CN117281884B - 一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，属于兽药技术领域，本发明提供的中药组合物由柴胡、沙棘、白芍、黄连、金银花、蒺藜、生姜、薄荷、海风藤、甘草组成，通过对用量的优选最终获得的本发明中药组合物，极大地提高了肉鸡场的经济效益，同时本发明为纯中药制剂，毒副作用小，无残留，不产生耐药性，用药安全，具有很好的社会效益。
Description
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺。
背景技术
黄曲霉菌是自然界中普遍存在的一种霉菌，通过其次级代谢物黄曲霉毒素侵染玉米、花生、棉籽等，进而污染饲料，从而严重影响养殖业的健康发展，导致巨大的经济损失，对人类食物链的安全也产生了很大的潜在威胁，产生严重的社会公共卫生安全问题。
研究表明，黄曲霉毒素作用的靶器官是肝脏，进而损伤机体的胃肠和肾脏等组织器官，导致畜禽生长发育停滞、免疫功能降低、生产性能下降，甚至引发急性死亡。因此，预防畜禽黄曲霉中毒的措施一是避免黄曲霉菌污染饲料，二是降解黄曲霉菌毒素，三是研发提高免疫功能的药物增强机体免疫功能。
被黄曲霉菌污染的饲料不仅对畜禽生产威胁巨大，而且可通过肉、蛋、奶等动物产品间接危害人类健康，导致肝脏损伤、机体中毒甚至致癌。研究发现多种单味中药或中药复方能对动物肝脏功能、免疫功能产生明显的调节作用。但实践生产中预防黄曲霉菌中毒的中兽药制剂普遍存在组方不合理、有效成分易损失、疗效不确切等问题。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明提供了一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物，本产品为纯中药制剂，毒副作用小，无残留，不产生耐药性，用药安全，也会产生很好的社会效益。
具体而言，本发明的技术方案是这样实现的，
以重量比计算，本发明所述中药组合物由以下成分组成：柴胡15-25份、沙棘13-23份、白芍7-20份、黄连2-10份、金银花2-10份、蒺藜4-14份、生姜2-9份、薄荷2-9份、海风藤3-10份、甘草2-10份。
进一步地，所述中药组合物由以下成分组成：柴胡20份、沙棘18份、白芍12份、黄连5份、金银花5份、蒺藜9份、生姜4份、薄荷4份、海风藤5份、甘草5份。
本发明的第二个目的在于提供所述中药组合物的方法，包括以下步骤：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在25-35℃水浴加热浸泡3.0-4.5h，然后缓慢升温至50-60℃浸泡1.5-2.5h，最后在65-75℃水浴条件下超声震荡0.5-1.5h，降温并密封于45-65℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持10-20min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加65-75%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.02-1.05的清膏，加乙醇使得醇的含量50-70%，静置10-20小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.08-1.23，得稠膏，真空度-0.08MPa—-0.10MPa，干燥温度85℃-95℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
更进一步地，所述中药组合物的方法，包括以下步骤：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在30℃水浴加热浸泡4.0h，然后缓慢升温至55℃浸泡2.0h，最后在70℃水浴条件下超声震荡1h，降温并密封于55℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持15min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.08MPa—-0.10MPa，干燥温度85℃-95℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
进一步地，所述中药组合物可与其他具有类似功能的兽药联合用药，例如氟康唑、咪康唑等。
本发明的第三个目的在于提供了一种兽药，所述兽药为片剂、颗粒剂、胶囊剂。所述兽药由本发明所述的中药组合物和药学上可接受的辅料组成。
与现有技术相比，本发明的技术效果在于：
本发明提供的中药组合物由柴胡、沙棘、白芍、黄连、金银花、蒺藜、生姜、薄荷、海风藤、甘草组成，利用本发明中药组合物将极大地提高肉鸡场的经济效益，同时本产品为纯中药制剂，毒副作用小，无残留，不产生耐药性，用药安全，也会产生很好的社会效益；本发明的中药组合物在市场中具有较强的竞争力。
附图说明
图1：加速实验的条件在第0、1、2、3、6个月重新检测实施例1、对比例7、对比例8的总黄酮的含量；
图2：加速实验的条件在第0、1、2、3、6个月重新检测实施例1、对比例7、对比例8的异鼠李素的含量；
图3：本发明各实施例对黄曲霉菌的抑菌率；
图4：7组中IgG的含量的检测；
图5：7组中IgM的含量的检测；
图6：7组中IgA的含量的检测。
具体实施方式
