CN103651847A - 一种调理肠道菌群的配方驴奶粉 - Google Patents

一种调理肠道菌群的配方驴奶粉 Download PDF

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魏华
赖卫华
许恒毅
彭珊珊
徐锋
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Abstract

本发明公开了一种调理肠道菌群的配方驴奶粉,配方以驴奶粉为主,添加胡萝卜粉、大豆低聚糖、菊粉、芦根多糖,并辅以添加含低聚异麦芽糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌两种益生菌。该配方驴奶粉能显著增加小鼠肠道中的乳酸菌和厌氧总菌数量,降低肠杆菌和肠球菌的数量;并且能显著提高Shannon-Wiener指数和丰富度,显著增加小鼠肠道菌群的多样性。

Description

一种调理肠道菌群的配方驴奶粉
技术领域
本发明属于保健领域,具体来说是一种能够调理肠道菌群的配方驴奶粉。
背景技术
肠道菌群对宿主的影响受到越来越多学者的关注,正常情况下肠道菌群稳定,与宿主处于平衡的共生状态。肠道菌群对宿主的生理学功能主要有以下三大方面:一是维持宿主肠道的正常结构和生理功能(营养吸收与代谢),二是拮抗外源病原微生物的定植(防御感染),三是调控宿主的免疫功能。驴奶由于具有良好的药效,在国内外典籍中多有涉及。如在我国《本草纲目》中记载:“驴乳,气味甘,冷利,无毒,热频饮之可治气郁,解小儿热毒,不生痘疹”;在维吾尔和蒙古等少数名族医学中,有用驴奶治疗结核病、肝硬化和胃溃疡、百日咳的记载。此外,秘鲁人认为驴奶可治气喘、气管炎、糖尿病等疾病。已有科学研究发现,鲜驴奶对猪霍乱沙门氏菌及志贺氏菌具有显著的抑制作用;同时Xueying Mao报道,驴奶与人肺癌细胞A549共孵育后,起到抗肿瘤和抑制肿瘤增殖分化的作用;马龙等研究证实鲜驴奶脂肪在体外具有抑制结核杆菌生长的作用。因此,开展驴奶粉复合配方的应用基础研究,充分发挥其微生态调节剂的功能将为驴奶的开发应用提供理论基础。
发明内容
本发明提供以下技术路线:
本发明旨在为驴奶的市场开发提供新途径,以驴奶粉为基质,添加胡萝卜粉、大豆低聚糖、菊粉、芦根多糖,并辅以添加含低聚异麦芽糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌两种益生菌。本发明包括如下技术方案:
一种调理肠道菌群的配方驴奶粉,依照如下步骤制备:
(1)新鲜胡萝卜清洗磨皮,修整后再次清洗;切断、脱水,于恒温箱70-80℃下烘干;打粉并过60目筛得到胡萝卜粉,将胡萝卜粉28 mg/g剂量添加到驴奶中;
(2)选取粒圆饱满的大豆,倒入高速组织捣碎机中捣碎后通过100目筛过滤;称取100 g粉碎后的豆粉,按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液,将其充分振荡混匀;放入微波炉中,将微波功率调至高火,处理2 min;转移至离心机,4500 r/min离心10 min;将上清液旋转蒸干得到大豆低聚糖,将大豆低聚糖按7.9 mg/g剂量添加到驴奶中;
(3)选取菊芋,将其洗净切丝,准确称取定量菊芋丝200 g;放置在加热容器中,加入200 g的水,加热到90℃后保温20 min,将保温的菊芋丝及蒸煮液用榨汁机榨汁取得的菊芋提取液;运用加石灰乳、充二氧化碳气体、絮凝、沉降、减压过滤、脱色等化学和物理方法将提取液中的蛋白质、果胶、氨基酸、色素等杂质除去,得到无色透明的菊粉溶液;将纯化的菊粉溶液按200 μL /g添加到驴奶中;
(4)取芦根试样200 g,粉碎后过40目筛;加入一定量蒸馏水进行超声处理,提取数次,合并滤液并真空浓缩至一定体积后,用一定量的浓度95%乙醇沉淀,抽滤,滤饼加蒸馏水复溶后用Sevag法脱蛋白;水层再次浓缩、醇沉并过滤;用乙醇洗涤滤饼数次,最后经真空干燥得芦根多糖;将提取得到的芦根多糖按6.5 mg/g剂量添加到驴奶中;
(5)将含低聚异麦芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g剂量添加到驴奶中;
(6)益生菌冻干活菌粉的制备:首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液,分装于4只500 mL三角瓶内,每瓶200 mL,121℃灭菌20 min冷却至37℃,分别按2%体积比例接种鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌,37℃厌氧培养24-28 h,检测2株益生菌培养液的活菌数,各培养液活菌数>10CFU/mL,则可停止培养,如果活菌数<10CFU/mL,继续培养直至达到10CFU/mL;将培养液在无菌条件下导入玻璃安瓶中,液面高度0.8 cm至1 cm,加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻,冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装,放入冻干机进行冷冻干燥, 制备粉末冻干菌种;鼠李糖乳杆菌冻干菌粉按0.4 mg/g剂量添加驴奶中,植物乳杆菌按0.2 mg/g剂量添加到驴奶中;
(7)将添加了上述材料的驴奶混合物进行均质,均质压力和温度分别为20-25 MPa和45-50℃;将均质后的驴奶混合物,进行喷雾干燥;喷雾干燥条件控制为:进风温度为130-160℃,塔温为75℃,排风温度为70-75℃。
为评价本发明在驴奶粉的基础上进一步调理肠道菌群,构建头孢曲松致肠道菌群失衡的小鼠模型,再灌胃配方驴奶粉组进行干预治疗。灌胃周期为28天,期间收集灌胃前、灌胃中和灌胃后三个时间点收集粪便,进行活菌计数和PCR-DGGE分析从而评价配方驴奶粉对小鼠肠道菌群的影响。
本发明的有益效果:
1、本发明配方驴奶粉具有调理肠道菌群的效果;
2、本发明配方驴奶粉味道清新,口感好,更易为普通群众接受,易于推广。
具体实施方式
实施例1
一种调理肠道菌群的配方驴奶粉,依照如下步骤制备:
(1)新鲜胡萝卜清洗磨皮,修整后再次清洗;切断、脱水,于恒温箱70-80℃下烘干;打粉并过60目筛得到胡萝卜粉,将胡萝卜粉28 mg/g剂量添加到驴奶中;
(2)选取粒圆饱满的大豆,倒入高速组织捣碎机中捣碎后通过100目筛过滤;称取100 g粉碎后的豆粉,按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液,将其充分振荡混匀;放入微波炉中,将微波功率调至高火,处理2 min;转移至离心机,4500 r/min离心10 min;将上清液旋转蒸干得到大豆低聚糖,将大豆低聚糖按7.9 mg/g剂量添加到驴奶中;
(3)选取菊芋,将其洗净切丝,准确称取定量菊芋丝20 kg;放置在加热容器中,加入200 g的水,加热到90℃后保温20 min,将保温的菊芋丝及蒸煮液用榨汁机榨汁取得的菊芋提取液;运用加石灰乳、充二氧化碳气体、絮凝、沉降、减压过滤、脱色等化学和物理方法将提取液中的蛋白质、果胶、氨基酸、色素等杂质除去,得到无色透明的菊粉溶液;将纯化的菊粉溶液按200 μL /g添加到驴奶中;
(4)取芦根试样200 g,粉碎后过40目筛;加入一定量蒸馏水进行超声处理,提取数次,合并滤液并真空浓缩至一定体积后,用一定量的浓度95%乙醇沉淀,抽滤,滤饼加蒸馏水复溶后用Sevag法脱蛋白;水层再次浓缩、醇沉并过滤;用乙醇洗涤滤饼数次,最后经真空干燥得芦根多糖;将提取得到的芦根多糖按6.5 mg/g剂量添加到驴奶中;
(5)将含低聚异麦芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g剂量添加到驴奶中;
