CS220315B2 - Method of producing bacterial cells - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu výroby bakteriálních buněk s vysokým podílem bílkovin a s obsahem tuků, uhlohydrátů a vitaminů. Větší množství této bakteriální hmoty je možno užít jako základ pro krmivá a potravinářské výrobky.

Jsou známy metody pro výrobu bakteriálnfc^{h b}un^ěk z baktenátomh kmenů ^kter^é rostou na methanolu jako na jediném zdroji u^hlíku. T^yto způso^by ve^dou často k zfetorn produktů, které obsahují barviva, sliz nebo nežádoucí bakteriální zásobní látky, napří^kla^{d ky}selrnu ^tyhytooxymásetoou. VHvem těchto látek je silně ovlivněna použitelnost bakteriální hmoty jako krmivá nebo potravinářského výrobku. Ve většině případů zamezuje chuť, v^ůně ne^bo toxňké vtestnosti p^řída^tnýc^{h lát}ek vynziU ^^^T^tei^riúln^{í h}mot^y jako krmivá nebo v potravinářství.

V publikaci M. Dostálek, L. Hággstrom a N. Molin: Optimization of Biomass Production from Methanol, Proč. IV IFS: Ferment. Technol Today str. 497—501 (1972) se popisuje výroba bakteriální hmoty z methanolu pěstováním mikroorganismu Methylomonas methanolica. Optimální růstová teplota pro tento druh bakterií je 30 °C, optimální koncentrace methanolu je 0,4 až 0,7 objemových %. Ttoto z^půso^bem je motoo ^dosáhnout maximální produktivity 2,5 g na 1 litr za hodinu.

V publikaci L. Hággstrom: Methanol Utilizing Bacteria for Single-Cell Production, (Disertace), Chemical Center, Technical Microtook University o^f Lund Švédsko je popsána pn ^prov^áděm o^bdo^bn^ého ^postu^pu při kultivaci Methylomonas methanolica s použitím methanolu jako zdroje uhlíku produktivita 2,63 g na 1 litr za hodinu. Příčinou tohoto stoupnutí je použití dokonalejšího živného prostřed. Ana^lýza pro^duktu vzlňedem ^k o^bsahu bílkovin, esenciálních aminokyselin, nu^kleovýc^{h ky}selrn a ^tu^ků nen^í uvedena.

Nyní bylo zjištěno, že je k uvedenému účelu možno použít nový kmen čeledi Methylomonas, který využívá jako zdroj uhlíku methanol, methan nebo dimethylamin. Tento kmen byl označen jako Methylomonas clara FH-B-5460 a byl uložen ve veřejné sbírce Američan Type Culture Collection pod označením ATCC 31226. ,

Předmětem vynálezu je tedy způsob výroby bakteriálních buněk v průmyslovém měřítku pěstováním bakterií čeledi Methylomonas za aerobních podmínek v živném prostředí, obsahujícím jako zdroj uhlíku methanol a mimoto zdroj dusíku a minerální soli, v^načupm se tím^ že se tokivace ^prová^dí při použití kmene Methylomonas clara ATCC ^{31226, k}oncen^trace metoanolu se udržuje v rozmez^{í 5} až ¹⁵⁰ ppm^, vzta^ženo na celtovou hmotnost živného prostředí při teplotě 30 až 42 °C za provzdušňování 0,1 až 1,5 litru vz^duc^hu na ^{1 lit}r ^živn^ého ^prost^ře^dí za minutu při pH v rozmezí 4,0 až 9,0, načež se bakteriální buněčná hmota oddělí, promyje se vodou a usuší, .

Způsob podle vynálezu se provádí v dobře provz^du^šn^ěných ^fermentorec^h s živný^m prostředím, které obsahuje methanol jako jediný zdroj uhlíku a mimoto soli jako dusičnan ^draselný^, síran amonný^{, f}osfore^čnan amonný nebo amoniak jako zdroje dusíku. Mimoto obsahuje živné prostředí fosforečnany, například dihydrofosforečnan draselný nebo hydrofosforečnan sodný a soli horečnaté a draselné, dále stopové prvky, například ty, které se běžně vys^ⁱ^itují v pitné vodě a také soh ^že^leznaté^, mMnaté a soh motytoenu.

Způsob podle vynálezu se provádí při teplotě 30 až 42 cc, s výhodou 35 až 39 °C.

