CN113979803A - 一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 - Google Patents
一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113979803A CN113979803A CN202111287854.9A CN202111287854A CN113979803A CN 113979803 A CN113979803 A CN 113979803A CN 202111287854 A CN202111287854 A CN 202111287854A CN 113979803 A CN113979803 A CN 113979803A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- fermentation
- urea
- production method
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 68
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 68
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 49
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 51
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 51
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 32
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 21
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 18
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 12
- 239000003595 mist Substances 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 10
- 238000005469 granulation Methods 0.000 claims description 9
- 230000003179 granulation Effects 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 7
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000005086 pumping Methods 0.000 claims description 6
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 4
- FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H calcium citrate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 4
- 239000001354 calcium citrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 4
- 235000013337 tricalcium citrate Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229920002752 Konjac Polymers 0.000 claims description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 claims description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 claims description 2
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000010485 konjac Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 abstract description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 9
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 7
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 3
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000221785 Erysiphales Species 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 206010064458 Penicilliosis Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 235000006029 Prunus persica var nucipersica Nutrition 0.000 description 1
- 244000017714 Prunus persica var. nucipersica Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- DJSISFGPUUYILV-UHFFFAOYSA-N UNPD161792 Natural products O1C(C(O)=O)C(O)C(O)C(O)C1OC(C(=C1O)O)=CC2=C1C(=O)C=C(C=1C=CC(O)=CC=1)O2 DJSISFGPUUYILV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000001785 acacia senegal l. willd gum Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001420 bacteriolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RKLXDNHNLPUQRB-TVJUEJKUSA-N chembl564271 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]2C(C)SC[C@H](N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NC(=O)[C@@H](NC2=O)CSC1C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C(=C\C)/NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]2NC(=O)CNC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]3N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(=O)C(=C)NC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(O)=O)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)C1=CC=CC=C1 RKLXDNHNLPUQRB-TVJUEJKUSA-N 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940025902 konjac mannan Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- DJSISFGPUUYILV-ZFORQUDYSA-N scutellarin Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC(C(=C1O)O)=CC2=C1C(=O)C=C(C=1C=CC(O)=CC=1)O2 DJSISFGPUUYILV-ZFORQUDYSA-N 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 108010082567 subtilin Proteins 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05C—NITROGENOUS FERTILISERS
- C05C9/00—Fertilisers containing urea or urea compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
- C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
- C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
- C05G5/10—Solid or semi-solid fertilisers, e.g. powders
- C05G5/12—Granules or flakes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fertilizers (AREA)
Abstract
本发明属于新型肥料技术领域，直接涉及一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法。该生产方法通过以下步骤实现：首先培养三代优良菌种，然后将进行种子培养，得到枯草芽孢杆菌发酵种子液；将枯草芽孢杆菌发酵种子液接种到含有发酵培养基的发酵罐，发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；将枯草芽孢杆菌发酵液和尿素液混合即可。本发明制备的生防尿素，在不改变农民施肥习惯的情况下，将抗菌微生物包含于尿素颗粒中，达到生物防治农作物病害的作用。
Description
技术领域
本发明属于新型肥料技术领域，直接涉及一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法。
背景技术
近十几年来，我国对新型肥料的研究不断深入，控释肥、缓释肥、生物有机肥等多种新型肥料不断研制成功，对促进粮食增产发挥了积极的促进作用，由于农民的习惯性施肥方法，忽视了抗病毒肥料的施用，农业和肥料研究单位对生物质抗病毒肥料的研究也受到了较大的影响，特别是近年来重茬种植导致的病原菌积累越来越多，致使近几年农作物的病虫害日趋严重，研究一种抑制或杀死多种作物病原菌的新型生物质防病肥料是十分必要的。
发明内容
针对现有技术中存在的市场空白等问题，本发明提供了一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法，本发明针对目前农民施肥习惯及土壤中病原菌积累的情况，根据枯草芽孢杆菌的生理特征，制备了一种新型的生防尿素。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法，包括以下步骤：
（1）将纯种枯草芽孢杆菌液涂布于琼脂平板上，网状划线，置于恒温培养箱内，恒温培养，培养基表面形成菌落，从平板中挑选出长势优良的单菌落，用接种环挑起移种到装有25ml液体培养基的摇甁中，置于摇床内，恒温振荡得到优良菌种液，再涂布琼脂平板上，恒温培养，从中挑选长势良好的单菌落，移种到液体培养基中，恒温培养，得到二代优良菌种，三次涂布于琼脂平板上，恒温培养，从平板中挑选出最为饱满的单菌落，移种到液体培养基中，培养,即得到三代优良菌种；
（2）将得到的三代优良菌种移植到种子培养基中，进行种子培养，即得到枯草芽孢杆菌发酵种子液；
（3）将枯草芽孢杆菌发酵种子液接种到含有发酵培养基的发酵罐，火焰保护接种后，启动搅拌机，发酵，即得到枯草芽孢杆菌发酵液；
（4）将枯草芽孢杆菌发酵液再经三效蒸发浓缩至75%，得浓缩发酵也，蒸发压力控制在-0.096Mpa,温度86℃，用高压尿素液泵将尿素液打入造粒塔顶部旋流喷射头，尿素液喷洒为细雾状，同时用高压计量泵，将浓缩发酵液打入造粒塔顶另一旋流喷雾器，喷洒出的细雾状枯草芽孢杆菌浓缩发酵液和细雾状尿液混合，在下落100米的过程中，水分蒸发，混合的细微颗粒聚集成大颗粒，枯草芽孢杆菌被包裹在尿素颗粒中，处于休眠状态，即得到含枯草芽孢杆菌生防尿素。
进一步的，步骤（1）中，所述琼脂平板培养基配方：牛肉膏30g/L;蛋白胨10g/L,NaCL5g/L，琼脂15g/L；所述液体培养基配方：葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L, NaCL5g/L，牛肉膏5g/L。
进一步的，步骤（1）中，所述恒温培养或恒温振荡的条件为56℃下培养或振荡24h。
进一步的，步骤（2）中，所述种子培养基配方：葡萄糖30g/L、大豆粉30g/L、酵母粉10g/L、(NH4)2SO4 5g/L，NaCl 5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L；所述接种量为1%。
进一步的，步骤（2）中，所述种子培养的条件为在温度56℃，摇床转速150-200r/min条件下，培养24-28h。
进一步的，步骤（3）中，所述发酵液培养基配方：葡萄糖30g/L，大豆粉30g/L，酵母粉10g/L, (NH4)2SO4 5g/L, NaCL5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L。
进一步的，步骤（3）中，所述发酵培养基中的接种量为3-5%；所述搅拌机的转速为200r/min；所述发酵的温度控制65℃，PH=7，通气量2.5vvm，发酵48h。
进一步的，步骤（4）中，所述尿素液的浓度为70-75%；所述尿素液中含有占其重量3-5%的魔芋甘露聚糖、1%的阿拉伯胶及1%的柠檬酸钙。
进一步的，步骤（4）中，所述浓缩发酵液占尿素液重量的0.2%-0.5%。
本发明将枯草芽孢杆菌菌体包含于尿素颗粒中，施入土壤后，菌体在养分丰富的土壤中迅速生长繁殖，抑制和杀死病原菌。将市售的枯草芽孢杆菌纯种，经平板-液体培养-平板-液体培养三代驯化筛选，得到枯草芽孢杆菌优良菌种，利用优良菌种进行发酵，得到的枯草芽孢杆菌发酵液，负压浓缩，通过高塔喷雾造粒将芽孢杆菌菌体包含于尿素颗粒中，制得含枯草芽孢杆菌生防尿素。
本发明的有益效果为：
（1）本发明制备的含枯草芽孢杆菌的尿素施入土壤中，其中休眠状态的菌体，得到充足的水分，氧气和养分，特别在夏季高温时期，会迅速生长繁殖，在生长过程中会产生枯草素、多粘素、短杆素等活性物质，这些活性物质对植物致病菌有显著的抑制作用，在生长过程中还会产生溶菌物质，从而溶解病原菌的菌丝体，致使菌丝体断裂解体或细胞质消解致死。
（2）本发明制备的生防尿素，经大田实验，枯草芽孢杆菌菌株对不同作物的众多真菌和细菌病毒具有非常有效的抑制和灭除作用，如粮食作物中的水稻纹枯病，稻瘟病、小麦纹枯病、豆类根腐病，在蔬菜和水果中，如草莓叶斑病，番茄叶病，黄瓜枯萎病，苹果霉心病，柑橘青霉病，油桃褐腐病等多种多样的病毒。在不改变农民施肥习惯的情况下，将抗菌微生物包含于尿素颗粒中，达到生物防治农作物病害的作用。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的试验方案做进一步的解释和说明。
本发明所使用的枯草芽孢杆菌购自环凯微生物科技有限公司。
实施例1
（1）枯草杆菌在液体培养基中生长繁殖尤其迅速，将纯种枯草芽孢杆菌液分别涂布于6块琼脂平板上，网状划线，置于恒温培养箱内，56℃下恒温培养24h，培养基表面形成菌落，从6块平板中挑选出长势优良的单菌落，用接种环挑起移种到装有25ml液体培养基的摇甁中，置于摇床内，56℃恒温振荡24h得到优良菌种液，再涂布6块琼脂平板上，56℃恒温培养24h，从6块中挑选长势良好的单菌落，移种到液体培养基中，56℃恒温培养24h，得到二代优良菌种，三次涂布于6块琼脂平板上，恒温培养24h，从6块平板中挑选出最为饱满的单菌落，移种到液体培养基中，培养24h,即得到三代优良菌种。分别封存于干燥无菌的沙土保藏管中；
琼脂平板培养基配方：牛肉膏30g/L;蛋白胨10g/L,NaCL5g/L，琼脂15g/L ；
液体培养基配方：葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L, NaCL5g/L，牛肉膏5g/L；
（2）将三代优良菌种，按常规手段复活后，移植到种子培养基中，一般种子培养用4-8只2000ml的摇甁，装有800ml培养基，接种量为1%，温度56℃，摇床转速150-200r/min，培养24-28h，即得到枯草芽孢杆菌发酵种子液；
种子培养基配方：葡萄糖30g/L、大豆粉30g/L、酵母粉10g/L、(NH4)2SO4 5g/L，NaCl5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L；
（3）得到的种子液按接种量的5%接种到发酵罐，发酵罐提前空罐灭菌115℃，25min，加入培养基后进行实罐灭菌115℃、25min,空气过滤器等相关管道阀门都须灭菌，发酵液培养基配方：葡萄糖30g/L，大豆粉30g/L，酵母粉10g/L, (NH4)2SO4 5g/L, NaCL5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L。火焰保护接种后，启动搅拌机转速200r/min，温度控制65℃，PH=7，通气量2.5vvm，发酵48h，即得到枯草芽孢杆菌发酵液；
（4）将枯草芽孢杆菌发酵液再经三效蒸发浓缩至75%，蒸发压力控制在-0.096Mpa,温度86℃。用高压尿素液泵将浓度为75%的尿素液（含有占其重量5%的魔芋甘露聚糖、1%的阿拉伯胶及1%的柠檬酸钙）打入造粒塔顶部旋流喷射头，尿素液喷洒为细雾状，同时用高压计量泵，将浓缩发酵液按尿液的0.2%-0.5%打入造粒塔顶另一旋流喷雾器，喷洒出的细雾状枯草芽孢杆菌浓缩发酵液和细雾状尿液混合，在下落100米的过程中，水分蒸发，混合的细微颗粒聚集成大颗粒，芽孢杆菌被包裹在尿素颗粒中，处于休眠状态，即得到含枯草芽孢杆菌生防尿素。
对比例1
（1）枯草杆菌在液体培养基中生长繁殖尤其迅速，将纯种枯草芽孢杆菌液分别涂布于6块琼脂平板上，网状划线，置于恒温培养箱内，56℃下恒温培养24h，培养基表面形成菌落，从6块平板中挑选出长势优良的单菌落，用接种环挑起移种到装有25ml液体培养基的摇甁中，置于摇床内，56℃恒温振荡24h得到优良菌种液，再涂布6块琼脂平板上，56℃恒温培养24h，从6块中挑选长势良好的单菌落，移种到液体培养基中，56℃恒温培养24h，得到二代优良菌种，三次涂布于6块琼脂平板上，恒温培养24h，从6块平板中挑选出最为饱满的单菌落，移种到液体培养基中，培养24h,即得到三代优良菌种。分别封存于干燥无菌的沙土保藏管中；
（2）将三代优良菌种，按常规手段复活后，移植到种子培养基中，一般种子培养用4-8只2000ml的摇甁，装有800ml培养基，接种量为1%，温度56℃，摇床转速150-200r/min，培养24-28h，即得到枯草芽孢杆菌发酵种子液；
（3）得到的种子液按接种量的5%接种到发酵罐，发酵罐提前空罐灭菌115℃，25min，加入培养基后进行实罐灭菌115℃、25min,空气过滤器等相关管道阀门都须灭菌，发酵液培养基配方：葡萄糖30g/L，大豆粉30g/L，酵母粉10g/L, (NH4)2SO4 5g/L, NaCL5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L。火焰保护接种后，启动搅拌机转速200r/min，温度控制65℃，PH=7，通气量2.5vvm，发酵48h，即得到枯草芽孢杆菌发酵液；
（4）将枯草芽孢杆菌发酵液再经三效蒸发浓缩至75%，蒸发压力控制在-0.096Mpa,温度86℃。用高压尿素液泵将浓度为75%的尿素液（含有占其重量1%的柠檬酸钙）打入造粒塔顶部旋流喷射头，尿素液喷洒为细雾状，同时用高压计量泵，将浓缩发酵液按尿液的0.2%-0.5%打入造粒塔顶另一旋流喷雾器，喷洒出的细雾状枯草芽孢杆菌浓缩发酵液和细雾状尿液混合，在下落100米的过程中，水分蒸发，混合的细微颗粒聚集成大颗粒，芽孢杆菌被包裹在尿素颗粒中，处于休眠状态，即得到含枯草芽孢杆菌生防尿素。
效果实施例
（一）将实施例1及对比例1制备的含枯草芽孢杆菌生防尿素进行有效活菌数检测，按照GB20287-2006及NY/T2321-2013对样品进行检测，统计最终的活菌率，具体结果将表1。
表1
（二）将实施例1及对比例1制备的生防尿素进行实际使用效果检测， 肥效试验使用盆栽，每个盆中种植草莓苗，使用的底肥相同，分为3组，每组50盆，设置为实施例1组、对比例1组及空白对照组，实施例1及对比例1分别追加制备的尿素，空白对照组仅采用底肥，施加量按照3kg底土中加入10g尿素，观察各组草莓生长情况。
通过观察，实施例1组及对比例1组草莓叶色浓绿，植株健壮，生长势好，且无白粉病、叶斑病发生；空白对照组草莓生长势明显弱于实施例及对比例组，同时，发生草莓叶斑病及白粉病。
待草莓开花期，随机选取10盆草莓，进行地下部分根长、根粗统计，具体结果见表2。
表2
Claims (9)
1.一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将纯种枯草芽孢杆菌液涂布于琼脂平板上，网状划线，置于恒温培养箱内，恒温培养，培养基表面形成菌落，从平板中挑选出长势优良的单菌落，用接种环挑起移种到装有25ml液体培养基的摇甁中，置于摇床内，恒温振荡得到优良菌种液，再涂布琼脂平板上，恒温培养，从中挑选长势良好的单菌落，移种到液体培养基中，恒温培养，得到二代优良菌种，三次涂布于琼脂平板上，恒温培养，从平板中挑选出最为饱满的单菌落，移种到液体培养基中，培养,即得到三代优良菌种；
（2）将得到的三代优良菌种移植到种子培养基中，进行种子培养，即得到枯草芽孢杆菌发酵种子液；
（3）将枯草芽孢杆菌发酵种子液接种到含有发酵培养基的发酵罐，火焰保护接种后，启动搅拌机，发酵，即得到枯草芽孢杆菌发酵液；
（4）将枯草芽孢杆菌发酵液再经三效蒸发浓缩至75%，得浓缩发酵也，蒸发压力控制在-0.096Mpa,温度86℃，用高压尿素液泵将尿素液打入造粒塔顶部旋流喷射头，尿素液喷洒为细雾状，同时用高压计量泵，将浓缩发酵液打入造粒塔顶另一旋流喷雾器，喷洒出的细雾状枯草芽孢杆菌浓缩发酵液和细雾状尿素液混合，在下落100米的过程中，水分蒸发，混合的细微颗粒聚集成大颗粒，枯草芽孢杆菌被包裹在尿素颗粒中，处于休眠状态，即得到含枯草芽孢杆菌生防尿素。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）中，所述琼脂平板培养基配方：牛肉膏30g/L;蛋白胨10g/L,NaCL5g/L，琼脂15g/L；所述液体培养基配方：葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L, NaCL5g/L，牛肉膏5g/L。
3.根据权利要求1或2所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）中，所述恒温培养或恒温振荡的条件为56℃下培养或振荡24h。
4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（2）中，所述种子培养基配方：葡萄糖30g/L、大豆粉30g/L、酵母粉10g/L、(NH4)2SO4 5g/L，NaCl 5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO42g/L；所述接种量为1%。
5.根据权利要求1或4所述的生产方法，其特征在于，步骤（2）中，所述种子培养的条件为在温度56℃，摇床转速150-200r/min条件下，培养24-28h。
6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（3）中，所述发酵液培养基配方：葡萄糖30g/L，大豆粉30g/L，酵母粉10g/L, (NH4)2SO4 5g/L, NaCL5g/L，K2HPO4 3g/L、KH2PO4 2g/L。
7.根据权利要求1或6所述的生产方法，其特征在于，步骤（3）中，所述发酵培养基中的接种量为3-5%；所述搅拌机的转速为200r/min；所述发酵的温度控制65℃，PH=7，通气量2.5vvm，发酵48h。
8.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（4）中，所述尿素液的浓度为70-75%；所述尿素液中含有占其重量3-5%的魔芋甘露聚糖、1%的阿拉伯胶及1%的柠檬酸钙。
9.根据权利要求1或8所述的生产方法，其特征在于，步骤（4）中，所述浓缩发酵液占尿素液重量的0.2%-0.5%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111287854.9A CN113979803A (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111287854.9A CN113979803A (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113979803A true CN113979803A (zh) | 2022-01-28 |
Family
ID=79745753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111287854.9A Pending CN113979803A (zh) | 2021-11-02 | 2021-11-02 | 一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113979803A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102363583A (zh) * | 2011-06-27 | 2012-02-29 | 山东润银生物化工股份有限公司 | 一种含芽孢菌尿素及制备方法 |
| CN104862263A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-08-26 | 黑龙江省科学院大庆分院 | 一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法 |
| CN105907661A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-08-31 | 中国农业大学 | 一种枯草芽胞杆菌的工业发酵方法 |
| CN108277179A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-07-13 | 武汉光谷创赢生物技术开发有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法 |
| CN110313475A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-10-11 | 河南科技学院 | 一种枯草芽孢杆菌控释剂及其制备方法 |
-
2021
- 2021-11-02 CN CN202111287854.9A patent/CN113979803A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102363583A (zh) * | 2011-06-27 | 2012-02-29 | 山东润银生物化工股份有限公司 | 一种含芽孢菌尿素及制备方法 |
| CN104862263A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-08-26 | 黑龙江省科学院大庆分院 | 一种含玉米秸秆的培养基及其制备方法和培养枯草芽孢杆菌(或植物乳杆菌)的方法 |
| CN105907661A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-08-31 | 中国农业大学 | 一种枯草芽胞杆菌的工业发酵方法 |
| CN108277179A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-07-13 | 武汉光谷创赢生物技术开发有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法 |
| CN110313475A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-10-11 | 河南科技学院 | 一种枯草芽孢杆菌控释剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 乔宏兴等: "《动物生物制品安全应用关键技术 第1版》", 31 March 2017, 中原农民出版社 * |
| 何若天等: "《农用益生菌生产与应用手册 第1版》", 29 February 2016, 金盾出版社 * |
| 张芳西等: "《含酚废水的处理与利用 第1版》", 28 February 1983, 化学工业出版社 * |
| 潘春梅: "《微生态制剂生产及应用 第1版》", 30 September 2014, 中国农业大学出版社 * |
| 邱立友: "《发酵工程与设备 第1版》", 31 August 2007, 中国农业出版社 * |
| 黄甫华等: "《魔芋种植新技术 第1版》", 31 July 2011, 湖北科学技术出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107446847B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用 | |
| CN101786914B (zh) | 一种促进水稻增产的微生物肥及其制备方法和应用 | |
| CN111362751B (zh) | 一种人参专用的复合微生物抗病促生菌肥及其制备方法 | |
| CN110205271B (zh) | 地衣芽孢杆菌的深层发酵方法及其应用 | |
| CN110387340B (zh) | 一株植物乳杆菌l16及其在防治蔬菜病害上的应用 | |
| CN112342173B (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105439725A (zh) | 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用 | |
| CN111172060A (zh) | 一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌及其制备方法和应用 | |
| CN111500489A (zh) | 一株凝结芽孢杆菌及其在茶叶种植上的应用 | |
| CN115340968B (zh) | 微刺假单胞菌的新用途及其方法、微刺假单胞菌21 4.1 9.2-14及其产品 | |
| CN111670769B (zh) | 一种提高水稻抗逆性的方法 | |
| CN111235064B (zh) | 一种农用复合微生物菌剂及其应用 | |
| CN114702357B (zh) | 一种高活性复合微生物肥料及其制备方法 | |
| CN105907661A (zh) | 一种枯草芽胞杆菌的工业发酵方法 | |
| CN109355197B (zh) | 用于促进盐碱地苜蓿生长的促生菌及其微生物有机肥料 | |
| CN112574906B (zh) | 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂 | |
| CN111748496B (zh) | 侧孢短芽孢杆菌mes818在番茄培育方面的应用 | |
| CN104988094A (zh) | 一种二氯喹啉酸固态降解菌剂的制作方法 | |
| CN111466266B (zh) | 一种促进水稻生长和促进水稻铁缺乏环境下铁元素吸收的方法 | |
| CN109749940B (zh) | 一种真菌菌剂的制备方法及其产品和应用 | |
| CN109136144B (zh) | 一种人参专用复合生物菌剂及生产制备方法 | |
| CN113293112B (zh) | 复合微生物土壤修复剂及其制备方法 | |
| CN111517863B (zh) | 一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物有机肥及其制备 | |
| CN114763311A (zh) | 一种防治果蔬细菌病害的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN113979803A (zh) | 一种含枯草芽孢杆菌生防尿素的生产方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220128 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |