CN1831107A - 中药多菌种混合固体发酵技术及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了中药多菌种混合固体发酵技术及其应用。该技术通过制备多菌种发酵液，然后将中药粉碎，过筛，调节含水量及pH，加入豆粕、麸皮和无机盐，灭菌，冷却，加入一定比例的菌种发酵液，进行发酵，发酵结束后烘干即成。该技术可用于畜禽养殖业，特别是制备具有抗菌、抗病毒和/或促生长作用的药物或饲料添加剂。该技术具有加工方法简单，能提高中兽药疗效同时具有益生素的特点。

Description

中药多菌种混合固体发酵技术及其应用

技术领域

本发明属于生物发酵领域，涉及一种中药多菌种混合固体发酵技术，本发明还涉及该技术在畜禽养殖业中制备药物或绿色饲料添加剂的应用。

背景技术

在经济全球化步伐加快、市场开放程度不断扩大的今天，我国畜牧养殖业获得了加速发展的新机遇，但同时也面临着更加激烈的市场竞争。一方面，在国际市场上，发达国家对我出口畜禽产品的品质、卫生、安全等要求越来越高，绿色贸易壁垒的门槛不断地被抬高，已成为制约着我国畜禽产品的出口的瓶颈；另一方面，随着国民经济的发展和社会的进步，人民生活水平的不断提高，国内消费者不仅仅满足于温饱，在注重口味的同时，也将更加重视各种食品的营养结构及食品安全。健康、安全、无污染的食品越来越受到各阶层人士的青睐，而采用抗生素、生长类激素等添加剂养殖的畜禽产品将被拒绝进入市场。在日益强调食品安全的大潮流下，如何提高畜禽产品品质、减少药残，逐渐降低甚至禁止抗生素等药物作添加剂的使用，生产出无抗食品，是国际农产品市场的发展趋势。为了寻找抗生素的替代品，生产出既能有效防止畜禽疾病的发生，促进动物生长，毒副作用小，无残留，无耐药性的绿色饲料添加剂，各国研究人员做了大量的工作，发现中草药和微生态制剂(益生素)是两类重要的发展方向。

中草药是我国特有的中医理论与实践的产物，是一类兼有营养和药用双重作用，具备直接杀灭或抑制细菌和增强免疫能力的功能，且能促进营养物质消化吸收的无残留，无耐药性的天然药物。在兽医方面，应用中草药防治畜禽、水产动物疾病完全符合“安全食品生产”的要求，既有利于人类的生存健康，又符合出口要求，对养殖业的发展有重要意义。但就目前中草药在此领域的应用存在着剂型单一、质量粗糙、用量大、成本高等不利因素。例如其剂型就只有中药粗粉和浸提。中药粗粉在使用过程中存在着只能混饲，这样活性物质不能被完全利用，降低了生物利用度，导致用药量增大。中药经过微生物发酵后，由于微生物能产生大量的酶，如木质素酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶等，同时还产生某些生物活性物质。在这些微生物产物的作用下，中药的有效成分从细胞壁中释放，使有效成分含量升高，同时由于酶的作用，会产生一些新的类似物，这为中草药在养殖业的大量应用找到一条很好的出路。

发酵中药的作用机理：酶是一类具有高度催化效率的生物催化剂，它可以使复杂的化学反应在常温常压下迅速完成。微生物在生长过程中会产生各种各样的酶，如纤维素酶、木质素酶、淀粉酶、蛋白酶、脂酶等。这些丰富而强大的酶系可以将药物的成分分解转化形成新的活性成分，产生新的药效，发酵中药可通过下述途径来生产：首先，微生物以中药中的有效成分为前体，经微生物的代谢形成新的化合物；其次，微生物在生长过程中还能产生丰富的次生代谢产物，有些次生代谢产物自身就是功效良好的药物；第三，微生物的次生代谢产物和中药中的某些物质发生化学反应生成新的化合物；第四，由于中药的某些物质可能对微生物的生长和代谢有促进或抑制作用，对活性成分的产生也可能有促进或抑制作用，微生物在中药的特殊环境中也有可能改变自身的代谢途径，从而形成新的活性成分或改变各活性成分的相互比例；最后，微生物的分解作用有可能将中药中的有毒物质进行分解，从而降低药物的毒副作用，如菜籽饼、棉籽饼经微生物发酵后可以脱去有毒物质。利用微生物的生长代谢来炮制中药，可以比一般的物理或化学的炮制手段更具优越性，可较大幅度地改变药性，提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症。

由于中药发酵过程中微生物与中药材的作用是相互影响，且目前采用的微生物多数是药用真菌，发酵的方法多采用固体发酵技术，因此，部分学者提出药用真菌双向性固体发酵工程理论，并对该技术的理论基础、发酵组合的设计、菌质的药理筛选等内容进行了研究，具体内容可参见文献(庄毅，药用真菌新型(双向型)固体发酵工程.中国食用菌.2002，21(4)：3～6)。

药用真菌新型(双向性)固体发酵工程(简称双向发酵)的关键是将发酵菌种和发酵基质所构成发酵组合内的基质部分，由以往仅用富含碳、氮等营养的农副产品(甘蔗渣、麦麸等)作为单向性的营养基质(其发酵后的产品称药用菌质)，改变为采用具有一定活性成分的中药材作为药性基质，它既能提供真菌生长所需营养又会受真菌的酶的作用而被改变组织成分，从而产生新的性味功能，故具有双向性，其发酵后的产品称药性菌质，如兼用营养、药性两种基质则称为全性基质，发酵后的产品也称药性菌质。药性菌质，有可能比该真菌或药性基质本身或两者简单相加有更良好的药效，主要表现在增效、扩大应用、解毒等方面(参见：药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研制.中国药学杂志，2004，39(03)，P175～178)。

药用真菌新型(双向性)固体发酵工程为中药研究开发开辟了一个新的领域，即菌物药(参见：庄毅.中药的一个新领域.中药新药与临床药理.1992，3(2)49～51)。但是，由于不同菌种的生长条件存在差异，多菌种混合生长时相互之间的影响不是十分清楚，目前的研究多集中在单一菌种对特定中药材的研究领域，筛选不同菌种配伍与单一或多种中药材进行发酵的技术未见报道，也没有将中草药多菌种混合固体发酵技术用于畜禽养殖业的报道。

发明内容：

本发明的目的是针对上述技术问题提供一种中草药多菌种混合固体发酵技术。

本发明的另一个目的是提供上述固体发酵技术在畜禽养殖业中制备药物或绿色饲料添加剂的应用。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

一种中药多菌种混合固体发酵技术，包括下列步骤：

制备混合菌种发酵液：将二种或二种以上的原始菌种分别接种到各自的适宜培养基中在适当的条件下生产一级种子液，在对数生长期转接到二级种子液发酵罐扩大培养，二级种子发酵液培养至菌种生长处于对数生长期时再转接到生产罐中发酵，达到对数生长期时停止发酵，将分别发酵的菌液混合成为混合菌种发酵液，备用；

中药发酵：将中药粉碎，过筛，调节至适宜的含水量及pH，加入豆粕、麸皮和无机盐，灭菌，冷却，接种混合菌种发酵液，培养发酵，发酵结束后烘干即成。

所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其中原始菌种为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、高温酵母菌(Candida tropicalis)或白地霉(Geotrichum candidum)。

所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其中进行各级扩大培养时菌种发酵液的接种量为发酵物总质量的5-10％。

所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其中制备混合菌种发酵液时采用各菌种分别发酵的菌液等比例混合成为混合菌种发酵液。

所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其中中药发酵过程是将中药粉碎，过80-100目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量5％-10％的豆粕、10％-20％的麦麸，适量的无机盐，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值6.0-7.5，通入蒸汽灭菌20～25min，冷却，加入占发酵物总质量5％-10％的混合菌种液，25～30℃保持48-96h，每天至少搅拌2次，每次4～6min，发酵结束，烘干即成。

所述的中药多菌种混合固体发酵技术在畜禽养殖业中的应用。

所述的应用是在畜禽养殖业中运用该中药多菌种混合固体发酵技术制备具有抗菌、抗病毒和/或促生长作用的药物或饲料添加剂。

采用本发明获得的中药发酵制剂或饲料添加剂与传统中兽药相比有以下优点：

1、保护中药活性成分免遭破坏，提高中兽药的药效

微生物发酵是在常温、常压等较为温和的条件下进行的生物转化，故能最大限度地保护中药中活性成分免遭破坏，特别是对热敏感的芳香类挥发油、维生素等活性成分更能有效地加以保护。专家认为，发酵中药在中药加工工艺上是一个创举，有望解决中药在煎、煮、熬、炼、蒸、浸等传统工艺中，活性成分难于最大限度提取的难题。

相对而言，发酵中药的分子量较小，因而具有在机体中吸收较快、较完全、治疗效果较好等特性。药物进入机体后不能直接被利用的有效活性组分，通过微生物将其降解成小分子活性物质而被直接利用，还能除去大分子杂质，大大提高中药的药效。小分子活性物质由于其更易于通过身体的屏障而与机体细胞蛋白结合，因而比大分子物质有更高的活性。

2、产生新药效

优选的动物有益菌种本身具有补充或增强原有药物的功能，同时，微生物产生的酶又能对中药活性成分进行结构修饰，从而产生与原有药物相比产生了新的活性物质，从而具有新的保健、预防和治疗功能。

3、多菌种发酵增加酶的种类，促进有益物质的生成

本发明产用多种产酶菌种多中药进行发酵，由于所用菌株能产生如纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，使得中草药中药中的纤维素、木质素等能充分降解，不但使中药有效成分能最大限度的成为可吸收的，并且能将纤维素转化成低聚糖，促进动物胃肠道有益菌的生长，同时并能使小分子蛋白、游离氨基酸以及多肽类产物等生物活性物质大大提高。

4、中药与益生素同时使用，作用增强

传统中兽药仅是将中药材经过初步粉碎直接添加到饲料中，有效成分不能被动物吸收或者吸收率极低；或者是通过煎煮等方法提取，其生产成本增加。通过微生物发酵技术，使得中药材中的有效成分经过生物转化成为可吸收的主要成分，提高重要疗效，同时本发明选用产酶菌株和乳酸菌等作为发酵菌种，添加到饲料中能补充酶，促进饲料吸收，提供饲料转化率，另外乳酸菌、酵母等又有益生素的作用。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述，其中采用的中药制剂仅为了使本领域普通技术人员理解本发明而举例用，不可理解为本发明的方法仅能用于这几个具体的抗菌、抗病毒、促生长方。

实施例中所用的菌种分别购自中国普通微生物保存中心和中国工业微生物保存中心。实施例中采用的碳氮源也可用豆粕、麸皮之外的用于微生物培养的其他碳氮源替代，但该碳氮源应适宜所选菌种生长。

实施例1

中药抗病毒方：

清瘟败毒散：石膏120g，地黄30g，水牛角60g，黄连20g，栀子30g，牡丹皮20g，黄芩25g，赤芍25g，玄参25g，知母30g，连翘30g，桔梗25g，甘草15g，淡竹叶25g。

发酵工艺：

将蜡样芽孢杆菌DM423和枯草芽孢杆菌CICC10071分别接种到普通肉汤培养基在37℃，250rpm摇床培养，生产一级种子液，当细菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml时将一级种子液转接到二级种子液发酵罐扩大培养(普通肉汤)，接种量为发酵物总质量的10％，培养温度25-30℃，搅拌转速250rpm，同样当细菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml时，再接种到生产罐中25-30℃发酵(以发酵物总质量作为参照，接种量为10％，培养基的碳氮源采用8％的豆粕、15％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，其余为水)，制备菌种发酵液，当细菌总数达1.0×10⁹CFU/ml时停止发酵，出罐，将分别培养的菌种发酵液按等比例混合配成混合菌种发酵液，备用；

按上述清瘟败毒散的配方将中药材粉碎，过100目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量10％的豆粕、20％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值7.0±0.3，通入蒸汽灭菌20min，冷却，加入占发酵物总质量10％的混合菌种发酵液，25-30℃保持48h，每天至少搅拌2次，每次5min。当细菌总含量达到1.0×10^6～8CFU/g时发酵结束，60℃电热烘干，制得清瘟败毒散的中药发酵制剂。

实施例2

中药抗细菌方：

四味穿心莲散：穿心莲450g，辣蓼150g，大青叶200g，葫芦茶200g。

发酵工艺：

将地衣芽孢杆菌CICC10098接种到普通肉汤，乳酸乳杆菌CGMCC1.1878和嗜酸乳杆菌CGMCC1.9分别接种到MRS培养基中，37℃，250rpm摇床培养生产一级种子液，当细菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为发酵物总质量的10％，培养温度28±2℃，搅拌转速250rpm，二级种子液菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml时接种到生产罐中25-30℃发酵(以发酵物总质量作为参照，接种量为10％，培养基的碳氮源采用8％的豆粕、15％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，其余为水)，当细菌总数达1.0×10⁹CFU/ml时停止发酵，出罐，将分别培养的菌种发酵液按0.8∶1∶1的比例混合配成混合菌种发酵液，备用；

按上述四味穿心莲散的配方将中药材粉碎，过80目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量的10％的豆粕、15％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值6.8±0.3，通入蒸汽灭菌20min，冷却，加入占发酵物总质量10％的混合菌种发酵液，25-30℃保持72h，每天至少搅拌2次，每次5min。当细菌总数达1.0×10^6～8CFU/g时停止发酵，65℃电热烘干，制得四味穿心莲散的中药发酵制剂。

实施例3

中药促生长方：

肥猪散：绵马贯众30g，何首乌30g，麦芽500g，黄豆(炒)500g。

发酵工艺：

将枯草芽孢杆菌CICC10071、地衣芽孢杆菌CICC10098分别接种到普通肉汤，乳酸乳杆菌CGMCC1.1878和嗜酸乳杆菌CGMCC1.9分别接种到MRS培养基中，37℃，250rpm摇床培养生产一级种子液，当细菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml再转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为发酵物总质量的8％，培养温度28±2℃，搅拌转速200rpm，当二级种子液细菌含量达到1.0×10^7～8CFU/ml转接种到生产罐中25-30℃发酵(以发酵物总质量作为参照，接种量为10％，培养基的碳氮源采用8％的豆粕、15％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，其余为水)，当细菌总数达1.0×10⁹CFU/ml时停止发酵，出罐，将分别培养的菌种发酵液按1∶0.8∶1.1∶1的比例混合配成混合菌种发酵液，备用；

按上述肥猪散的配方将中药材粉碎，过90目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量的5％的豆粕、20％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值6.8±0.3，通入蒸汽灭菌20min，冷却，加入占发酵物总质量8％的混合菌种发酵液，25-30℃保持96h，每天至少搅拌2次，每次5min。当细菌总数达1.0×10^6～8CFU/g时停止发酵，55℃电热烘干，制得肥猪散的中药发酵制剂。

实施例4

中药抗病毒促生长方：

健鸡散：党参20g，黄芪20g，茯苓20g，六神曲10g，麦芽10g，山楂10g，甘草5g，槟榔5g

发酵工艺：

将乳酸链球菌CGMCC1.1936、高温酵母菌CGMCC2.617和白地霉CGMCC2.498分别接种到MRS、YPD、麦芽汁培养基中，乳酸链球菌在37℃，高温酵母菌和白地霉30℃，250rpm摇床培养生产一级种子液，当微生物含量达到1.0×10^6～8CFU/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为5％，培养温度28±1℃，搅拌转速230rpm，二级种子液微生物含量在1.0×10^6～8CFU/ml时接种到生产罐中28±1℃发酵(以发酵物总质量作为参照，接种量为10％，培养基的碳氮源采用8％的豆粕、15％的麦麸，适量的无机盐(MnSO₄0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，其余为水，当微生物总数达1.0×10⁹CFU/ml时停止发酵，出罐，将分别培养的菌种发酵液按等比例混合配成混合菌种发酵液，备用；

按上述健鸡散的配方将中药材粉碎，过80目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量的10％的豆粕、10％的麦麸，0.5％蔗糖，无机盐(MnSO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.01％)，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值7.2±0.2，通入蒸汽灭菌20min，冷却，占发酵物总质量5％的混合菌种发酵液，25-30℃保持96h，每天至少搅拌2次，每次5min。当微生物总数达1.0×10^6～8CFU/g时停止发酵，70℃电热烘干，制得健鸡散的中药发酵制剂。

实施例5

中药多菌种固体发酵制剂对肉鸡部分免疫指标及促生长的影响

1材料

1.1药物与试剂

中药普通制剂：健鸡散(党参20g，黄芪20g，茯苓20g，六神曲10g，麦芽10g，山楂10g，甘草5g，槟榔5g)。称取上述原料粉碎，过80目即得。

中药发酵制剂：按实施例4进行发酵制得。

新城疫IV系疫苗(中牧股份南京药械厂生产)。

1.2试验动物：1日龄艾维茵肉用雏鸡90只，南京市种青龙山鸡厂提供。将90只1日龄艾维茵肉鸡随机分为3组，每组30只。在2～6日龄和25～30日龄时分别投药两次，A组按饲料量1％的用量添加中药普通制剂，B组按1％的用量添加中药发酵制剂，C组为不添加任何药物的空白对照组，按常规方法饲养。

1.3饲喂效果检测指标

1.3.1新城疫抗体水平检测：于7、21日龄用新城疫IV系疫苗进行常规免疫，分别在20和35日龄时检测抗新城疫疫苗抗体水平。测定方法采用β-微量法所测定的NDV的血凝抑制(HI)抗体，结果以log2表示。

1.3.2免疫器官指数测定：饲养至45日龄时扑杀所有鸡只，采集脾脏、法氏囊，用滤纸吸取表面的水分后，用精密天平称重，根据与体质量之比计算脾脏、法氏囊的器官指数。

1.3.3鸡体质量：分别于1、7、14、21、28、35、45日龄称重，观察各阶段鸡体质量增长情况。

2结果

2.1各试验组新城疫疫苗免疫后血凝抑制抗体效价，结果见表1。由表1可知，在第二次免疫(21日龄)前A、B组鸡的抗体水平与空白对照组相比差异显著(P＜0.05)。在第二次免疫后B组抗体水平明显高于A组差异显著(P＜0.05)。表明发酵制剂在提高机体的体液免疫方面优于未发酵制剂。

表1 各组新城疫HI抗体效价(X±S)

组别	A	B	C
				20d	4.25±0.09a	4.56±0.1a	3.90±0.1b
35d	6.05±0.2b	6.85±0.5a	5.2±0.5c

注：同行数字右肩标有不同字母的表示差异显著，大写字母表示差异极显著，小写字母表示差异显著，下同。

2.2免疫器官指数由表2可见，A、B组法氏囊指数和脾脏指数明显高于C组，差异显著(P＜0.05)，B组和A组相比，差异显著(P＜0.05)。试验表明，2个试验组制剂对脾脏和法氏囊这两个免疫器官都具有促进生长的作用，从而使机体抵抗力增强，并以发酵制剂组最为突出。

表2 法氏囊指数和脾脏指数(X±S)

组别	A	B	C
				法氏囊指数	1.76±0.1b	1.96±0.1a	1.26±0.2d
脾脏指数	1.5±0.12c	1.65±0.2a	1.4±0.1c

2.3对肉鸡生产性能的影响：由表3可知，2个试验组之间初始体质量没有显著差异，出栏体质量和料肉比A、B组与C组相比，差异显著(P＜0.05)。B组和A、C组相比差异显著(P＜0.05)。表明该中药制剂经过发酵，明显提高了饲料利用率，同时可以降低单纯中药的使用量。

表3 体重增长情况及料肉比(X±S)

组别	A	B	C
				1日龄体质量	56±2	57±3	56±3
45日龄体质量	1800±9.5b	1840±7a	1698±8c
				料肉比	2.1b	2.04a	2.21c

结论：中药制剂经过发酵后，抗新城疫的血凝抑制抗体效价、免疫器官指数高于发酵前的制剂，增重效果(饲料利用率)亦非常明显。

实施例6

中药多菌种固体发酵制剂对细菌的体外抑菌作用

1、材料

1.1药剂

中药普通制剂：四味穿心莲散(穿心莲450g，辣蓼150g，大青叶200g，葫芦茶200g)。

中药发酵制剂：按实施例2将上述中药制剂进行发酵制成。

1.2菌种及培养条件：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、多杀性巴氏杆菌由南京农业大学兽医微生物组提供，将实验菌接种于普通营养肉汤中37℃培养18～24h，备用。

2、方法

2.1中药药液的制备：按处方配药，烘干后各称取100g，加水1～2L，浸泡30min；煎煮，煮沸后文火煎30min，用4层纱布过滤药液；药渣加水0.5～1L，煮沸后煎30min，过滤药液；合并2次药液，用文火浓缩至100mL(药液中生药含量为1g/mL)，灭菌备用。中药发酵制剂按同样方法制备成溶液。

2.2试验方法：采用试管2倍稀释法测定各菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。试验中每种药均用肉汤培养基2倍系列稀释10个梯度，第11支试管作阳性对照，第12管作阴性对照，各管稀释后的最终体积为2mL。每管加试验菌的肉汤培养物(稀释度为10^-3)0.05mL，置37℃培养16～18h，观察是否有菌生长。每种药物做2组重复。

2.3结果判断：取含各稀释度中草药的试验菌培养液，采用棉签划线法接种于普通琼脂平板培养基表面，置37℃培养24h。无细菌生长的最小药物浓度计为该药对试验菌的MIC(取2组重复平均值)。将不长细菌的营养琼脂平板继续培养24h，观察细菌的生长情况，以没有长出细菌的最低浓度，作为药物的MBC。

3结果

中药普通制剂与发酵制剂对常见细菌的体外抑制作用见表4。

表4  中药普通制剂与发酵制剂对常见细菌的MIC和MBC值

菌种	普通制剂		发酵制剂
					MIC(mg/ml)	MBC(mg/ml)	MIC(mg/ml)	MBC(mg/ml)
	大肠杆菌	16	64	8					8
金黄色葡萄球菌					32	32	4	8
	枯草芽孢杆菌	16	32	8					16
多杀性巴氏杆菌					32	64	8	8

结论：中药制剂经过发酵处理后，其抗菌活性明显增强。

Claims (7)

1、一种中药多菌种混合固体发酵技术，其特征在于包括下列步骤：

制备混合菌种发酵液：将二种或二种以上的原始菌种分别接种到各自的适宜培养基中在适当的条件下生产一级种子液，在对数生长期转接到二级种子液发酵罐扩大培养，二级种子发酵液培养至菌种生长处于对数生长期时再转接到生产罐中发酵，达到对数生长期时停止发酵，将分别发酵的菌液混合成为混合菌种发酵液，备用；

中药发酵：将中药粉碎，过筛，调节至适宜的含水量及pH，加入豆粕、麸皮和无机盐，灭菌，冷却，接种混合菌种发酵液，培养发酵，发酵结束后烘干即成。

2、根据权利要求1所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其特征在于原始菌种为蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、乳酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌、高温酵母菌或白地霉。

3、根据权利要求1所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其特征在于进行各级扩大培养时菌种发酵液的接种量为发酵物总质量的5-10％。

4、根据权利要求1所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其特征在于制备混合菌种发酵液时采用各菌种分别发酵的菌液等比例混合成为混合菌种发酵液。

5、根据权利要求1所述的中药多菌种混合固体发酵技术，其特征在于中药发酵过程是将中药粉碎，过80-100目筛，装入发酵罐中，加入占中药质量5％-10％的豆粕、10％-20％的麦麸，适量的无机盐，加水至含水量在60％-70％之间，调节pH值6.0-7.5，通入蒸汽灭菌20～25min，冷却，加入占发酵物总质量5％-10％的混合菌种液，25～30℃保持48-96h，每天至少搅拌2次，每次4～6min，发酵结束，烘干即成。

6、权利要求1所述的中药多菌种混合固体发酵技术在畜禽养殖业中的应用。

7、根据权利要求6所述的应用，其特征在于在畜禽养殖业中运用该中药多菌种混合固体发酵技术制备具有抗菌、抗病毒和/或促生长作用的药物或饲料添加剂。