Způsob podle vynálezu se provádí ve známých fermentorech, které je možno provzdušňovat, a to diskontinuálně nebo kontinuálně, popřípadě za použití moderních fermentorů, například šnekovitých reaktorů.

Kapané živné prostředí ve fermentačních nádobách se provzdušňuje 0,1 · až 1,5 litry vzduchu na 1 litr živného prostředí za minuto (1/1/min).

Požadovaná koncentrace methanolu se upravuje kontinuálně různým způsobem, například měřením spotřeby dusíku, podílu bakteriálních buněk v suspenzi nebo s vý^hodou m^ernm vyučovaného ^kys^ličn^íku uhličitého, tímto způsobem je možno přesně řídit přidávání methanolu při rychlé reakci na nedostatek uhlíku při zjištění klesajícího^ množství vylučovaného kysličníku uhličitého. Tento způsob úpravy má velikou výhodu' ta^{ké při p}oužit^í m^ěřen^í p^lynn^ého- methanolu plamenovým ionizačním detektorem.

Fermentační suspenze, která se skládá ze živného prostředí ' a rostoucí bakteriální hmoty má pH v rozmezí 4,0 až 9,0, s výhodou v rozmezí ' 6,0 až 7,2. V případě, že dojde ^{k p}o^klesu ^pH živnulo ^pros^tře^{dí p}od uvedenou hodnotu, je nutno dodat odpovídající množství zásady, například hydroxidu sodného nebo draselného. Příliš vysoké pH se upravuje přidáním kyseliny, například ' ^kyselrny ctoorovoéítové neto sírové

Oddělení hmoty bakteriálních buněk se ^provád^{í b}ěžným z^působem^, napnMad o^dstoe^mm s n^ohtonásotoým proutím vodou. K tomuto účelu je možno užít _ přístroje, sloužící k dekantaci a dělení fermentačnílio· prostředí. Tímto způsobem se získá pastovitá bakteriální hmota, která obsahuje jest^{ě 75} a^ž 90 ^hmotnostrnc^h % vody.

Bušem je motoo ^prov^ádět r^ůzným způsobem^, například vákovrnňm, sušemm ve flrndizační vrstvě neto rozstntovámm. Tatoo usušený ^produ^kt olbsalhuje ¹ až ' 4 ^hmotn^ostní % vo^dy a ⁸⁰ až ^{90 h}m^tnostn^íc^h % surové bíltovin^ V ^této surov^{é bíl}tovmě too^ří 7⁵ až ^{78 h}motnostrnch °/o aminokyseUna. Podíl es^encíalmch aminoltysehn je ^přibližn^{ě 50} hmotnostmi · % ’ celtového o^bsahu amino!k^yselm. ^Obsah ^kyselrn nu^eových tuků a uhlovodíků ve výsledném produktu je nízký. Obsah nuk^leovýc^{h ky}selm je ¹⁰ _ až ¹⁴ hmotnostních °/o, obsah tuků 5 až 10 ·hm-ot.nostních % a o^bsa^h uh^loh^ydrá^{tů 5} a^{ž 10 h}motnostmc^h °/o.

Zvláště výhodná je skutečnost, že bakteriální hmota, získaná způsobem podle vyn^álezu, neobsahuje ^žádné ^pigmen^ty, toxtóké látky, zásobní látky jako sliz nebo· kyselinu polyhydroxymáselnou, rušící látky s nepříjemným zápachem nebo sekundární metabolity.

Suchá bakteriální hmota, získaná způso^bem ^po^dle vytálezu, je ^proto zv^láště vho^dná jako zdroj bítkovm · pro potravm^ářske výrobky a krmivá.

Nový kmen Methylomonas clara FH-B-5460 ATCC 31226 má následující vlastnosti:

I. Růstové vlastnosti

a] K růstu nedochází na agaru s glukózou nebo jiném živném prostředí s glukóizou, na agaru s masovým bujónem nebo· na jiném prostředí s masovým bujónem, na želatině, na agaru nebo jiném živném prostředí s obsahem peptonu, na lakmusovém mléku ani na živných prostředích s bramborem nebo aminokyselinami.

bj ^K růstu dochtó na s^yntetic^kých živných prostředích s obsahem methanolu.

II. Morfologie

a] Jde o krátké tyčinky rozměru 0,5 až 1,5 jam, pohyblivé pomocí polárního bičíku, spory se netvoří, vytváří se cysty.

b] ^Kolonie jsou ^kru^hové^{, p}r^ůhledné^, slabě lesklé.

c] Pigment se nevytváří.

