CN106434479A - 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法 - Google Patents

一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106434479A
CN106434479A CN201610948591.4A CN201610948591A CN106434479A CN 106434479 A CN106434479 A CN 106434479A CN 201610948591 A CN201610948591 A CN 201610948591A CN 106434479 A CN106434479 A CN 106434479A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation tank
culture medium
type
culture
dissolved oxygen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610948591.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106434479B (zh
Inventor
顾伟
徐高原
陈关平
周明光
金建云
曹毅
韩进
林晗
田苏英
金梅林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WUHAN KEQIAN BIOLOGICAL Co Ltd
Original Assignee
WUHAN KEQIAN BIOLOGICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WUHAN KEQIAN BIOLOGICAL Co Ltd filed Critical WUHAN KEQIAN BIOLOGICAL Co Ltd
Priority to CN201610948591.4A priority Critical patent/CN106434479B/zh
Publication of CN106434479A publication Critical patent/CN106434479A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106434479B publication Critical patent/CN106434479B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法。该方法步骤如下：A、将冻干副猪嗜血杆菌5型用TSA平板活化18～24h，至单菌落长出；B、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养6～14h至OD600值达到0.8～1.6；C、以1％～5％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养8～14h至OD600值达到2.0～3.5；D、将二级种子液以1％～5％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，发酵罐中盛有发酵罐培养基，培养条件为：温度35～39℃、罐压0.02～0.1Mpa、溶氧20～50％、pH7.3～7.8，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌得到。该方法原料制备简单，成本低廉，既能保证副猪嗜血杆菌生长旺盛，进行正常代谢，又能提高生长速度，生产周期短，活菌数较高，一般活菌数为72～80亿/毫升，完全能适应于副猪嗜血杆菌5型疫苗生产。

Description

一种副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法
技术领域
本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法及应用。
背景技术
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)是常规饲养猪群上呼吸道的一种常在菌，但在特定条件下可以侵入机体并引起严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征，该病又称为革拉瑟氏病(Oliverira et al.,2004)。早期采用抗生素进行治疗，但是该菌耐药现象越来越常见，常用药物对该病已无明显的疗效，而且，随着人们对无药物残留、绿色食品需求的期望越来越高，目前许多国家对抗生素在动物饲料中应用的限制也越来越严格，抗生素在本病预防和控制等方面的应用必将受到严格限制和逐步禁止，因此，疫苗接种己成为预防和控制该病的主要措施。
TSB培养基作为副猪嗜血杆菌5型的传统的培养基，该培养基的基本成分为：葡萄糖2.5g/L，干酪素17g/L，磷酸二氢钾2.5g/L，胰液大豆蛋白胨3g/L。该培养基的优点在于配制容易，且是复合的培养基。但成本较高，最后所得的活菌数较少，一般活菌数在15～20亿，且生产周期长，不适合公司大规模生产。
在本发明申请之前，武汉科前动物生物制品有限责任公司2011年6月1日已经申报一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法专利(专利申请号：201110145940.6)，该专利提供了一种适于副猪嗜血杆菌5型高效的培养方法，保护内容为一种高密度培养副猪嗜血杆菌的方法，该专利适用范围仅限于3-100L发酵罐。
本发明通过进一步优化培养基组成，同时通过在培养基、pH值、最适温度、通气量、罐压、溶氧浓度(DO)等方面进行探索，优化高密度培养的各种条件，进行工业放大研究，获得了一种适用于500L发酵罐副猪嗜血杆菌5型常规培养的培养方法，且可进一步提高菌体密度，最终可实现高密度培养的工艺控制参数的成套技术定型和规模化示范生产线。
参考文献：
[1]Oliveira S,Pijoan C.Computer-based analysis of Haemophilusparasuis protein fingerprints.Can J Vet Res,2004a,68:71-75
[2]Oliveira S,Pijoan C.Haemophilus parasuis:new trends on diagnosis,epidemiology and control.Vet Microbiol,2004b,99:1-12
发明内容
本发明的目的在于克服副猪嗜血杆菌5型难以放大培养和大规模工业生产的缺陷，针对副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐高密度发酵培养的需要而创造性地筛选的一种高性能的培养方法，该培养方法的原料制备简单，成本低廉，较常规的培养方法既能保证副猪嗜血杆菌生长旺盛，进行正常代谢，又能提高生长速度，生产周期短，活菌数较高，一般活菌数为72～80亿/毫升，节省劳动力成本，完全能适应于副猪嗜血杆菌5型疫苗生产。
本发明通过下列技术方案实现：
一种适用于副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，步骤如下：
A、将冻干副猪嗜血杆菌5型用TSA平板活化18～24h，至单菌落长出；
B、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养6～14h至OD600值达到0.8～1.6；
C、以1％～5％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养8～14h至OD600值达到2.0～3.5；
D、将二级种子液以1％～5％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，发酵罐中盛有发酵罐培养基，培养条件为：温度35～39℃、罐压0.02～0.1Mpa、溶氧20～50％、pH7.3～7.8，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体；
所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：胰蛋白胨1～20g/L、酵母粉5～50g/L、酵母浸膏1～10g/L、氯化钠1～10g/L、醋酸铵1～10g/L、pH为7.4的1M磷酸缓冲液1％～30％V/V及添加一定量的牛血清5％～30％V/V和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.01～0.1mg/L。
上述方案中，发酵罐培养基装液量为250-350L。
上述方案中，发酵培养过程中搅拌转速与溶氧串联，当溶氧高于设定值时，搅拌转速自动调低，当溶氧低于设定值时，搅拌转速相应调高。
上述方案中，发酵培养条件中:通气量5～20m3/h。
上述方案中，二级种子培养基和发酵罐培养基的配制方法为：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的pH为7.4的1M磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
上述在培养过程中pH控制手段为：在培养过程中在线流加氨水溶液控pH值在7.3～7.8。
本发明的特点是：
培养基成分中以胰蛋白陈、酵母粉和酵母浸膏做为复合氮源,较以往专利培养基中单一氮源，营养更丰富,更有利于副猪嗜血杆菌5型生长繁殖；添加无机氮源醋酸铵,能迅速为副猪嗜血杆菌5型所吸收；缓冲盐体系的磷酸根不仅是核酸和辅酶的组成成分,而且缓冲体系可以起到一个很好的调节pH作用。副猪嗜血杆菌杆菌为兼性厌氧菌，发酵罐溶氧范围的控制对菌体生长起着重要作用。培养基的PH也是一个关键因素，通过前期pH优化实验，筛选出适合副猪嗜血杆菌5型生长的pH范围，最终该发明通过发酵培养基配方，pH控制，溶氧度等条件控制最终实现了副猪嗜血杆菌5型工艺在500L发酵罐上放大优化，从而解决了副猪嗜血杆菌5型难以大规模生产的技术难题。
本发明的有益效果：适用于副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度大规模培养，可以直接用于规模化生产，菌体生长快、菌体密度高，较以往发酵培养方法相比，可进一步提高发酵终点的活菌密度，并可以缩短发酵周期；且原料简单，成本低廉。
附图说明
图1是在500L发酵罐中，副猪嗜血杆菌5型在本发明的最佳实施例6制备的培养条件下的生长曲线。
具体实施方式
实施例1：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养8h至OD600值达到0.8；
B、以1％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养8h至OD600值达到2.0；
C、将二级种子液以1％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度35℃、罐压0.02Mpa、通气量5m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧20％、pH7.3，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为78亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：胰蛋白胨(10g/L)、酵母粉(5g/L)、酵母浸膏(5g/L)、醋酸铵(5g/L)、氯化钠(5g/L)、pH为7.4的1M磷酸钾缓冲液(1％V/V)及添加一定量的牛血清(5％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.1mg/L)。
E、所述培养基配制方法：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
实施例2：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养10h至OD600值达到0.9；
B、以2％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养12h至OD600值达到3.0；
C、将二级种子液以2％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度36℃、罐压0.04Mpa、通气量10m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧25％、pH7.8，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为73亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：酵母粉(10g/L)、胰蛋白胨(5g/L)、酵母浸膏(1g/L)、醋酸铵(2g/L)、氯化钠(4g/L)、pH为7.4的1M磷酸缓冲液(5％V/V)及添加一定量的牛血清(20％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.03mg/L)。
E、所述培养基配制方法：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
实施例3：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养14h至OD600值达到1.6；
B、以5％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养9h至OD600值达到2.8；
C、将二级种子液以5％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度39℃、罐压0.06Mpa、通气量15m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧30％、pH7.5，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为74亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：酵母粉(20g/L)、胰蛋白胨(7g/L)、酵母浸膏(4g/L)、醋酸铵(4g/L)、氯化钠(10g/L)、pH为7.4的1M磷酸缓冲液(20％V/V)及添加一定量的牛血清(25％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.05mg/L)。
E、所述培养基配制方法：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
实施例4：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养12h至OD600值达到1.2；
B、以3％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养10h至OD600值达到2.5；
C、将二级种子液以3％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度37℃、罐压0.08Mpa、通气量14m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧35％、pH7.6，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为75亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：酵母粉(30g/L)、胰蛋白胨(10g/L)、酵母浸膏(7g/L)、醋酸铵(2g/L)、氯化钠(1g/L)、pH为7.4的1M磷酸缓冲液(10％V/V)及添加一定量的牛血清(10％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.01mg/L)。
E、所述培养基成分中酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
实施例5：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养11h至OD600值达到1.1；
B、以4％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养11h至OD600值达到2.8；
C、将二级种子液以4％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度38℃、罐压0.05Mpa、通气量17m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧40％、pH7.7，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为77亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：酵母粉(40g/L)、胰蛋白胨(15g/L)、酵母浸膏(3g/L)、醋酸铵(7g/L)、氯化钠(6g/L)、pH为7.4的1M磷酸缓冲液(15％V/V)及添加一定量的牛血清(14％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.04mg/L)。
E、所述培养基配制方法：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
实施例6：培养方法的制备：
A、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养13h至OD600值达到1.6；
B、以5％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养13h至OD600值达到3.2；
C、将二级种子液以5％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，培养基装液量为300L，培养条件为：温度37℃、罐压0.06Mpa、通气量14m3/h、搅拌转速与溶氧串联、溶氧50％、pH7.4，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体，活菌数最高为80亿/毫升；
D、所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：酵母粉(40g/L)、胰蛋白胨(5g/L)、酵母浸膏(1g/L)、醋酸铵(1g/L)、氯化钠(1g/L)、pH为7.4的1M磷酸缓冲液(10％V/V)及添加一定量的牛血清(15％V/V)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(0.07mg/L)。
E、所述培养基配制方法：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

