CS269962B2 - Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production - Google Patents

Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production Download PDF

Info

Publication number
CS269962B2
CS269962B2 CS846033A CS603384A CS269962B2 CS 269962 B2 CS269962 B2 CS 269962B2 CS 846033 A CS846033 A CS 846033A CS 603384 A CS603384 A CS 603384A CS 269962 B2 CS269962 B2 CS 269962B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
alkyl
formula
residue
independently
compound
Prior art date
Application number
CS846033A
Other languages
English (en)
Other versions
CS603384A2 (en
Inventor
Elli Dr Rauschner
Eugen Dr Schaich
Ulrich Dr Neumann
August Dr Wahlefeld
Wolfgang Dr Gruber
Bernhard Empl
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6206074&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CS269962(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS603384A2 publication Critical patent/CS603384A2/cs
Publication of CS269962B2 publication Critical patent/CS269962B2/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/40Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/10O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81Packaged device or kit

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Silicon Polymers (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

Vynález ее týká způsobu výroby 4*6-Sllb8tituovaných-o(-D-maltohexa-bÍ8-oktaoBÍdových derivátu obecného vzore· I
(I) ve kterém každý ze symbolů R a R^ znamená nezávisle na druhém symbolu alkylovou nebo alkoylovou skupinu s 1 aŽ 6 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci nebo fenylový zbytek· přičemž R a R1 mohou společně též tvořit ; methylenový můstek* jehož atomy vodíku mohou být nezávisle na sobě substituovány vždy jednou fenylovou skupinou* *
R znamená zbytek oligoglukozidu s 5 až 7 glukozovými jednotkami a
X znamená atom vodíku nebo opticky stanovitelný zbytek* zejména nitrofenylovou skupinu* ' Stanovení hladiny a-amylázy v séru je důležitým klinickým parametrem pro funkci slinivky břišní» V obchodě běžná rěagenční Činidla pro stanovení ot-amylázy byla dříve zaměřena převážně na použití Škrobu nebo derivátů škrobu jakožto substrátů· Tyto substráty se však ukázaly jako neuspokojivé· К odstranění tohoto nedostatku byly proto škrob a deriváty škrobu nahraŽeny oligosacharidy a jejich opUcky stanovitelnými deriváty· přičemž se dosáhlo zajímavých zlepšení zejména použitím maltotetrdzy· maltopentázy a jejich derivátů, (německé zveřejAovací spisy DE-OS č« 27 41 192 a 27 55 8o3 a patentové spisy US č* 3 879 263 a 4 ooo o42)·
Obzvláště zajímavá varianta stanovení d—amylázy pH použití zmíněných oligoglukozidu vznikla. v přítomnosti CL-glukozidázyv poněvadž bylo přitom možno dosáhnout úplného odbourání oligoglukozidu na glukdzu* která pak mohla být snadno stanovena známými postupy (erov· německý zveře jKovací spis DE-OS č· 27 41 192)·
Ukázalo se však* že pomocný enzym ct—glukozldáza zkracuje dobu skladovatelňosti hotové směsi reagenčního činidla* poněvadž vyvolává i bez působení α-amylázy rozštěpení oligoglukozidu do určité míry. *
Podnětem к vynálezu byl proto úkol, odstranit tento nedostatek a poskytnout substrát pro <X-amylázu* který je dostatečně dlouho skladovatelný I v přítomnosti «<—glukozidázy a zlepšuje správnost důkazu Ot-amylázy*
Výnález řeší tento úkol sloučeninami výše uvedeného vzorce !* ve kterém obecné symboly
2
R* R * R а X mají výše uvedený význam.
Ukázalo se* že к použití připravené reagenční Činidlo se sloučeninami* vyrobenými způsobem podle vynálezu* nepodléhá ani v přítomnosti ot-glukozidázy žádným změnám a skýtá i po delší době správné hodnoty Ct-amylázy.
Z alkylových skupin je třeba uvést methylovou* ethylovou* propylovou* isopropylovou* butylovou* isobutylovou* terc.butylovou* n-pentylovou* jejich Isomery* n-hexylovou* jejich isomery* ja-> kož I cyklohexylovou skupinu* Rovněž přicházejí v úvahu Jako substituenty na atomech kyslíku v poloze 4 a/nebo 6 koncové glukozldového zbytku alkoylové skupiny odpovídající výše uvedeným alkylovým skupinám. Výhodné jsou v rámci vynálezu ty z uvedených sloučenin obecného vzorce I, u nichž symboly R a R1 společně znamenají popřípadě substituovaný methylenový můs tek, zejména pak ty, které jsou substituovány íenylovou skupinou, obzvláště benzylidenovou skupinou.
Ze zbytku oligoglukozidu ve významu symbolu R Jsou výhodné ty, které obsahují 6 glukozidových jednotek·
Jestliže X znamená opticky stanovitelný zbytek, může jím být zbytek, který sám vykazuje zbarvení v oblasti viditelného- světla nebo v ultrafialové oblasti, nebo zbytek, který se stane opticky stanovitelný reakcí s další sloučeninou, například převedením v barvivo nebo kopulací s barvivém. Takovéto opticky stanovitelné zbytky jsou odborníkům běžně známé a není třeba je zde blíže popisovat. Výhodné jsou íenyíové zbytky obsahující nitroskuplny, jako je nitroíenylová skupina nebo 3,4-dlnltrofenylová skupina·
Při způsobu podle vynálezu se oligoglukozldy se 6 až 8 atomy uhlíku, mající popřípadě na konci vázanou opticky stanovitelnou skupinu X, jakožto výchozí látky nechají za esterifikačních nebo etheriflkačních podmínek reagovat s orthooxy sloučeninou, výhodně s dialkoxyethanem nebo příslušným benzylovým derivátem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R a R1 společně znamenají methylenovou skupinu, a popřípadě se následně chrání volné hydroxylové skupiny, například peracetylací, methylenový můstek se u kyslíkového atomu v poloze 4 nebo 6 rozštěpí a popřípadě se takto vzniklá volná hydroxylové skupina v poloze 4 nebo 6 opět zesterlíikuje -nebo zéterifikuje, popřípadě preéteriflkuje nebo preestorlfikuje, načež se zbývající ochranné skupiny hydroxylových skupin, například асе tylové skupiny odštěpí. .
Sloučeniny a popřípadě substituovaným methylenovým můstkem, které vznikají při této syntéze Jako meziprodukty, ostatně však jsou výhodné 1 Jako finální produkty, se připravují způsobem podle vynálezu tak, že se sloučenina obecného vzorce II ( II ) ve kterém
X má výše uvedený význam a znamená ollgoglukožidový zbytek se 6 až 8 glukozovými jednotkami, nechá v přítomnosti kyseliny p-toluensulíonové reagovat v polárním rozpouštědle se sloučeninou obecného vzorce Ш '
- alkyl)
( III ) ve kterém 4 5 každý ze symbolů R a R znamená nezávisle na druhém symbolu atom vodíku nebo alkylovou skupinu β 1 až 5 atomy uhlíku a alkyl znamená alkylovou skupinu в 1 až 5 atomy uhlíku.
Jako polárního organického rozpouštědla se a výhodou používá dimethylformamidu nebo formamidu, vhodná Jsou však i Jiná polární organická rozpouštědla se srovnatelnou bazicilou.
Uvedenou reakcí se překvapivě získají Jednotné produkty, aniž by bylo nutno chránit četné přítomné hydroxylové skupiny· Popřípadě vzniklé vedlejší produkty je možno snadno oddělit.
Reakce se provádí účelně při teplotách od asi lo do asi 7o °C, s výhodou při teplotě místnosti. Poněvadž při této reakci stěží dochází ke vzniku vedlejších produktů, pracuje se к dosažení nejlepších výtěžků výhodně se stechiometrlckým nadbytkem sloučeniny obecného vzorce Ш.
CS 269962! Dl,
Příklady sloučenin obecného vzorce III jsou' dimethoxymethan, dimeth oxyethan, dlethoxyethan, dlpropoxyethan, dlbutoxyethan, dlmethoxypropany, dimethoxylsopropan, a fenyldimethoxy methan. ·
Příklady sloučenin obecného vzorce П jsou maltoteLróza. malfopentóza. maltohexóze, maltoheptóza a jejich deriváty, substituované na konch optlcky stanovitelnou skupinou, jako jsou mononitrofenylmaltoheptóza, 3,4—dlnltrofenylmaltoheptďza* atd.
Vynikající skladovatelnost sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu se projevuje Um, že za podmínek velmi rozšířeného, komerčně obvyklého testu pro barevné stanovení X—amylázy s p-nitrofenylmaltoheptozldem jakožto substrátem (C^pNP) [pufr pH 7,1| NaCl 5o mmolů; přibližně 3o jednotek ml*1 cf-glukozidázy; 5 mmolů substrátuj nevzniká při prakticky identických průbězích reakce, pokud jde o lag fázi a linearitu, za použití 4,6-ethylÍden-p,-nltrofenylmaltoheptozidem (Eth-C7pNP) během 4 dnů při teplotě 25 °C prakticky žádná glukóza, zatímco při použití p-nitrofenylmaltoheptozldu dochází к patrnému štěpení na glukózu. Za týchž podmínek při teplotě 4 °C nevzniká při použití substrátu podle vynálezu po 8 dnech Žádná glukóza, zatímco při použití známého srovnávacího substrátu dochází ke zřetelnému štěpení. Způsobem podle vynálezu se tedy získají nové sloučeniny, které při použití Jakožto substráty při stanovení tt-araylázy v přítomnosti CC-glukozldázy vykazují zlepšené vlastnosti.
Níže uvedené příklady vynález blíže objasňují.
PJLLL-L*-É____1
Způsob výroby 4,6-ethyllden—4—nitrofenyl—d-D-maltoheptozldu
Násada :
25o g (196 mmolů) 4-nltrofenyl—Cl-D-maltoheptozldu
31.5 ml (297 mmolů) dimethylacetalu acetaldehydu
2o g monohydrátu kyseliny p-loluensulfonové
1.5 1 dimethylform amidu
Syntéza :
25o g 4-nitrofenyl-ct-D-maltoheptožidu a 2o g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové se rozpustí v přibližně 1,5 1 dimethylformamidu a roztok se zpracuje к odstranění vody v rotační odparce. Tím klesne obsah vody z o,4 % na o,o2 %. Zbytek se rozpustí v 1,5 1 dimethylformamidu, к roztoku se přidá 31,5 ml dimethylacetalu acetaldehydu a směs se míchá 9 hodin při teplotě 5o °C, načež se ponechá asi lo hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs odpaří do sucha, zbytek se rozpustí ve vodě, pH vzniklého roztoku se upraví přidáním roztoku hydroxidu lithného na hodnotu 7,3 a po sflltrování se roztok odpaří na objem 75o ml.
Podle vysokotlaké kapalinové chromatograflcké analýzy obsahuje produkt přibližně 75 až 8o % ethyllden—4-nltro-fenyl-a-D-maltoheptozldu s asi 2o % výchozích látek.
Chromatograflcké čištění. :
Roztok vzorku (75o ml) se nechá projít kolonou o rozměrech 15o x 25 cm, naplněnou 7o 1 pryskyřice Dowex 5o WX2 (změní 2oo až 4oo mesh) v Li^-cyklu, která se eluuje vodou při průtoku 1,5 l.h“1. Přitom se jímají frakce po 4,5 1 a chromatografle se sleduje pomocí UV detektoru při 28o nm. .
Po přibližně loo 1 eluuje nezreagovaný 4-nltro-fenyl—4-D-malloheplozld, po přibližně 2oo 1 eluuje vyráběny produkt.
Frakce obsahující produkt se spojí a odpaří do sucha. Zbytek se rozpustí v 1,5 1 methanolu, roztok se sflltruje a produkt se vyloučí při teplotě O °C přidáním 4 1 isopropanolu a lo 1 petroletheru. Po míchání přes noc při teplotě 4 °C se produkt odsaje, promyje Isopropanolem a petroletherem a vysuší v sušárně při teplotě 3o °C.
CS 269962 132
Výtěžek :
15o g (58 theorie) bezbarvého prášku o molekulové hmotnosti 1 3oo
H2O (podle K. Fischera) 4,5 % isopropanol (podle plynové chromatografické analýzy) 5 acetaldehyd po kyselé hydrolýze (enzym.) 91 % o , C* vztaženo na sušinu - 7? ° (c - 1. H2O)
Vysokotlaká kapalinová chromatografie :
plošných procent (5yum-NH2 kolonát acetonitril/voda 1 : 1, 1 mmol/t c kyselina fosforečná, detekce při 3o5 nm).
Příklad 2
Způsob výroby 4,6-ethylidenmaltoheptdzy
Násada :
lo g (8,7 mmolů) maltoheptdzy
1,8 ml (17 mmolů) dimethylacetalu acetaldehydu g m on ohydrátu kyseliny p-toluensulfonové ml dimethylformamidu
Syntéza :
lo g maltoheptdzy a 1 g monohydrátu kyselin p-toluensulfonové se rozpustí ve loo ml dimethylformamidu a vzniklý roztok se odpaří do sucha. Tím se zbytek zbaví vody. Pak se zbytek rozpustí v 75 ml dimethylformamidu, к roztoku se přidá 1,7 ml dimethylacetalu acetaldehydu a směs se míchá v uzavřené nádobě 15 hodin při teplotě 5o °C. Poté se reakční roztok odpaří do sucha, zbytek se rozpustí ve vodě, zneutralizuje hydroxidem lithným na pH 7, sfiltruje a zahustí na objem 5o ml.
Chromatografické čištění :
Roztoku 5o ml vzorků se nechají projít kolonou pro chromatografické čištění o rozměrech 18o x 5 cm, naplněnou 3,5 1 pryskyřice Dowex 5o WX2 (změní 2oo až 4oo mesh) v Li^-cyklu, která se eluuje vodou při průtoku 15o ml-h*^ · Jímají se frakce 3o ml, které procházejí UV detektorem (28o nm).
Po 1,8 1 eluuje maltoheptdza, po 2,25 1 eluuje ethylidenmaltoheptdza.
Hlavní frakce se spojí, odpaří v rotační odparce do sucha, zbytek se rozpustí ve 2oo ml methanolu za přidání malého množství vody, к roztoku se přidá 12oo ml isopropanolu a směs se míchá při teplotě 4 °C. Přitom se vyloučí produkt, který se odsaje, promyje isopropanolem a petroletherem a vysuší za sníženého tlaku nad oxidem fosforečným při teplotě 25 °C.
Výtěžek :
6,2 g (óp % theorie)
Analýza :
voda (podle K. Fischera) 7,6 % acetaldehyd po kyselé hydrolýze (enzym.) 91,2 %[otj C ♦ vztaženo na sušinu (c ·· 1, Η2θ) - 69 °
CS 269962 E2
Vysokotlaká kapalinová chromatograíie (podmínky viz příklad 1) :
plošných procent*
Reakce s tetrazoliovou modří dokazuj·» že redukující konec Je volný*
P ř í к lad__3
Reagenční činidlo :
682,5 mg ethyliden-p-nitrofenylmaitoheptozidu (5,25 mmolu.11) se rozpustí ve loo ml puťru na bázi fosforečnanu sodného (lo5 mmoiů.l“1), obsahujícího chlorid sodný (52,5 mmolu.l“1), jakož i X-glukozídázu (42 jedn*ml~*), a pH se upraví na 7,lo* .
Finální koncentrace při testu :
Fosfátový pufr loo mmolů*l“\
NaCl 5o mmolů.l~\ substrát 5 mmolů.l\ .
d-glukozidáza 4o Jedn*ml“\
Násada při testu :
Ke 2 ml reagenčního činidla o teplotě 25 °C se přidá o,l ml vzorku a směs se udržuje na teplotě 25 °C> Po předběžné inkubační době 4 minut (iag fáze) se při Hg 4o5 nm registruje přírůstek extinkce Eppendoríovým fotometrem se zapisovačem* Ze změny extínkce za minutu (AE.mln1) se vypočte aktivita amylázy ve vzorcích podle vztahu
ÁE.min1 * Y * 1 000 -1r -11 • * β AE.min“ * 7 ooo rjedn.l J
E . v . d
Opětné stanovení -amylázy :
Stanovení aktivity se opakuje v určitých časových odstupech při reagenČním činidle, chovaném při teplotě 4 °C a 25 °C, čímž se získají tyto hodnoty t.
ponechání reagenčního lidské sérum 1 lidské sérum 2 kontrolní sérum činidla . . „-1 , . „-1 PNU 572 jedn.l jedn.lζ jedn.l“1
počáteční hodnota 118 383 214
4 hodiny při 25 °C 120 379 214
8 hodin »» 12o 391 216
24 hodiny »» 113 36o 2o9
32 hodin »· . 12o 392 217
48 hodin Γ» 126 382 214
8 hodin při - » °c 119 37o 21o
24 hodiny »· 118 387 215
4 8 hodin »· 123 393 2o8
72 hodin »· 113 4ol 223
8o hodin ·· 121 375 219
střední hodnota /VK 119 3,2 % 383 3,o % 214
Jednotlivé hodnoty leží v obvyklých rozmezích při manuálních stanoveních aktivit enzymů.
P ř £ к l_a_d__4
R, R^ - tosyl
2o g ethyllden pNP-G? se rozpustí ve loo ml absolutního pyridinu a smísí se se loo ml anhydridu kyseliny octové. Pak ss směs zahřeje na teplotu 35 °C a míchá se přes noc, načež se vlije do přibližně 1 litru vody s ledem. Vzniklá sraženina se odfiltruje za odsávání, důkladně se promyje vodou a pak se suší při teplotě 4o °C ve vakuu.
Výtěžek je 46,5 g, vzorek byl získán chromatografií na tenké vrstvě při použití směsi toluenu a acetonu v poměru 7:3.
2o g acetylovaného produktu se rozpustí ve loo ml dloxanu a roztok se smísí s lo ml vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové o koncentraci o, 5 N. Po 2 hodinách stání při teplotě « loo °C se směs neutralizuje pevným hydrogenuhličitanem sodným. Pak se směs zfiltruje, filtrát se odpaří do sucha* odparek ee rozpustí ve loo ml pyridinu a přidá se lo g chloridu kyseliny p-toluensulfonové. Po 4 hodinách stání při teplotě místnosti se přidají ještě 2 g chloridu kyseliny toluensulfonové. Po 24 hodinách stání se směs vlije do směsi vody a ledové drtí, vzniklá sraženina se oddělí filtrací, pak se promyje a usuší.
Výtěžek je 2o g. .
К odštěpení acetylových ochranných skupin se produkt rozpustí ve 15o ml absolutního methanolu a přidá se 5o ml roztoku 5oo mg sodíku v methanolu. Po 2 hodinách stání při teplotě místnosti se suspenze rozpustí přidáním 5o ml vody a pak se neutralizuje přidáním pryskyřice Dowex 5o WX4, H*.
Po chromatografií na pryskyřici Dowex WX2 в průměrem částic 2oo až 4oo mesh, Li* při použití vody jako elučního činidla se získají 2 g čistého produktu.
Tento produkt je možno čistit vysokotlakou kapalinou chromatografií při použití sloupce NH2 a stoupajícího množství acetonitrilu ve vodě.
Příklad__5
R, R fenyl
2o g acetylovaného produktu se smísí stejně jako v příkladu 4 s vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové s dioxanem, čímž dochází к odštěpení асе tylové skupiny, načež se roztok neutralizuje a produkt se izoluje. Odparek se smísí se loo ml pyridinu a pak se přidá lo tni bromfenolu. Po 2 hodinách stání při teplotě 5o °C s následným mícháním přes noc se produkt zpracovává stejným způsobem jako v příkladu 4 a pak se stejným způsobem Čistí chromatografií na pryskyřici Dowex 5o WX2, při rozměru částic 2oo až 4oo mesh, bi*.
Příklad 6
Stejným způsobem jako v příkladu 4 je možno získat další sloučeniny tak, že se místo lo g chloridu kyseliny toluensulfonové užijí chloridy kyselin, které jsou uvedeny v následující tabulce :
Tabulka 1
chlorid kyseliny sloučenina obecného vzorce 1
18 g acetylchloridu R, Ρχ - acetyl(ethanoyl) *
15 g isobutylchloridu R, R^ m isobutyl(lsobutanoyl) ‘
12 g hexylchlorldu R* R^ « hexyl(hexanoyl)
Příklad 7
R^ a Rg tvoří společně benzylídenovou skupinu
V baňce s okrouhlým dnem · objemem loo ml se rozpustí 3,3 g p-nitrofenyl-a-D-maltoheptaosldu v 5o ml absolutního pyridinu a roztok se odpaří do sucha· Odparek se rozpustí v lo ml absolutního pyridinu* přidá se o,5 ml benzylbromidu a směs se vaří 3 hodiny na teplotě varu pod zpětným chladičem* *
Pak se směs vlije do 7oo ml vody s ledem, sraženina se odfiltruje, promyje a usuší* ' Po chromatografil na Dowex WX2 s rozměrem částic 2oo až 4oo mesh* LI* při použití vody Jako elučního Činidla se získá o»l g Čistého produktu*

Claims (4)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob výroby 4,6-eubstituovaných-fit-D-maltohexa-bis-oktaosIdových derivátů obecného vzorce I ve kterém každý ze symbolů R a R1 znamená nezávisle na druhém symbolu alkylovou nebo alkoylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci nebo fenylový zbytek* přičemž R a R1 mohou společně též tvořit methylenový můstek* Jehož atomy vodíku mohou být nezávisle na sobě substituovány vždy Jednou fenylovou skupinou»
    R znamená zbytek oligoglukosidu s 5 až 7 gluk osovým i jednotkami a β
    CS 269962 Β2 znamená atom vodíku nebo opticky stanovitelný zbytek, zejména nitrofenylovou skupinu, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II ( II ) ve kterém
    X má výše uvedený význam a znamená zbytek ollgoglukozidu se 6 až 8 glukdzovými Jednotkami, nechá v přítomnosti kyseliny p-toluensulíonové reagovat v polárním organickém rozpouštědle se sloučeninou obecného vzorce III (O—alkyl) 2 ( III ) ve kterém
    4 5 každý ze symbolu R a R znamená nezávisle na druhém symbolu atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku nebo íenylovou skupinu, a alkyl znamená alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku.
  2. 2„
    Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako organického rozpouštědla použije dimethylíormamidu.
  3. 3.
    Způsob podle bodů 1 a 2, vyznačující se tím, že se reakce provádí při teplotě v rozmezí lo až 7o °C.
  4. 4.
    Způsob podle bodů 1 až 3, vyznačující se tím, Že se sloučeniny obecného vzorce ΠΙ použije v nadbytku.
CS846033A 1983-08-08 1984-08-08 Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production CS269962B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19833328616 DE3328616A1 (de) 1983-08-08 1983-08-08 Oligoglucosidderivate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS603384A2 CS603384A2 (en) 1989-09-12
CS269962B2 true CS269962B2 (en) 1990-05-14

Family

ID=6206074

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS846033A CS269962B2 (en) 1983-08-08 1984-08-08 Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production

Country Status (12)

Country Link
US (2) US4709020A (cs)
EP (1) EP0135758B1 (cs)
JP (3) JPS6054395A (cs)
AT (1) ATE59391T1 (cs)
AU (1) AU548974B2 (cs)
CA (1) CA1240990A (cs)
CS (1) CS269962B2 (cs)
DD (2) DD237169A5 (cs)
DE (2) DE3328616A1 (cs)
ES (1) ES8504211A1 (cs)
YU (1) YU43373B (cs)
ZA (1) ZA846093B (cs)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3323245A1 (de) * 1983-06-28 1985-01-10 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase
US4649108A (en) * 1984-07-26 1987-03-10 Genzyme Corporation Alpha amylase assay
JPS6183195A (ja) * 1984-08-24 1986-04-26 Wako Pure Chem Ind Ltd 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法
DE3621271A1 (de) * 1986-06-25 1988-01-07 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase
JPS637797A (ja) * 1986-06-27 1988-01-13 Toyobo Co Ltd α−アミラ−ゼの活性測定法
US4963479A (en) * 1986-10-07 1990-10-16 Hoechst Celanese Corporation Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside
JPH0631293B2 (ja) * 1987-12-11 1994-04-27 東洋紡績株式会社 マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬
DE3743908A1 (de) * 1987-12-23 1989-07-06 Boehringer Mannheim Gmbh Neue oligoglucoside
JPH0676431B2 (ja) * 1988-06-17 1994-09-28 東洋紡績株式会社 糖エステル誘導体および加水分解酵素活性測定用試薬
DE3929355A1 (de) * 1989-09-04 1991-03-07 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase
US5089392A (en) * 1990-03-30 1992-02-18 The United States Of America As Represented By Of The Department Of Health And Human Services Fluorogenic substrates for measurement of lysosomal enzyme activities within intact cells
CA2039564A1 (en) * 1990-04-10 1991-10-11 James R. Rasmussen Oligosaccharide compounds and preparation thereof
US5470715A (en) * 1990-07-23 1995-11-28 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Composition for determination of chloride ion
US5246695A (en) * 1991-04-03 1993-09-21 Rewo Chemische Werke Gmbh Use of alkylglycoside sulfosuccinates for the production of cosmetic preparations and cleaning agents
DE4110663A1 (de) * 1991-04-03 1992-10-08 Rewo Chemische Werke Gmbh Neue ammoniumverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als reinigungsmittel, kosmetischer rohstoffe und weichmacher, insbesondere als weichspuelmittel fuer gewebe
US5300634A (en) * 1991-05-07 1994-04-05 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Process for producing maltooligosaccharide derivative
GB9112989D0 (en) * 1991-06-17 1991-08-07 Genzyme Uk Ltd Preparation of oligosaccharide derivatives
JP3087891B2 (ja) 1998-03-31 2000-09-11 東洋紡績株式会社 電解質測定用試薬組成物
US6387646B1 (en) 1998-12-11 2002-05-14 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Reagent compositions for measuring electrolyte
US6259615B1 (en) * 1999-07-22 2001-07-10 O2 Micro International Limited High-efficiency adaptive DC/AC converter
ATE486952T1 (de) * 2007-01-17 2010-11-15 Fujifilm Corp Verfahren zur messung tierischer alpha-amylase
CN116082420B (zh) * 2023-01-12 2025-02-18 浙江大学 一种eps-g7的化学合成方法

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4000042A (en) * 1973-09-06 1976-12-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Diagnostic reagent for the determination of amylase
US3879263A (en) * 1973-09-06 1975-04-22 Du Pont Method for the determination of amylase
US4147860A (en) * 1976-07-13 1979-04-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for preparing nitroaromatic glycosides
NL179399C (nl) * 1976-07-13 1986-09-01 Du Pont Werkwijze voor de bepaling van het amylase-gehalte van een monster en reagens-proefpakket daarvoor.
US4145527A (en) * 1976-07-13 1979-03-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nitro aromatic glycosides
US4102747A (en) * 1977-07-28 1978-07-25 American Hospital Supply Corporation Amylase determination
DE2755803A1 (de) * 1977-12-14 1979-06-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase
AT362526B (de) * 1977-09-13 1981-05-25 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha- -amylase
DE2741192C2 (de) * 1977-09-13 1982-07-01 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase
US4233403A (en) * 1978-02-27 1980-11-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Amylase assay
DE3001878A1 (de) * 1980-01-19 1981-07-23 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Polysaccharid-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung sowie diese enthaltende mittel
US4550077A (en) * 1980-05-07 1985-10-29 Electro-Nucleonics, Inc. β-Amylase determination
JPS57177699A (en) * 1981-04-28 1982-11-01 Fuji Electric Co Ltd Determination of alpha-amylase by means of enzyme electrode method
US4451563A (en) * 1981-08-28 1984-05-29 Kaufman Richard A Method for increasing the sensitivity of assays
US4521592A (en) * 1981-10-23 1985-06-04 Svenska Sockerfabriks Ab Compounds for therapeutic or diagnostic use, a process and intermediates for their preparation
US4472499A (en) * 1982-01-22 1984-09-18 American Hoechst Corporation Reagents for the determination of enzymes
JPS5931699A (ja) * 1982-08-17 1984-02-20 Wako Pure Chem Ind Ltd α−アミラ−ゼ活性の測定法
EP0104047B1 (en) * 1982-09-16 1987-07-29 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Modified oligosaccharides used as substrate for measuring alpha-amylase activity
US4649108A (en) * 1984-07-26 1987-03-10 Genzyme Corporation Alpha amylase assay
JPH0687297A (ja) * 1992-09-08 1994-03-29 Olympus Optical Co Ltd 画像形成装置のシート搬送機構

Also Published As

Publication number Publication date
JPS6054395A (ja) 1985-03-28
DD237169A5 (de) 1986-07-02
DE3328616A1 (de) 1985-02-28
AU548974B2 (en) 1986-01-09
CA1240990A (en) 1988-08-23
EP0135758A2 (de) 1985-04-03
YU138584A (en) 1986-06-30
YU43373B (en) 1989-06-30
JPH0222288A (ja) 1990-01-25
ES534959A0 (es) 1985-04-16
ES8504211A1 (es) 1985-04-16
AU3166584A (en) 1985-02-14
JPH0515436B2 (cs) 1993-03-01
DD232512A5 (de) 1986-01-29
ZA846093B (en) 1985-04-24
JPH0223891A (ja) 1990-01-26
CS603384A2 (en) 1989-09-12
US4818692A (en) 1989-04-04
JPS6251960B2 (cs) 1987-11-02
US4709020A (en) 1987-11-24
EP0135758B1 (de) 1990-12-27
ATE59391T1 (de) 1991-01-15
EP0135758A3 (en) 1987-05-13
DE3483861D1 (de) 1991-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS269962B2 (en) Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production
EP1436411B1 (en) Chromogenic enzyme substrates and method for detecting beta-d-ribofuranosidase activity
HU206124B (en) Process for producing antitumorous sugar conjugates and pharmaceutical compositions comprising same
IMAZAWA et al. Nucleosides and nucleotides. XII. Synthesis and properties of 2'-deoxy-2'-mercaptouridine and its derivatives
JPS60218397A (ja) レゾルフイン誘導体のグリコシド、その製法及びこれを含有するグリコシダーゼ検出のための診断剤
Kissman et al. The Synthesis of 1-(Aminodeoxy-β-D-ribofuranosyl)-2-pyrimidinones. New 3'-and 5'-Aminonucleosides
JPH0655753B2 (ja) 新規オリゴグルコシド誘導体、α‐アミラーゼの測定方法および測定試薬
Lubineau et al. Synthesis of aryl d-gluco-and d-galacto-pyranosides and 1-O-acyl-d-gluco-and-d-gluco-pyranoses exploiting the mitsunobu reaction. Influence of the pKa of the acid on the stereoselectivity of the reaction
Hanze Nucleic acids. V. Nucleotide derivatives of tubercidin (7-deazaadenosine)
US5011923A (en) Polyacetyl oligosaccharide derivatives
Matta et al. Synthesis of p-nitrophenyl 2-acetamido-2-deoxy-3-O-β-D-galactopyranosyl-D-galactopyranosides
CN102603825B (zh) 5-硫代吡喃木糖的衍生物
US4992368A (en) Novel process for producing oxetanocin G
US5300634A (en) Process for producing maltooligosaccharide derivative
Lassota et al. Pyrimidine homoribonucleosides: synthesis, solution conformation, and some biological properties
Edge et al. Synthetic analogues of polynucleotides. Part IX. Synthesis of 3′-O-carboxymethyl-2′-deoxyribonucleosides and their use in the synthesis of an analogue of 2′-deoxyadenylyl-(3′→ 5′-)-thymidine 3′-phosphate
JP4115066B2 (ja) 糖質アミジン誘導体
US5393876A (en) Process for producing maltooligosaccharide derivatives
JP790H (ja) オリゴグルコシド誘導体
JPH0222289A (ja) オリゴグルコシド誘導体の製造法
JPH05507094A (ja) α―アミラーゼ基質としてのインドフェノール置換マルトオリゴシド
JP3070709B2 (ja) マルトオリゴ糖誘導体の製造法
Gangyi The synthesis of 5-lodoindoxyl-3-phenylphosphonate and its use in analysis of phosphodiesterase I
JPH1060006A (ja) 非還元末端アジド化アセチルマルトオリゴシルブロマイドの製造法
SI8411385A8 (sl) Postopek za pripravo derivatov oligoglukozida