KR960004037B1 - 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 - Google Patents

세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 Download PDF

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Abstract

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Description

세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C의 제조방법
본 발명은 세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 C의 제조방법에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10679의 변이주로서 이온인 수은에 내성을 가지며 주성분이 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분, 콘스팁리커인 배지에서 배양시 세팔로스포린 C를 고농도로 생산할 수 있는 미생물에 관한 것이다.
종래 미생물을 이용하여 세팔로스포린 C를 고농도로 생산하는 방법의 경우 배지원료에 극미량으로 존재하는 Fe++, Cu++, Hg++, As++등의 농도변화에 따라 세팔로스포린 C의 생산성에 영향을 미치는 문제점이 있었다.
본 발명자 등은 상기 지적된 문제점을 제거하여 어떠한 원료나 생산방법을 사용하더라도 항상 세팔로스포린 C를 고농도로 생산할 수 있는 방법으로 상기 중금속이온의 독성을 중화시키기 위해 세팔로스포린 C를 고농도로 생산하는 중금속 내성주를 변이처리한 결과 본 발명을 완성하였다. 즉, 본 발명의 미생물은 중금속이온 존재하에서도 생육할 수 있는 수단으로 고농도의 세팔로스포린 C를 생산하여 중금속이온의 독성을 중화시키는 특징으로 가진 미생물이다.
본 발명의 미생물은 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10679를 친주로 하여 자외선 조사, N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘(NTG)등의 변이 유발제로 통상적인 방법에 따라 처리한 후 염화수은이 3-30㎍/ml의 농도로 함유되어 있는 액체 또는 한천배지(포도당 10g/L, 아스파라긴 1g/L, 황산마그네슘 0.5g/L, 인산제1칼륨 0.5g/L, 인산제 2 칼륨 1g/L, pH 7.0)에서 7-10일간 배양하였다. 이때 대부분의 균주들은 염화수은의 농도가 높아 생육할 수 없으며 중금속이온에 대해 내구성이 높은 균주는 생육이 가능하므로 친주에 비해 중금속이온의 최소저해농도(Minimum Inhibitory Concentration : MIC)가 2배 이상되는 변이주를 얻을 수 있었고 이 내성주들 중에서 세팔로스포린 C의 생상성이 향상된 염화수은 내성주 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10785을 1992년 11월 3일 한국종균협회에 기탁하였다. 상기 균주들의 균학적 성질은 중금속이온 내성 및 세팔로스포린 C의 생산성을 제외하고는 친주의 그것과 동일하다.
본 발명 미생물의 특성은 다음의 표에 기재된 바와 같다.
[표 1] 염화수은 농도에 대한 내성 비교
〈주〉 사용배지 ; 한천배지
+ ; 생육, - ; 생육치 못함.
이하 본 발명을 다음의 실시예에서 좀더 구체적으로 설명한다.
[실시예 1]
· 사용균주 : 본 발명 미생물(KFCC 10785)
· 1차 종배지 : 대두분 3.0%, 콘스팁리커 0.75%, 설탕 2.5%, 포도당 1.0%, 탄산칼슘 0.5%, 소포제 0.15%, pH 7.0
· 2차 종배지 : 대두분 3.0%, 땅콩분 3.0%, 콘스팁리커 1.5%, 설탕 2.5%, 포도당 1.0%, 탄산칼슘 0.5%, 소포제 0.15%, pH 6.9
· 발효배지 : 이성화액당 4.5%, 혼합오일 7.0%, 땅콩분 2.5%, 콘스트립커 3.5%, 콘밀 1.5%, 글루텐밀 3.0%, D,L-메타오닌 0.75%, 황산칼슘 1.0%, 탄산칼슘 2.5%, 소포제 0.1%, pH 6.9
· 1차 종배양 : 1차 종배지를 50ml 씩 500ml용량의 진탕용 삼각플라스크에 넣고 살균후 균주를 식균하여 30℃에서 220rpm으로 90-96시간 진탕배양 하였다.
· 2차 종배양 : 2차 종배지를 7ℓ용량의 시험용 발효조에 각 5ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균 냉각후 1차 종배양에서 얻은 배양 완료액을 15㎖씩 접종한 다음, 공기를 매분당 0.5-1.0ℓ 공급하면서 600-900rpm으로 30℃에서 80-90시간 배양하였다.
· 발효방법 : 상기 발효배지를 30ℓ용량의 시험용 발효조에 19.4ℓ씩 분주하고 121℃에서 30분간 살균, 냉각하여 2차 종배양액을 1.6ℓ씩 접종한 후 공기를 매분당 0.5-1.0ℓ 공급하면서 300-600rpm으로 25-30℃로 배양하였다. 배양중 잔존 혼합오일 농도가 4-5%가 되면 살균된 혼합오일을 수시로 공급하였다.
추가된 혼합오일과 초기에 발효배지에 첨가된 혼합오일의 합계가 발효액량 대비 12-17%가 될 때까지 계속 배양하였다. 배양중 pH는 암모니아수를 사용하여 5.0-6.0으로 조절하였다. 배양완료후 세팔로스포린 C의 농도는 KFCC 10679가 36.2g/L, KFCC 10783가 40.3g/L이었다.
상술한 바와 같이 본 발명의 미생물은 통상은 세팔로스포린 C의 발효시에 사용되는 원료 등을 사용할 수 있고 어떠한 원료를 사용하더라도 고농도로 세팔로스포린 C를 생산할수 있는 특징이 있는 것이다.

Claims (2)

  1. 중금속이온인 염화수은 농도가 20㎍/ml이상인 조건에서도 생육할 수 있는 세팔로스포린 C를 생산하는 미생물 세팔로스포리움 아크레모니움 KFCC 10785.
  2. 제 1 항의 미생물을 이성화액당, 혼합오일, 땅콩분, 콘스팁리커 등이 함유된 배지에서 배양하여 세팔로스포린 C를 채취하는 것을 특징으로 하는 세팔로스포린 C의 제조방법.
KR1019920027568A 1992-12-31 1992-12-31 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 KR960004037B1 (ko)

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