DK165124B - Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse Download PDFInfo
- Publication number
- DK165124B DK165124B DK125387A DK125387A DK165124B DK 165124 B DK165124 B DK 165124B DK 125387 A DK125387 A DK 125387A DK 125387 A DK125387 A DK 125387A DK 165124 B DK165124 B DK 165124B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- compound
- formula
- acid
- microorganism
- streptomyces
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/445—The saccharide radical is condensed with a heterocyclic radical, e.g. everninomycin, papulacandin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Iron Core Of Rotating Electric Machines (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
Description
DK 165124 B
Den foreliggende opfindelse angår en særlig og hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af en antibiotisk 5-hydroxy-S541-macrolid-forbindelse ved dyrkning af Streptomyces-mikroorganismer. Britisk patentskrift nr. 2166436 og europæisk patentskrift nr. 170006 beskri-5 ver fremstilling af en klasse af forbindelser, som ansøgerne har betegnet antibiotika S541. Antibiotika S541-substanser har antibiotisk og især anti-endoparasitisk, anti-ectoparasitisk, anti-fungal, insekticid, nematicid og acaricid virkning og er af særlig interesse til anvendelse i landbrug, havebrug og dyre- og menneskesundhedsvæsen.
10 Antibiotika S541-substanser er også nyttige som mellemprodukter ved fremstilling af andre forbindelser, som har den antibiotiske virkning, hvortil der henvises ovenfor.
En antibiotika S541-forbindelse af særlig interesse er forbindelsen med formlen (I) 15
OH
CH3 .Αχ. CHs A/v a H 1^^ ^0 H CH(CH9)2 (I) "nr*
OH
Britisk patentskrift nr. 2166436 og europæisk patentskrift nr. 170006 beskriver fremstilling af forbindelsen med formlen (I) og andre antibiotika S541-forbindelser ved dyrkning af mikroorganismer tilhørende 20 slægten Streptomyces. Under de normale dyrkningsbetingelser beskrevet i disse patentskrifter danner Streptomyces-mikroorganismerne en blanding af forskellige antibiotika S541-forbindelser. Dette giver anledning til to problemer, når der ønskes en specifik antibiotika S541-
DK 165124B
2 forbindelse. For det første opnås generelt en relativt lav koncentration af den ønskede antibiotika S541-forbindelse, og for det andet er isolering og adskillelse af den ønskede forbindelse vanskelig fra en blanding af beslægtede forbindelser.
5 Ansøgerne har nu fundet, at det er muligt at dyrke en antibiotika S541-dannende Streptomyces- stamme på en sådan måde, at mikroorganismen producerer forbindelsen med formlen (I) ovenfor i en højere andel i forhold til andre antibiotika S541-forbindelser end i det tilfælde, hvor mikroorganismen fermenteres under normale fermenta-10 tionsbetingelser. Forbedringen opnås ved at dyrke S trep tomyces-mikroorganismen i nærværelse af én eller flere fedtsyrer og/eller salte deraf. På denne måde forøges koncentrationen af forbindelsen med formlen (I) , og isoleringen og adskillelsen af forbindelsen med formlen (I) gøres lettere, og der fås fordelagtigt højere udbytter af 15 den således vundne forbindelse.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af en forbindelse med formlen (I) er en sådan, ved hvilken en mikroorganisme af slægten Streptomyces, som er i stand til at danne forbindelsen med formlen (I), dyrkes, hvorved forbindelsen med formlen (I) dannes, hvorefter 20 forbindelsen om ønsket isoleres, og fremgangsmåden er ejendommelig ved, at dyrkningen sker i nærværelse af én eller flere ¢3,3-fedtsyrer og/eller salte af disse syrer.
