JPS62272986A - 抗生化合物の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は抗生化合物の新規製法に関する。特に、本発明
はストレプトミセス微生物の培養による抗生化合物の製
法に関する。

英し＃ｔｈＷ＋弔２１６６４５６号およびヨーロッパ特
許第１７０００６号の各明細書には、本発明者等か抗生
＋４１！１Ｊｉ８５４１と命名した一群の化合物が記載
されている。抗生ＪＩＩＪ實５５４１の各物質は抗生物
活性、特に抗外部寄生虫活性、抗外部寄生虫活性、抗真
菌活性、枚虫活性、殺縁虫活性および殺ダニ粘性ｔ−有
しておシ、農業、園芸および動物ないしヒトの健康面で
使用するのに％に重要である。抗生物質５５４１の各物
質はまた前記の抗生活性ｔ−有するその他の化合物を製
造するための中間体としても有用である。

特に重要な抗生物３！［８５４１化合物は、式（Ｉ）で
表される化合物である。

英ｌｌ￥Ｉ許第２１６６４５６号およびヨーロッパ特許
第１７０００６号の各明細書には、ストレプトミセス属
に楓する微生物の培養による式（Ｉ）の化合物およびそ
の他の抗生物＊ＳＳＺ化合物の製造が記載されている。

上記特許明細書に記載の通常の培養条件下ではストレプ
トミセス微生物は巧々の抗生物質５５４１化合物の混合
物を生産する。これは特定の抗生物質８５４１化合物を
必要とする場合に２つの間ｍを生ずる。第１は所望の抗
生’ａ１３１ｉｓ５４１化合物の力価が減少されること
そして第２はＰｔｒｕ化合物の単離および分離が類似化
合物の混合物からは困難であることである。

本発明によｆは、ストレプトミセス菌株が通常の発酵条
件下で発酵される場合に比べて、該菌株かｉｉｉ′ｉＩ
記式（Ｉ）の化合物をその他の抗生物質５５４１の各化
合物よりもより高い割合で生産するような方法で、抗生
物１８５４１住産のストレプトミセス菌株を培養するこ
とが可能であることが見出された。一般にこの改良はス
トレプトミセス微生物を脂肪酸およびその塩、エステル
およびアミドの存在下で培養するととＫよって達成され
る。この方法において、式（Ｉ）の化合物の力価は増加
しかつ式（Ｉ）の化合物の単離ないし分離はより容易に
なされ、それ故に有利なことにこのようＫして該化合物
のより高い収率が得られる。

即ち、本発明の一特量によｐ本発明者等は式（Ｄの化合
物の製法を提供する。該製法は式＋Ｉ）の化合物を１ａ
またはそ才り以上の脂肪酸および（または）こｎら酸の
功、エステルおよびアミドの存在下で生産することので
きるストレプトミセス属の微生物を培焚し、それより式
（Ｉ１の化合物ｆ、製造し°そして所望により該化合物
を単離することからなる。

弐〇の化合物を生産することのできる微生物ハ、線虫類
セノルハブジチスエレガンス（Ｃａａｎｏｒ−ｈａｂｄ
ｉｔｉａ　ｅｌｅｇａｎａ）　ｆ用いる好都合な小ｍｓ
試験で容易に同定することができ、それは飼えば上記線
虫の懸濁液に試験試料〔微生物の発酵から得られた〕を
加えついで線虫の生命力（ｖｉｓａｂｉ−１ｉｔｙ）に
対する得られた効果を試験することＫよりおよび試験試
料についての分析高性能液体クロマトグラフィーによシ
なされる。

微生物は、ストレプトミセスサーモアルケンシス（８ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎａ
ｉａ）　９ｉまたはストレブトミセスシアネオグリセウ
スノンシアノゲヌス（８ｔｒａｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｙ
ａｎｅｏｇｒｉｓｅｕａ　ｎｏｎ−ｃｙａｎｏｇｅｎｕ
ｓ）徳であるのか好１しく、％にストレプトミセスサー
モアルケンシスＮＯより　１２０１５（Ｉ９８４年９月
１０日付寄託）、ストレプトミセスサーモアルケンシス
ＮＯより　１２１１１．１２１１２．１２１１３および
１２１１４　（全て１９８５年６月２６日付を託）およ
びストレブトミセスシアネオグリセウスノンシアノゲヌ
スＮＲＲＬ　１５７７３（Ｉ９８４年５月３日付を此）
およびこれら全【の菌株の変異体が好ましい。

上記菌株の変異体は自生的に生ずるか、あるいは穐々の
方法例えば国際原子エネルギー機構発行のシンポジウム
（ウィーン１９７３年）議事碌第２４１員「Ｒａｄｉａ
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｉａｏｔｏｐｓｓｆｏｒ
工ｎｃＬｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉａｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ
ｓＪに記載のＬ工。

Ａｄｄｅｒ氏による”Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　
ｔｈｓ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆ　Ｍｉｃｒｏ−ｏ
ｒｇａｎｉａｍｓ”　Ｋ概説された方法によって生産さ
れうる。このような方法にはイオン化照射、化学的方法
例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニ
ジン（ＮＴＧ）による処理；加黒；遺伝子工学例えは組
み換え、形ｉｎ人、形質転換、溶原化および俗源性変換
そして自生変異体およびこれら全ての菌株の変異体に関
する選択的技法がある。

本発明方法によって用いられる脂肪数には、発酵か通常
の条件下で実施される場合に比べて、その他の抗生物質
５５４１の各化合物よシもより高い割合で式（Ｉ）の化
合物を生成する任意の脂肪酸が包含される。他の抗生物
［８５４１化合物に対して式（Ｉ）の化合物の割合を改
良しうる脂肪酸は、好都合な小規模発酵を用いかつ試験
試料の分析高性能液体クロマトグラフィーにより穐々の
脂肪酸の添加効果ｔ−Ｈｌｌｌべて容易に確認すること
かできる。本発明方法により使用されうる脂肪酸の例と
しては、１０個まで例えば３〜８個の炭素原子を有する
壱機敗を挙げることができる。

特に適当な脂肪酸の例としては、イソ酪酸および吉Ｘｅ
１ｌかある。

即ち、本発明の好ましい物像において本発明者等は、式
（Ｉ）の化合ｇａを、イソ酪酸、吉草酸およびこれら欧
の塊、エステルおよびアミドから選択される１個または
それ以上の化合物の存在下で生産しうるストレプトミセ
ス属の微生物を培養し、それより式（Ｉ）の化合物を製
造しそして所望により該化合物を単離することからなる
式（Ｉ）の化合物の製法を提供する。

該脂肪酸の適当な塩の例としては、アルカリ金属塩例え
ばカリウム塩またはナトリウム塩がある。適当なエステ
ルの例としては、アルキルエステル例えばＣ１〜４アル
キルエステル（側光ば）ｆルエステルまたは工ｔルエス
テル）がある。

本発明によれは、２ｆｆ＊の脂肪酸またはそれらの塩の
存在下で本発明方法を実施するのが有利であることが見
出された。同一発酵において両酸またはそれらの塩を使
用すると、その他の抗生Ｗ質５５４１の各化合物に対し
て望ましく昼い割合で式（Ｉ）の化合物が生成される。

卸ち、本発明の特に好ましい物像において本発明者智は
、２棟の脂肪酸またはそれらの塩の存在下において式（
Ｉ）の化合物を生産しうるストレプトミセス属の微生物
を培養し、それより式（Ｉ）の化合物を製造しそして所
望により＃化合物を単離することからなる式（Ｉ）の化
合物の製法を提供する。

本発明によれば、イソ酪酸および吉草酸の存在下である
いはそれらの塩の存在下で本発明方法を実施するのが特
に有利であることが見出された。同一発酵において両酸
またはそれらの塩を使用すると、その他の抗生物質５５
４１の各化合物に対して望ましく高い割合で式（Ｉ）の
化合物が生成される。卸ち、本発明の具体的特徴におい
て、本発明者等はイソ酪酸もしくはその塩および吉草酸
もしくはその塩の存在下において式（，１）の化合ｖｌ
Ｊを生産しうるストレプトミセス属の微生物を培資し、
それより式中の化合物を製造しそして所望により該化合
物を単離することからなる式中の化合物の製法を提供す
る。

１種以上の脂肪酸物質を発ｅＫ加える場合、該脂肪酸物
質は指定の割合で一緒に加えてもよいしあるいは好まし
くは互い罠別々に加えてもよい。この割合は培養中、一
方の物質のｍを一定に保ちそして他方の量を変えること
によりまたは両物質のＪｉｔを変更すること罠よシ望む
ように変えることができる。正確な墓は培養の要件に合
うように経験に基づいて決定される必要がある。式（！
）の化合物を生産する微生物を培養するのに用いる培地
は、本発明で添加する脂肪酸あるいはそれらの塩、エス
テルまたはアミドに関する以外は通常、該化合物の製造
に使用されている培地である。

一般に、該脂肪酸物質は微生物の培養中の任意の時に加
えることができる。しかしながら、本発明によれは培地
のｐ）Ｉか約５．５〜Ｚ５の中性−から離れ【変化し始
める時および（または）微生物が式（Ｉ）の化合物を生
産し始める時に該物質を添加し始めるのが好ましいこと
が見出された。

これは一般に、培養巾約１８時間口に起シうる。

この時点でｐＨを所望レベル（即ち、約ｐＨ５，５〜７
５例えば−Ｚ２〜７．４）Ｋ：調整するために該脂肪酸
物質か加えられる。ついで同一または相異なる脂肪酸物
質が残りの発酵中、所望レベルのｐＨ１１：維持するた
めに加えられうる。あるいはまた、ｐｌＩを所望レベル
に維持するために適当に添加される酸（例えは硫酸）水
溶液または塩基（例えば水酸化ナトリウム）水溶液とと
もに該脂肪酸物質を一定の割合で残シの発酵中に加えて
もよい。必要とされる脂肪酸物質の量は使用する培地お
よびストレプトミセス菌株の性＊によって広範囲に変わ
るが、一般には各培養の要件に合うように経験に基づい
て決定される必要かある。また、培地中に脂肪酸物置ｙ
＆：蓄積させることか必要かどうかを経験的に決定する
ことも重要である。しかしながら、本発明によればスト
レプトミセスサーモアルケンシス釉またはストレブトミ
セスシアネオグリセウスノンシアノゲヌス種の微生物を
用いて発酵を行う場合には、蓄積を生じさせる量で該脂
肪酸物＊を加えることを避けるのが好ましいということ
が見出された。

本発明方法において、培地は一般にまｆ述の脂肪酸物質
の外に炭素、窒素および無機塩からなる他の同化性源を
含有する。炭素、窒素および無機塩の適尚な供給源は英
国特許第２１６６４３６号およびヨーロッパ特許第１７
０００６号の各明細書に論じられている。

ストレプトミセス微生物の培養は、一般に英国特許Ｗ、
２１６６４３６号明細沓に記載の方法に従って行われそ
して所望により、式中の化合物は、前記の英ｃｉ＊許お
よびヨーロッパ特許各明ｍ書に記載の常套の単離および
分離技術によって全発酵から分離されうる。英国特許第
２１６６４５６号およびヨーロッパ特許第１７０００６
号の各明細ｖ：にはまた式（Ｉ）の化合物を精製するた
めの適当な方法も記載されている。

以下に、本発明′ｔ−実施例により説明する。以下の実
施例中、Ｌはリットルを意味する。

実施例　１ ストレプトミセスチーモアルケンシスＮＣｌＢ１２０１
５の胞子を以下の成分 ｇＬ−１ 酵母エキス（Ｏｘｏｉｄ　Ｌ２１）　　　　　０．５麦
芽エキス（Ｏｘｏｉｄ　Ｌ３９）　　　　５０．０菌字
上のにブトｙ（Ｏｘｏｉｄ　Ｌ４０）　　　　　５．０
寒天Ａ　３　（Ｏｘｏｉｄ　Ｌ１３）　　　　　１５．
０蒸留水を加えて１Ｌにし、−を約５．４にした。

から調製した寒天斜面上ＫＭえ付け、２８℃で１０日間
培養した。次に生長しきった斜面を２０係クリセロール
溶液（６−）でおおいそして胞子および菌糸体をはらは
らにするために滅菌工具で引っかいた。得られた胞子懸
ｆ＠液のＱ、　４　ｍｌ　ｆ、以下の培地Ａ グルコース　　　　　　　　　２．５ 麦芽デキストリン　　　　　２５．０ アルカソイ５０　　　　　　１２．５ 糖蜜　　　　　１．５ に２ＨＰＯ４０，１２５ （ａｃＯ５１，２５ ｔ−８Ｎｔル２５０　ｍエルレンマイヤーフラスコに植
え付けるのに使用した。

上記の培養物を５０１１ｗ直径の軌道運動を有して２５
０　ｒｐｍで作動する回転シェーカー上において２８℃
で２日間インキュベートした。この２日間生長した接撫
物の２％（Ｖ／Ｖ’）を、培地ムを含有するさらに別の
２５０−エルレンマイヤーフラスコに植え付けるのに使
用しついで前述のようにインキュベートした。

−まとめにした、上記振盪フラスコで生長した接樵物の
８０−を、以下の培地Ｂ　（４Ｌ）：培地　Ｂ　　　　
　　　　　　ｇＬ−１グルコース　　　　　　　　　　
３．７５麦芽デキストリンＭＤ３０１ｅ　　　３７．５
アルカソイ５０　　　　　　　１８．８糖　　　蜜　　
　　　　　　　　　　　　　２．２５に２ＨＰＯ４０，
１８８ Ｃ！ａｏ０３　　　　　　　　　　　　１．８８オート
クレーブ処理の前にメＩ’ｔ６．５にル４１ｉシた。

を含有する発酵ｆｉ（７Ｌ）に植え付けるのに使用した
。

これらの発ｅｌ＃を、３５℃のｉｈＡ度に調節した。

その培養物を５　ＣＦ　ＯｒｅｖＡ＋で振虚しそして３
１分で通気した。−が７．２〜１４以上に上昇するのを
妨ぐために以下の中〜りのいずれかの添加により、その
ｐＩ′ｉを調整した。

中　１０％Ｈ２８０４（実画特許第２１６６４３６号明
細書中の実施例５に記載の方法による）、８０−の１０
％Ｈ２８０４’ｆｒ　ｐ１１ｖ４１１　ツタｋｔ）　Ｉ
／Ｃ用いそして１１４時間目間口取した。

ｇｌｔ　　ｓ　Ｏ１５０吉Ｘ飲／イソ陥酸１１０−の５
０１５０吉尊酸／イソＭ敗を１８〜１３８時間目からＰ
間口−整のために使用した。

即ち、平均２７５２の萱草ｒ！ＶＬＡ３を使用した。

同様に、平均２．７５９のイソＭｗＶ日を使用した。

Ｑｌｌ）　　４０／６０百Ｘ酸／イソ酪酸１１５　ａｔ
ｏ）　４０／６０　＊　草酸／イソ酪酸を１８〜１３８
時間目から−間口ｌｌＪＩのために使用した。

即ち、平均２．３Ｆの吉草酸１＄および平均５．４５９
のイソ酪酸１４を使用した。

（ＩＶ）　　３０／７０　吉Ｘｓｔ／　（ソｋｍ１２５
−の３０／７０吉草ａ＆／イソ酪酸を１８〜１３８時間
目から一間口１４整のために使用した。

即ち、平均１．８７！Ｍの吉草酸１司および平均４．５
７５ｔのイソｒ１６〜へ／Ｂを使用した。

（Ｖ）　６０／４０百車飲／イソ節酸 １１５−の６０／４０吉草酸／イソ酪酸を１８〜１３８
時間目から一間口のために使用した。

ＢＯち、平均５．４５ｆの吉草酸−１および平均２．３
ｆのイソｅ１６ｅｌｌＡＪＢを使用した。

これらの発酵生産ｖｌＪを、％にことわらない限り１３
８時闇目に採取しそして式（Ｉ）の化合物の力価を以下
のように測定した。

式（Ｉ）の化合物　％全抗生物質 （ｆ）　　Ｈ２８０４＝ノルマルｐＨ調整　　２８４　
　　　　４６（ＩＩ）　　５０１５０吉車酸／イソ酪酸
　　４７４　　　　　５５’　　（ｉｉｌ）　　４Ｑ／
６０吉ｗイソ酪ｅＲ５０４６４０ｖ）　　５０／７ｏ吉
草酸／イソ酪［２３６７８（ｖ）　　６Ｑ／４０吉漏１
丸／イソ酪＃ｋ　　　　３４８　　　　　　４９実施例
　２ 培地Ｂの代ｆｉＫ以下の培地０ メ　　リ　　ト　−　ス　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　４５．０アルカソイ５０　　　　　１
８．８ 糖　　　蜜　　　　　　　　　　　２．２ｘ２ａｐｏ４
　　　ｏ、１８ Ｃａ００３　　　　ｔ８ シリコン１５２０　　　　　α６２５ を用いて実施例１０発＃金繰り返した。

