JPH02257887A - ストレプトミセス属菌からの新規アングサイクリノンおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ストレプトミセス属の菌種が通常の培養条件下にオクロ
マイジノンと呼ばれるアングサイクリノンを合成するこ
とは知られている（ＢｏｗｉｅＪ、Ｈ，、Ｊｏｈｎｓｏ
ｎ　Ａ、Ｗ、　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ
ｅｒｓ　１６゜１４４９（１９６７））。

本発明によれば予想外なことにストレプトミセス種ＤＳ
Ｍ　４７６９が新規アングサイクリノンを産生ずること
が見出された。

すなわち、本発明は １、式Ｉ （式中、ａ）　Ｒ’およびＲ２はヒドロキシルであり、
ｂ’）　　Ｒ’はオキソ基でありそしてＲ２はヒドロキ
シルであり、または ｃ）　Ｒ’およびＲ２はオキソ基である）の化合物、 ２、ストレプトミセス種ＤＳＭ　４７６９を式Ｉの化合
物が培地中に蓄積されるまで培養し、次いで適当である
場合は該化合物を単離することからなる式■の化合物の
製造方法、 ３、治療活性を有する物質としての式Ｉの化合物の使用
、 に関する。

以下に、本発明を特にその好ましい実施態様について詳
記する。本発明はまた、特許請求の範囲にも定義されて
いる。

式Ｉの化合物はストレプトミセス種ＤＳＭ　４７６９を
用いて製造されうる。この菌株は１９８８年８月２６日
、ブダペスト条約の条件に従ってドイツ微生物および細
胞培養物保存機関（ＤＳＭ）（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　Ｓａ
ｍｍｌｕｎｇ　ｖｏｎ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅ
ｎｕｎｄ　Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ）に上述の番号で
寄託された。

ストレプトミセス種ＤＳＭ　４７６９は下記の特性を有
する。

胞子の色：　　　　赤色 胞子鎖：　　　　　密ならせん 胞子の表面：　　　平滑 メラニン形成：　　陽性 ストレプトミセス種ＤＳＭ　４７６９の代わりに、式Ｉ
の化合物を実際に産生できる限りその突然変異体および
変異体も使用することができる。このタイプの突然変異
体はそれ自体知られた方法で、物理的手法により例えば
紫外線もしくはＸ−線のようなな射線によりまたは例え
ばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）　、Ｎ−メチル−
Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジン（！ＪＮＮＧ）
もしくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン
（ＭＯＢ）のような化学的突然変異誘発物質により得る
ことができる。

好気的発酵に適当な好ましい炭素源は、同化可能な炭水
化物および糖アルコール例えばグルコース、ラクトース
またはＤ−マンニトール、並びに炭水化物含有自然産物
例えば麦芽エキスである。適当な好ましい窒素含有栄養
物はアミノ酸、ペグチドおよびタンパク質並びにそれら
の分解生成物例えばペグトンもしくはトリプトン、また
肉エキスそして例えばトウモロコシ、小麦、エントウ、
大豆もしくはコツトンプラントの粉砕種子、アルコール
製造時の蒸留残留物、ミートミールまたは酵母エキス並
びにアンモニウム塩および硝酸塩である。栄養溶液はそ
のほかに添加無機塩として例えばアルカリ金属またはア
ルカリ土類金属、鉄、亜鉛およびマンガンの塩化物、炭
酸塩、硫酸塩またはリン酸塩を含有してもよい。

式Ｉの化合物の製造は、全栄養溶液の重量を基準として
それぞれ０．５〜６％好ましくは２〜４％濃度のグリセ
ロールおよび０．１〜４％好ましくは０．５〜２％濃度
の大豆粉を含有する栄養溶液中で特によく行われる。

発酵は好気的に、すなわち例えば振盪フラスコまたは発
酵槽中で振盪または撹拌しながら適宜空気または酸素を
導入し、液内培養によって行われる。発酵は約１８〜４
０℃好ましくは約２５〜３０°Ｃ特に２８〜３０℃で行
うことができる。微生物は上述の条件で定常期に達する
まで約６０〜１２０時間好ましくは７０〜７５時間培養
される。

培養は数段階で実施するのが有利である。すなわち最初
に１種またはそれ以上の前培養液を液体栄養培地中で製
造し、次いで例えば１：１０の容量比で実際の生産培地
である主培地に移す。

前培養液は例えば胞子形成菌糸体を栄養溶液に移し、約
４８〜７２時間放置し生育させることにより得られる。

胞子形成菌糸体は、菌株を固形または液体栄養培地例え
ば酵母−麦芽寒天上に約７日間放置して生育させること
によって得ることができる。

発酵の進行は培養液にｐｎまたは菌糸体の容量により、
薄層クロマトグラフィーまたは生物学的活性の試験によ
って監視することができる。

一般式１のアングサイクリノンは培養プロス中に存在す
る。従って、この物質の単離は該培養ブロスから菌糸体
を例えばか過または遠心分離によって分離するのが便利
である。次いで式Ｉの化合物は上澄液から便宜的には２
〜８のｐＨ範囲好ましくは５〜７のｐＨ値で単離させる
ことができる。目的の物質は慣用の溶剤例えば極性溶剤
例えば低級アルカノールで抽出することができる。しか
しながら、液体を例えばポリスチレンを基にした吸着性
樹脂上に通過させるのが有利である。溶出は次いで極性
溶媒好ましくは低級アルカノール例えばメタノールまた
はメタノールと水の混合物を用いて行うことができる。

溶媒を溶出液から蒸留によって除去し、アングサイクリ
ノン含有の水性残留物を乾燥させることができる。

式Ｉの化合物すおよびＣは、化合物Ｉａから微生物学的
手法のみならず化学的手法によっても得ることができる
。このためには化合物Ｉａを溶媒例えばクロロホルム、
メチレンクロライド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル
または（Ｃ＋〜Ｃａ）−アルコール中に溶解し、空気を
加えるかまたは加えずにかつ光を排除して空気中におい
てｌ〜２０日間撹拌する。この反応の期間は反応混合物
中における空気の量に左右される。

化合物Ｉｂが尋終生成物として得られる。その後の反応
で、この得られた反応溶液を石英フラスコ中において１
２〜４８時間Ｕｖ光（３６６ｎｍ）で照射することによ
って式Ｉｃの化合物を製造することが可能である。

一般式Ｉのアングサイクリノンは無色、無定形の固形物
であって、メタノール、アセトン、ＤＭＳＯ、ジオキサ
ンおよびクロロホルムに易溶性であるが、水およびアル
カンには不溶性である。

一般式１の化合物はその安定性に適した製薬処方中に混
入させることができる。抗菌および抗ウィルス作用並び
に原生動物に対する・作用は、インビトロで寒天拡散試
験または細胞培養試験によって証明されることができる
。該化合物は特に５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ
ｒｅｕｓおよび５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏ
ｇｅｎｅｓ並びにアデノウィルス、Ｈ５ＶＩ＃よびＨ５
ＶＩ　Ｉウィルレス並びにＴｒｉｃｈｏｍｏ−ｎａｓ　
ｖａｇｉｎａｌｉｓ（プロトシア）に対してとりわけ良
好な作用を示す。

以下に本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。百
分率データは、これまでの記述と同様に重量を基準とす
る値である。

実施例　１ ａ）生産菌株の胞子懸濁液の製造 栄養溶液（酵母エキス４ｇ、麦芽エキス１０９、グルコ
ース４９、水道水ＩＬ滅菌前ｐＨ７，３）　１００ｍＱ
ｔ　５００ＴＲＱのエルレンマイヤーフラスコに取す、
ＤＳＭ　４７６９株を植菌し、回転振盪機上１２０ｒｐ
ｍｓ　２７℃で７２時間インキュベートする。次に、予
め寒天２０ｇ／　Ｑを加えて固化させＩ；上記組成の栄
養培地を含む５００ｍ１２のエルレンマイヤーフラスコ
に培養液体２０ｍ０を均一に分布させ、傾斜させる。

培養液を２７°Ｃで１０−１４時間インキュベートする
。

この時点で１個のフラスコ内に生成した胞子を、市販の
非イオン界面活性剤（Ｓｅｒｖａ社からのＴｒｉｔｏｎ
Ｘ　１００）　１滴を含む脱イオン水５００ｍ（ｌで洗
い出し、そのまますぐ次工程に使用するかまたは一２２
°Ｃに保存する。

ｂ）　　エルシンマイヤーフラスコ中での生産菌株の培
養液または前培養液の製造 ２％ミートミール、１０％麦芽エキス、１％炭酸カルシ
ウムに水を加えて１００％とした栄養溶液（オートクレ
ーブ殺菌前のｐＨ７，２）　１００ｍｆｆを含む５００
ｍ１２のエルレンマイヤーフラスコに、斜面管内で生育
させた培養菌体またはＤＳＭ　４７６９胞子の懸濁液０
．２１１Ｑを植菌し、振盪機中Ｊ２０ｒｐｍｓ　２７℃
でインキュベートする。７２時間後に最大抗生物質生産
に達する。同栄養溶液からの４８時間齢の液内培養液（
５％）がＩＯおよび１００１２発酵槽の植苗に十分であ
る。

実施例　２ アングサイクリノンの製造 ＤＳＭ　４７６９を植菌した１０Ｑの発酵槽を以下の条
件で操作する。

栄養培地： ３０ｇ／Ｑグリセロール ２９／Ｑカゼインペプトン １９／Ｑ　Ｋ、ＨＰｏ。

１９／　Ｑ　ＮａＣ４ ０，５９／　ｎ　Ｍｇ５Ｏａ　・７　ＨＩＯ２ａｎ／　
０＠量元素溶液 微量元素溶液；　　３　ｇ／　Ｑ　ＣａＣｆｆ＊　・２
　Ｈｔｏｌ　９／　Ｑ　ＦｅＣ＠０７Ｈ６ ０，２ｇ／　Ｑ　Ｍｎ５０゜ ０．１９／　Ｑ　ＺｎＣＱ。

０．０２５９／（ｌ　ＣＬＩＳＯ４−５Ｈｇ。

Ｏ，０２９／Ｑ　Ｎａ、Ｂ４０？　−１０Ｈ２００，０
０４９／Ｑ　　Ｃｏ０ｆｆ。

０．０１９／（ｌ　Ｎａ２ＭｏＯ４・　２　ＪＯインキ
ュベーション時時間ニア２問 撹拌器速度：　２５０ｒｐｍ 通気：空気４Ｑ／分 泡〕生成は、エタノール性ポリオール溶液の反復添加に
よって抑制できる。最大生産には約７０時間後に達する
（、）Ｈ−５．３）。

実施例　３ ａ）アングサイクリノンの単離 発酵槽内容物８１２を濾過し、炉液を引続いて６Ｑずつ
のメチレンクロライドで３回抽出する。

回転蒸発器中で濃縮後に残留しているシロップ（４ｇ）
をシリカゲル上でクロマトグラフィーにかける（溶離剤
ＣＨ（ｊ２，　：　ＭｅＯＨ　３０　：　１　）　。式
１の化合物が下記の割合で得られる。

ａ）　Ｒ”およびＲ２がーＯＨである化合物　　　　　
３３０１１１９ｂ）Ｒ’が＝０であり、Ｒ２が−ＯＨで
ある化合物　２２０ｍｇＣ）Ｒ’およびＲ２が＝Ｏであ
る化合物　　　　　２２０ｍｇｂ）　　Ｒ”が＝Ｏであ
りモしてＲ２が−ＯＨである式Ｉの化合物の製造 Ｒ１およびＲ２がともに−ＯＨである式Ｉの化合物５０
１１１９を光を排除した空気中においてメチレンクロラ
イドｌＯｍＱ中で２４日間撹拌する。溶媒を真空中で蒸
発し、残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーにか
ける（溶離剤ＣＨＣＱｓ／　ＭｅＯＨ：　３０　：１）
。所望の化合物４２１１１９が得られる。

Ｃ）式１の化合物すおよびＣの製造 石英フラスコ中においてＣＨ（４３（工業用）中におけ
るＲ１およびＲ２がともにＯＨである式Ｉａの化合物１
００ｍ９ｔ　ｔｌＶ光線（３６６ｎｍ）で２４時間照射
する。

回転蒸発器中で濃縮した後の残留物をシリカゲル上でク
ロマトグラフィーにかける（溶離剤ＣＨＣＱｓ／　Ｍｅ
ＯＨ３０：　ｌ　）　。Ｒ’が＝０でありモしてＲ２が
一０■である化合物ｒ　ｂ　７．３ｍｇおよびＲ１およ
びＲコがともに＝０である化合物 ■ ｃ　５３ｍｇが得られる。

’　３Ｃ−ＮＭＲ Ｒ’　　−０Ｈ Ｒ”　　−０Ｈ ６５，７ ４４，１ ６９，０ ４５，２ １３６，４ １３５，７ １２８，２ １３７，２ ６３，３ １２９，４ １５６，８ １１４，８ １２９，５ １２０，２ １４３，４ 式１の化合物 （ＣＤ０ｆｆ　、中の）　／ Ｒ’＝Ｏ Ｒ”　＝ＯＨ １９６，７ ５３，８ ７７，１５ ４４，１ １４６，４ １３３，６ １３５，２ １３５，０ １８１，１ １２０，３ １５９，９ １１７，３ １２９，８ １１９，５ １３７，７ ’Ｈ−ＮＩＪＲ（ＣＤＣＩ２ｓ中の） Ｒ’　　＝Ｏ Ｒ”　　＝０ ５．４ ２．２ １２　　　　１８７．５ １２Ａ　　　　Ｉ２８．２ １２Ｂ　　　　１４０．０ １３　　　　２９．１ １４　　　　５６．０ １８４．３ １３５．１ １３４．３ ２９．７　　　　　　　　　１．５ ５６．４　　　　　　　　　４．０５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ａ）Ｒ＾１およびＲ＾２はヒドロキシルであり
   、 ｂ）Ｒ＾１はオキソ基でありそしてＲ＾２はヒドロキシ
   ルであり、または ｃ）Ｒ＾１およびＲ＾２はオキソ基である）の化合物。 ２）ストレプトミセス菌種ＤＳＭ４７６９またはその突
   然変異体および変異体を前記式 I の化合物が培地中に
   蓄積されるまで培養し、次いで適当である場合は該化合
   物を単離することからなる請求項１記載の式 I の化合
   物の製造方 法。 ３）完全栄養溶液の重量を基準にしてそれぞれ０．５〜
   ６％のグリセロールおよび０．１〜４％の大豆粉を含有
   する栄養溶液中で微生物を培養する請求項２記載の方法
   。 ４）栄養溶液が２〜４％のグリセロールおよび０．５〜
   ２％の大豆粉を含有する請求項３記載の方法。 ５）培養を約１８〜４０℃で実施する請求項２〜４のい
   ずれかに記載の方法。 ６）治療活性を有する物質としての請求項１記載の式
   I の化合物の使用。 ７）式 I の化合物を抗生物質として用いる請求項６記
   載の使用。 ８）抗生物質を細菌、ウィルスおよび原生動物に対して
   用いる請求項７記載の使用。 ９）ストレプトミセス種ＤＳＭ４７６９並びに請求項１
   記載の式 I の化合物を合成するその変異体および突然
   変異体。 １０）ａ）請求項１に記載の化合物 I ａを溶媒中に溶
   解し、光を排除して培養して化合物 I ｂを得そして ｂ）前記ａ）で得た反応混合物をＵＶ光線で照射して化
   合物 I ｃを得ることからなる、請求項１記載の化合物
   I ｂおよび I ｃの製造方法。