CN110419643B - 发酵中药制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

发酵中药制剂及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110419643B
CN110419643B CN201910829719.9A CN201910829719A CN110419643B CN 110419643 B CN110419643 B CN 110419643B CN 201910829719 A CN201910829719 A CN 201910829719A CN 110419643 B CN110419643 B CN 110419643B
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
traditional chinese
chinese medicine
probiotics
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910829719.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110419643A (zh
Inventor
刘泳君
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201910829719.9A priority Critical patent/CN110419643B/zh
Publication of CN110419643A publication Critical patent/CN110419643A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110419643B publication Critical patent/CN110419643B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
    • Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种发酵中药制剂，所述发酵中药制剂由益生菌发酵中药复方而成，所述益生菌为酵母菌、地衣芽孢杆菌，所述酵母菌为酿酒酵母JM01，保藏号为CGMCC NO.18034，所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌ZYFJ01，保藏编号为CGMCC NO.18035。本发明还提供一种提高肉禽产品品质的饲养方法，本发明根据动物生长周期三个不同阶段，在饲料中添加针对性的发酵复方中药来预防疾病，采用消毒用中药燃香熏烟、饮水添加益生菌与饲料加三阶段复方中药三位一体的无抗生素、无激素养殖方法，本发明改善了饲养环境、降低了养殖风险，为获得无抗生素、无激素的高品质产品提供了保障。

Description

发酵中药制剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及畜牧业养殖领域，尤其涉及一种发酵中药制剂及其制备方法与应用。
背景技术
随着集约化畜牧业的迅速发展，家畜的疾病也越来越复杂，兽药和抗生素饲料添加剂的使用量也日渐增加。抗生素的滥用导致各种危害，如不良反应、过敏反应、变态反应、细菌耐药、菌群失调，已成为一个全球性难题，同时抗生素的残留不仅影响畜禽产品的质量和风味，同时畜禽粪便药物有重金属的残留，导致自然生态环境造成污染，给人力健康带来严重危害。因此，寻求无抗、无激素的药物和养殖方法成为当今养殖领域的研究热点。
动物的生长周期分为三个不同阶段，第一阶段为生长初期，第二阶段为生长中期，第三阶段为生长后期。本发明根据动物不同生长期的发病特点与健康需求设计发酵中药制剂，采用消毒用中药燃香熏烟、饮水添加益生菌与饲料加三阶段复方中药三位一体的无抗生素、无激素养殖方法，改善了饲养环境、降低了养殖风险，为获得无抗生素、无激素的高品质产品提供了保障。
发明内容
本发明提供一种发酵中药制剂，所述发酵中药制剂由益生菌发酵中药复方而成，所述益生菌为酵母菌、地衣芽孢杆菌，所述酵母菌为酿酒酵母JM01，保藏号为CGMCCNO.18034，所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌ZYFJ01，保藏编号为CGMCC NO.18035。
所述酿酒酵母的活菌数为3×108cfu/mL以上，所述地衣芽孢杆菌的活菌数为3×108cfu/mL以上。
所述发酵中药制剂的制备方法为：
(1)将中药复方成分按重量份数进行混合，粉碎，过筛，混合；
(2)将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入90-110mL含所述酵母菌的菌液培养液、90-110mL含所述地衣芽孢杆菌的菌液培养液，同时加入100mL的9-11％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀；
优选地，按照每1千克加入100mL含所述酵母菌的菌液培养液、100mL含所述地衣芽孢杆菌的菌液培养液，同时加入100mL10％的葡萄糖溶液；
(3)将步骤(2)所得的中药复方与益生菌混合物置于单向阀的发酵袋中，35-40℃发酵68-76小时；优选地，37℃发酵72小时；
(4)将步骤(3)所得的中药复方与益生菌混合物的发酵物取出，置50-60℃低温烘干，粉碎，装袋，制得发酵中药制剂。
中药复方通过益生菌发酵后，药效加倍，有效物质突破细胞壁被直接萃取出来，同时大分子物质转化为小分子，更容易吸收；同时，中草药被发酵后，中草药原有的苦味被遮掩或改变，口感更好，动物更喜欢吃。
所述中药复方由以下重量的中药成分组成：党参15-40份、黄芪15-30份、红景天10-30份、苍术10-25份、佛手10-15份、白芍10-20份、金银花15-40份、马齿苋15-40份、薏苡仁20-60份、砂仁5-7份。
所述中药复方由以下重量的中药成分组成：金银花30-50份、藿香10-30份、远志10-20份、桔梗10-15份、赤芍10-30份、鱼腥草15-60份、红景天10-30份、榧子15-45份、乌梅5-30份。
所述中药复方由以下重量的中药成分组成：苍术10-40份、茯苓10-60份、车前草20-40份、木瓜15-20份、丁香3-5份、沙棘10-30份、茜草10-20份、蒲公英15-40份、鱼腥草15-60份、金银花15-30份。
本发明还提供一种提高肉禽产品品质的饲养方法，在饲养过程中向肉禽饲喂所述的发酵中药制剂。
在饲养过程中，具体包含以下步骤；
(1)在肉禽生长初期饲喂由以下重量的中药成分组成中药制剂：党参15-40份、黄芪15-30份、红景天10-30份、苍术10-25份、佛手10-15份、白芍10-20份、金银花15-40份、马齿苋15-40份、薏苡仁20-60份、砂仁5-7份；优选地，所述中药按照0.5-3％的重量比例加入到饲料中；
(2)在肉禽生长中期饲喂以下重量的中药成分组成的中药制剂：金银花30-50份、藿香10-30份、远志10-20份、桔梗10-15份、赤芍10-30份、鱼腥草15-60份、红景天10-30份、榧子15-45份、乌梅5-30份；优选地，所述中药按照0.5-3％的重量比例加入到饲料中；
(3)在肉禽生长后期饲喂以下重量的中药成分组成的中药制剂：苍术10-40份、茯苓10-60份、车前草20-40份、木瓜15-20份、丁香3-5份、沙棘10-30份、茜草10-20份、蒲公英15-40份、鱼腥草15-60份、金银花15-30份；优选地，所述中药按照0.5-3％重量的比例加入到饲料中。
中医药的最大特点就是辨证施治，因动物的不同生长周期其生理特点也不一样，所以要根据动物生长发育规律来辨证施治。
动物生长初期的特点是胃肠道功能低下、母原抗体不断衰减的过程，故第一阶段要以提高动物的免疫力为主兼顾肠道健康促食欲，选用扶正固本、健脾祛湿的天然植物复方中药；
动物生长中期的特点是发育还未成熟，抵抗病毒性疾病的能力较差，尤其是呼吸道疾病与败血性疾病，同时细菌性胃肠道疾病与寄生虫疾病并存，故第二阶段要以预防病毒性疾病为主，兼顾胃肠道疾病与寄生虫病，故选用解表清热、化痰止咳、凉血解毒的天然植物复方中药；
动物生长后期，动物发育已基本成熟，抗病毒能力大大增强，但此时动物的采食量非常大，其胃肠负担比较大，所以第三阶段要以保护胃肠道健康为主，兼顾病毒性疾病，故选用清热祛湿、燥湿渗湿的天然植物复方中药。
所述步骤(1)中在肉禽生长初期，采用中药燃香熏烟对动物房舍进行消毒，所述中药燃香的制备方法为：将苍术10-20份、石菖蒲5-15份、艾叶5-15份、甘松3-10份、白芷3-10份、丁香1-6份混合粉碎，过筛，搅拌均匀后制成圆柱形燃香；
优选地，所述中药燃香按照每立方米1g的用量，于养殖舍内点燃。
本发明采用中药熏烟避疫法来对动物房舍进行消毒，预防动物传染病的传播。熏烟中药每周点燃一次，对空气有良好的消毒作用，对巴氏杆菌、链球菌等有显著的抑制作用，可以作为预防动物传染病的辅助方法。
所述步骤(2)在肉禽生长中期，向饮水中添加益生菌，所述益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌4-6份、嗜酸乳杆菌2-3份、枯草芽孢杆菌2-3份、热带假丝酵母2-3份、粪链球菌1-2份配制而成；
优选地，将益生菌制成浓度为50-100亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶150-1：170的质量比加水稀释。
益生菌可以调节养殖动物肠道微生物菌群，一是阻止有害病原体，保证肠道健康，预防胃肠道疾病并增强动物的免疫功能；二是增进肠道对营养物质的消化吸收，减少动物有害气体的排放量，净化动物房舍环境，促进动物健康。
本发明所选用中药来源于中国农业部2012年颁布的《饲料原料目录》中的115种天然植物原料。本发明根据动物生长周期三个不同阶段，在饲料中添加针对性的发酵复方中药来预防疾病，采用消毒用中药燃香熏烟、饮水添加益生菌与饲料加三阶段复方中药三位一体的无抗生素、无激素养殖方法，本发明改善了饲养环境、降低了养殖风险，对于获得无抗生素、无激素的高品质产品提供了保障：
1、本发明发酵中药的添加及三位一体养殖方法显著提高肉禽平均体重，显著降低料重比；死亡率明显降低，提高肉禽抗病能力；显著提高经济效益。
2、本发明全程实现无抗，肉鸡产品面向终端时更加安全；避免了病毒及病菌的变异，养殖更加安全，养殖风险减小；避免了排泄物中所含抗生素对水土的污染，肉鸡粪便排泄物还可做成真正绿色有机肥。
具体实施方式
下面将结合具体实施例,对本发明作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
保藏说明
1、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01
菌种名称：酿酒酵母
拉丁名：(Saccharomyces cerevisiae)
菌株编号：JM01
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2019年06月26日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18034
2、地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01
菌种名称：地衣芽胞杆菌
拉丁名：(Bacillus Licheniformis)
菌株编号：ZYFJ01
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2019年06月26日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18035
实施例1、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01 CGMCC No.1803的筛选
一、酿酒酵母分离、筛选与鉴定
1、酿酒酵母分离
称取10g粉碎后的葡萄酒渣，加入90mL无菌生理盐水稀释，平板涂布法接种于YPD固体培养基，28℃培养24h-28h，观察并记录菌落形态。
2、酿酒酵母筛选
将分离出来的酵母菌株，接种YPD液体培养基活化24h后接种到WL琼脂培养基，27℃培养5d后观察，筛选出菌落颜色为奶油色(浅黄色)至绿色，表面为球形突起，光滑，不透明，奶油状的菌株。筛选到JM01、JM02、JM03。
3、紫外诱变与筛选
将经灭菌的固体YPD培养基倒入底部平整的平皿中，待凝固后取适量步骤1制备的菌悬液涂布于平板上，培养12h后，放入等离子菌种诱变仪进行诱变。获得诱变后的菌株JM01。
4、酿酒酵母的鉴定
(1)形状与培养特征
将菌种接种到YPD液体培养基中，25℃培养3-7d，观察是否发酵、培养液是否浑浊，是否形成环或岛，沉淀量多少及松紧状况，并制水浸片于显微镜下观察，记录酵母无性繁殖形式与细胞的形状。将酵母在YPD琼脂培养基上划线，于28℃培养3d-4d，观察其菌落形态。
JM01菌落成乳白色，细胞呈圆形，有白色紧实沉淀，多端出芽，无假菌丝。
(2)0.1％、0.01％放线菌酮抗性测试
溶解1g放线菌酮于2.5ml丙酮中，向丙酮溶液中加入6.7g氮源基础培养基，再加入含10g葡萄糖的蒸馏水，充分混合后过滤(0.20μm)除菌。取上述溶液加入到有灭菌蒸馏水的试管中，制成含0.1％、0.01％放线菌酮的培养基。向培养基中接种已活化好的酵母，25℃培养3周。观察结果。
结果表明JM01菌株在0.1％、0.01％放线菌酮培养基上均不能生长，符合酿酒酵母对0.1％、0.01％放线菌酮的抗性特征。
(3)26S rDNA序列同源性分析
采用菌落PCR方法扩增步骤一所得的菌株JM01的26S rDNA片段。细菌总DNA的提取采用细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司，Tiangen DP302-02)提取。26SrRNA扩增引物采用细菌通用引物，其引物序列为：正向引物为NL1:5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′；反向引物为NL4：5′-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3′。反应体系：1×PCR buffer 5μL；MgCl22.0mM/L；dNTP MIX 40μmol/L；Taq酶IU；模板DNA 60ng；引物各0.6μmol/L；ddH2O补充至50μL。PCR扩增程序：95℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸1min20s，进行36个循环；最后72℃延伸8min。
PCR产物利用1％琼脂糖凝胶电泳检测，片段长度约1500bp的阳性产物经纯化后送上海生工测速公司进行序列测定，其序列为序列表中序列1。
将序列1在GenBank数据库中进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)同源性比对，确定菌种类别。
上述形态、生理生化特征分析和26s rDNA序列同源性分析结果表明该菌为菌种名称：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，该菌株已于2019年06月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.18034，其分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01。
二、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.18034的抗逆性检测
1、耐热性检测
将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01 CGMCC No.18034按2％(v/v)的接种量(3.75×1010cfu/ml)接种到YPD液体培养基中，共六份，于85℃水浴锅内分别处理10min、15min、20min、30min、40min、60min后，利用YPD琼脂平板37℃恒温培养24h后，采用平板倾注法测定其活菌数。
结果如表1所示，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01 CGMCC No.18034在85℃处理10min后存活率仍达95％，处理15min，存活率达24％。证明该菌株耐热性能较好。一般饲料的制粒温度为70℃～85℃之间，耐高温之后存活率低也是酵母菌作为饲料添加剂的主要限制性因素之一。从耐热存活率看，本发明选育的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)JM01 CGMCC No.18034可以耐受制粒时的高温，作为饲料添加剂将会有较好的前途。
表1耐热试验结果
Figure BDA0002190272720000081
Figure BDA0002190272720000091
2、耐酸性检测
将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)JM01 CGMCC No.18034按2％(v/v)的接种量接种到pH值为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5的YPD液体培养基中，分别在0h、1h、2h、3h采用平板倾注法测定其活菌数。
结果表示pH值是影响酵母生长的重要因素，只有在pH值为1.5时不生长，在pH值为2.0时，生成红褐色的沉淀。其他酸度均能够生长良好，尤其pH值为4.0的酸度最适合酵母生长。
实施例2、地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01的筛选
一、地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01的分离、筛选及鉴定
1、菌株的分离培养
无菌采集28日龄健康AA肉鸡空肠，用灭菌载破片刮取肉鸡空肠粘膜，用适量无菌生理盐水稀释，平板涂布法接种于MRS培养基，37℃培养48h-72h；挑取形态不同的菌落划线接种纯培养，观察并记录菌落形态，挑取长势良好的特征单菌落于MRS肉汤培养基中。观察肉汤是否变浑浊，有浑浊的菌悬液放置4℃冰箱贮藏，进一步进行下述紫外诱变筛选实验。
2、菌株的紫外诱变与筛选
将经灭菌的固体LB培养基倒入底部平整的平皿中，待凝固后取适量步骤1制备的菌悬液涂布于平板上，培养12h后，放入等离子菌种诱变仪进行诱变。获得诱变后的菌株。
挑选诱变后的菌株接种于LB液体培养基中培养24h，然后取适量诱变后的菌悬液涂布于平板上，每平皿控制菌落在30-50个，在37℃下继续培养至24h(各菌落产生的代谢产物最大量时)，将琼脂块取出置于涂布有金黄色葡萄球菌的检测平皿上，37℃培养一段时间，以野生地衣芽孢杆菌为对照，测量并比较琼脂块周围形成的抑菌圈大小。对抑菌能力明显增大的菌株(抑菌圈大约10mm)进一步通过琼脂孔扩散法测定菌株的抑菌能力。选取抑菌圈在15mm以上的菌株进一步进行革兰氏染色实验。
3、菌株的革兰氏染色
用无菌注射器吸取少量含有步骤2所得菌株的MRS肉汤培养物，滴在载玻片上，在酒精灯火焰上轻轻烘干固定。滴加结晶紫染色液，染1min，水洗；滴加革兰氏碘液媒染，作用1min，水洗；滴加丙酮乙醇混合液(丙酮：95％乙醇＝3：7，体积比)脱色30s，水洗；滴加沙黄染色液复染1min，水洗，待干，在普通光学显微镜上观察，若菌体呈红色为阴性，呈紫色为阳性。选取呈革兰氏阳性，且形态一致的杆菌，进一步进行下述接触酶试验。
4、菌株的接触酶试验
做MRS斜面培养基，取含有步骤3所得菌株的MRS肉汤培养物约0.2mL注入装有MRS琼脂培养基斜面，5％CO2培养箱，37℃培养24h，长出菌落后，将3％过氧化氢溶液滴加到菌落上，若没有气泡产生说明是阴性，若有气泡产生说明是阳性。
通过步骤1-4的分离与筛选最终获得1株对金黄色葡萄球菌抑制能力明显增强，革兰氏染色成阳性，接触酶反应也为阳性的菌株。将该菌株编号为ZYFJ01。
二、菌株ZYFJ01的鉴定
1、形态学鉴定
一方面，将处于对数生长期，且菌落大小稳定，上述步骤一分离并筛选得到的菌株ZYFJ01进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、湿润度、菌落表面状态(是否平坦、突起、褶皱、凹陷等)、菌落边缘状态(是否整齐、不规则、放射状等)。另一方面，对处于对数生长期的所述菌株ZYFJ01，经涂片染色后采用光学显微镜观察菌体的形态。
分离并筛选得到的菌株ZYFJ01的细胞为杆状，细胞直径大于1μm，有芽孢形成，芽孢不膨大，革兰氏染色阳性。
2、生理生化特征测定
菌株ZYFJ01的生理生化特征测定结果如表2所示：
表2菌株ZYFJ01的生理生化特征
试验项目 结果 试验项目 结果
氧化酶 + 木糖 +
厌氧生长 + 甘露醇 +
VP试验 + 乳糖 -
MR试验 + 淀粉水解 +
VP菌液pH＞7 - 酪素水解 -
VP菌液pH＜6 + 利用柠檬酸盐 +
pH5.7生长 + 硝酸盐还原 +
碳水化合物产酸 + 50℃生长 +
葡萄糖 + 7％NaCl生长 +
阿拉伯糖 +
注：“+”表示结果阳性；“-”表示结果阴性。
3、16S rDNA序列同源性分析
采用菌落PCR方法扩增步骤一所得的菌株ZYFJ01的16S rDNA片段。细菌总DNA的提取采用细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司，Tiangen DP302-02)提取。16SrRNA扩增引物采用细菌通用引物，其引物序列为：正向引物为27f(对应于Escherichiacoil第8-27位碱基)：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTC AG-3′；反向引物为1495r(对应于Escherichia coil第1495-1515位碱基)：5′-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3′。反应体系(50μL)：10×PCR buffer 5μL；MgCl2(25mM)4μL；dNTP MIX(2.5mM each)4μL；引物27f(10pmol/μL)2μL；引物1495r(10pmol/μL)2μL；基因组DNA模板(100ng/μL)2μL；TaKaRa ExTaq酶(5U/μL)0.6μL；ddH2O补充至50μL。PCR扩增程序：95℃预变性5min；94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸2min，进行30个循环；最后72℃延伸10min。
PCR产物利用1％琼脂糖凝胶电泳检测，片段长度约1500bp的阳性产物经纯化后送中美泰和生物技术(北京)有限公司进行序列测定，其序列为序列表中序列1。将序列1在GenBank数据库中进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)同源性比对，确定菌种类别。
上述形态、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析结果表明该菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)。该菌株已于2019年06月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.18035，其分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01。
二、地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01的抗逆性检测
1、耐热性检测
将地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01 CGMCC No.18035按2％(v/v)的接种量(3.75×1010cfu/ml)接种到MRS肉汤培养基中，共六份，于85℃水浴锅内分别处理10min、15min、20min、30min、40min、60min后，利用MRS琼脂平板37℃恒温培养24h后，采用平板倾注法测定其活菌数。
结果如表3所示，地衣芽孢杆菌(B acillus Licheniformis)ZYFJ01 CGMCCNo.18035在85℃处理10min后存活率仍达92.17％，处理15min，存活率达28％。证明该菌株耐热性能较好。一般饲料的制粒温度为70℃～85℃之间，耐高温之后存活率低也是乳酸菌作为饲料添加剂的主要限制性因素之一。从耐热存活率看，本发明选育的地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01 CGMCC No.18035可以耐受制粒时的高温，作为饲料添加剂将会有较好的前途。
表3耐热试验结果
Figure BDA0002190272720000131
2、耐酸性检测
将地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01 CGMCC No.18035按2％(v/v)的接种量接种到pH值为2.0、2.5、3.0的MRS肉汤培养基中，分别在0h、1h、2h、3h采用平板倾注法测定其活菌数。
结果表明，pH值为3及2.5时，对地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)ZYFJ01CGMCC No.18035活性影响较小，而当pH＝2.0时活菌数发生明显的下降。这个存活率对于其耐过胃酸的抑制作用或杀灭作用应是较为理想的。
实施例3、发酵中药制剂的制备
1、生长初期发酵中药的制备方法
将党参15份、黄芪15份、红景天10份、苍术10份、佛手10份、白芍10份、金银花15份、马齿苋15份、薏苡仁20份、砂仁5份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合15分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入90mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、90mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的9％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，35℃发酵76小时；将发酵物取出，置60℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长初期发酵中药制剂。
2、生长中期发酵中药制作方法
将金银花30份、藿香10份、远志10份、桔梗10份、赤芍10份、鱼腥草15份、红景天10份、榧子15份、乌梅5份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入90mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、90mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的9％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，35℃发酵76小时；将发酵物取出，置60℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长初期发酵中药制剂。
3、生长后期发酵中药制作方法
将苍术10份、茯苓10份、车前草20份、木瓜15份、丁香3份、沙棘10份、茜草10份、蒲公英15份、鱼腥草15份、金银花15份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入90mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、90mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的9％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，35℃发酵76小时；将发酵物取出，置60℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长初期发酵中药制剂。
4、中药燃香的制备
苍术10份、石菖蒲5份、艾叶5份、甘松3份、白芷3份、丁香1份混合粉碎，过50目筛，搅拌均匀后制成圆柱形燃香。
实施例4、发酵中药制剂的制备
1、生长初期发酵中药制作方法
将党参30份、黄芪20份、红景天20份、苍术15份、佛手15份、白芍15份、金银花30份、马齿苋30份、薏苡仁30份、砂仁7份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合15分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入100mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、100mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的10％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，37℃发酵72小时；将发酵物取出，置50℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长初期发酵中药制剂。
2、生长中期发酵中药制作方法
将金银花40份、藿香15份、远志15份、桔梗15份、赤芍20份、鱼腥草30份、红景天20份、榧子30份、乌梅15份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入100mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、100mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的10％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，37℃发酵72小时；将发酵物，取出，置50℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长中期发酵中药制剂。
3、生长后期发酵中药制作方法
将苍术15份、茯苓30份、车前草30份、木瓜30份、丁香5份、沙棘20份、茜草15份、蒲公英30份、鱼腥草30份、金银花20份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入100mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、100mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的10％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，37℃发酵72小时；将发酵物取出，置50℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长中期发酵中药制剂。
4、中药燃香的制备
将苍术15份、石菖10份、艾叶10份、甘松6份、白芷6份、丁香3份混合粉碎，过50目筛，搅拌均匀后制成圆柱形燃香。
实施例5、发酵中药制剂的制备
1、生长初期发酵中药制作方法
将党参40份、黄芪30份、红景天30份、苍术25份、佛手15份、白芍20份、金银花40份、马齿苋40份、薏苡仁60份、砂仁7份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合15分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入110mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、110mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的11％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，40℃发酵68小时；将发酵物取出，置55℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长初期发酵中药制剂。
2、生长中期发酵中药制作方法
将金银花50份、藿香30份、远志20份、桔梗15份、赤芍30份、鱼腥草60份、红景天30份、榧子45份、乌30份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入110mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、110mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的11％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，40℃发酵68小时；将发酵物取出，置55℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长中期发酵中药制剂。
3、生长后期发酵中药制作方法
将苍术40份、茯苓60份、车前草40份、木瓜20份、丁香5份、沙棘30份、茜草20份、蒲公英40份、鱼腥草60份、金银花30份，按重量进行混合，然后粉碎，过300目筛，V型混合机混合20分钟。
将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入110mL酵母菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)、110mL枯草芽孢杆菌(活菌数不低于3×108cfu/mL)的菌液培养液，同时加入100mL的11％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀。
将上述步骤所得的中药复方与益生菌混合物，置于单向阀的发酵袋中，40℃发酵68小时；将发酵物取出，置55℃低温烘干，然后粉碎，装袋，制得生长中期发酵中药制剂。
4、中药燃香的制备
将苍术20份、石菖蒲15份、艾叶15份、甘松10份、白芷10份、丁香6份混合粉碎，过50目筛，搅拌均匀后制成圆柱形燃香。
实施例6、三位一体饲养肉鸡
我们在正常使用疫苗的同时，根据肉鸡的生长规律在饲料中添加了三阶段复方发酵中药进行试验。
1材料和方法
1.1试验鸡只与分组
本试验选用个体户饲养的同批哈伯德商品代健康肉鸡40000只，随机分成4组，每组10000只，四组肉鸡分别放在四个标准鸡舍内，采用暖风育雏2周，尔后育成至出售。四组温度、湿度、密度、光照等条件相同，且符合生产要求。饲喂、饮水、免疫、消毒、驱虫等操作一致，且按制定规程。
试验分组及饲养方式如下：
(1)试验A组
用基础日粮添加实施例3制备的三阶段复方发酵中药，使用实施例3制备的中药燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照0.5％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-31天，将生长中期发酵饲料按照0.5％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌4份、嗜酸乳杆菌3份、枯草芽孢杆菌3份、热带假丝酵母3份、粪链球菌1份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为50亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶150的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段32-41天，将生长后期发酵饲料按照0.5％的比例加入到饲料中。
(2)试验B组
用基础日粮加实施例4制备出的三阶段复方发酵中药，使用实施例4制备的中药燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照1.5％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-31天，将生长中期发酵饲料按照1.5％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌5份、嗜酸乳杆菌2份、枯草芽孢杆菌3份、热带假丝酵母2份、粪链球菌2份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为100亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶170的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段32-41天，将生长后期发酵饲料按照1.5％的比例加入到饲料中。
(3)试验C组
用基础日粮加实施例5制备出的三阶段复方发酵中药，使用实施例3制备的中药燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照3％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-31天，将生长中期发酵饲料按照3％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌6份、嗜酸乳杆菌2份、枯草芽孢杆菌2份、热带假丝酵母2份、粪链球菌2份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为80亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶160的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段32-41天，将生长后期发酵饲料按照3％的比例加入到饲料中。
(4)对照组
只用基础日粮。
1.2基础日粮组成
日粮用的是潍坊临朐县龙泉牌肉鸡成品料，分为两阶段料：
一号料：玉米55.2％，豆粕32％，鱼粉2％，菜饼4％，植物油3％，碳酸氢钙1.5％，石粉1％，食盐0.3％，添加剂1％；
二号料：玉米60.2％，豆粕27％，鱼粉2％，菜饼4％，植物油3％，碳酸氢钙1.3％，石粉1.2％，食盐0.3％，添加剂1％。
第一阶段使用一号料，第二阶段和第三阶段使用二号料。
1.3测定项目
(1)出栏时空腹称重，计算增重和饲料消耗率，算出料肉比。
(2)记录发病死亡率。
(3)外观鸡群生长发育情况。
(4)计算经济效益。
(5)试验时间：2019年4月1日至5月12日，全期42天。
2.结果与分析
2.1增重料比情况
平均体重：试验A组为2.51kg，试验B组为2.75kg,试验C组为2.761kg，对照组为2.55kg，经t检验，实验B组、C组与对照组差异显著(P<0.05)。料重比：试验组A组为1.47：1，试验组B组为1.39：1，试验组C组为1.38：1，对照组为1.45：1，经t检验，实验B组、C组与对照组差异显著(P<0.05)。
2.2死亡情况
试验A组死亡799只，试验B组死亡67只，试验C组死亡45只，对照组死亡213只，对照组比试验B组、C组死亡数高出3倍以上；表明B、C试验组鸡抗病力增强。
2.3鸡群生长发育情况
B、C两个试验组在饲料中添加三阶段复方发酵中药后，很快表现出食欲增强，食量增加，精神状态变好的特点；试验期内，鸡冠红润，鸡只发病少，抗应激、抵抗力强，生长发育健壮，鸡只均匀度好；而对照组与实验A组的鸡只精神状态、抗应激能力、均匀度较差。
表4增重情况表 (单位：只、kg、％)
组别 入雏 出栏 成活率 出栏总重 平均只重 总计耗料 平均耗料 料重比
试验A组 10000 9201 92.01 23095 2.51 33952 3.69 1.47：1
试验B组 10000 9933 99.33 27316 2.75 37944 3.82 1.39:1
试验C组 10000 9955 99.55 27476 2.76 37929 3.81 1.38:1
对照组 10000 9787 97.87 24957 2.55 36212 3.70 1.45：1
表5效益分析表 (单位：元、kg)
Figure BDA0002190272720000211
2.4经济效益
从表5看出，A试验组每公斤饲料增加了0.09元的发酵中药和熏烟中药费，而重量减少了0.04kg/只，节省西药费0.6元，纯利润少于对照组0.05元/只；B试验组每公斤饲料增加了0.26元的发酵中药和熏烟中药费，而增重却提高了0.2kg/只，节省西药费0.72元，纯利润高出对照组1.68元/只；C试验组每公斤饲料增加了0.47元的发酵中药和熏烟中药费，而增重却提高了0.21kg/只，节省西药费0.72元，纯利润高出对照组1.03元/只。实验结果表明B、C两组经济效益均显著优于对照组，其中B组组方综合效益最佳。
实施例7、三位一体饲养肉鸭
我们在正常使用疫苗的同时，根据肉鸭的生长规律在饲料中添加了三阶段复方发酵中药进行试验。
1材料和方法
本试验选用山东潍坊临朐县个体户饲养的同批樱桃谷商品代健康肉鸭34000只，随机分成4组，每组8500只。四组肉鸭分别放在四个鸭舍内，采用地面火道育雏2周，尔后在塑料平网上育成至出售。四组温度、湿度、密度、光照等条件相同，且符合生产要求。饲喂、饮水、免疫、消毒、驱虫等操作一致，且按制定规程。
试验分组及饲养方式如下：
(1)试验A组
用基础日粮加实施例3制备出的三阶段复方发酵中药，使用实施例3制备的燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照0.5％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-21天，将生长中期发酵饲料按照0.5％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌4份、嗜酸乳杆菌3份、枯草芽孢杆菌3份、热带假丝酵母3份、粪链球菌1份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为50亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶150的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段21-28天，将生长后期发酵饲料按照0.5％的比例加入到饲料中。
(2)试验B组
用基础日粮加实施例4制备出的三阶段复方发酵中药，使用实施例4制备的燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照1.5％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-21天，将生长中期发酵饲料按照1.5％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌5份、嗜酸乳杆菌2份、枯草芽孢杆菌3份、热带假丝酵母2份、粪链球菌2份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为100亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶170的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段21-28天，将生长后期发酵饲料按照1.5％的比例加入到饲料中。
(3)试验C组
用基础日粮加实施例5制备出的三阶段复方发酵中药，使用实施例5制备的燃香：
第一阶段1-15天，将生长初期的发酵中药制剂按照3％的比例加入到饲料中；同时，按照每立方米1g的熏烟中药用量，于养殖舍内点燃，每周一次。
第二阶段16-21天，将生长中期发酵饲料按照3％的比例加入到饲料中；同时饮水中添加益生菌，益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌6份、嗜酸乳杆菌2份、枯草芽孢杆菌2份、热带假丝酵母2份、粪链球菌2份配制而成。
配制方法为：将益生菌制成浓度为80亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶160的质量比加水稀释，按照动物体内有益菌有效浓度维持在1.5亿活菌/kg的标准，在动物日常饮用水中添加益生菌悬液。
第三阶段21-28天，将生长后期发酵饲料按照3％的比例加入到饲料中。
(4)对照组
只用基础日粮。
2、基础日粮组成
日粮主要原料是潍坊临朐县龙泉牌肉鸭成品料，分为两阶段料：
一号料：玉米59％，菜饼20％，麸皮10％，鱼粉7.5％，贝壳粉1％，肉粉1％，食盐0.5％，添加剂1％；
二号料：玉米59％，小麦17％，麸皮12％，菜饼5％，鱼粉4.5％，贝壳粉1％，食盐0.5％，添加剂1％。
第一阶段使用一号料，第二阶段和第三阶段使用二号料。
3、测定项目
(1)出栏时空腹称重，计算增重和饲料消耗率，算出料肉比。
(2)记录发病死亡率。
(3)外观鸭群生长发育情况。
(4)计算经济效益。
(5)试验时间：2019年4月9日至5月6日，全期28天。
3.结果与分析
3.1增重料比情况
平均体重：试验A组为1.82kg，试验B组为1.92kg,试验C组为1.98kg，对照组为1.87kg，经t检验，实验B组、C组与对照组差异显著(P<0.05)。料重比：试验组A组为1.70：1，试验组B组为1.50：1，试验组C组为1.48：1，对照组为1.65：1，经t检验，实验B组、C组与对照组差异显著(P<0.05)。
3.2死亡情况
试验A组死亡350只，试验B组死亡85只，试验C组死亡55只，对照组死亡313只，对照组比试验B组、C组死亡数高出3倍以上；表明B、C试验组鸭抗病力增强。
3.3鸭群生长发育情况
B、C两个试验组在饲料中添加三阶段复方发酵中药后，很快表现出食欲增强，食量增加，精神状态变好的特点；试验期内，鸭发病少，抗应激、抵抗力强，生长发育健壮，均匀度好；而对照组与实验A组的鸭精神状态、抗应激能力、均匀度较差。
表6增重情况表 (单位：只、kg、％)
组别 入雏 出栏 成活率 出栏总重 平均只重 总计耗料 平均耗料 料重比
试验A组 8500 8150 95.88 14833 1.82 24385 3.09 1.70：1
试验B组 8500 8415 99.00 16157 1.92 24235 2.88 1.50：1
试验C组 8500 8445 99.35 16721 1.98 24747 2.93 1.48：1
对照组 8500 8197 96.44 15323 1.87 25328 3.09 1.65：1
表7效益分析表 (单位：元、kg)
Figure BDA0002190272720000251
3.4经济效益
从表7看出，A试验组每公斤饲料增加了0.09元的发酵中药和熏烟中药费，而重量比对照组减少了0.05kg/只，节省西药费0.25元，纯利润少于对照组0.38元/只；B试验组每公斤饲料增加了0.26元的发酵中药和熏烟中药费，而增重却提高了0.05kg/只，节省西药费0.25元，纯利润高出对照组0.37元/只；C试验组每公斤饲料增加了0.47元的发酵中药和熏烟中药费，而增重却提高了0.11kg/只，节省西药费0.25元，纯利润高出对照组0.06元/只；实验结果表明B、C两组经济效益均显著优于对照组，其中B组组方综合效益最佳。

Claims (4)

1.一种提高肉禽产品品质的饲养方法，其特征在于，在饲养过程中向肉禽饲喂发酵中药制剂，所述发酵中药制剂由益生菌发酵中药复方而成，所述益生菌为酵母菌、地衣芽孢杆菌，所述酵母菌为酿酒酵母JM01，保藏号为CGMCCNO.18034，所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌ZYFJ01，保藏编号为CGMCCNO.18035；所述酿酒酵母的活菌数为3×108cfu/mL以上，所述地衣芽孢杆菌的活菌数为3×108cfu/mL以上；具体包含以下步骤：
(1)在肉禽生长初期饲喂中药制剂，所述中药按照1.5％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：党参30份、黄芪20份、红景天20份、苍术15份、佛手15份、白芍15份、金银花30份、马齿苋30份、薏苡仁30份、砂仁7份；
(2)在肉禽生长中期饲喂中药制剂，所述中药按照1.5％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：金银花40份、藿香15份、远志15份、桔梗15份、赤芍20份、鱼腥草30份、红景天20份、榧子30份、乌梅15份；
(3)在肉禽生长后期饲喂中药制剂，所述中药按照1.5％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：苍术15份、茯苓30份、车前草30份、木瓜30份、丁香5份、沙棘20份、茜草15份、蒲公英30份、鱼腥草30份、金银花20份；或，
(1)在肉禽生长初期饲喂中药制剂，所述中药按照3％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：党参40份、黄芪30份、红景天30份、苍术25份、佛手15份、白芍20份、金银花40份、马齿苋40份、薏苡仁60份、砂仁7份；
(2)在肉禽生长中期饲喂中药制剂，所述中药按照3％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：金银花50份、藿香30份、远志20份、桔梗15份、赤芍30份、鱼腥草60份、红景天30份、榧子45份、乌梅30份；
(3)在肉禽生长后期饲喂中药制剂，所述中药按照3％的重量比例加入到饲料中；所述中药复方由以下重量的中药成分组成：苍术40份、茯苓60份、车前草40份、木瓜20份、丁香5份、沙棘30份、茜草20份、蒲公英40份、鱼腥草60份、金银花30份；
在肉禽生长初期，采用中药燃香熏烟对动物房舍进行消毒，所述中药燃香的制备方法为：将苍术10-20份、石菖蒲5-15份、艾叶5-15份、甘松3-10份、白芷3-10份、丁香1-6份混合粉碎，过筛，搅拌均匀后制成圆柱形燃香；
在肉禽生长中期，向饮水中添加益生菌，所述益生菌按照重量份数计，由长双歧杆菌4-6份、嗜酸乳杆菌2-3份、枯草芽孢杆菌2-3份、热带假丝酵母2-3份、粪链球菌1-2份配制而成；
所述发酵中药制剂的制备方法为：
(1)将中药复方成分按重量份数进行混合，粉碎，过筛，混合；
(2)将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入90-110mL含所述酵母菌的菌液培养液、90-110mL含所述地衣芽孢杆菌的菌液培养液，同时加入100mL的9-11％的葡萄糖溶液，充分搅拌混合均匀；
(3)将步骤(2)所得的中药复方与益生菌混合物置于单向阀的发酵袋中，35-40℃发酵68-76小时；
(4)将步骤(3)所得的中药复方与益生菌混合物的发酵物取出，置50-60℃低温烘干，粉碎，装袋，制得发酵中药制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵中药制剂的制备方法为：
(1)将中药复方成分按重量份数进行混合，粉碎，过筛，混合；
(2)将上述所得的中药复方混合物按照每1千克加入100mL含所述酵母菌的菌液培养液、100mL含所述地衣芽孢杆菌的菌液培养液，同时加入100mL的10％的葡萄糖溶液；
(3)将步骤(2)所得的中药复方与益生菌混合物置于单向阀的发酵袋中，37℃发酵72小时；
(4)将步骤(3)所得的中药复方与益生菌混合物的发酵物取出，置50-60℃低温烘干，粉碎，装袋，制得发酵中药制剂。
3.根据权利要求1所述的饲养方法，其特征在于，所述中药燃香按照每立方米1g的用量，于养殖舍内点燃。
4.根据权利要求1所述的饲养方法，其特征在于，将益生菌制成浓度为50-100亿活菌/mL的悬液，益生菌悬液按照1∶150-1：170的质量比加水稀释。
CN201910829719.9A 2019-09-04 2019-09-04 发酵中药制剂及其制备方法与应用 Active CN110419643B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910829719.9A CN110419643B (zh) 2019-09-04 2019-09-04 发酵中药制剂及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910829719.9A CN110419643B (zh) 2019-09-04 2019-09-04 发酵中药制剂及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110419643A CN110419643A (zh) 2019-11-08
CN110419643B true CN110419643B (zh) 2023-05-23

Family

ID=68418704

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910829719.9A Active CN110419643B (zh) 2019-09-04 2019-09-04 发酵中药制剂及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110419643B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111000887A (zh) * 2020-01-10 2020-04-14 李芝发 一种利用发酵技术提高蒙中药药效的方法
CN112877257B (zh) * 2021-03-18 2023-04-07 昆明理工大学 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN113907192A (zh) * 2021-10-19 2022-01-11 湖南伟业动物营养集团股份有限公司 一种动物保健中药添加剂及其制备方法与应用

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1831107A (zh) * 2006-03-15 2006-09-13 南京仕必得生物技术有限公司 中药多菌种混合固体发酵技术及其应用
CN102232467A (zh) * 2011-04-15 2011-11-09 北京康华远景科技有限公司 畜禽抗腹泻饲料添加剂及其制备方法
CN102232998A (zh) * 2011-04-15 2011-11-09 北京康华远景科技有限公司 增强畜禽免疫力的中药微生态制剂及其制备方法
CN102379361A (zh) * 2011-09-29 2012-03-21 滨州市正元畜牧发展有限公司 饲料、饮水、消毒用菌与生物隔离联合的无抗养殖方法
CN102379373A (zh) * 2011-09-29 2012-03-21 滨州市正元畜牧发展有限公司 饲料、饮用水用菌与生物隔离联合的无抗养殖方法
CN102846674A (zh) * 2012-08-31 2013-01-02 郑州后羿制药有限公司 一种中药微生态组合物及其制备方法
CN102876614A (zh) * 2012-10-16 2013-01-16 北京龙科方舟生物工程技术有限公司 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN103155902A (zh) * 2013-03-12 2013-06-19 烟台百和生物技术有限公司 一种肉鸡饲养方法及其专用饲料中药添加剂
CN103392669A (zh) * 2013-07-26 2013-11-20 四川农业大学 一种利用益生菌和中药饲养优质鸡公鸡的方法及其所用饲料
CN103549141A (zh) * 2013-04-25 2014-02-05 北京生泰尔生物科技有限公司 一种猪用中草药复合益生菌饲料添加剂及其制备方法
CN106306358A (zh) * 2016-07-20 2017-01-11 洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司 一种发酵中药饲料添加剂配方及其生产工艺
CN108969691A (zh) * 2018-07-27 2018-12-11 华南农业大学 一种提高保育猪生长性能的发酵中药制剂及其制备方法与应用

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1831107A (zh) * 2006-03-15 2006-09-13 南京仕必得生物技术有限公司 中药多菌种混合固体发酵技术及其应用
CN102232467A (zh) * 2011-04-15 2011-11-09 北京康华远景科技有限公司 畜禽抗腹泻饲料添加剂及其制备方法
CN102232998A (zh) * 2011-04-15 2011-11-09 北京康华远景科技有限公司 增强畜禽免疫力的中药微生态制剂及其制备方法
CN102379361A (zh) * 2011-09-29 2012-03-21 滨州市正元畜牧发展有限公司 饲料、饮水、消毒用菌与生物隔离联合的无抗养殖方法
CN102379373A (zh) * 2011-09-29 2012-03-21 滨州市正元畜牧发展有限公司 饲料、饮用水用菌与生物隔离联合的无抗养殖方法
CN102846674A (zh) * 2012-08-31 2013-01-02 郑州后羿制药有限公司 一种中药微生态组合物及其制备方法
CN102876614A (zh) * 2012-10-16 2013-01-16 北京龙科方舟生物工程技术有限公司 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN103155902A (zh) * 2013-03-12 2013-06-19 烟台百和生物技术有限公司 一种肉鸡饲养方法及其专用饲料中药添加剂
CN103549141A (zh) * 2013-04-25 2014-02-05 北京生泰尔生物科技有限公司 一种猪用中草药复合益生菌饲料添加剂及其制备方法
CN103392669A (zh) * 2013-07-26 2013-11-20 四川农业大学 一种利用益生菌和中药饲养优质鸡公鸡的方法及其所用饲料
CN106306358A (zh) * 2016-07-20 2017-01-11 洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司 一种发酵中药饲料添加剂配方及其生产工艺
CN108969691A (zh) * 2018-07-27 2018-12-11 华南农业大学 一种提高保育猪生长性能的发酵中药制剂及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110419643A (zh) 2019-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3677656B2 (ja) 有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤及びその製造方法
CN110419643B (zh) 发酵中药制剂及其制备方法与应用
CN104770575B (zh) 一种黄芪微生态制剂及其制备方法和应用
CN114085789B (zh) 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用
CN105368755A (zh) 一种产酸屎肠球菌、抑菌微生态制剂及其应用
CN113549574B (zh) 一种凝结芽孢杆菌及其应用
CN105524855B (zh) 一种具有水产病原菌拮抗特性的凝结芽孢杆菌及其应用
CN116083273B (zh) 一株植物乳杆菌NHE-LpE15及应用
CN112574924A (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用
CN103301409B (zh) 防治虾偷死病的组合物及其制备方法
CN111534459A (zh) 一株高产淀粉酶的发酵乳杆菌及其在制备发酵饲料中的应用
CN106479944B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN113088468B (zh) 干酪乳杆菌Ma.GLRGJ 1及其应用
CN118077830A (zh) 一种促进水生动物生长的复合益生菌剂及其制备方法和应用
CN107118997B (zh) 一种饲用丁酸梭菌、促进畜禽生长的微生态制剂及其制备方法
CN114032190A (zh) 一株可发酵石斛且其发酵液可有效修复日光皮炎的罗伊氏乳杆菌
CN107312730B (zh) 一种复方中草药微生态制剂及其基于固态发酵的快速生产方法
CN106107019B (zh) 一种黄花蒿固态发酵的方法
CN117210370A (zh) 一种产细菌素的枯草芽孢杆菌及其应用
CN108795829B (zh) 枯草芽孢杆菌及其在菌剂以及肉猪饲料中的应用
CN111548965B (zh) 一株驴源短小芽孢杆菌及其在制备治疗驴驹腹泻的药物上的应用
CN113967243B (zh) 一种用于防治家禽腹泻的发酵中药制剂及其制备方法
CN111154677B (zh) 嗜酸乳杆菌及其应用
CN109161501A (zh) 一种饲用地衣芽孢杆菌及其应用
CN109984249A (zh) 一种发酵免疫增强剂及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant