchy a choroby, jako jsou poruchy spojené s neuronální kontrolou vnitřností, jako je ulcerativní kolitida, Crohnova choroba a příznak podráždění střev, inkontinence, poruchy krevního oběhu způsobené vasodilatací a bolest nebo reakce na bolestivé podněty, například které se přisuzují nebo jsou spojeny s některým z předcházejících stavů nebo přenosem bolesti při migréně.

Výsledky několika experimentů dokládají, že řada sloučenin obecného vzorce I je selektivními antagonisty tachykininového receptoru. Tyto sloučeniny výhodně váží jeden subtyp tachykininového receptoru v porovnání k jiným takovým receptorům. Takové sloučeniny jsou zvláště výhodné.

Například NK-1 antagonista je obzvláště výhodný pro ošetřování bolesti, zvláště chronické bolesti, jako jsou neuropatické bolesti, pooperační bolesti a migrény, bolesti spojené s artritidou, bolesti spojené s rakovinou, chronické bolesti spodní části zad, histaminová cefalalgie, herpes neuralgie, bolesti modelované končetiny, centrální bolesti, bolesti zubu, bolesti ze spálení sluncem, neuropatické bolesti, bolesti rezistentní k opioidům, viscerální bolesti, bolesti způsobené chirurgickým zákrokem, bolesti vyvolané poškozením kosti, bolesti způsobené porodními stahy a porodem, bolesti vyplývajících z popálenin, poporodních bolestí, bolesti související s angínou a bolesti související s močopohlavním traktem včetně cystitidy.

Kromě použití k potlačování bolesti jsou NK-1 antagonisty zvláště výhodné pro ošetřování a prevenci urinámí nedostatečnosti, příznaků podráždění začínající prostatické hypertrofie, poruch motility gastrointestinálního traktu, jako je syndrom podráždění střev, akutní a chronické obstruktivní choroby dýchacích cest, jako je bronchospasmus, bronchopneumonie, astma arespirační syndrom úzkosti u dospělých, arteroskleróza, zánětlivé stavy, jako je zánětlivá choroba střev, ulcerativní kolitida, Crohnova choroba, revmatická artritida, osteoartritida, neurogenní záněty, alergie, rinitida, kašel, dermatitida, urtikarie, psoriáza, konjunktivitida, mióza vyvolaná iritací, odmítání transplantované tkáně, plazmový extravazát vyplývající z cytokinové chemoterapie a podobně, poranění míchy, mrtvice, mozková mrtvice (ischemie), Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, rozptýlená skleróza, amyotrofhí laterální skleróza, schizofrenie, stavy úzkosti a deprese.

NK-2 antagonisty jsou zvláště výhodné při ošetřování urinámí nedostatečnosti, bronchospasmu, astmatu, respiračního syndromu úzkosti u dospělých, poruch motility gastrointestinálního traktu, jako je syndrom podráždění střev a bolest.

Kromě testů vázání in vitro popsaných výše, se řada sloučenin připravených způsoby podle tohoto vynálezu testovala také na modelových systémech in vivo na stavy spojené s přebytkem tachykininu. Tyto sloučeniny testované in vivo projevují účinnost proti takovým stavům.

Dále se uvádějí podrobnosti k testu stanovení selektivního vázání nárokovaného antagonisty NK-1.

Biologická aktivita sloučeniny podle tohoto vynálezu se hodnotila za použití iniciačního screeningového testu, který rychle a přesně měří vázání testované sloučeniny na známá receptorová místa NK-1 a NK-2. Testy použitelné k ohodnocení antagonistů receptoru tachikininu jsou dobře známé v oboru, viz například J. Jukic a kol., Life Sciencies 49, 1463 až 1469 (1991), N. Kucharczyk a kol., Joumal of Medicinal Chemistry 36, 1654 až 1661 (1993) nebo N. Rouissi a kol., Biochemical and Biophysical Research Communications 176, 894 až 901 (1991).

-26CZ 288434 B6

Test vázání receptoru NK-1

Test vázání radioaktivního receptoru se provádí za použití pracovního předpisu již dříve publikovaného, viz J. G. Payan a kol., Joumal of Immunology 133, 3260 až 3265 (1984). Při tomto testu se alikvot buněk IM9 (1 x 10⁶ buněk na zkumavku v prostředí RPMI 1604 doplněném 10% fetálním telecím sérem) inkubuje s 20 pM substance P značené ¹²⁵I v přítomnosti vzrůstajících koncentrací kompetitoru za teploty 4 °C po dobu 45 minut.

Buněčná linie IM9 je dobře charakterizována a snadno dostupná linie lidských buněk, viz například Annals of the New York Academy of Science 190, 221 až 234 (1972), Nátuře (London) 71, 84 až 88 (1974). Tyto buňky se kultivují běžným způsobem v prostředí RPMI 1640 doplněném 50 pg/ml sulfátu gentamicinu a 10% fetálního telecího séra.

Reakce se ukončí filtrací přes skleněný filtr jako zachycovací systém, přičemž se použije filtr, který byl napouštěn 0,1% polyethyleniminem po dobu 20 minut. Specifické vázání značené substance P se stanoví v přítomnosti 20 nM neznačeného ligandu.

Při testu vázání na kryse se dosáhne pro předmětnou sloučeninu hodnoty 0,144 nM.

Claims (3)

1. Trihydrát dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu.

2. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í se tím, že jako aktivní složku obsahuje trihydrát dihydrochloridu (R)-3-( 1 H-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]-2-[N/2-(4-(piperid-l-yl)-piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu podle nároku 1, dohromady s alespoň jednou farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, ředidlem nebo pomocnou látkou pro tuto sloučeninu.

3. Trihydrát dihydrochloridu (R)-3-(lH-indol-3-yl)-l-[N-(2-methoxybenzyl)acetylamino]2-[N-/2-(4-(piperid-l-yl)piperid-l-yl)acetyl/amino]propanu podle nároku 1, pro použití při ošetřování nebo prevenci stavů spojených s přebytkem tachykininů.