KR960004035B1

KR960004035B1 - 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법

Info

Publication number: KR960004035B1
Application number: KR1019920027566A
Authority: KR
Inventors: 길광훈; 손영선; 유명규; 이근철; 박종성
Original assignee: 제일제당주식회사; 김정순
Priority date: 1992-12-31
Filing date: 1992-12-31
Publication date: 1996-03-25
Also published as: KR940014773A

Abstract

내용 없음.

Description

세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C의 제조방법

본 발명은 세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C의 제조방법에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10679의 변이주로서 메티오닌 유사체인 D, L-셀레노메티오닌에 대해서 내성을 가지며 점도가 낮고 주성분이 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분, 콘스팁리커인 배지에서 배양시 세팔로스포린 C를 고농도로 생산할 수 있는 미생물에 관한 것이다.

종래 미생물을 이용하여 세팔로스포린 C를 생산하는 방법의 경우 배지에 첨가되는 D, L-메티오닌이 차지하는 비용이 전체 배지비용의 10%정도로 매우 높고 발효가 진행됨에 따라 배양액의 점도가 과도하게 상승되어 산소와 영양분의 물질전달속도가 감소하여 세팔로스포린 C의 생산성이 저하되는 문제점이 있었다.

본 발명자 등은 상기 지적된 문제점을 제거하기 위해서 세포내 메타오닌 생합성을 억제하여 생육을 저해하는 D, L-셀레노메티오닌, 에티오닌, 트리플루오로메타오닌 등의 메티오닌 유사체에 내성을 가지는 변이주들 중에서 배지중에 함유되어 있는 설페이트(SO₄ ^-2)를 이용하여 균체내에서 설페이트 리덕션 경로를 거쳐 메티오닌을 다량 합성함으로서 메티오닌을 배지중에 첨가하지 않고서도 세팔로스포린 C를 고농도로 생산할 수 있고 동시에 배양액의 점도가 크게 감소하는 미생물을 획득하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 미생물, 즉 D, L-셀레노메티오닌 내성주 세팔로스포리움 아크레모니움 CRC 0901은 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10679를 친주로 하여 자외선 조사, N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘(NTG)등의 변이 유발제로 통상적인 방법에 따라 처리한 후 D, L-셀레노메티오닌이 1-30㎍/㎖의 농도로 함유되어 있는 액체 또는 한천배지(포도당 10g/L, 아스파라긴 1g/L, 황산마그네슘 0.5g/L, 인산제 1 칼륨 0.5g/L, 인산제 2 칼륨 1g/L, pH 7.0)에서 7-10일간 배양하였다. 이때 대부분의 균주들은 D, L-셀레노메티오닌의 농도가 높아 생육할 수 없으며 메티오닌 유사체에 대해 내성이 높은 균주는 생육이 가능하므로 친주에 비해 메티오닌 유사체의 최소저해농도(Minimum Inhibitory Concentration : MIC)가 40%이상 되는 변이주를 얻을 수 있었고, 이 내성주들 중에서 메티오닌의 첨가없이 세팔로스포린 C를 고농도로 생산할 수 있으며 배양액의 점도가 친주의 그것에 비해 20%정도 밖에 안되는 세팔로스포리움 아크레모니윰 CPC 0901을 선별하여 한국종균협회에 기탁하였다(기탁번호 KFCC 10782, 1992년 11월 3일 기탁). 상기 균주들의 균학적 성질은 중금속이온 내성 및 세팔로스포린 C 생산성을 제외하고는 친주의 그것과 동일하다.

미생물의 특성은 다음의 표에 기재된 바와 같다.

[표 1] D, L-셀레노메티오닌 농도에 대한 내성비교

＜주＞ 사용배지 ; 한천배지

+ ; 생육, - ; 생육치 못함.

[표 2] D, L-메티오닌 농도에 대한 세팔로스포린 C 생성비교

〈주〉 세팔로스포린 C 생성확인은 발효배지를 500ml 용량의 배양용 삼각플라스크에 22ml 분주하고 살균후 종균을 식균하여 25℃에서 230rpm으로 7일간 진탕배양하였다.

[표 3] 형태학적 비교

[표 4] 겉보기 점도비교

〈주〉 점도비교는 발효배지를 30ℓ용량의 시험용 발효조에 19.4ℓ 분주하고 살균후 1.6ℓ접종하여 25-30℃에서 300-600rpm으로 6일간 배양하였다. 점도측정은 부룩필드 점도계 DV-2를 이용하여 디스크 스핀들 No.2로 10rpm에서 하였다.

이하 실시예에 의해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다.

[실시예 1]

· 사용균주 : 본 발명 미생물(KFCC 10782)

· 1차 종배지 : 대두분 3.0%, 콘스팁리커 0.75%, 설탕 2.5%, 포도당 1.0%, 탄산칼슘 0.5%, 소포제 0.15%, pH 7.0

· 2차 종배지 : 대두분 3.0%, 땅콩분 3.0%, 콘스팁리커 1.5%, 설탕 2.5%, 포도당 1.0%, 탄산칼슘 0.5%, 소포제 0.15%, pH 6.9

· 발효배지 : 이성화액당 4.5%, 혼합오일 7.0%, 땅콩분 2.5%, 콘스팁리커 3.5%, 콘밀 1.5%, 글루텐밀 3.0%, D, L-메티오닌 0.75%, 황산칼슘 1.0%, 탄산칼슘 2.5%, 소포제 0.1%, pH 6.9

· 1차 종배양 : 1차 종배지를 50ml 씩 500ml용량의 진탕용 삼각플라스크에 넣고 살균후 균주를 식균하여 30℃에서 220rpm으로 90-96시간 진탕배양 하였다.

· 2차 종배양 : 2차 종배지를 7ℓ용량의 시험용 발효조에서 각 5ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균, 냉각후 1차 종배양에서 얻은 배양 완료액을 15㎖씩 접종한 다음, 공기를 매분당 0.5-1.0ℓ 공급하면서 600-900rpm으로 30℃에서 80-90시간 배양하였다.

· 발효방법 : 상기 발효배지를 30ℓ용량의 시험용 발효조에 19.4ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균, 냉각하여 2차 종배양액을 1.6ℓ씩 접종한 후 공기를 매분당 0.5-1.0ℓ씩 공급하면서 300-600rpm, 25-30℃로 배양하였다. 배양중 잔존 혼합오일 농도고 4-5%가 되면 살균된 혼합오일을 수시로 공급하였다.

추가된 혼합오일과 초기에 발효배지에 첨가된 혼합오일의 합계가 발효액량 대비 12-17%가 될 때까지 계속 배양하였다. 배양중 pH는 암노니아수를 사용하여 5.0-6.0으로 조절하였다.

배양완료후 세팔로스포린 C의 농도는 KFCC 10679RK 35.8g/L, KFCC 10782가 41.2g/L이었다.

Claims

메티오닌 유사체인 D, L-셀레노메티오닌의 농도가 7㎍/ml 이상인 조건에서도 생육이 가능하고 배양액의 점도가 낮은 세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 세팔로스포리움 아크레모니움 CRC 0901(KFCC 10782).
제 1 항의 세팔로스포리움 아크레모니움 CRC 0901(KFCC 10782)을 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분, 콘스팁리커 등이 함유된 배지에서 배양하여 세팔로스포린 C를 채취하는 것을 특징으로 하는 세팔로스포린 C의 제조방법.