SI9800144A - Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' - Google Patents
Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' Download PDFInfo
- Publication number
- SI9800144A SI9800144A SI9800144A SI9800144A SI9800144A SI 9800144 A SI9800144 A SI 9800144A SI 9800144 A SI9800144 A SI 9800144A SI 9800144 A SI9800144 A SI 9800144A SI 9800144 A SI9800144 A SI 9800144A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- fermentation
- substance
- medium
- added
- microorganisms
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/872—Nocardia
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Mikroorganizmi vrste Amycolatopsis orientalis so sicer poznani kot dobri producenti antibiotika vankomicina, mi pa smo presenetljivo ugotovili, da so tudi izredno učinkoviti v pretvorbi substance ML-236B v njena 3-hidroksi derivata M-4 in M-4', ki se v obliki natrijeve soli uporabljata v farmaciji kot antihiperholesterolemika.ŕ
Description
Naziv izuma
Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4’
Področje tehnike v katero spada izum
Predloženi izum spada v področje farmacevtske industrije in se nanaša na nov biotehnološki postopek za pridobivanje 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4’ s fermentacijo z mikroorganizmi vrste Amycolatopsis orientalis.
Tehnični problem
Obstaja stalna potreba po novem in izboljšanem biotehnološkem postopku, ki bi omogočal kar najbolj efektivno pretvorbo substance ML-236B in njenih derivatov v farmacevtsko uporabne 3-hidroksi-ML-236B derivate. Čim boljši izkoristek pri pretvorbi substance ML-236B v njene 3-hidroksi derivate je pomemben tudi zaradi visoke cene izhodne substance.
Stanje tehnike
ML-236B in njegovi derivati ter analogi so poznani kot inhibitorji HMGCoA reduktaze in so pisani v patentu št. GB 1.555.831. Proizvajajo jih s fermentacijo z mikroorganizmi razlčnih vrst, ki pripadajo rodovom, kot so Gilbertella, Streptomyces, Circinella, Monascus, Nocardia, Amycolata, Mucor ali Penicillium kar opisujejo patenti US 4.137.322, US 4.346.227, US 4.537.859). Dva 3-hidroksi-ML-236 derivata poznana tudi kot M-4 in M-4’ sta se še posebej izkazala kot učinkovita inhibitorja HMG-CoA reduktaze in se njujna zmes v obliki natrijeve soli uspešno uporablja kot antihiperholesterolemik. Vse tri substance obstajajo tako v obliki kisline, kot tudi v obliki laktona.
ML-236B M-4 M-4’
Pridobivanje farmacevtsko sprejemljivih soli substanc M-4 in M-4’ je večstopenjski proces, pri čemer zaobsega prvi del pripravo substance ML-236B s fermentacijo z mikroorganizmi iz rodu Penicillium in izolacijo le-te z uporabo konvencionalnih izolacijskih tehnik ter pripravo njene natrijeve soli kot je opisano v patentu št. US 4.137.322. Drugi del pa zaobsega gojenje mikroorganizma iz enega izmed prej naštetih rodov v mediju, kateremu je dodan ML-236B v obliki natrijeve soli, izolacijo substanc M-4 in M-4’, ter pripravo njunih farmacevtsko sprejemljivih soli kar je opisano v patentih US 4.346.227 in US 4.537.859.
Opis rešitve tehničnega problema
Predloženi izum temelji na nalogi najti mikroorganizem, ki pretvarja substanco ML-236B v njene 3-hidroksi derivate (M-4 in M-4’) z relativno visokimi izkoristki. V ta namen so bili testirani mnogi mikroorganizmi, ki so v literaturi omenjeni kot potencialni producenti 3-hidroksi-236B derivatov. Presenetljivo pa so bili dobljeni najboljši rezulati v primeru, ko je bil uporabljen mikroorganizem vrste Amycolatopsis orientalis ATCC 19795, ki je bil do sedaj poznan le kot producent antibiotika vankomicina.
