CN109498744A - 一种复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法，包括以下步骤：（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌分别扩大培养，混合得到复合菌种；（2）发酵中药培养基的制备：制备含有复方杜仲叶散的培养基；（3）发酵：在发酵中药培养基中接种复合菌种，好氧发酵，当pH值接近5时，即为发酵终点。本发明还提供相应的发酵复方杜仲叶散。本发明的发酵复方杜仲叶散是一种无药残、防病促生长效果极佳的中药微生态制剂。由于复合菌和中药的协同作用，因此复合菌发酵复方杜仲叶散生产的添加剂其应用效果远远超过其它同类产品。

Description

一种复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法
技术领域
本发明涉及一种微生物繁殖过程中添加中药的发酵方法，具体涉及一种利用复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法。
背景技术
复方杜仲叶散是本申请人研制的一种动物饲料添加剂，由黄芪、党参、黄精、灵芝、金银花、板蓝根、杜仲叶组成，这几种中药都是植物性药材，富含纤维素，尤其是黄芪，主要成分黄芪多糖均镶嵌在纤维素中，有部分黄芪多糖和纤维形成了结合态，极难溶出，杜仲内含有大量的杜仲胶，杜仲胶难于溶解，普通中药的炮制是将杜仲皮炒制，将杜仲胶降解一部分，然而杜仲胶溶出率依然很低，严重影响复方杜仲叶散的药效。
中药发酵是用现代生物工程技术与传统的中药制剂方法相结合，使中药生产现代化，弥补传统制法的不足。将生物菌发酵技术应用到中药应用中，分解纤维素，让有效成分易于溶出，从而大幅提高了中药的药效和生物利用度。另外，应用益生菌发酵生产的中药制剂中，不仅含有中药有效作用的生理活性成分，而且还富含有菌种和基质在发酵制备过程中产生的多种抗菌肽、丰富的有机酸及多种有益的氨基酸。这些成分组分合理，极易被机体吸收和利用。所以采用本工艺生产的中药制剂，表现出了极佳的应用效果，更适应市场需要。
发明内容
本发明的目的旨在解决上述技术问题的不足，提供一种微生物发酵中药的技术，利用复合菌种发酵中药生产发酵中药制剂，生产出一种效果极佳的中药微生物制剂，用于制备动物饲料添加剂。
本发明提供一种复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法，包括以下步骤：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别进行扩大培养，按照下述体积百分比混合：酿酒酵母5-95％、枯草芽孢杆菌5-95％、黄芪中间根瘤菌5-95％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：制备含有复方杜仲叶散的发酵中药培养基；所述复方杜仲叶散中各组方按重量计为：黄芪20-50份、党参20-50份、黄精20-50份、金银花20-50份、杜仲叶20-50份、板蓝根20-50份、灵芝20-50份；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为1-5%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间48～72小时，当pH值接近5时，即为发酵终点。
上述各菌种均从中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）引进，确保了各菌种的存活和质量。
具体的信息为：酿酒酵母(CGMCC保藏号为2.3854)；
枯草芽孢杆菌(CGMCC保藏号为1.8955)；
黄芪中间根瘤菌(CGMCC保藏号为1.15575)。
上述各个菌种的作用为：酿酒酵母的菌体维生素、蛋白质含量高，易被动物吸收，同时酿酒酵母发酵植物后可以改善适口性。枯草芽孢杆菌进入动物体内，能100%到达大小肠，抑制致病菌，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长。提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力。合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体（人体）内的消化酶类一同发挥作用。黄芪中间根瘤菌在繁殖过程中可以产生大量的纤维素酶，分解纤维素，将纤维素转化为具有提高机体免疫力的黄芪多糖类似物。
枯草芽孢杆菌清除体内病菌抑制病毒繁殖，黄芪中间根瘤菌提升机体免疫力，酿酒酵母改善适口性，增加动物消化吸收能力。三者联合发酵起到了协同作用，保障动物健康生长。
作为优选，步骤（1）中，所述扩大培养后，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g。
作为优选，步骤（2）中，所述复方杜仲叶散中各组方按重量计为：黄芪50份、党参50份、黄精50份、金银花50份、杜仲叶50份、板蓝根50份、灵芝50份。
作为优选，步骤（2）中，发酵中药培养基中，按重量百分比计各组分用量为：红糖3-5%、香菇粉2-4%、豆粕5-10%、氯化钠0.4-0.6%、黄腐酸0.4-0.6%、复方杜仲叶散40-50%，余量为水，pH值自然。
在培养基中，各组分的作用分别为：红糖为发酵提供碳源和微量元素；香菇粉为发酵提供钾源，同时促进微生物发酵；豆粕和黄腐酸为发酵提供氮源；氯化钠和水是发酵的必要物质；复方杜仲叶散参与发酵，形成更多的产物。
作为优选，步骤（2）中，发酵中药培养基中，按重量百分比计各组分用量为：红糖4%、香菇粉3%、豆粕8%、氯化钠0.5%、黄腐酸0.5%、复方杜仲叶散45%，余量为水。
作为优选，步骤（3）中，接种量为4%。