III. Fyziologie

a) Růst při:

°C +, °C +, °C °C + ++, °C ++++, °C +++, °C +.

Optimální růstová teplota: 37 °C Optimální pH: 6,8 až 7,0.

Organismus je gram-negativní.

b) Růstové faktory nejsou nutné

c] ^Růstov^é podmín^ky

Tvorba kyseliny polyhydroxymáselné —

Tvorba indolu—

Tvorba acetonu—

Redukce · dusičnanu+ cytochromoxidáza + kataláza

Isocitrátdehydrogenáza+ malátdehydrogenáza+ oxidáza+

Tvorba sirovodíku— zkapalnění želatiny— h^ydrolýiza ^škro^bu— tvorba kyseliny citrónové— koagulace mléka—

Růst na amonných solích+ močovině— acetátu— dimethylaminu+ trimethylaminu— mono.methylaminu— mraven^čenu— formaldehydu— cukrech nebo polysacharidech— alkoholech s výjimkou methanolu — fixace dusíku+ fixace k^ysličn^íku uhhmtého+

Ostatní typy Methylomonas a další mikroorganismy · využívající methanol jsou popsány v publikaci Bergey‘s ^M^nua^l of Determinative Bacterology,. 8. vydání, Williams a Wilkens company, Baltimore 1974 a mimoto jsou použitelné kmeny popsány v dalších různýc^h puMfkacmři. ^sledujmí I ukazuje dosavadní stav znalostí o těchto kmenech a současím t^yto kmeny srovná s charakteristickými vlastnostmi nového kmene ^Met^hylomonas clara. Jak je z taMlky zřejmý l^iší se od sebe jednotil ty^pu Pseudomonas tvorbou kyseliny polyhydroxymáselné a tím, že nerostou na methanu nebo dimet^hylamrnu ja^ko nový · ^kmen. ^Zn^ámé typy ^Met^hylomonas se ^liší od nového ^kmenu ta^ké optimum teptotou pro tyortou pigmentu, tvorbou kyseliny polyhydroxymáselné a svým kotovtiým Warem. Dal^m důležitým rozdílem mezi novým kmenem a zná^mými kmeny je meta^bolismus hexulcizofos fátu. Tento metabolismus je u nového kmene energicky příznivější než serinová cesta využití methanolu.

V následující tabulce znamená na konci prvního sloupce výraz G + G (%} podti ^guaninu a c^ytosinu v celkov^ém o^bsa'hu py rimidinových zásad.

Ve sloupci 2 jsou uvedeny charakteristické vlastnosti nového kmene Methylomonas clara ATCC 31226.

Ve sloupcích 3 až 7 a 11 jsou uvedeny vlastnosti izznámýcb kmenů, popsané podle puMikace Bergey‘s Manual oř Determinative Bacteriolog^ ⁸. vy^dám, I^{974, T}he ^Williams a Wtikens Com^pany (Baltimore).

Ve sloupcích 8 až 11 jsou uvedeny vlastnosti kmenů, které byly popsány v jednotlivých dal^ších ^M^acmh. Jde zejm^éna o Pseudomonas methanohca, popsaný v U^S patentu č. 3 755 082, Pseudomonas · AM 1, po^psaný v J. Bact ¹¹⁴ (lú ³⁹⁰ (W73) a ^pseudomonas meth^ylolropa^{, p}op.saný v D°^S č. 2 161 164.

I +

+

CD oo

CD еэщищаш suuouioiÁmaw

ВЦЙОДОМЩЭШ ‘SJ pjV SBiiouiopnasd еэцоивщаш 'SJ susÁooiÁqjaui snuisoiÁqiajM snaTjBiEscfeo

ЕпэзоэоуЛщаэд >> ла .s Й >>

>>

o

-4TABULKA

LÍD suBOijuituoiiBqjaui

SEuom-cqÁqiaiAi

CM

X >>

g >ω >>

£ивртхооиец;аш suuomoiÁqiaw co

X >>

' .5 >o >4 книвщаш явиошсцАщадо o r-í

X CD θ’ >>

.s >3 s^· o

CM

9ZZT£ ODIV og^s-a-Hd bjbio sBuouioiÁiuapí

LÍD x

LÍD

CD

4->

G φ

Ctí O s 'Ctí

G >ω >ω

G G £>

		4~>	E
> 4-»		cn O >	5? ’Зч		(D CD	Ф CD Ctí
C/3 o Λ1	Í-H	rH 4D >> rG	ctí DD и	ω PQ	cd X <H4	X éG Ol
>	Ctí > •W	0 P<	O > H	Я . P<	Ol z	o ω

o 0^ 00

F ř-l TJ tSq

O ctí co o z o

o ctí

O r—<

Оч

CD*

G Й s

4—· Λ O ω <α ^4

CD 'Ctí G

CD СЛ >>

Л1

O

G β ctí ctí

G o G ctí Λ 4—> Φ β

Q o

Ό

N

O

Ctí ω

ο t-l Ό

N Ο ctí

G ctí Д

4—> CD fi

O

S см TJ

N

O _tctí

O

G ctí Л 4—* ω

Ctí

4—*

СЛ Ф O гн вэщищаш

ЕвиошсцХщарм

с\Г ю сп х p\[v suuouiopnosa со езцоиищэш ‘sj

I sijsÁooiÁmaui snuisofÁiusiAj

snoueiBsdPO srmoooiÁqiepj

8иезццлиоииц;аш sBuomoiÁqtoiM suepixoouuinom ευιιοιιιοιΧφθίΛΐ вэщвщэш δΒΐιοιιιοιλιμθΐΜ эггте ODIV

09F9-9-HJ EJBIO oj suuomoiÁp;apM

Příklad 1

Kmen Methylomonas clara FH-B-5460 ATCC

226 se udržuje ve zkumavkách se šikmým agarem následujícího složení:

agar	18 g
H3PO4 85%	2,0 ml
NH4OH 12%	3,0 ml
NazHPOk	0,01 g
H2SO4	1,2 g
MgSO4.7H2O	0,8 g
FeSC4.7HžO	0,03 g
methanol (přidání před plněním zkumavek)	10,0 ml

roztok stopových prvků* ) 1,0 ml voda 1 litr pH před sterilizací 6,7

*) obsahuje CuSO3, НзВСЗ, МпЗД^ . ZoSO^

NazMoCh

Zkumavky se šikmým agarem uvedeného stojní se zahnvaj^{í 30} minut v autoMávu na ¹²⁰ °C. Pak se zkumav^ky očkuj^{í M}et^hytomonas clara a nechají stát 2 dny při 37 °C. Vždy ze dvou zkumavek se smyje buněčná hmota 10 ml fyziologického roztoku kuchyňské soli a suspenze se užije k naočkování dalšího stupně.

Tímto stupněm je třepací kultura (předběžná kultura), k níž se užijí Erlenmeyerovy baňky o obsahu 2 litry s obsahem 1 litru živného roztoku svrchu uvedeného složení bez agaru s přídavkem 3,3 ml methanolu, sterilizovaného filtrací. Tato kultura se udržuje 3 dny při teplotě 37 °C na třepačkách při 220 otáčkách za minutu a při výkyvu 4 cm. Po 24 až 48 hodinách se přidá vždy 3,3 ml methanolu.

Následující stupeň (redukční kultura) se provádí ve fermentorech o objemu 25 litrů s obsahem ²0 htr^ů živn^ého ^prostře^dí svrchu uvedeného, složení, avšak bez methanolu a bez agaru. Po sterilizaci 30 minut při te^plotě ¹²⁰ °C a Uaku 1,2.1°⁵ a^ž 1,4.10^{5 p}a se fermentor očkuje 2 litry předběžné kultury. Fermentační prostředí ve fermentoru opatřeném míchadlem, provzdušňovacím zařízením a třemi šikanami jsou tyto:

teplota37 °C provzdušňování 1⁰ Иtrů/minutu^{, 0,5} Wmin tlak 0,2.^{103 p}a počet otáček za minulm pH6,6

Methanol se přeloží v množsM ²⁰ ml· Vžd^y kd^yž obsah CO2 pomná ktesa^ p^řidá se dalších 20 ml methanolu. Koncentrace methanolu nern te^dy v^yšší -než ^0,1 objemových %.

