CS226002B2

CS226002B2 - Method of stabilizing aqueous sterile platinum cis-diamine-dichloride solution

Info

Publication number: CS226002B2
Application number: CS79901A
Authority: CS
Inventors: Edmund S Granatek; Gerald M Ziemba; Frederick L Grab
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1978-05-30
Filing date: 1979-02-09
Publication date: 1984-03-19
Also published as: SE445172B; IE790194L; ZA79395B; FI790404A; PH18056A; FR2427097B1; NL191108B; AU519873B2; CH619141A5; HK37982A; FR2427097A1; FI66121B; NL7901283A; NZ189556A; ES478272A1; CA1119954A; AU4383379A; AT362052B; LU81056A1; JPS619923B2

Description

Vynniez se týká způsobu stabilizace vodného sterilního roztoku cis-diamindichloridu plstnatého. Tfto roztoky jsou ' vhodné pro léčbu karcinomu.

Platinové sloučeniny jsou zcela zvláštní skupinou sloučenin v obliastti látek, užívaných pro potlačení nádorů. V roce 1965 zjistili Rosenberg a další antibiotický účinek těchto sloučenin, později bylo zjištěno, že u zvířat jde o účinné látky proti nádorovému bujení. (Rosenberg B., Van Camp, L. a K>igas T, Jnhibition of cell division in Escherichia coli by electrolysis products from a platnnm electrode. Nátuře /Londýn/ 205: 698 až 699, 1965, Rosenberg, B., Van Camp L, Trosko J. E. a Mnnoiu* V. H, Platnnum compoiunds: A new class ' of patent entitmor agents. Nture /Londýn/ 222 : 385 až 386, 196 9).

Pokud jde o strukturu těchto látee, jde o komplex tvořený centrálním . atomem platiny, který je obklopen atomy chloru a amonnými skupinami v poloze cis nebo trans podle rovinných vztahů. Dvě z podrobný! studovaných sloučenin mají následnici vzorce:

Cl

CL ^J MH.

diaminnicM.ooidplatnatý diaminnetrachlorid platičitý

Jak je zřejmé, má cis-diamindichlorid platnatý, zvolený pro klinické zkoušky Naaional Ceaicer Institute chloridová atomy a aminoskupiny pouze v horizontální rovině. Cis-forma tohoto komplexu byla syntetizovány podle následující chemické rovnice:

nh₄ci

K₂[PtCl₄] + 2HH₃--------► cis-fPtdiH.pjClg] + 2KC1

Kauffman, G. В. a J. Kleinberg (Ed.), Inorganic Synthesis, McGraw-Hill Book Co., Inc., New York, 1963.

National Cancer Institute prováděl klinické zkoušky na chemoterapeutickou účinnost proti nádorům se svrchu uvedenou látkou, která se nyní nazývá podle United States Adopted Name (USÁN) ci8platin. Některé podrobnosti o chemické povaze a farmaceutickém zpracování této látky jsou uvedeny v publikaci Clinical Brochure, Cis-Platinum (II) diamminedichloride (NSC-119875), H. Handelman a další, Investigational Drug Branch, Cancer Therapy Evaluation Program, Divišion of Cancer Treatment, National Cancer Institute (Revised, srpen 1974) na stranách 1 až 5 fi JI až 32. Poslední dvě strany uvedené publikace se týkají zpracování uvedené látky na lékové formy. Sloučenina je podávána zdarma N.C.I. pro klinické vyhodnocení ke zjištění chemo^erapeutického účinku proti nádorům. Dále budou uvedeny citované dvě strany v nezkráceném znění.

Údaje o farmaceutických vlastnostech

NSC-119875 cis-diammindichlorid platnatý (II)

Lékové formy

Lékovka s obsahem 10 mg:

Obsahem keiždé lékovky s obsahem 20 ml je špinavě bílá lyofilizovaná látku. Knždá lék: ν'ка obsahuje 10 mg sloučeniny NSC-119875, 90 mg chloridu sodného, 100 mg inannitolu a kyselinu chlorovodíkovou к úpravě pH.