これらの発酵を３５°の温度Ｋｖ１１節した。その場賛
物を５００　ｒｅｖ７分で奈盪しそして３Ｖ分で通気し
た。これらの発酵もまた以下の条件に付した。

中　−が７２〜７．４以上に上昇するのを妨ぐために１
０　％　Ｈ２８０ａ　ｔ　７７０　Ｌ　タ。１００ｍの
１０％）！２８０４をｐＨ！Ｉ＃１１！！！のために使
用した。発酵生産物を１３８時間目間口取した。

叩　ｐ）１をＺ２〜Ｚ４にｐ４整するため罠、適轟く添
加される吉草酸または１０％ＮａＯＨとともにイソｒＩ
６酸を２４〜１６２時間目から平間口、６５２ル斗でカ
ロえた。平均２．１７Ｆの春草１へ唄を使用しそして全
ｔ２．１ｆのＮａＯＨｆ使用した。

（Ｉｌｌ）　　ｐｉ（を１２〜７．４に調整するために
、過当に添加される春草ｅＲまたは１ｏ％ＮａＯＨとと
もにイソ酪酸を２４〜１６２時間目から平間口、７１ｆ
／Ｌ７日で加えた。平均４．４６ｆの春草ｉＭ／８を使
用しそして全量２．６ｆのＮａＯＨを使用した。

ＯＶ）　Ｐ）１を７．２〜７．４１Ｃ調整するために、
適当に添加される春草＃ＲまたはＮａ０１’ｉとともに
イソ酪酸を２４〜１６２時間目から平間口、５８ｔ／Ｌ
／日で加えた。平均５．１５　ｆの春草Ｍ／Ｂを使用し
そして全量５．ＯｆのＮａＯＨを使用した。

これらの発酵生産物を、特にことわらない限シ１６２時
間口に採取しそして式（Ｉ）の化合物の力価を以下のよ
うに測定した。

（Ｉ）　　Ｈ２ＢＯ４＝ノルマルｐｉｔ吻整　　　　　
４６０　　　　４６（Ｉ１）平均２．６３　ＦＩＬ１日
イソ酪散　　　　　８０４　　　　６９（ｉｉｉ）　　
平均５．７１　ｔ／Ｉ４／８イソｔ！６酸　　　　　７
１４　　　　５８０ｖ）　　平均４，５１３　ｆ／Ｌ／
Ｆ３イ／！！Ｉｔ！＋酸９２１　　　　７８実施例　３ ストレプトミセスシアネオグリセウスノンシアノゲヌス
ＮＲＲＬ　１５７７３の液体窒素菌株を、培地Ａ　（５
０ｄ）　ｔ−含有する２５〇−振盪フラスコに植え付け
るのに使用しそして２′直径の軌道動程を有して２５　
Ｏｒｐｍで作動する回転シェーカー上において２８℃で
２日間インキュベートシた。

上記の２日間生長した接種物の１一部分を、培地Ａ（５
０＋ｄ）を含有するさらに別の２５０−振盪フラスコに
植え付けるのに使用しそして前述のようにインキュベー
トした。

−まとめＫした、上記振盪フラスコで生長した接ａＩ物
の８０−を、培地Ｃ（４ｒ、）を含有する発酵槽（７Ｌ
）に植え付けるのく使用した。

上記発＃を５０℃の温度に調節した。その培養物を５０
０　ｒｅｖ７％で振盪しそして３Ｌ／分で通気した。こ
の発酵中に１８〜１６２時間目から５間口５０盲草酸／
イソ酪酸を加えることｋよシーを７４に調整した。

この発酵生産物を１６２時間目間口取して２５０　ｍｙ
ルの式山の化合物を得たが、こｎは生産された抗生物３
ｉ　８５４１化合物全量の８４％に相当した。

実施例　４ 培地Ａを用いて実施例１の各接極段階を行った。−まと
めＫした、振盪フラスコで生長した接ｍ物の８０−を、
以下の培地Ｄ　（４Ｌ）グルコース　　　　　　　　　
　２．５麦芽デキストリンＭＤ３０Ｂ　　　２５．０ア
ルカソイ５０　　　　　　　１２．５抛　　　蜜　　　
　　　　　　　　　　　　１．５に２ＨＰＯ４α１２５ ＣａＣＯ３１，２５ を含有する発酵槽（７りにｍ見付けるのに用いた。

この発酵は、培養物を振盪しく　５００　ｒｅｖｌｏ　
）そして通気（３し分）を行いながら２８℃で２４時間
実施された。

上記の２４時間生長したＭ：へ物の８００−を、培地Ｄ
　（４０Ｌ）を含有する発酵＠　（７０１，）に植え付
けるのに使用した。この発酵は、培養物を振盪しく　５
５０　ｒｅｖｌｏ　）そして通気（３０Ｌ／分）を行い
なから２８℃で２４時間実施された。

上記の２４時間生長した接種物の８００−を、発酵槽（
７０Ｌ）中において培地Ｂ　（４０Ｌ）　Ｉｃ植え付け
るのに使用した。

この発ｒ＃ｔ−３４℃の温度に調節した。この培誉物ヲ
微盪しく　５５０　ｒｅｖｌｏ　）、通気（４０Ｔ、＋
７分）を行いそしてｐｔ’ｔを約ｙ、４に′ｇ４整する
ために、適当に添加される１０％Ｈ２ＳＯ４および１０
％ＮａＯＨとともに５０１５０吉草酸／イソ酪＃ｋを２
１〜１１７時間目から平間口度１０−７時間で加えた。

発酵生産物１＆−１１７時間口に採取して９４４１９／
Ｌの式（Ｉ）の化合物を得たが、これは生産された抗生
物［８５４１化合物全量の７９％に相当した。

実施例　５ 培地Ａを用いて、実施例１の各接攬段階を行った。−ま
とめにした、振盪フラスコで生長した接種物の８０−を
、培地１）（４１）を含有する発酵槽に殖え付けるのに
使用した。培養物を振盪しく　５００　ｒｅｖｌｏ　）
、通気（４Ｌ１５）　）　’ｒ行いながら２８℃で２４
時間発酵を実施した。

上記の２４時間生長させた接種物の８００−を、培地（
Ｉ！　（４０Ｌ）を含有する発酵槽（７０Ｌ）に植え付
けるのに使用した。

この発酵温度を３４℃に調整した。発酵伯を振盪しく　
５５０　ｒｅｖＡ＋）、通気しく４０Ｌ／分）そして（
Ｉ１１８〜１６２時間目から６．６間口／１，７日の平
均速度で８０／２０吉草ｆＲ／イソ酪酸を加えるか、あ
るいは（２）１８〜１８６時間目から６間口９７Ｉ、７
日の平均速度で７５／２５吉草酸／イソ酪酸を加えるか
のいずれかによりｐｌｉｉ約ｚ５に調整した。

こｎらの発酵生産物をそれぞ０１６２時間目お間口１８
６時間目間口取して（Ｉ）生産された抗生’＠　買８５
　ａ　ｉ化合物全量の６１％に相当する５１０１ｇ／Ｌ
の式中の化合物または（２）生産された抗生物′ＡＳ５
４１化合物全量の７２％に相当する５１６ｍ９／Ｌの式
＋１）の化合物のいずれかを得た。

特許出願人　　グラクツ・グループ・リミテッド外２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表される化合物の製造において、１種またはそれ以上
   の脂肪酸および（または）これら酸の塩、エステルおよ
   びアミドの存在下に上記式（ I ）の化合物を生産する
   ことのできるストレプトミセス属の微生物を培養し、そ
   れにより式（ I ）の化合物を製造し、そして所望によ
   り該化合物を単離することからなる前記式（ I ）の化
   合物の製法。 ２）脂肪酸がイソ酪酸または吉草酸である特許請求の範
   囲第１項記載の方法。 ３）微生物をイソ酪酸（またはその塩）および吉草酸（
   またはその塩）の存在下で培養する特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ４）培地のｐＨを５．５〜７．５に調整するのに脂肪酸
   を加え、その後該ｐＨを上記範囲に維持することを特徴
   とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５）微生物がストレプトミセスサーモアルケンシス（Ｓ
   ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎ
   ｓｉｓ）種またはストレプトミセスシアネオグリセウス
   ノンシアノゲヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｙａ
   ｎｅｏｇｒｉｓｅｕｓｎｏｎｃｙａｎｏｇｅｎｕｓ）種
   のうちの１種である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６）微生物がストレプトミセスサーモアルケンシスＮＣ
   ＩＢ１２０１５、１２１１１、１２１１２、１２１１３
   もしくは１２１１４であるか、またはストレプトミセス
   シアネオグリセウスノンシアノゲヌスＮＲＲＬ１５７７
   ３であるか、またはこれら菌株のいずれかの変異体であ
   る特許請求の範囲第１項記載の方法。