Za sev Amycolatopsis orientalis ATCC 19795 je značilen dobro razvejan micelij, ki pod določenimi pogoji fragmentira v krajše partikle. Kolonije, ki zrastejo na agrskem trdnem gojišču so bele do svetlomodre barve, žametnega izgleda, rahlo nagubane in dvignjene s premerom od 5 do 10 mm. Najprimernejša temperatura za rast je od 24° do 30°C, pri čemer je treba dodati, da ta mikroorganizem slabo sporulira.
Predmet predloženega izuma je encimatski proces hidroksilacije, ki poteče, ko v primerni fermentacijski medij z mikroorganizmom Amycolatopsis orientalis ATCC 19795 oziroma k celičnemu ekstraktu omenjenega mikroorganizma dodamo substanco ML-236B v obliki natrijeve soli. Kot fermentacijski medij, lahko uporabimo večino konvencionalnih gojišč, ki se uporabljajo za fermentacijo z mikroorganizmi rodu Amycolatopsis. Fermentacijski medij mora vsebovati vir asimilirnega ogljika, kot so glukoza, saharoza, dekstrini, glicerol, škrob, sojino olje in melasa, vir asimilirnega dušika, kot so sojina moka, mesni in kvasni ekstrakti, peptoni in amonijeve soli, ter v kolikor je to potrebno tudi razne anorganske soli, kot so natrijev in kalijev klorid, magnezijev sulfat, kalcijev karbonat in razni fosfati.
Fermentacijo vodimo pod aerobnimi pogoji pri temperaturi med 20° in 36°C, najboljše med 24° in 30°C. Vegetativni del fermentacije traja med 24 in 48 ur, nato pa dodamo v fermentacijski medij substanco ML-236B v obliki natrijeve soli, do celotne končne koncentracije 0.5% do 0.05%, preračunano na celotno maso fermentacijske brozge. Dodajanje je lahko šaržno ali pa kontinuimo. Fermentacijo končamo času od 2 do 5 dni po dodatku ML-236B, dobljeno fermentacijsko brozgo filtriramo, dobljeni filtrat ekstrahiramo z vodo nemešljivim organskim topilom, odparimo topilo in nanesemo surov produkt (zmes substanc M-4 in M-4’) na kromatografsko kolono, naprimer na silkagelsko kolono ter spiramo s primernim eluentom. Dobljeni produkt (zmes substanc M-4 in M-4’) po potrebi še prekristaliziramo in presolimo, v kolikor ga želimo v obliki soli.
Predloženi izum prikazujejo in pojasnjujejo, vendar v ničemer ne omejujejo naslednji primeri.
Primer 1
Priprava vcepka
Osnova za določitev najboljše proizvodne kulture je bil izbor posamezne kolonije s tipičnimi morfološkimi karakteristikami. Izbrane kolonije smo prenesli v sterilen poter in homogenizirali. Spoterirane kolonije so bile prenesene na poševna agarska gojišča (poševnik) in inkubirane v termostatu 7-14 dni pri 26°-30°C. V tem času so zrastle na poševnikih kulture, homogenega, nagubanega, gladkega micelija - bele do svetlo sivomodre barve. V nadaljevanju smo v poševnik vlili 10 ml sterilne vode, postrgali kulturo s pipeto in vsebino preneseli v poter ter jo poterirali. Z delom (0.5-1 ml) tako pripravljene in obdelane kulture smo v nadaljevanju nacepili vegetativno gojišče.
Agarsko gojišče za pripravo poševnih agarjev in Petrijevih plošč:
| NAZIV KOLIČINA | |
| - dekstrin 10 g | |
| - glukoza prehrambena | 5 g |
| - kazaminske kisline | 3 g |
| - kvasni ekstrakt | 4 g |
| - CaCO3 | 1 g |
| - agar | 15 g |
| sterilna voda | do 1000 ml |
pH se ne popravlja.
Primer 2
Vegetativni del fermentacije
Z vcepkom, ki je rastel na na poševniku 10 dni pri temperaturi 26°-30°C in je bil pripravljen po postopku opisanem v Primeru 1 smo nacepili 500 mililitersko erlenmajerico z 50 ml vegetativnega gojišča. Po dveh dneh smo del kulture (5 do 10 %) prenesli v fermenatcijsko gojišče.
Vegetativno gojišče
| SUROVINA | KOLIČINA |
| - koruzni škrob za fermentacijo | 20 g |
| - sojina moka za fermentacijo | 14 g |
| - glukoza | 10 g |
| - ekstrakt kvasa | 5 g |
| - NaH2PO4 χ 2H2O | 3.3 g |
pitna voda do 1000 ml
Primer 3
Pretvorba substance ML-236B v njena 3-hidroksi derivati M-4 in M-4’
Del kulture pripravljene po postopku opisanem v Primeru 2 smo prenesli v erlenmajerice s fermentacij skim gojiščem 1 in drugi dan fermentacije dodali vanj ML-236B v obliki natrijeve soli, do koncentracije 200 mg/l. Analize koncentracije substanc M-4 in M-4’ v fermentacij ski brozgi po treh dneh fermentacije pri temperaturi med 24° in 30°C so pokazale, da je bila končna skupna koncentracija substanc M-4 in M-4’ v fermentacij ski brozgi 60 mg/ml.
Fermentacijsko gojišče 1
| SUROVINA | KOLIČINA |
| - glicerol | 80 g |
| - sojina moka | 20 g |
| - sojino olje | 0,1 g |
| - Ca glukonat | 12 g |
| - magnezijev klorid χ 6H2O | 1.3 g |
| - magnezijev sulfat χ 7H2O | 1 g |
| - NaNO3 | 10 g |
pitna voda do 1000 ml
Vse surovine raztopimo v pitni vodi, nato naravnamo pH z IM vodno raztopino NaOH na 7.8. Tako pripravljeno gojišče razlijemo v 300 mililiterske erlenmajerice po 30 ml v vsako.
Primer 4
Pretvorba substance ML-236B v njena 3-hidroksi derivati M-4 in M-4’
Del kulture pripravljene po postopku opisanem v Primeru 2 smo prenesli v erlenmajerico s fermentacij skim gojiščem 3 in drugi dan fermentacije dodali vanj
ML-236B v obliki natrijeve soli, do koncentracije 400mg/l. Analize koncentracije substanc M-4 in M-4’ v fermentacijski brozgi po treh dneh fermentacije pri temperaturi med 24° in 30°C so pokazale, da je bila skupna končna koncentracija substanc M-4 in M-4’ v fermentacijski brozgi 160 mg/ml, kar pomeni 40% pretvorbo.
Fermentacij sko gojišče 3
| SUROVINA | KOLIČINA |
| - glicerol | 20 g |
| - sojina moka | 20 g |
| - Ca glukonat | 12 g |
| - magnezijev klorid χ 6H2O | 1-3 g |
| - magnezijev sulfat χ 7H2O | 1 g |
| - NaNO3 | 10 g |
pitna voda do 1000 ml
Vse surovine raztopimo v pitni vodi, nato popravimo pH do 7.8. Tako pripravljeno gojišče razlijemo v 300 mililiterske erlenmajerice po 30 ml v vsako.
Primer 5
Pretvorba substance ML-236B v njena 3-hidroksi derivati M-4 in M-4’ v polindustrijskem merilu
Z vsebino desetih erlenmajeric s kulturo pripravljeno po postopku opisanem v Primeru 2, pri čemer je bil vegetativni del fermentacije skrajšan na 24 ur, smo nacepili fermentor (14 1) z 10 1 fermentacij skega gojišča 2. Po 24 urah fermentacije smo šest ur kontinuirno dodajali v gojišče ML-236B v obliki natrijeve soli (470 mg ML-236B raztopljenih v 500 ml vode). Analize koncentracije substanc M-4 in M-4’ v fermentacijski brozgi po 36 urah fermentacije pri temperaturi med 24° in 30°C so pokazale, da je bila končna skupna koncentracija substanc M-4 in M-4’ v fermentacij ski brozgi 300 mg, kar pomeni 64% pretvorbo.