Claims (6)

1.一种副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：步骤如下：
A、将冻干副猪嗜血杆菌5型用TSA平板活化18～24h，至单菌落长出；
B、挑取4～8个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养6～14h至OD600值达到0.8～1.6；
C、以1％～5％V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养8～14h至OD600值达到2.0～3.5；
D、将二级种子液以1％～5％V/V接种量接种于500L发酵罐的灭菌培养基中，发酵罐中盛有发酵罐培养基，培养条件为：温度35～39℃、罐压0.02～0.1Mpa、溶氧20～50％、pH7.3～7.8，培养至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌5型菌体；
所述的二级种子培养基和发酵罐培养基成分均为：胰蛋白胨1～20g/L、酵母粉5～50g/L、酵母浸膏1～10g/L、氯化钠1～10g/L、醋酸铵1～10g/L、pH为7.4的1M磷酸缓冲液1％～30％V/V及添加一定量的牛血清5％～30％V/V和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.01～0.1mg/L。
2.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：发酵罐培养基装液量为250-350L。
3.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：发酵培养过程中搅拌转速与溶氧串联，当溶氧高于设定值时，搅拌转速自动调低，当溶氧低于设定值时，搅拌转速相应调高。
4.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：发酵培养条件中通气量5～20m3/h。
5.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：二级种子培养基和发酵罐培养基的配制方法为：酵母粉、胰蛋白胨、酵母浸膏和氯化钠，121℃灭菌20min，待冷却至常温再加入同样经121℃灭菌20min处理的pH为7.4的1M磷酸钾缓冲液，并加入过滤除菌的牛血清、醋酸铵和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
6.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌5型500L发酵罐的高密度培养方法，其特征在于：上述在培养过程中pH控制手段为：在培养过程中在线流加氨水溶液控pH值在7.3～7.8。
CN201610948591.4A 2016-10-26 2016-10-26 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法 Active CN106434479B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610948591.4A CN106434479B (zh) 2016-10-26 2016-10-26 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610948591.4A CN106434479B (zh) 2016-10-26 2016-10-26 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106434479A true CN106434479A (zh) 2017-02-22
CN106434479B CN106434479B (zh) 2020-05-08