(6)益生菌冻干活菌粉的制备:首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液,分装于4只500 mL三角瓶内,每瓶200 mL,121℃灭菌20 min冷却至37℃,分别按2%体积比例接种鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌,37℃厌氧培养24-28 h,检测2株益生菌培养液的活菌数,各培养液活菌数>10CFU/mL,则可停止培养,如果活菌数<10CFU/mL,继续培养直至达到10CFU/mL;将培养液在无菌条件下导入玻璃安瓶中,液面高度0.8 cm至1 cm,加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻,冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装,放入冻干机进行冷冻干燥,制备粉末冻干菌种;鼠李糖乳杆菌冻干菌粉按0.4 mg/g剂量添加驴奶中,植物乳杆菌按0.2 mg/g剂量添加到驴奶中;
(7)将添加了上述材料的驴奶混合物进行均质,均质压力和温度分别为20-25 MPa和45-50℃;将均质后的驴奶混合物,进行喷雾干燥;喷雾干燥条件控制为:进风温度为130-160℃,塔温为75℃,排风温度为70-75℃。
实施例2 肠道菌群调理试验
肠道菌群失衡小鼠模型的构建:BALB/c小鼠灌胃125 mg/mL的头孢曲松溶液0.2 mL/次(相当于成人正常剂量的10倍),每天2次,时间间隔6 h,连续灌胃5d,造成肠道菌群紊乱模型。
对造模小鼠灌胃实施例1制备的配方驴奶粉,按5 g/kg(配方驴奶粉/小鼠体重)的剂量灌胃,每只小鼠每次的灌胃量为300 μL/日,每日一次,共灌胃28天。
小鼠粪便的收集:小鼠粪便的采集分三个时间点,依次为造模前、造模后和灌胃后。收取粪便样品时,轻揉小鼠的直肠部位,用无菌离心管收集小鼠粪便,每只小鼠收集3-4粒粪便,送到无菌操作台待检。
小鼠粪便微生物的活菌计数:称取0.1 g粪便样品,加入1 mL已灭菌的0.85%生理盐水,置于旋涡振荡器上将粪便样品充分振荡混匀,按10倍倍比稀释,选取合适的稀释浓度接种到相应的选择性培养基(见表1.1),待培养结束,计算每克湿粪便样中的细菌数。
表1 肠道菌群检验用培养基和培养条件
项目 培养基 培养条件
厌氧总菌 BHI琼脂培养基 37℃,厌氧培养48 h
乳杆菌 MRS琼脂培养基 37℃,厌氧培养48 h
肠球菌 SBM琼脂培养基 37℃,24 h
肠杆菌 MAC琼脂培养基 37℃,24 h
表2 灌胃配方驴奶粉对小鼠肠道菌群组成的影响
  肠球菌 肠杆菌 乳酸菌 厌氧总菌
造模前 7.09±0.23 3.18±0.23 7.41±0.65 8.44±0.25
造模后 3.54±0.28a ND a 2.67±0.22a 3.69±0.13a
灌胃后 4.76±0.18 3.29±0.31b 8.27±0.25b 8.70±0.09b
注:a表示与造模前相比,p<0.05,b表示与造模后相比,p<0.05。
实验结果表明:头孢曲松作用5 d后,实验组小鼠肠道菌群出现重度失衡现象(表2),可培养厌氧总菌、乳酸菌和肠球菌极显著减少(p<0.01),肠杆菌则检测不到。经过28天的配方驴奶粉灌胃后,小鼠肠道菌群基本上恢复到与造模前同一水平,这表明配方驴奶粉对肠道菌群的失调具有良好的调理作用。
小鼠肠道菌群的多样性分析:参照DNA提取试剂盒,提取粪便样品中的细菌总基因组DNA;根据文献,自行设计特异性的扩增引物进行PCR扩增,将扩增得到的产物进行DGGE电泳得到DGGE图谱,图谱采用Quantity One(Bio-Rad)进行条带数、多样性及UPGMA相似性聚类分析。
表3 配方驴奶粉对小鼠肠道菌群影响的多样性分析
Figure 70049DEST_PATH_IMAGE002
注:a表示与造模前相比,p<0.05,b表示与造模后相比,p<0.05。
DGGE多样性分析显示,经头孢曲松作用作用后,小鼠肠道菌群中的微生物丰富度有明显的下降,而且均匀度也显著下降,而经配方驴奶粉灌胃后肠道菌群的丰富度、Shannon-Wiener指数以及均匀度均恢复到造模前,且在丰富度和Shannon-Wiener指数两个方面具有提高作用。这表明灌胃配方驴奶粉能有效地调理小鼠肠道菌群的多样性。

Claims (2)

1.一种调理肠道菌群的配方驴奶粉,其特征在于依照如下步骤制备:
(1)新鲜胡萝卜清洗磨皮,修整后再次清洗;切断、脱水,于恒温箱70-80℃下烘干,打粉并过60目筛得到胡萝卜粉,将胡萝卜粉28 mg/g剂量添加到驴奶中;
(2)选取粒圆饱满的大豆,倒入高速组织捣碎机中捣碎后通过100目筛过滤;称取100 g粉碎后的豆粉,按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液,将其充分振荡混匀;放入微波炉中,将微波功率调至高火,处理2 min;转移至离心机,4500 r/min离心10 min;将上清液旋转蒸干得到大豆低聚糖,将大豆低聚糖按7.9 mg/g剂量添加到驴奶中;
(3)选取菊芋,将其洗净切丝,准确称取定量菊芋丝200 g;放置在加热容器中,加入200 g的水,加热到90℃后保温20 min,将保温的菊芋丝及蒸煮液用榨汁机榨汁取得的菊芋提取液;加石灰乳、充二氧化碳气体、絮凝、沉降、减压过滤、脱色将提取液中的蛋白质、果胶、氨基酸、色素杂质除去,得到无色透明的菊粉溶液;将纯化的菊粉溶液按200 μL /g添加到驴奶中;
(4)取芦根试样200 g,粉碎后过40目筛;加入一定量蒸馏水进行超声处理,提取数次,合并滤液并真空浓缩,95%乙醇沉淀,抽滤,滤饼加蒸馏水复溶后用Sevag法脱蛋白;水层再次浓缩、醇沉并过滤;用乙醇洗涤滤饼数次,最后经真空干燥得芦根多糖;将提取得到的芦根多糖按6.5 mg/g剂量添加到驴奶中;
(5)将含低聚异麦芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g剂量添加到驴奶中;
(6)益生菌冻干活菌粉的制备:首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液,分装于4只500 mL三角瓶内,每瓶200 mL,121℃灭菌20 min冷却至37℃,分别按2%体积比例接种鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌,37℃厌氧培养24-28 h,检测2株益生菌培养液的活菌数,各培养液活菌数>10CFU/mL,则可停止培养,如果活菌数<10CFU/mL,继续培养直至达到10CFU/mL;将培养液在无菌条件下导入玻璃安瓶中,液面高度0.8 cm至1 cm,加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻,冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装,放入冻干机进行冷冻干燥,制备粉末冻干菌种;鼠李糖乳杆菌冻干菌粉按0.4 mg/g剂量添加驴奶中,植物乳杆菌按0.2 mg/g剂量添加到驴奶中;
(7)将添加了上述材料的驴奶混合物进行均质,均质压力和温度分别为20-25 MPa和45-50℃;将均质后的驴奶混合物,进行喷雾干燥。
2.如权利要求1所述的配方驴奶粉,其特征在于步骤(7)喷雾干燥条件控制为:进风温度为130-160℃,优选为150℃,塔温为75℃,排风温度为70-75℃。
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