Mikroorganismer, som er i stand til at producere forbindelsen med formlen (I), kan let identificeres under anvendelse af en test i be-25 kvemt lille skala, i hvilken test nematoden caenorhabd.itis elegans anvendes, fx ved at sætte en testprøve (opnået ud fra fermentation af mikroorganismen) til en suspension af nematoden og undersøge den deraf følgende virkning på nematode-levedygtighed, samt ved analytisk høj tryksvæske-chromatografi af testprøven.
30 Mikroorganismen vil fortrinsvis være af arten Streptomyces thermo-archaensis eller Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus, især Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 (deponeret 10. september 1984), Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12111, 12112, 12113 eller 12114 (alle deponeret 26. juni 1985) eller Streptomyces cyaneogriseus 3
DK 165124 B
noncyanogenus NRRL 15773 (deponeret 3. maj 1984) eller mutanter deraf med i det væsentlige samme egenskaber.
Mutanterne af de ovennævnte stammer kan opstå spontant eller kan dannes ved en række metoder inklusive dem, der er skitseret i Tech-5 niques for Che Development of Micro-organisms af Η.I. Adler i "Radiation and Radioisotopes for industrial Microorganisms", Proceedings of the Symposium, Wien 1973, s. 241, International Atomic Energy Authority. Sådanne metoder omfatter ioniserende stråling, kemiske metoder, fx behandling med N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG); varme; 10 genetiske teknikker såsom rekombination, transduktion, transformation, lysogenisation og lysogen konvertering, og selektive teknikker til spontane mutanter og mutanter af alle disse stammer.
Særligt egnede fedtsyrer, som kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er isosmørsyre og valerianesyre.
15 Den foreliggende opfindelse angår således i et foretrukket aspekt en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelsen med formlen (I), ved hvilken fremgangsmåde en mikroorganisme af slægten Streptomyces, som er i stand til at producere forbindelsen med formlen (I), dyrkes, hvorved forbindelsen med formlen (I) dannes, hvorefter forbindelsen 20 om ønsket isoleres, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at dyrkningen sker i nærværelse af én eller flere forbindelser valgt blandt isosmørsyre, valerianesyre og saltene af disse syrer.
Eksempler på egnede salte af fedtsyrerne omfatter alkalimetalsalte såsom kalium- eller natriumsalte.
25 Opfinderne har fundet det fordelagtigt at udføre fremgangsmåden ifølge opfindelsen i nærværelse af to fedtsyrer eller salte deraf.
Anvendelse af begge syrer eller deres salte i samme fermentation giver forbindelsen med formlen (I) i et ønsket højt forhold sammenlignet med andre antibiotika S541-forbindelser. Et særlig foretrukket 30 aspekt af opfindelsen angår således en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formlen (I), ved hvilken fremgangsmåde en mikroorganisme af slægten Streptomyces, som er i stand til at producere
DK 165124B
4 forbindelsen med formlen (I), dyrkes i nærværelse af to fedtsyrer eller salte deraf, hvorved forbindelsen med formlen (I) dannes.
Opfinderne har fundet, at det er specielt fordelagtigt at anvende isosmørsyre og valerianesyre eller salte deraf..Anvendelse af begge 5 syrer eller deres salte i samme fermentation giver forbindelsen med formlen (I) i et ønsket højt forhold sammenlignet med andre antibiotika S541-forbindelser. Et specielt aspekt af opfindelsen angår således en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formlen (I), ved hvilken fremgangsmåde en mikroorganisme af slægten 10 Streptomyces, som er i stand til at producere forbindelsen med form len (I), dyrkes i nærværelse af isosmørsyre eller et salt deraf og valerianesyre eller et salt deraf, hvorved forbindelsen med formlen (I) dannes.
Hvis der sættes mere end én fedtsyresubstans til fermentationen, kan 15 fedtsyresubstanserne tilsættes sammen i et fast forhold eller, fortrinsvis, uafhængigt af hinanden. Forholdet kan ændres under dyrkningen efter ønske, enten ved at holde mængden af en substans konstant og ændre mængden af den anden eller ved at ændre mængderne af begge substanser. De præcise mængder må bestemmes empirisk for at 20 tilfredsstille kravene til dyrkningen. Det dyrkningsmedium, der anvendes til dyrkning af mikroorganismen, som producerer forbindelsen med formlen (I), er det medium, som normalt ville være blevet anvendt til fremstilling af den nævnte forbindelse, men med fedtsyren/-syrerne eller saltene deraf tilsat.
25 I almindelighed kan fedtsyresubstansen/-substanserne tilsættes på et hvilket som helst tidspunkt under dyrkningen af mikroorganismen. Opfinderne har imidlertid fundet det fordelagtigt at begynde tilsætning af substansen/substanserne, når dyrkningsmediets pH-værdi begynder at ændres væk fra den naturlige pH-værdi på omkring 5,5-7,5, og/eller 30 når mikroorganismerne begynder at danne forbindelsen med formlen (I).
Dette kan i almindelighed ske omkring 18 timer inde i dyrkningen. På dette tidspunkt tilsættes fedtsyresubstansen/substanseme for at regulere pH til det ønskede niveau (d.v.s. omkring pH 5,5-7,5, fx pH 7,3-7,4). Den samme eller en anden fedtsyresubstans/ substanser kan 35 derefter tilsættes under hele resten af fermentationen for at holde
DK 165124B
5 pH på det ønskede niveau. Alternativt kan fedtsyresubstansen/-substanserne tilsættes med en fast hastighed under resten af fermentationen sammen med en vandig syre (fx svovlsyre) eller en base (fx natriumhydroxid) tilsat efter behov for at holde pH på det ønskede 5 niveau. Den nødvendige mængde fedtsyresubstans/-substanser vil variere over et bredt område afhængigt af arten af dyrkningsmediet og den anvendte Streptomyces-stamme og må i almindelighed bestemmes empirisk for at møde hver dyrknings krav. Det er også vigtigt empirisk at bestemme, hvorvidt det er nødvendigt at have en akkumulering af fedt-10 syresubstansen/-substanserne i mediet. Opfinderne har imidlertid fundet, at det kan være at foretrække at undgå tilsætning af fedtsyresubstansen/-substanserne i en mængde, som tillader akkumulering at finde sted, når fermentationen udføres under anvendelse af mikroorganismer af arterne Streptomyces thermoarchaensis eller Streptomy-15 ces cyaneogriseus noncyanogenus.
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil dyrkningsmediet i almindelighed indeholde andre assimilerbare kilder for carbon, nitrogen og mineralsalte ud over den/de ovenfor diskuterede fedtsyresubstans/-- substanser. Egnede kilder til carbon, nitrogen og mineralsalte er 20 diskuteret i britisk patentskrift nr. 2166436 og europæisk patentskrift nr. 170006.
Dyrkning af Streptomyces-organismen vil i almindelighed blive udført i overensstemmelse med metoderne beskrevet i britisk patentskrift nr.
2166436 og, hvis det ønskes, kan forbindelsen med formlen (I) skilles 25 fra hele fermentationen ved konventionelle isolerings- og separationsteknikker som beskrevet i ovennævnte britiske og europæiske patentskrifter. Britisk patentskrift nr. 2166436 og europæisk patent-skrift nr. 170006 beskriver også egnede metoder til oprensning af forbindelsen med formlen (I).
30 Opfindelsen illustreres ved følgende eksempler. I nedenstående eksempler betegner L liter.
DK 165124B
6 EKSEMPEL 1
Sporer af StrepComyces thermoarchaensis NCIB 12015 blev inokuleret på skråagar fremstillet ud fra følgende bestanddele: gL'1 5 Gærekstrakt (Oxoid® L21) 0,5
Maltekstrakt (Oxoid® L39) 30,0
Mykologisk pepton (Oxoid® L40) 5,0
Agar nr. 3 (Oxoid® L13) 15,0 .
Destilleret vand op til 1 L, pH ca. 5,4, 10 og inkuberet ved 28°C i 10 dage. Den modnede skråagar blev derefter dækket med 6 ml af en 20% glycerol-opløsning og skrabet med et sterilt værktøj for at løsne sporerne og myceliet. 0,4 ml af den resulterende spore-suspension blev anvendt til at inokulere en 250 ml Erlenmeyer kolbe indeholdende medium A: 15 Medium A gL~±
Glukose 2,5
Malt Dextrin MD 30E 25,0
Arkasoy™ 50 12,5
Melasse 1,5 20 K2HP04 0,125
CaC03 1,25 3-(N-morpholino)propansulfonsyre (MOPS) 21,0
Destilleret vand op til 1 L, pH justeret til pH 6,5 inden autoklavering.
25 Kulturen blev inkuberet ved 28°C i 2 dage på en rotationsryster, der kørte ved 250 omdr./min. med en orbital bevægelse med en diameter på 50 mm. 2% (volumen/volumen) portioner af det i 2 dage udviklede in-okulum blev anvendt til at inokulere yderligere 250 ml Erlenmeyer-kolber indeholdende 50 ml medium A og inkuberet som beskrevet tidli-30 gere.
7
DK 165124 B
80 ml af det samlede rysteflaskeudviklede inokulum blev anvendt til at inokulere en 7-liters fermenter indeholdende medium B (4 L):
Medium B gL~^
Glukose 3,75 5 Malt Dextrin MD 30E 37,5
Arkasoy“ 50 18,8
Melasse 2,25 K2HP04 0,188
CaC03 1,88 10 pH justeret til pH 6,5 inden autoklavering.
Fermentationerne blev reguleret til en temperatur på 35°C. Kulturen blev omrørt ved 500 omdr./min. og blev luftet med 3 L/min. For at forhindre pH i at stige over pH 7,2-7,4 blev pH reguleret enten ved tilsætning af: 15 (i) 10% H2SO4 (ifølge metoden beskrevet i eksempel 5 i britisk pa tentskrift nr. 2166436). 80 ml 10% H2SO4 anvendt til pH-regulering og høstet efter 114 timer.
(ii) 50/50 valerianesyre/isosmørsyre 110 ml 50/50 valerianesyre/isosmørsyre blev anvendt til pH-regulering 20 fra 18-138 timer, d.v.s. et gennemsnit på 2,75 g valerianesyre blev anvendt pr. liter pr. dag. På lignende måde blev der anvendt et gennemsnit på 2,75 g isosmørsyre pr. liter pr. dag.
(iii) 40/60 valerianesyre/isosmørsyre 25 115 ml 40/60 valerianesyre/isosmørsyre anvendt til pH-regulering fra 18-138 timer, d.v.s. der blev anvendt et gennemsnit på 2,3 g valerianesyre pr. liter pr. dag og et gennemsnit på 3,45 g isosmørsyre pr. liter pr. dag.
DK 165124B
8 (iv) 30/70 valerianesyre/isosmørsyre 125 ml 30/70 valerianesyre/isosmørsyre blev anvendt til pH-regulering fra 18-138 timer, d.v.s. der blev anvendt et gennemsnit på 1,875 g valerianesyre pr.
5 liter pr. dag og et gennemsnit på 4,375 g isosmørsyre pr. liter pr. dag.
(v) 60/40 valerianesyre/isosmørsyre 115 ml 60/40 valerianesyre/isosmørsyre blev anvendt til pH-regulering fra 18-138 timer, 10 d.v.s. der blev anvendt et gennemsnit på 3,45 g valerianesyre pr. liter pr. dag og et gennemsnit på 2,3 g isosmørsyre pr. liter pr. dag.
Fermentationerne blev høstet efter 138 timer, medmindre andet er angivet, og koncentrationerne af forbindelsen med formlen (I) blev 15 bestemt som følger: 9
DK 165124 B
X af forbindelsen med formlen (I) i forhold til
Forbindelse totale antibio- 5 med formlen (I) tika S541-for-
Syre til pH-regulering mg/L delser (i) H2SO4 - normal pH- 284 46 regulering (ii) 50/50 valerianesyre/ 474 55 10 isosmørsyre (iii) 40/60 valerianesyre/ 504 64 isosmørsyre (iv) 30/70 valerianesyre/ 236 78 isosmørsyre 15 (v) 60/40 valerianesyre/ 348 49 isosmørsyre EKSEMPEL 2
Fermentationen ifølge eksempel 1 blev gentaget men under anvendelse af 4 L medium C istedet for medium B.
20 Medium C gL‘*
Meritose 45,0
Arkasoy* 50 18,8
Melasse 2,2 K2HP04 0,18 25 CaC03 1,8
Silicone™ 1520 0,625 10
DK 165124 B
Destilleret vand op til 1 L, pH justeret til 6,5 ved hjælp af vandig H2SO4 inden autoklavering.
Fermentationerne blev reguleret til en temperatur på 35°C. Kulturen blev omrørt ved 500 omdr./min. og beluftet med 3 L/min. Fermentatio-5 nerne blev også underkastet følgende betingelser: (i) 10% H2SO4 tilsat for at forhindre pH i at overstige 7,2-7,4.
Der blev anvendt 100 ml 10% H2SO4 til pH-regulering. Fermentationen blev høstet efter 138 timer.
(ii) Isosmørsyre tilsat med en gennemsnitlig hastighed på 2,63 g/L/-10 dag fra 24-162 timer med valerianesyre eller 10% NaOH tilsat efter behov for at regulere pH til pH 7,2-7,4. Der blev anvendt et gennemsnit på 2,17 g valerianesyre pr. liter pr. dag og ialt 2,1 g NaOH.
(iii) Isosmørsyre tilsat med en gennemsnitlig hastighed på 3,71 g/L/-dag fra 24-162 timer med valerianesyre eller 10% NaOH tilsat efter 15 behov til regulering af pH til pH 7,2-7,4. Der blev anvendt et gennemsnit på 4,46 g valerianesyre pr. liter pr. dag og ialt 2,6 g NaOH.
(iv) Isosmørsyre tilsat med en gennemsnitlig hastighed på 4,38 g/L/-dag fra 24-162 timer med valerianesyre eller NaOH tilsat efter behov til regulering af pH til pH 7,2-7,4. Der blev anvendt et gennemsnit 20 på 3,13 g valerianesyre pr. liter pr. dag og ialt 3,0 g NaOH.
Fermentationerne blev høstet efter 162 timer, medmindre andet er angivet, og koncentrationerne af forbindelsen med formlen (I) blev bestemt som følger:
DK 165124B
11 X af forbindelsen med formlen (I) i forhold til
Forbindelse totale antibio- 5 med formlen (I) tika S561-for-
Syre til pH-regulering mg/L de Is er (i) H2SO4 - normal pH- 460 46 regulering (ii) Et gennemsnit på 10 2,63 g/L/dag 804 69 isosmørsyre (iii) Et gennemsnit på 3,71 g/L/dag 714 58 isosmørsyre 15 (ii) Et gennemsnit på 4,38 g/L/dag 921 78 isosmørsyre EKSEMPEL 3
Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus NRRL 15773, der var blevet 20 opbevaret i flydende nitrogen, blev anvendt til at inokulere en 250 ml rystekolbe indeholdende 50 ml medium A og inkuberet ved 28°C i 2 dage på en rotationsryster kørt ved 250 omdr./min. med en orbital bevsgelse med en diameter på 50 mm. 1 ml-portioner af dette i 2 dage udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere yderligere 250 ml 25 rystekolber indeholdende 50 ml medium A og inkuberet som beskrevet tidligere.
80 ml af det samlede rystekolbe-udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere en 7-liters fermenter indeholdende 4 L medium C.
DK 165124B
12
Fermentationen blev reguleret til en temperatur på 30°C. Kulturen blev omrørt ved 500 omdr./min. og beluftet med 3 L/min. pH blev reguleret ned til pH 7,4 ved tilsætning af 50/50 valerianesyre/iso-smørsyre fra 18-162 timer inde i fermentationen.
5 Fermentationen blev høstet efter 162 timer, hvilket gav 250 mg/L af forbindelsen med formlen (I) svarende til 84% af de totale dannede antibiotika S541-forbindelser.
EKSEMPEL 4
Inokuleringstrinnene ifølge eksempel 1 under anvendelse af medium A 10 blev fulgt. 80 ml af det samlede rystekolbe-udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere en 7-liters fermenter indeholdende 4 L medium D.
Medium D gL'l
Glucose 2,5 15 Malt Dextrin MD 30E 25,0
Arkasoy™ 50 12,5
Melasse 1,5 K2HP04 0,125
CaC03 1,25 20 Destilleret vand til 4 L, pH justeret til 6,5 før autoklavering.
Fermentationen blev foretaget i 24 timer ved en temperature på 28°C, idet kulturen blev omrørt (500 omdr./min.) og beluftet (3 L/min.).
800 ml af dette 24-timers udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere en 70-liters fermenter indeholdende 40 L medium D. Fermenta-25 tionen blev foretaget i 24 timer ved en temperatur på 28eC, idet kulturen blev omrørt (550 omdr./min.) og beluftet (30 L/min.).
800 ml af dette efter 24 timer udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere 40 L medium B i en 70-liters fermenter.
13
DK 165124 B
Fermentationen blev reguleret til en temperatur på 34°C. Kulturen blev omrørt (550 omdr./min.) og beluftet (40 L/min.), og 50/50 vale-rianesyre/isosmørsyre blev tilsat med en gennemsnitlig hastighed på 10 ml/time fra 21 til 117 timer, idet 10% H2SO4 og 10% NaOH blev 5 tilsat efter behov for at regulere pH til omkring pH 7,4.
Fermentationen blev høstet efter 117 timer, hvilket gav 944 mg/L af forbindelsen med formlen (I) svarende til 79% af de totale dannede antibiotika S541-forbindelser.
EKSEMPEL 5 10 Inokuleringstrinnene fra eksempel 1 under anvendelse af medium A blev fulgt. 80 ml af det rystekolbe-udviklede inokulum blev anvendt til at inokulere en 7-liters fementer indeholdende 4 L medium D. Fermentationen blev foretaget i 24 timer ved 28°C, idet kulturen blev omrørt (500 omdr./min.) og beluftet (4 L/min.).
15 800 ml af dette 24-timers-udviklede inokulum blev anvendt til at ino kulere en 70-liters fermenter indeholdende 40 L medium C.
Fermentationstemperaturen blev reguleret til 34°C. Fermenteren blev omrørt (550 omdr./min.) og blev beluftet (40 L/min.), og pH blev reguleret til omkring pH 7,3 ved tilsætning af enten (1) 80/20 valeria-20 nesyre/isosmørsyre med en gennemsnitlig hastighed på 6,67 g/L/dag fra 18 timer til 162 timer eller (2) 75/25 valerianesyre/isosmørsyre tilsat med en gennemsnitlig hastighed på 6,34 g/L/dag fra 18 til 186 timer.
Fermentationerne blev høstet efter henholdsvis 162 og 186 timer og 25 gav enten (1) 510 mg/L af forbindelsen med formlen (I) svarende til 61% af de totale dannede antibiotika S541-forbindelser eller (2) 516 mg/L af forbindelsen med formlen (I) svarende til 72% af de totale antibiotika S541-forbindelser.
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af en 5-hydroxy-S541-maerolidfor-bindelse med formlen (I): OH CH, JL x C®» ^ CH3 A I l\ \ H I! s® CH(CHs) j \ (I) "γΛ· OH 5 ved hvilken en mikroorganisme af slægten streptomyces, som er i stand til at producere forbindelsen med formlen (I), dyrkes, hvorved forbindelsen med formlen (I) dannes, hvorefter forbindelsen om ønsket isoleres, 10 kendetegnet ved, at dyrkningen sker i nærværelse af én eller flere C3_gfedtsyrer og/eller salte af disse syrer.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fedtsyren er isosmørsyre eller valerianesyre .
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikroorganismen dyrkes i nærværelse af isosmørsyre (eller et salt deraf) og valerianesyre (eller et salt deraf). DK 165124 B
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fedtsyren/-syrerne tilsættes til at justere dyrkningsmediets pH til 5,5-7,5, og pH-værdien derefter holdes i dette område ved, at fedtsyren/-syrerne eller en anden/andre 5 fedtsyre(r) tilsættes under resten af fermentationen eller ved, at fedtsyren/-syrerne tilsættes ved en fast hastighed under resten af fermentationen sammen med en vandig syre eller base.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikroorganismen er af arten Strepto-10 myces thermoarchaensis eller Streptomyces cyaneogriseus noncyano-genus.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikroorganismen er Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015, 12111, 12112, 12113 eller 12114 eller Strep-15 tomyces cyaneogriseus noncyanogenus NRRL 15773, eller er en mutant af en hvilken som helst af disse stammer og har i det væsentlige samme egenskaber.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8606120 | 1986-03-12 | ||
| GB868606120A GB8606120D0 (en) | 1986-03-12 | 1986-03-12 | Process |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK125387D0 DK125387D0 (da) | 1987-03-11 |
| DK125387A DK125387A (da) | 1987-09-13 |
| DK165124B true DK165124B (da) | 1992-10-12 |
| DK165124C DK165124C (da) | 1993-03-01 |
Family
ID=10594470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK125387A DK165124C (da) | 1986-03-12 | 1987-03-11 | Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5378617A (da) |
| EP (1) | EP0241147B1 (da) |
| JP (1) | JPH07106155B2 (da) |
| AT (1) | ATE56975T1 (da) |
| CA (1) | CA1319636C (da) |
| DE (1) | DE3765157D1 (da) |
| DK (1) | DK165124C (da) |
| ES (1) | ES2029832T3 (da) |
| GB (1) | GB8606120D0 (da) |
| IE (1) | IE60058B1 (da) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
| US5840704A (en) * | 1986-07-16 | 1998-11-24 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents and process for their preparation |
| US5212322A (en) * | 1986-12-11 | 1993-05-18 | Sankyo Company, Limited | Macrolide compounds, their preparation and their use |
| AR243528A1 (es) * | 1986-12-11 | 1993-08-31 | Sankyo Co | Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida. |
| EP0284176B1 (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-25 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| IN167980B (da) * | 1987-01-23 | 1991-01-19 | Pfizer | |
| US5525506A (en) * | 1987-01-23 | 1996-06-11 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| US5234831A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-10 | Pfizer Inc | Cultures for production of B avermectins |
| US5238848A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-24 | Pfizer Inc | Cultures for production of avermectins |
| DE3880088T2 (de) * | 1987-11-09 | 1993-07-22 | Pfizer | Ethylierte avermectine. |
| GB8726730D0 (en) | 1987-11-14 | 1987-12-16 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| JP2792856B2 (ja) * | 1987-12-28 | 1998-09-03 | 山之内製薬株式会社 | 抗生物質の製造方法 |
| GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| CN104193760B (zh) * | 2014-08-29 | 2016-11-30 | 宁夏泰瑞制药股份有限公司 | 一种利用奈马菌素发酵液提取奈马菌素粗品的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4914624A (da) * | 1972-06-08 | 1974-02-08 | ||
| SE434277B (sv) * | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | Sett att framstella nya antihelmintiskt verkande foreningar genom odling av streptomyces avermitilis |
| DE2909071A1 (de) * | 1979-03-08 | 1980-09-11 | Schmuecking Carl Guenther | Epikutantestpflaster |
| DE3532794A1 (de) * | 1984-09-14 | 1986-04-17 | Glaxo Group Ltd., London | Antibiotika, verfahren zu deren herstellung und diese verbindungen enthaltende mittel |
-
1986
- 1986-03-12 GB GB868606120A patent/GB8606120D0/en active Pending
-
1987
- 1987-03-11 IE IE62687A patent/IE60058B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-03-11 JP JP62054270A patent/JPH07106155B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-11 DE DE8787302099T patent/DE3765157D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-03-11 ES ES198787302099T patent/ES2029832T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-11 DK DK125387A patent/DK165124C/da not_active IP Right Cessation
- 1987-03-11 AT AT87302099T patent/ATE56975T1/de active
- 1987-03-11 CA CA000531749A patent/CA1319636C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-03-11 EP EP87302099A patent/EP0241147B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-08-24 US US07/933,578 patent/US5378617A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0241147B1 (en) | 1990-09-26 |
| DE3765157D1 (de) | 1990-10-31 |
| ES2029832T3 (es) | 1992-10-01 |
| DK125387D0 (da) | 1987-03-11 |
| JPS62272986A (ja) | 1987-11-27 |
| EP0241147A1 (en) | 1987-10-14 |
| GB8606120D0 (en) | 1986-04-16 |
| CA1319636C (en) | 1993-06-29 |
| DK125387A (da) | 1987-09-13 |
| DK165124C (da) | 1993-03-01 |
| IE870626L (en) | 1987-09-12 |
| ATE56975T1 (de) | 1990-10-15 |
| IE60058B1 (en) | 1994-05-18 |
| US5378617A (en) | 1995-01-03 |
| JPH07106155B2 (ja) | 1995-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK165124B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse | |
| RU2102481C1 (ru) | Способ получения 2-кето-l-гулоновой кислоты или ее соли | |
| US5618706A (en) | Preparation of phytosphingosine derivative | |
| US7279314B2 (en) | Chemical substance having morphogenetic and growth-accelerating activities | |
| EP0032830B1 (en) | Preparation of 2-keto-l-gulonic acid | |
| US20080318289A1 (en) | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus | |
| US6558931B1 (en) | Process for the preparation of Fexofenadine | |
| NO315750B1 (no) | Resolusjon av arylalkansyrer | |
| KR900005771B1 (ko) | L-글루탐산의 제조방법 | |
| EP0906446A1 (en) | Process for the preparation of clavulanic acid | |
| US6197560B1 (en) | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid | |
| CA1119981A (en) | Process for preparing 2,5-diketogluconic acid | |
| KR100317902B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| KR100317901B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| KR880002418B1 (ko) | 이노신 및 구아노신의 제조법 | |
| KR100292298B1 (ko) | 글루탐산 생산 미생물 및 이를 이용한 글루탐산 생산방법 | |
| SI9800144A (sl) | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' | |
| UA73074C2 (en) | Method of controlled fermentation for production of lovastatin as hydroxy-acid | |
| JPH05153982A (ja) | 新規変異株及びそれを用いるグリセリンの製造方法 | |
| KR960004035B1 (ko) | 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 | |
| KR100447423B1 (ko) | 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법 | |
| WO2004003212A1 (en) | Novel process for the production of pancreatic lipase inhibitor | |
| NO326120B1 (no) | Mikroorganisme som produserer 5-aminolevulinsyre og fremgangsmåte for fremstilling av 5-aminolevulinsyre ved anvendelse derav | |
| JPH0751072B2 (ja) | （Ｒ）−（＋）−γ−ブチロラクトン−γ−３−プロピオン酸の製造方法 | |
| JPH069517B2 (ja) | セフアロスポリンｃの製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |