CN108823118B - 一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株能抑制α‑葡萄糖苷酶活性的勒克菌，所述菌株是保藏于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclercia sp.PO‑S1。本发明还公开了前述菌株的应用。本发明公开的勒克菌PO‑S1菌株及其发酵产物能有效治疗2型糖尿病，应用前景良好。

Description

一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域；更具体地，涉及一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌。

背景技术

α-葡萄糖苷酶抑制剂是用于治疗2型糖尿病的一类药物，目前已经成为单纯饮食控制不佳的2型糖尿病患者的首选药物及1型糖尿病患者使用胰岛素治疗的首选辅助药物。近年大量临床研究表明，α-葡萄糖苷酶抑制剂能够控制餐后血糖的升高，减轻糖尿病患者高糖环境对机体组织、器官的刺激，延缓糖耐量异常患者向2型糖尿病转化的进程，能克服传统降糖药物的一些缺点，在调节糖脂代谢、提高胰岛素敏感性、保护胰岛细胞功能及改善多种糖尿病并发症等方面具有广泛的应用前景。

目前α-葡萄糖苷酶抑制剂的品种少，上市应用的品种有阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等，其制备工艺繁琐成本高，合成研究进展缓慢。因此，越来越多的学者青睐于从天然产物资源中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂，以期寻找到新的安全、有效的药物。

发明内容

本发明提供了一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的植物内生菌及其应用。

本发明提供了一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌，其特征在于：所述菌株是保藏于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclerciasp.PO-S1。

本发明勒克菌leclercia sp.PO-S1属于勒克菌属菌株，在2018年1月31 日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2018073。

其中，本发明菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了前述勒克菌和/或其发酵产物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

其中，所述发酵产物按照如下方法制备：取保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclercia sp.PO-S1，接种至培养基，发酵，离心，去除菌体，即可。

优选地，所述培养基为LB液体培养基或肉汤培养基，优选地，所述培养的温度为37℃，培养时间为48h，所述培养是在150r/min摇床下培养。

其中，所述α-葡萄糖苷酶抑制剂是治疗糖尿病的药物；优选地，所述糖尿病是2型糖尿病。

本发明还提供了一种α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物，所述抑制剂是以前述勒克菌PO-S1菌株的菌体和/或其发酵产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

其中，所述发酵产物按照如下方法制备：取保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclercia sp.PO-S1，接种至培养基，发酵，离心，去除菌体，即可；

优选地，所述培养基为LB液体培养基或肉汤培养基；

优选地，所述培养的温度为37℃，培养时间为48h，所述培养是在150 r/min摇床下培养。

其中，所述制剂为口服制剂；

优选地，所述制剂为散剂、膏剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或者滴丸。

本发明还提供了前述药物在制备治疗糖尿病的药物；优选地，所述糖尿病是2型糖尿病。

本发明提供的勒克菌PO-S1菌株及其发酵产物能抑制α-葡萄糖苷酶的活性，维持2型糖尿病患者的体重及显著降低血糖浓度，能有效治疗2型糖尿病，具有良好的市场应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1各测定体系下马齿苋内生菌对α-葡萄糖苷酶的抑制率

图2勒克菌PO-S1菌落特征

图3勒克菌PO-S1菌系统发育树

图4灌胃第12天葡萄糖耐量试验

具体实施方式

实施例1 勒克菌PO-S1菌株的分离及鉴定

1、实验材料

1.1 试验材料及试剂

马齿苋购买于本地药材市场，经四川师范大学生命科学学院植物学教研室鉴定为马齿苋科植物马齿苋(Portulaca oleracea L.)。酵母源α-葡萄糖苷酶、4-硝基苯基-D-吡喃葡糖苷(PNPG)链脲佐菌素(STZ)，购自上海源叶生物科技有限公司。柠檬酸、二甲双胍、无水乙醇、酵母粉、一水葡萄糖、胰蛋白胨、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钾、次氯酸钠、氢氧化钠、碳酸钠等均为国产分析纯。

