CN104173789A - 一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其包括如下步骤：1）按比例取各中药原料，粉碎后混匀，过筛备用；2）将菌种接种于液体培养基中，于20－40℃摇床培养18－24h获得发酵菌种，备用；所述菌种为枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和保加利亚乳杆菌中的一种或两种以上；3）将步骤1）得到的中药粉于110－130℃灭菌10－30min，然后将发酵菌种与无菌水混匀后接种到中药粉中于20－40℃厌氧发酵培养2－7天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，干燥发酵产物即得。临床试验发现：该发酵型清瘟败毒散制品用于畜禽的热毒发斑和高热神昏预防治疗效果好、疗效显著，且使用方便，毒副作用小，绿色无残留。

Description

一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种治疗畜禽感染性疾病的发酵型中药清瘟败毒散的制备方法。

背景技术

随着我国社会经济的迅速发展和人们生活水平的不断提高，人们健康生活的意识也在逐渐增强。因此，安全优质的畜产品生产就显得尤为重要。抗生素、化学合成药物以及激素类药物在饲料中的大量使用给养殖生产带来很大的危害，影响了食品安全和人民健康。中草药作为中国医学的瑰宝，具有营养保健和疾病治疗的双重作用。但中草药也有不少缺陷，如吸收利用度差，起效慢等。近年来，中草药的发酵技术得到广泛重视，研究发现中草药经过微生物发酵后，其有效成分能被充分提取释放，使其具有更高的生物活性和治疗价值，且有“安全绿色、无残留”等优点。

清瘟败毒散由石膏、地黄、水牛角、黄连等组成，具有泻火解毒和凉血的功效，多用于治疗畜禽热毒发斑和高热神昏。清瘟败毒散传统的使用方法是将中药粉碎后直接拌料饲喂，制备过程简单，但由于药物粒度较大，其中又存在很多难以溶出的活性成分，造成药物的利用率偏低，药效不能得到充分发挥。

发明内容

为克服现有技术不足，本发明目的在于提供了一种治疗畜禽感染性疾病的发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，该方法采用微生物发酵的方式对中药散剂进行科学处理，药物利用率高，药效好。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其包括如下步骤：

1）按比例取清瘟败毒散的各中药原料，粉碎后混匀，过筛备用；

2）将菌种接种于液体培养基中，于20－40℃摇床（100－200r/min）培养18－24h获得发酵菌种，备用；所述菌种为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、啤酒酵母（Saccharomyces cereviae）和保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）中的一种或两种以上；

3）将步骤1）得到的中药粉于110－130℃灭菌10－30min，然后将发酵菌种与无菌水混匀后接种到中药粉中于20－40℃厌氧发酵培养2－7天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，干燥发酵产物即得。

具体的，步骤2）中所述的液体培养基优选为PDA培养基、MRS培养基或营养肉汤培养基等。

步骤3）中发酵菌种的接种量为中药粉总重量的5－20%，所述无菌水的用量为中药粉总重量的1.5－2倍。

清瘟败毒散，《兽药典2010版二部》中公开的原料组成如下：石膏120g、地黄30g、水牛角60g、黄连20g、栀子30g、牡丹皮20g、黄芩25g、赤芍25g、玄参25g、知母30g、连翘30g、桔梗25g、淡竹叶25g。

清瘟败毒散经微生物发酵处理后，主要成分会发生较大的变化，其中难以吸收利用的大分子物质经过微生物的代谢作用变成易吸收的小分子，毒性物质的含量也随之降低，有利于更好的发挥其清热泻火、保肝利胆、增强免疫和促进食欲的功能，主治畜禽的热毒发斑和高热神昏，可应用于畜禽的细菌性、病毒性和细菌病毒混合感染性疾病，在治疗畜禽的高热性疾病、免疫缺陷病、生产能力下降以及提高抗应激能力、促进疾病的快速好转方面等具有良好的效果。本发明将中药发酵技术运用到清瘟败毒散中，把现代生物技术和传统的中药炮制方法结合起来，采用微生物发酵的方式对中药散剂进行科学处理，得到的发酵型清瘟败毒散具有更好的清热解毒和凉血功效，同时又降低了毒副作用，减少了药物的使用量，扩大其临床应用效果，从而弥补中药散剂起效慢和生物利用度低的缺陷。经临床应用发现，该发酵型清瘟败毒散制品用于畜禽的热毒发斑和高热神昏预防治疗效果好、疗效显著，且使用方便，毒副作用小，绿色无残留。

具体实施方式：

以下通过具体实施例来说明本发明技术方案，但本发明的保护范围并不局限于此。

下述实施例中，所用PDA培养基、MRS培养基、营养肉汤培养基、普通肉汤培养基及营养琼脂培养基的组成采用本领域常规配方即可，故不赘述。所用菌种可购买市售产品，其中，枯草芽孢杆菌ATCC 6633由河南农大微生物实验室提供；啤酒酵母ATCC 9763购自中科院微生物菌种保藏中心；德氏乳杆菌保加利亚亚种GIM 1.204购自广东省微生物研究所。

实施例1 

一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其包括如下步骤：

1）按比例取清瘟败毒散的各中药原料，粉碎后混匀，过80目筛备用；

2）将德氏乳杆菌保加利亚亚种GIM1.204接种于MRS培养基中，于30℃摇床（150r/min）培养18h获得发酵菌种，备用；

3）将步骤1）得到的中药粉于121℃灭菌15min，然后将发酵菌种与无菌水（无菌水的用量为中药粉总重量的1.5倍）混匀后按10%的接种量接种到中药粉中于30℃厌氧发酵培养5天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，在40℃鼓风干燥发酵产物即得。

实施例2

一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其包括如下步骤：

1）按比例取清瘟败毒散的各中药原料，粉碎后混匀，过80目筛备用；

2）将啤酒酵母ATCC 9763接种于PDA培养基中，于25℃摇床（120r/min）培养18h获得发酵菌种，备用；

3）将步骤1）得到的中药粉于121℃灭菌15min，然后将发酵菌种与无菌水（无菌水的用量为中药粉总重量的2倍）混匀后按18%的接种量接种到中药粉中于25℃厌氧发酵培养7天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，在40℃鼓风干燥发酵产物即得。

实施例3

一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其包括如下步骤：

1）按比例取清瘟败毒散的各中药原料，粉碎后混匀，过80目筛备用；

2）将枯草芽孢杆菌ATCC 6633接种于营养肉汤培养基中，于32℃摇床（120r/min）培养24h获得发酵菌种，备用；

3）将步骤1）得到的中药粉于121℃灭菌15min，然后将发酵菌种与无菌水（无菌水的用量为中药粉总重量的2倍）混匀后按8%的接种量接种到中药粉中于32℃厌氧发酵培养3天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，在40℃鼓风干燥发酵产物即得。

体外抑菌效果测定

材料：大肠埃希氏菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、清瘟败毒散（兽药典2010版二部）、实施例1制备所得发酵型中药清瘟败毒散。

方法：取清瘟败毒散及发酵型中药清瘟败毒散分别加10倍（重量倍）水浸润2h，文火煎煮30min，取药液，反复煎煮3次，将3次药液合并，浓缩至0.4g/ml，于121℃灭菌15min。

取大肠埃希氏菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923接种于普通琼脂平板上，37℃培养18h，挑取单个菌落接种于普通肉汤培养基，37℃培养16h，取0.1ml菌液加100ml灭菌肉汤将原菌液稀释成10⁶ cfu/ml作为稀释菌液。将12支灭菌空试管分成2组（清瘟败毒散试验组和发酵型清瘟败毒散组），每组6支。先将试管中全部加入1ml稀释菌液，再在每一组的第一支试管中加入清瘟败毒散提取液或发酵型清瘟败毒散提取液各1ml，混匀后取1ml加入第二支试管中，依次倍比稀释至第五支，药物浓度分别为0.2g/ml、0.1 g/ml、0.05 g/ml、0.025 g/ml、0.0125 g/ml，第六支作为空白对照。将试管密封，置于37℃培养18h后观察结果，见下表1。

表1. 试验样品对常见细菌的最小体外抑菌浓度（g/ml）

样品	大肠杆菌	金黄色葡萄球菌
			清瘟败毒散	0.10	0.20
发酵型清瘟败毒散	0.05	0.025

由表1可以看出，本发明发酵型清瘟败毒散与原散剂相比，需要更低的浓度即可达到抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的效果，由此可见微生物发酵处理能够增强中草药的药效，显著提高了其体外抑菌活性。

Claims (3)

1.一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）按比例取清瘟败毒散的各中药原料，粉碎后混匀，过筛备用；

2）将菌种接种于液体培养基中，于20－40℃摇床培养18－24h获得发酵菌种，备用；所述菌种为枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和保加利亚乳杆菌中的一种或两种以上；

3）将步骤1）得到的中药粉于110－130℃灭菌10－30min，然后将发酵菌种与无菌水混匀后接种到中药粉中于20－40℃厌氧发酵培养2－7天，每隔12h搅拌一次，发酵培养结束后，干燥发酵产物即得。

2.如权利要求1所述发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述的液体培养基为PDA培养基、MRS培养基或营养肉汤培养基。

3.如权利要求1所述发酵型中药清瘟败毒散的制备方法，其特征在于，步骤3）中发酵菌种的接种量为中药粉总重量的5－20%，所述无菌水的用量为中药粉总重量的1.5－2倍。