CZ287304B6 - Indolpyrrolkarbazolové deriváty - Google Patents

Abstract

Indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce I, v němž všechny substituenty mají specifické významy uvedené v nárocích a popise, a jejich farmaceuticky přijatelné soli. Meziprodukt obecného vzorce III, ve kterém substituenty mají specifické významy, pro výrobu indolopyrrolokarbazolů obecného vzorce I. Farmaceutické přípravky k léčení rakoviny obsahující indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce I, nebo jejich soli, ve spojení s farmaceuticky přijatelnými nosiči.ŕ

Description

Indolopyrrolokarbazoly s antitumorovou aktivitou, způsob jejich výroby, meziprodukt pro jejich výrobu a farmaceutické přípravky je obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nových indolopyrrolokarbazolových derivátů, inhibujících proliferaci tumorových buněk a vykazujících antitumorovou účinnost. Vynález se týká též způsobu výroby těchto sloučenin, meziproduktu pro jejich výrobu, jakož i farmaceutických přípravků obsahujících tyto sloučeniny.

Dosavadní stav techniky

V oblasti rakovinové chemoterapie se neustále používají různé sloučeniny v praxi jako antitumorová činidla. Jejich účinek na různé druhy tumorů však není vždy dostatečný a problém rezistence tumorových buněk proti těmto léčivům činí klinické použití takovýchto antitumorových činidel obtížným [47. Japan Society of Cancer Generál Meeting Article, str. 12 až 15 (1982)].

Vzhledem k této situaci je neustále prováděn vývoj nových karcinostatik pro léčbu rakoviny. Zvláště je vyžadováno, aby látky překonávaly rezistenci proti existujícím karcinogenním látkám a aby měly účinnost proti takovým typům rakoviny, proti kterým stávající karcinostatika nevykazují požadovanou účinnost.

S ohledem na dosavadní stav této oblasti provedlo vynálezci rozsáhlý průzkum metabolických produktů, jehož výsledkem je nová, antitumorovou účinnost vykazující sloučenina BE-137930 (12,13—dihydro—1,1 l-dihydroxy-5H-indolo-[2,3-a]pyrrolo[3,4-c]karbazol-5,7(6H)dion), která byla popsána ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. 20277/1991 a vJ. Antibiotics 44, 723-728(1991).

Potom byly vynálezci vytvořeny indolopyrrolokarbazolové sloučeniny, mající vynikající antitumorovou aktivitu, a to chemickou modifikací sloučeniny BE-137930.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou indolopyrrolokarbazoly s antitumorovou aktivitou, obecného vzorce I

v němž

R¹ a R² značí jednotlivě a) vodík, b) Ci^alkyl, c) C₃^alkenyl, d) Có-uaryl, e) Ci^alkyl substituovaný C^arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidyl, m) oxazolinyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q) pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³, přičemž tyto substituenty b) až

-1 CZ 287304 B6

t) jsou popřípadě substituovány 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, SO₃H, NH₂, kyanoskupinu, Ci_6alkylaminoskupinu, di-Ci_6-alkylaminoskupinu, hydroxyl a halogen,

Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

R³ značí A) vodík, B) C^alkyl, C) C₃_6cykloalkyl, D) C4_iocykloalkylalkyl, E) C6_i₂aryl, F) Ci.₆alkyl substituovaný C6_i₂arylem, G) C]_6-alkoxyl, Η) NHNH₂,1) NH₂, J) NH₂ substituovanou C6_i₂arylem, K) karbamoyl) L) pyrrolyl, M) oxazolyl, N) isoxazolyl, O) thiazolyl, P) imidazolyl, Q) pyridyl, R) pyridiminyl, S) oxazolinyl, T) oxazolidinyl, U) imidazolinyl, V) imidazolidinyl, W) pyrrolidinyl, X) piperazinyl, Y) thiazolyl nebo Z) thiazolidinyl, přičemž tyto substituenty B) až F) a L) až Z) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, který je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C^alkanoyl, C₂_7alkoxyalkarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící acetal, benzyl, jenž je popřípadě substituován Ci_6alkoxylem nebo nitroskupinou, NH₂ karboxyl, karbamoyl, kyanoskupinu a C₂_7alkoxykarbonyl, přičemž NH₂ a karbamoyl jsou popřípadě substituovány jednou nebo dvakrát C]^alkylem, který je popřípadě substituován substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, NH₂, karboxyl, karbamoyl a C₂_₇alkoxykarbonyl, nebo

R¹ a R² tvoří společně i) Ci^alkyliden nebo ii) Ci-^alkyliden substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Ci^alkylaminoskupinu, di-Ci_6alkylaminoskupinu, hydroxyl, karboxyl a SO₃H, nebo

R¹ a R² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázány, iii) pyrrolidinyl, iv) imidazolidinyl, v) imidazolinyl, vi) piperazidinoskupinu nebo vii) piperazinyl, přičemž tyto substituenty i) až v) jsou popřípadě substituovány v kruhu alespoň jedenkrát C^alkylem, který je popřípadě substituován substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, hydroxyl, karboxyl a SO₂H,

G značí cyklickou pentozovou nebo hexozovou skupinu, jejichž hydroxyskupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 3 stejnými nebo rozdílnými skupinami vybranými ze souboru zahrnujícího vodík, C^alkyl, Ci_6alkylkarbonyloxyskupinu, C^alkoxyskupinu a aminoskupinu,

X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) C ^alkylaminoskupinu, VII) Ci_₆alkoxyl, VIII) C^alkoxyl substituovaný C6_i₂arylem, IX) COOH, X) C₂_₇alkoxykarbonyl nebo XI) Ci_6alkyl, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Jednu výhodnou skupinu tvoří indolopyrrolokarbazoly podle vynálezu, obecného vzorce Ia

<Ia) v němž

R¹¹ a R²¹ značí jednotlivě a) vodík, b) C^alkyl, c) C₃_6alkenyl, d) Cí-^aryl, e) Cí^alky 1 substituovaný C^_l2arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidyl, m) oxazolyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q)

-2CZ 287304 B6 pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³¹, přičemž substituenty b) až t) jsou popřípadě substituovány 1 až 5 substituentami vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, kyanoskupinu a hydroxyl,

Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

R³’ značí A) vodík, B) C^alkyl, C) Ce-uaryl, D) C^alkoxyl, E) NH₂, F) NHNH, G) NH₂ substituovanou C6_i₂arylem, H) Ci_6alkoxyl, I) karbamoyl, J) pyrrolyl, K) oxazolyl, L) isoxazolyl, M) thiazolyl, N) imidazolyl, O) pyridyl, P) pyrimidyl, Q) oxazolinyl, R) oxazolidinyl, S) imidazolinyl, T) imidazolidinyl, U) pyrrolidinyl, V) piperazinyl, W) thiazolyl nebo X) thiazolidinyl, přičemž substituenty B) a C) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, který je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C₂_6alkanoyl, C₂_7alkoxykarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící acetal, benzyl, jenž je popřípadě substituován C]_6alkoxylem nebo nitroskupinou, NH₂ a karboxyl, nebo

R¹¹ a R²¹ tvoří společně i) C^alkyliden nebo ii) C^alkyliden substituovaný karboxylem, nebo

R¹’ a R¹² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázané, iii) pyrrolidinyl, iv) imidazolidinyl, v) imidazolinyl, vi) piperidinovou skupinu nebo vii) piperazinyl přičemž substituenty iii) až vii) jsou popřípadě substituovány v kruhu alespoň jedenkrát C^alkylem, který je popřípadě substituován hydroxylem,

G značí skupinu vzorce

v nichž

R⁷ značí vodík nebo Ci^alkyl a

R⁸ značí hydroxyl nebo NH₂ a

X¹¹ a X¹², jež jsou vázané k indolopyrrolokarbazolovému kruhu jednotlivě v poloze 1 nebo 2 a v poloze 10 a 11, značí jednotlivě I) halogen, II) hydroxyl, III) Ci^alkoxyl nebo IV) Ci.₆alkoxyl substituovaný C6-i₂arylem, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Druhou skupinou jsou indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce lb

-3CZ 287304 B6

(lb) v němž

R¹² značí vodík nebo Ci^alkyl,

R²² značí a) vodík, b) C^alkyl, c) C^alkyl substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, hydroxyl a kyanoskupinu, d) Cé-^aryl, e) C^alkyl substituovaný Cé-i₂aryleni, g) pyridyl, h) imidazolyl, i) imidazolidinyl, j) thiazolyl, k) pyrrolidinyl, 1) piperazinyl nebo m) skupinu -Y-R³², přičemž substituenty d) a e) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl a karboxyl,

Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a značí-li Y karbonyl nebo thiokarbonyl,

R³² značí A) vodík, B) C^alkyl, C) Cé-i₂aryl, D) NH₂, E) NHNH₂, F) NH₂ substituovanou Cé-^arylem, G) Ci_éalkoxyl, H) karbamoyl, I) pyridyl, J) pyrimidyl, K) imidazolinyl nebo L) pyrrolidinyl, přičemž substituenty B) a C) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, jenž je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C₂_6alkanoyl, C₂-7alkoxykarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící acetal, benzyl, NH₂, karboxyl a benzyl substituovaný C|.₆alkoxylem nebo nitroskupinou a značíli Y sulfonyl,

R³² je Ci^alkyl nebo C^^aryl, nebo

R¹² a R²² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázané, i) pyrrolidinyl, ii) piperidinovou skupinu nebo iii) piperazinyl, přičemž substituenty i) až iii) jsou popřípadě v kruhu substituovány C^alkyly, které jsou popřípadě substituovány alespoň jednou hydroxylem, a

G¹ značí skupinu vzorce

v nichž R⁷ je vodík, nebo C^alkyl a R⁸ je hydroxyl nebo NH₂ a

X a X , které jsou vázané k indolopyrrolokarbazolovému kruhu jednotlivě v poloze 1 nebo 2 a v poloze 10 nebo 11, značí jednotlivě I) halogen, II) hydroxyl nebo III) Ci^alkoxyl, popřípadě substituovaný Cé-^arylem, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

-4CZ 287304 B6

Třetí výhodnou skupinou jsou indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce I, v němž R¹ a R² značí jednotlivě vodík nebo Ci_6alkyl, popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu a di-Ci_6alkylaminoskupinu,

R¹ a R² tvoří společně Ci_6alkyliden, popřípadě substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Ci^alkylaminoskupinu, di-Ci_éalkylaminoskupinu, hydroxyl a karboxyl,

G je skupina obecného vzorce

v němž R⁷ je vodík nebo Ci^alkyl a R⁸ je hydroxyl a

X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) Ci_6alkylaminoskupinu, V) diCi.6alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) C,^alkoxy 1, VIII) COOH, IX) C₂_₇alkoxykarbonyl nebo X) Cj_6alkyl, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Čtvrtou výhodnou skupinou jsou indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce I, v němž

R¹ značí vodík nebo Ci_₆alkyl,

R² je skupina vzorce -Y-R³, přičemž C^alkyl ve významu R¹ je popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu a di-C]_6alkylaminoskupinu,

Y značí karboxyl a

R³ je vodík nebo C]_6alkyl,

R¹ a R² tvoří společně Ci_6alkyliden, popřípadě substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Cj^alkylaminoskupinu, di-Ci_6alkylaminoskupinu, hydroxyl a karboxyl,

G značí skupinu obecného vzorce
	0^	\AH
HCA	A
	OR7

v němž

R⁷ je vodík nebo Ci^alkyl a R⁸ je hydroxyl, a

-5CZ 287304 B6

X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) Ci_6alkylaminoskupinu, V) diC].6alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) C]_6alkoxyl, VIII) COOH, IX) C₃_7alkoxykarbonyl nebo X) C^alkyl, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Pátou výhodnou skupinou jsou indolopyrrolokarbazoly obecného vzorce I, v němž

R¹ a R² značí jednotlivě a) vodík, b) C|_6alkyl, c) C3_6alkenyl, d) C6_i2aryl, e) C^alkyl substituovaný C6-i2arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidinyl, m) oxazolinyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q) pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³, přičemž substituenty b) až t) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, SO3H, NH₂, C^alkylaminoskupinu, di-C^alkylaminoskupinu, hydroxyl a halogen,

Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

R³ značí vodík, C₃ _₆alkyl, NH₂ nebo karbamoyl,

G jé skupina vzorce

v němž

R⁷ je vodík nebo C^alkyl a R⁸ je hydroxyl a

X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) C^alkylaminoskupinu, V) diCi.₆alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) Ci_6alkoxyl, VIII) COOH, IX) C₂_7alkoxykarbonyl nebo X) C^alkyl.

V popise uváděné specifické, řádně vymezené substituenty patří pod následující obecnější termíny.

Výraz „nižší“ znamená počet atomů v substituentu, který je 1 až 6, s výhodou 1 až 4.

„Nižší alkylová skupina“ je přímá nebo rozvětvená alkylová skupina, mající 1 až 6 atomů uhlíku, a jejími příklady jsou methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, isopropylová skupina, butylová skupina, isobutylová skupina, sek.butylová skupina, terc.butylová skupina, pentylová skupina, isopentylová skupina, neopentylová skupina, hexylová skupina atd.

„Nižší alkenylová skupina“ zahrnuje alkenylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, mající 3 až 6 atomů uhlíku, jejich příklady jsou propenylová skupina, 2-butenylová skupina, 3butenylová skupina, 3-pentenylová skupina, 4-hexenylová skupina atd.

-6CZ 287304 B6 „Nižší alkinylová skupina“ může být alkinylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem, mající 3 až 6 atomů uhlíku a jejímiž příklady jsou propinylová skupina, 2-butinylová skupina, 3butinylová skupina, 3-pentenylová skupina, 4-hexenylová skupina atd.

„Cykloalkylová skupina“ zahrnuje 3 až 6-člennou cykloalkylovou skupinu a jejími příklady jsou cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina atd.

„Cykloalkyl-nižší alkylová skupina“ znamená alkylovou skupinu substituovanou cykloalkylovou skupinou, kde cykloalkylová a nižší alkylová část mají výše uvedené významy a jejich příklady jsou cyklopropylmethylová skupina, cyklobutylmethylová skupina, cyklopentylmethylová skupina, cyklohexylmethylová skupina, 1-cyklopropylethylová skupina, 2-cyklopropylethylová skupina, 1-cyklobutylethylová skupina, 2-cyklobutylethylová skupina, 1-cyklopentylethylová skupina, 2-cyklopentylethylová skupina, 1-cyklohexylethylová skupina, 3-cyklohexylpropylová skupina, 3-cyklopentylpropylová skupina 4-cyklohexylbutylová skupina, 4-cyklopentylbutylová skupina atd., a výhodně má cykloalkylová skupina celkem 4 až 10 atomů uhlíku.

„Arylová skupina může být monocyklická nebo polycyklická, a arylové skupiny, mající 6 až 12 atomů uhlíku mohou být označovány jako fenylová skupina, naftylová skupina a tetrahydronaftylová skupina.

„Arylkylová“ skupina znamená nižší alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, kde arylová a nižší alkylová část mají výše uvedené významy a arylkylové skupiny, mající 7 až 15 atomů uhlíku mohou být označovány jako například benzylová skupina, fenethylová skupina, fenylpropylová skupina, fenylbutylová skupina, fenylpentylová skupina, nafitylmethylová skupina a naftylethylová skupina.

„Heterocyklická skupina“ zahrnuje 5- nebo 6-členné heterocyklické skupiny, obsahující 1 až 4 heteroatomy, vybrané ze skupiny, obsahující atomy dusíku, atomy kyslíku a atomy síry a zde mohou být uvedeny aromatické heterocyklické skupiny jako například pyrrolylová skupina, furylová skupina, thienylová skupina, oxazolylová skupina, isoxazolylová skupina, thiazolylová skupina, isothiazolylová skupina, imidazolylová skupina, pyrazolylová skupina, oxadiazolylová skupina, thiadiazolylová skupina, triazolylová skupina, tetrazolylová skupina, furazanylová skupina, pyridylová skupina, pyridazinylová skupina, pyrimidinylová skupina, pyrazinylová skupina a triazinylová skupina; a nearomatické heterocyklické skupiny jako je například dihydrothienylová skupina, tetrahydrothienylová skupina, pyrrolinylová skupina, pyrrolidinylová skupina, imidazolidinylová skupina, imidazolinylová skupina, piperidinolová skupina, piperazinylová skupina, oxazolinylová skupina, oxazolidinylová skupina, isoxazolinylová skupina, isoxazolidinylová skupina, thiazolinylová skupina, thiazolidinylová skupina, isothiazolinylová skupina, isothiazolidinylová skupina, 1,2-dithiolanylová skupina, 1,3dithiolanylová skupina, 1,2-dithiolylová, 1,3-dithiolylovou skupinu, dihydrothiopyranylovou skupinu, tetrahydrothiopyranylovou skupinu, 1,4-dithianylovou skupinu, 1,4-dithianylovou skupinu, 1,4-oxathianylovou skupinu a thiomorfolinylovou skupinu.

Jako „mono-nižší alkylaminoskupiny“ mohou být například uvedeny methylaminoskupina, ethylaminoskupina, propylaminoskupina, isopropylaminoskupina, butylaminoskupina, pentylaminoskupina, hexylaminoskupina atd., a jako „di—nižší alkylaminoskupiny“ mohou být například uvedeny dimethylaminoskupina, ethylmethylaminoskupina, diethylaminoskupina, ethylpropylaminoskupina, dipropylaminoskupina, butylmethylaminoskupina, dibutylaminoskupina, butylethylaminoskupina, methylpentylaminoskupina, hexylmethylaminoskupina, ethylhexylaminoskupina atd.

„Arylaminoskupina“ znamená aminoskupinu substituovanou arylovou skupinou, kde arylová část má výše uvedené významy a arylaminová skupina může například znamenat fenylaminoskupinu a naftylaminoskupinu.

