CN101181314A - 猴头菌转化银杏叶提取物的制备方法及用途 - Google Patents

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黄达明
张志才
钱静亚
崔凤杰
肖香
管国强
吴其飞
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Abstract

本发明属于生物转化技术领域，为猴头菌转化银杏叶的发酵液及发酵液提取物的制备方法及用途。其将猴头菌接种到麸皮固体培养基，分别培养3－7天后，先转接入种子培养基，培养1－2天后，再转接入发酵培养基中培养。其中种子培养组成为葡萄糖10～40g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L；发酵培养基：葡萄糖10～40g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO4·7H2O 0～1g/L和KH2PO40.1～2g/L，1～10g/L CaCO3，0.2～5％的EGB。本发明的方法成本低，工艺简单，便于管理，节省人力物力，制得的发酵液经糖尿病大鼠实验证明可用于降血糖药物的制备。

Description

猴头菌转化银杏叶提取物的制备方法及用途
技术领域：
本发明属于生物转化技术领域，涉及生物转化及降血糖作用，具体为猴头菌转化银杏叶的发酵液及发酵液提取物的制备方法及用途。
背景技术：
猴头菌(Hericium erinaceus)是著名的药食兼用菌，其性平味甘，具有助消化、利五脏的功能。研究表明，猴头菌具有提高机体耐缺氧能力，提高心血输出量，加速血液循环，抑制肿瘤细胞生长等作用，尤其对胃粘膜有较好的保护作用。
对具有药效的一些已知其结构的天然产物进行生物转化和修饰是当前研究的一个热点。同时对天然产物进行发酵改造，改变药物利用度以产生新的治疗作用，或增强原有疗效，扩大用药品种，已经成为生物转化及制药行业研究的重点之一。银杏叶提取物(Ginkgo biloba L extract，EGB)是从银杏科银杏属植物银杏叶中提取的活性物质，具有改善心脑血管循环、保护肝脏提高机体免疫功能等作用。
猴头菌的研究主要集中于猴头菌深层发酵及菌丝体的研究，银杏叶提取物的研究集中在提取物成分的制备及制备方法，对于猴头菌转化银杏叶提取物得到其发酵液用于降血糖药物的开发，国内还未有专利报道。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种猴头菌转化银杏叶提取物的制备方法及用途，包括培养基的组成及工艺，并经糖尿病大鼠实验证明其转化物具有降血糖作用，为糖尿病的治疗提供一种新的方法。
为了达到上述目的，本发明的转化银杏叶提取物的方法包括以下内容：
猴头菌接种到麸皮固体培养基，分别培养3-7天后，转接入种子培养基。种子培养组成为葡萄糖10～40g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L；培养条件为温度为20～35℃，转速为30-150rpm，通气量为0.1∶1～2∶1，初始pH范围为4.0～7.5。培养1-2天后，转接入发酵培养基中培养。发酵培养基：葡萄糖10～40 g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10 g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO4·7H2O 0～1g/L和KH2PO4 0.1～2g/L，1～10g/LCaCO3，0.2～5％的EGB。发酵培养条件为，通气量为0.1∶1～2∶1，转速为30-150rpm，温度为20～35℃，初始pH范围为4.0～7.5。
本发明的方法成本低，工艺简单，便于管理，节省人力物力。制得的发酵液经糖尿病大鼠实验证明可用于降血糖药物的制备。
具体实施方式：
实施例1
猴头菌接种到麸皮固体培养基，分别培养3-7天后，转接入种子培养基。经种子培养25-28℃，150r/min培养1-2天后，转接入添加发酵培养基中培养。培养基组成：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，麸皮5g/L，玉米粉20g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，  KH2PO42 g/L，EGB 5g/L和10g/L CaCO3。发酵工艺：转化温度为30℃，初始pH范围为7.5。发酵培养条件为：通气量为2∶1，转速为150rpm，温度为35℃。
制得发酵液后进行糖尿病大鼠降血糖实验，正常雄性SD大鼠实验前适应性喂养5d，选择10只大鼠作为正常对照组。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200 mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，测血糖，取血糖值＞11mmol/L的作为实验性糖尿病模型鼠。给药方式如表1所示，实验结果见表2。
表1各组动物给药方式
    组别     制备方法
  模型阴性对照组猴头发酵液组0.1％EGB组猴头转化0.1％EGB发酵液组猴头发酵液+0.1％EGB组阳性对照组(二甲双胍)     0.9％生理盐水猴头菌发酵离心后取上清液EGB溶于0.9％生理盐水，配制成1％浓度(w/v)猴头菌接种于含有1％EGB(w/v)的培养基，发酵离心后取上清液EGB溶于猴头菌发酵上清液，配制成1％浓度(w/v)二甲双胍溶解于0.9％生理盐水，配制成4g/L浓度
表2不同处理组与对照组实验前后空腹血糖含量的变化
    组别     鼠数   试验前     试验后     血糖降低绝对值
    模型阴性对照组转化组发酵液+1％EGB发酵液组1％EGB组     1010101010   19.34±1.6519.54±2.3118.30±1.9119.28±1.3618.61±1.72     19.05±0.98··14.59±1.01**15.98±1.73**·17.64±1.63*··16.25±1.83**·· 4.95±2.942.32.±0.96·1.64±0.82··2.36±1.23·
    二甲双胍组     10   19.21±1.60   11.66±0.91**··     7.55±2.04·
实施例2
猴头菌接种经麸皮固体培养基和种子培养基培养同施例1。培养1-2天后，转接入添加发酵培养基中培养。发酵培养基组成：葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，麸皮1g/L，玉米粉5g/L，KH2PO40.1g/L，0.5％的EGB和1g/L CaCO3。发酵培养条件为：通气量为0.1∶1，转速为30rpm，温度为20℃。
制得发酵液后进行糖尿病大鼠降血糖实验，正常雄性SD大鼠实验前适应性喂养5d，选择10只大鼠作为正常对照组。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，测血糖，取血糖值＞11mmol/L的作为实验性糖尿病模型鼠。给药方式同于实施例1，实验结果如表2所示。
表2不同处理组与对照组实验前后空腹血糖含量的变化
  组别     鼠数   试验前   试验后     血糖降低绝对值
  模型对照组转化组发酵液+1％EGB发酵液组1％EGB组二甲双胍组     101010101010   19.12±2.1318.54±1.9619.30±2.5319.01±1.4618.76±1.9219.17±2.60   19.05士0.98··15.13±1.01**17.05±1.73*·17.74±1.57··16.25±2.12**··11.66±2.11**·· 3.412.251.272.517.51
实施例3
猴头菌接种经麸皮固体培养基和种子培养基培养同施例1。种子培养1-2天后，转接入发酵培养基中培养。培养基组成：葡萄糖25g/L，蛋白胨6g/L，麸皮3g/L，玉米粉12.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L和KH2PO4 1g/L，2.5％的EGB和5g/L CaCO3。发酵培养条件为：通气量为1∶1，转速为90rpm，温度为28℃。
制得发酵液后进行糖尿病大鼠降血糖实验，正常雄性SD大鼠实验前适应性喂养5d，选择10只大鼠作为正常对照组。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，测血糖，取血糖值＞11mmol/L的作为实验性糖尿病模型鼠。给药方式同于实施例1，实验结果如表3所示。
表3  不同处理组与对照组实验前后空腹血糖含量的变化
    组别     鼠数   试验前     试验后     血糖降低绝对值
    模型阴性对照组转化组发酵液+1％EGB发酵液组1％EGB组二甲双胍组     101010101010   16.6134±1.9016.52±2.1716.13±1.8916.31±1.4116.61±1.6216.21±1.67     16.05±1.01··11.01±1.23**12.98±1.69*·14.71±1.72 *··13.25±1.79**··8.66±0.99**·· 5.513.151.593.367.55
以上已详细描述了本发明的实施方案，对本领域技术人员来说很显然可以做很多改进和变化而不会背离本发明的基本精神。所有这些变化和改进都在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.猴头菌转化银杏叶提取物的制备方法，其特征在于以猴头菌为出发菌株，进行一级种子培养和发酵培养，得到具有降低血糖的猴头菌发酵液；其中所述的种子培养基葡萄糖10～40g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，培养条件为温度为20～35℃，转速为30-150rpm，通气量为0.1∶1～2∶1，初始pH范围为4.0～7.5；发酵培养基组成为：葡萄糖10～40g/L，麸皮1～5g/L，蛋白胨2～10 g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO4·7H2O 0～1 g/L和KH2PO40.1～2g/L，1～10g/L CaCO3，0.2～5％的EGB；发酵培养的条件是：温度为20～35℃，搅拌速率80～200 rpm，初始pH范围为4.0～7.5；通气量为0.1∶1～2∶1。
2.根据权利要求1所述的制备方法得到的猴头菌转化银杏叶提取物的用途，其特征是用于制备预防或治疗糖尿病的药物或保健品。
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