Family

ID=58178664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610948591.4A Active CN106434479B (zh) 2016-10-26 2016-10-26 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106434479B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108949606A (zh) * 2017-06-29 2018-12-07 南京天邦生物科技有限公司 一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺
CN109010814A (zh) * 2018-08-31 2018-12-18 武汉科前生物股份有限公司 副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法
CN109207397A (zh) * 2018-09-18 2019-01-15 山东省滨州畜牧兽医研究院 一种副猪嗜血杆菌培养基及高密度发酵培养方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102220272A (zh) * 2011-06-01 2011-10-19 武汉科前动物生物制品有限责任公司 一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法
CN103667160A (zh) * 2013-12-30 2014-03-26 山东滨州博莱威生物技术有限公司 一种副猪嗜血杆菌高密度发酵培养基

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102220272A (zh) * 2011-06-01 2011-10-19 武汉科前动物生物制品有限责任公司 一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法
CN103667160A (zh) * 2013-12-30 2014-03-26 山东滨州博莱威生物技术有限公司 一种副猪嗜血杆菌高密度发酵培养基

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
苗立中: "副猪嗜血杆菌应该定量PCR方法建立及其分离株高密度发酵研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108949606A (zh) * 2017-06-29 2018-12-07 南京天邦生物科技有限公司 一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺
CN108949606B (zh) * 2017-06-29 2021-08-27 兆丰华生物科技(南京)有限公司 一种鸡毒支原体高密度发酵培养工艺
CN109010814A (zh) * 2018-08-31 2018-12-18 武汉科前生物股份有限公司 副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法
CN109010814B (zh) * 2018-08-31 2021-11-16 武汉科前生物股份有限公司 副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法
CN109207397A (zh) * 2018-09-18 2019-01-15 山东省滨州畜牧兽医研究院 一种副猪嗜血杆菌培养基及高密度发酵培养方法
CN109207397B (zh) * 2018-09-18 2020-07-28 山东省滨州畜牧兽医研究院 一种副猪嗜血杆菌培养基及高密度发酵培养方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106434479B (zh) 2020-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102220272B (zh) 一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法
CN108220175A (zh) 酿酒酵母高密度培养方法及其pH调控方法
CN103088010A (zh) 一种生物保健垫料及其制备方法
CN107217020B (zh) 一种适用于嗜酸乳杆菌的培养基及其制备方法
CN104762250B (zh) 一种利用木质纤维素水解液生产益生菌的方法
CN103289910A (zh) 一种凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法
CN103710286A (zh) 一种丁酸梭菌活菌制剂加工方法及培养基组合物
CN106434479A (zh) 一种副猪嗜血杆菌5型500l发酵罐的高密度培养方法
CN103614323B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用
CN103289935A (zh) 一种复合菌株微生态制剂及其制备方法
CN101904418A (zh) 绞股蓝皂甙用于减少动物瘤胃内甲烷产生的方法
CN103483040A (zh) 冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基及其发酵生产方法
CN102994421B (zh) 一株适用于青贮燕麦的乳酸菌及其应用
CN104313079B (zh) 莫能菌素预混剂的制备方法
CN106399155A (zh) 一种地衣芽孢杆菌发酵培养基
CN104757275A (zh) 枯草芽孢菌液体发酵甘草微生态制剂、制备方法及其作为畜禽饲料添加剂的应用
CN102071165A (zh) 一种添加谷氨酸提高乳酸菌在低pH条件下生物量的方法
CN107760612A (zh) 一种黑曲霉yy07菌株及其在固体发酵生产饲用酸性蛋白酶中的应用
CN102286411B (zh) 植物乳杆菌及其在发酵白菜外包叶中的应用
CN102550294B (zh) 一种姬菇菌种的液体发酵培养方法
CN107048364A (zh) 一种富含γ‑氨基丁酸的桑叶粉及其制备方法
CN108707569B (zh) 屎肠球菌高效发酵培养基及其发酵培养方法
CN104263689B (zh) 一种用于生产甘油酸的热带醋杆菌的驯化方法
CN105820989A (zh) 一种直投式发酵剂益生乳酸菌的高密度培养方法
CN104862263A (zh) 一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant