CN104862263A - 一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法 - Google Patents

一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法 Download PDF

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Abstract

一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法，它属于菌株培养领域。本发明主要解决现有玉米秸秆利用率低，现有培养基中使用大量化学试剂，存在培养成本高，来源不广泛，技术含量大，不易于非专业人士掌握，不利于利用在实际生产中的技术问题。培养基包括玉米芯、玉米秸秆、豆粕、大豆糖蜜；采用混合的方法制备。菌种的培养方法：活化菌种，制备种子液，然后接种到培养基中。在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时。本发明用于培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)。

Description

一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法
技术领域
本发明属于枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)培养的技术领域。具体涉及一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法。
背景技术
由于我国农业机械化程度不高，玉米联合收割机械化作业尚未得到大面积推广应用，大部分地区仍依靠农民手工收获玉米。农民割倒玉米秸秆再经过一段时间晾晒后，将玉米穗收走；玉米秸秆留在田间继续晾晒，晾晒后的玉米秸秆可以手工捆扎运到田边村头堆放或由打捆机捡拾打捆后运至秸秆存储点或利用点。东北地区玉米秸秆的规模化工业利用方式多为直燃发电。
现有枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)培养基中使用大量化学试剂，存在培养成本高，来源不广泛，技术含量大，不易于非专业人士掌握，不利于利用在实际生产中的技术问题。
发明内容
本发明要解决现有玉米秸秆利用率低，现有培养基中使用大量化学试剂，存在培养成本高，来源不广泛，技术含量大，不易于非专业人士掌握，不利于利用在实际生产中的技术问题；而提供了一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法。
本发明中一种含玉米秸秆的培养基的配方为：10～43g/L玉米芯、10～45g/L玉米秸秆、1～8g/L豆粕、1～7g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值；其制备方法如下：将玉米秸秆、玉米芯和豆粕分别依次进行粉碎、过30目筛处理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，搅拌均匀，然后在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，得到含玉米秸秆的培养基。
本发明中一种含玉米秸秆的培养基培养枯草芽孢杆菌的方法是按下述步骤完成的：
步骤一、将菌种活化三代以上，保存于牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上；
步骤二、取牛肉膏蛋白胨液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种经步骤一处理的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
步骤三、将步骤二获得的种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了枯草芽孢杆菌的培养。
本发明中一种含玉米秸秆的培养基培养植物乳杆菌的方法是按下述步骤进行的：
步骤一、将菌种活化三代以上，保存于MRs固体培养基斜面上；
步骤二、取MRs液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种经步骤一处理的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
步骤三、将步骤二获得的种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了植物乳杆菌的培养。
玉米芯中含糖54.5％、粗蛋白质2.2％、粗纤维29.7％、矿物质1.2％，为微生物生产提供碳源和矿物质。
玉米秸秆中碳水化合物含量31％～45％，蛋白质含量3～6％，为微生物生产提供碳源。
豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品。豆粕中粗蛋白质含量高达30～50％，为微生物生产提供氮源。
大豆糖蜜是生产大豆浓缩蛋白过程中，醇溶部分物质，经过浓缩处理后的产品，因富含糖类物质，颜色和流动性类似蜂蜜。粗蛋白质(大豆乳清蛋白)5％-8％、碳水化合物50％-55％、蔗糖15％-20％、单糖5％-10％、灰份(主要是P3+、Ca2+、Mg2+、K+、Fe2+)4％，为微生物生长提供碳源和矿物质。
过30目筛，可使玉米秸秆、玉米芯和豆粕均匀分散在水中，菌种可以充分利用培养基原料，生长状态良好，活菌数高。不足30目菌活数达不到1.0×108cFu/ml。
