DK168451B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C og anvendelse af nærmere angivne phosphorforbindelser til reduktion af dannelsen af desacetylcephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetylcephalosporin C. - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C og anvendelse af nærmere angivne phosphorforbindelser til reduktion af dannelsen af desacetylcephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetylcephalosporin C. Download PDFInfo
- Publication number
- DK168451B1 DK168451B1 DK139484A DK139484A DK168451B1 DK 168451 B1 DK168451 B1 DK 168451B1 DK 139484 A DK139484 A DK 139484A DK 139484 A DK139484 A DK 139484A DK 168451 B1 DK168451 B1 DK 168451B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cephalosporin
- phenyl
- hydrogen
- phosphorus compound
- alkyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
i DK 168451 B1
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C. Mere præcist angår opfindelsen tilsætningen af visse organiske og uorganiske phosphorforbindel ser til kulturmediet under fermentering af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, 5 der også producerer uønsket desacetyl cephalosporin C. Tilsætning af phosphorforbi ndel serne hæmmer kraftigt dannelse af desacetyl cephalosporin C urenheden, hvilket således letter udvindingen af cephalosporin C fra fermentationssubstratet og dets efterfølgende omdannelse til 7-ami-nocephalosporanSyre (7-ACA). Opfindelsen angår desuden anvendelsen af de 10 pågældende phosphorforbindelser til reduktion af dannelsen af desacetyl-cephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetyl cephalosporin C, hvilken anvendelse er ejendommelig ved det i krav 16 anførte.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man til 15 mediet sætter en phosphorforbindel se med den almene formel - r4 0 \p-OR3 R2o rso*^ ^r6 20 0) (l° R5°\ r1°\ or1 Νζ e„er R8·^ ^OR2 25 Oli) (IV) hvori R1, R2 og R3 uafhængigt af hinanden betegner ligekædet eller forgrenet Cx-Cxoalkyl, phenyl eller phenyl(C1-C4)alkyl, idet al kylgruppen eller al kyldel en af phenyl al kyl eventuelt er substitueret med én eller flere halogen- eller carboxysubstituenter, og phenyl gruppen 30 eller phenyldelen af phenylalkyl eventuelt er substitueret med én eller flere Cx-C6alkyl-, Cx-C6alkoxy- eller halogensubstituenter, R4 er Cx-C6alkyl, der eventuelt er substitueret med én eller flere halogengrupper, eller er -OR10, hvori R10 er hydrogen eller er som defineret for R1, R5 er hydrogen eller er som defineret for R1, 35 R6 er hydrogen, C2-C$alkenyl, C2-C6alkanoyl eller Cx-C6al- kyl, idet alkylgruppen eventuelt er substitueret med én eller flere cyano-, C2-C6alkanoyl- eller carbo(Cx-C6)alkoxygrupper, og R8 og R9 begge enten er hydrogen eller chlor, i en koncentration fra ca. 100 2 DK 168451 B1 til 3000 ppm.
Cephalosporin C [3-acetoxymethyl-7)3-(D-5-amino-5-carboxypentanami-do)ceph-3-em-4-carboxylsyre] er en forbindelse, der, selv om den i sig selv har nogen antibiotisk aktivitet, er af størst betydning som et ud-5 gangsmateriale for fremstilling af semisyntetiske cephalosporinantibioti ka. Cephalosporin C kan således omdannes ved kendte fremgangsmåder til 3-acetoxymethyl-7)8-aminoceph-3-em-4-carboxyl syre (7-ACA), der derefter bruges som et hovedmellemprodukt til fremstilling af en lang række kom-merci el 1 e cephalospori nanti bi oti ka.
10 Det er kendt, at cephalosporin C kan opnås ved fermentering af forskellige mikroorganismer herunder især svampe af slægten Emericellopsis-Cephalosporium. Eksempler på cephalosporin C-producerende mikroorganismer er den originale Brotzu-stamme af Cephalosporium, d.v.s. Cephalospo-rium sp. I.M.I. 49137 (ATCC 11550), og mutanter heraf såsom mutantstamme 15 8650 (ATCC 14553) beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.109.362, Cephalospo-rium sp. I.B.I. 1131 beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.503.851 og Cepha-losporium sp. stamme F.12 (ATCC 20339) beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.400.433. Andre eksempler på cephalosporin C-producerende organismer rapporteret i litteraturen omfatter Cephalosporium polyaleurum Y-505 20 (FERM-P No. 1160) beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.488.822, Cephalospo-rium acremonium K-121 (ATCC 20427) og Cephalosporium acremonium N-75 (ATCC 20428) beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.488.821 og Cephalosporium polyaleurum 199 (ATCC 20359) og en mutant heraf identificeret som Y-505 (ATCC 20360) og beskrevet i GB-patentskrift nr. 1.389.714. Cephalosporin 25 C fremstilles almindeligvis i industriel målestok ved brug af en højt producerende mutantstamme af Cephalosporium acremonium (også kendt som Acremonium chrysogenum). Eksempler på sådanne mutanter og fremgangsmåder til fremstilling heraf er blevet indgående beskrevet i litteraturen.
På trods af indgående forskning gennem årene er fermentation af 30 cephalosporin C i kommerciel målestok endnu ikke fuldstændig tilfredsstillende. De fleste cephalosporin C-producerende mikroorganismer, især de højt producerende stammer, der er anvendt i kommerciel produktion, resulterer i samproduktion af en signifikant mængde desacetyl cephalosporin C, en urenhed der er ekstremt vanskelig at separere fra det ønskede 35 cephalosporin C produkt på grund af dets lignende kemiske og fysiske karakteristika. Tilstedeværelse af desacetyl cephalosporin C, typisk i mængder på 15% af den samlede cephalosporinkerne produceret under fermentering, resulterer i udvinding af cephalosporin C (eller mere almin- 3 DK 168451 B1 deligt, et opløsningsmiddel-ekstraherbart derivat heraf) kontamineret med desacetyl cephalosporin C (eller derivater heraf). Hertil kommer, at, da cephalosporin C (eller derivater heraf) i industriel målestok ikke renses inden den efterfølgende omdannelse til 7-ACA, påvirkes produkt-5 kvaliteten af 7-ACA også ugunstigt af den medfølgende fremstilling af desacetyl cephalosporin C i udgangsfermenteringssubstratet.
Den kendte teknik, der angår cephalosporin C produktion er primært koncentreret om at finde nye mikroorganismer med højere cephalosporin C produktivitet og at tilvejebringe fermentationsadditiver, der forøger 10 cephalosporin C produktion. Således er der for eksempel blevet udviklet mutantstammer af Cephalosporium acremonium, der producerer væsentligt højere udbytter af cephalosporin C. Det er blevet foreslået at tilsætte forskellige additiver til næringsmediet under fermentationen af en cephalosporin C-producerende organisme for således at forøge cephalosporin 15 C udbyttet. Således er brugen af svovlforbindelser såsom natriumsulfit, natriummetabisulfit, natriumthiosulfat, natriumhydrosulfit, natriumthio-sulfat og natriumsulfat omhandlet i GB-patentskrift nr. 820.422, brugen af methionin, calciumchlorid, magnesiumchlorid, ammoniumsulfat og visse carbohydrater, olier og fedtsyrer omhandlet i GB-patentskrift nr.
20 938.755, brugen af norval in og norleucin er omhandlet i GB-patentskrift nr. 975.393, brugen af phenyleddikesyre er omhandlet i GB-patentskrift nr. 975.394 og brugen af e-caprolactam, 2-butanon, sekundær butylalkohol og 1,3-butandiol er omhandlet i GB-patentskrift nr. 1.503.851. Problemet med samproduktion af desacetylcephalosporin C under cephalosporin C fer-25 mentation er kun forsøgt løst ved tilvejebringelse af mikroorganismer, der fremstiller større mængder af cephalosporin C kerner som cephalosporin C eller løst ved ekstraktions/isolationsfremgangsmåder (for eksempel US-patentskrift nr. 4.059.573).
Desacetyl cephalosporin C blev først påvist i kulturfiltrater af 30 Cephalosporium acremonium. Abraham et al. foreslog, at dannelse af denne substans skyldtes den enzymatiske deacylering af cephalosporin C (Bio-chem. J. 81: 591-596, 1961). Senere er esteraseenzymer, der kan deacety-lere cephalosporin C, blevet isoleret fra forskellige kilder, for eksempel citrusfrugter, bakterier, actinomyceter, hvedekim, pattedyrslever og 35 -nyre og Rhodotorula, Pisano et al. rapporterer i Develop. Ind. Microbiol. 8: 417-423, 1967, rapporterer, at esteraseaktivitet er udbredt i slægten Cephalosporium. Størstedelen af disse acetylesteraseenzymer synes at have brede substrattolerancer, d.v.s. at ^-naphthyl acetat og tri- 4 DK 168451 B1 acetin er aktive substrater, og deres aktivitet overfor cephalosporin C synes ikke enestående.
Nuesch et al. har ifølge Second International Symp. on Genetics of Industrial Microorganisms, Proc., 1975, udgivet af MacDonald, K.D., New 5 York, Academic Press, side 451-472 og Fujisawa et al. ifølge Agr. Biol. Chem. 39(6): 1303-1309 (1975) uafhængigt af hinanden delvis oprenset cephalosporin C esteraseaktivitet fra ekstracellulær substratsupernatant fra Cephalosporium acremonium og konkluderet, at tilstedeværelsen af enzymaktiviteten var delvis ansvarlig for forekomsten af desacetylcephalo-10 sporin C ved C. acremonium fermentationer. Lignende esteraseaktivitet er blevet påvist i de cephalosporin C-producerende Streptomyceter Strepto-myces clavuligerus (Antimicrob. Agents Chemother. 1: 237-241, 1972). Huber har imidlertid i Appl. Microbiol. 16(7): 1011-1014 (1968) præsenteret bevis på, at dannelsen af desacetyl cephalosporin C under fermenta-15 tionsprocessen skyldes den ikkø-enzymatiske hydrolyse af cephalosporin C. Det er de foreliggende opfinderes mening, at desacetyl cephalosporin C dannelsen skyldes både enzymatisk og ikke-enzymatisk hydrolyse, hvor en-zyamtisk acetylesteraseaktivitet spiller en betydningsfuld rolle.
I rapporter af Liersch et al. i Second International Symp. on Gene-20 tics of Industrial Microorganisms, Proc., 1976, udgivet af MacDonald, K.D., New York, Academic Press, side 179-195 og Felix et al. i FEMS Microbiol. Lett. 8: 55-58, 1980 er det blevet påpeget, at desacetylce-phalosporin C også er et intracellulært mellemprodukt i biosyntesen af cephalosporin C fra desacetoxycephalosporin C.
25 Enzymaktiviten af den delvis oprensede acetylesterase fra Cephalo sporium acremonium rapporteredes at blive hæmmet af di isopropylfluor-phosphat, en anerkendt inhibitor for esteraser (Agr. Biol. Chem. 39(6): 1303-1309, 1975). Denne phosphoracetylesteraseinhibitors voldsomme toksicitet og høje pris forhindrer imidlertid brugen deraf i den kommer-30 cielle produktion af cephalosporin C.
På grund af dens amfotere natur omdannes Cephalosporin C normalt til et derivat, således at den lettere kan udvindes fra fermentationssubstratet ved opløsningsmiddelekstraktionsfremgangsmåder. Eksempler på sådanne derivater er givet i GB-patentansøgning nr. 2.021.640A. En sær-35 lig foretrukken fremgangsmåde er omhandlet i US-patentskrift nr.
3.573.296. Det cephalosporin C derivat, som opnås ved en sådan foretrukken fremgangsmåde, kan udvindes som et krystallinsk bis-dicyclohexyl-aminsalt som omtalt i US-patentskrift nr. 3.830.809. Cephalosporin C el- 5 DK 168451 B1 ler derivatet heraf udvundet fra fermentationssubstratet spaltes herefter ved en konventionel fremgangsmåde, for eksempel fremgangsmåden ifølge US-patentskrift nr. 3.932.392, til frembringelse af 7-ACA.
Som bemærket ovenfor har desacetyl cephalosporin C urenheden, der 5 typisk dannes under fermentation i mængder på ca. 15% af den samlede cephalosporinkerne (cephalosporin C og desacetyl cephalosporin C), kemiske og fysiske karakteristika, som er meget lig det ønskede cephalosporin C produkts karakteristika. Når cephalosporin C omdannes til et opløsningsmi ddelekstraherbart derivat, omdannes desacetyl cephalosporin C 10 således også til et lignende derivat, og det derefter isolerede cephalosporin C derivat er kontamineret med desacetyl cephalosporin C derivatet.
Det kan udledes heraf, at en reduktion af mængden af cephalosporinkerne opnået som desacetyl cephalosporin C vil resultere i et renere cephalosporin C derivatprodukt. Hertil kommer, at, da dette derivat normalt ik-15 ke oprenses inden omdannelsen til 7-ACA, vil reducerede mængder af desacetyl cephalosporin C i fermentationssubstratet også give en bedre kvalitet 7-ACA produkt.
Den foreliggende opfindelse er rettet mod brugen af visse phosphor-forbindelser, der fungerer som inhibitorer for desacetylcephalosporin C 20 produktionen under fermentationen af cephalosporin C. Det resulterende fermentationssubstrat indeholder en signifikant højere mængde cephalosporin C i forhold til desacetylcephalosporin C, hvilket således forbedrer kvaliteten af det udvundne cephalosporin C produkt, hvilket igen forbedrer kvaliteten af det endelige 7-ACA-mellemprodukt, der fremstil-25 les ud fra et sådant cephalosporin C produkt.
Den foreliggende opfindelse angår en forbedring ved produktionen af cephalosporin C ved submers, aerob dyrkning af cephalosporin C-produce-rende mikroorganismer. Især angår den foreliggende opfindelse en fremgangsmåde til hæmning af dannelsen af desacetyl cephalosporin C under 30 fermenteringen af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, hvilken mikroorganisme er en sådan, som også producerer desacetyl cephalosporin C, ved tilsætning af visse organiske og uorganiske phosphorforbindel ser til dyrkningsmediet.
De inhibitorer, der benyttes ved fremgangsmåden ifølge den forelig-35 gende opfindelse, er phosphorforbindel ser med følgende almene formler DK 168451 B1 R1°\ 6 R4\ κ° N>-or3 r20^ Rscr XR6 (I) (II) 5 R3Ov o Rx0 Ov or1 NX eller >" ^rS R2CT XOR2 (III) (IV) hvori substituenterne har de i krav 1 angivne betydninger. Sådanne for-10 bindeiser nedsætter effektivt dannelsen af desacetyl cephalosporin C under fermentativ produktion af cephalosporin C. Desuden er disse forbindelser væsentligt mindre toksiske end diisopropylfluorphosphat og i almindelighed relativt billige, hvilket muliggør praktisk brug deraf til cephalosporin C produktion i stor målestok.
15 Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er anvendelig ved enhver konventionel, fermentativ procedure til fremstilling af cephalosporin C, forudsat at en sådan fremgangsmåde benytter en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetyl cephalosporin C i fermenteringssubstratet. Mange eksempler på sådanne mikroorga-20 nismer beskrives i litteraturen, for eksempel i GB-patentansøgning nr. 2.060.610A. Andre cephalosporin C-producerende mikroorganismer kan let testes for desacetylcephalosporin C produktion ved sædvanlige prøver, der er velkendte for fagfolk.
Den mest foretrukne cephalosporin C-producerende mikroorganisme til 25 brug i den foreliggende opfindelse er en stamme af Cephalosporium acre-monium (også kendt som Acremonium chrysogenum), der producerer både cephalosporin C og desacetylcephalosporin C. Typiske produktionsstammer af Cephalosporin acremonium resulterer i dannelse af ca. 15% af den samlede cephalosporin C kerne (cephalosporin C og desacetyl cephalosporin C) som 30 desacetyl cephalosporin C.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil fortrinsvis blive udført ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme (én, der kan producere både cephalosporin C og desacetyl cephalosporin C) under aerobe betingelser, fortrinsvis i submers kultur i et konventionelt cephalospo-35 rin C næringsmedium i overensstemmelse med konventionelle cephalosporin C fermenteringsprocedurer. Opfindelsen ligger i opdagelsen af, at tilsætning af visse phosphorforbindel ser til næringsmediet vil reducere produktion af desacetyl cephalosporin C under fermenteringen væsentligt 7 DK 168451 B1 og .resultere i et slutsubstrat indeholdende en væsentlig højere andel af det ønskede cephalosporin C i forhold til det uønskede desacetyl cephalosporin C.
Det benyttede næringsmedium bør indeholde assimilerbare kilder for 5 carbon og nitrogen og, om ønsket, vækstfremmende substanser såvel som uorganiske salte.
Egnede carbonkilder omfatter for eksempel glucose, saccharose, stivelse, opløselig stivelse, vegetabilske og animalske olier, dextrin og maltose.
10 Egnede nitrogenkilder omfatter for eksempel naturlige, nitrogenhol-dige substanser eller materialer, der er fremstillet ud fra disse, såsom kødekstrakter, pepton, casein, majsstøbevæske, gærekstrakter, sojabønnemel, trypton, bomuldsfrømel og hvedeklid. Nitrogenholdige, organiske og uorganiske forbindelser kan også benyttes, for eksempel urinstof, nitra-15 ter og ammoniumsalte såsom ammoniumacetat, ammoniumchlorid eller ammoniumsulfat.
Uorganiske salte, der kan benyttes i fermenteringsmediet, omfatter sulfater, nitrater, chlorider, carbonater, etc., der er blevet benyttet ved cephalosporin C produktion.
20 Vækstfremmende substanser, der kan benyttes, omfatter for eksempel cystein, cystin, thiosulfat, methyloleat og især methionin og også sporstoffer såsom jern, zink, kobber og mangan.
Dyrkningsbetingelser såsom temperatur, pH og fermenteringstid vælges således, at den benyttede mikroorganisme kan akkumulere en maksimal 25 mængde af den ønskede cephalosporin C. Temperaturen holdes normalt på ca. 15 til 45°C, fortrinsvis ved ca. 25eC og fermentationen foretages gennem en periode på fra ca. 1 til 20 dage, fortrinsvis 4 til 10 dage og mest foretrukket ca. 6 dage.
Det har nu vist sig, at visse organiske og uorganiske phosphorfor-30 bindeiser, når de tilsættes kulturmediet under dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, resulterer i væsentligt reduceret produktion af desacetyl cephalosporin C i fermenteringssubstratet. Det ' menes, at denne reduktion af desacetyl cephalosporin C produktionen stammer fra hæmning af acetylesteraseenzymet, der typisk produceres under 35 dyrkningen af cephalosporin C-producerende mikroorganismer.
De phosphorforbindel ser, der kan benyttes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, kan betegnes med følgende formler 8 DK 168451 B1
Rl0\ 3 R\/° j)P-OR3 r2o/ r6 CO 00 R5°\p/° eiler „β/' \R9 R20X XOR2 (III) C'V) 10 hvori Rl, R2 og R3 uafhængigt af hinanden betegner ligekædet eller forgrenet (^-(^„alkyl, phenyl eller phenyl(C^C^Jalkyl, idet al kyl gruppen eller al kyl del en af phenyl al kyl eventuelt er substitueret med én eller flere, fortrinsvis 1 til 3, substituenter udvalgt blandt halogen (chlor, brom, fluor, iod) og carboxy, og idet phenylgruppen el-15 ler phenyldelen af phenylalkyl eventuelt er substitueret med én eller flere, fortrinsvis 1 til 3, substituenter, som uafhængigt af hinanden er udvalgt blandt Cx-C6al kyl, (^-Cgalkoxy og halogen, R4 er Cx-C6alkyl, der eventuelt er substitueret med én eller flere, fortrinsvis 1 til 3, halogengrupper, eller er -OR10, hvori R10 er 20 hydrogen, Cj-Cjøalkyl, phenyl eller phenyl(Cl-C4) al kyl, idet al kyl-, phenyl- og phenyl al kyl grupperne eventuelt er substitueret som beskrevet ovenfor for R1, R5 er hydrogen, Cj-C^alkyl, phenyl eller phenyl(Cx-C4)al kyl, idet al kyl-, phenyl- og phenyl al kylgrupperne eventuelt er substitueret som defineret ovenfor for R1, R6 er 25 hydrogen, C2-C6alkenyl, C2-C6alkanoyl eller (^-(^alkyl, idet al kylgruppen eventuelt er substitueret med én eller flere, fortrinsvis 1 til 3, substituenter udvalgt blandt cyano, C2-C6alkanoyl og carbo-((^-CJalkoxy, og R8 og R9 begge enten er hydrogen eller chlor.
Phosphitforbindelserne med den almene formel (I) kan eksempelvis 30 være trimethylphosphit, triethyl phosphit, triisopropylphosphit, tribu-tylphosphit, tri phenyl phosphi t og tri (2-chl orethyl) phosphi t. Phosphiter med blandet funktion såsom benzyl di ethyl phosphi t og diphenyl i sodecyl-phosphit kan også anvendes.
Phosphorforbindel ser med den almene formel (II) kan for eksempel 35 være phosphorsyrling, dibenzylphosphit, dibutylphosphit, diethylphos-phit, di isopropylphosphit, dimethylphosphit, diphenyl phosphit, triethyl-phosphonoacetat, 2-chl orethyl phosphonsyre, di ethyl cyanomethyl phosphonat, di methyl methyl phosphonat, dimethyl phosphat, trimethyl phosphonoacetat, 9 DK 168451 B1 di ethylethylphosphonat, di ethylcarbomethoxymethylphosphonat, d i ethyl acetyl phosphonat, di methyl acetylmethylphosphonat, dimethylcyanomethylphosphonat, diethyl allylphosphonat og 2-carboxyethylphosphonsyre.
Forbindelser med den almene formel (III) kan for eksempel være 5 phosphorundersyrling, monomethylphosphonat, monoethylphosphonat og 2,2,2,-trichlorethylphosphordichloridit.
Pyrophosphitforbindelser med den almene formel (IV) kan for eksempel være tetramethylpyrophosphit og tetraethylpyrophosphit.
Foretrukne phosphorforbindelsesinhibitorer omfatter phosphorsyr-10 ling, phosphorundersyrling, diisopropylphosphit, triisopropylphosphit, dibenzylphosphit, dimethylphosphit, tributylphosphit, tri ethylphosphono-acetat, 2-chlorethylphosphonsyre, tetraethyl pyrophosphit, diethylcyano-methylphosphonat, dimethylmethylphosphonat, 2,2,2-trichlorethylphosphor-dichloridit, dimethyl phosphat, di phenylphosphit, triphenylphosphit, tri-15 methylphosphit, dibutylphosphit, tri(2-chlorethylJphosphit, trimethyl-phosphonoacetat, diethyl ethylphosphonat, diethylcarbomethoxymethylphosphonat, diethyl acetylphosphonat, dimethyl acetylmethylphosphonat, dimethyl cyanomethyl phosphonat og diethyl allylphosphonat.
Særligt foretrukne forbindelser omfatter phosphorsyrling, phospho-20 rundersyrling, diisopropylphosphit, triisopropylphosphit, dibenzylphosphit, dimethylphosphit og tributylphosphit.
Den mest foretrukne phosphorforbindelsesi nhi bitor er phosphorsyrling.
Phosphorforbindelserne benyttes således, at de giver en slutsub-25 stratkoncentration på fra ca. 100 til 3000 ppm (baseret på vægt) og mest foretrukket ca. 200 til 1000 ppm. Inhibitorforbindelse kan tilsættes på én gang eller med periodiske intervaller i løbet af fermentationen.
Mest fordelagtigt kan de organiske phosphorforbindel ser sættes til den igangværende fermentation mellem ca. 70 og 140 timer efter inokule-30 ring som enkelte eller multiple tilsætninger. De uorganiske phosphorforbindel ser kan mest fordelagtigt tilsættes den igangværende fermentation umiddelbart efter inokulering til ca. 140 timer efter inokulering. Alternativt kan de kommes i fermentationsmediet før sterilisation.
Anvendelse af ovennævnte phosphorforbindel ser i overensstemmelse 35 med fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse har vist sig at sænke procenten af desacetyl cephalosporin C væsentligt (baseret på samlet cephalosporinkerne, der er cephalosporin C og desacetyl cephalosporin
C) i fermentationssubstratet. Når de anvendes i typiske cephalosporin C
10 DK 168451 B1 fermentationer, er niveauet af desacetyl cephalosporin C reduceret til ca. 4% af den samlede cephalosporinkerne sammenlignet med ca. 15% i ubehandlede fermentationer.
I behandlede rysteflaskefermentationer viser den samlede mængde af 5 produceret cephalosporinkerne sig at være uændret og derfor øges cephalosporin C titerværdierne almindeligvis i tilsvarende omfang. Ved fermentationer i stor målestok er det ikke blevet fastslået, at anvendelsen af phosphorinhi bitorforbindelserne resulterer i forøgede niveuaer af cephalosporin C. Selv hvis cephalosporin C niveauerne forbliver konstan-10 te, letter den reducerede mængde af desacetyl cephalosporin C ved behandlede fermentationer imidlertid i høj grad udvindingen af det ønskede cephalosporin C produkt med en højere grad af renhed.
Phosphorforbindelserne, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, påvistes at have inhibitorisk aktivitet på en-15 zymniveauet. Cephalosporin C esteraseaktiviteten rensedes således delvis fra Cephalosporium acremonium-substrat supernatant ved "DEAE Sephadex A50" søjlekromatografi, og dette præparats hydrolytiske aktivitet (målt ved HPLC ved overvågning af omdannelsen af cephalosporin C til desacetyl cephalosporin C) viste sig at blive inhiberet af phosphorforbindel-20 serne med de almene formler (I), (II), (III) og (IV).
Efter at fermentation er afsluttet, omdannes det ønskede cephalosporin C produkt fortrinsvis ved kendte fremgangsmåder såsom de fremgangsmåder, der er beskrevet i US-patentskrift nr. 3.573.296, til et derivat, der lettere kan udvindes fra substratet ved opløsningsmiddel-25 ekstraktionsprocedurer. Cephalosporin C eller derivatet heraf opnået ved fermentation kan herefter omdannes ved kendte fremgangsmåder til 7-ACA, et nøglemellemprodukt i fremstillingen af mange semisyntetiske cephalo-sporiner. Ved at benytte phosphorinhibitorforbindelserne i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse opnås cephalosporin C eller deri-30 vatet heraf og det endelige 7-ACA mellemprodukt mere effektivt og i en større grad af renhed sammenlignet med den tidligere fremgangsmåde med ubehandlet substrat.
Opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler. Udtrykket "ppm", som benyttes i eksemplerne, er beregnet på vægt/vægt-basis.
Eksempel 1
Standardrysteflaskefermentationer af Cephalosporium acremonium (en højt ceph C-producerende mutantstamme, der også producerer desacetyl 35 11 DK 168451 B1 ceph C) iværksattes i overensstemmelse med følgende protokol. Podekultur initieredes ved inokulering af et majsstøbevæske-glucosebaseret podemedium fra en nedfrossen opbevaringskultur. Podeflasker dyrkedes i 3 dage ved 281C, mens de rystedes ved 260 opm, og 10¾ inokulumvolumen benytte-5 des til at starte produktionsfasen af fermentationerne. Produktionsmediet baseredes på en afbalanceret sammensætning af majsstøbevæske, "Pharmamedia" (bomuldsfrømel, som sælges af Traders Oil Mill Company,
Forth Worth, Texas), dextrin, sojaolie, methionin og ammoniumsulfat. Flaskerne rystedes ved 25eC og 260 opm i en samlet periode på 6 dage, 10 hvorefter portioner af substratet fortyndedes, filtreredes og analyseredes for cephalosporin C og desacetylcephalosporin C ved HPLC. Inhibitorer tilsattes i de nedskrevne mængder på dag 4 (96 timer). Resultaterne summeres nedenfor.
15 Tilsæt- Des C/ nings- Des samlet Ceph- niveau Ceph C Ceph C kerne1
Tilsat inhibitor ppm μg/g øg/g % 20 Di isopropyl- 1600 9750 495 4,83 phosphit 600 9850 520 5,01:
Tri isopropyl- 1600 11000 575 4,96 phosphit 600 8995 530 5,56
Di benzyl- 600 9380 485 4,92 25 phosphit 100 9220 660 6,68
Dimethyl hydrogen- 600 9400 350 3,60 phosphit (Mobil Chem. Co.) 100 10615 520 4,67
Dimethyl hydrogen- 600 9380 340 3,49 phosphit (Alfa Chem. Co.) 100 9360 415 4,23 30 Di ethyl acetyl 1000 9285 440 4,52 phosphonat 600 9665 445 4,40
Kontrol, ingen tilsætning 8760 705 7,45 *Ceph C + Des Ceph C 35
Eksempel 2
Under anvendelse af standardrysteflaskefermentationsbetingelser og samme producerende kultur som bekrevet i eksempel 1 sattes uorganiske og 12 DK 168451 B1 organiske phosphorforbindel ser til den igangværende fermentation ved 0, 48 og 96 timer efter inokulering til slutinhibitorsubstratkoncentratio-ner på 100 til 800 ppm. Resultaterne summeres i følgende datatabel.
5 Dag 6 Dag 7
Inhibitorforbindelse - -
Tidspunkt for til- Ceph C/ ^D_ Ceph C/ fD_
sætning/slut- Des Ceph C C + D Des Ceph C C + D
koncentration i ppm i øg/g % i /tg/g % 10 _
Phosphorsyrling 0 timer/ 100 11810/730 5,8 10300/925 8,2 200 10540/460 4,2 11585/935 7,4 400 9940/350 3,4 10240/500 4,6 15 800 10600/390 3,5 10335/425 3,9 48 timer/100 10300/710 6,4 9370/820 8,0 200 9895/535 5,1 9950/710 6,6 400 10030/405 3,8 9305/480 4,9 800 9200/355 3,7 9180/470 4,8 20 96 timer/100 8355/755 8,3 10240/1430 12,2 200 7670/670 8,0 9605/975 9,2 400 7830/640 7,5 8645/705 7,5 800 10140/780 7,1 8225/770 8,5
Di phenylphosphit 25 96 timer/100 10565/1145 9,7 9705/1220 11,22 200 10345/935 8,2 10000/1410 12,3 400 9985/690 6,4 9250/945 9,2 800 9615/780 7,5 8800/720 7,5
Kontrol (ingen til - 30 sætning af inhibitor) 8055/1145 12,5 8784/1562 15,1 1
koncentration af des ceph C
- x 100 koncentration af ceph C + des ceph C 35
Eksempel 3
Under anvendelse af standardrysteflaskefermentationsbetingelser og samme producerende kultur som bekrevet i eksempel 1 sattes uorganiske 13 DK 168451 B1 phosphorinhibitorforbindelser til mediet før sterilisation ved autoklavering ved 121eC i - 20 minutter. Resultaterne summeres i følgende datatabel .
5 Dag 6
Inhibitorforbindelse - slutkoncentration Ceph C/Des Ceph C _ i ppm i C + D % 10 Phosphorsyrling/200 9740/600 5,8 400 8050/340 4,0 800 7111/285 3,8
Phosphorundersyrling/150 8110/1130 12,2 300 8600/1000 10,4 15 450 9080/940 9,4
Kontrol (ingen tilsætning af inhibitor) 7840/1060 11,9
* koncentration af des ceph C
20 - x 100
koncentration af ceph C + des ceph C
Eksempel 4
Cephalosporium acremonium fermenteredes i 30 1 omrørte tankfermen-25 tatorer ifølge standardprocedurer for opbygning af kultur og fermentering. Beholderne inokuleredes til 10% af medievolurnenet med en podekultur, som var propageret på et majsstøbevæske "Pharmamedia"-glucosemedi-um. Fermenteringsmediet var sammensat af majsstøbevæske, sojamel og sojaolie som organisk carbon og nitrogen. Glucosesirup og sojaolie tilsat-30 tes under fermenteringen. Til testfermentatoren sattes tributylphosphit ved 96 timer til en slutsubstratkoncentration på 300 ppm. Virkningen af tilsætningen er anført nedenfor udtrykt i ændringer i niveuaerne af cephalosporin C og desacetyl cephalosporin C.
35 14 DK 168451 B1
Tributylphosphit - 300 ppm ved 96 timer W_
Tid (timer) C + D (%) 5 .......................................
74 4,2 85 3,7 98 4,3 109 4,0 10 122 4,6 133 5,8 146 6,9 157 7,9 170 9,1 15 ........................................
* koncentration af des ceph C
- x loo
koncentration af ceph C + des ceph C
20 Kontroltest - inhibitor ikke tilsat *D_
Tid (timer) C + D (%) 25 74 4,8 85 4,5 98 5,1 109 6,9 122 8,9 30 133 12,6 146 13,0 157 13,2 170 15,0
Tilsætningen af tri butylphosphit nedsatte mængden af produceret desacetyl cephalosporin C til 9,1% af den samlede ceph kerne sammenlignet med 15,0% i kontrol testen.
35 15 DK 168451 B1
Eksempel 5
Cephalosporlum acremonium fermenteredes i en 3000 1 tankfermentor med omrøring under anvendelse af konventionelle cephalosporin C medier 5 og konventionelle fremgangsmåder. Dimethylhydrogenphosphit tilsattes ved 100 timer til en slutsubstratkoncentration på 600 ppm. Resultaterne af tilsætningen af inhibitor summeres i de følgende tabeller.
Dimethylhydrogenphosphit ved 100 timer 10 fD_
Tid (timer) C + D (%} 78 5,8 91 7,4 15 102 8,8 115 7,7 126 6,9 139 7,9 150 7,4 20 163 8,3 168 9,0
* koncentration af des ceph C
-- x 100
25 koncentration af ceph C + des ceph C
30 35 16 DK 168451 B1
Kontrol - inhibitor ikke tilsat _
Tid (timer) C + D (%) 5 --------------------------------------- 83 5,8 96 8,2 107 10,7 120 11,9 10 131 13,8 144 16,9 155 18,9 168 20,9 170 22,5 15 ........................................
* koncentration af des ceph C
- x 100
koncentration af ceph C + des ceph C
20 Eksempel 6 Følgende phosphorforbindel ser testedes ligeledes ved rysteflaske-fermentationer og udviste inhibitoraktivitet med hensyn til desacetyl cephalosporin C produktion: 25 tri ethylphosphonoacetat 2-chlorethylphosphonsyre tetraethylpyrophosphit diethylcyanomethylphosphat 2,2,2-tri chlorethylphosphordi chloridit 30 dimethylphosphat trimethylphosphit tri ethylphosphit di butylphosphit tri(2-chlorethyl)phosphit 35 trimethylphosphonoacetat di ethyl ethylphosphonat tri butylphosphit triphenylphosphit 17 DK 168451 B1 di ethylcarbomethoxymethylphosphonat dimethyl acetylmethylphosphonat dimethylcyanomethylphosphonat diethyl al1ylphosphonat 5
Eksempel 7 Følgende phosphorforbindel ser testedes ligeledes i fermentorer og udviste inhibitoraktivitet med hensyn til desacetyl cephalosporin C produktion: 10 tri ethylphosphonoacetat 2-chlorethylphosphonsyre tetraethylpyrophosphit di ethylcyanomethylphosphonat 15 dimethylmethylphosphonat 2,2,2-tri chlorethylphosphordi chloridi t dimethylphosphat triethylphosphit di phenylphosphit 20 tri phenylphosphit di isopropylphosphit tri i sopropylphosphit
Claims (20)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C, ved hvilken en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer des- 5 acetyl cephalosporin C, dyrkes i et næringsmedium, KENDETEGNET ved, at man til mediet sætter en phosphorforbindelse med den almene formel Rla R4\ s/* ^>P-OR3 d20' r5ct ^r6 10 (I) (») R5a ΚχΟ .o OR1 ener ' X R«"^ \r9 R2<X X>R2 (111) (IV) hvori R1, R2 og R3 uafhængigt af hinanden betegner ligekædet eller forgrenet Cj-C^alkyl, phenyl eller phenyl(Ci-C4)alkyl, idet al kyl gruppen eller al kyldelen af phenyl al kyl eventuelt er substitueret 20 med én eller flere halogen- eller carboxysubstituenter, og phenylgruppen eller phenyl del en af phenyl al kyl eventuelt er substitueret med én eller flere Cx-Cgalkyl-, Ci-Cgalkoxy- eller halogensubstituenter, R4 er Ci-Cealkyl, der eventuelt er substitueret med én eller flere halogengrupper, eller er -OR10, hvori R10 er hydrogen eller er som 25 defineret for Rl, R5 er hydrogen eller er som defineret for R1, R6 er hydrogen, C2-C6alkenyl, C2-C6alkanoyl eller C^Cgal-kyl, idet alkylgruppen eventuelt er substitueret med én eller flere cyano-, C2-C6alkanoyl- eller carboiCj-CJalkoxygrupper, og R8 og R9 begge enten er hydrogen eller chlor, i en koncentration fra ca. 100 30 til 3000 ppm.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at mikroorganismen er en cephalosporin C-producerende stamme af slægten Cephalosporium.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at mikroorganis men er en cephalosporin C-producerende stamme af Cephalosporium acremo-nium. DK 168451 B1
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at phosphorforbindel sen har formlen RxOv ^P-OR3
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4,KENDETEGNET ved, at R1, R2 og 10 R3 uafhængigt af hinanden betegner methyl, ethyl, isopropyl, n-butyl, phenyl, benzyl, isodecyl eller 2-chlorethyl.
5 R20// hvori R1, R2 og R3 uafhængigt af hinanden betegner Cj-C^al-kyl, halogensubstitueret (^-C^alky!, phenyl eller benzyl.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at phosphorforbindel sen har formlen
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at R4 er 2-chlorethyl eller -OR10, hvori R10 er hydrogen, benzyl, n-butyl, ethyl, isopropyl, methyl, phenyl eller 2,2,2-trichlorethyl, R5 er hy- 30 drogen, ethyl, methyl, 2-chlorethyl, n-butyl, phenyl, isopropyl eller benzyl, og R6 er hydrogen, ally!, cyanomethyl, carboethoxymethyl, methyl, carbomethoxymethyl, ethyl, acetyl eller acetylmethyl.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at 35 phosphorforbindel sen har formlen R5°\p/° Re/ ^R9 5 DK 168451 B1 hvori R5 er hydrogen, Cx-C^alkyl, halogensubstitueret Ci-Cj0alkyl, phenyl eller benzyl, og R8 og R9 begge enten er hydrogen eller chlor.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, KENDETEGNET ved, at R5 er hydrogen, methyl, ethyl eller 2,2,2-trichlorethyl.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at 10 phosphorforbindel sen er tetramethylpyrophosphit eller tetraethyl py ro- phosphit.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at phosphorforbindel sen er udvalgt fra gruppen bestående af phosphorsyr- 15 ling, phosphorundersyrling, di isopropylphosphit, tri isopropylphosphit, di benzylphosphit, dimethylphosphit, tributylphosphit, triethylphosphono-acetat, tetraethylpyrophosphit, diethylcyanomethylphosphonat, dimethyl-methyl phosphonat, 2,2,2-trichlorethylphosphordichioridit, diphenylphosphit, triphenylphosphit, trimethylphosphit, dibutylphosphit, tri(2- 20 chlorethyljphosphit, trimethylphosphonoacetat, diethylethylphosphonat, diethylcarbomethoxymethylphosphonat, diethylacetylphosphonat, dimethyl -acetyl methylphosphonat, dimethylcyanomethylphosphonat og diethyl allyl-phosphonat.
12. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at phosphorforbindel sen er udvalgt fra gruppen bestående af phosphorsyr-ling, phosphorundersyrling, di isopropylphosphit, triisopropylphosphit, di benzylphosphit, dimethylphosphit og tributylphosphit.
13. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at phosphorforbindel sen er phosphorsyrling.
14. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at en organisk phosphorforbindel se sættes til den igangværende fermentation 35 mellem ca. 70 og 140 timer efter inokulering,
15. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 2 eller 3, KENDETEGNET ved, at en uorganisk phosphorforbindel se sættes til dyrkningsmediet før sterilisa- DK 168451 B1 tion eller fra 0 til 140 timer efter inokulering.
15 RV / RSCT xR6 hvori R4 er C1-Cealkyl, halogensubstitueret Cx-C6alkyl eller 20 er -OR10, hvori R10 er hydrogen, Ci-C10alkyl, halogensubstitueret Cj-Cjoalkyl, phenyl eller benzyl, R5 er hydrogen, C1-C10alkyl, halogensubstitueret C1-C10alkyl, phenyl eller benzyl, og R6 er hydrogen, C2-C6alkenyl, Cx-C6alkyl, C2-C6alkanoyl eller Cj-Cgalkyl substitueret med C2-C6alkano-25 yl, carbo(C1-C6)alkoxy eller cyano.
16. Anvendelse af en phosphorforbindelse med den almene formel R1°\ R \ x° 5 >-01?* >> r2q/ RsCr ^ R6 (I) (II) R5Ov O r1°v /0Rl 10 eller N/ Rs^' \Re XOR! (III) (IV) hvori R1, R2 og R3 uafhængigt af hinanden betegner ligekædet eller 15 forgrenet Cj^C^alkyl, phenyl eller phenyl (Cx-C4) al kyl, idet al kyl gruppen eller al kyldel en af phenyl al kyl eventuelt er substitueret med én eller flere halogen- eller carboxysubstituenter, og phenylgruppen eller phenyl del en af phenyl al kyl eventuelt er substitueret med én eller flere Cx-C6alkyl -, Ci-Cgalkoxy- eller halogensubstituenter, R4 20 er Cx-C6alkyl, der eventuelt er substitueret med én eller flere halogengrupper, eller er -OR10, hvori R10 er hydrogen eller er som defineret for R1, R5 er hydrogen eller er som defineret for R1, R® er hydrogen, C2-C6alkenyl, C2-C6alkanoyl eller Ci-Cgal-kyl, idet alkylgruppen eventuelt er substitueret med én eller flere cya-25 no-, C2-C6alkanoyl- eller carboiCi-CJalkoxygrupper, og R® og R9 begge enten er hydrogen eller chlor, til reduktion af dannelsen af desacetyl cephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetyl cephalosporin C, i et næringsmedium, idet phosphorforbindelsen sættes til næringsmediet i en 30 koncentration fra ca. 100 til 3000 ppm.
17. Anvendelse ifølge krav 16, KENDETEGNET ved, at mikroorganismen er en cephalosporin C-producerende stamme som angivet i krav 2 eller 3.
18. Anvendelse ifølge krav 16 eller 17, KENDETEGNET ved, at phos phorforbindelsen er som angivet i et hvilket som helst af kravene 4-13. DK 168451 B1
19. Anvendelse ifølge krav 16 eller 17, KENDETEGNET ved, at en organisk phosphorforbindelse sættes til den igangværende fermentation mellem ca. 70 og 140 timer efter inokulering.
20. Anvendelse ifølge krav 16 eller 17, KENDETEGNET ved, at en uorganisk phosphorforbindelse sættes til dyrkningsmediet før sterilisation eller fra 0 til 140 timer efter inokulering. 10 15 20 25
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US47244483 | 1983-03-07 | ||
| US06/472,444 US4520101A (en) | 1983-03-07 | 1983-03-07 | Production of cephalosporin C |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK139484D0 DK139484D0 (da) | 1984-02-29 |
| DK139484A DK139484A (da) | 1984-09-08 |
| DK168451B1 true DK168451B1 (da) | 1994-03-28 |
Family
ID=23875534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK139484A DK168451B1 (da) | 1983-03-07 | 1984-02-29 | Fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C og anvendelse af nærmere angivne phosphorforbindelser til reduktion af dannelsen af desacetylcephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetylcephalosporin C. |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4520101A (da) |
| JP (1) | JPH069517B2 (da) |
| KR (1) | KR910002861B1 (da) |
| AT (1) | AT381723B (da) |
| AU (1) | AU567142B2 (da) |
| BE (1) | BE899086A (da) |
| CA (1) | CA1209072A (da) |
| CH (1) | CH661284A5 (da) |
| CY (1) | CY1467A (da) |
| DE (1) | DE3408194A1 (da) |
| DK (1) | DK168451B1 (da) |
| ES (1) | ES530294A0 (da) |
| FI (1) | FI78733C (da) |
| FR (1) | FR2545502B1 (da) |
| GB (1) | GB2136000B (da) |
| GR (1) | GR81804B (da) |
| HK (1) | HK16189A (da) |
| IE (1) | IE57096B1 (da) |
| IT (1) | IT1175945B (da) |
| KE (1) | KE3849A (da) |
| LU (1) | LU85240A1 (da) |
| MY (1) | MY8800129A (da) |
| NL (1) | NL194830C (da) |
| PT (1) | PT78205B (da) |
| SE (1) | SE461470B (da) |
| SG (1) | SG79688G (da) |
| ZA (1) | ZA841602B (da) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9689021B2 (en) * | 2011-10-14 | 2017-06-27 | Université de Liège | Method for measuring beta-lactam antibiotics |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB820422A (en) * | 1957-01-30 | 1959-09-23 | Ici Ltd | Production of cephalosporin by fermentation |
| US3151240A (en) * | 1960-09-27 | 1964-09-29 | Bendix Corp | Carrier signal attenuation as a function of two variables |
| FR1363594A (fr) * | 1962-07-02 | 1964-06-12 | Merck & Co Inc | Procédé de production de céphalosporine c par fermentation |
| GB975394A (en) * | 1962-07-25 | 1964-11-18 | Farmaceutici Italia | Cephalosporin c |
| GB1109362A (en) * | 1964-04-10 | 1968-04-10 | Nat Res Dev | Improvements in fermentation processes for the production of antibiotics from emericellopsis-cephalosporium fungi |
| US3573296A (en) * | 1968-07-01 | 1971-03-30 | Bristol Myers Co | Process for the preparation of 7-aminocephalosporanic acid |
| CH553850A (de) * | 1970-01-21 | 1974-09-13 | Ciba Geigy Ag | Verfahren zur darstellung von fuer die gesteuerte biosynthese von cephalosporin c, geeigneten mangel-mutanten und deren verwendung zur gesteuerten biosynthese von cephalosporin c. |
| GB1400433A (en) * | 1971-08-13 | 1975-07-16 | Alfa Farmaceutici Spa | Production of cephalosporin c |
| JPS5431077B2 (da) * | 1971-11-15 | 1979-10-04 | ||
| US3830809A (en) * | 1972-08-25 | 1974-08-20 | Bristol Myers Co | Bis-dicyclohexylamine n-carbisobutoxycephalosporin c |
| US4059573A (en) * | 1973-08-01 | 1977-11-22 | Glaxo Laboratories Limited | Extraction of N-blocked amino acids from aqueous media |
| DK385974A (da) * | 1973-08-17 | 1975-04-28 | Ciba Geigy Ag | |
| JPS577719B2 (da) * | 1973-09-28 | 1982-02-12 | ||
| JPS577720B2 (da) * | 1973-10-01 | 1982-02-12 | ||
| US3932392A (en) * | 1974-01-14 | 1976-01-13 | Bristol-Myers Company | Process for the preparation of 7-aminocephalosporanic acids |
| IT1042829B (it) * | 1975-09-24 | 1980-01-30 | Lorenzini Sas Inst Biochim | Procedimento per la produzione di cefalosporina c |
| GB1597856A (en) * | 1977-03-07 | 1981-09-16 | Massachusetts Inst Technology | Production of cephalosporin antibiotics |
| US4178210A (en) * | 1977-03-07 | 1979-12-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Accellular synthesis of cephalosporins |
| JPS54163880A (en) * | 1978-04-26 | 1979-12-26 | Glaxo Group Ltd | Improvement in cephalosporin production |
-
1983
- 1983-03-07 US US06/472,444 patent/US4520101A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-02-08 CA CA000447028A patent/CA1209072A/en not_active Expired
- 1984-02-10 AU AU24478/84A patent/AU567142B2/en not_active Expired
- 1984-02-29 DK DK139484A patent/DK168451B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-02-29 GR GR73946A patent/GR81804B/el unknown
- 1984-03-02 NL NL8400691A patent/NL194830C/nl not_active IP Right Cessation
- 1984-03-02 ZA ZA841602A patent/ZA841602B/xx unknown
- 1984-03-02 FI FI840838A patent/FI78733C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-03-02 IT IT19892/84A patent/IT1175945B/it active
- 1984-03-05 PT PT78205A patent/PT78205B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-03-05 AT AT0074384A patent/AT381723B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-05 ES ES530294A patent/ES530294A0/es active Granted
- 1984-03-06 BE BE0/212514A patent/BE899086A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 SE SE8401235A patent/SE461470B/sv not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 IE IE536/84A patent/IE57096B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 GB GB08405879A patent/GB2136000B/en not_active Expired
- 1984-03-06 FR FR8403470A patent/FR2545502B1/fr not_active Expired
- 1984-03-06 CH CH1102/84A patent/CH661284A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-06 DE DE19843408194 patent/DE3408194A1/de active Granted
- 1984-03-07 LU LU85240A patent/LU85240A1/fr unknown
- 1984-03-07 KR KR1019840001138A patent/KR910002861B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-03-07 JP JP59042203A patent/JPH069517B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-11-25 SG SG796/88A patent/SG79688G/en unknown
- 1988-11-25 KE KE3849A patent/KE3849A/xx unknown
- 1988-12-30 MY MY8405879A patent/MY8800129A/xx unknown
-
1989
- 1989-02-23 HK HK161/89A patent/HK16189A/xx not_active IP Right Cessation
- 1989-07-21 CY CY1467A patent/CY1467A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Owens et al. | Rhizobium-synthesized phytotoxin: an inhibitor of β-cystathionase in Salmonella typhimurium | |
| SG188126A1 (en) | Fermentation media comprising urea-like nitrogen sources and its use for the production of secondary metabolits, enzymes and recombinant proteias | |
| US5484728A (en) | Parathion hydrolase analogs and methods for production and purification | |
| US4248966A (en) | Synthesis of isopenicillin derivatives in the absence of living cells | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| US3677902A (en) | Preparation of amyloglucosidase | |
| EP0241147B1 (en) | Process for the production of macrolide compounds | |
| CN109136207A (zh) | 一种重组大肠杆菌生产磷脂酶d的方法 | |
| DK168451B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af cephalosporin C og anvendelse af nærmere angivne phosphorforbindelser til reduktion af dannelsen af desacetylcephalosporin C ved dyrkning af en cephalosporin C-producerende mikroorganisme, der også producerer desacetylcephalosporin C. | |
| US20080318289A1 (en) | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus | |
| NO824162L (no) | Mikroorganismer av genus hypomikrobium og fremgangsmaate til avbinding av metylgruppeholdige forbindelser i vandig opploesninger | |
| JPH01104195A (ja) | ２−アリールオキシプロピオン酸の製造方法 | |
| US5413920A (en) | Method for enhanced production and recovery of phosphate starvation inducible gene products | |
| CA2251596A1 (en) | Process for the preparation of clavulanic acid | |
| CN100434525C (zh) | 新型丙三醇激酶、该基因和使用该基因的丙三醇激酶的制造法 | |
| SU1694642A1 (ru) | Способ получени ноурзеотрицина | |
| Svensson et al. | Glycerol catabolite regulation of d-cycloserine production in Streptomyces garyphalus | |
| KR100446110B1 (ko) | 세팔로스포린 c 생산 미생물 | |
| CN118726439A (zh) | 一种构建重组蛋白表达能力提升的枯草芽孢杆菌底盘菌株的方法 | |
| NO135185B (da) | ||
| WO2009138994A1 (en) | A fermentation process for the production of secondary metabolites | |
| JPH08275776A (ja) | 新規キチナーゼ及びその製造方法 | |
| KR19980039741A (ko) | 세팔로스포린 c 생산 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법. | |
| WO2001060976A1 (en) | Single colonies of myxobacteria cells | |
| JPS62253389A (ja) | Ｌ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフイニル）−酪酸の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed | ||
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |