CN107048364A - 一种富含γ‑氨基丁酸的桑叶粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富含γ‑氨基丁酸的桑叶粉，其制备方法如下：S1.制备混合桑叶粉：将新鲜桑叶洗净、干燥、粉碎后得到桑叶粉，以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的0～14%蔗糖，4～8%蛋白胨，0.4～3% L‑谷氨酸钠，0.42～3%磷酸氢二钾，30～60%水，混匀后灭菌；S2.发酵培养：往灭菌后的混合桑叶粉中接入5～9%戊糖乳杆菌ss6菌液，30～40℃放置培养24～48h；S3.将发酵后的桑叶粉真空干燥、粉碎，得到富含γ‑氨基丁酸的桑叶粉。本发明制备的桑叶粉富含GABA，含量可达54.95mg/g，是普通桑叶粉的5倍；而且富含乳酸菌，在医药卫生、保健食品、饲料等领域有积极的应用意义。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体地，涉及一种富含γ-氨基丁酸的桑叶粉及其制备方法。
背景技术
桑叶是桑科植物的叶子，桑树在我国种植广泛，生命力极强，资源丰富。桑叶作为药食两用资源的记载如《神农本草》、《本草纲目》、《中华人民共和国药典》均有详细的资料。
二十世纪以来，我国及国际上对桑树等药物的有效成分进行大量的研究，明确其化学结构、药用功能等如黄酮类、多糖类、甾醇类、生物碱等及其对治疗糖尿病、高血脂、高血压的疗效进行了深入的研究。随着医学及相关科学的发展，桑树资源的医用价值也得到进一步拓展。
本发明人实验室在对桑叶的研究过程中发现桑叶γ-氨基丁酸（γ-aminobutyricacid , GABA）的含量要高于普通植物，尤其是桑嫩叶的含量更高。GABA是哺乳动物神经中枢的一种抑制性递质，具有调节血压、促使精神安定、促进脑部血流等作用。传统的桑叶GABA富集主要是采用真空处理或二氧化碳处理等物理方法，但上述方法经实践证明提高桑叶GABA含量有限。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有桑叶GABA富集方面存在的缺陷和不足，提供一种富含GABA桑叶粉的制备方法，所述桑叶粉中不仅GABA含量高，而且富含乳酸菌，提高了桑叶产品的副加值，拓展其在医药卫生、保健食品、饲料等领域的新用途。
本发明的目的在于提供一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法，包括如下步骤：
S1.制备混合桑叶粉：将新鲜桑叶洗净、干燥、粉碎后得到桑叶粉，以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的0～14%蔗糖，4～8%蛋白胨，0.4～3% L-谷氨酸钠，0.42～3%磷酸氢二钾，30～60%水，混匀后灭菌；
S2.发酵培养：往灭菌后的混合桑叶粉中接入5～9%戊糖乳杆菌ss6菌液，30～40℃培养24～48h；
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
优选地，所述制备方法包括如下步骤：
S1.制备混合桑叶粉：将新鲜桑叶洗净、干燥、粉碎后得到桑叶粉，以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的0～7%蔗糖，5～7%蛋白胨，0.5～1.5% L-谷氨酸钠，1.2～2%磷酸氢二钾，40～60%水，混匀后灭菌；
S2.发酵培养：往灭菌后的混合桑叶粉中接入7～9%戊糖乳杆菌ss6菌液，30～35℃培养36～48h；
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
优选地，步骤S1所述桑叶粉为粉碎后过800～1200目筛得到（优选1000目）。
优选地，步骤S1所述灭菌为110～130℃高温灭菌10～30min。
更优选地，步骤S1所述灭菌为120℃高温灭菌20min。
优选地，步骤S2所述戊糖乳杆菌ss6菌株在接种前，先在MRS液体培养基中，37℃静置培养6～10h（优选8h），得到种子液。
优选地，戊糖乳杆菌ss6菌株在MRS液体培养基的接种量为1～4%（优选2%）。
优选地，步骤S3所述干燥为45～60℃真空干燥。
更优选地，所述干燥为55℃真空干燥，此条件下菌的存活数为3.95×109cfu/g。
作为一种优选的实施方式，本发明富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法具体包括如下步骤：
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的6%蛋白胨，1.6% K2HPO4，1.0%L-谷氨酸钠及60%水，混匀后120℃高温灭菌20min，冷却备用；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h制得种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为9%，然后30℃发酵36h；
S3.将发酵后的桑叶粉在55℃真空条件下干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
本发明还公开了上述任一方法制备得到的富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
本发明的制备工艺，以及桑叶中添加辅料的组成及比例，混合物组成及比例不合适会抑制GABA的产量；制备得到的桑叶粉富含GABA，其最高含量可达54.95mg/g，是普通桑叶粉的5倍，所述桑叶粉不仅GABA含量高，而且富含乳酸菌，将其用于食品、保健品中具有积极的意义。
因此，上述方法及其制备得到的富含γ-氨基丁酸的桑叶粉在制备食品和/或保健品中的应用亦在本发明保护范围内。
同时，本发明还公开了一种桑叶发酵培养基，所述培养基配方为桑叶粉：蛋白胨：L-谷氨酸钠：K2HPO4：水的重量比为100：6：1.0：1.6：60。即培养基配方按照如下比例进行：桑叶粉100g，蛋白胨6 g，L-谷氨酸钠1.0 g，K2HPO4 1.6 g，水60 g（初始含水量60%）。
本发明具有以下有益效果：
（1）本发明公开了一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法，所述方法制备得到的桑叶粉不仅富含γ-氨基丁酸，还富含乳酸菌。
（2）本发明制备得到的桑叶粉，γ-氨基丁酸最高含量可达54.95mg/g，是普通桑叶粉的5倍，乳杆菌菌落数为3.95×109cfu/g。
（3）本发明提高了桑叶产品的副加值，拓展其在医药卫生、保健食品等领域的新用途，所述制备方法及其产物在制备食品、保健品方面具有积极的意义。
附图说明
图1为碳源对桑叶粉GABA产量和戊糖乳杆菌SS6菌体生物量的影响。
图2为氮源含量对SS6固体发酵产GABA的影响。
图3为K2HPO4含量对SS6固体发酵产GABA的影响。
图4为L-谷氨酸钠含量对SS6固体发酵产GABA的影响。
图5为水量对SS6固体发酵产GABA的影响。
图6为接种量对SS6固体发酵产GABA的影响。
图7为温度对SS6固体发酵产GABA的影响。
图8为发酵时间对GABA产量及菌体量影响。
图9为不同干燥方式对发酵产物的影响。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法
一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法，包括如下步骤：
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的6%蛋白胨，1.6% K2HPO4，1.0%L-谷氨酸钠及60%水，混匀后120℃高温灭菌20min，冷却备用；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h制得种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为9%，然后30℃发酵36h；
S3.将发酵后的桑叶粉在55℃真空条件下干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
实施例2 富含γ-氨基丁酸桑叶粉制备工艺的优化
1、混合桑叶粉中碳源添加量优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，按照4个条件添加碳源（葡萄糖、蔗糖、木糖），分别为0%、7%、13%、28%（w/w，下同）。添加2%蛋白胨作为氮源，添加0.42%K2HPO4，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为5%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果如图1所示，确定最优碳源为蔗糖，添加量优选为7～13%，最适添加量为7%。
实施例2混合桑叶粉中氮源添加量优化
1、混合桑叶粉中氮源添加量优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，按照5个条件添加氮源（蛋白胨），分别为0%、2%、4%、6%、8%（w/w，下同）。添加蔗糖7%，添加0.42%K2HPO4，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为5%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图2所示，确定蛋白胨最适添加量为6%。
实施例3混合桑叶粉中K2HPO4添加量优化
1、混合桑叶粉中K2HPO4添加量优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，按照8个条件添加K2HPO4，分别0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%、3.0%、4.0%、6.0%（w/w，下同）。添加蔗糖7%，添加6%蛋白胨，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为5%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图3所示，确定K2HPO4最适添加量为1.6%。
实施例4混合桑叶粉中L-谷氨酸钠添加量优化
1、混合桑叶粉中L-谷氨酸钠添加量优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，按照5个条件添加L-谷氨酸钠，分别为0%、0.5%、1.0%、1.5%、3.0%（w/w，下同）。添加蔗糖7%，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，初始含水量为60%，；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为5%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图4所示，确定L-谷氨酸钠最适添加量为1.0%。
实施例5混合桑叶粉中初始含水量优化
1、混合桑叶粉中初始含水量优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠，按照5个条件调节发酵培养基初始含水量，分别为30%、40%、50%、60%、70%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为5%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图5所示，确定发酵最适初始含水量为60%。
实施例6 发酵桑叶粉培养基正交实验优化
1、根据实施例1～5所述单因素实验所确定的最优配方作为试验因子（如表1所示），以桑叶粉为基质，初始含水量为60%，戊糖乳杆菌SS6菌株接种量为5%，35℃发酵36h条件下采用L9（34）进行正交试验；
2、结果
正交试验结果如表2所示。
表1 正交试验因素水平表
| 水平 | 碳源% | 氮源% | K2HPO4% | L-谷氨酸钠% |
| 1 | 0 | 4 | 1.2 | 0.5 |
| 2 | 7 | 6 | 1.6 | 1.0 |
| 3 | 14 | 8 | 2.0 | 1.5 |
表2正交实验结果表
| 因素 | 碳源 | 氮源 | K2HPO4 | L-谷氨酸钠 | GABA（mg/g） |
| 1 | 2 | 2 | 1 | 2 | 47.77 |
| 2 | 1 | 3 | 2 | 2 | 51.37 |
| 3 | 3 | 3 | 1 | 3 | 35.68 |
| 4 | 2 | 3 | 3 | 1 | 31.65 |
| 5 | 2 | 1 | 2 | 3 | 37.65 |
| 6 | 3 | 1 | 3 | 2 | 25.28 |
| 7 | 1 | 2 | 3 | 3 | 44.20 |
| 8 | 1 | 1 | 1 | 1 | 31.79 |
| 9 | 3 | 2 | 2 | 1 | 32.72 |
| 均值1 | 127.36 | 94.73 | 115.24 | 96.16 | |
| 均值2 | 117.07 | 124.69 | 121.74 | 124.42 | |
| 均值3 | 93.68 | 118.7 | 101.13 | 117.53 | |
| 极差 | 33.68 | 29.28 | 20.61 | 28.26 |
在前述单因素筛选和正交实验的基础上，通过数据统计软件分析可得出，确定最优配方组合为：蔗糖0%，蛋白胨6%，1.0%L-谷氨酸钠，K2HPO41.6%，在最优配方条件下发酵得到GABA的产量为53.57mg/g。
实施例7戊糖乳杆菌SS6接种量的优化
1、戊糖乳杆菌SS6接种量的优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，所述接种量分别为1%、3%、5%、7%、9%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图6所示，确定戊糖乳杆菌SS6的最适接种量为7%。
实施例8桑叶发酵温度的优化
1、桑叶发酵温度的优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为7%，按照5个温度条件，分别25℃、30℃、35℃、42℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图7所示，确定发酵最适发酵温度为35℃。
实施例9桑叶发酵时间的优化
1、桑叶发酵时间的优化
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为7%，35℃按照5个时间条件，分别发酵0h、12h、24h、36h、48h。
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果如图8所示，确定发酵最适发酵时间为36h。
实施例10 戊糖乳杆菌SS6发酵桑叶粉培养基正交优化
1、根据实施例7～9所述单因素实验所确定的最优单因子作为试验因子（如表3），以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠条件下采用L9（34）进行正交试验；
2、结果
正交试验结果如表4所示。
表3 正交试验因素水平表
| 水平 | 初始含水量% | 接种量% | 时间（h） | 温度（℃） |
| 1 | 40 | 5 | 24 | 30 |
| 2 | 50 | 7 | 36 | 35 |
| 3 | 60 | 9 | 48 | 40 |
表4 正交实验结果表
| 因素 | 初始含水量% | 接种量% | 时间（h） | 温度（℃） | GABA（mg/g） |
| 1 | 2 | 2 | 1 | 2 | 43.09 |
| 2 | 1 | 2 | 2 | 3 | 47.10 |
| 3 | 3 | 1 | 2 | 2 | 51.01 |
| 4 | 2 | 1 | 3 | 3 | 42.51 |
| 5 | 3 | 2 | 3 | 1 | 54.13 |
| 6 | 2 | 3 | 2 | 1 | 50.89 |
| 7 | 1 | 3 | 3 | 2 | 51.51 |
| 8 | 3 | 3 | 1 | 3 | 49.06 |
| 9 | 1 | 1 | 1 | 1 | 48.10 |
| 均值1 | 146.71 | 141.62 | 140.25 | 153.12 | |
| 均值2 | 136.49 | 144.32 | 149.0 | 145.61 | |
| 均值3 | 154.2 | 151.46 | 148.15 | 138.67 | |
| 极差 | 17.71 | 9.84 | 8.75 | 17.71 |
在前述单因素筛选和正交实验的基础上，通过数据统计软件分析可得出，确定戊糖乳杆菌SS6发酵桑叶粉培养基最佳条件为：初始含水量60%，戊糖乳杆菌SS6接种量为9%，培养时间36h，培养温度30℃，桑叶粉GABA的最高含量为54.95 mg/g。
实施例11不同干燥方式对发酵产物的影响
1、不同干燥方式对发酵产物的影响
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6%%K2HPO4，添加L-谷氨酸钠1.0%，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h当做种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为7%，35℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉分别在真空及常压条件下干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2、结果
结果见图9所示，在45～60℃条件下真空干燥菌株的存活率大于普通干燥；因此确定55℃为最佳的真空干燥条件，此条件下菌的存活数最高，为3.95×109cfu/g。
因此，确定本发明的富含γ-氨基丁酸桑叶粉的最佳制备方法为：
S1.将新鲜的桑叶洗净、干燥、粉碎过1000目筛得到桑叶粉；以桑叶粉为基质，添加6%蛋白胨，添加1.6% K2HPO4，添加1.0%L-谷氨酸钠，初始含水量为60%；
S2.将活化好的戊糖乳杆菌SS6菌株接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养8h制得种子液，将种子液接种到步骤S1的混合桑叶粉中，接种量为9%，30℃发酵36h。
S3.将发酵后的桑叶粉在55℃真空条件下干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉，得到的桑叶粉中GABA含量达54.95mg/g，是普通桑叶粉的5倍，且乳酸菌高达3.95×109cfu/g。
Claims (9)
1.一种富含γ-氨基丁酸桑叶粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.制备混合桑叶粉：将新鲜桑叶洗净、干燥、粉碎后得到桑叶粉，以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的0～14%蔗糖，4～8%蛋白胨，0.4～3% L-谷氨酸钠，0.42～3%磷酸氢二钾，30～60%水，混匀后灭菌；
S2.发酵培养：往灭菌后的混合桑叶粉中接5～9%戊糖乳杆菌ss6菌液，30～40℃培养24～48h；
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.制备混合桑叶粉：将新鲜桑叶洗净、干燥、粉碎后得到桑叶粉，以桑叶粉为基质，添加占桑叶粉总重量的0～7%蔗糖，5～7%蛋白胨，0.5～1.5% L-谷氨酸钠，1.2～2%磷酸氢二钾，40～60%水，混匀后灭菌；
S2.发酵培养：往灭菌后的混合桑叶粉中接入7～9%戊糖乳杆菌ss6菌液，30～35℃培养36～48h；
S3.将发酵后的桑叶粉干燥、粉碎，得到富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述灭菌为110～130℃高温灭菌10～30min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2所述戊糖乳杆菌ss6菌株在接种前，先在MRS液体培养基中，37℃静置培养6～10h，得到种子液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，戊糖乳杆菌ss6菌株在MRS液体培养基的接种量为1～4%。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3所述干燥为45～60℃真空干燥。
7.权利要求1～6任一方法制备得到的富含γ-氨基丁酸的桑叶粉。
8.权利要求7所述桑叶粉在制备食品和/或保健品中的应用。
9.一种桑叶发酵培养基，其特征在于，培养基配方为桑叶粉：蛋白胨：L-谷氨酸钠：K2HPO4：水的重量比为100：6：1.0：1.6：60。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110592151A (zh) * | 2019-09-16 | 2019-12-20 | 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 | 乳酸菌生产高含γ-氨基丁酸发酵液及其在化妆品中的应用 |
| CN111449182A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-07-28 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 桑叶蛋白水解物及其制备方法和用其制备的酵素饮料 |
| CN112617073A (zh) * | 2020-12-15 | 2021-04-09 | 河北农业大学 | 一种乳酸菌发酵羊角脆甜瓜汁及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102559552A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-11 | 天津科技大学 | 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用 |
| CN104323284A (zh) * | 2014-10-17 | 2015-02-04 | 华南农业大学 | 一种桑叶γ-氨基丁酸粗提物的制备方法 |
| CN104975051A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-10-14 | 江苏科技大学 | 一种富集桑叶中gaba的方法 |
| CN105285625A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-02-03 | 江苏科技大学 | 一种富含gaba的桑叶酵素饮料原液及其制备方法和应用 |
| CN106479932A (zh) * | 2016-11-15 | 2017-03-08 | 华南农业大学 | 一种产γ‑氨基丁酸的戊糖乳杆菌 |
| CN106509331A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-03-22 | 成都市农林科学院 | 一种富含gaba的桑叶蛋白粉的制备方法 |
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102559552A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-11 | 天津科技大学 | 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用 |
| CN104323284A (zh) * | 2014-10-17 | 2015-02-04 | 华南农业大学 | 一种桑叶γ-氨基丁酸粗提物的制备方法 |
| CN104975051A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-10-14 | 江苏科技大学 | 一种富集桑叶中gaba的方法 |
| CN105285625A (zh) * | 2015-10-12 | 2016-02-03 | 江苏科技大学 | 一种富含gaba的桑叶酵素饮料原液及其制备方法和应用 |
| CN106479932A (zh) * | 2016-11-15 | 2017-03-08 | 华南农业大学 | 一种产γ‑氨基丁酸的戊糖乳杆菌 |
| CN106509331A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-03-22 | 成都市农林科学院 | 一种富含gaba的桑叶蛋白粉的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 冯胜利等: "桑叶中γ-氨基丁酸含量及富集方法的研究进展", 《湖南农业科学》 * |
| 谢正旸等主编: "《现代微生物培养基和试剂手册》", 29 April 1994, 福建科学技术出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110592151A (zh) * | 2019-09-16 | 2019-12-20 | 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 | 乳酸菌生产高含γ-氨基丁酸发酵液及其在化妆品中的应用 |
| CN111449182A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-07-28 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 桑叶蛋白水解物及其制备方法和用其制备的酵素饮料 |
| CN112617073A (zh) * | 2020-12-15 | 2021-04-09 | 河北农业大学 | 一种乳酸菌发酵羊角脆甜瓜汁及其制备方法 |
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