CN115887555B - 一种抑制黄曲霉菌的中药组合物 - Google Patents
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,属于黄曲霉抑制剂技术领域,以蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁和山苍子为原料,将其粉碎至300‑500目,然后利用阶梯式温度浸泡法将不同原料的有效成分浸出,再利用超临界法进行高温高压提取,提高了有效成分的含量,且不同原料之间相互作用,相辅相成,增强了药物稳定性、临床疗效,提高了药物的吸收利用率。该组合物可以高效抑制黄曲霉菌,而且作用时间长,在较长时间内都能保持较高的抑菌率。
Description
技术领域
本发明属于黄曲霉抑制剂技术领域,具体涉及一种抑制黄曲霉菌的中药组合物。
背景技术
霉菌污染一直是全球关注的问题,特别是在动物的养殖环境及饲料加工、运输和储存过程中的霉菌污染,霉菌及霉菌代谢产生的毒素对人和动物的健康造成极大的危害。
黄曲霉是一类常见的曲霉属腐生性病原真菌,多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。黄曲霉菌落生长较快,结构疏松,表面灰绿色,背面无色或略呈褐色,菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。黄曲霉菌在温度、水分合适的条件下会产生毒性次生代谢产物黄曲霉毒素,这种毒性次生代谢产物被认为是一类致癌物,且黄曲霉菌是所有产生黄曲霉毒素菌类中分布最广的一类。黄曲霉菌的菌核在寄主上萌发出菌丝,与此同时也会产生出分生孢子,分生孢子作为最初的侵染源,通过载体的传播后会侵染到寄主上从而导致大量繁殖并产生菌丝,菌丝在达到合适的温度及湿度时产生有毒次生代谢产物—黄曲霉毒素,如此循环往复,将产生越来越多的黄曲霉菌和黄曲霉毒素。因此,如何抑制黄曲霉菌的产生成为了目前亟需解决的重要难题。
目前,抑制黄曲毒素的方法有物理、生物及化学方法。物理和化学方法会带来残留、二次污染等问题。物理方法耗能大,而化学试剂的使用会使菌株产生抗性,如果使用不当还会增加毒素的产生,且临床用于抗黄曲霉菌的药物有唑类、棘白素类、脂质体类等,这些抗菌药物不仅价格昂贵,还易产生耐药性。
发明内容
有鉴于此,本发明提出一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,该中药组合物不仅可以高效抑制黄曲霉菌,而且作用时间长,在较长时间内都能保持较高的抑菌率。
为实现上述目的,本发明提出如下技术方案:
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,按质量份数计,包括以下组分:蒲公英3-6份,甘草4-8份,决明子6-10份,花椒2-4份,大青叶5-10份,黄柏13-18份,土槿皮10-15份,大黄8-12份,苦参1-3份,白头翁2-5份,山苍子2-4份。
进一步地,按质量份数计,包括以下组分:蒲公英5份,甘草6份,决明子8份,花椒3份,大青叶7.5份,黄柏15份,土槿皮12份,大黄10份,苦参2份,白头翁4份,山苍子3份。
本发明还提供一种抑制黄曲霉菌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)将蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁、山苍子分别剔除杂质,干燥、粉碎;
2)将粉碎后的原料混合,超声搅拌,浸泡,然后利用二氧化碳进行超临界萃取,过滤得到滤液;
3)将所得滤液进行减压浓缩,造粒,即得到抑制黄曲霉菌的中药组合物。
进一步地,步骤1)中,所述粉碎为粉碎至原料粒径为300-500目。
进一步地,步骤2)中,所述超声搅拌参数为:超声频率为40-50kHz,时间为3-5h。
进一步地,步骤2)中,所述浸泡为:在40-55℃水浴条件下浸泡1.5-2.5h,然后在60-70℃水浴条件下浸泡0.2-0.4h,最后在75-85℃水浴条件下浸泡0.1-0.3h。
进一步地,步骤2)中,所述萃取参数为:压力50-60MPa,温度65-80℃,二氧化碳流速为5-10L/h,时间为1-2h。
本发明还提供一种饲料,利用抑制黄曲霉菌的中药组合物制备而成。
进一步地,所述抑制黄曲霉菌的中药组合物添加量为0.1-0.3wt%。
蒲公英苦、甘,寒,归肝、胃经。清热解毒,消肿散结,利尿通淋,具有广谱抗菌作用。
甘草甘,平,入心、脾、胃、肝经,清热解毒、缓急止痛,其成分中的甘草甜素有很强的解毒作用,对食物中毒、多种药物中毒、农药中毒、蛇毒、体内代谢产物中毒、过敏性疾病等均有很好的效果。
决明子味甘、苦,性寒,微咸。清肝明目,润肠通便。
花椒性味辛,温。归脾、胃、肾经。具有温中止痛、杀虫止痒的功效。花椒中含有挥发性植物油,其中柠檬烯物质有较强的杀菌、抑菌、抗菌作用。
大青叶性寒、味苦,归心经和胃经。有清热解毒、凉血消斑的作用。具有体外广谱抗菌作用,是抗菌消炎、止痛、退热的传统中草药。此外,大青叶内含有多种抗病毒物质,对感冒病毒、腮腺炎病毒、肝炎病毒及流脑病毒等有较强的抑制和杀灭作用。
黄柏苦,寒,入肾、膀胱、脾、大肠经,清热燥湿、泻火解毒。黄柏有效成分为小檗碱,研究发现其对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、草绿色链球菌、痢疾杆菌、溶血性链球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌均有效或有较强的抑制作用,对枯草杆菌、百日咳杆菌、破伤风杆菌、黄曲霉菌亦有抑制作用。
土槿皮性味归经,辛,温。有毒。归肺经。主要成分是土槿皮酊,里面还含有土槿皮酸,对于真菌是具有比较好的抑制作用。
大黄苦寒,归脾胃经、大肠经、肝经和心包经。大肠有泻热、通便、凉血、解毒、化瘀、通经的作用。大黄具有抗菌作用,且抗菌谱广、作用强,有效成分主要为大黄酸、大黄素、大黄素甲醚和芦荟大黄素,其中以芦荟大黄素作用最强,其抗菌机理是对细菌细胞核酸和蛋白质合成的阻碍作用,还能抑制二十碳稀酸类异常代谢,增加细胞保护机制,抗凝抗栓。改善微循环,有抗厌氧菌作用,特别是对常见的脆弱杆菌的抑制作用尤为显著。大黄还具有清除自由基,促进肠黏膜杯状细胞增生,改善肠黏膜通透性的使用。
苦参苦,寒。归心、肝、胃、大肠、膀胱经。清热澡湿,祛风杀虫,利尿。
白头翁苦,寒。归胃、大肠经。清热解毒,凉血止痢。与黄柏联用可提高抗菌功效。
山苍子辛、味苦,温。对于多种细菌具有很强的抑制作用。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明以蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁和山苍子为原料,通过将中药原料粉碎至300-500目,然后利用阶梯式温度浸泡法将不同原料的有效成分浸出,再利用超临界法进行高温高压提取,提高了有效成分的含量,将有效成分高效的提出后与其它有效成分混合,进一步提高有效成分之间的相互作用,从而增强了药物稳定性、临床疗效,提高了药物的吸收利用率。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制,而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。另外,对于本发明中的数值范围,应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入,用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时,以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下,可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化,这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等,均为开放性的用语,即意指包含但不限于。
本发明中所述的“份”如无特别说明,均按质量份计。
本发明所用原料均为市场上购买。
实施例1
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,按质量份数计,组分如下:
蒲公英5份,甘草6份,决明子8份,花椒3份,大青叶7.5份,黄柏15份,土槿皮12份,大黄10份,苦参2份,白头翁4份,山苍子3份。
制备方法如下:
1)将蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁、山苍子分别剔除杂质,干燥、粉碎至粒径为400目;
2)将粉碎后的原料混合,在超声功率为45kHz下超声搅拌4h,然后依次在50℃水浴条件下浸泡2h,在65℃水浴条件下浸泡0.3h,在80℃水浴条件下浸泡0.2h,取出,利用二氧化碳进行超临界萃取,压力为55MPa,温度70℃,二氧化碳流速为8L/h,时间为1.5h,过滤得到滤液;
3)将所得滤液进行减压浓缩,造粒,即得到抑制黄曲霉菌的中药组合物。
实施例2
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,按质量份数计,组分如下:
蒲公英3份,甘草8份,决明子6份,花椒2份,大青叶10份,黄柏13份,土槿皮10份,大黄12份,苦参1份,白头翁5份,山苍子2份。
制备方法如下:
1)将蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁、山苍子分别剔除杂质,干燥、粉碎至粒径为300目;
2)将粉碎后的原料混合,在超声功率为50kHz下超声搅拌3h,然后依次在40℃水浴条件下浸泡2.5h,在60℃水浴条件下浸泡0.4h,在85℃水浴条件下浸泡0.1h,取出,利用二氧化碳进行超临界萃取,压力为60MPa,温度65℃,二氧化碳流速为5L/h,时间为2h,过滤得到滤液;
3)将所得滤液进行减压浓缩,造粒,即得到抑制黄曲霉菌的中药组合物。
实施例3
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,按质量份数计,组分如下:
蒲公英6份,甘草4份,决明子10份,花椒4份,大青叶5份,黄柏18份,土槿皮15份,大黄8份,苦参1份,白头翁5份,山苍子2份。
制备方法如下:
1)将蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁、山苍子分别剔除杂质,干燥、粉碎至粒径为500目;
2)将粉碎后的原料混合,在超声功率为40kHz下超声搅拌5h,然后依次在55℃水浴条件下浸泡1.5h,在70℃水浴条件下浸泡0.2h,在75℃水浴条件下浸泡0.3h,取出,利用二氧化碳进行超临界萃取,压力为50MPa,温度80℃,二氧化碳流速为10L/h,时间为1h,过滤得到滤液;
3)将所得滤液进行减压浓缩,造粒,即得到抑制黄曲霉菌的中药组合物。
实施例4
一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,按质量份数计,组分如下:
蒲公英4份,甘草7份,决明子9份,花椒4份,大青叶8份,黄柏14份,土槿皮11份,大黄11份,苦参3份,白头翁3份,山苍子3份。
制备方法同实施例1。
对比例1
同实施例1,区别在于,原料中不添加花椒。
对比例2
同实施例1,区别在于,原料中不添加白头翁和山苍子。
对比例3
同实施例1,区别在于,制备方法步骤2)为:将粉碎后的原料混合,在超声功率为45kHz下超声搅拌4h,然后依次在50℃水浴条件下浸泡2h,在65℃水浴条件下浸泡0.3h,在80℃水浴条件下浸泡0.2h,过滤得到滤液。即不进行二氧化碳超临界萃取。
对比例4
同实施例1,区别在于,制备方法步骤2)为:将粉碎后的原料混合,利用二氧化碳进行超临界萃取,压力为55MPa,温度70℃,二氧化碳流速为8L/h,时间为1.5h,过滤得到滤液。即不进行浸泡处理。
对比例5
同实施例1,区别在于,制备方法步骤2)为:将粉碎后的原料混合,在超声功率为45kHz下超声搅拌4h,然后在65℃水浴条件下浸泡3h,过滤得到滤液。
抑菌实验
培养基:琼脂培养基,加热溶解,分装后121℃灭菌15-20min。
菌种为:黄曲霉菌(Aspergillusflavus),编号142803,购自商城创联北纳生物科技有限公司。
黄曲霉菌孢子液制备:挑取生长旺盛、活力好的菌丝于培养基上,28℃生化培养箱中培养5-7d,形成充足的孢子后,加入4mL无菌水,充分震荡后获得黄曲霉菌孢子液,将孢子液滴于血球计数板上,置于显微镜下计数,然后将其稀释至浓度为107个/mL。
抑菌活性测定:用灭菌去离子水分别将实施例1-4、对比例1-5制备的抑制黄曲霉菌的中药组合物稀释到0.01g/mL,以无水乙醇做阳性对照组,放入灭菌过的培养基中,空白对照组的培养基中不加任何东西。移取黄曲霉菌孢子液1μL,接种到培养基中间,置于28℃生化培养箱中分别培养3d、9d和15d后,观察黄曲霉菌生长的状况,并采用十字测量法测量黄曲霉菌生长圈的大小。每个实验组和对照组分别设置3个平行,记录平均结果,抑菌率结果参见表1。
表1
从表1中可以看出,本发明制备的抑制黄曲霉菌的中药组合物可以高效的抑制黄曲霉菌活性,且可以在15d之后抑菌率还可以达到80%左右,而未按照本发明方法制备的抑制黄曲霉菌的中药组合物抑制率明显下降,说明本发明提供的组合物中原料之间存在相互作用,且需要相应的方法配合,通过适宜的参数控制,最终提高了抑制率,且可在较长时间内保持较高的抑制活性。
试验例1
将实施例1-4、对比例1-5制备的抑制黄曲霉菌的中药组合物添加于玉米-豆粕饲料中,验证本发明制备的药物对家畜黄曲霉菌毒素中毒的临床防治效果,以西药e清霉为对照组,二者使用量均为玉米-豆粕饲料质量的0.2%,得到拌有药物的饲料。
试验对象来源于当地养猪场,该猪场因饲喂霉变饲料引发猪中毒,随机采集1000头,体重相当,随机分成10组,每组100头。
用法:每天猪饲喂饲料5公斤/头,10d为一个疗程。
疗效标准判定:
治愈:精神状态良好,食欲、排便恢复正常,其他临床指征消失,治愈率=治愈数/治疗总数。
有效:精神状态明显改善,食欲、排便有明显好转,其他临床指征暂未消除,有效率=(治愈数+有效数)/治疗总数。
治疗效果如表2所示。
表2
从表2中可以看出,饲喂添加本发明实施例制备的中药组合物用于治疗黄曲霉菌毒素中毒的临床防治效果较高,有效率最高可达98%,而对比例制备的中药组合物效果明显下降,但仍远高于西药组分的效果。并且经过一个月后的观察,实施例1-4组的400头猪精神状态仍然良好,而对照组的100头猪有11头猪开始出现食欲不振的现象,说明本发明制备的中药组合物药效持续率长。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种抑制黄曲霉菌的中药组合物,其特征在于,按质量份数计,由以下组分组成:蒲公英3-6份,甘草4-8份,决明子6-10份,花椒2-4份,大青叶5-10份,黄柏13-18份,土槿皮10-15份,大黄8-12份,苦参1-3份,白头翁2-5份,山苍子2-4份;
所述抑制黄曲霉菌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)将蒲公英、甘草、决明子、花椒、大青叶、黄柏、土槿皮、大黄、苦参、白头翁、山苍子分别剔除杂质,干燥、粉碎;
2)将粉碎后的原料混合,超声搅拌,浸泡,然后利用二氧化碳进行超临界萃取,过滤得到滤液;
3)将所得滤液进行减压浓缩,造粒,即得到抑制黄曲霉菌的中药组合物;
步骤2)中,所述超声搅拌参数为:超声频率为40-50kHz,时间为3-5h;
步骤2)中,所述浸泡为:在40-55℃水浴条件下浸泡1.5-2.5h,然后在60-70℃水浴条件下浸泡0.2-0.4h,最后在75-85℃水浴条件下浸泡0.1-0.3h;
步骤2)中,所述萃取参数为:压力50-60MPa,温度65-80℃,二氧化碳流速为5-10L/h,时间为1-2h。
2.根据权利要求1所述的抑制黄曲霉菌的中药组合物,其特征在于,按质量份数计,由以下组分组成:蒲公英5份,甘草6份,决明子8份,花椒3份,大青叶7.5份,黄柏15份,土槿皮12份,大黄10份,苦参2份,白头翁4份,山苍子3份。
3.根据权利要求1所述的制黄曲霉菌的中药组合物,其特征在于,步骤1)中,所述粉碎为粉碎至原料粒径为300-500目。
4.一种饲料,其特征在于,利用权利要求1-3任一项所述的抑制黄曲霉菌的中药组合物添加到常规饲料中制备而成;所述抑制黄曲霉菌的中药组合物添加量为0.1-0.3wt%。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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