Po 22 hodinách se 20 litrů suspenzze kultury přeočkuje do fermentoru o obsahu 200 litrů. Tento fermentor pracuje za ^tých^ž po^dmínek jako produkční kultura a je také stejně vybaven. Fermentační podmínky jsou tyto:

toptoto37 provzdu^šňovám 6—8 m³/hod^, 0^ až 0^,75/1/ /1/min ^tla^k 0,2.105 Pa otáčky za minutu380 ^pH6,7 ^Ho^dno^ta p^H se u^pravuje 10% vodným amo^moⁿⁱa^kem na ^6,7 až 6Д ^PNvod methanolu se řídí měřením koncentrace methanolu pomocí ^plamenov^ého ionizačního detektoru v odpadním p^lynp ^přičem^ž po ^poklesu ^methano^lu po^{d 50} p^pm se znovu ^přidá methanol do živného prostředí. Pří obsahu 600 ppm methanolu v odpadním plynu se nachází v ^živném rozto^ku 0^,22 % methanolu.

^Po 20 ho^din^ác^h fermentoce se oč^kuje další ^fermentor 2°⁰ htr^y suspenzní ^kultur^y z pře^dběžn^é fermentace. Tento fermentor obsahuje 2000 l^itr^{ů ži}vné^ho ^prostředí a ^pracuje za následujících podmínek:

teplota37 °C provzduš^ňov^án^í 60 ^— 80 т³/^ ^0,5 až 0^,75 1/11miú tlak 0,2 .- 1Ο³ Pa otáčky za minutu170

PH6,7

Přidání methanolu se provádí stejně jako v ^pře^dběžném ^fermentoru o obsahu 200 litrů. Koncentrace methanolu v živném prostředí se pohybuje v rozmezí 50 až 80 ppm. Po -22 ho^dinác^h fermentace se bakteriální buněčná limota oddělí tak že se ^pH živného prostře^dí u^praví přidáním zře^děné ^kyselin^y sírov^é na ^4,0 a bun^ná ^hmota se -odděluje v separátoru při 400 otáčkách za minutu. Buně^čnou hmotu je mo^žno -oddělit ta^ké při pH ^6,5 až 6Д Takto otidětoná bun^ěčná hmota s o^bsa^hem sušin^y 20 % .se ^prom^yje vodo^u a pak se dále zpracovává v separátoru až na o^bsah su^šin^y 2⁵ %. ^Pak se buněěná hmota suší rozstřikováním při vstupní teplotě 120 až 150 °C. Takto získaný prášek obsahuje je^ště ^1,5 až ^3,5 % vo^dy a mⁱmoto ^- následující složky:

(N x 6,25)

surová bílkovina			85	%
aminokyselina			74	%
z toho esenciální aminokyseliny			50	%
nukleové kyseliny	8	až	12	%
surový tuk	6	až	8	%
popeloviny	5	až	6	%
(jde o hmotnostní %).
Příklad 2

Kmen Methylomonas clara FH-B-5460 ATCC 31226 se pěstuje stejně jako v příkladě 1.

Hlavním fermentorem je fermentor o obsahu 3000 litrů pro kontinuální fermentaci se stálým provzdušňováním. - Pracuje za následujících podmínek:

teplota37 °C provzdušňování 80 Nm³/h,

0,67 1/1/min tlak 0,1.10⁵ Pa otáčky za minutu390 pH6,8

Fermentor se očkuje 200 litry suspenze z předběžného fermentoru. Obsahuje 2000 litrů živného roztoku, popsaného na začátku příkladu 1, avšak bez agaru. Koncentrace methanolu se měří svrchu uvédeným způsobem a řídí přidáváním směsi methanolu a vody v objemovém poměru 40 : 60 tak, aby střední koncentrace volného methanolu byla udržována v rozmezí 10 až 50 ppm.

Po vytvoření 7 až 10 kg buněčné hmoty/ /litr je možno změnit způsob na kontinuální.

Při průtokové rychlosti (D) 0,25/hodina se přidává živné prostředí. Tato hodnota po 12 hodinách zvýší na D = 0,33/hodina, což znamená 650 litrů/hodinu. Po této době se již upraví průtoková rovnováha. Střední hodnota volného methanolu se udržuje na 10 až 20 ppm. Odebírá se odpovídající množství živného prostředí, toto prostředí se udržuje ve vedlejším zásobníku bez přidání methanolu ještě 1 až 2 hodiny a pak se oddělí a suší buněčná hmota stejně jako v příkladu 1.

Buněčná hmota obsahuje 2 až 4 °/o vody a mimoto surovou bílkovinu (N x 6,25) 81 % aminokyseliny 70 % základní aminokyseliny 50 °/o celk. množ, nukleové kyseliny 8 až 10 % surový tuk 5 až 10 % popeloviny 5 až 10 %

Při kontinuálním provádění způsob podle vynálezu je produktivita 5 až 6 gramů bakteriální hmoty v jednom litru za hodinu. Při provádění po jednotlivých vsázkách je produktivita 25 až 30 gramů buněčné hmoty za hodinu v jednom litru.

Buněčná hmota, získaná z Methylomonas clara se s výhodou užívá jako přísada do krmných směsí к náhradě jiných bílkovinných zdrojů. V následující tabulce jsou uvedeny nejdůležitější vlastnosti tohoto nového zdroje bílkovin ve srovnání s běžnými zdroji. Buněčná hmota, získaná způsobem podle vynálezu, bude dále uváděna jako „bioprotein“.

TABULKA 1
Zdroj bílkovin	Podíl v % Aminokyseliny NPN Tuk Popel Uhlohydráty

Bioprotein		70	8—10	5—10	5-10	—
Rybí mouka		56	10	5	15	4
Sójový šrot		41	5	1	6	36
Sušené odstředěné mléko		35	—	—	8	50

Bioprotein podle vynálezu má velký obsah aminokyselin a poměrně nízký obsah nebílkovinného dusíku —NPN—, převážně nukleové kyseliny a neobsahuje uhlohydráty. Z aminokyselin má vysoký obsah lysinu a tryptofanu a poměrně nízký obsah methioninu a cystinu. Tyto okolnosti je třeba brát v úvahu při sestavování krmných směsí v závislosti na požadavcích jednotlivých živočišných druhů.

Bioprotein podle vynálezu je možno užít pro živočišné druhy, uvedené v následující tabulce 2 jako náhrada za jiné zdroje bílkovin v uvedených množstvích.

TABULKA 2

Živočich	Maximální množství bioproteinu na tunu	Bioprotein může nahradit v 1 tuně	Podíl bioproteinu v bílkovině krmivá (do 100 % známé zdroje)
Kuře	100	kg	160 kg sójový šrot	36% bioprotein
Nosnice	80	kg	145 kg sójový šrot	38% bioprotein
Slepice	50	kg	62 kg rybí mouka	18% bioprotein
Vepř	100	kg	160 kg sójový šrot	50% bioprotein
Tele	50	kg	114 kg suš. odstřed. mléko	17% bioprotein
Pstruh	250	kg	308 kg rybí mouka	44% bioprotein

Příkladem · úspěšného použití bioproteinu sledky krmných pokusů , tak jak jsou uvev krmných směsích místo určitého podílu děny v následupcí tabulce 33.

jiných bílkovinných zdrojů mohou být vý- .

TABULKA 3

Sojový šrot Bloprotein

1. Podíl v %

Základní krmivo:

obilí, minerální látky atd.	84,1	84,1
Variabilm složky v %
sójový šrot	15,9	—
bioprotein	—	10,0
krmivo k doplnění energie,
např. kukuřičný škrob		5,9
	100 %	100 %
2. Výsledky v %
Přírůstek	100	104,1
Spotřeba krmivá	100	104,3
Využitá krmivá	100	100,0

(^Spotre^ba lkrmwa/přnrnste^

Z výsledků uvedených pokusů je zřejmé, že bakteriální buněčná hmota, vyrobená způsobem podle vynálezu, se s výhodou užije v poměrně v^yso^kém množsM ja^ko zdroj bilkovrn v ^krmivu r^ůznýc^h žwo^ný^ druhů

Claims (2)

1. Způsob výroby bakteriálních buněk v pr^ům^ys^lov^ém meřítlxu pěstov^árnm bakteru čeledi Methylomonas za aerobních podmínek v živném prostředí obsahujícím jako zdroj uhlíku methanol a mimoto zdroj dusíku a minerální soli, vyznačující se tím, že se kultivace provádí při použití kmene Methylomonas clara ATCC 31226, koncentrace methanolu se udržuje v rozmezí 5 . až 150 ppnL vzta^ženo na cenovou ^hmotnost živn^é vynAlezu ho prostředí při teplotě 30 až 42 °C za provzdtóňování ^0,1 a^{ž 1,5} litru vzduc^hu na 1 litr živného prostředí za minutu při pH v rozmezí 4,0 až 9,0, načež se bakteriální bun^ěčna ^hmota oddělí, ^prom^yje se vodou a usuší.

2. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se pěstování provádí při koncentraci metanolu v rozmez^{í 10} a^{ž 50} p^pm^, vzteteno na celkovou hmotnost živného prostředí.