FI78733B - Foerfarande foer framstaellning av cefalosporin-c. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av cefalosporin-c. Download PDFInfo
- Publication number
- FI78733B FI78733B FI840838A FI840838A FI78733B FI 78733 B FI78733 B FI 78733B FI 840838 A FI840838 A FI 840838A FI 840838 A FI840838 A FI 840838A FI 78733 B FI78733 B FI 78733B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cephalosporin
- phosphite
- deacetylcephalosporin
- fermentation
- added
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
1 78733
Menetelmä kefalosporiini-C:n valmistamiseksi Tämä keksintö koskee uutta menetelmää kefalosporiini-C :n valmistamiseksi viljelemällä ravintoliuoksessa mik-5 ro-organismia Cephalosporium acremonium, joka tuottaa ke falosporiini-C : tä ja myös ei-toivottavaa deasetyylikefalo-sporiini-C:tä. Tässä menetelmässä ravintoliuokseen lisätään fosforiyhdisteitä, joiden on havaittu suuresti ehkäisevän deasetyylikefalosporiini-C-epäpuhtauden syntymistä, 10 minkä vuoksi ne parantavat kefalospriini-C:n saantoa fer-mentointiliemestä ja sen myöhempää konversiota 7-aminoke-falosporiinihapoksi (7-ACA).
Kefalosporiini-C £3-asetoksimetyyli-7^-(D-5-ami-no-5-karboksipentaaniamido)kef-3-eemi-4-karboksyylihappc^ 15 on yhdiste, joka sen lisäksi, että sillä sellaisenaan on jonkin verran antibioottista aktiivisuutta, on ensiarvoisen tärkeä lähtöaine puolisynteettisten kefalosporiinianti-bioottien valmistamiseksi. Siten kefalosporiini-C voidaan konvertoida tunnetuilla menetelmillä 3-asetoksimetyyli-20 7/6 -aminokef-3-eemi-4-karboksyylihapoksi (7-ACA), jota käytetään sitten avain-välituotteena valmistettaessa lukuisia kaupallisia kefalosporiini-antibiootteja.
Tiedetään, että kefalosporiini-C:tä voidaan saada fermentoimalla erilaisia mikro-organismeja, joihin lukeu-25 tuu erityisesti suvun Emericellopsis-Cephalosporium sienet.
Esimerkkejä kefalosporiini-C:tä tuottavista mikro-organismeista ovat Cephalosporium'in alkuperäinen Brotzu-kanta, so. Cephalosporium sp. I.M.I. 49137 (ATCC 11550), ja sen mutantit, kuten mutanttikanta 8650 (ATCC 14553), jota ku- 30 vataan GB-patenttijulkaisussa 1 109 362; Cephalosporium sp. I.B.I. 1131, jota kuvataan GB-patenttijulkaisussa 1 503 851; ja Cephalosporium sp. kanta F. 12 (ATCC 20339), jota kuvataan GB-patenttijulkaisussa 1 400 433. Muita esimerkkejä kefalosporiini-C:tä tuottavista organismeista, 35 joita on mainittu kirjallisuudessa, ovat Cephalosporium polyauleurum Y-505 (FERM-P no. 1160), jota kuvataan GB-patentti julkaisussa 1 488 822; Cephalosporium acremonium K-121 (ATCC 20427) ja Cephalosporium acremonium N-75 2 78733 (ATCC 20428), joita kuvataan GB-patenttijulkaisussa 1 488 821; ja Cephalosporium polyauleurum 199 (ATCC 20359) ja sen mutantti, joka on identifioitu Y-505:ksi (ATCC 20360), kuvattu GB-patenttijulkaisussa 1 389 714.
5 Kefalosporiini-C:tä valmistetaan yleisesti teolli sessa mitassa käyttämällä runsastuottoista Cephalosporium acremonium'in mutanttikantaa (tunnetaan myös nimellä Ac-remonium chrysogenum). Esimerkkejä sellaisista mutanteista ja menetelmistä niiden valmistamiseksi on laajalti kuvattu 10 kirjallisuudessa.
Huolimatta perusteellisesta tutkimuksesta vuosien aikana, kefalosporiini-C;n tuottaminen fermentaatiolla kaupallisessa mitassa ei vielä ole täysin tyydyttävää. Useimmat kefalosporiini-C:tä tuottavat mikro-organismit, erityi-15 sesti runsastuottoiset kannat, joita käytetään kaupallisessa tuotannossa, johtavat siihen, että samanaikaisesti syntyy merkittävä osuus deasetyylikefalosporiini-C:tä, epäpuhtautta, joka on äärimmäisen vaikea erottaa halutusta, ke-falosporiini-C-tuotteesta sen samanlaisten kemiallisten ja 20 fysikaalisten ominaisuuksien vuoksi. Deasetyylikefalospo- riini-C:n läsnäolo noin 15 %:n määrinä fermentoinnin aikana muodostuneen kefalosporiinituotteen kokonaismäärästä johtaa siihen, että saadaan kefalosporiini-C:tä (tai taval-; lisemmin sen liuotin-uutettavaa johdannaista), joka on 25 kontaminoitunut deasetyylikefalosporiini-C:llä (tai sen johdannaisella). Lisäksi koska teollisessa mitassa kefalo-sporiini-C: tä (tai sen johdannaista) ei tavallisesti puhdisteta ennen seuraavaa konversiota 7-ACA:ksi, deasetyylikefalosporiini-C: n samanaikainen muodostuminen fermentointi-30 liemessä vaikuttaa haitallisesti myös 7-ACA-tuotteen laa tuun .
Aikaisempi kefalosporiini-C:n tuotantoon liittyvä tekniikan taso koskee pääasiallisesti uusien mikro-organismien löytymistä, joiden kefalosporiini-C:n tuotanto on kor-35 keampi, ja fermentointi-lisäaineita, jotka kasvattavat kefalosporiini-C: n tuotantoa. Siten on kehitetty esimerkiksi Cephalosporium acremonium'in mutanttikantoja, jotka tuottavat oleellisesti suurempia saantoja kefalosporiini-C:tä.
3 78733
On ehdotettu, että lisättäisiin erilaisia lisäaineita kasvualustaan kefalosporiini-C:tä tuottavan organismin fer-mentoinnin aikana kefalosporiini-C:n saannon kasvattamiseksi. Niinpä rikkiyhdisteiden, kuten natriumsulfiitin, 5 natriummetabisulfiitin, natriumtiosulfaatin, natriumvety- sulfiitin, natriumtiosulfaatin ja natriumsulfaatin käyttö esitetään GB-patenttijulkaisussa 820 422; metioniinin, kal-siumkloridin, magnesiumkloridin, ammoniumsulfaatin ja tiettyjen hiilihydraattien, öljyjen ja rasvahappojen käyttö 10 esitetään GB-patenttijulkaisussa 938 755? norvaliinin ja norleusiinin käyttö esitetään GB-patenttijulkaisussa 975 393? fenyylietikkahapon käyttö esitetään GB-patentti-julkaisussa 975 394? ja S-kaprolaktaamin, 2-butanonin, sekundäärisen butyylialkoholin ja 1,3-butaanidiolin käyttö 15 esitetään GB-patenttijulkaisussa 1 503 851.
Deasetyylikefalosporiini-C:n yhtäaikaisen muodostumisen ongelmaa on käsitelty vain esittämällä mikro-organismeja, jotka tuottavat suurempia osuuksia kefalosporii-ni-C:tä, tai uuttamis- ja eristämismenetelmien keinoin 20 (esim. US-patenttijulkaisu 4 059 573).
Deasetyylikefalosporiini-C havaittiin ensi kertaa Cephalosporium acremonium'in viljelysuodoksissa. Abraham et ai. esittävät, että tämän aineen muodostuminen johtui kefalosporiini-C:n entsymaattisesta deasetylaatiosta : 25 ^Biochem. J. 81 (1981), ss. 591 - 59^7. Sen jälkeen este- raasientsyymejä, jotka kykenevät deasetyloimaan kefalosporiini-C :tä, on eristetty erilaisista lähteistä, esimerkiksi sitrushedelmistä, bakteereista, aktinomykeeteistä, vehnän alkioista, nisäkkään maksasta ja munuaisista ja 30 Rhodotorulasta. Pisano et ai. raportoivat julkaisussa
Develop. Ind. Microbiol. 8 (1967), ss. 417 - 423, että es-teraasiaktiivisuutta on laajalti suvussa Cephalosporium. Suurimmalla osalla näistä asetyyliesteraasientsyymeistä näyttää olevan laajat substraattitoleranssit? so. /3-naft-35 yyliasetaatti ja triasetiini ovat aktiivisia substraatteja, ja niiden aktiivisuus kefalosporiini-C:tä kohtaan ei vaikuta ainutlaatuiselta.
4 78733
Nuesch et al., Second International Symp. on Genetics of Industrial Micro-orgamisms, Proc. 1976, toim. McDonald K. D., New York, Academic Press, ss. 451 - 472, ja Fujisawa et al., Agr. Biol. Chem. 39(6) (1975), ss. 1303 5 - 1309, ovat toisistaan riippumatta puhdistaneet osittain kefalosporiini-C-esteraasisaktiivisuutta solun ulkopuolisesta Cephalosporium acremonium'in kasvualustan supernatan-tista, ja he päättelivät, että entsyymiaktiivisuuden läsnäolo aiheutti osittain deasetyylikefalosporiini-C:n läsnä-10 olon C. acremonium-fermentoinneissa. Samanlaista esteraa-siaktiivisuutta on havaittu kefalosporiini-C:tä tuottavassa Streptomycetes-suvun Streptomyces clavuligerus-kannassa ^Antimicrob. Agents Chemother. 1 (1972), ss. 237 - 241^. Huber, julkaisussa Appi. Microbiol. 16(7) (1968), ss. 1011 15 -1014, on kuitenkin esittänyt todisteita, että fermentoin- tiprosessin aikana deasetyylikefalosporiini-C:n muodostus johtyy kefalosporiini-C:n ei-entsymaattisesta hydrolyysis-tä. Tämän keksinnön tekijöiden mielipide on, että deaset-yylikefalosporiini-C:n muodostuminen johtuu sekä entsymaat-20 tisesta että ei-entsymaattisesta hydrolyysistä, ja entsy-maattisen asetyyliesteraasiaktiivisuuden merkitys on huo-mättävä.
Liersch et al., Second International Symp. on Ge-·." netics of Industrial Micro-organisms, Proc. 1976, toim.
25 McDonald, K. D., New York, Academic Press, ss. 179 - 195; :· ja Felix et al., FEMS Microbiol. Lett. 8 (1980), ss. 55 - 58, ovat osoittaneet, että deasetyylikefalosporiini-C on myös solun sisäinen välituote kefalosporiini-C:n biosynteesissä deasetoksikefalosporiini-C:stä.
30 Cephalosporium acremonium'ista saadun osittain puh distetun asetyyliesteraasin entsyymiaktiivisuuden ilmoitettiin inhiboituvan di-isopropyylifluorifosfaatilla, esteraa-sien tunnetulla inhibiittorilla £Agr. Biol. Chem. 39(6) *: (1975), ss. 1303 - 1309^. Tämän fosforiasetyyliesteraasi- 35 inhibiittorin hyvin suuri myrkyllisyys ja korkea hinta estävät kuitenkin sen käyttöä kefalosporiini-C:n kaupallisessa ·’ tuotannossa.
5 78733
Kefalosporiini-C:n amfoteerisen luonteen takia se konvertoidaan tavallisesti johdannaisekseen siten, että se voidaan helpommin saada talteen fermentointiliemestä liuo-tinuuttomenetelmillä. Esimerkkejä sellaisista johdannaisis-5 ta on annettu GB-patenttihakemuksessa 2 021 640Ά. Yhtä erityisen edullista menetelmää on kuvattu US-patenttijulkaisussa 3 573 296. Tällaisella edullisella menetelmällä saatu kefalosporiini-C-johdannainen voidaan saada talteen kiteisenä bis-sykloheksyyliamiinisuolana, kuten on esitetty 10 US-patenttijulkaisussa 3 830 809. Kefalosporiini-C tai sen johdannainen, joka on saatu talteen fermentointiliemestä, lohkaistaan sitten tavanomaisella menetelmällä, esim. US-patentti julkaisussa 3 932 392 kuvatulla menetelmällä 7-ACA:n saamiseksi.
15 Kuten edellä on mainittu, deasetyylikefalosporiini- C-epäpuhtaudella, jota saadaan tyypillisesti fermentoinnin aikana noin 15 % kefalosporiinirakenteen kokonaismäärästä (kefalosporiini-C ja deasetyylikefalosporiini-C), on hyvin samanlaiset kemialliset ja fysikaaliset ominaisuudet kuin 20 halutulla kefalosporiini-C-tuotteella. Kun kefalosporiini konvertoidaan liuotin-uutettavaksi johdannaiseksi, deaset-yylikefalosporiini-C konvertoituu sen vuoksi samanlaiseksi johdannaiseksi ja eristetty kefalosporiini-C-johdannainen on sitten kontaminoitunut deasetyylikefalosporiini-C-joh-25 dannaisella. Siksi voidaan havaita, että kun vähennetään sen kefalosporiinirakenteen määrää, joka saadaan deasetyyli-kefalosporiini-C:nä, saadaan puhtaampaa kefalosporiini-C-johdannaista. Koska tätä johdannaista ei tavallisesti puhdisteta ennen konversiota 7-ACA:ksi, pienemmät määrät de-30 asetyylikefalosporiini-C:tä fermentointiliemessä johtavat myös parempaan 7-ACA-tuotteen laatuun.
Tämä keksintö kohdistuu menetelmään, jossa käyte-- - tään määrättyjä fosforiyhdisteitä, jotka toimivat deasetyy likefalosporiini-C: n tuotannon inhibiittoreina kefalospo-35 riini-C:n fermentoinnin aikana. Tuloksena olevassa fermentointiliemessä on merkittävästi suurempi osuus kefalospo-riini-C:tä verrattuna deasetyylikefalosporiini-C:hen, ja näin paranee saadun kefalosporiini-C-tuotteen laatu ja edel- 6 78733 leen lopullisen 7-ACA-välituotteen laatu, jota valmistetaan tällaisesta kefalosporiini-C-tuotteesta.
Tämä keksintö koskee menetelmää kefalosporiini-C:n valmistamiseksi aerobisella kefalosporiini-C:tä ja deaset-5 yylikefalosporiini-C:tä tuottavien Cephalosprium acremo- nium-mikro-organismien submerssiviljelyllä, jolloin deaset-yylikefalosporiini-C:n muodostumisen ehkäisemiseksi ravintoliuokseen lisätään fosforiyhdistettä, jolla on kaava 14 o io iro r4o .o \ 3 \ ^ ”5
P-OR , P^ tai HoP-0R
2 / 5 / \ 6 2 RO R°0 R
(I) (II) (III) 12 3 15 jossa R , R ja R toisistaan riippumatta merkitsevät 4 5 alempaa alkyyliä, R ja R toisistaan riippumatta merkitsevät vetyä, alempaa alkyyliä, bentsyyliä tai fenyyli ja R^ on vety, alempi alkyyli tai alempi alkanoyyli, pitoisuutena noin 100 - 3000 ppm.
20 Alemmalla alkyylillä ja alemmalla alkanoyylillä tarkoitetaan 1-4 hiiliatomia sisältäviä alkyyli- ja al-kanoyyliryhmiä.
Edellä määritellyt fluoriyhdisteet vähentävät tehokkaasti deasetyylikefalosporiini-C:n muodostumista ke-25 falosporiini-C:n fermentaatiotuotannon aikana. Lisäksi nämä yhdisteet ovat oleellisesti vähemmän myrkyllisiä kuin di-isopropyylifluorifosfaatti, ja yleisesti suhteellisen halpoja, mikä mahdollistaa niiden käytännöllisen hyödyntämisen suurimittaisessa kefalosporiini-C-tuotannossa.
30 Tämän keksinnön mukainen menetelmä on käyttökel poinen mihin tahansa fermentointimenetelmään kefalosporiini-C: n valmistamiseksi, edellyttäen, että käytetään kefalosporiini-C :tä tuottavaa mikro-organismia, joka tuottaa myös deasetyylikefalosporiini-C:tä fermentointiliemessä. Mo-35 nia esimerkkejä tällaisista mikro-organismeista on kuvattu kirjallisuudessa, esim. GB-patenttihakemuksessa 2 060 610A. Muista kefalosporiini-C:tä tuottavista mikro-organismeista 7 78733 voidaan deasetyylikefalosporiinin-C:n tuotanto helposti testata alalla hyvin tunnetuilla tavanomaisilla kokeilla.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettävä kefa-losporiini-C:tä tuottava mikro-organismi on Cephalosporium 5 acremonium (tunnetaan myös nimellä Acremonium chrysogenium), joka tuottaa sekä kefalosporiini-C:tä että deasetyylikefa-losporiini-C:tä. Tyypilliset Cephalosporium acremonium'in tuotantokannat tuottavat noin 15 % kefalosporiinituottei-den kokonaismäärästä (kefalosporiini-C ja deasetyylikefalo-10 sporiini-C) deasetyylikefalosporiini-C:tä.
Keksinnön mukainen menetelmä suoritetaan mielellään viljelemällä kefalosporiini-C:tä tuottavaa mikro-organismia (joka kykenee tuottamaan sekä kefalosporiini-C:tä että deasetyylikefalosporiini-C:tä) aerobisissa olosuhteis-15 sa, edullisesti submerssivil jelmänä, tavanomaisessa kefalosporiini-C: n ravintoliuoksessa tavanomaisten kefalosporiini-C: n fermentointimenetelmien mukaisesti. Tässä keksinnössä on havaittu, että edellä määriteltyjen fosforiyhdistei-den lisääminen ravintoliuokseen vähentää oleellisesti de-20 asetyylikefalosporiini-C:n tuotantoa fermentoinnin aikana ja johtaa lopulliseen liemeen, jossa on oleellisesti suu-* rempi osuus haluttua kefalosporiini-C:tä verrattuna ei-toi- vottuun deasetyylikefalosporiini-C:hen.
Käytettävän ravintoliuoksen pitäisi sisältää assi-25 miloituvia hiili- ja typpilähteitä ja haluttaessa kasvua " edistäviä aineita sekä epäorgaanisia suoloja.
Sopiviin hiililähteisiin kuuluvat esimerkiksi glukoosi, sakkaroosi, tärkkelys, liukoinen tärkkelys, kasvi-ja eläinöljyt, dekstriini ja maltoosi.
30 Sopiviin typpilähteisiin kuuluvat esimerkiksi luon- -·- nolliset typpeä sisältävät aineet tai niistä valmistetut aineet, kuten lihauutteet, peptoni, kaseiini, viljaliotus-nesteet, hiivauutteet, soijapapujauhot, tryptoni, puuvil-lansiemenjauhot ja vehnänleseet. Typpeä sisältäviä orgaa-35 nisiä tai epäorgaanisia yhdisteitä voidaan myös käyttää, .V kuten esimerkiksi ureaa, nitraatteja ja ammoniumsuoloja, kuten ammoniumasetaattia, ammoniumkloridia tai ammoniumsul-faattia.
8 78733
Epäorgaanisiin suoloihin, joita voidaan käyttää fermentointialustassa, kuuluvat sulfaatit, nitraatit, kloridit, karbonaatit jne., joita on käytetty kefalospo-riini-C:n tuotannossa.
5 Kasvua edistäviin aineisiin, joita voidaan käyttää, kuuluvat esimerkiksi kysteiini, kystiini, tiosulfaatti, metyylioleaatti ja erityisesti metioniini, ja myös hivenaineet, kuten rauta, sinkki, kupari ja mangaani.
Viljelyolosuhteet, kuten lämpötila, pH ja fermen-10 tointiaika valitaan siten, että käytetty mikro-organismi voi akkumuloida maksimimäärän haluttua kefalosporiini-C:tä. Lämpötila pidetään tavallisesti 15 - 45°C:ssa, edullisesti noin 25°C:ssa, ja fermentointia suoritetaan noin 1-20 vuorokautta, edullisesti 4-10 vuorokautta, edullisimmin 15 noin 6 vuorokautta.
Keksinnön mukaisella menetelmällä saavutettavan deasetyylikefalosporiini-C:n tuotannon vähenemisen uskotaan johtuvan kefalosporiini-C:tä tuottavien mikro-organismien viljelyn aikana tyypillisesti syntyvän asetyylieste-20 raasientsyymin inhiboitumisesta.
·.·. Kaavan I mukaisista fosfiittiyhdisteistä voi olla esimerkkeinä trimetyylifosfiitti, trietyylifosfiitti, tri-1 isopropyylifosfiitti ja tributyylifosfiitti.
Kaavan II mukaisista fosforiyhdisteistä voivat ol-25 la esimerkkeinä fosfonihappo, dibentsyylifosfiitti, dibut- yylifosfiitti, dietyylifosfiitti, di-isopropyylifosfiitti, dimetyylifosfiitti, difenyylifosfiitti, trietyylifosfo-niumasetaatti, dimetyylimetyylifosfonaatti, dietyylietyyli-fosfonaatti ja dietyyliasetyylifosfonaatti.
30 Kaavan III mukaisista yhdisteistä voidaan esimerk kinä mainita fosfiinihappo.
Erityisen edullisia keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettäviä fosforiyhdisteitä ovat fosfonihappo, fos-fiinihappo, di-isopropyylifosfiitti, tri-isopropyylifos-35 fiitti, dibentsyylifosfiitti, dimetyylifosfiitti ja tri butyylifosf iitti .
Edullisin fosforiyhdiste-inhibiittori on fosfonihappo .
9 78733
Fosforiyhdisteitä käytetään siten, että niiden lopulliset pitoisuudet ravintoliuoksessa ovat välillä 100 -3000 ppm (painosta), ja edullisesti noin 200 - 1000 ppm. Fosforiyhdiste voidaan lisätä kaikki yhdellä kertaa tai 5 tietyin aikavälein fermentoinnin aikana. Edullisimmin or gaaniset fosforiyhdisteet lisätään käynnissä oleviin fer-mentaatioihin noin 70 ja 140 tunnin välillä yksittäisinä tai useina annoksina. Epäorgaaniset fosforiyhdisteet voidaan edullisesti lisätä käynnissä oleviin fermentaatioi-10 hin aikavälillä välittömästi ymppäyksen jälkeen - noin 140 tuntia ymppäyksen jälkeen. Vaihtoehtoisesti ne voidaan panostaa ravintoliuokseen ennen sterilointia.
Edellä määriteltyjen fosforiyhdisteiden käyttö tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä on oleellisesti alen-15 tanut deasetyylikefalosporiini-C:n prosentuaalista osuutta kefalosporiinituotteiden kokonaismäärästä fermentointilie-messä. Näiden fosforiyhdisteiden käyttö tyypillisissä ke-falosporiini-C-fermentoinneissa on alentanut deasetyylike-falosporiini-C-määriä noin 4 %:iin kefalosporiinituottei-20 den kokonaismäärästä verrattuna noin 15 %:iin tavanomaisissa fermentoinneissa.
Käsitellyissä ravistuspullofermentoinneissa tuotetun kefalosporiinituotteen kokonaismäärä näyttää pysyvän muuttumattomana, ja näin ollen kefalosporiini-C-tiitterit 25 kasvavat yleisesti sopivalla määrällä. Suurimittaisemmissa fermentoinneissa ei ole havaittu, että fosfori-inhibiitto-riyhdisteiden käyttö johtaa kefalosporiini-C:n kasvaneeseen määrään. Vaikka kefalosporiini-C-määrät pysyvät vakiona, deasetyylikefalosporiini-C:n alentunut määrä keksinnön 30 mukaisessa menetelmässä helpottaa suuresti halutun kefalo-sporiini-C-tuotteen saantia puhtaampana.
On osoitettu, että tämän keksinnön mukaisesti käytettävien fosforiyhdisteiden inhibiittoriaktiivisuus on entsyymitasolla. Niinpä kefalosporiini-C-esteraasiaktiivi-35 suus puhdistettiin osittain Cephalosporium acremonium- kasvualustan supernatantista DEAE Sephadex A50-pylväskro-matografiällä, ja tämän valmisteen hydrolyyttisen aktiivi- 10 78733 suuden (mitattuna HPLC:lla seuraamalla kefalosporiini-C:n konversiota deasetyylikefalosporiini-C:ksi) havaittiin estyvän kaavojen I, II ja III mukaisten fosforiyhdisteiden vaikutuksesta.
5 Kun fermentointi on saatettu loppuun, haluttu ke- falosporiini-C-tuote konvertoidaan edullisesti tunnetuilla menetelmillä, kuten esimerkiksi US-patenttijulkaisussa 3 573 296 kuvatuilla menetelmillä, johdannaiseksi, joka voidaan helpommin ottaa talteen liemestä liuotin-uuttome-10 netelmillä. Kefalosporiini-C tai sen johdannainen, joka saadaan fermentoinnista voidaan sitten konvertoida tunnetuilla menetelmillä 7-ACA:ksi, avain-välituotteeksi monien puolisynteettisten kefalosporiinien valmistuksessa. Käyttämällä tämän keksinnön mukaisesti fosfori-inhibiittoriyhdis-15 teitä kefalosporiini-C:tä tai sen johdannaista ja lopullista 7-ACA-välituotetta saadaan tehokkaammin ja puhtaampana verrattuna aikaisempaan menetelmään, jossa kasvualusta ei sisällä näitä fosforiyhdisteitä.
Seuraavat esimerkit on tarkoitettu kuvaamaan tätä 20 keksintöä. Esimerkeissä käytetty termi "ppm" perustuu painosuhteeseen .
Esimerkki 1
Standardista Cephalosporum acremonium-kantaa (runsaasti kefalosporiini-C:tä tuottava mutanttikanta, joka 25 tuottaa myös deasetyylikefalosporiini-C:tä) fermentoitiin ravistuspulloissa seuraavalla tavalla:
Ymppiviljelmä aloitettiin ymppäämällä viljanlio-tusneste-glukoosipohjainen ymppi-kasvualusta jäähdytetystä viljelmästä. Ymppipulloja viljeltiin 3 päivää 28°C:n 30 lämpötilassa ravistelemalla nopeudella 260 kierr./min ja 10 % viljelmästä käytettiin tuotantovaiheen fermentointien ymppäämiseen. Tuotantokasvualusta perustui tasapainotettuun seokseen, jossa oli viljanliotusnestettä, PHARMAME-DIA 8 (puuvillansiemenjauhoa, jota myy Traders Oil Mill 35 Company, Forth Worth, Texas, USA), dekstriiniä, soijaöljyä, metioniinia ja ammoniumsulfaattia. Pulloja ravisteltiin 25°C:n lämpötilassa nopeudella 260 kierr./min 6 vuorokauden kokonaisaika, jonka jälkeen osa liemestä laimennettiin n 78733 ja suodatettiin, ja niistä tutkittiin kefalosporiini-C ja deasetyylikefalosporiini-C HPLCrlla. Inhibiittoreita lisättiin rekisteröityinä määrinä päivänä 4 (96 tuntia).
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
12 78733
Ui
•H
id
G
0 u O * I M —'
44 G :G d) d) -P
d) U) dP (O iH 4D 40 (NOO O Γ- m O (NO in • +J :G '— oo o <Ti m σι ιο io ie h< cn in hi h< tn-PM - - - - - - n) On) TT m h> m τσιο ro n* ro n1 t t? r- <11 94 q -p e 0
H
G
H
U -H
1 M
• O
4-1 C4
0) tTi W
Λί ^ ιηοιηοιηοοοοιηοιηιη O
• O1 <Ti (N n-ro ooio m cn -tm t* n< o h ui G_ h· in mm u io rom γον< ·=τό< r-· id G 4-1 dl dl
Ω M
H
rH
U >1 I tji 4-1 • x oo om oo öin oo min o ai 4H tT> ininO(TlOO(NOiHOOlOOOU5lD ra dl 3_ r~oo o (Ti ro(N 41 io roro (no r-~ id X <Tl(Tir-lOO<Ti<Ti(TiOCTi(Tl(Ti(TiOO dl »H »H Ό + u ίΗ Ή
-P G
-P :G -h
:G G oooooooooooo -H
ui :id oooooooooooo p •H:itJ oioiooiOiHOiHvoiHoir) 0 ►G E Ή iH iH &i
M
o
•H H
4-1 Id 4-1 44 H Id 01 •H 4-1 Id « 4-> 4-> -H -H G Md
4-1 -H -P 4-1 O -M
-H -H -H 4-1 —.4-1 44 m •H 44 4-1 -H Id -H —. lii >( —.
44 W -P -H 4-> -H G O :<C *
m O -H 44 r-4 44 4-1 44 UI
O 44 -H Ui ·· Ui i-i -H H
44 -H 44 O O O ·· Ή rH
H ·—I Ui 44 O 44 O
Ή >i O >i >i U >1 -H
•H>i >i 44 4-1 · 4-1 -P dl P >i DU -H d) g d) · d> O Du O H > dl > g w
4-1 O P >1 -H Xl -H dl G -H
P P Dj >1 -H U Ή -G -H rH
>i-H Oi O Ui >i >iU-H iH
4-1 -H O M -P >i H >, >i O
4-1 Λ ra -H G -P Ή 4-> G >1 P
:G Ή -H I φ d) Xl d) Ή -P 4-1
W.G I -H X5 g O E Ή ai G
•H G -H P -H -H S -H <: -H o
Ω -H TJ -P Ό X
13 78733
Esimerkki 2 Käyttäen normaaleja ravistuspullofermentointi-olo-suhteita ja samaa tuotantoviljelmää kuin esimerkissä 1 on kuvattu, epäorgaanisia ja orgaanisia fosforiyhdisteitä li-5 sättiin käynnissä oleviin fermentointeihin 0, 48 ja 96 tunnin kohdalla ymppäyksen jälkeen, jolloin saatiin lopulliset liemikonsentraatiot väliltä 100 - 800 ppm.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
i4 78733 μ <ί vo o\ o vo <τν oo in m in m cn m (N in ή K Q ' ' ' ' s ' K ' ' ' ' ' — 00 Γ-- Ί· m 00 VO Tf Tf m OI 03 H N OV h in
' Q + <*° rH Ή rH i—I
U
u 4-1 ty
M
• O O O CM
tn m tn o in oooo ro m m o cm rH tn o ir> ^ cn ro o cn cm i-ι oo ^r^or** m ^ Tf m in Φ cn cn m oo n· rr τγ rH σ» rH γη σ> r-* «h o m o in o o un o o in m in inooo^* rj <1 ooo^rro in o oo ^ o cm ooinooo :rdiö^ ro in cn ro ro σ> ro i-π cn vo vo cn r^ocNOor- j>.r^ o rH o o en (n cn <n o cr> oo oo en o tn oo oo o
>r| i|_| rH rH rH rH »H iH O
:nj φ ή pv, sd
X
o u co in ττ in ti· ih oo r~ m o tn c-t cn -n· vn tn i * Q ***·· v ' k ' ' ' v ‘ · · — tn n· en m vo tn m m oo oo r-- oi co io h in uh
q + <#> ^ jU
U
m <0 u <u I T( o | «4-1 + mh <u 0) Λ u a: · i . tn if) tn m cv vlh »1 oooo o m tn m loooo m ο o tt qj <u m m vd tn en <-h m o tn m h ί1 2 3 cd i-h m en oo .-h t) a; n· ro ro γ- tn tj· ro vo vo r~~ rH tn vo r"- <-h nK tr N N N N N N s. N N N. N X N N N N \ ·· rjoooo o in o o tn o o o m tn m m m tn tn
ttOICr .ΗτΤτΓΟ O <3\ Γ0 O tn Γ-~ Γ0 Tf VO N· oo »H tn CC
·> . r-j co tn oi n m oo o cn co vo oo i-h tn ro σ\ vo o o O
n_, · r—i o o\ o o σι o en oor^r^o o o en tn oo Ai a:
QJ i—IrHrHrH·—I rH rHrH
** Γ •H g •—I ex 2
Hq -P
3 tn II) Q<„ >1 -P O O -rl :ifl ra H -H -p ra H -p -p Ή
Ό H (0 -rH <-H
.e h-» ra -h
>1 G M OOOO OOOO UH O O O O -H
H 3 -P o o o o o oooo oooo raooooa) PPG CU o O O O H CN Ί1 00 rH CN Ti· 00 0 ·—I CN rl· 00 O (1) CU rH CN t* 00 ^ 4H \ ·' +j e i» ra n ra ra -h ra -h P <U G Λ ra *rH -H rH -H Ή
rl m O ·Η Ή -P 4-1 >i -P rH
•H X A! U +1 G G >i G 0
Λ >ι 0 G 3 3 G3 P
•H :ra MH 3 -P 4J CU-P -P
.G m G ra 4J mh G
G-Htuo oo vo -H vo O
H rH e Μη o Tf σι Ό en Xi 15 78733
Esimerkki 3 Käyttäen normaaleja ravistuspullofermentointi-olo-suhteita ja samaa tuotantoviljelmää kuin on kuvattu esimerkissä 1, epäorgaanisia fosfori-inhibiittoriyhdisteitä 5 lisättiin kasvualustaan ennen autoklaavissa tapahtunutta sterilointia 121°C:n lämpötilassa 20 minuutin ajan.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa. Inhibiittoriyhdiste/ Päivä 6 lopullinen konsentraatio Kef.-C/deas.kef.-C D(*
10 ppm c * D
fosfonihappo/200 9740/600 5,8 400 8050/340 4,0 800 7111/285 3,8 15 fosfiinihappo/150 8110/1130 12,2 300 8600/1000 10,4 450 9080/940 9,4
Kontrolli; ei lisäystä_7840/1060_11,9 *) kons. deas.kef.-C_ 2q kons. kef.-C + deas.kef.-C x
Esimerkki 4
Cephalosporium acremonium'ia fermentoitiin 30 litran sekoitetuissa tankkifermenttoreissa normaalien menetelmien mukaisesti viljelmien muodostamiseksi ja fermen-25 toimiseksi. Astioita ympättiin 10 %:lla ravintoliuoksen tilavuudesta ymppiviljelmällä, joka oli kasvatettu viljan-liotusneste-PHARMAMEDIA-glukoosiravintoliuoksessa. Fermen-tointiravintoliuos sisälsi viljanliotusnestettä, soijajau-joa ja soijaöljyä orgaanisen hiilen ja typen lähteinä.
30 Glukoosisiirappia ja soijaöljyä lisättiin fermentoinnin aikana. Koefermenttoriin lisättiin tributyylifosfiittia 96 tunnin kohdalla siten, että lopullinen liemikonsentraatio oli 300 ppm.
Lisäyksen vaikutus on esitetty seuraavassa muutok-35 sena kefalosporiini-C:n ja deasetyylikefalosporiini-C:n määrissä.
16 78733
Tributyylifosfiitti - 300 ppm 96 h.
—P(* ,,)
Aika (tuntia)_C + D { ' 74 4,2 5 85 3,7 98 4,3 109 4,0 122 4,6 133 5,8 10 146 6,9 157 7,9 _170_9_j_l_
Kontrolliajo - ei inhibiittoria 15 D(*
Aika (tuntia)_C + D
74 4,8 85 4,5 98 5,1 20 109 6,9 122 8,9 133 12,6 146 13,0 157 13,2 25 170_25,0_ *) kons. deas.kef.-C_ kons. kef.-C + deas.kef.-C x 100
Tributyylifosfiitin lisäys alensi muodostuneen 30 deasetyylikefalosporiini-C:n määrän 9,1 %:iin kokonais-tuotteen määrästä verrattuna 15 %:iin kontrolliajossa. Esimerkki 5
Cephalosporium acremonium'ia fermentoitiin 3000 litran sekoitetussa tankkifermenttorissa käyttäen tavan-35 omaisia kefalosporii.ni-C-ravintol iuoksi a ja menetelmiä. Dimetyylivetyfosfiittia lisättiin 100 tunnin kohdalla siten, että lopullinen liemen konsentraatio oli 600 ppm.
17 78733
Inhibiittorin lisäyksen tulokset on esitetty seu-raavissa taulukoissa.
Dimetyylivetyfosfiitti 100 tunnin kohdalla 5 D<* - (%)
Aika (tuntia)_C + D_ 78 5,8 91 7,4 102 8,8 10 115 7,7 126 6,9 139 7,9 150 7,4 163 8,3 15 168_9j_0_
Kontrolli - ei inhibiittoria D (*
Aika (tuntia) C + D ^ 20 63 iTi 96 8,2 107 10,7 120 11,9 131 13,8 25 144 16,9 155 18,9 168 20,9 _170_22,5_
*) kons.deas.kef.-C
---- x 100
30 kons. kef.-C + deas.kef.-C
Claims (5)
1. Menetelmä kefalosporiini-C:n valmistamiseksi viljelemällä ravintoliuoksessa kefalosporiini-C:tä ja myös 5 deasetyylikefalosporiini-C:tä tuottavaa mikro-organismia Cephalosporium acremonium, tunnettu siitä, että ravintoliuokseen lisätään fosforiyhdistettä, jolla on kaava R10 R40 λΟ O ^P-OR3 , tai H-f-OR5 10 r2o/ r5o' ^R6 K U (I) K U K (II) (III) 12 3 joissa R , R ja R toisistaan riippumatta merkitsevät 4 5 alempaa alkyyliä, R ja R toisistaan riippumatta merkitsevät vetyä, alempaa alkyyliä, bentsyyliä tai fenyyliä ja 15 R^ on vety, alempi alkyyli tai alempi alkanoyyli, pitoisuutena noin 100 - 3000 ppm.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fosforiyhdiste on fosfonihappo, fos-fiinihappo, di-isopropyylifosfiitti, tri-isopropyylifos- 20 fiitti, dibentsyylifosfiitti, dimetyylifosfiitti tai tri-butyylifosfiitti.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fosforiyhdiste on fosfonihappo.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-25 n e t t u siitä, että orgaanista fosforiyhdistettä lisätään fermentointiin noin 70 - 140 tuntia ymppäyksen jälkeen.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-n e t tu siitä, että epäorgaaninen fosforiyhdiste lisätään ravintoliuokseen ennen sterilointia tai 0 - 140 tuntia 30 ymppäyksen jälkeen.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US47244483 | 1983-03-07 | ||
| US06/472,444 US4520101A (en) | 1983-03-07 | 1983-03-07 | Production of cephalosporin C |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI840838A0 FI840838A0 (fi) | 1984-03-02 |
| FI840838A FI840838A (fi) | 1984-09-08 |
| FI78733B true FI78733B (fi) | 1989-05-31 |
| FI78733C FI78733C (fi) | 1989-09-11 |
Family
ID=23875534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI840838A FI78733C (fi) | 1983-03-07 | 1984-03-02 | Foerfarande foer framstaellning av cefalosporin-c. |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4520101A (fi) |
| JP (1) | JPH069517B2 (fi) |
| KR (1) | KR910002861B1 (fi) |
| AT (1) | AT381723B (fi) |
| AU (1) | AU567142B2 (fi) |
| BE (1) | BE899086A (fi) |
| CA (1) | CA1209072A (fi) |
| CH (1) | CH661284A5 (fi) |
| CY (1) | CY1467A (fi) |
| DE (1) | DE3408194A1 (fi) |
| DK (1) | DK168451B1 (fi) |
| ES (1) | ES530294A0 (fi) |
| FI (1) | FI78733C (fi) |
| FR (1) | FR2545502B1 (fi) |
| GB (1) | GB2136000B (fi) |
| GR (1) | GR81804B (fi) |
| HK (1) | HK16189A (fi) |
| IE (1) | IE57096B1 (fi) |
| IT (1) | IT1175945B (fi) |
| KE (1) | KE3849A (fi) |
| LU (1) | LU85240A1 (fi) |
| MY (1) | MY8800129A (fi) |
| NL (1) | NL194830C (fi) |
| PT (1) | PT78205B (fi) |
| SE (1) | SE461470B (fi) |
| SG (1) | SG79688G (fi) |
| ZA (1) | ZA841602B (fi) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013053953A1 (en) * | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Université de Liège | Method for measuring beta-lactam antibiotics |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB820422A (en) * | 1957-01-30 | 1959-09-23 | Ici Ltd | Production of cephalosporin by fermentation |
| US3151240A (en) * | 1960-09-27 | 1964-09-29 | Bendix Corp | Carrier signal attenuation as a function of two variables |
| GB975393A (en) * | 1962-07-02 | 1964-11-18 | Merck & Co Inc | Production of cephalosporin c |
| GB975394A (en) * | 1962-07-25 | 1964-11-18 | Farmaceutici Italia | Cephalosporin c |
| GB1109362A (en) * | 1964-04-10 | 1968-04-10 | Nat Res Dev | Improvements in fermentation processes for the production of antibiotics from emericellopsis-cephalosporium fungi |
| US3573296A (en) * | 1968-07-01 | 1971-03-30 | Bristol Myers Co | Process for the preparation of 7-aminocephalosporanic acid |
| CH553850A (de) * | 1970-01-21 | 1974-09-13 | Ciba Geigy Ag | Verfahren zur darstellung von fuer die gesteuerte biosynthese von cephalosporin c, geeigneten mangel-mutanten und deren verwendung zur gesteuerten biosynthese von cephalosporin c. |
| GB1400433A (en) * | 1971-08-13 | 1975-07-16 | Alfa Farmaceutici Spa | Production of cephalosporin c |
| JPS5431077B2 (fi) * | 1971-11-15 | 1979-10-04 | ||
| US3830809A (en) * | 1972-08-25 | 1974-08-20 | Bristol Myers Co | Bis-dicyclohexylamine n-carbisobutoxycephalosporin c |
| US4059573A (en) * | 1973-08-01 | 1977-11-22 | Glaxo Laboratories Limited | Extraction of N-blocked amino acids from aqueous media |
| DK385974A (fi) * | 1973-08-17 | 1975-04-28 | Ciba Geigy Ag | |
| JPS577720B2 (fi) * | 1973-10-01 | 1982-02-12 | ||
| JPS577719B2 (fi) * | 1973-09-28 | 1982-02-12 | ||
| US3932392A (en) * | 1974-01-14 | 1976-01-13 | Bristol-Myers Company | Process for the preparation of 7-aminocephalosporanic acids |
| IT1042829B (it) * | 1975-09-24 | 1980-01-30 | Lorenzini Sas Inst Biochim | Procedimento per la produzione di cefalosporina c |
| US4178210A (en) * | 1977-03-07 | 1979-12-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Accellular synthesis of cephalosporins |
| JPS5467097A (en) * | 1977-03-07 | 1979-05-30 | Massachusetts Inst Technology | Cell free synthesis of cephalosporine |
| JPS54163880A (en) * | 1978-04-26 | 1979-12-26 | Glaxo Group Ltd | Improvement in cephalosporin production |
-
1983
- 1983-03-07 US US06/472,444 patent/US4520101A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-02-08 CA CA000447028A patent/CA1209072A/en not_active Expired
- 1984-02-10 AU AU24478/84A patent/AU567142B2/en not_active Expired
- 1984-02-29 GR GR73946A patent/GR81804B/el unknown
- 1984-02-29 DK DK139484A patent/DK168451B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-03-02 NL NL8400691A patent/NL194830C/nl not_active IP Right Cessation
- 1984-03-02 FI FI840838A patent/FI78733C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-03-02 ZA ZA841602A patent/ZA841602B/xx unknown
- 1984-03-02 IT IT19892/84A patent/IT1175945B/it active
- 1984-03-05 ES ES530294A patent/ES530294A0/es active Granted
- 1984-03-05 AT AT0074384A patent/AT381723B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-05 PT PT78205A patent/PT78205B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 SE SE8401235A patent/SE461470B/sv not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 IE IE536/84A patent/IE57096B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 BE BE0/212514A patent/BE899086A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 CH CH1102/84A patent/CH661284A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 GB GB08405879A patent/GB2136000B/en not_active Expired
- 1984-03-06 DE DE19843408194 patent/DE3408194A1/de active Granted
- 1984-03-06 FR FR8403470A patent/FR2545502B1/fr not_active Expired
- 1984-03-07 LU LU85240A patent/LU85240A1/fr unknown
- 1984-03-07 KR KR1019840001138A patent/KR910002861B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-03-07 JP JP59042203A patent/JPH069517B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-11-25 SG SG796/88A patent/SG79688G/en unknown
- 1988-11-25 KE KE3849A patent/KE3849A/xx unknown
- 1988-12-30 MY MY8405879A patent/MY8800129A/xx unknown
-
1989
- 1989-02-23 HK HK161/89A patent/HK16189A/xx not_active IP Right Cessation
- 1989-07-21 CY CY1467A patent/CY1467A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Acid protease production by fungi used in soybean food fermentation | |
| JPH0870879A (ja) | 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法 | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| SK902006A3 (sk) | Spôsob fermentácie polymyxínu B pomocou produkčného mikroorganizmu Bacillus polymyxa | |
| US5334517A (en) | Microbial process for the production of trans-4-hydroxy-L-proline | |
| US20080318289A1 (en) | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus | |
| FI78733B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av cefalosporin-c. | |
| US5409820A (en) | Process for the production of lovastatin using Coniothyrium fuckelii | |
| US5108914A (en) | Process for the synthesis of l-alpha-amino acids | |
| US5075233A (en) | Process for the preparation of 2-aryloxypropionic acids | |
| US3975235A (en) | Process for the production of cephamycin type antibiotic substances | |
| KR0134131B1 (ko) | 세파로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세파로스포린 c의 제조방법 | |
| EP0381478A1 (en) | Process for the preparation of 6-alpha-hydroxymethyl lovastatin derivatives | |
| CA2289553C (en) | Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid | |
| KR960004036B1 (ko) | 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 | |
| SU958498A1 (ru) | Способ получени @ -маннаназы | |
| KR100462842B1 (ko) | 내염성 단백질 분해효소를 생산하는 할로모나스 마리스플라바 | |
| KR20020034755A (ko) | 고농도 세팔로스포린 ｃ 생산을 위한 발효배지조성물 및고농도 세팔로스포린 ｃ의 생산방법 | |
| KR950004010B1 (ko) | 미생물을 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 | |
| KR960004037B1 (ko) | 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 | |
| KR19990033539A (ko) | 세팔로스포린 ｃ 생산 미생물 | |
| WO2004005275A1 (en) | Fed batch solid state fermentation for the production of hmg-coa reductase inhibitors | |
| JPS62236500A (ja) | セフアロスポリン系抗生物質の製造法 | |
| JPH0575757B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: BRISTOL-MYERS CO |