1.2 培养基及缓冲液

LB(Luria-Bertani)培养基(g/L)：酵母粉5.00g，胰蛋白胨10.00g，NaCl 10.00g，加蒸馏水调pH至7.0后定容至1000mL，固体培养基时加入琼脂 15.00g，121℃高压灭菌20min。

肉汤(Nutrient Broth)培养基(g/L)：蛋白胨10.00g，牛肉膏3.00g， NaCl 5.00g，加蒸馏水调PH至7.0后定容至1000mL，121℃高压灭菌20min。

0.01mol/L磷酸缓冲液(PBS)(g/L)：NaCl 8.00g，KCl 0.20g，Na2HPO4 1.44g，KH2PO4 0.24g，加蒸馏水调PH至7.0后定容至1000mL。

0.1mol/L柠檬酸缓冲液：A液：2.10g柠檬酸溶于100mL双蒸水；B液： 2.94g柠檬酸三钠溶于100mL双蒸水。A液、B液按1:1.32混合，调PH至 4.2-4.5，浓度即为0.1mol/L，将配好的柠檬酸缓冲液用0.2μm微孔滤膜抽滤，冰浴备用。

0.9％生理盐水(SPSS)(g/mL)：称取NaCl 0.90g，溶解于少量蒸馏水中，定容至100mL。

1.3 实验仪器

电子天平(万分之一，赛多利斯科学仪器北京有限公司)；超净工作台 (苏州安泰空气技术有限公司)；台式低温冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；高压灭菌锅(上海申安医疗器械厂)；紫外可见分光光度计 (SHIMADZU)；酶标仪(SpectraMax i3x,Molecular Devices)；PCR仪 (BIO-RAD)；凝胶成像系统(BIO-RAD)；稳压稳流电泳仪(PowerPac Basic， BIO-RAD)；水平电泳槽(BIO-RAD)。

2 试验方法

2.1 马齿苋内共生菌分离

取马齿苋的茎、叶组织，用自来水反复冲洗至表面无异物，擦干并用无菌水清洗三次，在浓度为75％的酒精中浸泡10min，将其取出转入到体积分数为3％的次氯酸钠溶液中浸泡5min，无菌水冲洗3次，备用。将处理后的马齿苋放入无菌研钵中，加入0.01mol/L磷酸缓冲液研磨，上清液梯度稀释 (10^-1-10^-8)涂布于LB培养基重复三次，置于37℃恒温培养箱中培养48小时。最后一次冲洗的无菌水也进行上述操作，用于表面无菌鉴定。

2.2 菌落纯化及发酵培养

通过平板划线进一步纯化菌落，挑取纯化后单菌落接入LB液体培养基和肉汤培养基中(250mL锥形瓶内含50mL培养基)，置于37℃恒温摇床中 150r/min培养48h。

2.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性测定

测定原理：

在一定条件下，α-葡萄糖苷酶能够水解4-硝基苯基-D-吡喃葡糖苷中的糖苷键，生成对硝基苯酚，在碱性条件下显黄色，可以通过测定吸光度值的方法测定该黄色物质，进而计算出α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制活性。

(1)测定体系1：

在96孔酶标板中加入10μL，1U/mL(酶活定义：pH6.8，37℃条件下1min 内生成1μmoL葡萄糖的酶量)α-葡萄糖苷酶(PBS缓冲溶液溶解)，80μL， 0.1mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾(pH 6.8)，20μL测试样品(所筛马齿苋内共生菌发酵液)，阴性对照孔加入空白培养基，37℃保温15min后，加入40 μL，2mg/mL PNPG反应10min测定反应体系的光吸收值。

(2)测定体系2：

在96孔酶标板中加入50μL，1U/mL(酶活定义：pH6.8，37℃条件下1min 内生成1μmoL葡萄糖的酶量)α-葡萄糖苷酶(PBS缓冲溶液溶解)，100μL， 0.1mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾(pH 6.8)，50μL测试样品(所筛马齿苋内共生菌发酵液)，阴性对照孔加入空白培养基，37℃保温15min后，加入50 μL，10mmol/L PNPG反应10min，加入100μL，1mol/L碳酸钠终止夜后测定反应体系的吸光度值。

抑制率计算公式：

菌液抑制率(％)＝[1-(D-C/B-A)]×100％

(A：PBS+PBS+空白培养基+PNPG；B：PBS+酶+空白培养基+PNPG；C： PBS+PBS+菌液+PNPG；D：PBS+酶+菌液+PNPG)

2.4菌种鉴定

取50μL灭菌的双蒸水于EP管中，用枪头挑取上述所筛菌的单菌落于双蒸水中并吹打数次使其混匀，于98℃水浴10min使菌体裂解。以引物27F(5＇ -AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3＇)，1540R(5＇ -AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3＇)扩增细菌16SrDNA。PCR反应条件为： 94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火1min，72℃延伸2min，循环30 次；最后72℃延伸10min，4℃终止反应。扩增体系：PCRmix：12.5μL，引物27F：1μL，引物1540R：1μL，DNA模板：2μL，ddH2O：8.5μL。PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测后，送样成都擎科梓熙生物技术有限公司测序。

3.实验结果

3.1 内共生菌的分离

通过对马齿苋茎叶样品进行处理筛选，总计获得内共生细菌大约30多株，经纯化后于30％甘油溶液-80℃保存。

3.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂内生菌的筛选

本实验选用两种培养基(LB培养基和NB培养基)和两种酶反应体系对所筛菌进行抑制α-葡萄糖苷酶活性的测定，通过对所筛30多株马齿苋内共生细菌的筛选，其中一株菌(命名为PO-S1)以LB液体培养基培养发酵并选用体系二测定其发酵液对α-葡萄糖苷酶的抑制活性时，表现出具有60.67％抑制率。选用两种培养基和两种测定反应体系实验结果如下：

表1 测定体系1下马齿苋内生菌α-葡萄糖苷酶抑制效率的筛选

表2 测定体系2下马齿苋内生菌α-葡萄糖苷酶抑制效率的筛选

通过数据分析显示(结果见图1)，并选用反应体系1测定菌对α﹣葡萄糖苷酶的抑制效果时，测得所筛菌对α－葡萄糖苷酶具有49.0％的抑制率；以 NB培养基作为发酵培养基并选用反应体系1测定菌对α﹣葡萄糖苷酶的抑制效果时，所筛菌对α－葡萄糖苷酶具有46.98％的抑制率；以LB培养基作为发酵培养基并选用反应体系2测定菌对α﹣葡萄糖苷酶的抑制效果时，所筛菌对α－葡萄糖苷酶具有60.67％的抑制率；以NB培养基作为发酵培养基并选用反应体系2测定菌对α﹣葡萄糖苷酶的抑制效果时，所筛菌对α－葡萄糖苷酶具有51.75％的抑制率。

3.3菌种鉴定

对上述所筛菌PO-S1提取DNA后以引物27F，1540R，扩增16S rDNA全序列，获得一条1513bp的DNA片段，条带清晰。将PCR产物测序，将所得序列于NCBI进行Blast，并构建系统发育树。结果见图2、图3。

16S rDNA的序列(SEQ ID NO：1)如下：

GAATCCAAAGTGGTAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTACTTCTT TTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGG AACGTATTCACCGTAGCATTCTGATCTACGATTACTAGCGATTCCGACTT CATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTACGACGCACTTTATGA GGTCCGCTTGCTCTCGCGAGGTCGCTTCTCTTTGTATGCGCCATTGTAG CACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCC CACCTTCCTCCAGTTTATCACTGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGGCCTA ACCGCTGGCAACAAAGGATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACC CAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAAAGCATCTCTGCTAAGTTCTCTGGATGTCA AGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCA CCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCC GTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCACTCC TCAAGGGAACAACCTCCAAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCA GGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTGAGCGTCAGT CTTTGTCCAGGGGGCCGCCTTCGCCACCGGTATTCCTCCAGATCTCTAC GCATTTCACCGCTACACCTGGAATTCTACCCCCCTCTACAAGACTCTAG CCTGCCAGTTTCGAATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACAT CCGACTTGACAGACCGCCTGCGTGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATT AACGCTTGCACCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCG GTGCTTCTTCTGCGGGTAACGTCAATTGCTGCGGTTATTAACCACAACA CCTTCCTCCCCGCTGAAAGTACTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCATAC ACGCGGCATGGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCAC TGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGGCTG GTCATCCTCTCAGACCAGCTAGGGATCGTCGCCTAGGTGAGCCATTACC CCACCTACTAGCTAATCCCATCTGGGCACATCTGATGGCAAGAGGCCCG AAGGTCCCCCTCTTTGGTCTTGCGACGTTATGCGGTATTAGCTACCGTTT CCAGTAGTTATCCCCCTCCATCAGGCAGTTTCCCAGACATTACTCACCC GTCCGCCACTCGTCACCCGAGAGCAAGCTCTCTGGCTACCGTCGACTG CAGGTAG

根据菌落特征和系统树，将本发明PO-S1菌株鉴定为勒克菌属菌株，命名为勒克菌PO-S1leclercia sp.PO-S1，保藏于中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO：M 2018073。

以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。

试验例1 本发明勒克菌PO-S1菌株治疗2型糖尿病的验证

1 实验材料

1.1 实验药物

本发明实施例1分离鉴定的勒克菌PO-S1菌株的菌液：将勒克菌PO-S1 菌株接入LB液体培养基和肉汤培养基中(250mL锥形瓶内含50mL培养基)，置于37℃恒温摇床中150r/min培养48h，得菌液(每毫升菌液中有10⁹个菌)。

阳性药物：二甲双胍、阿卡波糖；

造模药物：用0.1mol/L柠檬酸缓冲液配置成1％的STZ溶液于冰浴避光保存(现配现用，并于30分钟之内注射完毕)。

1.2 实验动物ICR小鼠(雄性，22-26g，购自成都达硕实验动物中心)

2 实验方法

2.1 小鼠建模

45只ICR小鼠适应性喂养一周，小鼠禁食不禁水12小时后将小鼠随机分为空白组(5只)和建模组(40只)。其中建模组以120mg/kg的比例腹腔注射STZ溶液，空白组则注射同等剂量的柠檬酸缓冲液，共建模腹腔注射3 天。建模第七天后禁食不禁水12小时，用采血针尾静脉采血测空腹血糖，将空腹血糖≥11.1mmoL的小鼠视为建模成功。

2.2 小鼠分组及灌胃

按照上述方法空白组小鼠5只、其中建模成功小鼠又分为2型糖尿病模型组(5只)、菌发酵液灌胃组(5只)、菌体灌胃组(5只)、菌液灌胃高剂量组(5只)、菌液灌胃中剂量组(5只)、菌液灌胃低剂量组(5只)、二甲双胍灌胃组(5只)、阿卡波糖灌胃组(5只)。

空白组小鼠和2型糖尿病模型组按0.2mL/10g灌胃生理盐水；菌发酵液灌胃组以0.2mL/10g灌胃发酵液(将菌液离心去除菌体后上清液浓缩五倍)；菌体灌胃组以0.2mL/10g灌胃菌体-生理盐水溶液(用与发酵液灌胃组所灌胃发酵液等体积的生理盐水溶解和浓缩五倍的发酵液所离心的菌体等量的菌体量)；菌液灌胃高剂量组按0.2mL/10g灌胃菌液(浓缩十倍)；菌液灌胃中剂量组按0.2mL/10g灌胃菌液(浓缩五倍)，菌液灌胃低剂量组按0.2mL/10g灌胃未进行浓缩的菌液；二甲双胍灌胃组按0.1mL/10g灌胃二甲双胍溶液(10mg/mL)；阿卡波糖灌胃组按0.1mL/10g灌胃阿卡波糖溶液(2mg/mL)；每天于19：00-21:00之间灌胃，共灌胃30天。

2.3 空腹血糖、糖耐量指标测定

小鼠分别于灌胃第0天、第30天禁食、自由饮水12h后将小鼠固定，用 75％的酒精擦拭小鼠尾部进行消毒使两侧尾静脉扩张便于取血，待酒精干后用采血针扎小鼠尾静脉，使其自然流出一滴血后用血糖仪和血糖试纸检测尾静脉全血的血糖值即为此次实验测定的小鼠空腹血糖值。并于灌胃第30天禁食、自由饮水12h后以2g/kg的灌胃量给小鼠灌胃10％的葡萄糖水溶液，分别在0min、30min、60min、120min时间点按上述操作测定小鼠的血糖值。

2.4 数据统计

用SPSS17.0软件处理数据，采用平均数±标准差

进行分析，各组数据采用单因素方差分析，p<0.05为显著性差异,p<0.01为极显著差异。

3 实验结果

3.1 体重、空腹血糖、葡萄糖耐量指标测定

实验结果如表3、4、5所示：

表3 连续灌胃30d对2型糖尿病小鼠体重的影响

注：与空白组相比，^aP<0.05，^bP<0.01；与模型组相比，^cP<0.05，^dP<0.01

由表3可知，与空白组相比，模型组于建模成功后灌胃第0天到第30 天体重呈逐渐下降的趋势(P<0.05)；与模型组相比，小鼠各治疗组的体重从第0天到第30天均有不同程度地升高(P<0.05)。

表4 灌胃第0天与第30天空腹血糖的比较

注：与空白组相比，^aP<0.05，^bP<0.01；与模型组相比，^cP<0.05，^dP<0.01

由表4可知，与空白组相比，模型组于灌胃第0、30天空腹血糖均显著升高(P<0.01)；与模型组相比，小鼠给予治疗第0天血糖浓度无明显差异，而在灌胃第30天，发酵液、菌体、菌液高、中和二甲双胍组小鼠空腹血糖浓度明显降低(P<0.01)。

表5 灌胃第30天葡萄糖耐量试验

注：与空白组相比，^aP<0.05，^bP<0.01；与模型组相比，^cP<0.05，^dP<0.01

糖耐量结构见表5及图4，各组小鼠血糖浓度在灌胃葡萄糖溶液半小时到一小时处于较高水平，后逐渐降低。其中，空白组、菌体、菌液中、低及二甲双胍组在灌胃葡萄糖两小时后能恢复到初始血糖水平。与模型组相比，发酵液组、菌体组和菌液中剂量组有明显差异(p<0.01)。

由上述结果可知：本发明勒克菌PO-S1菌株、发酵液(发酵产物)或者包含二者的菌液均能维持2型糖尿病小鼠的体重，显著降低血糖浓度，可以有效治疗2型糖尿病。

综上，本发明提供的勒克菌PO-S1菌株及其发酵产物均能抑制α-葡萄糖苷酶的活性，维持2型糖尿病患者的体重及显著降低血糖浓度，能有效治疗 2型糖尿病，具有良好的市场应用前景。

序列表

<110> 四川师范大学

<120> 一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌及其应用

<130> GY048-18P1263

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1423

<212> DNA

<213> 勒克菌PO-S1(leclercia sp. )

<400> 1

gaatccaaag tggtaagcgc cctcccgaag gttaagctac ctacttcttt tgcaacccac 60

tcccatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg tagcattctg 120

atctacgatt actagcgatt ccgacttcat ggagtcgagt tgcagactcc aatccggact 180

acgacgcact ttatgaggtc cgcttgctct cgcgaggtcg cttctctttg tatgcgccat 240

tgtagcacgt gtgtagccct actcgtaagg gccatgatga cttgacgtca tccccacctt 300

cctccagttt atcactggca gtctcctttg agttcccggc ctaaccgctg gcaacaaagg 360

ataagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatttc acaacacgag ctgacgacag 420

ccatgcagca cctgtctcag agttcccgaa ggcaccaaag catctctgct aagttctctg 480

gatgtcaaga gtaggtaagg ttcttcgcgt tgcatcgaat taaaccacat gctccaccgc 540

ttgtgcgggc ccccgtcaat tcatttgagt tttaaccttg cggccgtact ccccaggcgg 600

tcgacttaac gcgttagctc cggaagccac tcctcaaggg aacaacctcc aagtcgacat 660

cgtttacggc gtggactacc agggtatcta atcctgtttg ctccccacgc tttcgcacct 720

gagcgtcagt ctttgtccag ggggccgcct tcgccaccgg tattcctcca gatctctacg 780

catttcaccg ctacacctgg aattctaccc ccctctacaa gactctagcc tgccagtttc 840

gaatgcagtt cccaggttga gcccggggat ttcacatccg acttgacaga ccgcctgcgt 900

gcgctttacg cccagtaatt ccgattaacg cttgcaccct ccgtattacc gcggctgctg 960

gcacggagtt agccggtgct tcttctgcgg gtaacgtcaa ttgctgcggt tattaaccac 1020

aacaccttcc tccccgctga aagtacttta caacccgaag gccttcttca tacacgcggc 1080

atggctgcat caggcttgcg cccattgtgc aatattcccc actgctgcct cccgtaggag 1140

tctggaccgt gtctcagttc cagtgtggct ggtcatcctc tcagaccagc tagggatcgt 1200

cgcctaggtg agccattacc ccacctacta gctaatccca tctgggcaca tctgatggca 1260

agaggcccga aggtccccct ctttggtctt gcgacgttat gcggtattag ctaccgtttc 1320

cagtagttat ccccctccat caggcagttt cccagacatt actcacccgt ccgccactcg 1380

tcacccgaga gcaagctctc tggctaccgt cgactgcagg tag 1423

Claims (15)

1.一株能抑制α-葡萄糖苷酶活性的勒克菌（leclercia sp.），其特征在于：所述菌株是保藏于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclerciasp.PO-S1。

2.权利要求1所述勒克菌和/或其发酵液在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述发酵液按照如下方法制备：取保藏编号为CCTCC NO：M 2018073的勒克菌leclercia sp.PO-S1，接种至培养基，发酵，离心，去除菌体，即可。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述培养基为LB液体培养基或肉汤培养基。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述发酵培养的温度为37℃，发酵培养时间为48h，所述发酵培养是在150r/min摇床下培养。

6.根据权利要求3～5任意一项所述的用途，其特征在于：所述α-葡萄糖苷酶抑制剂是治疗糖尿病的药物。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述糖尿病是2型糖尿病。

8.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物，其特征在于：所述抑制剂是以权利要求1所述的勒克菌PO-S1菌株的菌体和/或其发酵液为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述发酵液按照如下方法制备：取保藏编号为CCTCC NO：M2018073的勒克菌leclercia sp.PO-S1，接种至培养基，发酵，离心，去除菌体，即可。

10.如权利要求9所述的药物，其特征在于：所述培养基为LB液体培养基或肉汤培养基。

11.如权利要求9所述的药物，其特征在于，所述发酵培养的温度为37℃，发酵培养时间为48h，所述发酵培养是在150r/min摇床下培养。

12.根据权利要求8~11任一项所述的药物，其特征在于：所述制剂为口服制剂。

13.根据权利要求12所述的药物，其特征在于：所述制剂为散剂、膏剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或者滴丸。

14.权利要求8～13任意一项所述的药物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述糖尿病是2型糖尿病。

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