-7CZ 287304 B6 „Atomy halogenu“ zahrnují atom fluoru, atom chloru, atom bromu a atom jodu.

Jako „nižší alkylidenové skupiny“ mohou být například uvedeny alkylidenové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, mající 1 až 6 atomů uhlíku jako je například methylenová skupina, ethylidenová skupina, propylidenová skupina, isopropylidenová skupina, butylidenová skupina, isobutylidenová skupina, sek.butylidenová skupina, pentylidenová skupina a isopentylidenová skupina, neopentylidenová skupina a hexylidenová skupina.

„Nižší alkoxyskupina“ znamená /nižší alkyl/-O-skupinu, kde nižší alkylová část má výše uvedené významy a jejími příklady jsou methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyskupina, butoxyskupina, isobutoxyskupina, sek.butoxyskupina, terc.butoxyskupina, pentoxyskupina, isopentoxyskupina, neopentoxyskupina, hexoxyskupina atd.

„Nižší alkyloxykarbonylová skupina“ znamená /nižší alkoxy/-CO-skupinu, kde nižší alkoxylová část má výše uvedený význam a jejími příklady jsou methoxykarbonylová skupina, ethoxykarbonylová skupina, propyloxykarbonylová skupina, isopropyloxykarbonylová skupina, butyloxykarbonylová skupina, isobutyloxykarbonylová skupina, pentyloxykarbonylová skupina, hexyloxykarbonylová skupina atd.

„Aralkoxyskupina“ znamená nižší alkoxyskupinu substituovanou arylovou skupinu, kde arylová skupina a alkoxylová část mají výše uvedené významy a jejich příklady jsou benzyloxyskupina, fenethyloxyskupina, fenylpropoxyskupina, alfa-naftylmethoxyskupina, beta-naftylmethoxyskupina, naftylethoxyskupina, tetrahydronaftylmethoxyskupina atd.

Příklady chránící skupiny v „popřípadě substituované hydroxylové skupině“ jsou alkanoylové skupiny, mající 2 až 6 atomů uhlíku jako je acetylová skupina, propionylová skupina a butyrylová skupina, aroylskupiny jako je benzoylová skupina, substituované a nesubstituovaná aralkylové skupiny jako je benzylová skupina a 4-methoxybenzylová skupina, skupiny tvořící acetyl jako je acetonid atd.

„Pentosová skupina“ a „hexosová skupina“ znamenají pentosovou skupinu a hexosovou skupinu jejichž hydroxylové skupiny mohou být substituovány stejnými nebo rozdílnými 1 až 3 skupinami vybranými ze skupiny, zahrnující atomy vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkylkarbonyloxyskupiny, nižší alkoxyskupiny a aminoskupiny, nebo mohou být oxidovány a mohou jimi být skupiny odvozené od pentosy jako je například ribosa, arabinosa, xylosa a 2deoxyribosa a skupiny odvozené od hexos, jako je například allosa, glukóza, mannosa, galaktosa, glukózamin, galaktosamin, 2-deoxyglukóza, 4-O-methylglukóza, rhamnosa a kyselina glukuronová.

Ze sloučenin podle předloženého vynálezu obecného vzorce I jsou výhodné sloučeniny následujícího obecného vzorce la

(la)

-8CZ 287304 B6 kde

R¹¹ a R²¹ nezávisle na sobě každý znamená atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, nižší alkenylovou skupinu, arylovou skupinu, aralkylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu, oxazolylovou skupinu, isoxazolylovou skupinu, thiazolylovou skupinu, imidazolylovou skupinu, pyridylovou skupinu, pyrimidinylovou skupinu, oxazolinylovou skupinu, oxazolidinylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu, imidazolidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, thiazinylovou skupinu, thiazolidinylovou skupinu /nižší alkylová skupina, nižší alkenylová skupina, arylová skupina, arylkylová skupina a heterocyklická skupina mohou mít 1 až 5 substituentů, vybraných ze skupiny, zahrnující karboxylové skupiny, karbamoylové skupiny, kyanoskupiny a hydroxylové skupiny/, nebo skupinu vzorce -Y-R³¹, kde Y představuje karbonylovou skupinu, thiokarbonylovou skupinu nebo sulfonylovou skupinu a R³¹ představuje atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, arylovou skupinu /nižší alkylová skupina a arylová skupina mohou mít 1 až 4 substituenty vybrané ze skupiny, zahrnující atomy halogenu, popřípadě substituovaní hydroxylové skupiny, aminoskupiny a karboxylové skupiny/, aminoskupinu, hydrazinoskupinu, arylaminoskupinu, nižší alkoxyskupinu, karbamoylskupinu, pyrrolylovou skupinu, oxazolylovou skupinu, isoxazolylovou skupinu, thiazolylovou skupinu, imidazolylovou skupinu, pyridylovou skupinu, pyrimidinylovou skupinu, oxazolinylovou skupinu, oxazolidinylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu, imidazolidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, thiazinylovou skupinu nebo thiazolidinylovou skupinu, nebo

R¹¹ a R²¹ spolu představují nižší alkylidenovou skupinu, mající popřípadě karboxylovou skupinu/y/, nebo

R¹¹ a R²¹ tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou navázány pyrrolidinylovou skupinu, imidazolidinylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu, piperidinoskupinu nebo piperazinylovou skupinu /tyto heterocyklické skupiny mohou na kruhu mít nižší alkylové skupiny/u/ popřípadě substituované hydroxyskupinou/ami/,

G¹ představuje skupinu obecného vzorce

nebo

kde R⁷ představuje atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu a

R⁸ představuje hydroxylovou skupinu nebo aminoskupinu a

X¹¹ a X²¹ jsou připojeny k indolopyrrolokarbazolovým kruhům v poloze 1- nebo 2 a 10- nebo 11, a každý nezávisle na druhém znamená atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu nebo aralkoxyskupinu.

-9CZ 287304 B6

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou sloučeniny obecného vzorce lb

(Ib>

kde

R představuje atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu /nižší alkylová skupina může mít 1 až 5 substituentů vybraných ze skupiny, zahrnující karboxylové skupiny, karbamoylové skupiny, hydroxylové skupiny a kyanoskupiny/, arylovou skupinu, aralkylovou skupinu /arylová skupina a aralkylová skupina mohou mít 1 až 4 substituenty vybrané ze skupiny, zahrnující hydroxylové skupiny a karboxylové skupiny, pyridylovou skupinu, imidazolylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu, thiazolylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu nebo skupinu vzorce -Y-R³², kde Y představuje karbonylovou skupinu, thiokarbonylovou skupinu nebo sulfonylovou skupinu a když Y je karbonylová skupina nebo thiokarbonylová skupina, R³² představuje atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, arylovou skupinu /nižší alkylová skupina a arylová skupina mohou mít 1 až 4 substituenty vybrané ze skupiny, zahrnující atomy halogenu, popřípadě chráněné hydroxylové skupiny, aminoskupiny a karboxylové skupiny/, aminoskupinu, hydrazinoskupinu, arylaminoskupinu, nižší alkoxyskupinu, karbamoylovou skupinu, pyridylovou skupinu, pyrimidinylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu nebo pyrrolidinylovou skupinu a jestliže Y je sulfonylová skupina,

R³² představuje nižší alkylovou skupinu nebo arylovou skupinu, nebo

R¹² a R²² spolu znamenají nižší alkylidenovou skupinu, mající karboxylovou skupinu/y/, nebo

R¹² a R²² tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou navázány pyrrolidinylovou skupinu, piperidinoskupinu nebo piperazinylovou skupinu /tyto heterocyklické skupiny mohou mít na kruhu nižší alkylovou skupinu/y/ popřípadě nesoucí hydroxylovou skupinu/y// a

G¹, X¹¹ a X²¹ mají stejné významy jak jsou definovány výše u vzorce la,

Výhodněje G¹ obecně

a výhodně jsou X¹¹ a X²¹ hydroxylové skupiny navázané v poloze 1 až 11 indolopyrrolokarbazolového kruhu.

-10CZ 287304 B6

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být ve formě farmaceuticky přijatelných solí. Takové soli zahrnují adiční soli s anorganickými kyselinami, například kyselinou chlorovodíkovou a sírovou, a s organickými kyselinami, jako je například kyselina octová, citrónová, vinná a kyselina maleinová. Obsahují-li sloučeniny podle vynálezu kyselé skupiny, mohou tyto existovat ve formě solí alkalických kovů, například draselné soli a sodné soli, solí kovů alkalických zemin, jako je například hořečnatá a vápenatá sůl, a solí s organickými bázemi, jako je ethylaminová sůl a argininová sůl.

Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy imidopyrrolokarbazolů obecného vzorce I, a jejich farmaceuticky přijatelných solí. Jeho podstata je v tom, že se sloučenina obecného vzorce II nebo III

(II)

(III) v nichž

Y je vodík nebo Ci_6alkyl, který je popřípadě substituovaný, a X¹, X² a G mají významy uvedené v nároku 1, nebo derivát sloučenin obecných vzorců II a ΠΙ, ve kterém jsou funkční skupiny chráněny, uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce IV

R¹

H2N-N/

R2 (IV) v němž

R¹ a R² mají významy uvedené v nároku 1, nebo

R¹ a R² tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinou, Cé_i2 která má popřípadě na kruhu C^alkylové skupiny, jež jsou popřípadě substituované aminoskupinou, hydroxylem, karboxylem nebo sulfoskupinou,

-11CZ 287304 B6 nebo v reakci s jejím derivátem, v němž v případě, že R¹ a R² obsahují funkční skupinu, je tato funkční skupina chráněna, chránící skupiny se popřípadě odstraní za získání sloučeniny obecného vzorce lc

(lc) v němž R¹, R², X¹, X² a G mají shora uvedené významy, nebo se aminoskupina obecného vzorce -NR*R², v němž R¹ a R² mají uvedené významy, ve sloučenině obecného vzorce lc

a) formyluje zahřátím s kyselinou mravenčí, formamidem nebo dimethylformamidem, nebo reakcí se směsí kyseliny mravenčí a jejího anhydridu za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je karbonyl a R³ je vodík, a druhý substituent značí vodík, nebo se uvedená aminoskupina

b) alkyluje Ci_6 alkylhalogenidem, C,_6 alkylmesylátem nebo Ci_6 alkyltosylátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí Ci_6 alkyl a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

c) alkenyluje C₃_g alkenylhalogenidem nebo C₃_₈ alkenylmesylátem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí C₃_g alkenyl a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

d) aralkyluje C6_i2aryl-Ci_6alkylhalogenidem, Cé-naryl-Ci^alkylmesylátem nebo C^arylCi-6-alkyltosylátem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentu R¹ a R² značí C]_6 alkyl substituovaný C^₂ arylem a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

e) karbamoyluje Ci_6 alkylisokyanátem nebo Có-u arylisokyanátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ nebo R² značí skupinu -Y-R³, v níž X je karbonyl a R³ je C]_6 alkylaminoskupina nebo C6-12 arylaminoskupina, nebo se uvedená aminoskupina

f) thiokarbamoyluje Ci_6 alkylthioisokyanátem nebo Có-i₂ aiylthioisokyanátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ nebo R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je thiokarbonyl a R³ je Cj_6 alkylaminoskupina nebo arylaminoskupina, a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

d) alkanoyluje Ci^ alkanoylhalogenidem nebo Ci_6 alkanoylanhydridem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je karbonyl a R³ je Ci_« alkyl, a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

h) sulfonyluje anhydridem nebo halogenidem Ci_6 alkylsulfonové nebo Ce-n arylsulfonové kyseliny za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze

-12CZ 287304 B6 substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y značí sulfonyl a R³ je C_b6 alkyl nebo C^₂ aryl, nebo se

i) ve sloučenině obecného vzorce Ic, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí C₃_6 alkenyl a druhý substituent značí skupinu definovanou v nároku 1, C₃_6 alkenyl redukuje na C₃_^ alkyl katalytickou hydrogenací, nebo se

j) sloučenina obecného vzorce Ic kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce OHC-R⁶, v němž R⁶ je vodík, karboxyl nebo Ci_« alkyl, obsahující popřípadě 1 až 4 substituenty vybrané ze souboru zahrnujícího aminoskupinu, mono-C_b6alkylaminoskupinu, di-Ci_6alkylaminoskupinu, hydroxyl, karboxyl a sulfoskupinu, a chránící skupiny se ve všech případech popřípadě odstraní, načež se vzniklá sloučenina obecného vzorce I popřípadě převede na farmaceuticky přijatelnou sůl.

Výrazy alkylace, alkenylace, alkinylace, aralkylace, alkanoylace a sulfonylace jsou široce vykládány a znamená to, že všechny reakce zavádějí substituenty, odpovídající R¹ a R² ve struktuře sloučenin podle předloženého vynálezu a například, alkylace znamená zavedení substituované nebo nesubstituované alkylové skupiny podle vynálezu.

Reakce sloučeniny vzorce II nebo III /navíc zahrnující jejich deriváty, když je zavedena funkční skupina/ se sloučeninou vzorce IV /zahrnující i deriváty, kde jsou chráněny funkční skupiny/ může být provedena podle reakce známé per se pro imid nebo anhydrid kyseliny s hydrazinem nebo derivátem hydrazinu a může být například provedena za nepřítomnosti rozpouštědla nebo v inertním rozpouštědle, například rozpouštědle jako je Ν,Ν-dimethylformamid při teplotě mezi asi 0 °C a teplotě varu rozpouštědla, výhodně v rozmezí od asi teploty místnosti do asi 80 °C.

Použití množství sloučeniny vzorce IV ke sloučenině vzorce II nebo III není zvláště definována a může se měnit v širokém rozsahu podle typu sloučeniny, reakčních podmínek atd., ale obvykle je vhodné použít sloučeninu vzorce IV v množství v rozmezí od nejméně 1 mol, výhodně 1 až 10 mol, zejména 3 až 5 mol na mol sloučeniny vzorce II nebo III. Dále, jestliže sloučenina vzorce IV je kapalná při reakční teplotě, je také možné použít sloučeninu ve velkém přebytku, například v množství 10 až 40 mol na mol sloučeniny vzorce II nebo III takže slouží jako rozpouštědlo.

Může tak být získána sloučenina výše uvedeného vzorce Ic, kde jsou existující funkční skupiny současně vhodně chráněny.

Takto získaná sloučenina vzorce Ic v případě, že R¹³ a R²³ představují atom vodíku nebo její deriváty, kde jsou funkční skupiny chráněny /zde obecně označované jako sloučeniny vzorce Ic/ může být formylována, alkylována, alkenylována, alkinylována, aralkylována, karbamoylována, thiokarbamoylována, alkalnoylována nebo sulfonylována, za vzniku odpovídající sloučeniny vzorce Ic v případě, že alespoň jeden z R¹³ a R²³ představuje skupiny definované výše pro tyto skupiny s výjimkou atomu vodíku.

Formylace sloučeniny vzorce Ic může být provedena metodou obvykle používanou pro formylaci aminoskupiny a může, například být provedena zahříváním sloučeniny s kyselinou mravenčí, formamidem, dimethylformamidem nebo podobně, nebo metodou její reakce se směsí kyseliny mravenčí a anhydridem kyseliny v rozpouštědle, neovlivňujícím negativně reakci nebo bez jakéhokoliv rozpouštědla nebo jinými způsoby.

Reakce sloučeniny vzorce Ic s kyselinou mravenčí, formamidem, dimethylformamidem nebo podobně se obvykle provádí za přítomnosti rozpouštědla při teplotě od 30 °C do teploty varu rozpouštědla, ale je-li to nezbytné, může být také provedena při teplotě vyšší nebo pod takovou teplotou a doba reakce je obvykle v rozmezí od 30 minut do 2 dnů. Výhodně se reakce obvykle

-13CZ 287304 B6 provádí za přítomnosti kyselého katalyzátoru jako je kyselina chlorovodíková nebo kyselina sírová.

Formylace za použití směsi kyseliny mravenčí s anhydridem kyseliny se obvykle provádí při nižší teplotě v rozmezí od -5 °C do teploty místnosti, ale může se také provádět, je-li to nezbytné v rozmezí pod touto teplotou. Dále je reakční doba obvykle 10 minut až 5 hodin, ale je-li to nezbytné, může být tato doba prodloužena nebo zkrácena.

Alkylace, alkenylace, alkinylace a aralkylace sloučeniny vzorce Ic může být provedena podle o sobě známé metody, například reakcí s alkylačním činidlem, alkenylačním činidlem, alkinylačním činidlem nebo aralkylačním činidlem jako je alkylhalogenid, alkenylhalogenid, alkinylhalogenid, aralkylhalogenid, alkylmesylát, alkenylmesylát, aralkylmesylát, alkyltosylát nebo aralkyltosylát, nebo metodou kondenzace této sloučeniny s aldehydovou sloučeninou nebo ketonovou sloučeninou a redukcí vzniklého kondenzátu nebo podobně. Redukční reakce může být provedena metodou využívající kyselinu mravenčí, kov nebo hydrid kovu nebo obvyklou metodou jako je katalytická redukce za použití palladia na uhlí nebo podobně.

Karbamoylace a thiokarbamoylace sloučeniny vzorce Ic může být provedena reakcí odpovídající isokyanátové sloučenině nebo thioisokyanátovou sloučeninou za nepřítomnosti rozpouštědla nebo ve vhodném rozpouštědle. Reakční teplota může být v rozmezí od asi -20 °C do teploty varu rozpouštědla, výhodně asi 0 až 50 °C.

Alkanoylace sloučeniny vzorce Ic může být provedena její reakcí s odpovídajícím halogenidem kyseliny nebo anhydridem kyseliny za nepřítomnosti rozpouštědla nebo ve vhodném rozpouštědle. Reakce se obvykle provádí při teplotě v rozmezí od asi -5 °C do teploty varu rozpouštědla a je-li to nezbytné, může se také provádět při nižší teplotě.

Halogenid kyseliny nebo anhydrid kyseliny se obvykle používá v malém přebytku vzhledem ke sloučenině vzorce Ic, ale může, je-li to nezbytné, být použit v množství nižší nebo vyšším než uvedené množství a reakční doba může obvykle být 30 minut až 2 dny.

Sulfonylace sloučeniny vzorce Ic může být provedena reakcí s činidlem jako je odpovídající anhydrid organické sulfonové kyseliny nebo organický sulfonylhalogenid za přítomnosti nebo nepřítomnosti báze. Reakční teplota může být obvykle dostačující v rozmezí od asi -10 °C do asi 50 °C, aleje možné, v případě nutnosti, pracovat při teplotě nad nebo pod uvedenou teplotou a reakční doba může obvykle být 30 minut až 3 dny. Činidlo jako je anhydrid organické sulfonové kyseliny nebo organický sulfonylhalogenid, se obvykle používá v malém přebytku, ale je možno jej také použít ve vyšším nebo nižším množství.

Dále je kondenzační reakce sloučeniny vzorce Ic se sloučeninou výše uvedeného vzorce V /zahrnujícím její deriváty, ve kterých jsou funkční skupiny chráněny/je takzvaná reakce tvorby Schiffovy báze a může, například, vhodně provedena v rozpouštědle inertním vůči reakci, např. v rozpouštědle jako je tetrahydrofuran, při teplotě mezi asi 0 °C až teplotě varu rozpouštědla, výhodně v rozmezí od teploty místnosti do asi 50 °C. Reakční doba je obvykle v rozmezí 30 minut až 2 dny, ale může být, je-li to nezbytné, kratší nebo delší.

Použité množství sloučeniny vzorce V ke sloučenině vzorce Ic není přísně stanoveno, ale obvykle je vhodné použít sloučeninu vzorce V v množství 1 až 50 mol, výhodně 3 až 10 mol na mol sloučeniny vzorce Ic.

Hydrazonová sloučenina získaná výše uvedenou reakcí může být podrobena katalytické hydrogenační reakci za použití palladia na uhlí nebo podobně za získání sloučeniny vzorce I, kde R¹ nebo R² představují atom vodíku.

-14CZ 287304 B6

V předchozích postupech může být chránění funkčních skupin v surovém materiálu a odstranění chránících skupin přítomných v připravené sloučenině provedeno za použití obvyklých metod, které se v této oblasti běžně používají.

Dále izolace a čištění sloučenin připravených výše uvedenými reakcemi může být provedeno metodami známými per se v oblasti organické syntézy, například srážecími metodami, metodami extrakce rozpouštědlem, rekrystalizací, chromatografii atd.

Sloučenina výše uvedeného vzorce II, použitá jako výchozí surový materiál ve výše uvedených postupech může být připravena glykosidací sloučeniny obecného vzorce VI.

(vi) kde X¹, X² a Y mají výše uvedený význam, připravenou způsobem známým per se /J. Chem. Soc. Perkin Transactions I. str. 2475-2480 /1990// nebo jejího derivátu, kde jsou funkční skupiny chráněny.

Glykosidace sloučeniny vzorce VI nebo jejího chráněného derivátu, kde jsou funkční skupiny chráněny, může být provedena způsobem známým per se /J. Am. Chem. Soc. 60, 2559 /1938//, například kondenzací s reaktivním derivátem pentosy nebo hexosy, kde jsou hydroxylové skupiny chráněny, např. l-brom-2,3,4,6-O-tetraacetylglukózou, za použití kyanidu rtuťnatého jako aktivačního činidla, nebo uhličitanu stříbrného, oxidu stříbrného a podobně, výhodně oxidu stříbrného, v aprotickém rozpouštědle, např. rozpouštědle jako je benzen, toluen nebo methylenchlorid při teplotě od asi 0 °C do asi 100 °C, výhodně asi 80 °C.

Alternativně, sloučenina vzorce II může také být připravena postupem podle PCT/W091/18003.

Dále, sloučenina vzorce III může být připravena zpracováním s bází takto získané sloučeniny vzorce II nebo jejím derivátem, ve kterém jsou funkční skupiny chráněny.

Výhodnou bází je vodný roztok hydroxidu draselného a reakce s takovou bází se obvykle provádí při teplotě místnosti, někdy je však výhodné provádět ji při teplotě až 50 °C.

Neutralizace nebo modifikace reakční směsi se v případě potřeby provádí použitím kyseliny chlorovodíkové, čímž se sloučenina vzorce III vysráží v krystalické formě.

-15CZ 287304 B6

Předmětem vynálezu je rovněž meziprodukt obecného vzorce III

(III) ve kterém X¹, X² a G mají významy uvedené v nároku 1, a jeho derivát, ve kterém jsou funkční skupiny chráněné, pro výrobu indolopyrrolokarbazolů shora uvedeného obecného vzorce I.

Dalším předmětem vynálezu jsou farmaceutické přípravky k léčení rakoviny, které jako účinné látky obsahují v účinném množství indolopyrrolokarbazoly podle nároků 1 až 6, uvedeného obecného vzorce I, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, ve spojení s farmaceuticky přijatelnými nosiči.

Sloučeniny obecného vzorce I podle předloženého vynálezu mají vynikající protinádorovou aktivitu jak je doloženo následujícími příklady farmakologických testů.

1/ Terapeutický účinek proti myšímu tumoru /P3 88/

Terapeutický účinek sloučenin podle vynálezu proti myšímu tumoru /P388/ je uveden v tabulce 1 a 2.

Tabulka 1

Účinek sloučeniny z příkladu 2 vůči P388

Tumor17	dávky27, i.p. /mg/kg injekce/	MST37/dny/	T/C /%/*7
	0	12,3 ±1,06	100
	1	15,8 ±0,84	128
P388	3	17,8 ± 1,92	145
	10	>26,4 ± 18,82	>245
	30	>42,2 ±24,38	>343
	100	>47,2 ± 18,90	>384

Tabulka 2

Účinek sloučeniny z příkladu 5 vůči P388

Tumor17	dávka27, i.p. /mg/kg/injekce/	MST37/dny/	T/C /«/o/47
	0	12,3 ±0,95	100
	1	16,8 ±0,84	137
P388	3	17,8 ± 1,92	145
	10	>26,2 ± 10,18	>213
	30	>23,4 ± 9,74	>190
	100	>36,4 ±8,05	>296

-16CZ 287304 B6 /Poznámky k tabulkám 1 a 2/ ¹⁷Inokulace tumoru: 10⁶ rakovinných buněk bylo inokulováno intraperitoneálně.

^2/Dávka: Po inokulaci tumoru byla podávána každá dávka intraperitoneálně jednou denně 1. až

10.den ^3/MST: počet přežívajících ve dnech - průměr ^4/ T/C /%/: /MST ošetřené skupiny/MST kontroly/ x 100 ^5/Standard: v případě T/C > 125, je testovaná sloučenina hodnocena jako mající výrazný protinádorový účinek v dávce.

2/ Inhibiční účinek na proliferaci buněk myší leukemie

Metoda měření:

100 μΐ dávky buněčného kultivačního média /10% fetální hovězí sérum- obsahující-RPMI-1640 médium/, obsahujících 3 x 10³ buněk myší leukemie /P388/ se vloží do 96-jamkové mikrodestičky, buňky se kultivují pod 5 % CO₂ při 37 °C po 24 hodin, přidá se 10 μΐ testovaných roztoků, obsahujících testované sloučeniny se přidá do jamek a buňky se kultivují pod 5% CO₂ při 37 °C po 24 hodin. 10 μΐ dávky 0,5% thiazoylové modři se přidá ke kultivační půdě a inkubace se provede pod 5% CO₂ při 37 °C po 2 hodiny pro provedení enzymatické reakce. Pro přerušení reakce se přidá 20% dodecylsulfát sodný /SDS/, inkubace se dále provádí při 37 °C po 4 hodiny pro rozpuštění vzniklého barviva a absorbance při 550 nm se měří a srovnává s kontrolní skupinou. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3

Inhibiční aktivita proliferace buněk myší leukemie P388

Testovaná sloučenina 50% inhibiční koncentrace /IC₅₀, μΜ/

sloučenina z příkladu 1	<0,030
sloučenina z příkladu 2	0,29
sloučenina z příkladu 3	0,065
sloučenina z příkladu 4	0,096
sloučenina z příkladu 5	0,28
sloučenina z příkladu 6	0,059
sloučenina z příkladu 7	0,91
sloučenina z příkladu 8	0,30
sloučenina z příkladu 9	0,028
sloučenina z příkladu 10	0,46
sloučenina z příkladu 11	<0,026
sloučenina z příkladu 12	0,042
sloučenina z příkladu 13	0,22
sloučenina z příkladu 14	<0,027
sloučenina z příkladu 15	0,31
sloučenina z příkladu 17	0,044
sloučenina z příkladu 22	0,11
sloučenina z příkladu 23	<0,025
sloučenina z příkladu 24	0,001
sloučenina z příkladu 25	0,048
sloučenina z příkladu 27	0,027
sloučenina z příkladu 28	<0,029

-17CZ 287304 B6

Tabulka 3 - pokračování

Testovaná sloučenina

50% inhibiční koncentrace sloučenina z příkladu 29 sloučenina z příkladu 30 sloučenina z příkladu 31 sloučenina z příkladu 33 sloučenina z příkladu 34 sloučenina z příkladu 35 sloučenina z příkladu 36 sloučenina z příkladu 37 /IC₅q, μΜΖ

0,005

0,003

0,011

0,11

0,019

0,17

0,002

0,095

Z výsledků uvedeného farmakologického testu je zřejmé, že sloučeniny podle předloženého vynálezu vykazují vynikající protinádorovou účinnost a jsou vhodné jako protinádorová činidla pro kontrolu nebo prevenci chorob, zejména pro léčbu rakoviny. Jestliže se sloučenina podle vynálezu použije pro tento účel, je obvykle formulována do farmaceutických přípravků, obsahujících její účinné množství a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.

Jako formy použití sloučeniny podle vynálezu pro tento účel mohou být zvoleny různé formy aje možno uvést orální činidla jako jsou například tablety, kapsle, prášky, granule nebo kapaliny nebo sterilizovaná parenterální činidla jako jsou například roztoky nebo suspenze nebo čípky, masti nebo podobné přípravky.

Mohou být připraveny pevné přípravky, jako jsou tablety, kapsle, granule nebo prášky nebo mohou být také připraveny za použití vhodných aditiv. Tato aditiva mohou být aditiva obvykle používaná a zahrnují sacharidy jako například laktosu a glukózu; škroby jako například kukuřičný, pšeničný a rýžový; mastné kyseliny jako například kyselinu stearovou; anorganické soli jako např. metakřemičitanhlinitan hořečnatý a bezvodý fosforečnan vápenatý; syntetické makromolekuly jako např. polyvinylpyrrolidon a polyalkylenglykol; soli mastných kyselin jako je například stearát vápenatý a stearát hořečnatý; alkoholy jako například stearylalkohol a, benzylalkohol; syntetické deriváty celulózy jako je například methylcelulóza, karboxymethylcelulóza, ethylcelulóza a hydroxypropylcelulóza a dále želatina, talek, rostlinné oleje, arabská guma atd..

Pevné přípravky jako jsou tablety, kapsle, granule a prášky obsahují účinnou složku v množství 0,1 až 100 % hmotn., výhodně 5 až 100 hmotn. %.

Kapalné přípravky se připraví ve formě jako jsou suspenze, sirupy, injekce nebo kapky za použití vhodných přísad obvykle používaných v kapalných přípravcích jako je voda, alkoholy nebo rostlinné oleje jako je například sojový olej, podzemnicový olej a sezamový olej.

Rozpouštědla vhodná v případě parenterálního podání ve formě intramuskulární injekce, intravenózní injekce nebo subkutánní injekce zahrnují například, destilovanou vodu pro injekce, vodné roztoky hydrochloridu lidokainu /pro intramuskulární injekce/, fyziologický salinický roztok, vodné roztoky glukózy, ethanol, polyethylenglykol, kapaliny pro intravenózní injekce /např. vodné roztoky kyseliny citrónové a citrátu sodného, atd./, roztoky elektrolytů /pro intravenózní kapačky a intravenózní injekce/, atd., a směsi těchto rozpouštědel.

Tyto injekce také mohou mít formy prášků jako takových nebo s přidanými aditivy, které se rozpustí při použití kromě takových forem, kde se složky postupně rozpouštějí. Taková injekce obsahuje obvykle 0,1 až 10 % hmotn., výhodně 1 až 5 % hmotn. účinné složky.

Kapalné činidlo suspenze, sirupu nebo podobně pro orální podání může obvykle obsahovat 0,5 až 10 % hmotn. účinné složky.

-18CZ 287304 B6

Výhodná dávka sloučenin podle tohoto vynálezu se může měnit podle typu použité sloučeniny, způsobu a četnosti aplikace přípravku, specifického léčeného místa, stupně choroby, stáří pacienta, diagnózy lékaře, typu nádoru atd., ale přibližně mohou denní dávky pro dospělého jedince být, například, v rozmezí 10 až 500 mg v případě orálního podání a v rozmezí 10 až 100 mg v případě parenterálního podání, výhodně intravenózní injekci. Frekvence podání se mění v závislosti na způsobu podání a symptomech, obvykle 1 až 5krát denně. Mohou být také upravena metody podání jako je přerušované podání, např. podání každý druhý den nebo podání každý třetí den.

Vynález je blíže popsán následujícími příklady, které jej však nikterak neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad A

Sloučenina vzorce

3,4 g 12,13—dihydro—1,1 l-dihydroxy-13-/beta-D-glukopyranosyl/-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu se rozpustí ve 120 ml 10% vodného roztoku hydroxidu draselného a roztok se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Reakční roztok se neutralizuje přídavkem 120 ml 2N kyseliny chlorovodíkové a vysrážené červené krystaly se odfiltrují, promyjí vodou a suší, získá se 3,0 g uvedené sloučeniny.

FAB-MS/M/z/: 520/M7, 521 /M+HČ ¹ H-NMR /400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 3,42 /1H, ml, 3,56-3,70 /2H, ml, 3,76 /1H, ml, 3,954,10 /2H, ml, 4,95 /1H, d, J=4,6 Hz/, 5,24 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,32 /1H, dd, J=4,9, 5,1 Hz/, 7,06 /2H, dd, >7,6, 7,8 Hz/, 7,09 /1H, d, J=8,0 Hz/, 7,20 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,40 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,36 /1H, d, J=7,6 Hz/, 8,51 /1H, d, J=7,6 Hz/, 10,13 /1H, s/, 10,52 /1H, s/, 11,11 /1H, s/.

-19CZ 287304 B6

Příklad B

Sloučenina vzorce

mg rebekamycinu se rozpustí v 5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 5 ml 2N vodného roztoku hydroxidu sodného a směs se míchá 3 hodiny při 80 °C. K reakčnímu roztoku se přidá 60 ml vody, směs se ochladí ledem a vysrážená žlutá sraženina se odfiltruje. Zpracuje se sloupcovou chromatografií na silikagelu /vnitřní průměr 1,5 cm, délka 45 cm/, kolona se promyje chloroformem, eluuje směsí chloroform-tetrahydrofuran /10:1/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Výsledný žlutý prášek se promyje chloroformem. Získá se 6,4 mg výše uvedené sloučeniny.

Hodnoty Rf: 0,51 /získána na Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran:kyselina octová =10:1:1:0,2/

FAB-MS /m/z/: 571 /M+Hf ’Η-NMR /300 MHz, DMSO-dfi/, δ /ppm/: 10,9 /1H, s/, 9,07 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,92 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,78 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,53 /1H, d, J=7,8Hz/, 7,50 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,03 /1H, d, J=8,9 Hz/, 3,96 /2H, m/, 3,87 /1H, m/, 3,61 /3H, s/, 3,54-3,73 /3H, m/.

-20CZ 287304 B6

Příklad 1

Sloučenina vzorce

3,51 g 12,13-dihydro-l, 11-dihydroxy-l 3-/beta-D-glukopyranosyl/-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7-/6H/dionu se rozpustí v 8 ml hydrazinhydrátu /Wako Pure Chemical Industries, Ltd./ a reakce se provádí při teplotě místnosti po 2 hodiny. Po reakci se přidá 180 ml přečištěné vody, pH roztoku se upraví na 5,0 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, směs se dostatečně ochladí ledem a výsledná sraženina se odfiltruje, promyje se čištěnou vodou. Získá se 3,51 g výše uvedené sloučeniny vzorce 1 /výtěžek 97 %/.

FAB-MS /m/z/: 535 /M+H/ 'H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,9 /1H, šs/, 10,4 /1H, s/ 10,0 /1H, s/, 8,72 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,54 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,05 /1H, d, J=9,3 Hz/, 7,02 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,00 /1H, d, J=7,8 Hz/, 5,42 /1H, šd, J=5,8 Hz/, 5,35 /1H, šs/, 5,22 /1H, šd, J=4,4 Hz/, 4,96 /2H, šs/, 4,91 /1H, šd, J=5,3 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,73 /1H, m/, 3,63 /2H, m/, 3,39 /1H, m/

3,47 g sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu /DMF/, roztok se přitom míchá při teplotě místnosti, po částech se přidá 20 ml lOOmg/ml roztoku

-21CZ 287304 B6 kyseliny glyoxylové, vytvoří se tak sraženina, která tuhne do stavu podobného gelu. Dále se přidá 200 ml čištěné vody, reakční roztok se ochladí ledem a výsledná sraženina se oddělí filtrací, promyje se čištěnou vodou a suší pod sníženým tlakem. Získá se 3,85 g výše uvedené sloučeniny vzorce 2 /výtěžek 100 %/.

FAB-MS /m/z/: 591 /M+HÁ 'H-NMR/400 MHz, DMSO-d₆/, δ /ppm: 11,1 /1H, šs/, 10,5 /1H, šs/, 9,01 /1H, s/, 8,69 /1H, d, J=7,8Hz/, 8,53 /1H, d, J=7,8Hz/, 7,23 /2H, t, J=7,8Hz/, 7,10 /1H, d, J=9,3 Hz/, 7,06 /1H, d, J=7,8Hz/, 7,04 /1H, d, J=7,8Hz/, 5,44 /1H, šs/, 5,34 /1H, šs/, 5,24 /1H, šs/, 4,95 /1H, šd, J=5,9 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,76 /1H, ml, 3,64 /2H, ml, 3,40 /1H, ml.

Příklad 3

Sloučenina vzorce 3

mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí v 0,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu /DMF/ za míchání roztoku při teplotě místnosti, přidá se 0,2 ml 15% semialdehydu kyseliny jantarové /Aldrich Chemical Co./ a o jednu hodinu později se přidá 5 ml čištěné vody. Potom se reakční roztok ochladí ledem a výsledná sraženina se odfiltruje, promyje čištěnou vodou a suší za sníženého tlaku, získá se 25,3 mg uvedené sloučeniny vzorce 3 /výtěžek 91 %/.

FAB-MS/m/z/: 619/M+H/ ‘H-NMR /400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 12,1 /1H, šs/, 11,0 /1H, šs/, 10,4 /1H, šs/, 10,0 /1H, šs/, 8,69 /1H, šs/, 8,68 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,51 /1H, d, J=8,3 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,07 /1H, d, J=9,3 Hz/, 7,04 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,01 /1H, d, J=7,8 Hz/, 5,43 /1H, šd, J=5,4 Hz/, 5,33 /1H, šs/, 5,22 /1H, šs/, 4,93 /1H, šd, J=4,9 Hz/, 4,01 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,63 /2H, ml, 3,40 /1H, m/.

-22CZ 287304 B6

Příklad 4

Sloučenina vzorce 4

511 mg rebekamycinu /sloučenina popsaná v J. Antibiotics 40, 668-678 /1987// se rozpustí ve 3 ml hydrazinhydrátu /Wako Pure Chemical Industries, Ltd./ a roztok se nechá stát při teplotě místnosti jednu hodinu. Přidá se 200 ml čištěné vody a výsledná sraženina se oddělí filtrací, promyje 100 ml čištěné vody a suší se za sníženého tlaku. Získá se 497 mg uvedené sloučeniny, 6-N-aminorebekamycinu vzorce 4 /výtěžek 95 %/.

FAB-MS /m/z/: 585 /M+HÁ ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,64 /1H, šs/, 9,24 /1H, d, J=7,8 Hz/, 9,07 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,70 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,45 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,42 /1H, d, J=7,8 Hz/, 6,93 /1H, d, J=8,8 Hz/, 5,42 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,33 /1H, t, J=5,4 Hz/, 5,03 /3H, šs/, 3,97 /2H, m/, 3,84 /1H, m/, 3,59 /3H, s/, 3,50 ~ 3,70 /3H, m/.

Příklad 5

Sloučenina vzorce 5

-23CZ 287304 B6

Způsob A g sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí v 60 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 1,8 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové, směs se zahřívá na 60 °C po 4 hodiny, dále se přidá 0,8 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a směs se zahřívá na 37 °C po 16 hodin. Smíchá se s 1 1 ethylacetátu, směs se postupně promyje 2% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a potom se ethylacetátové vrstva dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha, získá se 3,3 g oranžového prášku. Tento se rozpustí v methanolu a zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH 20 /vnitřní průměr 3 cm, délka 54 cm, eluce methanolem/, a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 2413,6 mg uvedené sloučeniny vzorce 5 jako oranžového prášku.

Způsob B

25,9 mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 0,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 15,0 mg formohydrazinu a směs se míchá při 70 °C po 2 hodiny. Smísí se se 70 ml ethylacetátu a promyje se vodou /20 ml/. Ethylacetátové vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha, získá se 26,9 mg oranžového prášku. Tento se rozpustí v methanolu a zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH 20 /vnitřní průměr 1,5 cm, délka 48 cm, eluce methanolem/, a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 16,3 m uvedené sloučeniny vzorce 5 jako oranžového prášku.

Rf hodnota: 0,35 /na Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform-methanol-tetrahydrofuran = 2:1:1/

FAB-MS /m/z/: 562 /ΜΛ ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-d₆/, δ /ppm/: 11,0 /1H, šs/, 10,8 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 10,0 /1H, s/,

8,64 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,47 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,44 /1H, s/, 7,21 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,06 /1H, d, J=9,7 Hz/, 7,05 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,02 /1H, d, J=7,8 Hz/, 5,43 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,36 /1H, šs/, 5,22 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,92 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,62 /2H, m/.

Příklad 6

Sloučenina vzorce 6

-24CZ 287304 B6 ml kyseliny octové a 2 ml acetanhydridu se přidá k 510 mg sloučeniny získané v příkladu 1 a sloučenina se rozpustí zahříváním při 90 °C. Přidá se voda, objem se upraví na 300 ml a reakční produkt se adsorbuje na sloupci Diaionu HP 20 /vnitřní průměr 3 cm, délka 13,5 cm/ a po promytí kolony 600 ml vody se eluuje 300 ml methanolu. Methanolový eluát se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí v 50 ml methanolu a roztok se zahustí na asi 5 ml. Přidá se k němu 100 ml ethylacetátu, směs se nechá stát přes noc při 4 °C a výsledná oranžová sraženina se odfiltruje, získá se 426 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 6.

Rf hodnota: 0,43 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform-methanol-tetrahydrofuran = 2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 576 /ΜΛ 'Η-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/ 11,0 /1H, s/, 10,7 /1H, s/, 10,4 /1H, šs/, 10,05 /1H, s/,

8,64 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,47 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,20 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,01-7,06 /3H, m/, 5,355,45 /2H, m/, 5,23 /1H, šs/, 4,92 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,58-3,70 /2H, m/, 3,40 /1H, m/, 2,10/3H,s/.

Příklad 7

Sloučenina vzorce 7

72,5 mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve směsi 8 ml tetrahydrofuranu a 5 ml methanolu, přidá se 140 μΐ 2N kyseliny chlorovodíkové a 13,2 μΐ 37% vodného roztoku formaldehydu se přidá a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 80 mg 10% palladia na uhlí a směs se redukuje pod plynným vodíkem při teplotě místnosti 2 hodiny a pak se zfiltruje přes Celit. Přidá se 80 ml ethylacetátu k získanému filtrátu, směs se postupně promyje 2% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a potom se výsledná ethylacetátová vrstva dehydratuje a zahustí se dosucha, získá se 28,8 mg oranžového prášku. Tento se rozpustí v malém množství methanolu a roztok se zpracuje sloupcovou chromatografíí na Sephadexu LH-20 /vnitřní průměr 1,5 cm, délka 90 cm, eluce methanolem/, získá se 17,1 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 7 ve formě oranžového produktu.

Rf hodnota: 0,49/ na Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform-methanol-tetrahydrofuran-kyselina octová = 20:10:10:1/.

-25CZ 287304 B6

FAB-MS /m/z/: 549 /M+H/* ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-de/, 5 /ppm/: 10,9 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 9,98 /1H, s/, 8,72 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,54 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,00-7,06 /3H, m/, 5,73 /1H, q, J=5,4 Hz/, 5,43 /1H, d, J=5,7Hz/, 5,35 /1H, šs/, 5,22 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,90 /1H, d, 5,4 Hz/, 3,96-4,03 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,58-3,70 /2H, m/, 3,40 /1H, m/, 2,74 /3H, d, J=5,4 Hz/.

Příklad 8

Sloučenina vzorce 8

NH- CHjCOOH

500 mg sloučeniny získané v příkladu 2 se rozpustí v 6 ml Ν,Ν-dimethylformamidu /DMF/, přidá se 75 mg 10% palladia na uhlí /Pd-C/ a hydrogenace se provádí při teplotě místnosti po

3,5 hodiny za míchání. Reakční směs se odfiltruje za použití papírového filtru na který byla nastříkána diatomická hlinka pro odstranění Pd- a k filtrátu se přidá 150 ml vody. pH směsi se upraví na 5 IN hydroxidem sodným a pak se extrahuje ethylacetátem /200 ml x 5/. Ethylacetátová vrstva se zahustí a vysrážené krystaly se oddělí filtrací. Získá se 182,3 mg uvedené sloučeniny vzorce 8.

FAB-MS /m/z/: 593 /M+H/* 'H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 12,6 /1H, šs/, 10,9 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 10,0 /1H, s/, 8,69 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,52 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,18 /2H, t, J=7,8 Hz/, 6,99 ~ 7,05 Z3H, m/, 5,90 /1H, šs/, 5,42 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,35 /1H, t, J=5,4 Hz/, 5,21 /1H, d, J=4,9 Hz/, 4,89 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,03 /2H, m/, 3,83 /2H, s/, 3,74 /1H, m/, 3,63 /2H, ml, 3,39 /1H, m/.

-26CZ 287304 B6

Příklad 9

Sloučenina vzorce 9

ml methanolu se přidá ke 501,7 mg sloučeniny získané v příkladu A a potom se přidá 501,7 mg hydrochloridu semikarbazidu, 0,325 ml triethylaminu a směs se refluxuje za zahřívání 8 hodin. Po reakci se reakční roztok zahustí dosucha, přidá se 300 ml methylethylketonu /MEK/ a 200 ml vody, provede se extrakce a k vodné vrstvě se přidá dalších 300 ml MEK pro provedení reextrakce. MEK vrstvy se spojí a zahustí se dosucha, ke zbytku se přidá 300 ml methanolu, tím se rozpustí, roztok se zpracuje na chromatografícké koloně Sephadexu LH-20 /3x28 cm/ a eluce se provede methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 461 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 9/ ve formě červeného, krystalům podobného prášku.

Rf hodnota: 0,15 /Měrek Co., Kieselgel 60F₂₅₄, vyvíjecí systém:methanol:chloroform:tetrahydrofuran = 1:2:1/.

FAB-MS /m/z/: 577 /Mf 'H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 10,0 /1H, s/, 8,68 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,66 /1H, šs/, 8,51 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,20 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,01 ~ 7,07 /3H, m/, 6,41 /2H, šs/, 5,44 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,38 /1H, šs/, 5,23 /1H, d, J=4,9 Hz/, 4,91 /1H, šs/, 4,00 ~ 4,09 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,60 ~ 3,68 /2H, m/, 3,39 /1H, m/.

-27CZ 287304 B6

Příklad 10

Sloučenina vzorce 10

/10/ ml methanolu se přidají ke 22 mg sloučeniny získané v příkladu A a směs se refluxuje za zahřívání 22 hodin. Reakční roztok se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí ve 4 ml methanolu, roztok se zpracuje na koloně Sephadexu LH-20 /1,8x35 cm/, eluce se provede methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 10,7 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 10.

Rf hodnota: 0,29 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:l:l/

FAB-MS /m/z/: 594 /Μ+ΗΛ ‘H-NMR/400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,4 /1H, šs/, 10,1 /1H, šs/, 9,73 /1H, šs/,

8,65 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,49 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,27 /2H, s/, 7,21 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,01 ~ 7,12 /3H, m/, 5,45 /1H, šs/, 5,37 /1H, šs/, 5,24 /1H, šs/, 4,91 /1H, šs/, 3,97 ~ 4,10 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,62 /2H, m/, 3,40 /1H, m/.

Příklad 11

Sloučenina vzorce 11

-28CZ 287304 B6

9,5 mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve 2 ml tetrahydrofuranu (THF), k roztoku se přidá 30 mg anhydridu methansulfonové kyseliny (Aldrich Chemical Co.), směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Reakční roztok se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí ve 2 ml methanolu, zpracuje chromatografií na koloně Sephadexu LH-20 (1,8 x 34 cm) a eluuje se methanolem. Frakce obsahující žádaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 8,3 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 11.

Rf hodnota: 0,48 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/

FAB-MS/m/z/: 612/MÁ ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,5 /1H, brs/, 10,4 /1H, s/, 10,1 /1H, s/, 8,67 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,50 /1H, d, J=7,7 Hz/, 7,22 /2H, t, J=7,6 Hz/, 7,02 ~ 7,07 /3H, m/, 5,43 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,36 /1H, brs/, 5,22 /1H, d, J=5,2 Hz/, 4,89 /1H, d, J=4,8 Hz/, 4,03 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,63 /2H, m/, 3,40 /1H, m/.

Příklad 12

Sloučenina vzorce 12

ml methanolu a 2 ml tetrahydrofuranu se přidají k 11,7 mg sloučeniny získané v příkladu 1, získá se roztok. Přidá se 0,1 ml anhydridu kyseliny propionové /Aldrich Chemical Co./ a směs se míchá při teplotě místnosti po 4 hodiny. K reakčnímu roztoku se přidají 2 ml vody a 3 ml methanolu, směs se nechá stát 30 minut a pak se zahustí dosucha a přidají se 3 ml methanolu. Získá se roztok, který se zpracuje na koloně Sephadexu LH-20 /1,8 x 30 cm/ a eluuje se methanolem a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 6,2 mg uvedené sloučeniny vzorce 12.

Rf hodnota: 0,55 /Měrek Co., Kieselgel 60F₂₅4, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/ ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,6 /1H šs/, 10,4 /1H, šs/, 10,0 /1H, s/, 8,64 /1H, d, J=7,8 MHz/, 8,47 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,20 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,00 ~ 7,08 /3H, m/, 5,30 ~ 5,45 /2H, m/, 5,21 /1H, m/, 4,92 /1H, m/, 4,02 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,62 /2H, m/, 3,38 /1H, m/, 2,39 /2H, q, J=9,3 Hz/, 1,16 /3H, t, J=7,3 Hz/.

-29CZ 287304 B6

Příklad 13

Sloučenina vzorce 13 nhcoocf₃

/13/

9,9 mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve 2 ml tetrahydrofuranu, přidá se 0,006 ml anhydridů kyseliny trifluoroctové a směs se nechá stát při teplotě místnosti 15 minut. K reakčnímu roztoku se přidají 2 ml vody, směs se zahustí dosucha, přidají se 2 ml vody a 10 ml ethylacetátu, provede se extrakce a získaná ethylacetátová vrstva se zahustí dosucha. Získaná surová substance se rozpustí ve 3 ml methanolu, zpracuje chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8x30 cm/ a eluuje se methanolem a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 9,5 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13.

Rf hodnota: 0,53 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform: methanol_tetrahydrofuran = 2:1:1/.

'H-NMR /500 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 12,7 /1H, šs/, 11,0 /1H, šs/, 10,5 /1H, šs/, 10,1 /1H, šs/, 8,61 /1H, d, J=7,6 Hz/, 8,45 /1H, d, J=7,9 Hz/, 7,21 /2H, t, J=7,6 Hz/, 7,02 ~ 7,07 /3H, m/, 5,42 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,35 /1H, šs/, 5,21 /1H, šs/, 4,91 /1H, d, J=5,5 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,76 /1H, m/, 3,61 /2H, m/, 3,39 /1H, m/.

-30CZ 287304 B6

Příklad 14

Sloučenina vzorce 14

NHCHoCONHo

ml methanolu a 4 ml benzenu se přidají ke 31,6 mg sloučeniny získané v příkladu 8, vznikne roztok. K němu se přidá 0,15 ml trimethylsilyldiazomethanu /10% hexanový roztok, Tokyo Kasei Co./ a směs se nechá stát při teplotě místnosti 10 minut a zahustí se dosucha. Získá se 29,3 mg methylesteru sloučeniny získané v příkladu 8. Tato se rozpustí v 5 ml methanolu, přidá se 0,6 ml koncentrovaného vodného amoniaku a směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin. Reakční roztok se zahustí dosucha, přidají se 3 ml methanolu ke zbytku, získaný roztok se chromatografuje na koloně Sephadexu LH-20 /1,8x36 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 16,9 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 14.

Rf hodnota: 0,22 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol_tetrahydrofuran = 2:1:1/.

‘H-NMR /400 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 10,9 /1H, s/, 10,4 /1H, šs/, 10,0 /1H, šs/, 8,69 /1H, d, J=7,3 Hz/, 8,52 /1H, d, >8,3 Hz/, 7,77 /1H, šs/, 7,39 /1H, šs/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 6,98 ~ 7,05 /2H, m/, 6,25 /1H, t, J=3,9 Hz/, 5,41 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,35 /1H, šs/, 5,20 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,87 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,68 ~ 3,70 /4H, m/, 3,39 /1H, m/.

FAB-MS/m/z/: 592 /M+Hf

-31CZ 287304 B6

Příklad 15

Sloučenina vzorce 15

ml methanolu se přidají k 11 mg sloučeniny z příkladu A a 10 mg 2-hyrazinopyridinu /Aldrich Chemical Co./, připraví se roztok a tento roztok se refluxuje 1,5 hodiny. Reakční roztok se zahustí dosucha, přidá se 30 ml vody a 50 ml ethylacetátu, pH vodné vrstvy se upraví na 5 IN kyselinou chlorovodíkovou, provede se extrakce a výsledná ethylacetátová vrstva se zahustí dosucha. Výsledná surová substance se rozpustí ve 2 ml methanolu, zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8 x 36 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 10 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 15.

Rf hodnota: 0,46 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 612 /M+HT ‘H-NMR /400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 10,0 /1H, s/, 9,34 /1H, s/,

8,65 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,48 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,95 /1H, d, J=4,9 Hz/, 7,62 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,18 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,00 ~ 7,08 /3H, m/, 6,86 /1H, d, J=7,8 Hz/, 6,78 /1H, dd, J=4,9, 7,8 Hz/, 5,44 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,37 /1H, šs/, 5,23 /1H, d, J=5,8 Hz/, 4,92 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,76 /1H, m/, 3,64/2H,m/, 3,41/1H, m/.

-32CZ 287304 B6

Příklad 16

Sloučenina vzorce 16

ml methanolu se přidají ke 24 mg sloučeniny získané v příkladu A a 4-hydrazinobenzoové kyselině /Aldrich Chemical Co./ a směs se refluxuje za zahřívání 2 hodiny. Reakční roztok se zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8 x 44 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 20,9 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 16 jako červený krystalický prášek.

Rf hodnota: 0,31 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol: tetrahydrofuran =2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 655 /M+H/ 'H-NMR /500 MHz, DMSO-d/, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,5 /1H, šs/, 10,1 /1H, šs/, 9,11 /1H, s/,

8,65 /1H, d, J=7,9Hz/, 8,48 /1H, d, J=7,9Hz/, 7,80 /2H, d, J=8,3 Hz/, 7,18 /2H, t, J=7,6 Hz/, 7,01 ~ 7,08 /3H, m/, 6,84 /2H, d, J=8,3 Hz/, 5,20 ~ 5,60 /3H, šs/, 4,96 /1H, šs/, 4,03 /2H, m/, 3,76 /1H, m/, 3,65 /2H, m/, 3,41 /1H, m/.

-33CZ 287304 B6

Příklad 17

Sloučenina vzorce 17

kyseliny oxamové /Aldrich Chemical Co./ a směs se míchá za zahřívání na 80 °C po 20 hodin. Reakční roztok se zahustí dosucha, přidá se 15 ml vody a 50 ml ethylacetátu, pH směsi se upraví na 2 IN kyselinou chlorovodíkovou a provede se extrakce. Ethylacetátová vrstva se zahustí, a vysrážené krystaly se oddělí filtrací. Získá se 10 mg výše uvedené sloučeniny obecného vzorce 17.

Rf hodnota: 0,38 /Měrek. Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol: tetrahydrofuran = 2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 606 /M+Hf 'H-NMR /500 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 11,4 /1H, s/, 11,0 /1H, s/, 10,4 /1H, s/, 10,0 /1H, s/,

8,63 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,46 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,38 /1H, s/, 8,11 /1H, s/, 7,21 /2H, t, J=7,9 Hz/, 7,02, 7,07 /3H, m/, 5,41 /1H, d, J=5,8 Hz/, 5,35 /1H, t, J=5,8 Hz/, 5,19 /1H, d, J=5,2 Hz/, 4,89 /1H, d, J=5,5 Hz/, 4,03 /2H, m/, 3,76 /1H, m/, 3,63 /2H, m/, 3,40 /1H, m/.

-34CZ 287304 B6

Příklad 18

Sloučenina vzorce 18

26,7 mg sloučeniny získané v příkladu 1 a 5,5 mg anhydridu kyseliny jantarové se rozpustí v 0,5 ml pyridinu a roztok se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Zahustí se dosucha za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v malém množství Ν,Ν-dimethylformamidu a podrobí se vysokotlakové kapalinové chromatografií /HPLC/ /Chromatolex ODS, 20 x 250 mm, pohyblivá fáze 20% acetonitril/. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí pro odstranění acetonitrilu, upraví se hodnota pH na 2 a extrahuje se 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v methanolu a zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /vnitřní průměr 1,5 cm, délka 90 cm, eluce methanolem/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 9,7 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 18 ve formě oranžového prášku.

HPLC: Rt, 5,3 minuty /sloupec: Chromatolex ODS, vnitřní průměr 4,6 mm, délka 250 mm, detekce UV 305 nm, průtoková rychlost 1 ml/min, pohyblivá fáze 27,5% acetonitril :trifluoroctová kyselina = 1000:1/.

'H-NMR /400 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 11,0 /1H, s/, 10,7 /1H, šs/, 10,4 /1H, šs/, 10,1 /1H, šs/,

8,64 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,47 /1H, d, J=9 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,01 ~ 7,07 /3H, m/, 5,42 /2H, šs/, 5,22 /1H, šs/, 4,92 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,63 /2H, m/, 3,40 /1H, m/, 2,65 /2H, t, J=7,3 Hz/, 2,52 /2H, t, J=7,3 Hz/.

-35CZ 287304 B6

Příklad 19

Sloučenina vzorce 19

methyljodidu se přidá k roztoku a směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Míchá se s 50 ml ethylacetátu, směs se promyje postupně 1% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak vodou a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v methanolu a zpracuje se sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /1,5x90 cm, eluce methanolem/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Získá se 18,0 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 19 jako oranžového prášku.

Rf hodnota: 0,51 /Měrek Co., Kieselgel 60F₂₅₄, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuramkyselina octová = 20:10:10:1/.

FAB-MS /m/z/: 563 /Μ+ΗΛ ‘H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,9 /1H, s/, 10,3 /1H, s/, 9,95 /1H, s/, 8,70 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,53 /1H, d, J=8,3 Hz/, 7,18 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,00-7,06 /3H, m/, 5,41 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,34 /1H, t, J=5,4 Hz/, 5,19 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,86 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,62 /2H, m/, 3,39 /1H, m/, 3,02 /6H, s/.

-36CZ 287304 B6

Příklad 20

Sloučenina vzorce 20

/20/

82.1 mg terc.butyloxykarbonyl /Boc/-glycinu se rozpustí v 1 ml methylenchloridu, roztok se míchá za chlazení ledem 15 minut, přidá se 96,7 mg dicyklohexylkarbodiimidu rozpuštěného v 1 ml methylenchloridu a směs se míchá za chlazení ledem po 15 minut. Přidá se 227,6 mg sloučeniny z příkladu 1 rozpuštěné v 6 ml pyridinu a směs se míchá při teplotě místnosti 17 hodin. Reakční roztok se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se postupně promyje nasyceným solným roztokem, kyselou vodou /pH2/ a pak vodou a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografíí na silikagelu /1,5x55 cm, eluce toluen:methanol=6:l/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 105,2 ml Bocderivátu výše uvedené sloučeniny vzorce 20 ve formě oranžového prášku. Tento se rozpustí v 1,2 ml kyseliny trifluoroctové a roztok se míchá při teplotě místnosti 30 minut pro odstranění Boc skupiny. Reakční roztok se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí v 15 ml vody a roztok se upraví na pH 7,58 a extrahuje se n-butanolem. K n-butanolové vrstvě /50 ml/ se přidá 40 ml vody a směs se upraví na hodnotu pH 2 zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a zahustí se dosucha. Výsledný oranžový prášek se rozpustí v methanolu a podrobí se sloupcové chromatografíi na Sephadexu LH-20 /1,5 x38 cm, eluce methanolem/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 63,7 mg hydrochloridu uvedené sloučeniny vzorce 20 ve formě oranžového prášku.

HPLC: Rt, 8,7 minut /sloupec: Chromatolex ODS, vnitřní průměr 4,6 mm, délka 250 mm, detekce UV 305 nm, průtoková rychlost 1 ml/minuta, pohyblivá fáze 20% acetonitrikkyselina trifluoroctová = 1000:1 -> 70% acetonitrikkyselina trifluoroctová = 1000:1, 30 minut lineární gradient/.

FAB-MS /m/z/: 592 /Μ+ΗΛ ‘H-NMR /hydrochlorid, 400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 11,3 /1H, šs/, 11,0 /1H, šs/, 10,5 /1H, s/,

10.1 /1H, s/, 8,62 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,46 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,31 /2H, s/, 7,19 /2H, t, J=7,8 Hz/, 7,03 ~ 7,08 /3H, m/, 5,46 /1H, šs/, 5,34 /1H, šs/, 5,27 /1H, šs/, 4,91 /1H, šd, J=4,9 Hz/, 4,03 /2H, ml, 3,98 /2H, s/, 3,76 /1H, m/, 3,64 /2H, m/, 3,40 /1H, ml.

Příklad 21

Sloučenina vzorce 21

/21/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 3 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se

42,2 g 1-deoxy-l-hydrazino-D-sorbitolu a 0,1 ml triethylaminu a směs se refluxuje za zahřívání 16 hodin. Po zchladnutí na teplotu místnosti se zpracuje na koloně Sephadexu LH-20 /1,8x20 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 20,0 mg uvedené sloučeniny vzorce 21.

FAB-MS /m/z/: 699 /Μ+ΗΛ 'H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,91 /1H, s/, 10,35 /1H, šs/, 9,96 /1H, šs/, 8,73 /1H, d, >8,9 Hz/, 8,54 /1H, d, J=8,9Hz/, 7,20 /2H, t, >8,4 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 5,76 /1H, t, >3,8 Hz/, 5,42 /1H, d, >5,5 Hz/, 5,37 /1H, šs/, 5,22 /1H, d >5,5 Hz/, 4,89 /1H, šs/, 4,67 /1H, d >3,4 Hz/, 4,45 /1H, d, >5,1 Hz/, 4,37 /1H, d, J=7,0 Hz/, 4,25-4,43 /2H, m/, 4,00 /2H, m/, 3,553,80 /7H, ml, 3,44-3,52 /2H, m/, 3,35-3,44 /2H, m/, 3,05-3,20 /2H, ml.

-38CZ 287304 B6

Příklad 22

Sloučenina vzorce 22 o

100 mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 100 mg karbohydrazidu a směs se míchá při 80 °C po 3 hodiny a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v methanolu a nerozpustný materiál se odstraní filtrací přes Celíte. Výsledný filtrát se zahustí a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, podrobí se sloupcové chromatografíi na Sephadexu LH-20 /1,5x20 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 91,2 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 22.

Rf hodnota: 0,1 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform-methanol-tetrahydrofuran = 2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 593 /M+HT ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,96 /1H, s/, 10,40 /1H, s/, 10,01 /1H, s/, 8,95 /1H, s/,

8,65 /1H, d, >8,2 Hz/, 8,50 /1H, d, >8,2 Hz/, 7,90 /1H, s/, 7,17 /2H, t, >6,9 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 5,43 /1H, d, >4,1 Hz/, 5,38 /1H, šs/, 5,20 /1H, s/, 4,90 /1H, s/, 4,39 /2H, šs/, 4,04 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,55-3,70 /2H, m/, 3,38 /1H, m/.

-39CZ 287304 B6

Příklad 23

Sloučenina vzorce 23

/23/

15,0 mg sloučeniny připravené v příkladu A se rozpustí v 1 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 32 mg dihydrochloridu 3-hydroxybenzyIhydrazinu a 0,1 ml 10% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá 4 hodiny při 80 °C. Smísí se s 50 ml ethylacetátu, směs se postupně promyje 0,2N kyselinou chlorovodíkovou a pak nasyceným salinickým roztokem a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí dosucha. Zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje sloupcovou chromatografíí na Sephadecu LH-20 /1,8 x 15 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 15,3 mg uvedené sloučeniny vzorce 23.

Rf hodnota: 0,22 /Měrek Co., Kieselgel 60F₂₅₄, vyvíjecí systém chloroform-methanol-tetrahydrofuran = 5:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 641 /M+HÚ ’Η-NMR /200 MHz, DMSO-de/ δ /ppm/: 10,90 /1H, s/, 10,38 /1H, s/, 9,99 /1H, s/, 9,30 /1H, s/, 8,70 /1H, d, J=8,l Hz/, 8,53 /1H, d, J=8,5 Hz/, 6,86-7,22 /8H, m/, 6,61 /1H, dd, >2,2, 8,4 Hz/, 6,03 /1H, t, >5,1 Hz/, 5,43 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,35 /1H, t, J=5,0 Hz/, 5,22 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,89 /1H, d, >5,4 Hz/, 4,19 /2H, d, J=5,1 Hz/, 4,00 /2H, m/, 3,72 /1H, m/, 3,53-3,70 /2H, m/, 3,38 /1H, m/.

-40CZ 287304 B6

Příklad 24

Sloučenina vzorce 24

/24/

64,6 mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 2 ml N,N-dimethylformamidu, 30 mg 2kyanoethylhydrazinu a směs se míchá při 90 °C po 1,5 hodiny. K reakčnímu roztoku se přidá 50 ml 0,2N kyseliny chlorovodíkové a směs se extrahuje ethylacetátem /50 ml x 2/. Ethylacetátová vrstva se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje se sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /1,8 x 30 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 45,0 mg uvedené sloučeniny vzorce 24.

Rf hodnota: 0,39 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 3:1/.

FAB-MS /m/z/: 588 /Μ+ΗΛ 'H-NMR /200 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 10,91 /1H, s/, 10,36 /1H, s/, 9,98 /1H, s/, 8,70 /1H, d, >8,4 Hz/, 8,53 /1H, d, J=8,4 Hz/, 7,18 /2H, t, J=8,4 Hz/, 7,18 /2H, t, J=8,4 Hz/, 6,95-7,10 /3H, m/, 6,15 /1H, t, >4,2 Hz/, 5,42 /1H, d, >5,7 Hz/, 5,34 /1H, šs/, 5,23 /1H, d, >4,4 Hz/, 4,91 /1H, d, >5,3 Hz/, 4,00 /2H, m/, 3,72 /1H, m/, 3,55-3,70 /2H, m/, 3,39 /1H, m/, 3,30 /2H, td, >4,2,

6,2 Hz/, 2,69 /2H, t, >6,2 Hz/.

-41CZ 287304 B6

Příklad 25

Sloučenina vzorce 25

/25/

1,09 g sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 35 ml N,N-dimethylformamidu -2 ml vody, přidá se 455 mg 2-hydrazino-2-imidazolin-hydrobromidu a 211 mg hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá při 80 °C po 2 hodiny a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí ve 300 ml 0,2N kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se n-butanolem /1 1x2/. Butanolová vrstva se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 chromatograficky /3,0 x 80 cm/, a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 650 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 25.

Rf hodnota: 0,55 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém n-butanol:octová kyselina:voda = 4:1:1/

FAB-MS /m/z/: 603 /M+H/* 'H-NMR /400 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 11,2 /1H, s/, 10,90 /1H, šs/, 10,50 /1H, s/, 10,14 /1H, s/, 9,42 /1H, šs/, 8,92 /1H, šs/, 8,62 /1H, d, J=10,6Hz/, 8,45 /1H, d, J=9,5 Hz/, 7,22 /2H, t, J=6,5 Hz/, 7,02-7,10 /3H, m/, 5,48 /1H, d, J=4,7 Hz/, 5,32 /2H, šm/, 4,94 /1H, d, J=3,5 Hz/, 4,04 /2H, m/, 3,70-3,90 /5H, m/, 3,54-3,70/2H, m/, 3,41 /1H, m/.

-42CZ 287304 B6

Příklad 26

Sloučenina vzorce 26

/26/

48,3 mg sloučeniny vzorce A se rozpustí v 1 ml N,N-dimethylformamidu, 14,3 mg l-amino-4/2-hydroxyethyl/piperazinu a 0,1 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se přidá a směs se míchá při 80 °C 2 hodiny. Rozdělí se mezi 50 ml ethylacetátu a 50 ml vody, přidá se 5 ml 0,2N kyseliny chlorovodíkové k vodné vrstvě a směs se extrahuje n-butanolem /100 mix 2/. Butanolová vrstva se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje chromatografii na sloupci Sephadexu LH-2/ /1,8 x 30 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 22 mg požadované sloučeniny vzorce 26.

Rf hodnota: 0,53 /Měrek. Co., Kieselgel 60F₂₅₄, vyvíjecí systém n-butanol:kyselina octová:voda = 4:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 648 /M+Hf 'H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,92 /1H, s/, 10,50 /2H, šs/, 10,10 /1H, s/, 8,66 /1H, d, J=7,2 Hz/, 8,50 /1H, d, J=8,9 Hz/, 7,18 /2H, t, J=8,9 Hz/, 7,02-7,12 /3H, m/, 5,46 /1H, d, J=5,6Hz/, 5,25-5,40 /3H, šm/, 4,86 /1H, d, J=5,6Hz/, 3,95^1,20 /4H, m/, 3,70-3,90 /4H, m/, 3,55-3,70 /4H, m/, 3,20-3,50 /6H, m/.

-43CZ 287304 B6

Příklad 27

Sloučenina vzorce 27

/27/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 0,6 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 10 mg terc.butylkarbazinátu se přidá a směs se míchá při 80 °C 6 hodin. Smísí se s 50 ml ethylacetátu, směs se postupně promyje vodou /30 ml x 2/ a nasyceným salinickým roztokem a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje se na sloupci Sephadexu LH-20 /1,6x20 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 27,2 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 27.

Rf hodnota: 0,42 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 4:1/.

FAB-MS /m/z/: 634 /M+H/* ’H-NMR /400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 10,99 /1H, s/, 10,42 /1H, s/, 10,02 /1H, s/, 9,82 /1H, šs/, 8,65 /1H, d, J=7,7 Hz/, 8,49 /1H, d, 1=7,7 HzJ, 7,18 /2H, t, 1=7,7 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 5,42 /1H, šs/, 5,35 /1H, šs/, 5,21 /1H, šs/, 4,90 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,72 /1H, ml, 3,56-3,70 /2H, m/, 3,40 /lH,m/, 1,50/9H,s/.

-44CZ 287304 B6

Příklad 28

Sloučenina vzorce 28

/28/ a sloučenina vzorce 29

177 mg sloučenina získané v příkladu 1 se rozpustí v 6 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se

0,68 ml allylbromidu a směs se míchá při teplotě místnosti 1 den. Ke směsi se přidá 200 ml vody, směs se extrahuje ethylacetátem /200 ml x 3/ a ethylacetátové vrstva se dehydratuje nasyceným 15 salinickým roztokem a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí ve 3 ml methanolu, chromatografuje na sloupci Sephadexu LH-20 /2,5 x 40 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadované produkty se zahustí dosucha, získá se 42,1 g výše uvedené sloučeniny vzorce 28 a 67,5 mg sloučeniny vzorce 29.