玉米秸秆多为农业废弃物，在广大农村方便易得。本发明为秸秆综合利用提供一个新的途径，变废为宝，提高经济效益，使得玉米秸秆到了有效的利用。同时玉米秸秆，玉米芯，豆粕，大豆糖蜜等廉价的原料，替代微生物培养基中化学试剂，不仅大幅度降低了培养基成本，同时也为后续制备微生物饲料生产提供了基础，使得生产过程中技术难度降低，生产成本降低，方便易行，产品价格降低，农民可以广泛的使用微生物饲料，使农村废弃资源循环利用，可持续发展。
本发明原料来源不广泛，方法容易操作和掌握，有利于在实际生产中应用。
在实验室中用牛肉膏蛋白胨培养基制备1L菌液需要培养基成本需要10元。
在实验室中用MRs培养基制备1L菌液需要培养基成本40-70元。
本发明配方中玉米秸秆，玉米芯为农业废弃物，豆粕市售在2-3元/500克，大豆糖蜜0.25元/500克，制备1L菌液培养基成本仅需不足0.1元。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式中一种含玉米秸秆的培养基的配方为：10g/L玉米芯、30g/L玉米秸秆、5g/L豆粕、7g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值；其制备方法如下：将玉米秸秆、玉米芯和豆粕分别依次进行粉碎、过30目筛处理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，搅拌均匀，然后灭菌，冷却至室温，得到含玉米秸秆的培养基。
一种含玉米秸秆的培养基培养枯草芽孢杆菌的方法是按下述步骤进行的：
步骤一、将枯草芽孢杆菌菌种活化三代以上，保存于牛肉膏固体蛋白胨培养基斜面上；
所述的牛肉膏蛋白胨固体培养基配方如下：3.0g/L牛肉膏：10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl、25g/L琼脂和1000ml水，pH值为7.4-7.6。
步骤二、去牛肉膏蛋白胨液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种步骤一的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方如下：3.0g/L牛肉膏、10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl和1000ml水，pH值为7.4-7.6。
步骤三、将种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的一种含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了枯草芽孢杆菌的培养。
将步骤三恒温震荡箱取出的菌液按1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8取9个梯度稀释，倾倒法倒入牛肉膏蛋白胨固体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养24小时。然后计算菌活数，本实施方式培养的菌活数达到1.0×108cFu/ml以上。
具体实施方式二：本实施方式中含玉米秸秆的培养基的配方为：30g/L玉米芯、35g/L玉米秸秆、5g/L豆粕、5g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值；其制备方法如下：将玉米秸秆、玉米芯和豆粕分别依次进行粉碎、过30目筛处理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，搅拌均匀，然后灭菌，冷却至室温，得到含玉米秸秆的培养基。
一种含玉米秸秆的培养基培养植物乳杆菌的方法是按下述步骤进行的：
步骤一、将植物乳杆菌菌种活化三代以上，保存于MRs固体培养基斜面上；
所述MRs固体培养基的配方如下：
10.0g/L蛋白胨、10.0g/L牛肉浸取物、5.0g/L酵母浸粉、5.0g/L葡萄糖、5.0g/L乙酸钠、2.0g/L柠檬酸二胺、1.0g/L吐温80、2.0g/L磷酸氢二钾、0.2g/L七水硫酸镁、0.05g/L七水硫酸锰、20.0g/L碳酸钙、20.0克g/L琼脂和1000ml蒸馏水，pH值为6.8。
步骤二、去MRs液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种步骤一的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
所述的MRs液体培养基的配方如下：
10.0g/L蛋白胨、10.0g/L牛肉浸取物、5.0g/L酵母浸粉、5.0g/L葡萄糖、5.0g/L乙酸钠、2.0g/L柠檬酸二胺、1.0g/L吐温80、2.0g/L磷酸氢二钾、0.2g/L七水硫酸镁、0.05g/L七水硫酸锰、20.0g/L碳酸钙和1000ml蒸馏水，pH值为6.8。
步骤三、将种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的一种含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了植物乳杆菌的培养。
将步骤三恒温震荡箱取出的菌液按1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8取9个梯度稀释，倾倒法倒入牛肉膏蛋白胨固体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养24小时。然后计算菌活数，本实施方式培养的菌活数达到1.0×108cFu/ml以上。

Claims (10)

1.一种含玉米秸秆的培养基，其特征在于含玉米秸秆的培养基的配方为：10～43g/L玉米芯、10～45g/L玉米秸秆、1～8g/L豆粕、1～7g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值。
2.根据权利要求1所述的一种含玉米秸秆的培养基的制备方法，其特征在于含玉米秸秆的培养基的配方为：20～35g/L玉米芯、20～40g/L玉米秸秆、2～6g/L豆粕、2～6g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值。
3.根据权利要求1所述的一种含玉米秸秆的培养基的制备方法，其特征在于含玉米秸秆的培养基的配方为：30g/L玉米芯、35g/L玉米秸秆、5g/L豆粕、5g/L大豆糖蜜，余量为水，自然pH值。
4.根据权利要求1所述的一种含玉米秸秆的培养基的制备方法，其特征在于含玉米秸秆的培养基的制备方法如下：
将玉米秸秆、玉米芯和豆粕分别依次进行粉碎、过30目筛处理，混合；然后加入大豆糖蜜和水，搅拌均匀，然后在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，得到含玉米秸秆的培养基。
5.一种含玉米秸秆的培养基培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于该方法是按下述步骤完成的：
步骤一、将菌种活化三代以上，保存于牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上；
步骤二、取牛肉膏蛋白胨液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种经步骤一处理的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
步骤三、将步骤二获得的种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了枯草芽孢杆菌的培养。
6.根据权利要求5所述的一种含玉米秸秆的培养基培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于步骤一所述的牛肉膏蛋白胨固体培养基配方如下：3.0g/L牛肉膏：10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl、15-25g/L琼脂和1000ml水，pH值为7.4-7.6。
7.根据权利要求5所述的一种含玉米秸秆的培养基培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于步骤二牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方如下：3.0g/L牛肉膏、10.0g/L蛋白胨、5.0g/LNaCl和1000ml水，pH值为7.4-7.6。
8.一种含玉米秸秆的培养基培养植物乳杆菌的方法，其特征在于该方法是按下述步骤进行的：
步骤一、将菌种活化三代以上，保存于MRs固体培养基斜面上；
步骤二、取MRs液体培养基100ml，在121℃条件下灭菌25分钟，冷却至室温，接种经步骤一处理的菌种，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，得到种子液；
步骤三、将步骤二获得的种子液按2v/v％的接种量接种于权利要求1所述的含玉米秸秆的培养基中，在37℃恒温震荡箱中振荡培养24小时，取出；即完成了植物乳杆菌的培养。
9.根据权利要求8所述的一种含玉米秸秆的培养基培养植物乳杆菌的方法，其特征在于步骤一所述MRs固体培养基的配方如下：
10.0g/L蛋白胨、10.0g/L牛肉浸取物、5.0g/L酵母浸粉、5.0g/L葡萄糖、5.0g/L乙酸钠、2.0g/L柠檬酸二胺、1.0g/L吐温80、2.0g/L磷酸氢二钾、0.2g/L七水硫酸镁、0.05g/L七水硫酸锰、20.0g/L碳酸钙、20.0克g/L琼脂和1000ml蒸馏水，pH值为6.8。
10.根据权利要求8所述的一种含玉米秸秆的培养基培养植物乳杆菌的方法，其特征在于步骤二所述的MRs液体培养基的配方如下：10.0g/L蛋白胨、10.0g/L牛肉浸取物、5.0g/L酵母浸粉、5.0g/L葡萄糖、5.0g/L乙酸钠、2.0g/L柠檬酸二胺、1.0g/L吐温80、2.0g/L磷酸氢二钾、0.2g/L七水硫酸镁、0.05g/L七水硫酸锰、20.0g/L碳酸钙和1000ml蒸馏水，pH值为6.8。
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