Příprava roztoku

Lékovka s obsahem 10 mg účinné látky

Při rekonstituci 10 ml sterilní vody, určené pro injekční použití (USP) bude ubs?;;.·vat 1 ml výsledného roztoku, 1 mg sloučeniny NSC-119875, 1U mg mannitclu e. 9 itg chloridu sodného při pH v rozmezí 3,5 až 4,5.

Skladování

Neotevřené lékovky se suchým obsahem je nutno skladovat při teplotě 4 ež 8 ¹ 0.

Stálost

Neporušené lékovky se suchým obsahem mají předpokládanou stálost 1 rok při skladování při teplotě 4 až 8 °C. Protože se provádí další zkoušky, je možné, že údaje o stabilitě sloučenin budou ještě změněny. Po rekonstituci svrchu uvedeným způsobem vzniká bledě žlutý roztok, který je při teplotě 2k °C stálý pouze hodinu za světla a ve tmě při teplotě 22 °C je stálý pouze 8 hodin. Rekonstituované roztoky mohou vytvářet sraženinu po hodinovém skladování při teplotě 4 až 8 °C.

Upozornění

Lyofilizované roztoky neobsahují konzervační činidlo a lze jich užít do 8 hodin po rekonstituci.

Sppen 1974

Clinical Drug Distribution Section

Drug Development Branch

Další údaje o lékových formách této látky jsou uvedeny například v Cancer Chemotherapy Reports, část 1, svazek 57, č. 4, strany 465 až 471 (1973).

Cancer JO: 1 451 až 1 456 (1972) přináší o sloučenině čisplatin následující údaje:

Látka je vyráběna Ben Venue Laboratories lne., Bedford, Ohio. Bylg dodána Сапсез? TJjerapy Evaluation Branch, МаИта1 Cancer Institute v lékovkách s obsahem 10 mg cis-diaoindichloridu platnatého, 10 mg suchého oannitolu a 9 mg suchého hfcLoridu sodného. Výsledný žlutobílý prášek se snadno rozpouutí v 8 až 10 ml sterilní vody a je určen k injekčnímu podání bezprostředně po přípravě.

V Ainnls of Interna! Med. 86: 803 až 812 (1977) uvádí sloučeninu pod zkratkou DDP a popisuje ji následujícím způsobem: .

Sloučenina DDP je dostupná za účelem výzkumu pouze kvalifkOovným odborní lům přes Investigntioinl Drug Branch Cancer Therapy Evaluation Program, №Л1та1 Cancer Institute. Sloučenina se podává ve formě bílého lyofilZovnaného prášku v lékovkách, které obsahuj 10 mg DDP, 90 mg chloridu sodného, 100 mg M^a^n^nito^lu (U.S.P.) a kyselinu chlorovodíkovou k úpravě pH. Při reioniSituci 10 ml sterilní vody pro injekční podání (U.S.P.) bude 1 ml takto získaného výsledného roztoku obsahovat 1 mg DDP, 10 mg maanntolu a 9 mg chloridu sodného. Výsledný roztok bude mít pH v rozmezí 3,4 až 4,5. Při teplotě 22 °C je roztok po rek^r^ns^ituci stálý po dobu alespoň 8 hodin.

Svrchu uvedené lékové formy vyžadují při uložení v lékovkách v suché formě v pevném stavu před rekonnsitucí skladování při teplotě 4 ež 8 ^UC, je nesnadné je rekonstituovat a po je možno je pouuít při uložení při teplotě 22 ' °C nejvýš po dobu 12 hodin.

Rekkonsituce může způsobovat obtíže v případě, že je prováděna nevhodrým způsobem. Mimoto je rozpustnost sloučeniny cisplatin ve vodě pouze přibližně 1 mg/ml, takže náklady, které vznikají při přípravě lékových forem s obsahem více než 25 mg/lékovka LytfiLizncí jsou tak vysoké, že nelze uvažovat o jejich běžném pouužií.

Úkolem vynálezu je připravit stálou, z terapeutického hlediska přijatelnou lékovou formu cis-diamindichloridu placatého pro niti^ožilní pouužií, a to tak, aby nebylo zapotřebí LytfiLiznce a rekonstituce, ani chlazení v průběhu dopravy a skladování při dávkách 50 mg i vyššíeh.

Předmětem·vynálezu je tedy způsob stabilizace vodného sterilního roztoku cis-diamindichloridu platnUého v uzavřené nádobě ve formě jedno tlivé dávky, vhodné pro п^ю^Ш podání nemocným, vyzn^^ící se tím, že se při k^r^(^c^e^nt^i^<^:L cis-diamindichloridu platnatého 0,1 až 1,0 mg/ml roztok stabilizuje přidáním kyseliny chlrrrroáíiové do pH 2,0 až 3,0, . s výhodou 2,3 až 2,7 ze přítomnoti netoxického, z farmaceutického hlediska přijatenného anorganického zdroje chloridových iontů v konncenraci, ekvivalentní 1 až 20 mg/ml chloridu sodného a za přítomnost netoxického, z farmaceutického hlediska neškodného nosiče v koncentraci 2 až 150 mg/ml.

Po měsíčním skladování při teplotě 56 °C nemá doOít k vyššímu poklesu účinnooti roztoku než 10 », obvykle méně než 4 % při měření vysokotlakou kapalinovou ctaΌmanorranií. K roztoku je popřípadě možno přidávat konzervační činidlo.

Při pouužtí roztoků vyrobených způsobem podle vynálezu je možno zbrzdit růst zhoubných nádorů, které jsou citlivé na cis-diamindichlorid placatý. Roztoky se podávají nitrožilně v mnOžsví, které je schopno inhibevat růst nádoru, roztoky·se podávají jako sterilní vodné roztoky v uzavřené nebo zatavené nádobě, ·například v amu^ui nebo lékovce v mιiOíSví, které je možno nitrožilně podat, přičemž koncentrace sloučeniny ^splatin v roztoku je 0,1 až 1,0 mg/ml, s výhodou 1,0 mg/ml, pH roztoku se pohybuje v rozmezí 2,0 až 3,0 s výhodou v rozmezí 2,3 až 2,7 a zvláště 2,5, přičemž toto pH se udržuje příSomnoSí příslušného mnOžtví netoxické, z farmaceutického a·léčebného hlediska přijatelné kyseliny, s výhodou silné anorganické kyseliny, zvláště kyseliny chlorovodíkové.

Roztok popřípadě.obsahuje ještě netoxický, z farmaceutického hlediska přijatelný anorganický zdroj chloridových iontů v . konccntraci, která je ekvivalentní kor^cfieinx^i^c^i, zajištěná přítomiosSÍ chlor i dl ových iontů v íícožsví 1 až 20 mj/ml, s výhodou 9 m/ml. Roztok popřípadě obsahuje ještě další chemické látky nebo běžné, neškodné, z fyzilogického hlediska přijatelné nosiče, s výhodou mannttol v 2 až 150 m^ml, s výhodou v konceetгacl mg/ml, přičemž tento roztok při skladování 1 měsíc při teplotě 56 °C ztrácí méně než 10 %, obvykle méně než 4 % účinnosti při měření vysokotlakou kapalinovou chrornaaograflí.

Popis výhodných provedení

Příklad 1

Injekční roztok sloučeniny ^splatin o koncceCгaci 1 mg/ml [1 mg c^{* i}s-čliamⁱcdichlsridu plstnatého' v ¹ ml]

Složení	v 1 ml	v 1 litru
cis-diamind^chlorid
platnaty (II)	0^,0010 ^gA	1,000 ^gA
chlorid sodný U.S.P.	0,0090 g	9,000 g
iiftCiol, U.S.P.	0,0100 g	10,000 g
koncentrovaná kyselina	2^,0 až 3,0®
chlorovodíková US.P. do pH	2^,0 ^až 3^,0^]
voda k Ctjekδtimž pouuítí
U.S.P. do	1,0 ml	1 000,0 ml

Poznámka:

A = vztaženo na látku o· čistoto 10C %, hmoOnost sloučeniny udané čistoty je nutno upřev!.!, tak, aby roztok obsahoval 1 g 100% čistého cis-diamitdichlsaidu plstnatého v 1 litru.

B = je zapotřebí přibližně 0,035 až 0,050 ml kyseliny chlorovodíkové o 37 % na g chloridu sodného k úpravě pH na hodnotu přibližně 2,5.

Uppoornění

Cis-dia · indickl ?rid plstnatý je t .'xieká látka a je uvedena na straně 942 Reegstry cf roxic Effccts cf Chemical Substance^ z 'roku 1976. OSHA standard TWA (Time Wei^ghtcd Averze) je 2 Z tohoto důvodu je na základě svrchu uvedených publikací a na základě nařízení, která platí pro uvedenou látku v předpisech Natona! Cancer Institute Safety Standarde v případě chemických látek, Keré mohou způsobit těžké poškození zdraví, jakož i vzhledem k nařízení Nationíal Institute of Health Speccficaticns for a Class II typ 1 Safety CeCi-net nutno ·při s uvedenou látkou zachovávat velmi přísná bezpečnostní zařízení. Jíakékcliv vážení cCs-diaiCrdichlsaidu plstnatého, plnění do lékovek, zátkování a podobné postupy jc nutno provádět při použití ochranných pomůcek.

Všechny osoby, které se dostávají do styku s uvedenou látkou musí být chráněny aoйěkou kryjící celou hlavu a tvář, úplným ochra-rným oblekem, gumovými rukavicemi a dýchacím přístrojem, například NSA Ultra FUter eecsirator, který jc určen pro prostředí, zamořené prachem, parami a kou^řem o ΓΥΑ mén^ě te^ž 5°/^/^. V ^přípa^dě s^rilního ^n^í jc možno nahradit dýchací přístroj běžnou chirurgickou gázovou maskou. Jakékoli tkaniny nebo pomůcky, do nichž se látks. vsákne, jc nutno skladovat v uzavřené kovové nádobé až do jejich spálení.

V žádném případě není možno pokládat svrchu uvedené předpisy při výrobě, zpracování • výzkumu této sloučeniny ma přehnané.

cis-Diamindichlorid platnatý · je nutno chránit před světlem. Výroba a plněn:! do lékovek, tak jak bylo popsáno je nutno vždy provádět v difuzním světle, které je přírodního a fluorescenčního osvěělení.

Zřízení

Reakční nádoby

Je nutno užít tlakových nádob, vyložených skleněnou vrstvou. Je možno užít míchadla A 316 čč. Je nutno udržovat bezpečný pracovní objem, který je nutno kontrolovat zařízením, které je nedílnou soiuSást,:í každé reakční nádoby.

Filtrační · zařízení membránového typu

316 čč. V případě · potřeby je nutno zařadit mernmrány pro předběžnou filtraci a konečný sterilizující filtr 0,2^2_<am.

Nádoby pro přenos sloučeniny

Ne jvýhočdLěěěí je téflon nebo tygon.

Požadavky 316 čč je možno zajistit také při použití nerezové oceli. Také věechna dalěí zařízení je nutno vooit tak, aby bylo možno získat sterilní, nepyrrogenní prodiUct, který je prostý pevných částic.

Pokyny pro výrobu

Tyto pokyny byly upraveny pro výrobu a plnění v průběhu 8 hodin. čkladování produktu před plněním nebylo bráno v úvahu.

V průběhu výroby a filtrace byla udržována teplota 27 - 2 °C.

Do vhodné nádoby se vloží voda k injekčnímu podání (Uč.P. v mno^v!, které tvoří 80 % výsledného objemu vsázky.

Za stálého míchání se přidá chlorid sodný . čměs se míchá 10 minut - nebo až do úplného rozpuštění.

Za stálého míchání se pH roztoku chLoridu sodného opatrně upraví na hodnotu 2,0 až 3,0 s výhodou 2,5 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Přibližné množ^ví této kyseliny bylo svrchu uvedeno. Po posledním př^dánií se výsledná směs míchá ještě 10 minut, načež se výsledné pH·znovu zkonnroluje.

Za energického míchání se přidá mannntol a směs se míchá 10 minut nebo do úplného rozpuštění.

Za energického míchání se přidá při zachování věech svrchu uvedených bezpečnostních předpisů cit-iiamiědichlorii platnatý. Nádoba, z níž byla sloučenina přidána, se vypláchne dostateným množstvím vody, určené pro injekční podání a tato voda se · přidá do reakční nádoby.

čměs se míchá až do úplného rozpuštění, k čemuž je zapotřebí přibližně 60 až 90 minut. Pak se znovu zkc^r^^jroluje pH a v případě potřeby se přidá dalěí koncentrovaná kyselina chlorovodíková do pH 2,0 až 3,0, optimální pH je 2,5.

Objem celkového možství se doplní vodou, určenou pro injekční podiáií. Předem vypočítaný objem vsázky. Pak se ' znovu upraví pH.

Roztok se nechá projít čistým sternním filteem o 0,22^ (Millipore FLlter) za účelem sterilizace.

Výsledná směs se dělí do lékovek následujícím způsobem:

Lék<ovka s obsahem 10 mg účinné látky

Sterilní lékovka z tmavého skla typ I o objemu 15 ml se naplní 10 ml uvedeného roztoku, Pak se zazátkuje červenými zátkami o průměru 20 mm s tefonnovým povlakem a uzavře se pomocí hliníkové fólie. Oonačí se. jako K93, 100 a 107 při piřelkrytti dusíkem a jako K94, 101 a 108 bez plřelkrytí dusíkem.

Lékovka s obsahem 25 mg ůSinné látky

Užije . se sterilní lékovka z tmavého skla typ I o objemu 50 ml, do lékovky se naplní 25 mL svrchu získaného roztoku. Lékovka se uzavře červenou zátkou o průměru 20 mm s teflonovým povlakem a překryje hoblíkovou fólií. Oonnaí se jako K95, 102 a 109 při překrytí dusíkem a K96, 103 a 110 bez překrytí dusíkem.

Lékovka s obsahem 50 mg účinné látky

Užije se sterilní lékovky z tmavého skla typ I o obsahu 50 ml, do lékovky se vloží 50 ml svrchu získaného roztoku. Lékovka se zázátkuje červenou zátkou o průměru 20 mm e teflnnvvým polakem a překryje hliníkovou fólií. Oznnčí se jako K97, 104 a 111 při překrytí dusíkem a K98, 105 a 112 bez přefrytí dusíkem.

Uvedené lékové formy byly připraveny v následujících 5 skupinách, jejichž výsledné ,pH je uvedeno v závorkách.

K93-96	(ph 2,4)
K97-98	(pH 2,5)
K100-403	(pH 2,3)
K104-105	(pH 2,4)
K107-110	(pH 2,3)
K111-112	(pH 2,4)

Původní účinnost při sledování vysokotlakou kapalinovou chromaatlгtaií.se pohybovala v rozmezí 0,99 až ' 1,00 mg/ml.

Ztráta účinnooti v % piři skladování 1 nebo 2 měsíce při uvedené teplotě je shrnuta v následnici tabulce;

	56 °C 1 měsíc	2 měsíce	45°C 1 měsíc
K93	4,0
K94	2,0	4,0
K95	0,0		-1,0*
K96	»,0	4,0	0,0
K97	3,0
K98	4,0	2,0
K100	3,0

	56 °C 1 mmsíc	2 m^ělce	45 °C 1 mmsíc
K101	3,0	5,0
K102	3,0
K103	5,0.	4,0
K104	o,o		-1,0*
K1C5	o,o	5,0	0,0
K107	1,0		0,0
K108	2,0	5,0	1,0
K109	3,0
K110	3,0
K1 1 t	7,0
K112	7,0

μ Negativní číslo znamená, že účinnost se zvyšuje.

Z tabulky je zřejmé, Že uvedené roztoky při přesytí dusíkem nebo bez něho ztrácí pouze 7 % své účinnosti nebo méně po skladování při teplotě 56 °C nebo 45 °C, přičemž většina vzorků ztratila pouze 3 % účinnooti nebo méně. Roztoky si udržely pH 2,4 až 2,7.

Po 1 měsíci není možno pozorovat žádnou fyzikální zrninu při teplotě 56 nebo 45 °C. Roztoky ' zůstávají čiré a bezbarvé. Hodnoty podle Kletta jsou průměrně 8 až 12, po 1 měěíci při 56 nebo 45 °C 6 až 15. Nebylo možno pozorovat žádné rozdíly mezi vzorky překrytými a nepřekrytými dusíkem.

Jeden vzorek při každé z uvedených teplot byl skladován tak, že lékovka byla obrácena zátkou dolů, takže se roztok dosltal. do styku s tefoonovou zátkou. Vzorky z těchto lékovek byly sledovány po skladování při teplotě 56 °C po 1 měěsci s překrytím nebo bez překrytí dusíkem. Stálost nebyla ovlivněna po 1 měsíčním skladování při teplotě 56 °C a vzorky ztratily pouze 1 až 2 % své původní účinnossi.

Při uložení na 2 týdny při teplotě 4 °C byly vzorky zkoumány'za tím účelem, aby bylo možno prokázat případnou krystalizaci cis-diamindichloridu plstnatého. Do doby 1 měsíce nebylo možno prokázat tvorbu krystalů a i pak bylo možno pozorovat krystaly · pouze náhodně, nikoliv v každém vzorku. Pouze 1 Šarže lékovek o obsahu 10 mg účinné látky a 1 Šarže · lékovek o 25 mg účinné látky vytvářela krystaly při teplotě 4 °C. Mři obsahu 50 mg účinné látky v 1 lékovce doSlo ke krystalizaci ve vSech Šíaržích, avšak nikoliv ve všech vzorcích. V jednom vzorku s obsahem krystalů, vzniklých při teplotě 4 °C nebylo možno krystaly rozpussit ani zahřátím roztoku na 37·°C za míchání. Z těchto pozorován je možno uzavřít, že produkt není možno skladovat při nižších teplotách, protože i znoovirozpuštění vykrystalizovaného produktu bylo velmi obtížné.

cis-Diaminchlorid platnatý (NSC 119875) je anorganická látka, u níž byla nejprve prokázána schopnost ' brzdit rozmnožování Escherichia coli a později ρrstinádsrsvá účinnost’. Účinek této sloučeniny spočívá patrně v tom, že ruší syntézu DNA tak, že vytváří příčné můstky mezi komppemennárními řetězci DNA. Sloučenina je účinná proti celé řadě · nádorových systémů, včetně L1210,·sarkom 180, Waaerů karcinosakkom 256, nádory mléčné žlázy vyvolané DMBA a ascitický mmlanosarkom B16. Sloučenina je zvláště zajímavá proto, že je synertická s velkým mtoostyím látek, které jsou běžně užívány jako cheoterapeutika.

široce založených toxikologických pokusech na zvířatech bylo prokázáno, že sloučenina může způsobit nekrózu ledvinných kanálků, zánět sliznice tenkého a tlustého střeva, potlačení aktivity kostní dřeně a atrofii lymfoidní tkáně. Pokusy tedy byla prokázána toxicita v následujících směrech: ·

В

Potlačení činnosti kostní dřeně, nedostatečnost ledvin, nesnášenlivost v zažívací soustavě a mimoto ještě toxicita vzhledem ke sluchovému ústrojí. Běžně užívané dávky s nízkou až mírnou toxicitou se pohybují v rozmezí 60 až 100 mg/m^ v jednotlivé dávce nebo dávce, rozdělené na 3 až 5 dnů, přičemž tuto dávku je možno opakovat po 4 týdnech. Při klinických zkouškách bylo prokázáno, že látku bude možno užít u ňádorů zárodečných buněk, lymfonů, sarkomů a karcinomů mléčné žlázy, jakož i kožních karcinomů na hlavě a krku.

Dávka 60 mg/ty se rovná přibližně dávce 1,5 mg/kg, což znamená přibližně 105 mg u nemocného, jehož hmotnost je 70 kg.

Roztoky podle vynálezu se užívají stejným způsobem а к témuž účelu jako ostatní protinádorové látky. Jak již bylo uvedeno, jé možno je užít i ve spojení s dalšími chemoterapeutickými látkami s velmi dobrým výsledkem. Je-li to žádoucí, je možno roztoky podle vynálezu přidat bezprostředně před použitím ke sterilnímu, z farmaceutického hlediska přijatelnému ředidlu ve vodném roztoku, například к vodnému roztoku glukózy nebo chloridu sodného. Roztok se podává jako nitrožilní injekce nebo ve foi'mě nitrožilní Infuze.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie (HPLC) cis-diamindichloridu platnatáho

Metoda cis-Diamindichlorid plstnatý se chromatografuje na sloupci s použitím materiálu Mater *s Micro-Bondapak-NHg při použití vstřikovací techniky. Detekce se provádí stanovením adsorbce v ultrafialovém světle při 313 nm,.výpočet se provádí podle výšky získaného vrcholu zevní kalibrací. Tímto způsobem je možno stanovit uvedenou látku v práškované směsi, která obsahuje i chlorid sodný a mannitol. Specifičnost metody je možno prokázat tak, že se oddělí od sebe cia-isomer a trans-isomer i zjevné nečistoty, a mimoto i voda, kyselina a zásada. Oba isomery je možno vyjádřit následujícími vzorci:

Cis-(NH₃)₂ClgPt II

Trans-(NH₃)₂Cl₂Pt II

Podmínky HPLC <;»

Sloupec - Water's Micro-Bondapak-NH₂ (300 x 4,0 mm ID) 027386 nebo ekvivalent

Mobilní fáze - směs ethylacetátu, methanolu, dimethylformamidu a destilované vody v poměru 25:16:5:5. Je nutno užít reakčních činidel ve spektromiatrické čistotě (Burdick a Jackson). Vodu před použitím i výsledný roztok po smísení je nutno zbavit plynů.

Detektor - Weters Model 440 Abrosbance Detector.

Vlnová délka - 313 nm (ultrafialové světlo).

Citlivost - 0,1 AUPS.

Injektor - Obsah 20 mikrolitrů.

Typ injektoru - Valco o 49 000 kPa z nerezové oceli (CV -6-UHPa-C20).

Vstřikovaný objem - 20 mikrolitrů.

Zařízení pro pohon rozpouštědla - čerpadlo Wáter's Model 6000A.

Průtok - 2,0 ml/minuta.

Retence - přibližně 2,8 minut.

Zařízení к provádění záznamu - Heath Model SR-255B.

Rychlost papíru - 1,25 cm/minutu.

Napětí - rozmezí 10 milivoltů.

Analýza HPLC ·

Při shora uvedených podmínkách je nutno získat chromatogramy standardu a vzorku ve dvojím provedení.

Jako standard se užije cis-diamindichlorid platnatý (DDP):

Šarže δ. = 78F7 (Mtthey Bishop šarže ě. AM7702.

Označená čistíte = 99,8 %.

Rozppuštědlo - spektromeerická kvalita, destioováno ve skle (Bnurdick a Jackson).

Standard - odváží se přesně 25 mg ois-diamindicMoridu platnatěho (PPP) do volumeerické baňky o obsahu 25 ml. Po'zředění se objem doplní dimethyiormmamidem.

Maateiál pro vstřiknutí do chromraograllckého zařízení - rekonstituuje se obsah lékovky přidáním 10,0 ml dimethylformamidu . a směs se mechanicky protřepává 5 minut nebo ;se . promísí pomooS ultrazvuku ná’2 ’ = minutý.-· ‘ 5,> mwArku se pak zliltruje (Millipore ter Kit nebo ekvavaleelS),.. grvní ώ. získaného mateiálu se odloží..

vždy 10 l^éko^^vk-sse^ejný způsobemjpřed prováděním stanovení. _o

Zachování jednotnooti vzorku- připraví se jednotlivých

Výpočty .o

Standardní faktor (SF) mg stendardu/ml

,........... ... .. IIprůměrná výška vrcholu pro standard

SF x průměrná výška vrcholu pro· vzorek x 25 mg DDP/g vzorku v ^g · ^{7 :} “ mg DDP/lékovka = SF x průměrná výška vrcholu . pra vzorek x 10

Pro získání uniformních výsledků se vyp°oítá průměr vždy ·pro . · 10 předem připravených lékovek. .

Metoda

Shora uvedená stanovení sloučeniny ^splatin se provádí ve vodtych roztocích, které obsahují chlorid sodný a rannStol.

Podmínky HPLC

Mooilní láze- směs lcetouSlrilu a destioované vody v objemovém poměru 75:25. Je nutno užít Rozpouutédel ve spektrometrické čistotě, desilovaných ve skle (Burdick a Jackson). Jodu před použitím a výsledný roztok·po smísení všech složek je nutno zb^vv^ plynu.

yssMkovací zařízení - A100 mikrroitrů loop injektor.

Vstřikovaný objem - 100 mkroUitrů letence - přibližně 2,0 minut.

Annlýza HPLC

226002 . 10

Standard - naváží se přesně - 25 mg cis-diamindiclxLoridu platnatého (DDP), 225 mg chloridu sodného a 250 mg mmnnitolu do volumeerické baňky o obsahu 25 ml. Matteiál se rozpustí a doplní se na určený objem destioovanou vodou. 5,0 mL výsledného roztoku se přenese pipetou do volumetrické baňky o obsahu 25 ml, přidá se 2,0 mL destilované vody a objem se doplní acetonitrilim

Vzorek (1 mg/ml) - pipetou se přenese 5,0 mL vzorku do volumeerické baňky o obsahu 25 ml, přidá se 2,0 mL destioované vody a objem se doplní aceton^^eem.

Výpočty mg standardu/ml , Faktor pro standard (SF) = ..........

průměrná výška vrcholu pro standard mg DDP/ml = SF x průměrná výška vrcholu pro vzorek x 25

Viález je sbhopen průmyslového využití.

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1. Způsob stabilizace vodného sterilního roztoku cis-diamindichloridu platnatého v uzavřené nádobě ve formě jedotlivé dávky, vhodné pro nitrožilní podání nemocným, vyz^anící se tím, že se při ^^€^^01 cis-diamindichloridu plstnatého 0,1 až 1,0 kg/ml roztok stabilizuje přidáním kyseliny chlorovodíkové do pH 2,0 až 3,0, s výhodou 2,3 až 2,7 za příoomnosti netoxického, z farmaceutického hlediska přijatenného anorganického zdroje chloridových iontů v ekvivalentní 1 - až 20 mg/ml chloridu sodného a za přítomiooti nétoxického, z farmaceutického hlediska neškodného nosiče v konce^^ci 2 až 150 вд/m.,
2. Způsob podle bodu 1, vyzunanící se tím, že se roztok stabilizuje do pH 2,5.
3. Způsob podle bodu 2, vyz^anící se tím, že se užije 1,0 mg/ml cis-diamindichlori- du platnatého.
4. Způsob podle bodů 1 až 3, vyвдaaužící se tím, že se jako nosiče užije m^annitoíu v množtví 10 m/mi.