-45CZ 287304 B6

Sloučenina vzorce 28

Rf hodnota: 0,68 /Měrek Co., Kieselgel 60F₂5₄, vyvíjecí systém chloroform: methanol = 2:1/

FAB-MS /m/z/: 575 /M+Hf 'H-NMR/400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,90 /1H, s/, 10,38 /1H, s/, 9,98 /1H, s/, 8,70 /1H, d, J=9,0 Hz/, 8,52 /1H, d, J=10,2 Hz/, 7,20 /2H, t, 1=1,1 HtJ, 6,95-7,08 /3H, m/, 5,92 /2H, m/, 5,40 /1H, d, J=6,4 Hz/, 5,32 /1H, m/, 5,20 /2H, m/, 5,05 /1H, d, J=11,5 Hz/, 4,88 /1H, d, J=5,8 Hz/, 4,00 /2H, m/, 3,67-3,78 /3H, m/, 3,58-3,65 /2H, m/, 3,35 /1H, m/.

Sloučenina vzorce 29

Rf hodnota: 0,75 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254 vyvíjecí systém chloroform: methanol = 2:1/ ‘H-NMR /400 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,91 /1H, s/, 10,40 /1H, šs/, 10,00 /1H, šs/, 8,66 /1H, d, J=9,4 Hz/, 8,50 /1H, d, J=9,4 Hz/, 7,18 /2H, t, J=8,0 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 5,90 /2H, ddt, J=6,3,10,2, 17,0 Hz/, 5,42 /1H, d, J=5,3 Hz/, 5,33 /1H, šs/, 5,23 /2H, d, J=17,0 Hz/, 5,22 /1H, šs/, 5,04 /2H, d, J=10,2 Hz/, 4,91 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,97 /4H, d, J=6,3 Hz/, 3,70 /1H, m/, 3,513,66/2H,m/, 3,35/1H, ml.

Příklad 29

Sloučenina vzorce 30

/30/

-46CZ 287304 B6 a sloučenina vzorce 31

/31/ mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí v 1 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 0,3 ml benzylbromidu a směs se míchá přes noc. Smísí se se 40 ml ethylacetátu, směs se postupně promyje vodou /30 ml x 2/ a pak nasyceným šalinickým roztokem a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje se chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 /1,6x30 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadované produkty se zahustí do sucha, získá se 13,2 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 30 a 7,2 mg sloučeniny vzorce 31.

Sloučenina vzorce 30

Rf hodnota: 0,44 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 3:1/

FAB-MS /m/z/: 715 /M+H/ ’Η-NMR /200 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,85 /1H, s/, 10,35 /1H, s/, 9,96 /1H, s/, 8,65 /1H, d, J=8,5 Hz/, 8,45 /1H, d, J=9,0 Hz/, 7,50-7,65 /4H, m/, 7,10-7,40 /8H, m/, 6,95-7,10 /3H, ml, 5,40 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,30 /1H, šs/, 5,18 /1H, d, J=4,9 Hz/, 4,83 /1H, d, J=4,9 Hz/, 4,58 /2H, s/, 4,55 /2H, s/, 4,00 /2H, m/, 3,46-3,80 /3H, mí, 3,36 /1H, ml.

Sloučenina vzorce 31

Rf hodnota: 0,38 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 3:1/ ’Η-NMR /300 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 10,88 /1H, s/, 10,40 /1H, šs/, 10,00 /1H, šs/, 8,67 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,51 /1H, d, J=7,3 Hz/, 7,50 /2H, d, J=6,9 Hz/, 7,30 /2H, t, J=6,9 Hz/, 7,21 /1H, t, J=6,9 Hz/, 7,16 /2H, t, J=7,3 Hz/, 6,96-7,07 /3H, m/, 6,13 /1H, t, J=5,3 Hz/, 5,42 /1H, d, J=5,9 Hz/, 5,21 /1H, d, J=5,3 Hz/, 4,91 /1H, šs/, 4,55 /1H, šs/, 4,28 /2H, d, J=5,3 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,72 /1H, m/, 3,55-3,70 /2H, m/, 3,40 /1H, mí.

-47CZ 287304 B6

Příklad 30

Sloučenina vzorce 32 o

/32/

1,4 g sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 30 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 1 g methylkarbazinátu a směs se míchá při 80 °C 2 hodiny. Ke směsi se přidá 400 ml vody a směs se extrahuje ethylacetátem /500 ml x 3/. Výsledná ethylacetátová vrstva se zahustí dosucha. Zbytek se rozpustí v 5 ml methanolu, zpracuje se chromatografíí na sloupci Sephadexu LH-20 /3,0 x 80 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 1,3 g sloučeniny vzorce 32.

Rf hodnota: 0,18 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chlorofomrmethanol = 4:1/.

FAB-MS /m/z/: 592 /M+Hf

Ή-NMR /300 MHz, DMSO-dfi/, δ /ppm/: 11,00 /1H, s/, 10,42 /1H, šs/, 10,18 /1H, s/, 10,04 /1H, šs/, 8,64 /1H, d, J=7,6 Hz/, 8,47 /1H, d, J=8,3 Hz/, 7,20 /2H, t, J=8,3 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 5,42 /1H, šs/, 5,35 /1H, šs/, 5,21 /1H, šs/, 4,91 /1H, šs/, 4,02 /2H, ml, 3,75 /3H, s/, 3,50-3,70 /3H, ml, 3,40/1H, ml.

-48CZ 287304 B6

Příklad 31

Sloučenina vzorce 33

/33/ mg sloučeniny z příkladu A se rozpustí v 1 ml N,N-dimethylformamidu, 67 m /2R,3S/-3,4,0isopropyliden-2,3,4-trihydroxybutankarbohydrazidu a směs se míchá při 80 °C 7 hodin a pak při teplotě místnosti 3 dny. Ke směsi se přidá 50 ml vody a směs se extrahuje ethylacetátem /50 ml x 2/. Výsledná methylacetátová vrstva se zahustí dosucha. Zbytek se rozpustí ve 3 ml methanolu, zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /1,8x25 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 112 mg sloučeniny vzorce 33.

Rf hodnota: 0,14 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroforrmmethanol = 4:1/

FAB-MS /m/z/: 692 /M+HÁ ’H-NMR /300 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 11,01 /1H, s/, 10,70 /1H, s/, 10,45 /1H, s/, 10,05 /1H, s/, 8,75 /1H, d, J=7,4 Hz/, 8,47 /1H, d, J=7,4 Hz/, 7,21 /2H, t, J=7,4 Hz/, 7,00-7,10 /3H, m/, 6,26 /1H, d, J=6,7Hz/, 5,44 /1H, d, J=5,9Hz/, 5,39 /1H, šs/, 5,24 /1H, d, J=5,9 Hz/, 4,93 /1H, d, J=5,9Hz/, 4,31 /1H, dd, J=6,7, 11,9 Hz/, 4,22 /1H, t, J=6,7 Hz/, 4,10 /1H, ddd, J=6,7, 6,7, 11,9 Hz/, 4,05 /2H, m/, 3,91 /1H, t, J=6,7Hz/, 3,76 /1H, m/, 3,57-3,71 /2H, m/, 3,40 /1H, m/, 1,45/3H,s/, 1,36/3H,s/.

-49CZ 287304 B6

Příklad 32

Sloučenina vzorce 34

/34/ mg sloučeniny z příkladu 1 se rozpustí v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu, přidá se 10 mg anhydridů kyseliny p-toluensulfonové a směs se míchá při teplotě místnosti 1 den. Reakční roztok se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /1,8 x 20 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 12,3 mg uvedené sloučeniny vzorce 34.

Rf hodnota: 0,49 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroforrmmethanol: tetrahydrofuran = 3:1:1/

FAB-MS /m/z/: 688 /M+Hf ’Η-NMR /300 MHz, DMSO-dX, δ /ppm/: 10,98 /1H, s/, 10,87 /1H, s/, 10,42 /1H, s/, 10,05 /1H, s/, 8,54 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,38 /1H, d, J=7,9 Hz/, 7,84 /2H, d, J=8,7 Hz/, 7,44 /2H, d, J=8,7 Hz/, 7,19 /2H, t, J=7,9 Hz/, 7,00-7,08 /3H, m/, 5,43 /1H, d, J=4,7Hz/, 5,35 /1H, šs/, 5,23 /1H, d, >4,9 Hz/, 4,90 /1H, d, J=4,4 Hz/, 4,04 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,55-3,70 /2H, m/, 3,40 /1H, m/, 2,42 /3H, s/.

-50CZ 287304 B6

Příklad 33

Sloučenina vzorce 35

/35/ mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve 2 ml tetrahydrofuranu, přidá se 0,1 ml fenylisokyanátu a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Reakční roztok se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje se sloupcovou chromatografií na Sephadexu LH-20 /1,6 x 30 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 12 mg sloučeniny vzorce 35.

Rf hodnota: 0,38 Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/

FAB-MS /m/z/: 563 /M+H/ ‘H-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 11,00 /1H, s/, 10,40 /1H, šs/, 10,10 /1H, šs/, 9,48 /1H, s/, 9,50 /1H, s/, 8,67 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,50 /1H, d, J=8,3 Hz/, 7,48 /2H, d, J=7,8 Hz/, 7,27 /2H, t, >7,8 Hz/, 7,20 /2H, t, J=7,8 Hz/, 6,95-7,10 /4H, m/, 5,43 /1H, d, J=4,2 Hz/, 5,30 /1H, šs/, 5,23 /1H, šs/, 4,95 /1H, šs/, 4,03 /2H, m/, 3,75 /1H, m/, 3,58-3,70 /2H, m/, 3,38 /1H, m/.

-51CZ 287304 B6

Příklad 34

Sloučenina vzorce 36

/36/ mg sloučeniny získané v příkladu 1 se rozpustí ve 2 ml tetrahydrofuranu, přidá se 16 μΐ benzoylchloridu a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Rozpouštědlo se oddestiluje a zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 /1,6x20 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 12 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 36.

Rf hodnota: 0,57 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/

FAB-MS /m/z/: 639 /M+HC ’Η-NMR /200 MHz, DMSO-ds/, δ /ppm/: 11,35 /1H, šs/, 11,04 /1H, s/, 10,45 /1H, šs/, 10,08 /1H, šs/, 8,66 /1H, d, J=8 Hz/, 8,49 /1H, d, J=8,5 Hz/, 8,04 /2H, d, >7,1 Hz/, 7,55-7,78 /3H, m/, 7,20 /2H, t, >8,5 Hz/, 7,00-7,15 /3H, m/, 5,45 /2H, šs/, 5,25 /1H, šs/, 4,97 /1H, šs/, 4,02 /2H, m/, 3,55-3,82 /3H, m/, 3,41 /1H, m/.

-52CZ 287304 B6

Příklad 35

Sloučenina vzorce 37

/37/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 1,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 30 mg alfa-pikolinohydrazidu a směs se míchá při 80 °C 2 hodiny. Smísí se s 50 ml ethylacetátu a směs se postupně promyje vodou a pak nasyceným solným roztokem, dehydratuje se bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje se chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8x15 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 30 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 37.

Rf hodnota: 0,58 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 2:1:1/.

FAB-MS /m/z/: 640 /M+HÁ ’Η-NMR /300 MHz, DMSO-dó/, δ /ppm/: 11,43 /1H, s/, 11,02 /1H, s/, 10,45 /1H, s/, 10,07 /1H, s/, 8,82 /1H, d, J=4,2 Hz/, 8,75 /1H, d, J=7,3 Hz/, 8,48 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,12 /2H, m/, 7,75 /1H, m/, 7,20 /2H, t, J=7,0 Hz/, 7,00-7,15 /3H, m/, 5,45 /1H, d, J=6,3 Hz/, 5,40 /1H, šs/, 5,25 /1H, d, J=6,3 Hz/, 4,96 /1H, šs/, 4,04 /2H, m/, 3,76 /1H, m/, 3,55-3,72 /2H, ml, 3,42 /1H, ml.

-53CZ 287304 B6

Příklad 36

Sloučenina vzorce 38

/38/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 1 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 30 mg 2-hydrazinoethanolu a směs se míchá při 80 °C 2 hodiny. Zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 1 ml ethanolu, zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8x20 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 32 mg uvedené sloučeniny vzorce 38.

Rf hodnota: 0,32 /Měrek Co., Kieselgel 6OF754, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 2:1/ 'H-NMR /300 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,91 /1H, s/, 10,35 /1H, šs/, 9,98 /1H, šs/, 8,70 /1H, d, J=6,7 Hz/, 8,53 /1H, d, J=6,9Hz/, 7,18 /2H, t, J=7,6 Hz/, 6,99-7,06 /3H, m/, 5,76 /1H, t, J=5,2 Hz/, 5,41 /1H, d, J=5,6 Hz/, 5,32 /1H, šs/, 5,20 /1H, d, J=5,2 Hz/, 4,90 /1H, šs/, 4,51 /1H, t, J=4,9 Hz/, 3,96-4,06 /2H, m/, 3,73 /1H, m/, 3,55-3,70 /4H, m/, 3,39 /1H, m/, 3,12 /2H, m/.

-54CZ 287304 B6

Příklad 37

Sloučenina vzorce 39

/39/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 2 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 10 mg hydrochloridu 1-aminopyrrolidinu a 0,1 ml vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá při 80 °C po 2 hodiny. Přidá se k ní 40 ml vody a směs se extrahuj ethylacetátem /40 ml x 2/. Výsledná ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 1 ml methanolu, zpracuje se na sloupci Sephadexu LH-20 /1,8 x 20 cm/ za eluce methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 10,0 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 39.

Rf hodnota: 0,33 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 4:1/.

FAB-MS /m/z/: 589 /M+H/* ‘H-NMR /300 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,91 /1H, s/, 10,35 /1H, s/, 9,95 /1H, s/, 8,78 /1H, d, J=8,3 Hz/, 8,52 /1H, d, J=8,3 Hz/, 7,16 /2H, t, J=7,6Hz/, 6,98-7,06 /3H, m/, 5,40 /1H, d, J=5,5 Hz/, 5,33 /1H, t, J=5,7 Hz/, 5,18 /1H, d, J=5,5 Hz/, 4,85 /1H, d, J=4,8 Hz/, 4,02 /2H, m/, 3,74 /1H, m/, 3,53-3,68 /2H, m/, 3,30-3,42 /5H, m/, 1,97 /4H, m/.

-55CZ 287304 B6

Příklad 38

Sloučenina vzorce 40

NH,

karbazol-4,7/6H/dionu, sloučeniny popsané v PCT/W091/18003, 1,3 g oxidu stříbrného io a 550 mg 4Á molekulárního síta se suspenduje ve 30 ml bezvodého benzenu. Po refluxování za zahřívání po 20 minut se během 10 minut přikape roztok 416,4 mg alfa-brom-3-deoxy-3azido-2,4,6-triacetyl-D-glukózy v 5 ml bezvodého benzenu. Po dalším zahřívání po 2 dny se nerozpustný materiál odfiltruje za použití Celitu. Filtrát se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí ve 150 ml ethylacetátu, promyje se postupně 0,2N kyselinou chlorovodíkovou, vodou a pak 15 nasyceným salinickým roztokem, dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha.

Zbytek se rozpustí v 5 ml chloroformu, zpracuje se chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 /3,0 x 80 cm/ a eluuje chloroformem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha a zbytek se čistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě /n-hexan:aceton:tetrahydrofuran = 3:1:0,1 Rf:0,5/, pak toluenacetonem = 10:1 Rf 0,5/. Získá se 9,2 mg 6-benzyloxymethyl20 1,11 -dibenzyloxy-12,13-dehydro-13-/beta-D-glukopyranosyl/-5H-indolo/2,3-a/-pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu.

9,2 mg výsledné sloučeniny se rozpustí v 1 ml hydrazin-monohydrátu a roztok se míchá při teplotě místnosti 4 hodiny. Smísí se se 30 ml ethylacetátu a směs se postupně promyje 0,2N 25 kyselinou chlorovodíkovou, vodou a pak nasyceným salinickým roztokem, dehydratuje se bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v 0,5 ml tetrahydrofuranu 1 ml methanolu, přidá se palladiová čerň a směs se míchá pod proudem dusíku při teplotě místnosti 3 hodiny. Nerozpustný materiál se odfiltruje za použití Celitu, k filtrátu se přidá 1,5 ml 10% chlorovodíku-methanolu a směs se zahustí dosucha. Zbytek se rozpustí v 0,5 ml methanolu, 30 zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 /1,0 x 15 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 2,0 mg uvedené sloučeniny vzorce 40.

Rf hodnota: 0,5 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém n-butanol:kyselina octová:voda = 4:1:1/

FAB-MS /m/z/: 534 /M+Hf ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-dfi/, δ /ppm/: 10,80 /1H, s/, 10,48 /1H, s/, 10,20 /1H, s/, 8,79 /1H, d, >7,9 Hz/, 8,52 /3H, s/, 8,50 /1H, d, >9,2 Hz/, 7,61 /1H, d, >6,6 Hz/, 7,16 /1H, dd, >9,2,

-56CZ 287304 B6

9,2 Hz/, 7,10 /1H, dd, J=9,2, 9,2 Hz/, 7,05 /1H, dd, J=9,2, 9,2 Hz/, 7,00 /1H, dd, J=9,2, 9,2 Hz/, 6,42 /1H, d, J=5,2 Hz/, 6,16 /1H, d, J=3,9 Hz/, 5,18 /1H, š/, 4,93 /1H, š/, 4,40 /1H, m/, 4,16 /1H, m/, 4,03 /1H, m/, 3,78 /1H, m/, 3,68 /1H, m/, 3,42 /1H, m/.

Příklad 39

Sloučenina vzorce 41

/41/ mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 1,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 60 mg kyanoacetohydrazidu a směs se míchá při 80 °C 9 hodin. Smísí se se 30 ml ethylacetátu, směs se postupně promyje vodou, pak nasyceným šalinickým roztokem a ethylacetátová vrstva se dehydratuje bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 /1,5 x 15 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se

27,7 mg uvedené sloučeniny vzorce 41.

Rf hodnota: 0,53 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 3:1:0,1/.

FAB-MS/m/z/: 601/Μ+ΗΛ ‘H-NMR /300 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 11,14 /1H, s/, 11,01 /1H, s/, 10,42 /1H, s/, 10,04 /1H, s/, 8,65 /1H, d, J=7,6 Hz/, 8,47 /1H, d, J=7,6 Hz/, 7,21 /2H, t, J=7,6 Hz/, 7,05 /3H, t, J=7,6 Hz/, 5,41 /2H, d, J=4,5 Hz/, 5,19 /1H, d, J=6,8 Hz/, 4,90 /1H, d, J=6,8 Hz/, 4,13 /2H, s/, 4,04 /2H, š/, 3,75 /1H, ml, 3,64 /2H, ml, 3,43 /1H, ml.

-57CZ 287304 B6

Příklad 40

Sloučenina vzorce 42

/42/ g 12,13—dihydro—1,1 l-dihydroxy-13-/p-D-glukopyranosyl/5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu se rozpustí ve 25 ml tetrahydrofuranu, přidá v přebytku diazomethan v etherovém roztoku, směs se míchá přes noc při 4 °C a vytvořená žlutá sraženina se odfiltruje. Rozpustí se ve 3 ml hydrazin-monohydrátu a roztok se nechá reagovat při teplotě místnosti 1,5 hodiny. Po reakci se přidá 200 ml čištěné vody a výsledná sraženina se odfiltruje, promyje se postupně čištěnou vodou a pak methanolem a suší se za sníženého tlaku. Získá se 683,4 mg sloučeniny vzorce 42.

HPLC: Rt, 10,5 min /kolona Chromatolex ODS, vnitřní průměr 4,6 mm, délka 250 mm, detekce UV 305 nm, průtoková rychlost 1 ml/min, pohyblivá fáze methanokvoda = 6,4/.

FAB-MS /m/z/: 563 /M+Hf ’Η-NMR /300 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 10,9 /1H, s/, 8,87 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,65 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,35 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,23 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,25 /lH,d, J=7,8 Hz/, 7,18 /1H, d, J=7,8 Hz/, 6,90 /1H, d, J=9,3 Hz/, 5,40 /1H, šs/, 5,18 /1H, šs/, 5,00 /2H, šs/, 4,90 /2H, šs/, 4,06 /6H, s/, 4,00 /2H, m/, 3,78 /1H, m/, 3,63 /2H, m/, 3,42 /1H, ml.

-58CZ 287304 B6

Příklad 41

Sloučenina vzorce 43

/43/

708,8 mg sloučeniny vzorce 43 se získá ze 679 mg sloučeniny získané v příkladu 40 způsobem podle příkladu 2.

HPLC: Rt 10,9 minut /kolona Chromatolex ODS, vnitřní průměr 4,6 mm, délka 250 mm, detekce UV 310 nm, průtoková rychlost 1 ml/min, pohyblivá fáze acetonitril:voda = 2,8 -> acetonitril:voda = 6:4, 30 minut lineární gradient/

FAB-MS/m/z/: 618/MČ ’Η-NMR /400 MHz, DMSO-dft/, δ /ppm/: 13,5 /1H, šs/, 11,1 /1H, s/, 9,01 /1H, s/, 8,83 /1H, d, >7,8 Hz/, 8,63 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,39 /1H, t, >7,8 Hz/, 7,37 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,29 /1H, d, >7,8 Hz/, 7,22 /1H, d, J=7,8 Hz/, 6,94 /1H, d, J=9,3 Hz/, 5,43 /1H, d, J=5,4 Hz/, 5,22 /1H, d, >5,4 Hz/, 5,01 /1H, šs/, 4,93 /1H, d, >5,4 Hz/, 4,07 /6H, s/, 4,05 /1H, m/, 3,96 /1H, m/, 3,79 /1H, m/, 3,60 /2H, m/, 3,44 /1H, m/.

-59CZ 287304 B6

Příklad 42

Sloučenina vzorce 44

/44/

704 mg sloučeniny získané v příkladu 41 se rozpustí v 10 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 60 mg 10% palladia na uhlí /Pd-C/ a směs se hydrogenuje při teplotě místnosti 6 hodin za míchání. Reakční směs se odfiltruje za použití vrstvy filtračního papíru, na který byl nastříkán Celit pro odstranění Pd-C, k filtrátu se přidá 200 ml ethylacetátu a směs se extrahuje 50 ml vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného /pH 8/. pH vodné vrstvy se upraví na 2 a extrahuje se ethylacetátem /500 ml/. Ethylacetátová vrstva se extrahuje 2% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného /70 ml/. Vrstva 2% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se zahustí za sníženého tlaku, adsorbuje se na sloupec Diaionu HP 20 /vnitřní průměr 3 cm, délka 30 cm/, promyje se vodou a pak se eluuje 300 ml methanolu. Methanolový eluát se zahustí dosucha, zbytek se rozpustí v malém množství Ν,Ν-dimethylformamidu a roztok se podrobí preparativní HPLC /kolona:Chromatolex ODS, vnitřní průměr 20 mm, délka 250 mm, detekce UV310nm, průtoková rychlost 9 ml/min, pohyblivá fáze acetonitril:voda = 25:75/. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství vody, zpracuje sloupcovou chromatografií na Sephadexu G-15 /vnitřní průměr 3 cm, délka 63 cm/ a eluuje směsí voda:methanol = 9:1. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí a pak suší vymražením, získá se 84,2 mg sodné soli sloučeniny vzorce 44.

HPLC: Rt 8,9 min /kolona:Chromatolex ODS, vnitřní průměr 4,6 mm, délka 250 nm, detekce UV310nm, průtoková rychlost 1 ml/min, pohyblivá fáze acetonitril:voda:kyselina trifluoroctová = 300:700:1/.

FAB-MS /m/z/: 643 /M+NaT 'H-NMR /400 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,9 /1H, šs/, 8,85 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,63 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,33 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,31 /1H, t, J=7,8 Hz/, 7,24 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,16 /1H, d, J=7,8 Hz/, 6,89 /1H, d, J=9,3 Hz/, 5,63 /1H, šs/, 5,42 /1H, šs/, 5,10 /1H, šs/, 4,99 /1H, šs/, 4,06 /6H, s/, 4,02 /2H, m/, 3,80 /1H, m/, 3,67 /1H, t, J=8,8 Hz/, 3,58 /1H, m/, 3,42 /1H, t, J=8,3 Hz/, 3,34 /2H, s/.

-60CZ 287304 B6

Příklad 43

Sloučenina vzorce 45

/45/

23,8 mg sloučeniny vzorce 45 se získá ze 70 mg sloučeniny získané v příkladu 4 stejným způsobem jako v příkladu 2.

FAB-MS /m/z/: 641 /Μ+ΗΛ 'H-NMR /400 MHz, DMSO-d^, δ /ppm/: 10,8 /1H, s/, 9,26 /1H, d, J=7,8 Hz/, 9,09 /1H, d, J=7,8 Hz/, 8,94 /1H, s/, 7,78 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,74 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,50 /2H, t, J=7,8 Hz/, 6,98 /1H, d, J=9,3 Hz/, 5,44 /1H, d, J=5,9 Hz/, 5,33 /1H, šs/, 5,09 /1H, d, J=5,4 Hz/, 3,96 /2H, m/, 3,85 /1H, m/, 3,67 /2H, m/, 3,59 /3H, s/, 3,56 /1H, m/.

Příklad 44

Sloučenina vzorce 46

/46/

-61CZ 287304 B6

210 mg sloučeniny vzorce 46 se získá z 1 g sloučeniny získané v příkladu 43 stejným způsobem jak je popsán v příkladu 42.

FAB-MS /m/z/: 643 /M+Hf ’Η-NMR /500 MHz, DMSOW, δ /ppm/: 10,7 /1H, s/, 9,26 /1H, d, J=7,8 Hz/, 9,09 /1H, d, >7,8 Hz/, 7,74 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,71 /1H, d, J=7,8 Hz/, 7,46 /2H, t, >7,8 Hz/, 6,93 /1H, d, >9,2 Hz/, 6,00 /1H, šs/, 5,42 /1H, šs/, 5,31 /1H, šs/, 5,03 /1H, šs/, 3,96 /2H, šs/, 3,85 /2H, s/, 3,83 /1H, m/, 3,59 /3H, s/, 3,50-3,70 /3H, m/.

Příklad 45

Sloučenina vzorce 47

/47/

48,2 mg sloučeniny vzorce 47 se získá z 51,4 mg sloučeniny získané v příkladu 4 způsobem podle příkladu 5.

FAB-MS /m/z/: 613 /Μ+ΗΛ 'H-NMR /400 MHz, DMSOW, δ /ppm/: 10,9 /1H, šs/, 10,8 /1H, šs/, 9,20 /1H, m/, 9,03 /1H, m/, 8,48 /1H, s/, 7,75 /1H, d, >7,8 Hz/, 7,70 /1H, d, >7,8 Hz/, 7,45 /2H, t, >7,8 Hz/, 6,93 /1H, št, >9,3 Hz/, 5,41 /2H, m/, 5,04 /1H, d, >5,9 Hz/, 3,99 /2H, šs/, 3,86 /1H, m/, 3,60 /3H, s/, 3,523,67 /3H, m/.

-62CZ 287304 B6

Příklad 46

Sloučenina vzorce 48

/48/ mg sloučeniny vzorce 48 se získá ze 14,1 mg sloučeniny získané v příkladu 4 stejným způsobem jako v příkladu 6.

FAB-MS /m/z/: 627 /M+Hf 'H-NMR/500 MHz, DMSO-dfi/, δ /ppm/: 10,8 /2H, s/, 9,20 /1H, m/, 9,04 /1H, m/, 7,74 /2H, m/, 7,47 /2H, m/, 6,93 /1H, m/, 5,41 /1H, m/, 5,32 /1H, šs/, 5,04 /1H, ml, 3,96 /2H, šs/, 3,85 /1H, m/, 3,58 /3H, s/, 3,50-3,70/3H, m/, 2,12 /3H, s/.

Příklad 47

Sloučenina vzorce 49

/49/

-63CZ 287304 B6 ml hydrazinmonohydrátu se přidá ke 3,2 mg 12,13-dihydro-2,10-dihydroxy-13-/(3-Dglukopyranosyl/-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Rozdělí se mezi ethylacetát-0,2N kyselinu chlorovodíkovou a ethylacetátová vrstva se postupně promyje vodou a pak nasyceným salinickým roztokem a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje chromatografii na sloupci Sephadexu LH-20 /1,0 x 5 cm a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 3,0 mg sloučeniny vzorce 49.

Rf hodnota: 0,22 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol:tetrahydrofuran = 3:1:1/

FAB-MS /m/z/: 534 /M/* ‘H-NMR /300 MHz, DMSO-de/, δ /ppm/: 11,16 /1H, s/, 9,76 /1H, s/, 9,73 /1H, s/, 8,90 /1H, d, J=7,3 Hz/, 8,82 /1H, d, J=7,3 Hz/, 7,18 /1H, d, J=2,0 Hz/, 6,98 /1H, d, J=2,0 Hz/, 6,83 /2H, dt, J=2,0, 7,3 Hz/, 5,97 /1H, d, J=7,2 Hz/, 5,84 /1H, t, J=3,3 Hz/, 5,32 /1H, d, J=5,3 Hz/, 5,10 /1H, d, J=5,3 Hz/, 4,93 /1H, d, J=5,2 Hz/, 4,90 /2H, s/, 4,04-3,86 /2H, m/, 3,78 /1H, m/, 3,60-3,35 /3H, m/.

Příklad 48

Sloučenina vzorce 50

/50/

0,4 ml hydrazinhydrátu se přidají k 7,1 mg 2,10-difluor-12,13-dihydro-13-/|3-D-glukopyranosyl/-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo-/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu a směs se míchá při teplotě místnosti 40 minut. Přidá se 1,34 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a směs se extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátová vrstva se promyje vodou a zahustí. Zbytek se rozpustí ve 3,7 ml Ν,Ν-dimethylformamidu a 0,37 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Rozdělí se mezi ethylacetát a vodu a ethylacetátová vrstva se zahustí dosucha. Zbytek se rozpustí v malém množství ethanolu, zpracuje na sloupci Sephadexu LH-20 a eluuje ethanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 4,6 mg sloučeniny vzorce 50.

FAB-MS /m/z/: 566 /Mf

-64CZ 287304 B6 'H-NMR /400 MHz, DMSO-ťW, δ /ppm/: 11,9 /1H, s/, 10,8 /1H, šs/, 9,07 /1H, dd, J=5,8,

8,8 Hz/, 9,01 /1H, dd, J=5,9, 8,8 Hz/, 8,45 /1H, s/, 7,93 /1H, šd, J=8,8 Hz/, 7,44 /1H, šd, J=8,8 Hz/, 7,27 /2H, m/, 6,28 /1H, d, J=8,8Hz/, 6,20 /1H, šs/, 5,42 /1H, šs/, 5,13 /1H, šd, J=5,4 Hz/, 4,96 /1H, d, J=5,4 Hz/, 4,09 /1H, šd, J=7,3 Hz/, 3,94 /2H, m/, 3,83 /1H, šd, J=7,3 Hz/, 3,58 /1H, m/, 3,45 /1H, m/.

Příklad 49

Sloučenina vzorce 51

/51/ kde Bn znamená benzylovou skupinu.

100 mg 6-benzyloxymethyl-l 1,1 l-dibenzyloxy-12,13-dihydro-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4c/karbazol-5,7/6H/-dionu, 1,4 g oxidu stříbrného a 0,7 g 4.10“'°m molekulového síta se suspenduje ve 40 ml bezvodého benzenu, suspenze se za zahřívání refluxuje 20 minut a potom se přikape roztok l-brom-2,3,5-tri-0-acetyl-D-ribosy v 10 ml bezvodého benzenu během 10 minut. Směs se dále zahřívá a refluxuje 3 hodiny a nerozpustný materiál se odstraní přes Celíte filtrací.

Filtrát se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a roztok se promyje postupně 0,2N kyselinou chlorovodíkovou, vodou a pak nasyceným salinickým roztokem, suší se nad bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v chloroformu, zpracuje se na koloně Sephadexu LH-20 /2,5 x 20 cm/ a eluuje chloroformem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, zbytek se zpracuje chromatografií na koloně silikagelu /2,5 x 25 cm/ a eluuje směsí toluen-ethylacetát /3:1/ a frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha. Zbytek se dále čistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě /toluenethylacetát = 5:1 /Rf= 0,6/, získá se 20,8 mg 6-benzyloxymethyl-l, 11-dibenzyloxy-l 2,13dihydro-13-/[3-D-ribofuranosyl/-5H-indolo/2,3-a/pyrrolo/3,4-c/karbazol-5,7/6H/-dionu.

20,8 mg této sloučeniny se rozpustí ve 2 ml hydrazinmonohydrátu a roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Smísí se se 30 ml ethylacetátu, směs se postupně promyje 0,2N kyselinou chlorovodíkovou, vodou a pak nasyceným salinickým roztokem a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v methanolu, podrobí chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 /1,0x15 cm/ a eluuje methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha a zbytek se čistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě /chloroform-methanol = 10:1 /Rf=0,5//, získá se uvedená sloučenina vzorce 51.

-65CZ 287304 B6

Rf hodnota: 0,5 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol = 10:1/.

FAB-MS /m/z/: 684 /Mf 'H-NMR /300 MHz, DMSO-dé/, δ /ppm/: 10,45 /1H, s/, 8,90 /1H, d, >0,75 Hz/, 8,68 /1H, d, >0,75 Hz/, 7,18 /2H, d, >0,75 Hz/, 7,11 /2H, d, >0,75 Hz/, 7,20-7,50 /11H, m/, 5,35-5,45 /5H, m/, 5,17 /1H, d, >0,38 Hz/, 5,10 /1H, d, >0,45 Hz/, 4,98 /2H, s/, 3,90-4,00 /2H, ml, 3,60-3,70 /2H, m/.

Příklad 50

Sloučenina vzorce 52

/52/

33,0 mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí ve 3 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 8,4 mg hydroxyacetohydrazidu a směs se míchá při 80 °C po 2 dny. Zahustí se dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje se chromatografíí na sloupci Sephadexu LH20 /1,5x25 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha a zbytek se rozpustí ve 30 ml ethylacetátu. Roztok se promyje vodou a ethylacetátová vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a zahustí se dosucha. Zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, zpracuje chromatografíí na sloupci Sephadexu LH-20 /1,5x15 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 29,0 mg požadované sloučeniny vzorce 52.

FAB-MS /m/z/: 593 /M+HČ ’Η-NMR /300 MHz, DMSOW, δ /ppm/: 11,00 /1H, s/, 10,55 /1H, s/, 10,41 /1H, s/, 10,02 /1H, s/, 8,63 /1H, d, >7,8 Hz/, 8,47 /1H, d, >7,8 Hz/, 7,20 /2H, t, >7,8 Hz/, 7,04 /3H, ml, 5,88 /1H, t, >7,0 Hz/, 5,41 /1H, d, >6,2 Hz/, 5,35 /1H, š/, 5,20 /1H, d, >6,2 Hz/, 4,90 /1H, d, >6,2 Hz/, 4,16 /2H, d, >5,7 Hz/, 4,03 /2H, ml, 3,74 /1H, ml, 3,59-3,68 /2H, ml, 3,39 /1H, ml.

-66CZ 287304 B6

Příklad 51

Sloučenina vzorce 53

/53/

35,0 mg sloučeniny získané v příkladu A se rozpustí v 1,0 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, přidá se 35,0 mg ethylhydrazin-oxalátu a 0,5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá při 80 °C po 1 den. Zahustí se dosucha a zbytek se rozpustí v malém množství methanolu, chromatografuje se na sloupci Sephadexu LH-20 /1,5 x 15 cm/ a eluuje se methanolem. Frakce, obsahující požadovaný produkt se zahustí dosucha, získá se 20,8 mg sloučeniny vzorce 53.

Rf hodnota: 0,5 /Měrek Co., Kieselgel 6OF254, vyvíjecí systém chloroform:methanol: tetrahydrofuran = 2:1:1/

FAB-MS /m/z/: 563 /M+H/

Ή-NMR /300 MHz, DMSO-d/, δ /ppm/: 10,90 /1H, s/, 10,35 /1H, s/, 9,96 /1H, s/, 8,72 /1H, d, J=7,9 Hz/, 8,54 /1H, d, J=7,9 Hz/, 7,17 /2H, t, J=7,9 Hz/, 7,03 /3H, m/, 5,72 /1H, t, J=4,8 Hz/, 5,41 /1H, d, J=6,3 Hz/, 5,35 /1H, t, J=4,0Hz/, 5,21 /1H, d, J=4,0Hz/, 4,87 /1H, d, J=6,3 Hz/, 3,96-4,09 /2H, ml, 3,73-3,77 /1H, ml, 3,58-3,67 /2H, ml, 3,37-3,45 /1H, m/, 3,07 /2H, ml, 1,09 /3H, t, J=7,l Hz/.

Příklad 52 g sloučeniny vzorce 5 se rozpustí v roztoku 600 g makrogolu 400 z japonského lékopisu bylo rozpuštěno ve 400 g destilované vody pro injekce a roztok se zfiltruje pro odstranění bakterií za použití filtru 0,2 pm. 5ml dávky filtrátu se naplní do promytých a sterilizovaných lahviček běžnou metodou a lahvičky se uzavřou a opatří čepičkou, připraví se injekce, obsahující 250 mg sloučeniny z příkladu 5 na lahvičku. Podání se provádí za použití zařízení pro intravenózní infuzi, kam se vloží 5 až 10 ml této injekce /250 až 500 mg sloučeniny z příkladu 5/ a zředí se na 500 ml infuzi jako je 5% glukóza.

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Indolopyrrolokarbazoly s antitumorovou aktivitou, obecného vzorce I v němž

   R¹ a R² značí jednotlivě a) vodík, b) C^alkyl, c) C3_6alkenyl, d) C6-i2aryl, e) Ci^alkyl substituovaný C6_12arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidyl, m) oxazolinyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q) pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³, přičemž tyto substituenty b) až t) jsou popřípadě substituovány 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, SO3H, NH₂, kyanoskupinu, Ci^alkylaminoskupinu, diCi^alkylaminoskupinu, hydroxyl a halogen,

   Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

   R³ značí A) vodík, B) C^alkyl, C) C₃_6cykloalkyl, D) C₄_iocykloalkylalkyl, E) Ce-uaryl, F) C|.₆alkyl substituovaný Cé-^arylem, G) Ci_6alkoxyl, Η) NHNH₂,1) NH₂, J) NH₂ substituovanou Có-uarylem, K) karbamoyl, L) pyrrolyl, M) oxazolyl, N) isoxazolyl, O) thiazolyl, P) imidazolyl, Q) pyridyl, R) pyridiminyl, S) oxazolinyl, T) oxazolidinyl, U) imidazolinyl, V) imidazolidinyl, W) pyrrolidinyl, X) piperazinyl, Y) thiazolyl nebo Z) thiazolidinyl, přičemž tyto substituenty B) až F) a L) až Z) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, který je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C2_6alkanoyl, C₂-7alkoxykarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící acetal, benzyl, jenž je popřípadě substituován Ci_6alkoxylem nebo nitroskupinou, NH₂, karboxyl, karbamoyl, kyanoskupinu a C^alkoxykarbonyl, přičemž NH₂ a karbamoyl jsou popřípadě substituovány jednou nebo dvakrát C^alkylem, který je popřípadě substituován substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, NH₂, karboxyl, karbamoyl a C₂-₇alkoxykarbonyl, nebo

   R¹ a R² tvoří společně i) Cj^alkyliden nebo ii) C^alkyliden substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Cι-ealkylaminoskupinu, di-Ci^alkylaminoskupinu, hydroxyl, karboxyl a SO₃H, nebo

   R¹ a R² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázány, iii) pyrrolidinyl, iv) imidazolidinyl, v) imidazolinyl, vi) piperazidinoskupinu nebo vii) piperazinyl, přičemž tyto substituenty i) až v) jsou popřípadě substituovány v kruhu alespoň jedenkrát Ci^alkylem, který je popřípadě substituován substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, hydroxyl, karboxyl a SO₂H,

   G značí cyklickou pentozovou nebo hexozovou skupinu, jejichž hydroxyskupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 3 stejnými nebo rozdílnými skupinami vybranými ze souboru zahrnujícího vodík, Ci_6alkyl, Ci_6alkylkarbonyloxyskupinu, Ci_éalkoxyskupinu a aminoskupinu,

   -68CZ 287304 B6

   X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) Ci_6alkylaminoskupinu, VII) Ci.₆alkoxyl, VIII) Ci_6alkoxyl substituovaný C6_i₂arylem, IX) COOH, X) C₂_₇alkoxykarbonyl nebo XI) Ci^alkyl, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.
2. 2. Indolopyrrolokarbazoly podle nároku 1, obecného vzorce Ia <Ia) v němž

   R¹¹ a R²¹ značí jednotlivě a) vodík, b) Ci^alkyl, c) C₃_6alkenyl, d) C6_i₂aryl, e) Ci^alkyl substituovaný C6_i₂arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidyl, m) oxazolyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q) pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³¹, přičemž substituenty b) až t) jsou popřípadě substituovány 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, kyanoskupinu a hydroxyl,

   Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

   R³¹ značí A) vodík, B) Ci^alkyl, C) Ce-uaiyl, D) C^alkoxyl, E) NH₂, F) NHNH₂, G) NH₂ substituovanou C6-i₂arylem, H) C^alkoxyl, I) karbamoyl, J) pyrrolyl, K) oxazolyl, L) isoxazolyl, M) thiazolyl, N) imidazolyl, O) pyridyl, P) pyrimidyl, Q) oxazolinyl, R) oxazolidinyl, S) imidazolinyl, T) imidazolidinyl, U) pyrrolidinyl, V) piperazinyl, W) thiazolyl nebo X) thiazolidinyl, přičemž substituenty B) a C) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, který je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C₂_6alkanoyl, C₂_7alkoxykarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící acetal, benzyl, jenž je popřípadě substituován Ci_6alkoxylem nebo nitroskupinou, NH₂ a karboxyl, nebo

   R¹¹ a R²¹ tvoří společně i) Ci_6alkyliden nebo ii) Ci_6alkyliden substituovaný karboxylem, nebo

   R¹¹ a R¹² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázané, iii) pyrrolidinyl, iv) imidazolidinyl, v) imidazolinyl, vi) piperidinovou skupinu nebo vii) piperazinyl přičemž substituenty iii) až vii) jsou popřípadě substituovány v kruhu alespoň jedenkrát C^alkylem, který je popřípadě substituován hydroxylem,

   -69CZ 287304 B6

   G značí skupinu vzorce nebo v nichž

   R⁷ značí vodík nebo Ci^alkyl a

   R⁸ značí hydroxyl nebo NH₂ a

   X¹¹ a X¹², jež jsou vázané k indolopyrrolokarbazolovému kruhu jednotlivě v poloze 1 nebo 2 a v poloze 10 a 11, značí jednotlivě I) halogen, II) hydroxyl, III) C^alkoxyl nebo IV) Ci^aikoxyl substituovaný C₆_i₂arylem, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.
3. 3. Indolopyrrolokarbazoly podle nároku 1, obecného vzorce lb (lb) v němž

   R¹² značí vodík nebo Ci_6alkyl,

   R²² značí a) vodík, b) Ci^alkyl, c) C^alkyl substituovaný 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, karbamoyl, hydroxyl a kyanoskupinu, d) C6_i₂aryl, e) Ci^alkyl substituovaný Có-narylem, g) pyridyl, h) imidazolyl, i) imidazolidinyl, j) thiazolyl, k) pyrrolidinyl, 1) piperazinyl nebo m) skupinu -Y-R³², přičemž substituenty d) a e) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl a karboxyl,

   Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a značí-Ii Y karbonyl nebo thiokarbonyl,

   R³² značí A) vodík, B) Ci^alkyl, C) Cé_i₂aryl, D) NH₂, E) NHNH₂, F) NH₂ substituovanou C6-i₂arylem, G) Ci^alkoxyl, H) karbamoyl, I) pyridyl, J) pyrimidyl, K) imidazolinyl nebo L) pyrrolidinyl, přičemž substituenty B) a C) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxyl, jenž je popřípadě chráněn chránící skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího C₂_6alkanoyl, C₂_₇alkoxykarbonyl, benzoyl, skupinu tvořící

   -70CZ 287304 B6 acetal, benzyl, NH₂, karboxyl a benzyl substituovaný Ci_6alkoxylem nebo nitroskupinou a značili Y sulfonyl,

   R³² je C|_₆alkyl nebo C₆-i₂aryl, nebo

   R¹² a R²² tvoří společně s atomem dusíku, na nějž jsou vázané, i) pyrrolidinyl, ii) piperidinovou skupinu nebo iii) piperazinyl, přičemž substituenty i) až iii) jsou popřípadě v kruhu substituovány C^alkyly, které jsou popřípadě substituovány alespoň jednou hydroxylem, a

   G¹ značí skupinu vzorce nebo v nichž R⁷ je vodík nebo C^alkyl a R⁸ je hydroxyl neboNH₂ a

   X¹¹ a X²¹, které jsou vázané k indolopynolokarbazolovému kruhu jednotlivě v poloze 1 nebo 2 a v poloze 10 nebo 11, značí jednotlivě I) halogen, II) hydroxyl nebo III) C]_6alkoxyl, popřípadě substituovaný C^₁₂arylem, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.
4. 4. Indolopyrrolokarbazoly podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž R¹ a R² značí jednotlivě vodík nebo Cj^alkyl, popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu a di-C^alkylaminoskupinu,

   R¹ a R² tvoří společně Cj^alkyliden, popřípadě substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu, di-C^alkylaminoskupinu, hydroxyl a karboxyl,

   G je skupina obecného vzorce v němž R⁷ je vodík nebo Ci^alkyl a R⁸ je hydroxyl a

   X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, Π) halogen, III) NH₂, IV) Cι-ealkylaminoskupinu, V) diCi^alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) Cj-ealkoxyl, VIII) COOH, IX) C₂_₇alkoxykarbonyl nebo X) C i^alky 1, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.

   -71CZ 287304 B6
5. 5. Indolopyrrolokarbazoly podle nároku 1, obecného vzorce I v němž

   R¹ značí vodík nebo C í^alky 1,

   R je skupina vzorce -Y-R , přičemž Cj^alkyl ve významu R¹ je popřípadě substituovaný 1 nebo 2 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu a di-C]_6alkylaminoskupinu,

   Y značí karboxyl a

   R³ je vodík nebo Ci_₆alkyl,

   R¹ a R² tvoří společně Ci^alkyliden, popřípadě substituovaný 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující NH₂, Ci_6alkylaminoskupinu, di-C]_6alkylaminoskupinu, hydroxyl a karboxyl,

   G značí skupinu obecného vzorce v němž

   R^{6 7} je vodík nebo C_l_₆alkyl a R⁸ je hydroxyl, a

   X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) C^alkylaminoskupinu, V) diCi.₆alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) Ci_6alkoxyl, VIII) COOH, IX) C₃_₇alkoxykarbonyl nebo X) C]_6alkyl, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli.
6. 6. Indolopyrrolokarbazoly podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž

   R¹ a R² značí jednotlivě a) vodík, b) Cj^alkyl, c) C3_6alkenyl, d) C6_i2aryl, e) Ci^alky 1 substituovaný C6_i2arylem, f) pyrrolyl, g) oxazolyl, h) isoxazolyl, i) thiazolyl, j) imidazolyl, k) pyridyl, 1) pyrimidinyl, m) oxazolinyl, n) oxazolidinyl, o) imidazolinyl, p) imidazolidinyl, q) pyrrolidinyl, r) piperazinyl, s) thiazolyl, t) thiazolidinyl nebo u) skupinu -Y-R³, přičemž substituenty b) až t) jsou popřípadě substituovány 1 až 4 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující karboxyl, SO3H, NH₂, C^alkylaminoskupinu, di-C]_6alkylaminoskupinu, hydroxyl a halogen,

   Y značí karbonyl, thiokarbonyl nebo sulfonyl a

   R³ značí vodík, Ci_6alkyl, NH₂ nebo karbamoyl,

   -72CZ 287304 B6

   G je skupina vzorce v němž

   R⁷ je vodík nebo Ci^alkyl a R⁸ je hydroxyl a

   X¹ a X² značí jednotlivě I) vodík, II) halogen, III) NH₂, IV) Ci_6alkylaminoskupinu, V) diCi_6alkylaminoskupinu, VI) hydroxyl, VII) Ci^alkoxyl, VIII) COOH, IX) C₂_7alkoxykarbonyl nebo X) Ci_6alkyl.
7. 7. Způsob přípravy imidopyrrolokarbazolů podle nároků 1 až 6, obecného vzorce I, a jejich farmaceuticky přijatelných solí, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II nebo III

   Cil)

   Clil) v nichž

   Y je vodík nebo Ci-ealkyl, který je popřípadě substituovaný, a X¹, X² a G mají významy uvedené v nároku 1 nebo derivát sloučenin obecných vzorců II a III, ve kterém jsou funkční skupiny chráněny, uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce IV

   -73CZ 287304 B6

   R¹

   HzN-n/ <IV>

   R2 v němž

   R¹ a R² mají významy uvedené v nároku 1, nebo

   R¹ a R² tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinu C^, která má popřípadě na kruhu C^alkylové skupiny, jež jsou popřípadě substituované aminoskupinou, hydroxylem, karboxylem nebo sulfoskupinou, nebo v reakci s jejím derivátem, v němž v případě, že R¹ a R² obsahují funkční skupinu, je tato funkční skupina chráněna, chránící skupiny se popřípadě odstraní za získání sloučeniny obecného vzorce Ic v němž R¹, R², X¹, X² a G mají shora uvedené významy, nebo se aminoskupina obecného vzorce -ΝΗ’Η², v němž R¹ a R² značí jednotlivě vodík, ve sloučenině obecného vzorce Ic

   a) formyluje zahřátím s kyselinou mravenčí, formamidem nebo dimethylformamidem, nebo reakcí se směsí kyseliny mravenčí a jejího anhydridů za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je karbonyl a R³ je vodík, a druhý substituent značí vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   b) alkyluje Ci_6 alkylhalogenidem, C|_₆ alkylmesylátem nebo C]_6 alkyltosylátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí Ci_6 alkyl a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   c) alkenyluje C₃_₈ alkenylhalogenidem nebo C₃_₈ alkenylmesylátem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí C₃_₈ alkenyl a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   d) aralkyluje C^aryl-C^alkylhalogenidem, Ce-naryl-C^alkylmesylátem nebo C6_₁₂arylCí^alkyltosylátem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí alkyl substituovaný arylem a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   e) karbamoyluje Ci_6 alkylisokyanátem nebo arylisokyanátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ nebo R² značí skupinu -Y-R³, v níž X je karbonyl a R³ je Ci_6 alkylaminoskupina nebo Ce-u arylaminoskupina, nebo se uvedená aminoskupina

   -74CZ 287304 B6

   f) thiokarbamoyluje Ci_6 alkylthioisokyanátem nebo C6_i2 arylthioisokyanátem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ nebo R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je thiokarbonyl a R³ je C]_6 alkylaminoskupina nebo C6-12 arylaminoskupina, a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   d) alkanoyluje Cj_6 alkanoylhalogenidem nebo C]_6 alkanoylanhydridem za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y je karbonyl a R³ je Ci_6 alkyl, a druhý substituent je vodík, nebo se uvedená aminoskupina

   h) sulfonyluje anhydridem nebo halogenidem C|_₆ alkylsulfonové nebo Cé_i2 arylsulfonové kyseliny za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí skupinu -Y-R³, v níž Y značí sulfonyl a R³ je Ci_6 alkyl nebo Ce-n aryl, nebo se

   i) ve sloučenině obecného vzorce Ic, v němž alespoň jeden ze substituentů R¹ a R² značí C₃..₆ alkenyl a druhý substituent značí skupinu definovanou v nároku 1, C₃~₆ alkenyl redukuje na C₃_6 alkyl katalytickou hydrogenací, nebo se

   j) sloučenina obecného vzorce Ic kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce OHC-R⁶, v němž R⁶ je vodík, karboxyl nebo Ci_6 alkyl, obsahující popřípadě 1 až 4 substituenty vybrané ze souboru zahrnujícího aminoskupinu, mono-C^alkylaminoskupinu, di-Ci^alkylaminoskupinu, hydroxyl, karboxyl a sulfoskupinu, a chránící skupiny se ve všech případech popřípadě odstraní, načež se vzniklá sloučenina obecného vzorce I popřípadě převede na farmaceuticky přijatelnou sůl.
8. 8. Meziprodukt obecného vzorce III (III) ve kterém X¹, X² a G mají významy uvedené v nároku 1, a jeho derivát, ve kterém jsou funkční skupiny chráněné, pro výrobu indolopyrrolokarbazolů shora uvedeného obecného vzorce I.
9. 9. Farmaceutické přípravky k léčení rakoviny, vyznačující se tím, že jako účinné látky obsahují v účinném množství indolopyrrolokarbazoly podle nároků 1 až 6, uvedeného obecného vzorce I, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, ve spojení s farmaceuticky přijatelnými nosiči.