JPH01104195A - ２−アリールオキシプロピオン酸の製造方法 - Google Patents

２−アリールオキシプロピオン酸の製造方法

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JPH01104195A
JPH01104195A JP63164817A JP16481788A JPH01104195A JP H01104195 A JPH01104195 A JP H01104195A JP 63164817 A JP63164817 A JP 63164817A JP 16481788 A JP16481788 A JP 16481788A JP H01104195 A JPH01104195 A JP H01104195A
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ester
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bacillus
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JP63164817A
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Mauro A Bertola
マウロ　アッティリオ　ベルトラ
Smet Marie-Jose De
マリー　ヨーセ　デ　スメット
Arthur F Marx
アーサー　フリートリッヒ　マルクス
Gareth T Phillips
ガレス　トーマス　フィリップス
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Gist Brocades NV
Shell Internationale Research Maatschappij BV
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Gist Brocades NV
Shell Internationale Research Maatschappij BV
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    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
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    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は２−アリールオキシプロピオン酸エステルを対
応するカルボン酸へ立体特異的に転化する方法に関する
ものであり、その際に未転化エステル中に異性体富化（
高量化）をもたらす方法に関する。
〔従来の技術〕
生物学的活性化合物の多くのものは立体異性体の混合物
として存在することが公知である。従来これらの混合物
は農業上及び製薬掌上の応用面に屡々使用されている。
通常の場合に所望の生物学的活性は主として片方の立体
異性体に存在するから２種の立体異性体混合物の場合に
混合物の力価は半減してしまう。けれども立体異性体混
合物のままで継続使用する理由は主として立体異性体分
別の費用の方が活性増加可能性による潜在的利益よりも
大である点にある。
〔発明が解決しようとする課題〕
従って２−アリールオキシプロピオン酸の純粋なエナン
チオマー（鏡像体）の経済上魅力的な収率における製造
のための工業的規模による製法に対する要請が増しつつ
あり、本発明の目的は該製法の提供にある。
〔課題を解決するための手段〕
本発明はアリールオキシプロピオン酸エステルのＲ−異
性体の富化のため、並びに了り−ルオキシプロビオン酸
エステルの立体選択的加水分解によって生成された対応
するアリールオキシプロピオン酸の中にＳ−配置を主と
して形成させるため、の方法を提供するものであり、該
方法は弐■（ただし式中Ａはエステル残基であって好ま
しくはアルキル基、任意に置換された基又は枝鎖を有す
る基であり、Ｒ”は任意に置換された了り−ル又は任意
に置換された複素環基であって炭素原子（複数）のみな
らずチッ素、イオウ及び酸素から成る群から選ばれる単
数又は複数の原子を有し、該複素環基は任意に置換され
るものであり、Ｂ及びＤは任意の置換基例えば水素又は
ハロゲン原子である）で示されるアリールオキシプロピ
オン酸エステルを、Ｃ（１６）Ａ基の立体選択的加水分
解能を持つ微生物の作用又は微生物からの誘導物質の作
用に付することにより、主としてＳ−配置体である対応
するカルボン酸を生成させる方法である。
該方法を行った後に、Ｒ−配置体を主とするエステルを
、Ｓ−配置体を主とする酸から好ましくは分別し、任意
に、Ｒ−配置を有する他のエステルヘＲ−エステルを転
化させるか又はＲ−配置を有する対応するカルボン酸へ
転化させる。該転化は当業界公知の方法により遂行され
る。
好ましくはＡは炭素原子数１〜６の線状アルキル基であ
って好ましくはフェニル、メチル又はエチル基により、
更に好ましくはメチル又はエチル基により、任意に置換
されたか又は枝鎖を有する該線状アルキル基である。
Ｒｏは任意に置換されたアリール基又は複素環基であり
、該環基は例えばトリフルオロメチル、フッ素、塩素、
臭素、ＣＩ”’　ＣａアルキノＣ１メトキシ、ニトロ基
で任意に置換される。
適切な式■の化合物はフルアジフォップ　ブチルエステ
ル（ｆｌｕａｚｉｆｏｐ　ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒ）即
ちブチル−２−４−（５−）リフルオロメチル−２−ピ
リジルオキシ）−フェノキシ−プロピオネートであるか
又はジクロフオツプ　エチルエステル（ｄｉｃｌｏｆｏ
ｐ　ｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ）即ちエチル−２−４−（
２，４−ジクロロフェノキシ）フェノキシ　プロピオネ
ートである。
本発明の方法に従うと式■の２−アリールオキシプロピ
オン酸エステル又はこのカルボン酸そのものは主として
Ｒ−配置を有するものとして、即ち５０重量％以上のＲ
−異性体を有するものとして生成されるから有利である
。
本発明の好適態様に従い末法は微生物又は微生物からの
誘導物質を選択することによって遂行され、かようにし
て遊離酸の少くとも７０重量％、好ましくは８０重量％
、更に好ましくは８５重量％がＳ−配置を有するものと
して該遊離酸を与える。
本発明の他の目的は本発明方法において有利に使用され
得る酵素を提供するにある。
式Ｉの化合物のＳ−エステルを立体選択的に加水分解し
得る多数の微生物が今や本発明に右いて発見された。更
に欧州特許出願Ｅ　Ｐ　−Ａ　−０２３３６５６号明細
書記載の微生物も又使用され得る。該欧州出願の発明は
２−アリールプロピオン酸の製法に係わる。その実験例
によればラセミ体混合物〔例えばナプロキセン　エステ
ル（ｎａｐｒｏｘｅｎ　ｅｓｔｅｒ）又はイブプロフェ
ン　エステル（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ　ｅｓｔｅｒ）　〕
を使用した場合に或種の微生物の使用下に特異的にＳ−
エステルが加水分解されることが示されている。けれど
もフェノキシプロピオン酸の場合には、カイラル（ｃｈ
ｉｒａｌ）なＣ−原子の周辺基の特別な配列にもとづき
、ナプロキセンエステル使用の場合に期待されるように
、加水分解されるものはＲ−エステルであると期待され
るかもしれない。
よってＲ−ナプロキセンのエステルを加水分解する微生
物が式Ｉの化合物のＳ−エステルを加水分解する事実は
予測外のことである。
本発明における“立体選択的加水分解能をもつ微生物”
との用語は細菌、酵母又は真菌を包含する微生物を意味
する。適切な細菌は例えばバチルス（Ｂａｃｉ　ｌ　１
ｕｓ）属及びスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓ）属に属するもの、適切な酵母は例えばピキ
ア（Ｐｉｃｈｉａ）属に属するもの、及び適切な真菌は
例えばデバロミセス（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）属に属
するものである。
上記微生物から誘導された突然変異株も又同様に使用さ
れ得る。
新規な遺伝子の導入によって弐Ｉのエステルの立体選択
的加水分解能を獲得した微生物も又使用され得る。
上記の遺伝子４人は立体選択的加水分解能を示す物質、
即ちエステラーゼ酵素、をコードするクローニングされ
た遺伝子の、スクリーニングされた成る微生物から他の
微生物、特にエシェリキアコリ　（ε５ｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ　ｃｏｌｉ）　、への転移によって達成され得る。
転換されるその他の微生物はサツカロミセス（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙ
ｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、バチルス属、アスペルギルス
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、エシェリキア属、プソ
イドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属及びストレプ
トミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の微生物であ
る。クローニングされた遺伝子はエステル、例えばβ−
ナフチル−アセテート、ナプロキセンエステル又は式Ｉ
を有する化合物、を加水分解し得る酵素をコードする能
力にもとづいて選択され得る。又は別法としてエステラ
ーゼをコードする選択済み遺伝子を用いる交雑によって
選択され得る。後者（別法）による選択は、対応する酵
素のＤＮＡ配列において、関連する微生物が相同性を表
すことの観察（Ｉｈａｒａｅｔ　ａｔ、、１９８５．　
Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、９８　、ｐ、９５）　ニ’ｂト
ツくと共にプラスミドｐＮＡＰＴ−７（欧州特許出願Ｅ
　Ｐ　−Ａ−０２３３６５６号明細書例１１参照）が他
のバチルス属の種からみちびかれた染色体のＤＮＡと交
雑することを示す本発明者等の観察にもとづくものであ
る。更に本発明は、式■のエステルの加水分解における
微生物の活性又は微生物からの誘導物質の活性を増加さ
せる利益を与えるためにエステラーゼを成る微生物の中
ヘコードする複合され及び（又は）変改された遺伝子複
写物（コピイ）を導入する方法を包含する。この微生物
は例えばバチルス　スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　
５ｕｂｔｉｌｉｓ）であり得る。
該微生物は例えばポリマーゲル上に、これを不動態化す
ることが有利である。不動態化は生細胞、休眠細胞及び
（又は）死菌細胞を用いて行われ得るが別法としては、
高度に特異的な活性を必要とするならば成程度まで純化
されたエステラーゼ酵素を用いて行われる。
従って用語“微生物又は微生物からの誘導物質”は微生
物、死菌細菌、生細胞又は休眠細胞或はそれらの抽出物
、任意に濃縮もしくは純化された該抽出物を意味する。
生細胞又は死菌細胞から誘導又は単離された細胞加水分
解物又は酵素（製剤）は適切な条件の下で式■のＳ−異
性体へ転化させることが見出された。例えば細胞内酵素
又は細胞外酵素は上記の微生物から得られる。遊離カル
ボン酸のＳ−異性体への転化は適宜の緩衝液並びに生理
的食塩水の中で生起する。貯蔵された後にも誘導された
細胞群は式（Ｉ）のエステルを遊離カルボン酸のＳ−異
性体へ転化させる。
本発明で使用されるバチルス属の種の培養物はバチルス
　リヘニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉ
ｆｏｒｍｉｓ）　（この種菌試料は受託番号１１９４５
の下でＡＴＣＣに寄託されている〕、バチルススブチリ
ス、好ましくはバチルス　スブチリスＴｈａｉＩ−８に
の種菌試料は受託番号６７８・８５の下でＣＢＳに寄託
されている〕及びバチルスＮミル４Ｍ種〔この種菌試料
は受託番号３４２・８７の下にＣＢＳに寄託されている
〕の各培養物を包含する。
本発明で使用されるスタフィロコッカス属の種の培養物
はスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓ。
ａｕｒｅｕｓ）　　にの種菌試料は受託番号３４１・８
７の下でＣＢＳに寄託されている〕、スタフィロコッカ
ス　アウレウスＮａｐ２−５にの種菌試料は受託番号３
４０・８７の下でＣＢＳに寄託されている〕の各培養物
を包含する。
本発明で使用されるピキア属の種の培養物はピキア　フ
ァリノサ（Ｐ、　ｆａｒｉｎｏｓａ）　（この種菌試料
は受託番号０５３４の下でＩＦＯに寄託されている〕の
培養物を包含する。
本発明で使用されるデバロミセス属の種の培養物はデバ
ロミセス　ハンセニ（Ｄ、　ｈａｎｓｅｎｉｉ）　（こ
の種菌試料は受託番号（１６）３４の下でＩＦＯに寄託
されている〕の培養物を包含する。ＮａｐｌＯＭ株を本
発明で使用し得るがこの植株試料は受託番号８０５・８
５の下でＣＢＳに寄託されている。
本発明の好適態様に従うと式■の化合物を少くとも７０
重量％のＳ−配置体を有する対応する遊離カルボン酸へ
転化させる能力を具える微生物を約０．５〜１０日間培
養する。次に該細胞群を液体普通培地中に懸濁させて式
■の化合物を該細胞群の作用に付する。又は別法として
細胞群を例えば分解用培地（Ｉｙｓｉｓ　ｍｅｄｉｕｎ
＋）中に懸濁させて死滅させてから式■の化合物を該細
胞群からの誘導物質の作用に供する。
約０．５〜１０日間にわたる上記の培養の後に細胞群を
培地から単離した後に該細胞群を液体普通培地中に、又
は分解用培地中に、懸濁させる。
弐Ｉの化合物の選択的加水分解のために使用する微生物
を生育させるには、同化性炭素源（例えばグルコース、
乳酸塩、シュクロース等）、チッ素源（例えば硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニラ、　ム、塩化アンモニウム等
）及び有機性栄養源（例えばイーストエキス、麦芽エキ
ス、ペプトン、肉エキス等）並びに無機性栄養源（例え
ばリン酸塩、マグネシウム、カリウム、亜鉛、鉄及びそ
の他のコン跡量の金属類）の供給剤を含有する通常の培
養基を使用し得る。
任意に単数成分又は複数成分で富化されたＪａｐ培地を
適宜の培地として使用し得る。下記組成のＪａｐ培地を
使用してよい： 大豆粉（３０ｇ／ｌ）　、硝酸ナトリウム（７，５ｇ／
ｊ）　、硫酸第一鉄・７Ｈ，０（０，２８ｇ／ｌり、ク
エン酸ナトリウム（６ｇ／ｊり及びフラクトース（１２
，５ｇ／ｌ）　、ｐＨ７，２に調整。この培地使用前に
例えば１２０℃に２０分間殺菌せねばならない。
他の好適培地は任意に単数又は複数の成分で富化された
ＴＢＳ−培地２Ｘである。６０ｇ／Ｉｌのトリブチカー
ゼ大豆ブロス（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ　ｓｏｙ　ｂｒｏ
ｔｈ）［：０ｘｏｉｄ■〕を使用し得る。この培地の使
用前に例えば１２０℃に２０分間殺菌せねばならない。
その他の好適培地は任意に単数又は複数成分で富化され
た２ＸＴＹ培地である。この培地としてトリプトン（Ｔ
ｒｙｐｔｏｎｅ）　　［Ｄｉｆｃｏ■］　３０ｇ／ｌ、
イーストエキス〔口１ｆｃｏ■〕２０　ｇ／　ｌ、　Ｎ
ａＣｊ！３ｇ／Ｉｌ、　　（ＮＨｓ）ａＨＰｏ、　　１
ｇ／ｌ及び（ＮＨ４）、Ｓｏ。
１ｇ／ｌ　（ｐＨ６，８に調整）から成るものを使用し
得る。使用前に培地を例えば１１０℃に３０分間殺菌せ
ねばならない。更に好ましい培地は任意に単数又は複数
成分で富化された脱脂乳培地である。
下記組成の脱脂乳培地を使用してよい：脱脂乳粉から調
製された１０％脱脂乳。これを使用前に例えば１１０℃
に３０分間殺菌せねばならない。
脱脂乳培地に対する富化として例えば０．５％乳酸塩又
はＰＳｒｌｌ塩或はそれらの組合せを使用し得る。下記
組成のＰＳＩＩＩ塩培地を用いてよいニリン酸二水素カ
リウム（２，１ｇ／ｘ）、リン酸−水素アンモニウム（
１，０ｇ／ｊり、硫酸アンモニウム（０，９ｇ／ｆ）、
塩化カリウム（０，２ｇ／ｌ）、クエン酸ナトリウム（
０，２９ｇ／β）、硫酸カルシウム・２１ｈＯ（０，（
１６）５ｇ／ｌ＞　、硫酸マグネシウム・７ＨｚＯ（０
，２ｇ／　ｌ）　、硫酸第一鉄アンモニウム・６１１□
０　　（２，５ｇ／Ｉり、硫酸亜鉛・７Ｈ２Ｏ（０，５
■／ｌ）、塩化マンガン・４１１□Ｏ（０，３■／ｌ）
、硫酸銅・５１１．０　　（０，１５■／ｌ）、塩化コ
バルト・６ｉ＋、ｏ　　（０，１５■／Ｉｌ）、オルソ
−ホウ酸（０，０５■／Ｅ）、モリブデン酸ナトリウム
・２１ｈＯ（０，０５５ｍｇ／　１）及びヨウ化カリウ
ム（０，１■／１）、ｐＨを６．８に調整。
ＰＳＩＩＩ塩培地使用前に例えば１２０℃に２０分間殺
菌せねばならない。
微生物生育期に温度θ〜４５℃及びｐｌ＋３．５〜９に
保持することが好ましい。更に好ましくは温度２０〜３
７℃、ｐＨ５〜９において微生物を生育させる。
微生物生育期に必要な好気条件は当業界周知の操作に従
って達成され得るけれども酸素供給は微生物の代謝要求
量に合致すれば充分である。該供給は酸素導入により達
成させるのが最も便利であり、適切に行うには空気の形
状で、任意に同時に反応液の振盪又は攪拌を伴わせる。
式■のエステルを遊離カルボン酸へ転化させる際に微生
物は生育期にあることで良く、既述の通常使用の培地を
使用し、又は微生物は酵素の劣化を防止する何らかの系
（培地又は緩衝液）の中に保存されても良い。
式■のエステルを遊離カルボン酸へ転化させる際に必要
な場合に同化性炭素源（例えばグルコース、乳酸塩、シ
ュクロース等）、必要な場合にチッ素源（例えば硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム等）
及び必要な場合に有機栄養源（例えばイーストエキス、
麦芽エキス、ペプトン、肉エキス等）並びに必要な場合
に無機栄養源（例えばリン酸塩、マグネシウム、カリウ
ム、亜鉛、鉄及び他のコン跡量の金属類）の供給剤を含
有する通常の培地を用い得る。
好ましくは、式Ｉのエステルを遊離カルボン酸へ転化さ
せる際に任意に単数又は複数の成分で富化されたＪａｐ
培地（既述の通り）を使用してよい。
更に好ましくは任意に単数又は複数の成分で富化された
脱脂乳培地（既述の通り）を使用してよい。
例えば同化性炭素源の除去により、又はチッ素源の除去
により微生物を非生育期に保持することができる。この
加水分解期において温度０〜４５℃、ｐＨ３，５〜９に
維持することが好適である。
該加水分解期において温度２０〜３７℃、ｐＨ５〜８に
微生物を保持することが好ましい。この期間において必
要な好気条件は当業界周知の操作に従うけれども酸素供
給量は微生物の代謝所要量に合致すれば充分である。こ
れは酸素を好ましくは空気の形態で、同時に任意に反応
液を振盪又は攪拌しながら供給することにより最も便利
に達成される。生成された遊離のカルボン酸を分別し、
Ｒ−配置体を富化した弐Ｉのエステルを回収して純化し
、所望ならばＲ−配置を有する他の型のエステル又は遊
離酸へ転化させ得るがこれらはかような諸製品について
公知されたいかなる操作に従ってもよい。
微生物を５０％グリセリン中に凍結されるか又は凍結乾
燥される寒天斜面の上に保持し得る。必要ならば周知の
操作に従って微生物を予備培養し得る。例えば微生物を
ブイヨン又はＢ　ＨＩ　（ｂｒａｉｎ−ｈｅａｒｔ　１
ｎｂｕｓｉｏｎ）培地の中で３０℃に２４時間、回転振
盪器上で培養し得る。下記組成のブイヨン培地を使用し
得る：　Ｌａｂ　Ｌｅｍｃｏ　Ｌ　２９　（肉エキス、
０ｘｏｉｄ■）（９ｇ／ｌ）、バタトベプトン（Ｂａｃ
ｔｏｐｅｐｔｏｎ）　（１０ｇ　／　１　）及び塩化ナ
トリウム（５ｇ／ｊり　、ｐＨ７，６に調整。使用前に
この培地を例えば１２０℃に２０分間殺菌せねばならな
い。
ＢＨＩ培地としては０．０３７ｇ／６ＢＨＩ（Ｏｘｏｉ
ｄ■）を含有するもの（ｐＨ７，０に調整）を使用し得
る。使用前にこの培地を例えば１２０℃に２０分間殺菌
せねばならない。
下記組成のＹＥＰＤ培地を使用し得る：バクトペプトン
２０ｇ／Ｉ！、イーストエキス１０ｇ／β、グルコース
２０ｇ／ｌｏ使用前にこの培地を例えば１１０℃に３０
分間殺菌せねばならない。
バチルス　スブチリスＴｈａｉ　　Ｉ−８から誘導され
、式（１）のエステルを加水分解し得る酵素は欧州特許
出願Ｅ　Ｐ　−Ａ−０２３３６５６号明細書において特
性化されている。該エステラーゼ活性は微生物内に存在
するリパーゼ活性と無関係であることが見出されていた
。エステルの“不良”異性体（“ｗｒｏｎｇ″ｉｓｏｍ
ｅｒ）の加水分解量が低度であることは該バチルス株の
夾雑するリパーゼ活性に主として由来することは事実で
ある。Ｔｈａｉ　　ｒ　＝８株の純化されたエステラー
ゼはバチルスの全細胞分解物よりも有意に高い鏡像体選
択能を示すのである。
Ｅ、コリ／ｐＮＡＰＴ−７株及びバチルス／ｐＮＡＰＴ
−７株は共にＴｈａｉ　　ｌ−３ｘステラーゼをコード
するプラスミドを有するが該両株は有意の量のエステラ
ーゼを産生する。Ｓ　Ｄ　Ｓ　−Ｐ、Ａ１［、ＩＥ法、
ＨＰＬＣ−３ＥＣ法及び等電集束法（ｉｓｏｅｌｅｃｔ
ｒｉｃ　ｆｏｃｕｓｉｎｇ）によって確認された通りの
エステラーゼ活性を有す名タンパク質は微生物の細胞分
解物中において最高濃度を示すタンパク質であることは
驚異に値する。
遺伝子のクローニングが酵素の表現レベルを改善し得る
ことは公知であるけれどもエステラーゼの場合において
エステラーゼ量の増大は実に驚くべきことである。タン
パク質の劣化及び細胞内沈積は酵素に関する遺伝子のク
ローニングの際の折り畳み（ｆｏｌｄｉｎｇ）の誤りと
して屡々起る問題である（Ｈａｒｒｉｓ、　Ｔ、　Ｊ、
Ｒｏ、１９８３．　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ４、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）。これら
の問題はエステラーゼをコードする遺伝子のクローニン
グの場合にも起るであろうと思われる。
本発明の更に他の態様として本発明の方法によって得ら
れたＲ型異性体を主とするか又はＳ型異性体を主とする
殺草活性塩、酸又はエステルを含有すると共に不活性の
希釈剤或いは担体を含有する殺草組成物が提供される。
〔実施例〕
下記の路側は本発明を例証するが但し本発明は該路側の
範囲に限定されない。
例　　１ 三種の細菌と一種の真菌とをＢＨＩ（細菌用）又はＹＥ
ＰＤ　（真菌用）の培地中で３０℃に２４時間予備培養
してから１０％脱脂乳中へ接種した。
各株を５（１６）１ｎｌ容のバッフルフラスコ中に保持
された１（１６）ｍ１！の該脱脂乳に接種（５Ｘ）して
から３０℃に４８又は７２時間恒温保持した。その後に
培養物に対し１．２５　Ｍ　Ｔｒｉｓ　／ＨＣｌ緩衝液
（ｐＨ８，０）を最終濃度５０ｍＭとなるまで添加し、
並びに４０ｍｇのラセミ型のフルアジフオップ　ブチル
エステルの大豆油溶液（２（１６）■エステル／−大豆
油）を添加し、該培養物を更に２４時間恒温保持した。
恒温保持時間終了後に培養物を酢酸エチルで抽出し、生
成酸を単離し、シリカゲルコラムを用いて純化した。
単離されたエステル及び酸の旋光度を測定した。
エステル及び酸の夫々をＢ　Ｆ　ｓ　／　Ｍｅ　ＯＨ使
用下にエステル基交換させ、又はエステル化させた後に
コラムＣＢａｋｅｒｈｏｎｄ　ＤＮＢＰＧ　（Ｄｉｎｉ
ｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）　
ｃｏｖａｌｅｎｔ　ｃｏｌｕｍｎ〕を用いてＨＰＬＣ法
によりエステル及び酸の鏡像体純度を更に確定した。そ
の結果を第１表に示す。
！１麦　　フッげジフォップ　ブチルエステルの分割（
注）＊全エステル供試量：約２（１６）ｍｇ例２ 例１のようにして五種の微生物を予備生育させ、１（１
６）ｍｌ容バッフルフラスコ中に保持された２５ｍ１の
１０％脱脂乳中へこれを接種した。
３０℃に４８時間生育させた後に、大豆油中に溶解した
約１６可のラセミ型ジクロフオツプ　エチルエステルを
培養物に添加し、これを更に２４時間恒温保持した（本
例においてＴｒｉｓ／　ＨＣＩｔ緩衝液を添加しない）
。
恒温保持時間終了後に培養物をｎ３ｐｏ、使用でｐＨ４
，０に酸性化し、２ｍｌの二塩化メチレンで抽出した。
残留エステル及び生成酸を単離してＨＰＬＣによって分
析した。このエステルは或場合にエステル基交換せずに
分析された。酸はＢＦ３／ＭｅＯＨを用いてまずエステ
ル化されることが常法である。
結果を第２表に示す。
ｍ　　ジクロフォップ　エチルエステルの分゛割（注）
＊全エステル供試Ｉ：約０．８ｇ／ｊ’表中の数値は実
施２回後の平均値である例３ 例１のようにして五種の微生物を予備生育させ、１（１
６）Ｉ１１容バツフルフラスコ中に保持された２５ｍ１
の１０％脱脂乳中にこれを接種した。
３０℃に４８時間生育させた後に約１０■のラセミ型ジ
クロフォップ　メチルエステルの大豆油中の溶解物を該
培養物に添加してから更に２°４時間培養した（本例に
おいてＴｒｉｓ／　ＨＣＩ！緩衝液を添加しない）。
培養時間終了後に培養物をＨｆｆＰＯＪでｐＨ４，０に
酸性化し、２５ｍ１ｌの二塩化メチレンで１回抽出した
。残留エステル及び生成酸を単離し、ＨＰＬＣで分析し
た。エステルはエステル基交換せずに分析可能であった
。酸をまずＢＦｓ／ＭｅＯＨでエステル化した。結果を
第３表に示す。
第３表　ジクロフォップ　メチルエステルの分割例４ 例１のようにして三種の微生物を予備生育させ、１（１
６）ｍｌ容バッフルフラスコ中に保持された２５ｍ１０
１０％脱脂乳中にこれを接種した。
３０℃に４８時間生育させた後に約ｔｏｍｇのラセミ型
フェノキサブロブ　エチルエステル（ｆｅｎｏｘａｐｒ
ｏｐ　ｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ）の大豆油溶解物を該培
養物に添加してから更に２４時間培養したく本例におい
てＴｒｉｓ／ＨＣβｙ衝液を添加しない）。
培養時間終了後に培養物を８３ＰＯ４でｐＨ４，０に酸
性化し、２５ｒｄの二塩化メチレンで１回抽出した。
残留エステルを単離しＨＰＬＣによって分析した。
結果を第４表に示す。
第４表　フェノキサブロブ　エチルエステルの分割例５ ジクロフォップ　エチルエステル及びジクロフオツプ　
メチルエステルのＴｈａｉ　　Ｉ−８エステラーゼ（バ
チルス１−８５／ｐＮａｐ　Ｔ　７、ＣＢ５６７８・８
６の中へクローニングされてから単離されたエステラー
ゼ）による加水分解を１（１６）ｍ１容フラスコ中に保
持された１０ｍ１の反応用培地中で行った。該反応用培
地の組成分は酵素エキス（１０−’単位／ｍｆ）　、０
．１Ｍ　　ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７，５）　、Ｂ　ＳＡ
　（２ｕ／ｎｕ）　、ラセミ型ジクロフォップ　エチル
エステル（０，２■／ｍｌ）及びトウイン°（Ｔｗｅｅ
ｎ）　−８０（２％（ｖ／ｖ）　）であった。この混合
物を回転振盪器上で３０℃に２時間培養した。培養時間
の終了後に混合物を二塩化メチレンで抽出し、残留エス
テルと生成酸とをＨＰＬＣにより分析した。エステルと
酸とをＢＦ。
／ＭｅＯＩＩで先ずエステル化した。結果を第５及び６
表に示す。
玉１表Ｔｈａｔ　Ｉ−８エステラーゼによるジクロフォ
ップ　エチルエステルの分割

Claims (22)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）アリールオキシプロピオン酸エステルのＲ−異性
    体を富化し、アリールオキシプロピオン酸エステルを立
    体選択的加水分解に付してＳ−配置体を主とする対応す
    るアリールオキシプロピオン酸を生成させる方法におい
    て、 下式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔但し式中Ａはエステル残基であり、Ｒ’は任意に置換
    されたアリール又は任意に置換された複素環基であって
    炭素原子（複数）以外にチッ素、イオウ及び酸素から成
    る群から選ばれる単数又は複数の原子を含有し、該複素
    環基は任意に置換され、Ｂ及びＤは任意の置換基である
    〕で示されるアリールオキシプロピオン酸エステルを、
    ＣＯＯＡ基の立体選択的加水分解能を持つ微生物の作用
    又は微生物からの誘導物質の作用に付し、かようにして
    主としてＳ−配置体である対応するカルボン酸を生成さ
    せることを特徴とする前記の方法。
  2. （２）主としてＲ−配置体であるエステルを、主として
    Ｓ−配置体である酸から分別し、任意に、Ｒ−エステル
    をＲ−配置を有する他のエステルヘ転化させるか又はＲ
    −配置を有する対応するカルボン酸へ転化させ、該転化
    を公知の方法によって遂行する請求項１記載の方法。
  3. （３）Ｓ−配置体であるカルボン酸が少くとも７０重量
    ％の量で生成される請求項１又は２記載の方法。
  4. （４）Ａがアルキル基、任意に置換され又は分枝化され
    たアルキル基であって好ましくはＡが炭素原子数１〜６
    個の線状アルキル基である請求項１〜３のいずれか１項
    記載の方法。
  5. （５）主としてＲ型のフルアジフォップブチルエステル
    又はジクロフォップエチルエステルが単離される請求項
    １〜４のいずれか１項記載の方法。
  6. （６）微生物が不動態において、生細胞として、死菌細
    胞として又は休眠細胞として使用される請求項１〜５の
    いずれか１項記載の方法。
  7. （７）式 I の立体選択的化合物を対応するＳ−配置体
    であるカルボン酸へ転化させる能力を有する物質を微生
    物から遊離させてこれを使用する請求項１〜６のいずれ
    か１項記載の方法。
  8. （８）微生物が細菌、酵母又は真菌である請求項１〜７
    のいずれか１項記載の方法。
  9. （９）微生物がバチルス属又はスタフィロコッカス属に
    属する細菌、ピキア属に属する酵母、或いはデバロミセ
    ス属に属する真菌である請求項８記載の方法。
  10. （１０）微生物がバチリスリヘニフォルミス、好ましく
    はバチルスリヘニフォルミス（ＡＴＣＣ１１９４５）バ
    チルススブチリス、好ましくはバチルス スブチリスＴｈａｉ I −８（ＣＢＳ６７９・８５）；
    バチルス属の種Ｎａｐ４−Ｍ（ＣＢＳ３４２・８７）；
    スタフィロコッカスアウレウス、好ましくはスタフィロ
    コッカスアウレウス（ＣＢＳ３４１・８７）；スタフィ
    ロコッカスアウレウスＮａｐ２−５（ＣＢＳ３４０・８
    ７）；ピキアファリノサ、好ましくはピキアファリノサ
    （ＩＦＯ０５３４）；デバロミセスハンセニ、好ましく
    はデバロミセスハンセニ（ＩＦＯ８０３４）；又は菌株
    Ｎａｐ１０Ｍ（ＣＢＳ８０５・８５）或いはそれらの突
    然変異株もしくは変異株である請求項９記載の方法。
  11. （１１）微生物がエステラーゼをコードするＤＮＡ断片
    の使用によって転換された微生物である請求項１〜７の
    いずれか１項記載の方法。
  12. （１２）ＤＮＡ断片がバチルス属の種から誘導されたも
    のである請求項１１記載の方法。
  13. （１３）ＤＮＡ断片がバチルススブチリスから誘導され
    たものである請求項１２記載の方法。
  14. （１４）ＤＮＡ断片がプラスミドへ挿入される請求項１
    ３記載の方法。
  15. （１５）プラスミドがｐＮＡＰＴ−７又はｐＮＡＰＴ−
    ８である請求項１４記載の方法。
  16. （１６）使用される微生物がエシエリキアコリ、好まし
    くはＥ．コリＪＭ１０１ｈｓｄｓ又はＥ． コリＤＨＩである請求項１１〜１５のいずれか１項記載
    の方法。
  17. （１７）使用される微生物がバチルススブチリス、好ま
    しくはＢ．スブチリス１−８５又はＢ．スブチリス１Ａ
    ４０である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の方法
    。
  18. （１８）請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法によ
    って産生されたときに主としてＲ−配置を有するか又は
    主としてＳ−配置を有する殺草活性の酸、塩又はエステ
    ル。
  19. （１９）請求項１７記載の少くとも１種の化合物を含有
    すると共に不活性の担体又は希釈剤を含有する殺草組成
    物。
  20. （２０）請求項１記載の式 I で示されるエステルを立
    体選択的に加水分解することにより主としてＳ−配置を
    持つ対応するカルボン酸を生成させる能力を有する酵素
    。
  21. （２１）請求項１記載の式 I で示されるエステルを立
    体選択的に加水分解することにより主としてＳ−配置を
    持つ対応するカルボン酸を生成させ、その後に、得られ
    たＳ−異性体富化酸を式 I のＲ−異性体富化エステル
    から実質上分別させる能力を有する酵素の使用。
  22. （２２）バチルス属の種Ｎａｐ４Ｍ（ＣＢＳ３４２・８
    ７）及びスタフイロコッカスアウレウスＮａｐ２−５（
    ＣＢＳ３４０・８７）又はそれらの突然変異株及び変異
    株から成る群から選ばれる微生物。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3910024A1 (de) * 1989-03-28 1990-10-11 Basf Ag Verfahren zur fermentativen herstellung von 2-(4-hydroxipenoxi-)propionsaeure
US5238831A (en) * 1989-04-28 1993-08-24 Gist-Brocades Stabilization of carboxyl esterase
KR100204837B1 (ko) * 1989-04-28 1999-06-15 기스트 브로카데스 나암로제 베노오트하프 카르복실 에스테라제의 안정화
US5457051A (en) * 1993-03-09 1995-10-10 Sepracor, Inc. Enantioselective hydrolysis of ketoprofen esters by beauveria bassiana and enzymes derived therefrom
US5580783A (en) * 1994-10-12 1996-12-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Enzymatic process for the preparation of chiral α-tertiary carboxylic acid esters
RU2762200C1 (ru) * 2020-09-09 2021-12-16 Общество с ограниченной ответственностью "БИОТРОФ" Способ кормления сельскохозяйственных птиц при введении в корм добавки на основе микроорганизмов рода Bacillus

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2927535A1 (de) * 1979-07-07 1981-01-08 Bayer Ag Stereoselektive spaltung von phenylglycinderivaten mit enzymharzen
CA1215924A (en) * 1983-07-27 1986-12-30 David W. Bewick Process for producing optically active aryloxypropionic acids and derivatives thereof useful as herbicides
EP0149241B1 (en) * 1983-12-28 1991-03-27 Agency Of Industrial Science And Technology Dna base sequence containing regions involved in the production and secretion of a protein, recombinant dna including the whole or a part of the dna base sequence, and method of producing proteins by use of the recombinant dna
US4801537A (en) * 1984-06-08 1989-01-31 Genex Corporation Vector for expression of polypeptides in bacilli
IT1201408B (it) * 1985-03-22 1989-02-02 Montedison Spa Processo per la preparazione biotecnologica di acidi alfa-arilalcanoici otticamente attivi
DE3680132D1 (de) * 1985-04-01 1991-08-14 Kanegafuchi Chemical Ind Verfahren zur herstellung von optisch aktiver indolin-2-carbonsaeure.
DE3532026A1 (de) * 1985-09-09 1987-03-19 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung optisch aktiver (alpha)-phenoxypropionsaeure und deren derivate
GB8600245D0 (en) * 1986-01-07 1986-02-12 Shell Int Research Preparation of 2-arylpropionic acids

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IL86929A (en) 1992-07-15

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