Fermentacijsko gojišče 2
| SUROVINA | KOLIČINA |
| - glicerol | 20 g |
| - koruzni škrob za fermentacijo | 20 g |
| - sojina moka za fermentacijo | 14 g |
| - glukoza | 10 g |
| - ekstrakt kvasa | 5 g |
| - NaH2PO4 x 2H2O | 3.3 g |
pitna voda do 1000 ml
Vse surovine raztopimo v pitni vodi, nato popravimo pH do 7.8.
LEK, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov, d.d.
Claims (6)
- Patentni zahtevki:1. Postopek za pridobivanje substanc M-4 in M-4’ s z uporabo mikroorganizmov vrste Amycolatopsis orientalis.
- 2. Postopek opisan v zahtevku 1, označen s tem, da substanco ML-236B oziroma njene alkalijske soli pretvorimo z uporabo mikroorganizmov vrste Amycolatopsis orientalis v substanci M-4 in M-4’.
- 3. Postopek opisan v zahtevku 1, označen s tem, da je mikroorganizem Amycolatopsis orientalis ATCC 19795.
- 4. Postopek opisan v zahtevku 2, označen s tem, da se dodaja substanca ML236B oziroma njena alkalijska sol v fermentacijsko gojišče šaržno, stopenjsko ali pa kontinuirano.
- 5. Postopek opisan v zahtevku 4, označen s tem, da se dodaja substanca ML236B oziroma njena alkalijska sol v fermentacij sko gojišče do končne vsebnosti 0.5 do 0.05% preračunano na celotno maso gojišča.
- 6. Postopek opisan v zahtevku 2, označen s tem, da se v gojišče tekom fermentacije dodaja po potrebi asimilirni vir ogljika, dušika ali fosforja.LEK, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov, d.d.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI9800144A SI9800144A (sl) | 1998-05-21 | 1998-05-21 | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' |
| EP99919467A EP1080220A1 (en) | 1998-05-21 | 1999-05-21 | New biotechnological process for preparing hydroxylated ml-236b derivatives, known as m-4 and m-4', and analogues thereof |
| JP2000549757A JP2002515258A (ja) | 1998-05-21 | 1999-05-21 | Ｍ−４およびｍ−４’として知られる水酸化ｍｌ−２３６ｂ誘導体、およびその類似体のバイオテクノロジーを用いた新規の製造方法 |
| PCT/IB1999/000923 WO1999060151A1 (en) | 1998-05-21 | 1999-05-21 | New biotechnological process for preparing hydroxylated ml-236b derivatives, known as m-4 and m-4', and analogues thereof |
| AU37247/99A AU3724799A (en) | 1998-05-21 | 1999-05-21 | New biotechnological process for preparing hydroxylated ml-236b derivatives, known as m-4 and m-4', and analogues thereof |
| US09/700,945 US6365382B1 (en) | 1998-05-21 | 1999-05-21 | Biotechnological process for preparing hydroxylated ML-236B derivatives, known as M-4 and M-4′, and analogues thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI9800144A SI9800144A (sl) | 1998-05-21 | 1998-05-21 | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI9800144A true SI9800144A (sl) | 1999-12-31 |
Family
ID=20432267
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI9800144A SI9800144A (sl) | 1998-05-21 | 1998-05-21 | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6365382B1 (sl) |
| EP (1) | EP1080220A1 (sl) |
| JP (1) | JP2002515258A (sl) |
| AU (1) | AU3724799A (sl) |
| SI (1) | SI9800144A (sl) |
| WO (1) | WO1999060151A1 (sl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4428866B2 (ja) * | 1999-01-20 | 2010-03-10 | 協和発酵バイオ株式会社 | ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の製造法 |
| HUP0105145A3 (en) | 1999-01-29 | 2006-02-28 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Process for producing hmg-coa reductase inhibitor |
| GB2581122B (en) * | 2018-11-27 | 2023-07-26 | Hypha Discovery Ltd | Biocatalytic techniques |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4137322A (en) | 1976-11-02 | 1979-01-30 | Sankyo Company Limited | ML-236B carboxylic acid derivatives and their use as antihyperlipemic agents |
| DK149080C (da) * | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
| JPS5889191A (ja) | 1981-11-20 | 1983-05-27 | Sankyo Co Ltd | ３−ヒドロキシ−ｍｌ−２３６ｂ誘導体の製造法 |
| US4547488A (en) | 1984-04-16 | 1985-10-15 | Eli Lilly And Company | Antibiotic M43D, pharmaceutical compositions and method of use |
| EP0215665B1 (en) * | 1985-09-13 | 1991-11-21 | Sankyo Company Limited | Hydroxy-ml-236b derivatives, their preparation and use |
| US6043064A (en) | 1993-10-22 | 2000-03-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Enzymatic hydroxylation process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors and intermediates thereof |
-
1998
- 1998-05-21 SI SI9800144A patent/SI9800144A/sl not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-05-21 EP EP99919467A patent/EP1080220A1/en not_active Withdrawn
- 1999-05-21 AU AU37247/99A patent/AU3724799A/en not_active Abandoned
- 1999-05-21 US US09/700,945 patent/US6365382B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 WO PCT/IB1999/000923 patent/WO1999060151A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-05-21 JP JP2000549757A patent/JP2002515258A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU3724799A (en) | 1999-12-06 |
| US6365382B1 (en) | 2002-04-02 |
| JP2002515258A (ja) | 2002-05-28 |
| EP1080220A1 (en) | 2001-03-07 |
| WO1999060151A1 (en) | 1999-11-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0089370B1 (en) | Production of gamma-decalactone | |
| CA1168999A (en) | Method for preparing 2,5-diketo-d-gluconic acid | |
| AU762656B2 (en) | Method of producing gamma-decalactone | |
| AU2016287537A1 (en) | Use of Microbacterium strains for the production of antibacterial agents | |
| US5108917A (en) | Process for the preparation of ibuprofen | |
| US3649455A (en) | Production of lipase | |
| JPH07106155B2 (ja) | 抗生化合物の製法 | |
| US4492756A (en) | Microorganisms of the genus Hyphomicrobium and process for degrading compounds wich contain methyl groups in aqueous solutions | |
| JPS60244295A (ja) | （十）‐トランス‐シクロプロパンカルボン酸の製造方法 | |
| US5212078A (en) | Process for producing a lactone | |
| CA2032658A1 (en) | Process for the production of 6-hydroxynicotinic acid | |
| US20080318289A1 (en) | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus | |
| CA2088667A1 (en) | Process for producing astaxanthin by fermentation | |
| EP0482908B1 (en) | Process for producing streptovaricin | |
| CS217986B2 (en) | Method of making the 2-keto-l-gulonic acid | |
| SI9800144A (sl) | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' | |
| EP0502525A1 (de) | Biotechnologisches Verfahren zur Herstellung von S-(+)-2,2-Dimethylcyclopropancarboxamid und R-(-)-2,2-Dimethylcyclopropancarbonsäure | |
| DD141683A5 (de) | Enzymatische komplexe | |
| DE69839248T2 (de) | VERFAHREN FÜR DIE HERSTELLUNG VON INHIBITOREN DER HMG-CoA-REDUKTASE. | |
| JP2000500642A (ja) | ロバスタチンの製造方法 | |
| JPS61247396A (ja) | ゲニステインの製造法 | |
| US3663373A (en) | Process for the preparation of iodinin | |
| JP4982792B2 (ja) | 光学活性なｄ−ホモセリン及びｄ−ホモセリンラクトンの製造法 | |
| AU655698B2 (en) | Process for producing optically active norborneol | |
| SI9600120A (en) | New and improved fermentative procedure for the production of clavulanic acid and its salts |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF | Valid on the event date | ||
| KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20070201 |