CN112574906B - 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂 - Google Patents

一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂 Download PDF

Info

Publication number
CN112574906B
CN112574906B CN202011367092.9A CN202011367092A CN112574906B CN 112574906 B CN112574906 B CN 112574906B CN 202011367092 A CN202011367092 A CN 202011367092A CN 112574906 B CN112574906 B CN 112574906B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound microbial
microbial agent
continuous cropping
tomato
strain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011367092.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112574906A (zh
Inventor
郭南南
蔡颖辉
杨传伦
张心青
张萧萧
蔡倩倩
马娜娜
冉新新
杨丹丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Jingbo Agrochemical Technology Co ltd
Original Assignee
Chambroad Chemical Industry Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chambroad Chemical Industry Research Institute Co Ltd filed Critical Chambroad Chemical Industry Research Institute Co Ltd
Priority to CN202011367092.9A priority Critical patent/CN112574906B/zh
Publication of CN112574906A publication Critical patent/CN112574906A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112574906B publication Critical patent/CN112574906B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G13/00—Protecting plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/05—Fruit crops, e.g. strawberries, tomatoes or cucumbers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及农业及微生物技术领域，尤其涉及一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂。本发明将YJY20‑02菌株与YJY19‑01进行复配获得复合微生物菌剂。将该复合微生物菌剂施用后，易定植，且不易产生抗药性，对番茄重茬病菌具有明显的抑菌活性，且均高于菌株单一使用的效果。不仅解决了单一生防菌株的防治不稳定、持续性弱的实际问题，而且对番茄重茬常见病菌有良好的防治效果，可快速恢复并稳定土壤中的菌群平衡，是一种防治番茄重茬常见病效率高、环境友好的生防菌株，应用前景广阔，本发明还为开发研制出有效控制番茄重茬病的生防组合制剂奠定基础。

Description

一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂
技术领域
本发明涉及农业及微生物技术领域，尤其涉及一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂。
背景技术
番茄是被列为全世界产量最高的30种农作物之一。其富含维生素类和糖类，营养丰富，食用方便，因而深受人们普遍喜爱。随着近年来我国番茄栽培面积扩大，棚室番茄因倒茬困难后引起产量低，品质差，病害多等连作障碍问题，严重制约着番茄产业的发展和经济效益的提高。
随着番茄产业不断发展，轮作难以实施，重茬障碍成为民生关注的重点课题。为了解决番茄重茬问题，常用策略包括化学农药、土壤改良、抗病品种、嫁接与轮作等，但效果均不稳定。此外，由于化学农药防治不仅会使病原菌产生抗药性，而且药剂残留造成环境污染，对于人类健康及环境安全存在严重隐患。因此，必须发展环境友好型的防病措施(如生物防治)，从而实现无公害、成本较低、不易产生抗性问题、对环境干扰小、抑制病害发展、提高食品安全等多重目标。因此，寻获一种安全高效的防治番茄连作障碍的生物防治方法极其必要。