实施例1：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在30℃水浴加热浸泡4.0h，然后缓慢升温至55℃浸泡2.0h，最后在70℃水浴条件下超声震荡1h，降温并密封于55℃的反应釜，通入CO2使压力达到30Mpa，保持15min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.09MPa，干燥温度90℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
实施例2：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在25℃水浴加热浸泡3.0h，然后缓慢升温至50℃浸泡1.5h，最后在65℃水浴条件下超声震荡0.5h，降温并密封于45℃的反应釜，通入CO2使压力达到20Mpa，保持10min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加65%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.02的清膏，加乙醇使得醇的含量50%，静置10小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.08，得稠膏，真空度-0.08MPa，干燥温度85℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
实施例3：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1)将沙棘、白芍、金银花、薄荷在35℃水浴加热浸泡4.5h，然后缓慢升温至60℃浸泡2.5h，最后在75℃水浴条件下超声震荡1.5h，降温并密封于65℃的反应釜，通入CO2使压力达到35Mpa，保持20min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2)柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加75%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3)生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4)将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.05的清膏，加乙醇使得醇的含量70%，静置20小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.23，得稠膏，真空度-0.10MPa，干燥温度95℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
对比例1：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）将白术、白芍、金银花、薄荷在25℃水浴加热浸泡3.0h，然后缓慢升温至50℃浸泡1.5h，最后在65℃水浴条件下超声震荡0.5h，降温并密封于45℃的反应釜，通入CO2使压力达到20Mpa，保持10min后，释放CO2，过滤得到滤液；
步骤2）-4）同实施例1。
对比例2：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）白芍、金银花、薄荷在25℃水浴加热浸泡3.0h，然后缓慢升温至50℃浸泡1.5h，最后在65℃水浴条件下超声震荡0.5h，降温并密封于45℃的反应釜，通入CO2使压力达到20Mpa，保持10min后，释放CO2，过滤得到滤液；
步骤2）-4）同实施例1。
对比例3：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）同实施例步骤1）
2）柴胡、黄连、海风藤、当归粉碎至原料粒径为80目，加75%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
步骤3）-4）同实施例1。
对比例4：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）同实施例步骤1）
2）柴胡、黄连、枳实、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加75%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
步骤3）—4）同实施例1。
对比例5：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）柴胡、枳实粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
2）芍药、甘草和步骤1）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
3）将步骤1）、2）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.09MPa，干燥温度85℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
对比例6：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺为：
1）将沙棘、白芍、白术、三七在30℃水浴加热浸泡4.0h，然后缓慢升温至55℃浸泡2.0h，最后在70℃水浴条件下超声震荡1h，降温并密封于55℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持15min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）金银花、车前子和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.09MPa，干燥温度90℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
对比例7：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
中药组合物的成分与用量同实施例1，制备工艺具体如下：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在45℃水浴加热浸泡2h，然后缓慢升温至65℃浸泡0.3h，最后在85℃水浴条件下超声震荡0.2h，降温并密封于55℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持15min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.09MPa，干燥温度90℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
对比例8：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
中药组合物的成分与用量同实施例1。
制备工艺为：将柴胡、沙棘、白芍、黄连、金银花、蒺藜、生姜、薄荷、海风藤、甘草加水煎煮2次，混合煎液；浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.09MPa，干燥温度90℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
对比例9：一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物及其制备工艺，具体如下：
制备工艺同实施例1。
一、沙棘中总黄酮以及异鼠李素有效物质的检测
1.仪器与试药
1.1.1 Waters Acquity Arc高效液相色谱仪（美国）：2998PDA检测器，四元超高压梯度泵，Empower色谱工作站。
1.1.2 实施例1与对比例7-8制备的中药组合物。
1.2方法与结果
1.2.1总黄酮的测定
对照品溶液的制备：取芦丁对照品20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀。精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含芦丁0.2mg）。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加30%乙醇至6.0ml，加 5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟。加氢氧化钠试液10ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，参照紫外-可见分光光度法（通则0401），在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法：取本品粗粉约2g，精密称定，加60%乙醇30ml，加热回流2小时，放冷，滤过，残渣再分别加60%乙醇 25ml，加热回流2次，每次1小时，滤过，合并滤液，置100ml量瓶中，残渣用60%乙醇洗涤，洗涤液并入同一量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液3ml，置25ml量瓶中，加30%乙醇至6ml，照标准曲线制备项下的方法，自“加亚硝酸钠溶液1ml”起，依法测定吸光度，同时取供试品溶液3ml，除不加氢氧化钠试液外，其余同上操作，作为空白，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（mg），计算，即得。
重复以上实验5次取平均值，并在加速实验的条件在第0、1、2、3、6个月重新检测实施例1、对比例7、对比例8的总黄酮的含量，具体见图1。
1.2.2异鼠李素的测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（58：42）为流动相；检测波长为370nm。理论板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过3号筛）0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液备用。精密量取滤液25ml，置具塞锥形瓶中，加盐酸3.5ml，在75℃水浴中加热水解1小时，立即冷却，转移至50ml量瓶中，用适量乙醇洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
重复以上实验5次取平均，并在加速实验的条件在第0、1、2、3、6个月重新检测实施例1、对比例7、对比例8的异鼠李素的含量，具体见图2。
二、黄曲霉体外药敏试验MIC的测定
2.1试剂与仪器
培养箱（海福玛实验设备有限公司），超声提取仪（育模仪器有限公司），Bio-Rad酶标仪（北京线上生物科技有限公司）。
试剂：实施例1-3以及对比例1-6的中药组合物。
2.2 MIC80 测定进行如下试验操作
将2g/ml药液混于SDA液体培养基中，运用倍比稀释的方法将浓度稀释为1024μg/μL、512μg/μL、256μg/μL、128μg/μL、64μg/μL、32μg/μL、16μg/μL、8μg/μL，吸取100μL混有药液的培养基于无菌96孔板中，每个浓度3个重复。
用生理盐水将菌液稀释为103CFU/mL悬液，吸取100μL菌液于96孔板中，使浓度更改为512μg/μL、256μg/μL、128μg/μL、64μg/μL、32μg/μL、16μg/μL、8μg/μL和4μg/μL，阳性对照孔中加入100μL菌液和100μL液体培养基，阴性对照加入200μL液体培养基，37℃培养48h，酶标仪测定各孔OD630值。相同方法制备递减浓度为65μg/μL、60μg/μL、55μg/μL、50μg/μL、45μg/μL、40μg/μL、35μg/μL、30μg/μL的无菌96孔板，测定4种合剂的MIC80，试验重复3次。
结果与分析：实施例和对比例1至3对黄曲霉和烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC)结果，具体如表1所示。
表1黄曲霉的MIC80测定结果
由表1可以看出，实施例1-3、对比例1-6以及对比例9中的10种中药合剂随着中药浓度的增加，其OD630值降低。对于黄曲霉试验表示，当实施例1-3中药药液的浓度大于11ug/uL、14ug/uL、13ug/uL、对比例1-6以及对比例9浓度大于47ug/uL、52ug/uL、34ug/uL、28ug/uL、71ug/uL、39ug/uL和44 ug/uL能抑制80％以上的黄曲霉生长。实验可以看出，实施例1-3所需的浓度显著低于对比例1-6和对比例9。
2.3体外培养基药敏试验
为了实验的准确度，对实施例1、对比例1-6和对比例9的梯度药液进行配置，具体方法为：取349μL浓度为2g/mL的药液混于7.932mL的SDA培养基中制成浓度为88μg/μL的培养基。在生理盐水中加入聚山梨酯80冲洗黄曲霉培养基表面，将制成的菌液稀释为1CFU/ml，取100μL的菌液于培养基中，用玻璃推滑器将菌液均匀推开，于37℃培养箱中倒置培养。相同方法制备22μg/μL、44μg/μL、88μg/μL和乙醇的培养基，记录12h、24h、48h和96h时的菌落个数和菌落直径。其中对照组培养基仅加入聚山梨酯80冲洗黄曲霉培养基表面，不添加任何药液。
利用上述方法观察在12h、24h、48h和96h时的菌落个数。其中对照组不做其他任何药物或者酒精的处理。
结果与分析：黄曲霉培养基药敏试验结果。
实施例和对比例1-6在不同浓度培养基中培养12h、24h、48h和96h时黄曲霉的生长情况如表2所示。
表2不同时间下各实施例不同浓度的霉菌生长比较
注：
实施例122含义为：含义为实施例1中培养基的浓度为22μg/μL，其他实施例以及浓度以此类推。
酒精44和酒精88的含义为：采用浓度为44μg/μL和88μg/μL的酒精进行培养基消毒。
NO的含义为：没有霉菌的产生。
“/”表示培养基含有大量的霉菌，难以用肉眼计数。
黄曲霉培养基药敏试验结果显示：实施例1浓度大于44μg/μL时，培养基中没有菌落长出，浓度为22μg/μL时，96h时只长出1.5CFU。然而君药用量（对比例2）以及君药种类（对比例1）变化的情况下，浓度为88μg/μL 的培养皿中培养24h就长出了菌落，对比例3和4仅仅换了一种药物，最终在培养96h也长出菌落。对比例5只有4味药物，这也是目前市场常用的预防黄曲霉在鸡中传染的药物，可在当浓度为88μg/μL时培养24h培养皿中长出4CFU，对比例6在佐药和使药发生变化的情况下，培养48h时长出2CFU。酒精组同空白对照组相同条件培养24h和12h培养皿中就已经长出菌落。
2.4抑菌活性测定：
用灭菌去离子水分别将实施例1-3、对比例1-6制备的抑制黄曲霉菌的中药组合物稀释到22μg/μL，以无水乙醇做阳性对照组，放入灭菌过的培养基中，空白对照组的培养基中不加任何东西。移取黄曲霉菌孢子液1μL，接种到培养基中间，置于28℃生化培养箱中分别培养3d、9d和15d后，观察黄曲霉菌生长的状况。每个实验组和对照组分别设置3个平行，记录平均结果。采用Graphpad prism进行统计，具体如图3。
图3可以看出，本发明实施例1-3制备的中药组合物可以高效的抑制黄曲霉菌繁殖，且可以在15d之后抑菌率还可以达到80％左右，而对比例1-9的中药组合抑制黄曲霉菌物的抑制率明显下降，说明本发明提供的组合物中原料之间存在“君臣佐使”的相互作用以及疗效的密切配合。
三、本发明中药组合物在预防黄曲霉中毒的研究
3.1试剂与选材
试剂：本发明的实施例1、对比例1、对比例5、对比例9和氟康唑（阳性对照组）
选材：选取70只23日龄的体重（1.1±0.05kg）接近健康的蛋鸡(购自潍坊某企业)分为7组。
3.2给药方式
将本发明药物配置成为2g/ml，灌喂给药，早9点，5ml/只，一天一次2组为染菌试验前灌喂实施例1的中药组合物，3组为染菌试验前灌喂对比例1的中药组合物，4组为染菌试验前灌喂对比例5的中药组合物，5组为染菌试验前灌喂对比例9的中药组合物；空白对照组（1组）灌灌喂同剂量的生理盐水；阳性对照组（7组）喂西药氟康唑；试验组（6组）只进行染菌的试验组。
3.3喂养方式
连续5天灌喂给药，后对除1组外的所有雏鸡用棉签在鼻腔内擦拭黄曲霉液体进行染菌试验，连续染菌7天至雏鸡出现症状。
3.4结果检测
鸡免疫球蛋白GELISA检测试剂，主要检测指标IgG、IgM、IgA。检测此指标的原因在于，该三项指标可以显著提高鸡对于环境中包括黄曲霉在内的各种霉菌的抵抗力，具体的检测结果如下：
1）对于7组中IgG的含量的检测，组间采用单因素比较具体表3和图4所示。
表3 IgG中7组多重实验比较
*. 均值差的显著性水平为 0.05。
从上表可以看出，1组与6组之间存在及其显著性差异，说明黄曲霉侵染成功，2组的IgG的含量显著高于其他组别，即本发明实施例1的中药组合物显著高于其他实施例，说明本发明的中药组合物配伍精准、疗效确切，与其他组相比均具有显著性差异（p<0.05）。
2）对于7个组别中IgM含量的检测，组间采用单因素比较，具体表4和图5所示。
表4 IgM中7组多重实验比较
*. 均值差的显著性水平为 0.05。
从表4可以看出，1组与6组之间存在及其显著性差异，说明黄曲霉侵染成功，2组的IgM的含量显著高于其他组别，即本发明实施例1的中药组合物显著高于其他实施例，说明本发明的中药组合物具有显著提高免疫力的作用，并且效果要优于不同于本发明技术方案的中药组合物。
3）对于7个组别中IgA的含量的检测，组间采用单因素比较，具体检测结果见表5和图6所示。
表5 IgA中7组多重实验比较
*. 均值差的显著性水平为 0.05。
从表5可以看出，1组与6组之间IgA的含量存在及其显著性差异，说明黄曲霉侵染成功，2组的IgA的含量显著高于其他组别，即本发明实施例1的中药组合物显著高于其他实施例，说明本发明的中药组合物配伍精准、疗效确切，免疫功能高于其他组别，在表中可以看出，2组与其他组相比均具有显著性差异（p<0.05）。
Claims (4)
1.一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物，其特征在于，以重量比计算，所述中药组合物由以下成分组成：柴胡15-25份、沙棘13-23份、白芍7-20份、黄连2-10份、金银花2-10份、蒺藜4-14份、生姜2-9份、薄荷2-9份、海风藤3-10份、甘草2-10份。
2.如权利要求1所述的一种预防鸡黄曲霉菌中毒的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下成分组成：柴胡20份、沙棘18份、白芍12份、黄连5份、金银花5份、蒺藜9份、生姜4份、薄荷4份、海风藤5份、甘草5份。
3.一种制备权利要求1或2所述中药组合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在25-35℃水浴加热浸泡3.0-4.5h，然后缓慢升温至50-60℃浸泡1.5-2.5h，最后在65-75℃水浴条件下超声震荡0.5-1.5h，降温并密封于45-65℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持10-20min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加65-75%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.02-1.05的清膏，加乙醇使得醇的含量50-70%，静置10-20小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.08-1.23，得稠膏，真空度-0.08MPa—-0.10MPa，干燥温度85℃-95℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1）将沙棘、白芍、金银花、薄荷在30℃水浴加热浸泡4.0h，然后缓慢升温至55℃浸泡2.0h，最后在70℃水浴条件下超声震荡1h，降温并密封于55℃的反应釜，通入CO2使压力达到20-35Mpa，保持15min后，释放CO2，过滤得到滤液；
2）柴胡、黄连、海风藤、蒺藜粉碎至原料粒径为80目，加70%的乙醇回流提取2次，合并滤液，滤液和药渣备用；
3）生姜、甘草和步骤2）的药渣加水煎煮2次，混合煎液；
4）将步骤1）、2）、3）的液体混合，浓缩至相对密度为1.03的清膏，加乙醇使得醇的含量60%，静置15小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15，得稠膏，真空度-0.08MPa—-0.10MPa，干燥温度85℃-95℃，真空状态下粉碎过80目筛，即得。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Country or region after: China Address after: 261061 No. 88 Shengli East Street, Shandong, Weifang Applicant after: SHANDONG VOCATIONAL ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY College Applicant after: Shandong Tianyu Biological Technology Co.,Ltd. Address before: No. 888-1666, Gao'er Road, Comprehensive Bonded Zone, Weifang City, Shandong Province, 261061 Applicant before: Shandong Tianyu Biological Technology Co.,Ltd. Country or region before: China Applicant before: SHANDONG VOCATIONAL ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY College |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |