KR100447423B1 - 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법 - Google Patents

세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100447423B1
KR100447423B1 KR1019960058829A KR19960058829A KR100447423B1 KR 100447423 B1 KR100447423 B1 KR 100447423B1 KR 1019960058829 A KR1019960058829 A KR 1019960058829A KR 19960058829 A KR19960058829 A KR 19960058829A KR 100447423 B1 KR100447423 B1 KR 100447423B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cysteine
cephalosporin
producing
kfcc
aminoethyl
Prior art date
Application number
KR1019960058829A
Other languages
English (en)
Other versions
KR19980039741A (ko
Inventor
길광훈
손영선
이근철
박종성
이경한
김해균
이철훈
Original Assignee
씨제이 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 씨제이 주식회사 filed Critical 씨제이 주식회사
Priority to KR1019960058829A priority Critical patent/KR100447423B1/ko
Publication of KR19980039741A publication Critical patent/KR19980039741A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100447423B1 publication Critical patent/KR100447423B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/745—Cephalosporium ; Acremonium
    • C12R2001/75—Cephalosporium acremonium ; Acremonium strictum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 세팔로스포리움 아크레모니움 (Cephalosporium Acremonium ; KFCC-10782)의 변이주로서 시스테인의 유사체인 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인에 대해 내성을 가지며 세팔로스포린 C 를 고농도로 생산할 수 있는 미생물 및 이 미생물을 이용하여 세팔로스포린 C 를 고수율로 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

세팔로스포린 C 생산 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C 의 제조방법
본 발명은 세팔로스포린 C 를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C의 제조방법에 관한 것이다. 좀더 구체적으로, 본 발명은 세팔로스포리움 아크레모니움(Cephalosporium Acremonium; KFCC-10782)의 변이주로서 시스테인의 유사체인 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인에 대해 내성을 가지며 세팔로스포린 C 를 고농도로 생산할 수 있는 미생물 및 이 미생물을 이용하여 세팔로스포린 C 를 고수율로 제조하는 방법에 관한 것이다.
미생물을 사용하여 세팔로스포린 C 를 생산하는 경우에는 대사경로중 세팔로스포린 C 의 생산을 위해 시스테인이 요구되는 것으로 알려져 있다. 즉, 세팔로스포리움 아크레모니움에 의해 생성되는 세팔로스포린 C 의 황 원자는 시스테인으로부터 유래된 것이며, 시스테인은 메티오닌으로부터 reverse transsulfuration 과정을 통해 생성된다(참조: Nuesch et al, 1973). 따라서, 종래의 세팔로스포린 C 생산방법에서는 시스테인의 전구물질인 메티오닌을 배지에 첨가해 주었으며, 이 경우 배지에 첨가되는 D, L-메티오닌이 차지하는 비용이 전체 배지비용의 10% 정도로서매우 높은 문제점이 있었다.
이에 본 발명자들은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자 다각도로 연구하였으며, 그 결과 세포 내 시스테인 합성을 억제하며 생육을 저해하는 o-메틸-DL-세린, α-메틸-DL-세린, D-글루코오스-L-시스테인, (S)-2-아미노에틸-L-시스테인 등의 시스테인 유사체에 내성을 가지는 변이주들 중 세팔로스포린 C 를 고농도로 생산하는 미생물을 분리하는데 성공하여 본 발명을 완성하게 되었다. 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 세팔로스포리움 아크레모니움의 변이주로서 시스테인의 유사체인 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인에 대해 내성을 가지며 세팔로스포린 C 를 고농도로 생산할 수 있는 미생물에 관한 것이다. 특히, 본 발명에 따른 변이주는 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인에 대하여 0.5% 이상의 농도에서도 내성을 나타낸다.
본 발명에 따른 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인 내성주를 얻기 위하여 본 발명자들은 먼저 친주인 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC-10782 균주를 자외선 조사, N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘(NTG) 등의 변이 유발제로 통상의 방법에 따라 처리한 후, (S)-2-아미노에틸-L-시스테인이 5 내지 20mg/㎖ 의 농도로 함유되어 있는 액체 또는 한천배지(포도당 10g/ℓ, 아스파라긴 1g/ℓ, 황산마그네슘 0.5g/ℓ, 인산 제 1칼륨 0.5g/ℓ, 인산 제 2 칼륨 1g/ℓ, pH 7.0)에서 7 내지 10 일간 배양하였다. 이 배지조성에서는 대부분의 균주가 생육할 수 없으며 시스테인 유사체에 대해 높은 내성을 갖는 균주만이 생육가능하므로 친주에 비해 시스테인 유사체의 최소저해농도(Minimum Inhibitory Concentration : MIC)가 2 배 이상 되는 변이주를 얻을 수 있었으며, 이 변이주들 중에서 세팔로스포린 C 를 친주에 비해 10% 정도 고농도로 생산할 수 있는 균주를 선별하였다. 본 발명자들은 이에 따라 선별된 변이균주를 세팔로스포리움 아크레모니움 C2 라 명명하고 1996 년 11 월 19 일자로 사단법인 한국종균협회에 기탁하여 KFCC-10933 의 기탁번호를 부여받았다. 본 발명에 따른 변이주 KFCC-10933 의 균학적 성질은 세팔로스포린 C 생산성 및 시스테인 내성을 제외하고는 친주의 성질과 동일하다. 하기 표 1 에는 본 발명에 따른 세팔로스포리움 아크레모니움 C2 균주의 (S)-아미노에틸-L-시스테인에 대한 내성을 친주인 KFCC-10782 와 비교하여 나타내었으며, 표 2 에는 세팔로스포리움 아크레모니움 C2 의 D,L-메티오닌 농도 변화에 따른 세팔로스포린 C 생성능을 나타내었다.
표 1. (S)-아미노에틸 시스테인에 대한 내성 비교
주) 사용배지: 한천배지
+ : 생육, - : 생육하지 못함
표 2. D,L-메티오닌 농도변화에 따른 세팔로스포린 C 생성능 비교
주) 세팔로스포린 C 의 생성확인은 발효배지를 500㎖ 용량의 배양용 삼각 플라스크에 22㎖ 분주하고 살균 및 식균한 다음 25℃에서 230rpm으로 7 일간 진탕배양함으로서 이루어졌다.
한편, 본 발명은 상기 설명한 바와 같은 성질을 갖는 본 발명의 변이주를 시스테인 유사체인 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인의 농도가 0.5% 이상인 조건에서 배지중에서 배양하여 세팔로스포린 C 를 고수율로 제조하는 방법에 관한 것이다.
이때, 배지로는 주성분으로서 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분, 콘스팁리커를 함유하는 것을 사용하는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기위한 것일 뿐 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
하기 표 3 의 1 차 종배지를 50㎖씩 500㎖ 용량의 진탕용 삼각 플라스크에 가하고 살균한 후, 균주를 식균하여 3℃, 220rpm 의 조건하에 90 내지 96 시간동안1 차 종배양하였다. 하기 표 4 의 2차 종배지를 7ℓ용량의 시험용 발효조에 각각 5ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균, 냉각시킨 후 1 차 종배양에서 얻은 배양 원료액을 15㎖씩 접종하였다. 매 분당 0.5 내지 1.0ℓ의 속도로 공기를 공급하면서 3℃, 600 내지 900 rpm 의 조건하에 80 내지 90 시간동안 종배양하였다.
하기 표 5 의 발효배지를 30ℓ용량의 시험용 발효조에 19.4ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균, 냉각한 다음 2 차 종배양액을 1.6ℓ씩 접종하였다. 공기를 매 분당 0.5 내지 1.0ℓ의 속도로 공급하면서 300 내지 600rpm, 25 내지 30℃ 의 조건하에 배양하였다. 배양중 잔존 혼합오일 농도가 4 내지 5%로 되면 살균된 혼합오일을 수시로 공급하였다. 추가된 혼합오일과 초기에 발효배지에 첨가된 혼합오일의 합계가 발효액량 대비 12 내지 17%로 될 때까지 계속 배양하였다. 배양 중 pH는 암모니아수를 사용하여 5.0 내지 6.0으로 조절하였다. 배양 완료후 CPC의 농도는 공지의 균주 KFCC-10782 가 40.2g/ℓ이고 본 발명에 따른 신규 변이주 세팔로스포리움 아크레모니움 C2(기탁번호: KFCC-10933)가 44.8g/ℓ이었다.
표 3. 1차 종배지 조성
표 4. 2차 종배지 조성
표 5. 발효배지의 조성
실시예 2
사용균주, 1차 및 2차 종배지, 발효배지 조성 및 배양방법을 실시예 1에서와동일하게 실시한 결과, 배양완료 후 세팔로스포린 C 의 농도는 KFCC-10782 균주의 경우 39.5g/ℓ이고 본 발명에 따른 세팔로스포리움 아크레모니움 C2 (기탁번호:KFCC-10933)의 경우 44.2g/ℓ이었다.
상술한 바와 같이 본 발명에 따른 미생물은 시스테인에 대한 내성을 가지게되어 세팔로스포린 C 생산 농도가 향상되는 사실이 확인되었다.

Claims (3)

  1. 세팔로스포리움 아크레모니움(Cephalosporium acremonium; KFCC-10782)의 변이주로서 시스테인의 유사체인 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인에 대해 내성을 가지며 세팔로스포린 C 를 고농도로 생산할 수 있는 세팔로스포리움 아크레모니움(Cephalosporium acremonium) C2(기탁번호:KFCC-10933).
  2. 제 1 항의 세팔로스포리움 아크레모니움(Cephalosporium acremonium) C2(기탁번호:KFCC-10933)을 (S)-2-아미노에틸-L-시스테인의 농도가 0.5% 이상인 조건에서 배지중에서 배양하여 세팔로스포린 C 를 제조하는 방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분 및 콘스팁리커를 함유하는 배지중에서 배양하는 방법.
KR1019960058829A 1996-11-28 1996-11-28 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법 KR100447423B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019960058829A KR100447423B1 (ko) 1996-11-28 1996-11-28 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019960058829A KR100447423B1 (ko) 1996-11-28 1996-11-28 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR19980039741A KR19980039741A (ko) 1998-08-17
KR100447423B1 true KR100447423B1 (ko) 2004-11-03

Family

ID=37362462

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019960058829A KR100447423B1 (ko) 1996-11-28 1996-11-28 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100447423B1 (ko)

Also Published As

Publication number Publication date
KR19980039741A (ko) 1998-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH03232497A (ja) 発酵法によるｌ―グルタミンの製造方法
SU1435159A3 (ru) Способ получени L-карнитина
DK165124B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse
EP0745679B1 (en) A method for producing L-isoleucine with a fermentation process and L-homoserine as the sole nitrogen source
KR100447423B1 (ko) 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법
US3700558A (en) Production of l-tryptophan by fermentation
US4729952A (en) Process for producing L-glutamic acid by fermentation
KR0134131B1 (ko) 세파로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세파로스포린 c의 제조방법
KR960004035B1 (ko) 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법
US7456010B2 (en) Microorganism producing 5′-xanthylic acid
KR0146493B1 (ko) 발효법에 의한 l-알라닌의 제조 방법
Igarashi et al. Excretion of L-tryptophan by analogue-resistant mutants of Pseudomonas hydrogenothermophila TH-1 in autotrophic cultures
KR100280189B1 (ko) 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법
US4322498A (en) Citric acid producing mutant yeast strains
KR100317901B1 (ko) 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법
KR100317902B1 (ko) 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법
US4699883A (en) Process for producing N-acylneuraminate aldolase
KR100317951B1 (ko) 세팔로스포린c생산 신규한 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법
KR920005975B1 (ko) 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법
KR100671081B1 (ko) 이노신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법
KR100446110B1 (ko) 세팔로스포린 c 생산 미생물
KR900007945B1 (ko) 글루타민산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법
KR900007944B1 (ko) 글루타민산올 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법
US3024169A (en) Process for the production of penicillin
KR960004037B1 (ko) 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20080626

Year of fee payment: 5

LAPS Lapse due to unpaid annual fee