发明内容
针对现有技术缺陷，本发明提供了一株枯草芽孢杆菌及其复合菌剂，用于防治棚室番茄重茬常见的多种病菌(如番茄枯萎病菌、番茄叶霉病菌、番茄灰叶斑病菌、番茄灰霉病菌、番茄青枯病菌)的防治有明显效果。
首先发明人对番茄常见病菌的有效防治菌株进行分离筛选，得到一株对棚室番茄重茬常见病菌具有优异防治效果的枯草芽孢杆菌YJY20-02，尤其对于番茄叶霉病菌、番茄灰霉病菌、番茄灰叶斑病菌等有显著优异的防治效果，其防治效果均在80％以上，在生物防治领域具有突出的表现。
该枯草芽孢杆菌YJY20-02，其16SrDNA序列如Seq ID No:1所示，该序列为菌株的16SrDNA的全序列。该菌株于2020年06月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20014。
由于棚室番茄重茬病害往往并不是一两种病菌导致，因此为了更好的防治棚室番茄重茬病菌，发明人长期研究后发现，将YJY20-02菌株与YJY19-01进行复配所获得的菌剂能够更好的实现棚室番茄重茬病菌的防治，具体的，所述菌剂技术方案如下：
一种防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其中包括：YJY20-02菌株和YJY19-01菌株，以有效活菌计，YJY20-02与YJY19-01菌量比3:1-1:3。
优选的，YJY20-02与YJY19-01菌量比为1:1。
优选的，上述复合微生物菌剂的有效活菌数为5.0×1010～1.0×1011cfu/g。
该复合微生物菌剂可以为液体复合微生物菌剂也可以为固体菌剂，具体的液体复合微生物菌剂的制备方法如下：将YJY20-02和YJY19-01菌株的单菌落分别接种至装有100ml液体培养基的试管中，33-37℃培养18-24h，按4-10％接种量转接入1L培养基中，33-37℃培养18-24h后转接入装有300L发酵培养基的500L发酵罐中，无菌空气的通气比为1:1.0-1:2.5，搅拌速度最高为350rpm，33-37℃发酵27-38小时，经镜检芽孢率不低于80％即可。
其中，培养基为玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：豆粕5-6.9％，玉米粉4-6％，硫酸铵0.02-0.1％，玉米淀粉0.4-0.8％，硫酸锰0.03-0.05％，碳酸钙0.1-0.4％，玉米浆干粉0.1-0.5％，其余为水，pH7.0-7.5。
固体复合微生物菌剂的制备方法可以采用现有常规技术即可，具体可以为：将所制得的液体复合微生物菌剂按3:1(v/v)的比例浓缩后进行喷雾干燥，保护剂(麦芽糊精)浓度10-20％，喷雾干燥工艺中各条件的最佳参数为：出口温度90℃，入口温度120℃，入料速度720mL/h，雾化口径1mm、雾化压力0.1MPa、热风流量30M3/h，获得两者的有效活菌数均≥5.0×1010cfu/g，菌粉的含水率控制在10％以下。
扩大培养完成后的两株菌的菌液分别进行浓缩及喷雾干燥，然后按比例混合即可。
菌剂的使用方法：所述复合微生物菌剂的施用方法为灌根或者地面喷施；用量为0.01～0.03g/株，每15天施用一次，共施用两次。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明所述的复合微生物菌剂，两种枯草芽孢杆菌易培养，易定植，不易产生抗药性，菌株之间相互影响、相互促进，对番茄重茬病菌具有明显的抑菌活性，均高于菌株单一使用的效果，抑菌谱广，对多种作物枯萎病病菌有高达75％以上的抑制效果，还对其他26种真菌性病原菌和2种细菌性病原菌具有明显抑制效果。
(2)发明所述的复合微生物菌剂，不仅解决了单一生防菌株的防治不稳定、持续性弱的实际问题，而且对番茄重茬常见病菌有良好的防治效果，且可快速恢复并稳定土壤中的菌群平衡，施用后能有效控制番茄重茬病的发生。
(3)本发明所述的复合微生物菌剂，属于生物制剂，避免了化学方法污染等弊端不会对环境和生态造成污染，有利于番茄的绿色无公害生产。
生物保藏说明
1.YJY19-01菌株：
保藏时间：2019年03月19日；
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心；
保藏编号：CGMCC No.17357；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；
分类命名:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；
2.YJY20-02菌株：
保藏时间：2020年06月03日；
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心；
保藏编号：CGMCC No.20014；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；
分类命名:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