本发明还提供一种发酵复方杜仲叶散，是应用上述的方法制备得到的。
本发明还提供上述发酵复方杜仲叶散在制备防病促生长的动物饲料添加剂或药物中的应用。
本发明所述的中药组分各药物的功能为：
黄芪味甘性温、补气升阳，其活性成分黄芪多糖可提高机体免疫力。
党参味甘，平，归肺、脾经。有补中益气，健脾益肺的功效。
黄精性平、味甘,入脾、肾、肺经,具有补肾益精、滋阴润燥等功效。
灵芝性温，味淡，滋补强壮。用于健脑、消炎、利尿、益肾。
金银花自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。
板蓝根味苦、性寒，具有清热解毒，凉血利咽之功效。常用于温疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿。
杜仲叶味甘，性温。有补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎的功效。现代研究杜仲具有清除体内垃圾，加强人体细胞物质代谢，防止肌肉骨骼老化，平衡人体血压，分解体内胆固醇，降低体内脂肪，恢复血管弹性，利尿清热，广谱抗菌，兴奋中枢神经，提高白血球药理作用。
诸药配伍，协同作用,共同达到抗菌抗病毒增强机体免疫力的功效。
本发明的发酵复方杜仲叶散，是一种无药残、防病促生长效果极佳的中药微生态制剂。由于复合菌和中药的协同作用，因此复合菌发酵复方杜仲叶散生产的添加剂其应用效果远远超过其它同类产品。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪20-50份、党参20-50份、黄精20-50份、金银花20-50份、杜仲叶20-50份、板蓝根20-50份、灵芝20-50份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，扩大培养后，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母5-90％、枯草芽孢杆菌5-90％、黄芪中间根瘤菌5-90％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖3-5%、香菇粉2-4%、豆粕5-10%、氯化钠0.4-0.6%、黄腐酸0.4-0.6%、复方杜仲叶散40-50%，余量为水，混合均匀，pH值自然；
复方杜仲叶散中各组分优选为粉碎为10-20目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为1-5%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间48～72小时，当pH值接近5时，即为发酵终点。
实施例1
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪50份、党参50份、黄精50份、金银花50份、杜仲叶50份、板蓝根50份、灵芝50份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，各菌种的菌落总数为酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母33％、枯草芽孢杆菌33％、黄芪中间根瘤菌34％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖4%、香菇粉3%、豆粕8%、氯化钠0.5%、黄腐酸0.5%、复方杜仲叶散45%，余量为水，pH值自然；复方杜仲叶散中各组分为粉碎为20目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为4%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间48小时，当pH值接近5时，即为发酵终点，得到发酵复方杜仲叶散。
实施例2
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪30份、党参40份、黄精20份、金银花50份、杜仲叶50份、板蓝根30份、灵芝20份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母20％、枯草芽孢杆菌30％、黄芪中间根瘤菌50％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖3%、香菇粉4%、豆粕10%、氯化钠0.4%、黄腐酸0.4%、复方杜仲叶散40%，余量为水，pH值自然；复方杜仲叶散中各组分为粉碎为20目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为3%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间60小时，当pH值接近5时，即为发酵终点，得到发酵复方杜仲叶散。
实施例3
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪30份、党参30份、黄精35份、金银花25份、杜仲叶25份、板蓝根40份、灵芝20份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母5％、枯草芽孢杆菌5％、黄芪中间根瘤菌90％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖5%、香菇粉2%、豆粕5%、氯化钠0.6%、黄腐酸0.6%、复方杜仲叶散50%，余量为水，pH值自然；复方杜仲叶散中各组分为粉碎为15目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为5%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间72小时，当pH值接近5时，即为发酵终点，得到发酵复方杜仲叶散。
实施例4
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪40份、党参25份、黄精30份、金银花50份、杜仲叶20份、板蓝根30份、灵芝30份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母50％、枯草芽孢杆菌40％、黄芪中间根瘤菌10％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖4%、香菇粉2.5%、豆粕6%、氯化钠0.4%、黄腐酸0.5%、复方杜仲叶散48%，余量为水，pH值自然；复方杜仲叶散中各组分为粉碎为15目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为1%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间55小时，当pH值接近5时，即为发酵终点，得到发酵复方杜仲叶散。
实施例5
复方杜仲叶散中各组方按重量份计为：黄芪20份、党参40份、黄精20份、金银花30份、杜仲叶40份、板蓝根50份、灵芝20份。
本发明的复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法的步骤如下：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别从斜面接入不同的三角瓶中，振荡培养48小时进行扩大培养，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g；按照下述体积百分比混合：酿酒酵母70％、枯草芽孢杆菌15％、黄芪中间根瘤菌15％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：按重量百分比计为：
红糖5%、香菇粉3%、豆粕7%、氯化钠0.5%、黄腐酸0.5%、复方杜仲叶散43%，余量为水，pH值自然；复方杜仲叶散中各组分为粉碎为15目的粉末；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为1%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间70小时，当pH值接近5时，即为发酵终点，得到发酵复方杜仲叶散。
实施例6
本发明的发酵复方杜仲叶散的应用试验
实验地点：大禹猪场
实验方法：
选取30头胎次、体重相近的10千克左右的三元杂交猪，随机分成2组，以圈为单位进行饲养，试验期为115天。以玉米-豆粕为基础日粮，试验组在基础日粮中添加实施例1制备的发酵复方杜仲叶散，对照组基础日粮和试验组一致，添加实施例1中未发酵的复方杜仲叶散。各猪只饲养管理条件一致，自由采食和饮水，按猪场常规程序进行驱虫和免疫。
1、对育肥猪生长性能的影响
试验开始和结束时以圈为单位分别测定猪体重，计算平均日增重，并每天记录猪采食量，进而计算料肉比。结果如表1所示。
表1 对育肥猪生长性能的影响
由表1可知，试验组能显著提高育肥猪的生长性能，明显优于对照组。
2、对血清生化指标的影响
在试验结束时，选取试验组和对照组屠宰前每个重复随机选取1头猪，前腔静脉采血10mL，室温下倾斜放置30min，3600r/min离心10min，分离血清于-20℃保存，用分析仪及试剂盒测定血清尿素氮（SUN）含量。结果如表2所示。
表2对血清生化指标的影响
试验组 对照组
SUN/（mmol/L） 3.28±0.96<sup>a</sup> 4.03±0.68<sup>b</sup>
由表2可知，试验组中血清尿素氮（SUN）显著低于对照组，说明试验组大幅提升了氮的利用率，降低了氮的排放量，将饲料中的氮转化为蛋白质，提高了经济效益。
实施例7
酿酒酵母发酵黄芪提升黄芪多糖含量试验
1 实验材料
1.1 药品与试剂
黄芪(产地内蒙)，经鉴定为豆科植物蒙古黄芪，作为发酵药材时粉碎成65目粉末。葡萄糖标准品购自中国食品药品检定研究院，批号：110833—201704；苯酚、无水乙醇、浓硫酸均为分析纯；酿酒酵母(CGMCC保藏号为2.3854)；豆芽汁培养基。
1.2 实验仪器
自动电热高压蒸汽灭菌器；DHP一9162型电热恒温培养箱；pH测定计；图华SHA—C恒温振荡器；THZ—D台式恒温振荡器(空气浴)；微型sigmal—14离心机；KDＣ一1044低速离心机；单目显微镜；正置荧光显微镜；Bs 224s—L电子天平；紫外分光光度计cary50(美国)；万能粉碎机；无菌操作台。
2实验方法
2.1 菌种活化与液体发酵种子培养
将低温保藏的酿酒酵母菌种取出，无菌操作接种于斜面培养基上，于28℃下培养24 h，重复3次，作为活化后菌种备用。将活化菌种无菌操作接种至豆芽汁液体培养基内，接种量为10％，于28℃、150 r／min振荡培养，通过镜检及观察生长状态确定种子最佳培养时间。
2.2 实验分组
无菌条件下将已灭菌的5.00g黄芪药材粉末加入100mL豆芽汁培养基中，每瓶按10％的接种量接入液体种子，作为发酵组；对照组不接种液体种子，加入等量蒸馏水；取5．00g原药材按传统水煎方法处理，过滤取滤液100 mL作空白对照组。发酵组与对照组置于28℃、150r/min条件下培养。
2.3 pH值测定
待接种培养后24 h，取发酵组与对照组各3个样品，于4200r／min下离心10min，取上清液，测定体积及pH值后将样品密闭置于冰箱。
2.4 多糖含量测定
2.4.1 多糖标准曲线的制备
精密称取葡萄糖标准品100mg置100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，再精密吸取10mL于另一l00mL容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀即得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8mL，1.0mL分别于50 mL锥形瓶中，加蒸馏水至1.0 mL，精密加入5％苯酚溶液1 mL。摇匀，加入5 mL浓硫酸，迅速混匀，放置5 min后，于沸水浴中加热15min，取出冷却。另取蒸馏水l mL，同样操作作为空白组。在490 nm波长下测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线，得回归方程。
2.4.2 样品的处理与测量
将冷冻保存的样品置于室温下融化，取适量已融化的样品各1.0 mL，分别加入无水乙醇使乙醇终浓度为85％，置于4℃冰箱静置过夜，待多糖沉出再抽滤，滤饼用70％的乙醇洗涤3次，60℃水浴挥发尽乙醇，用热蒸馏水将滤饼溶解。定容至10mL，2000r/min离心10 min，取上清液作为待测液。
2.4.3 待测液中多糖含量测定
精密吸取各待测液0-3mL分别于50 mL锥形瓶，加蒸馏水至1.0 mL．依照多糖标准曲线制备方法进行测定，记录各个待测液的吸光度，代入标准曲线方程计算多糖的含量。
2.4.4 样品中多糖含量测定各样品中多糖含量计算如下：
3.结果
表1
传统水煎液与发酵组多糖含量对比结果见表1。表1可以看出，传统水煎法中黄芪多糖的产量约为16.1 mg/g，产率为1.6l％；发酵后黄芪多糖的产量约为18.4 mg/g，产率为1.84％，两种处理方法对黄芪多糖的产率影响相差0.23％。由此可见,将黄芪用酵母发酵后可以大幅提高黄芪多糖的产量。
实施例8
具体应用案例1
2018年3月，绵阳市吴家镇张某养殖肉鸡6000只，15日龄，鸡体消瘦，采食量下降，粪便稀薄，而且发白，用水冲后，有很多未消化的饲料出现。问诊时，该养殖户说前几天鸡群得了球虫病，治愈后，就出现了这种情况。经诊断可以确定为鸡群经过球虫病后，鸡的肠道没有恢复正常所致。
取实施例1中发酵中药1000克拌料500斤，连用5天，5天后鸡群恢复正常，采食量迅速上升，粪便颜色变黑，用水冲粪便几乎进不到饲料。
具体应用案例2
2017年10月，中江县市张某饲养了6000只蛋鸡，常规饲养．按正常的免疫程序进行免疫。7月龄时，鸡群突然发生慢性呼吸道病并发大肠杆菌病，经过7天药物治疗疾病基本痊愈，病前产蛋率在95%，治愈一周后鸡群采食量偏低，产蛋率维持在70%左右，而且上升缓慢，张某非常着急。
取实施例2中发酵中药1000克拌料500斤，超能多维（北京华罗添加剂厂生产）配合饮水。5天后鸡群采食量恢复到正常，10天后产蛋率已逐步回升到92%。
具体应用案例3
2017年12月，乐至县刘某饲养760头育肥猪，有一半猪得了病毒性腹泻，经过10天治疗，基本痊愈。猪群采食量迟迟不能恢复，同时猪的粪便不成型，背毛杂乱。粪便中发现大量没有消化的玉米粒。
取实施例3中发酵中药1000克拌料300斤，5天后猪群采食量迅速上升，粪便已然发黑成型，10天后脊背发红，背毛光亮，猪群恢复健康。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种复合菌种发酵复方杜仲叶散的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）复合菌种的准备：将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黄芪中间根瘤菌的原菌液分别进行扩大培养，按照下述体积百分比混合：酿酒酵母5-90％、枯草芽孢杆菌5-90％、黄芪中间根瘤菌5-90％，得到复合菌种；
（2）发酵中药培养基的制备：制备含有复方杜仲叶散的发酵中药培养基；所述复方杜仲叶散中各组方按重量计为：黄芪20-50份、党参20-50份、黄精20-50份、金银花20-50份、杜仲叶20-50份、板蓝根20-50份、灵芝20-50份；
（3）发酵：将发酵中药培养基加热至35℃，接种复合菌种，接种量为1-5%；采用好氧发酵，温度35℃，发酵时间48～72小时，当pH值接近5时，即为发酵终点。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述扩大培养后，各菌种的菌落总数为：酿酒酵母的菌落总数为3.8×103cfu/g，枯草芽孢杆菌的菌落总数为2.6×103cfu/g，黄芪中间根瘤菌的菌落总数为2.8×103cfu/g。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述复方杜仲叶散中各组方按重量计为：黄芪50份、党参50份、黄精50份、金银花50份、杜仲叶50份、板蓝根50份、灵芝50份。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，发酵中药培养基中，按重量百分比计各组分用量为：红糖3-5%、香菇粉2-4%、豆粕5-10%、氯化钠0.4-0.6%、黄腐酸0.4-0.6%、复方杜仲叶散40-50%，余量为水，pH值自然。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，发酵中药培养基中，按重量百分比计各组分用量为：红糖4%、香菇粉3%、豆粕8%、氯化钠0.5%、黄腐酸0.5%、复方杜仲叶散45%，余量为水。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，接种量为4%。
7.一种发酵复方杜仲叶散，其特征在于：是应用权利要求1-6任一项所述的方法制备得到的。
8.权利要求7所述的发酵复方杜仲叶散在制备防病促生长的动物饲料添加剂或药物中的应用。
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