附图说明
图1实验例2中复合微生物菌剂对番茄枯萎病菌的平板对峙实验效果图；
图2实验例2中复合微生物菌剂对番茄灰叶斑病菌的平板对峙实验效果图；
图3实验例2中复合微生物菌剂对番茄灰霉病菌的平板对峙实验效果图；
图4实验例2中复合微生物菌剂对番茄叶霉病菌的抑菌圈实验效果图；
图5实验例2中复合微生物菌剂对番茄青枯病菌的抑菌圈实验效果图；
图6实施例2中复合微生物菌剂与YJY19-01菌株单一菌剂对番茄灰霉病菌抑制效果对比图；
图7实施例2中复合微生物菌剂与YJY19-01菌株单一菌剂对番茄叶霉病菌抑制效果对比图。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。在下面的详细描述中，对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
本申请中所涉及的番茄病原菌均为常规菌种，均由发明人采集自相应番茄病株，并进行常规培养所得。
实施例1复合微生物菌剂的制备
将YJY19-01菌株与YJY20-02菌株分别进行发酵扩大培养，培养条件为：无菌空气的通气比为1:1.0，搅拌速度为250rpm，培养温度为37℃，发酵周期为30h，经镜检芽孢率不低于80％。
其中，培养基为玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：豆粕6.86％，玉米粉5.5％，硫酸铵0.04％，玉米淀粉0.46％，硫酸锰0.05％，碳酸钙0.3％，玉米浆干粉0.17％，其余为水，pH7.2。
A、扩大培养完成后的菌液按照有效活菌量1:1进行混合，即得抗重茬常见病菌的液体复合微生物菌剂，有效活菌量≥9.0×109cfu/mL。
B、扩大培养完成后的两株菌的菌液分别按3:1(v/v)的比例浓缩后进行喷雾干燥，喷雾干燥工艺中各条件的最佳参数为：出口温度90℃，入口温度120℃，以麦芽糊精作为保护剂，浓度为10％，入料速度720mL/h，雾化口径1mm、雾化压力0.1MPa、热风流量30M3/h，获得YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂，两者的有效活菌数均≥5.0×1010cfu/g。
将上述得到的YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂按照有效活菌数1:1的比例混合，即得到抗重茬常见病菌的固体复合微生物菌剂。
实施例2复合微生物菌剂的制备
将YJY19-01菌株与YJY20-02菌株分别进行发酵扩大培养，培养条件为：无菌空气的通气比为1:1.5，搅拌速度为200rpm，培养温度为35℃，发酵周期为33h，经镜检芽孢率不低于80％。
其中，培养基为玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：豆粕6.5％，玉米粉5％，硫酸铵0.1％，玉米淀粉0.55％，硫酸锰0.034％，碳酸钙0.1％，玉米浆干粉0.3％，其余为水，pH7.0。
A、扩大培养完成后的菌液按照有效活菌量1:1进行混合，即得抗重茬常见病菌的液体复合微生物菌剂，有效活菌量≥9.0×109cfu/mL。
B、扩大培养完成后的两株菌的菌液分别按3:1(v/v)的比例浓缩后进行喷雾干燥，喷雾干燥工艺中各条件的最佳参数为：出口温度90℃，入口温度120℃，以麦芽糊精作为保护剂，浓度为15％，入料速度720mL/h，雾化口径1mm、雾化压力0.1MPa、热风流量30M3/h，获得YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂，两者的有效活菌数均≥5.0×1010cfu/g。
将上述得到的YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂按照有效活菌数1:2的比例混合，即得到抗重茬常见病菌的固体复合微生物菌剂。
实施例3复合微生物菌剂的制备
将YJY19-01菌株与YJY20-02菌株分别进行发酵扩大培养，培养条件为：无菌空气的通气比为1:2.0，搅拌速度为300rpm，培养温度为33℃，发酵周期为35h，经镜检芽孢率不低于80％。
其中，培养基为玉米粉黄豆粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：豆粕6％，玉米粉4.5％，硫酸铵0.08％，玉米淀粉0.8％，硫酸锰0.04％，碳酸钙0.25％，玉米浆干粉0.45％，其余为水，pH7.4。
A、扩大培养完成后的菌液按照有效活菌量1:1进行混合，即得抗重茬常见病菌的液体复合微生物菌剂，有效活菌量≥9.0×109cfu/mL。
B、扩大培养完成后的两株菌的菌液分别按3:1(v/v)的比例浓缩后进行喷雾干燥，喷雾干燥工艺中各条件的最佳参数为：出口温度90℃，入口温度120℃，以麦芽糊精作为保护剂，浓度为20％，入料速度720mL/h，雾化口径1mm、雾化压力0.1MPa、热风流量30M3/h，获得YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂，两者的有效活菌数均≥5.0×1010cfu/g。
将上述得到的YJY19-01菌株、YJY20-02菌株的固体菌剂按照有效活菌数2:1的比例混合，即得到抗重茬常见病菌的固体复合微生物菌剂。
实验例1 YJY19-01菌株、YJY20-02菌株根际定植实验
(1)菌液的制备：取单菌落接种于LB液体培养基中，于37℃振荡培养24h，将菌悬液稀释以避免培养基剩余过多营养导致烧苗现象发生。
(2)盆栽实验与取样：选取2-4真叶期番茄秧苗进行实验，将制备的菌液洒于番茄秧苗根部土壤，以未洒菌液秧苗根际土壤做对照，每个处理6个重复，稳定5-7d，取根际土样进行稀释涂布，跟踪四周，测定根际菌数，土壤菌落数稳定性好，由初始的106-107cfu/g到后期稳定在108cfu/g，定植能力相对较强。
实验例2复合微生物菌剂对番茄病菌的抑制
(1)复合微生物菌剂对番茄病菌的抑制效果(复合微生物菌剂采用实施例1的固体复合微生物菌剂)
番茄枯萎病菌、番茄灰叶斑病菌、番茄灰霉病菌采用平板对峙法：
将病原菌菌丝块接种在新的PDA培养基(200g马铃薯、20g葡萄糖、15g琼脂和1000mL蒸馏水，pH6.5-7.0)平板的中心，在其两侧距中心20mm等距离处接种复合微生物菌剂(复合微生物菌剂采用无菌水稀释100倍)，设置空白对照。28℃恒温培养，待对照平板病原菌菌落长满时调查各处理病原菌生长直径，计算抑制率，数据及效果见表1和图1，图2，图3。
表1本发明所述的抗重茬复合微生物菌剂对番茄三种真菌性病菌的抑制率
Figure BDA0002802405120000061
注：抑制率＝[(对照病原菌直径-处理病原菌直径)/对照病原菌直径]×100％。
结果表明，本发明所述复合微生物菌剂对番茄枯萎病菌、番茄灰叶斑病菌、番茄灰霉病菌均有明显抑制作用，抑制率在75％以上。
番茄叶霉病菌与番茄青枯病菌采用抑菌圈法：
将番茄叶霉病菌孢子液与番茄青枯病菌的菌液均匀涂布于营养琼脂平板上，取平板中两点进行打孔，向孔内接种本发明所述的复合微生物菌剂(复合微生物菌剂无菌水稀释500倍)，设置空白对照，番茄叶霉病菌平板与番茄青枯病菌平板分别置于28℃与37℃恒温培养，待对照平板病原菌菌落长满时，观察有无抑菌圈。若出现抑菌圈，则视为具有拮抗作用，若未出现抑菌圈，则表示没有拮抗作用。
结果表明，本发明所述抗重茬复合微生物菌剂对番茄叶霉与番茄青枯病菌均有明显抑制作用，详见图4和图5。
(2)复合微生物菌剂与YJY19-01菌株单一菌剂对病菌抑制效果对比
YJY19-01菌株对枯萎与青枯病菌具有非常明显的拮抗效果，而对其他的病菌并非为最佳拮抗菌株，因此将YJY19-01与复合菌进行拮抗效果对比，经过YJY20-02的复合，对番茄灰霉与叶霉这两种病菌的拮抗效果有不同程度的提高，结果见图6和图7。
实验例3抗重茬复合微生物菌剂在温室盆栽条件下的生防效果
一、番茄枯萎病菌室内盆栽防效实验
番茄枯萎病病菌菌液：将活化在PDA培养基上的番茄枯萎病病菌用无菌刀片刮下菌丝体到液体PDA培养基上培养7天(170r/min，28℃)，用灭菌的纱布过滤，即得到番茄枯萎病病原菌孢子液。
实验处理：
实验共分为5组，每组处理10株，除以下处理外，各组均采取相同的常规管理，实验结果见表2。
各组处理如下：
复合微生物菌剂组：在2-4真叶期番茄植株上喷洒复合微生物菌剂，菌剂均稀释至有效菌含量为107cfu/mL，喷雾标准是每片叶子上有雾状液滴分布，以不掉下为准。处理24h后，在每株幼苗根际土壤中接种10mL浓度为1×106cfu/mL的病原菌孢子液。将番茄植株置于温度为28℃，光照为12h/12h温室条件下培养，跟踪观察番茄叶片的发病情况并计算防效。
YJY19-01菌剂组：在番茄植株上喷洒YJY19-01菌剂，其他处理同复合微生物菌剂组。
YJY20-02菌剂组：在番茄植株上喷洒YJY20-02菌剂，其他处理同复合微生物菌剂组。
药剂对照组：在每株番茄植株幼苗根际土壤中接种10mL浓度为1×106cfu/mL的病原菌孢子液，24h后在番茄植株上喷洒稀释500倍的50％多菌灵，喷雾标准是每片叶子上有雾状液滴分布，以不掉下为准。
空白对照组：同种方式接种等量病原菌孢子液，并采用等量清水进行喷雾。
番茄枯萎病病情分级标准如下：
0级：无症状；
1级：1-2片真叶变黄或真叶萎焉下垂；
2级：3-4片真叶变黄或萎焉下垂；
3级：5片-6片真叶变黄或真叶萎焉下垂；
4级：全株严重萎焉，以致枯死。
病情指数＝∑(各级病株数×代表级值)/(调查总株数×最高代表级值)×100％；
防效＝(1-试验区病情指数/对照区病情指数)×100％。
表2本发明所述复合微生物菌剂在温室条件下对番茄枯萎的防治效果(28d)
Figure BDA0002802405120000081
二、番茄灰叶斑病菌室内盆栽防效实验
番茄灰叶斑病菌孢子液制备与实验处理方法同番茄枯萎病菌室内盆栽防效实验，病原菌孢子液为番茄灰叶斑病菌孢子液，结果统计见表3。
番茄灰叶斑的分级标准：
0级，植株正常，叶片上无病斑；
1级，植株叶片发病率不超过10％；
3级，植株叶片发病率超过10％且不超过40％；
5级，植株叶片发病率超过40％且不超过60％；
7级，植株叶片发病率超过60％且不超过80％；
9级，植株叶片发病率超过80％。
病情指数＝∑(各级病株数×代表级值)/(调查总株数×最高代表级值)×100％；
防效＝(1－试验区病情指数/对照区病情指数)×100％。
表3本发明所述复合微生物菌剂在温室条件下对番茄灰叶斑的防治效果(移栽42d)
Figure BDA0002802405120000091
三、番茄灰霉病菌室内盆栽防效实验
番茄灰霉病菌孢子液制备与实验处理方法同番茄枯萎病菌室内盆栽防效实验，病原菌孢子液为番茄灰霉病菌孢子液，结果统计见表4。
番茄灰霉病的分级标准(每个处理共调查120片叶)：
0级：无病斑；
1级：病斑面积占整个叶面积的5％以下；
3级：病斑面积占整个叶面积的5％-15％；
5级：病斑面积占整个叶面积的15％-25％；
7级：病斑面积占整个叶面积的25％-50％；
9级：病斑面积占整个叶面积的50％以上。
病情指数＝∑(各级病叶数×各级代表值)/(调查总叶数×最高级代表值)×100％
防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100％
表4本发明所述复合微生物菌剂在温室条件下对番茄灰霉的防治效果(移栽21d)
Figure BDA0002802405120000092
Figure BDA0002802405120000101
四、番茄叶霉病菌室内盆栽防效实验
番茄叶霉病菌孢子液制备与实验处理方法同番茄枯萎病菌室内盆栽防效实验，病原菌孢子液为番茄叶霉病菌孢子液，结果统计见表5。
番茄叶霉病的分级标准(以叶片为单位)：
0级，叶片上无病斑；
1级，病斑面积占整张叶片面积的5％以下；
3级，病斑面积占整张叶片面积的6％～10％；
5级，病斑面积占整张叶片面积的11％～20％；
7级，病斑面积占整张叶片面积的21％～50％；
9级，病斑面积占整张叶片面积的50％以上。
病情指数＝∑(各级病叶数×各级代表值)/(调查总叶数×最高级代表值)×100％
防效＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100％
表5本发明所述复合微生物菌剂在温室条件下对番茄叶霉的防治效果(移栽42d)
Figure BDA0002802405120000102
五、番茄青枯病菌室内盆栽防效实验
番茄青枯病菌菌液制备与实验处理方法同番茄枯萎病菌室内盆栽防效实验，病原菌孢子液改为番茄青枯病菌液，浓度为1×108cfu/mL，结果统计见表6。
番茄青枯病的分级标准为：
0级，植株正常；
1级，植株叶片萎蔫程度不超过25％；
2级，植株叶片萎蔫程度超过25％且不超过50％；
3级，植株叶片萎蔫程度超过50％且不超过75％；
4级，植株叶片萎蔫程度超过75％。
病情指数＝∑(病级数×该病级植株数)/(最大病级数×植株总株数)×100％
防效＝(对照组病情指数－处理组病情指数)/对照病情指数×100％
表6本发明所述复合微生物菌剂在温室条件下对番茄青枯的防治效果(移栽28d)
Figure BDA0002802405120000111
实验例4复合微生物菌剂对温室大棚番茄重茬病的防效试验
在滨州店子某农户的番茄大棚进行了田间试验。开始试验时，所有植株尚未发病，试验设置每小区两行，三次重复，随机排列。试验共分为两组：复合微生物菌剂组与空白对照组，病原菌与复合微生物菌剂的接种方式与接种量同实施例3，空白对照组用等量清水接种作为对照。待空白对照区番茄植株发病较重时进行病情调查并计算防效。接种病原菌14天后，番茄枯萎病、番茄叶霉病、番茄灰霉病、番茄灰叶斑病、番茄青枯病开始不同程度的发病，统计各组发病率并计算防效，分别见表7-11。
表7本发明所述复合微生物菌剂在温室大棚对番茄枯萎病的防治效果
Figure BDA0002802405120000112
表8本发明所述复合微生物菌剂在温室大棚对番茄叶霉病的防治效果
Figure BDA0002802405120000113
Figure BDA0002802405120000121
表9本发明所述复合微生物菌剂在温室大棚对番茄灰霉病的防治效果
Figure BDA0002802405120000122
表10本发明所述复合微生物菌剂在温室大棚对番茄灰叶斑病的防治效果
Figure BDA0002802405120000123
表11本发明所述复合微生物菌剂在温室大棚对番茄青枯病的防治效果
Figure BDA0002802405120000124
实验例5田间试验
(一)试验处理
复合微生物菌剂组、YJY19-01菌剂组、YJY20-02菌剂组：分别为实施例1制备的固体复合微生物菌剂、YJY19-01固体菌剂与YJY20-02固体菌剂，用水稀释20000倍，含菌体均在106cfu/mL以上。
药剂对照组：50％多菌灵，用水稀释500倍。
空白对照组：清水。
(二)试验方法
试验在山东省滨州市博兴县店子某农户的番茄大棚内进行。土壤为砂壤土，已经连续种植番茄5年，秋茬移栽番茄，死苗病发生严重。试验共设5个处理，采用菌剂或药剂进行灌根处理，400mL/株，空白对照以等量清水代替。每个处理3次重复，共15个小区，每个小区面积为20m2，随机排列。试验地两边设保护行。间隔15d灌根1次，共2次。其他田间管理措施同常规。当空白对照组死苗情况超过50％时，分别调查各处理组的死苗数，计算发病率、防治效果，并统计此年度番茄产量，结果见表12。
发病率＝死苗数/定植苗数×100％
防治效果＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100％
表12本发明所述复合微生物菌剂对番茄的防病效果与产量
Figure BDA0002802405120000131
以上所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用条件的等效替换以及辅助部件的增加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
序列表
<110> 黄河三角洲京博化工研究院有限公司
<120> 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂
<141> 2020-11-27
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1417
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
<400> 1
cggctggctc cttacggtta cctcaccgac ttcgggtgtt gcaaactctc gtggtgtgac 60
gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcggc atgctgatcc gcgattacta 120
gcgattccgg cttcatgtag gcgagttgca gcctacaatc cgaactgaga acggttttat 180
gagattagct ccacctcgcg gtctcgcgac tctttgtacc gtccattgta gcacgtgtgt 240
agcccaggtc ataaggggca tgatgatttg acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca 300
ccggcagtca ccttagagtg cccaactgaa tgctggcaac taagatcaag ggttgcgctc 360
gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac gacaaccatg caccacctgt 420
cactctgtcc cccgaagggg aacgctctat ctctagagtt gtcagaggat gtcaagacct 480
ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540
cgtcaattcc tttgagtttc agccttgcgg ccgtactccc caggcggagt gcttaatgcg 600
ttagctgcag cactaagggg cggaaacccc ctaacactta gcactcatcg tttacggcgt 660
ggactaccag ggtatctaat cctgtttgct ccccacgctt tcgcgcctca gcgtcagtta 720
cagaccagaa agccgccttc gccactggtg ttcctccaca tctctacgca tttcaccgct 780
acacgtggaa ttccgctttc ctcttctgca ctcaagttcc ccagtttcca atgaccctcc 840
acggttgagc cgtgggcttt cacatcagac ttaaggaacc gcctgcgcgc gctttacgcc 900
caataattcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960
ccgtggcttt ctggttaggt accgtcaagg taccgcccta ttcgaacggt acttgttctt 1020
ccctaacaac agagctttac gacccgaagg ccttcatcgc tcacgcggcg ttgctccgtc 1080
agactttcgt ccattgcgga agattcccta ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg 1140
tctcagtccc agtgtggccg atcaccctct caggtcggct acgcatcgtc gccttggtga 1200
gccgttacct caccaactag ctaatgcgcc gcgggcccat ctgtaagtga tagccgaagc 1260
catctttcaa ccaaggacca tgaggtcctc ggtgttatcc ggtattagct ccggtttccc 1320
gaagttatcc cagtcttaca ggcaggttgc ccacgtgtta ctcacccgtc cgccgctgac 1380
ttcagggagc aagctcccat ccgtccgctc gactgca 1417

Claims (7)

1.一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株，其特征在于，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YJY20-02，于2020年06月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20014。
2.一种防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其特征在于，该菌剂包括菌株YJY20-02与菌株YJY19-01，所述的菌株YJY20-02为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏编号为CGMCC No.20014；所述的菌株YJY19-01为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），编号为CGMCC No.17357。
3.根据权利要求2所述的防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其特征在于，以有效活菌计，YJY20-02与YJY19-01菌量比3:1-1:3。
4.根据权利要求3所述的防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其特征在于，以有效活菌计，YJY20-02与YJY19-01菌量比为1:1。
5.根据权利要求2所述的防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其特征在于，复合微生物菌剂的有效活菌数为5.0×1010～1.0×1011cfu/g。
6.根据权利要求2所述的防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂，其特征在于，该复合微生物菌剂为液体复合微生物菌剂或固体复合微生物菌剂。
7.权利要求2所述的防治棚室番茄重茬常见病害的复合微生物菌剂的使用方法，其特征在于，所述复合微生物菌剂的施用方法为灌根或者地面喷施；用量为0.01～0.03g/株，每15天施用一次，共两次。
CN202011367092.9A 2020-11-27 2020-11-27 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂 Active CN112574906B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011367092.9A CN112574906B (zh) 2020-11-27 2020-11-27 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011367092.9A CN112574906B (zh) 2020-11-27 2020-11-27 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112574906A CN112574906A (zh) 2021-03-30
CN112574906B true CN112574906B (zh) 2022-06-14

Family

ID=75126495

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011367092.9A Active CN112574906B (zh) 2020-11-27 2020-11-27 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112574906B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111518185B (zh) * 2020-05-18 2022-02-08 山东农业大学 调控番茄果实品质的转录因子及其应用
CN114145313B (zh) * 2021-12-31 2022-11-04 新疆天物生态环保股份有限公司 一种防治重茬病害的复合微生态制剂及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105296377A (zh) * 2014-07-31 2016-02-03 北京惠民达科技发展中心 一种地衣芽孢杆菌及微生物菌剂和它们在防治植物重茬病中的应用
CN108977374A (zh) * 2018-07-06 2018-12-11 东北农业大学 防治番茄灰霉病及叶霉病的复配菌剂组合物
CN109156477A (zh) * 2018-09-14 2019-01-08 河北省农林科学院植物保护研究所 枯草芽孢杆菌bab-1在防治番茄叶霉病上的应用
CN110079483A (zh) * 2019-05-28 2019-08-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105296377A (zh) * 2014-07-31 2016-02-03 北京惠民达科技发展中心 一种地衣芽孢杆菌及微生物菌剂和它们在防治植物重茬病中的应用
CN108977374A (zh) * 2018-07-06 2018-12-11 东北农业大学 防治番茄灰霉病及叶霉病的复配菌剂组合物
CN109156477A (zh) * 2018-09-14 2019-01-08 河北省农林科学院植物保护研究所 枯草芽孢杆菌bab-1在防治番茄叶霉病上的应用
CN110079483A (zh) * 2019-05-28 2019-08-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
微生物杀菌剂对番茄重茬病的防治效果及其对番茄产量的影响;贾海民等;《河北农业科学》;20111231;第15卷(第05期);第46-47页+第73页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112574906A (zh) 2021-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107446847B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用
CN101696390B (zh) 连作黄瓜、西瓜枯萎病的生物防治菌株及其微生物有机肥料
CN104745483B (zh) 一种宛氏拟青霉菌株sj1及其应用
CN114085793B (zh) 一种防治植物真菌病害的皮氏类芽孢杆菌菌剂的生产方法及其应用
CN111944716B (zh) 一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN110387340B (zh) 一株植物乳杆菌l16及其在防治蔬菜病害上的应用
CN112574906B (zh) 一种防治棚室番茄重茬常见病害的菌株及其复合微生物菌剂
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN105439725A (zh) 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用
CN111500489A (zh) 一株凝结芽孢杆菌及其在茶叶种植上的应用
CN105462881A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的多粘类芽孢杆菌及其应用
CN107099475B (zh) 一株甲基营养型芽孢杆菌及其菌剂的制备和应用
CN113832060B (zh) 一种抗重茬微生物菌剂及其在农业生产中的应用
CN109749940B (zh) 一种真菌菌剂的制备方法及其产品和应用
CN109957535B (zh) 简单芽胞杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物肥及应用
CN103951483A (zh) 一种防治农作物土传病害的生防菌肥及其生产工艺和应用
CN114149935B (zh) 一种产酶溶杆菌及其应用
CN109456900B (zh) 一种复合生物制剂及其用途
CN113293112B (zh) 复合微生物土壤修复剂及其制备方法
CN114763311A (zh) 一种防治果蔬细菌病害的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN114634878A (zh) 一种复合微生物制剂及其在防治根结线虫中的应用
CN113930371A (zh) 一种使用多粘类芽孢杆菌af01促进蔬菜生长和抗病的方法
CN111808778A (zh) 一株防治黄萎病的韦氏芽孢杆菌及其培养方法、菌剂及其制备方法和应用
CN104988100A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌cd-17菌株及用途
CN108865947A (zh) 一株巨大芽孢杆菌及其在防治甘薯根腐病中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240527

Address after: 256500 Boxing Economic Development Zone, Shandong, Binzhou

Patentee after: Shandong Jingbo Agrochemical Technology Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: 256500 Boxing Economic Development Zone, Shandong, Binzhou

Patentee before: CHAMBROAD CHEMICAL INDUSTRY RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd.

Country or region before: China