CN1612743A - 草药组合物phy906及其在化疗中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于提高包括用于治疗疾病、尤其是治疗病毒性感染和癌瘤在内的药物的治疗指数的草药组合物。本发明提供了用于改善进行化疗个体的生命质量的方法。此外，本发明通过经对进行这类化疗的人给予草药组合物PHY906来提高化疗药物的治疗指数而改善了对疾病的治疗方法。

Description

草药组合物PHY906及其在化疗中的应用
发明领域
本发明涉及用于提高包括用于治疗疾病、尤其是治疗病毒性感染和癌瘤在内的药物的治疗指数的草药组合物和草药提取物。可以将本发明的方法用于改善进行化疗个体的生命质量。本发明特别涉及通过用草药组合物PHY906来提高化疗药物的治疗指数而治疗疾病的方法。更具体地说，本发明涉及癌症的治疗方法，该方法通过用草药组合物PHY906提高癌症化疗药物的治疗指数来进行。
发明背景
将本文中的所有公开出版物和专利申请引入作为参考，就如同特别和分别将各公开出版物或专利申请引入作为参考的程度相同。
I.草药
草药已经被亚洲和欧洲人应用多年。在美国(US)，草药在食品添加剂工业上以及在全身治疗的药物领域已经有经济价值。大约有三分之一的美国人口已经至少一次试用过某些形式的可选择的药物(Eisenberg等，《新英格兰药物杂志》(N.Engl.J.Med.)，328：246-252(1993))。植物性药材还成为鉴定治疗疾病的新型活性剂的焦点。来源于植物提取物的活性化合物为制药工业所持续关注。例如，已经发现获自短叶紫杉树树皮的抗肿瘤药物紫杉醇可用于治疗乳腺癌(Gomez-Espuch等，《骨髓移植》(Bone MarrowTransplant)，25(3)：231-235(2000))。
在全世界存在许多草药分支，诸如印度草药、Unani、Sida和中药(TCM)。尽管现代西药一般由给药能够介入特定生化途径的单一化学物质的步骤组成，但是每种TCM制剂均含有数以百计的来自几种草药的化学物质，它们以协调方式用于与体内的多种靶物发生相互作用。尽管以一种显著方式为草药组合物和这些古老的草药处方提供了实践经验，但是它们也得到可可变程度的一组理论的支持，这些理论在解剖学、药理学、病理学、诊断治疗等方面均不同于现代西医的理论。在不同的草药领域中，TCM已经发展出了一套悠久的更为完整的理论，这些理论已经由治疗大中华区和包括韩国和日本在内的东亚的庞大人群(＞13亿人)的当地临床医师进行了充分记录和实践。
II.中药
西药一般使用纯化的化合物、既可以是天然的也可以是合成的，它们大部分定向于单一的生理学靶物。然而，TCM中所用的组合物通常由基于独特和整体观念而定向于体内多种靶物的多种草药和化合物组成。TCM主要应用使用不同组合和配制方法加工的粗天然产品来治疗不同的结构，从而产生的副作用较少。TCM的巨大潜力还未得到世界大多数人的认可。
植物提取物的混合物而非单一化合物在全世界范围内广泛用于控制疾病且在西方国家的认知度正在得到逐步提高(Okada，F.，《柳叶刀》(Lancet)348：5-6(1996)；Xiao PG，Xing ST和Wang LW，《人种药理学杂志》(Journal of Ethnopharmacol)38：167-175(1993))。中药的应用基于以同时且协同方式对多种分子靶物和细胞机制起作用的草药制剂中的许多化学成分的相互作用。这些成分具有不同的功能；有些成分可以产生功效，而其它成分可以降低毒性或增加生物利用度。中草药制剂可能是已知最好的植物药物且已经来源于在千年以上的人类中的经验观察结果。在许多情况中，指定中药制剂的所述适应症是多种的而非单一的。这并不令人意外，因为在一种制剂中许多植化组分可以对多个靶物发挥作用。可能的情况是一种中药制剂可以缓解一种以上与应用癌症化疗剂相关的副作用。
在典型TCM处方中的草药被指定作为君药和包括辅药、佐药和使药在内的臣草药起作用。君药在治疗疾病病因或主要症状方面产生主导作用。臣药帮助强化主要草药的作用且在治疗附加症状方面起主导作用。存在三种类型的佐药：1)提高主要草药或辅助性草药的治疗作用或治疗第三位症状的那些草药；2)减少或消除主要和辅助性草药的毒性和其它副作用的那些草药；和3)对不特别受主要草药影响的互补性靶组织起作用的那些草药。使药将其它草药的作用引导至侵害部位和/或协调并介导处方或配方中其它草药的作用。与由单一植物一种或多种部位组成的大多数草药或补充剂相反，所述TCM的作用定向于多组织。
例如，众所周知的TCM处方-用于治疗哮喘的″麻黄汤″由麻黄、桂枝、苦杏仁和甘草组成。作为君药的麻黄散寒、发汗并促使肺气流动以缓解哮喘的主要症状。作为臣药的桂枝提高麻黄的发汗作用并温经以确保阳气流动而减轻头痛和全身痛。作为佐药的苦杏仁促进肺气的反向流动并强化麻黄缓解哮喘的作用。作为使药的甘草缓和麻黄与桂枝的作用以便确保生命之气的体内平衡。尽管4种草药中的每一种均明确地显示出其相应的活性，但是当将它们组合时，它们可以彼此互补和补充。实际上，可以将君药与一种或多种臣药一起开据处方，这取决于患者描述的症状((Prescriptions ofTraditional Chinese Medicine)，第1节，第10-16页，主编E.Zhang，出版社：上海中医药大学(Publishing House，Shanghai University ofTraditional Chinese Medicine)，1998)。
气指的是体内的总能量。草药用于实现气的最佳平衡；认为这种平衡本身在患者的总体健康和活力中显示出来(K.C.Huang，《中草药药理学》(ThePharmacology of Chinses Herbs)，第2版，第2页，1999，CRC Press)。
指导用草药和诸如针灸这样的其它方式治疗疾病的TCM的主要理论是：1)阴阳学说；2)五行学说；3)脏腑学说；4)气、血和津液学说；和5)经络学说。
在TCM中，进行适当诊断的第一位重要的方面在于确定疾病属阴还是属阳，中国人认为这两种力量控制着宇宙的活动方式。阴代表自然的阴性面，包括暗、静、深、寒和湿；而阳代表阳性成分，包括光、活动、高、热和干(K.C.Huang，《中草药药理学》(The Pharmacology of Chinses Herbs)，第2版，第2页，1999，CRC Press)。通常将阴解释为负面力量，而阳代表正面力量。这两种力量互补且它们可以相互依存。因此，TCM试图实现阴与阳之间的平衡。
在基于阴与阳的基本原理诊断患者的过程中，那些具有发热、口干、便秘或具有脉速情况的患者属于阳性。那些具有恶寒、不口渴且腹泻并表现出脉缓的个体属于阴性。还可以按照阴阳学说将草药的性、味和功能分类。例如，寒性与凉性的草药属阴，而温性与热性的草药属阳。酸、苦和咸味的草药属阴，而辛、甜和淡味的草药属阳。具有收敛和沉降功能的草药属阴，而具有发散、上行和上浮功能的草药属阳。在TCM中，治疗机理基于阴阳的主导或薄弱。根据草药的阴阳特性及其使阴阳失衡恢复的功能开据其处方。在如此操作的过程中获得了有益的治疗作用。
根据五行学说，构成物质世界的有5种基本物质(即木、火、土、金和水)。在TCM中，已经将该理论用于解释人体生理学和病理学并用于指导临床诊断和治疗。中医已经应用五行相生、相克、相乘和相侮的法则设计出了许多有效和特定的治疗方案，诸如培土生金(强化脾的功能以有益于肺)、填水养木(滋养肾精以有益于肝)、扶土克木(补充脾的功能以治疗肝的机能亢进)和强水控火(填肾精以治疗心脏的机能亢进)。特别给某些草药的特性赋予五行中的每一种的目的在于指导对TCM处方的开据。
在TCM中，将人体内部器官分成三组：五脏(心、肝、脾、肺和肾)；六腑(胆囊、胃、大肠、小肠、膀胱和三焦)；特别器官(脑、骨髓、骨、血管、胆囊和子宫)。在TCM中，五脏六腑不仅是解剖学单位，而且是涉及不同器官中相互作用的生理学和病理学的概念。例如，心也涉及某些心理功能并影响血液、毛发、舌和皮肤的功能。阴阳五行影响这些内部器官、脏腑和特别器官中的相互作用。相互作用理论的复杂性用于解释如下所讨论的开据处方的草药所针对的疾病的病理学情况。
在TCM中草药处方从诊断开始，这种诊断由4个主要项目组成：问诊、望诊、听诊和闻诊、取脉和扪诊。在问诊阶段中，汇集了包括主要症状的特征在内的大量信息。例如，如果主要症状的特征在于上腹部区域中有可以通过温暖和压迫而减轻的浊音，那么这将提示脾阳不足。腰膝酸软、对包括极端寒冷在内的寒冷不耐受显示出肾阳虚。在望诊阶段中，对活力、皮肤颜色以及一般表象和舌的情况进行观察。例如，苍白肤色在体内相当于秋肺，其气必燥。这种情况可以在阳气虚和气血循环受阻或经络寒导致它们收缩时发生。
在TCM中，正是由气、血和津液带来了五脏六腑、经络、组织和其它用于执行其生理功能的器官所需的能量且气、血和津液的形成和代谢取决于它。TCM处方考虑到了草药对气和血在治疗中的作用。
TCM保持了经络及其分支部分分布在整个体内。草药正是通过它们发挥对病理性靶物的影响并达到了对疾病改善的目的。例如，麻黄对肺经和膀胱经起作用以便诱发汗出而缓解哮喘并促进利尿。如上所述，针灸的临床应用也受经络学说的指导。
概括地说，尽管可以将TCM中各草药的性质和特性赋予阴阳和五行之一，但是它们通过经络起作用且通过气、血和津液来介导以便对诸如脏腑这样的靶物起治疗作用。致病因素可以通过极为相同的经络系统伪装诱骗以便对脏腑功能产生不良影响且由此导致疾病。
III.草药组合物在美国获得专利权的情况
已经授权了用于治疗患有各种疾病和其它与健康相关问题的包括人在内的哺乳动物的草药组合物的美国专利。例如，已经发现包括牡丹的草药组合物用于治疗包括因疱疹病毒和脊髓灰质炎病毒而导致的感染在内的病毒性感染(美国专利US 5,411,733)。
可以用含有植物生物碱汉防己甲素的药物组合物治疗眼部炎症(美国专利US 5,627,195)。美国专利US 5,683,697中公开了具有消炎、抗发热、祛痰或止咳作用的药物组合物，其中该组合物包括来自楝属、Angepica、石斛属、凤仙花属、柑桔属、桑寄生属、青葙属、白前属和瑚珊菜属的植物部位。已经发现包括山姜属、菝葜属、青牛胆属、蒺藜属、睡茄属和姜属的根、根茎和/或赘生物提取物的草药制剂可减轻或缓解与类风湿性关节炎、骨关节炎和反应性关节炎相关的症状并可减少促炎细胞因子的产生(美国专利US 5,683,698)。已经证实含有滑石、蚕粪便和12种不同草药组分的组合物可有效缓解哺乳动物的炎症、疼痛和发热(美国专利US 5,908,628)。
还授权了用于治疗癌症和与癌症相关的健康问题的草药组合物的专利。例如，美国专利US 5,437,866中公开了包括草药混合物的组合物，所述的草药包括半枝莲的种类及其提取物，该组合物用于改善人体内的恶性肿瘤的影响。美国专利US 5,665,393中公开了包括洋甘草和黄芩、碎米桠和锯齿棕的不同草药组合物用于治疗前列腺癌。此外，抗肿瘤草药组合物包括黄芪属的根(Astragali radix)、芍药属的根、樟属的树皮(Cinnamomicortex)、Rhemannia的根和甘草属的根(Glycyrrhizae radix)用于提高丝裂霉素D和阿霉素的抗肿瘤活性(美国专利US 4,613,591和美国专利US 4,618,495)。
IV.癌症化疗的不良作用
医学肿瘤学在过去几十年中对改变药物实践具有巨大影响，此时已经确定了用于各种致死性恶性肿瘤的药物治疗方法。然而，通常使用的极少几类药物具有较窄的治疗指数和比抗肿瘤药物产生的有害副作用的更大的可能性(Calabresi和Chabner，1996)。
类似于仅具有中等程度的选择性的许多其它有效药物的抗癌药可以产生严重的毒性。与癌症化疗相关的常见不良作用包括但不限于胃肠并发症(例如腹泻、恶心、呕吐、厌食和粘膜炎)、疼痛、食欲缺乏、骨髓/血液并发症(例如白细胞减少症、嗜中性白细胞减少症、贫血、出血和血小板减少症)、疲劳和睡眠失调。
本发明的本发明者对已经用于治疗与癌症化疗相关的症状的中药制剂进行了文献研究。据报导含有7种草药的植物制剂TJ-14可有效地预防癌症患者中由CPT-11导致的腹泻(Kase，Y，Hayakawa T，和Aburada M.等，《日本药理学杂志》(Jpn.J.Pharmacol.)75，407-413(1997)；Marita M.，Nagai E和Hagiwara H.等，《异生物学》(Xenobiotica.)23，5-10(1993))。提出了腹泻因肠微生物产生的CPT-11活性代谢物SN-38累积而发生。本发明者认为B-葡糖醛酸糖苷酶抑制剂贝加因是缓解由CPT-11产生的腹泻的TJ-14中的活性组分(Kase，Y，Hayakawa T，和Aburada M.等，《日本药理学杂志》(Jpn.J.Pharmacol.)75，407-413(1997)；Marita M.，Nagai E和Hagiwara H.等，《异生物学》(Xenobiotica.)23，5-10(1993)；Takasuna K，Takehiro H，Hirohashi M，等，《癌症化疗药理学》(Cancer Chemother Pharmacol.)42：280-286(1998)；Takasuna K，Takehiro H，Hirohashi M，Kato M，等，《癌症研究》(Cancer Res.)56：3752-3757(1996))。因此，评价了含有富含贝加因的黄芩根的几种中草药制剂。在实验室检验的几种制剂中，本发明者选择了PHY906。已经在1500多年以前确定了这种特定制剂可用于治疗腹泻、腹部痉挛、发热、头痛、呕吐、恶心、极度口渴和下贲门扩张(汉朝的《伤寒论》(Shang Han Lun of the Han Dynasty)；Hong-Yen Hsu和Chau-ShinHsu，Commonly used Chinese Herb Formulas With Illustrations，Oriental Healing Art Institute，California，(1980))。PHY906由具有一定比例的4种草药黄芩(Scutellariae baicalensis Georgi)(scute)、芍药(Paeonia lactiflora pall)(白芍根)、甘草(Glycyrrhizae uralensisFisch)(甘草)、大枣(Fructus ziziphi)(海枣)的果实组成，其混合比例分别为1.5∶1.0∶1.0∶1.0(干重)。应注意各草药具有不同的药理学分布，包括如表1中所示的抗癌和抗病毒活性、血液学和免疫学刺激作用、止痛活性、血管舒张作用、保肝作用、抗氧化作用和改善食欲作用。
           表1.PHY 906制剂中各草药推定的生物学活性。
      抗癌      免疫调节          抗菌      消炎      神经系统       其它
黄芩   +       +                    +         +           -          抗病毒，抗菌，抗腹
               ↑↓淋巴细胞与巨                                      泻，利尿，血管舒张，
                   噬细胞活性                                        ↓脂，抗凝，抗氧化，
                   双功能                                            止吐，保肝
芍药   +       +                    +         +           +          血管舒张，保肝，利
               ↑↓巨噬细胞活性                           止痛       尿，抗凝，↓肠运动
                   双功能调节剂
大枣   +       +                    -         -           +          保肝，肌持久力，改
               抗IgE作用                                  ↑睡眠     善食欲
甘草   +       +                    +         +           +          抗利尿，↓肠运动，↓
              ↑巨噬细胞活性                              止痛       脂(LDL，TC)，抗氧
              ↑干扰素&↑IL-1                                        化，抗病毒，抗凝，
              ↑淋巴细胞                                             抗补体
              ↑干扰素&↑IL-2
              ↑NK活性
              ↓IgE↑提高↓下降↑↓：下降或提高           +：有作用    -：无作用
截止到目前为止，仅将PHY906作为单一药物而非与合成药物组合开据处方。然而，可以理解的是文献记载的PHY906的应用之一实际上可以用于缓解因化疗诱发的副作用。尽管已经鉴定了PHY906中4种草药的每一种内的一些主要化学成分且已经检验出了其药理活性(中国植物学上海科学技术出版公司(Chinese Botany Shanghai Science and Technology PublishingCompany)(1999)；Huang，H-C，Wang，H-R，和Hsieh，L-M.，《欧洲药理学杂志》(Eur J of Pharmacol)251：91-93(1994)；Lin，C-C和Shieh，《美国中药杂志》(Am J Chinese Med)1：31-36(1996)；Tang，W.和Eisenbrand，G.，《植物来源的中药：化学、药理学和在传统与现代药物中的应用》(ChineseDrugs of Plant Origin：Chemistry，Pharmacology and Use in Traditionaland Modern Medicine)第919-929页。Springer-Verlag Press，New York，(1992))，但是不可能完整地预计所鉴定组分的生物特性。
发明概括
本发明的本发明者已经令人意外地发现可以将草药组合物PHY906用于提高一种或多种化疗用化合物的治疗指数和调节造血活性的各种方法。可以将本文所公开的方法用于改善化疗患者的生命质量且因与PHY906一起给药时化疗剂毒性降低而增加化疗剂的剂量。
本发明提供了混有药物上可接受的载体且可以包括或不包括一种或多种化疗用化合物或抗病毒剂的草药组合物PHY906。选择用于制备特定PHY906制剂的4种植物种类各自选自4种不同属草药之一：黄芩属(Scutellaria)、甘草(Licorice)、白芍药(Peony Alba)和枣属果实(Ziziphi Fruit)。选择草药以便获得一种或多种PHY906的所需效果，其中这类效果包括但不限于提高一种或多种化疗用化合物的治疗指数、增强一种或多种化疗用化合物的抗肿瘤活性或提高一种或多种抗病毒剂的抗病毒活性、调节造血和免疫活性以及改善进行化疗或抗病毒疗法的哺乳动物的生命质量。
本发明包括的化疗用化合物或化疗剂包括但不限于那些用于治疗癌症、寄生虫感染和微生物感染的化疗用化合物或化疗剂。
本发明包括的抗病毒化合物或抗病毒剂包括那些用于治疗病毒性感染、疾病或病症的化合物或抗病毒剂。
本发明的组合物和方法用于治疗任何哺乳动物。更具体地说，本发明的方法用于治疗人。
本发明进一步提供了包括下列成分的组合物：药物上可接受的载体；来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属(Scutellaria)、甘草属(Glycyrrhiza)、枣属(Ziziphus)和芍药属(Paeonia)；和一种或多种化疗用化合物。优选该组合物包括：药物上可接受的载体；包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和包括一种或多种化疗剂或抗病毒剂的化疗制剂。更优选所述的草药制剂包括来自黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的材料或化学物质。最优选本发明提供了包括黄芩(Scutellaria baicalensis)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、枣(Ziziphus jujuba)和芍药(Paeonialactiflora)的这类组合物。
本发明的草药组合物特别用于癌症化疗，诸如但不限于使用伊立替康(irinotecan)制剂(CPT-I1，Camptosar)、5-氟尿嘧啶(FU或5-FU)、VP-16和β-L-二氧戊环-胞苷(L-OddC)、亚叶酸(LV)及其组合的疗法，其中所述的组合疗法诸如但不限于FU/LV和CPT-11/FU/LV。
本发明的草药组合物特别用于抗病毒疗法。优选将所述的草药组合物与用于治疗AIDS的抗病毒剂一起给药。更优选将所述的草药组合物与选自AZT、D4T和DDI的抗病毒剂一起给药。
本发明提供了提高用于治疗癌症的癌症治疗化合物的治疗指数的方法。本发明还提供了提高用于抗病毒疾病疗法的抗病毒剂的治疗指数的方法。更具体地说，本发明提供了包括给予一种或多种抗癌或抗病毒剂与治疗有效量的一种组合物的步骤的这类方法，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质或包括下列各草药属的植物种类的草药制剂：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。本发明的方法提供了来自这类草药的材料或化学物质或包括这类草药的草药制剂的应用，其中所述的材料或化学物质或草药制剂是由浓缩的含水液体得到的成粒提取物形式。这类组合物可以是可摄取的形式，诸如但不限于粉剂、胶囊剂、液体和片剂。另一方面，本发明应用栓剂形式的这类组合物。
本发明还提供了哺乳动物疾病的治疗方法，该方法包括根据这类治疗给药需要给予治疗有效量的一种组合物的步骤，该组合物包括：药物上可接受的载体；来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和一种或多种化疗用化合物。
本发明进一步提供了哺乳动物疾病的治疗方法，该方法包括根据这类治疗需要给予治疗有效量的一种或多种化疗用化合物或抗病毒剂和一种组合物的步骤，该组合物包括：药物上可接受的载体；来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质或选自下列各草药属的植物种的草药制剂：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。本发明包括在给予一种或多种化疗用化合物之前给予所述组合物的这类方法。本发明还包括在给予一种或多种化疗用化合物之后给予所述组合物的这类方法。
本发明提供了为治疗疾病而调节造血活性的方法，该方法通过根据这类治疗需要对哺乳动物给予治疗有效量的一种组合物的步骤，该组合物基本上由药物上可接受的载体和来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质或包括下列各草药属的植物种类的草药制剂组成：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。本发明提供了这类方法，其中所述来自草药的材料或化学物质是由浓缩的含水液体得到的成粒提取物的形式。本发明特别提供了这类方法，其中所述的组合物是可摄取的形式，诸如但不限于粉剂、胶囊剂、液体和片剂。另一方面，本发明提供了所述组合物是栓剂形式的这类方法。
本发明还提供了改善进行化疗或抗病毒疗法的哺乳动物的生命质量的方法，该方法包括治疗有效量的一种或多种化疗用化合物和一种组合物的结合给药步骤，所述的组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
本发明关注包括一种或多种化疗剂的化疗制剂与一种组合物结合给药的方法，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和包括下列各草药属的植物种类的草药制剂：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
本发明还关注包括一种或多种抗病毒剂的抗病毒制剂结合一种组合物给药的方法，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和包括下列各草药属的植物种类的草药制剂：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
本发明应用所公开的草药组合物来提高化疗剂的抗肿瘤活性、提高抗病毒剂的抗病毒活性、降低化疗剂或抗病毒剂的毒性、调节哺乳动物的造血和免疫活性并改善进行化疗或抗病毒疗法的哺乳动物的生命质量。
本发明在一个方面中公开了一种治疗方法，该方法包括使用一种或多种化疗用化合物和一种组合物的化疗方案，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂。本发明在另一个方面中公开了一种治疗方法，该方法包括使用包括一种或多种抗病毒剂和一种组合物的抗病毒方案，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂。
此外，本发明提供了包括使用一种或多种化疗用化合物或抗病毒化合物与一种组合物的治疗方案，其中所述的组合物包括：药物上可接受的载体和包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂。
另外，本发明公开了包括三种化疗用化合物、优选CPT-11、FU和LV和包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂或来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质的组合物和化疗方案：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。本发明关注包括一种或多种抗病毒剂的抗病毒疗法。
附图简述
附图1.不同剂量的CPT-11在不带有肿瘤的BDF-1小鼠体内的作用。仅在第0天经腹膜内(i.p.)给予CPT-11(各组中N＝5)。
附图2.PHY906对CPT-11治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体重的作用。仅在第0天经腹膜内给予CPT-11(400mg/kg)。在指定的剂量下从第0天开始经口服每天给予两次PHY906(各组中N＝5)。
附图3.PHY906对CPT-11治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠肿瘤生长的作用。仅在第0天经腹膜内给予CPT-11(400mg/kg)。从第0天开始经口服每天给予两次PHY906(500mg/kg)、持续8天。使用斯氏配对t-检验(student’s paired t-test)计算p值。
附图4.PHY906对CPT-11治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠血液变化的作用(各组中N＝5)。仅在第0天经腹膜内给予CPT-11(400mg/kg)。从第0天开始经口服每天给予两次PHY906(500mg/kg)、持续4天(各组中N＝5)。
附图5.PHY906对FU/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体重的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图6.PHY906对FU/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠肿瘤生长的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图7.PHY906对FU/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠血液变化的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图8.PHY906对CPT-11/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠肿瘤生长的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)、CPT-11(200mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图9.PHY906对CPT-11/FU/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠肿瘤生长的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)、CPT-11(300mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图10.PHY906对CPT-11/FU/LV治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体重变化的作用。如材料和方法部分中所述仅在第0天的1小时期限内经腹膜内依次给予LV(100mg/kg)、CPT-11(300mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第0天LV的最初剂量后30分钟经口服给予PHY906并连续给予4天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图11.PHY906对CPT-11治疗的带有人HepG2肿瘤的NCr-裸鼠肿瘤生长的作用。仅在第0天经腹膜内给予CPT-11(200mg/kg)。在第0天给予CPT-11前30分钟经口服给予PHY906并连续给予8天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图12.PHY906对CPT-11治疗的带有人HepG2肿瘤的NCr-裸鼠体重的作用。仅在第0天经腹膜内给予CPT-11(200mg/kg)。在第0天给予CPT-11前30分钟经口服给予PHY906并连续给予8天、每天2次，剂量500mg/kg(各组中N＝5)。
附图13.L-OddC与PHY906对带有结肠38的BDF-1小鼠的抗肿瘤作用。给5只雌性BDF-1小鼠(8-10周龄，平均重量约20g)经皮下注射结肠38肿瘤细胞。仅在第0天经腹膜内注射一次剂量的L-OddC(β-L-二氧戊环-胞苷25mg/kg，q.d.X5)。在第0天且以每日剂量为基础经口服给予PHY906(1g/kg，b.i.d.)，直到本完成实验为止(q.d.是″每日″的缩写，它指的是每天一次；q.d.X5指的是5只小鼠中的每一只均接受每天一次的剂量；b.i.d.是″每天2次″的缩写，它指的是每天两次)。如材料和方法部分中所述计算肿瘤重量。
附图14.VP-16与PHY906对带有结肠38的BDF-1小鼠的抗肿瘤作用。给5只雌性BDF-1小鼠(8-10周龄，平均重量约20g)经皮下注射结肠38肿瘤细胞。仅在第0天经腹膜内注射一次剂量的VP-16(依托泊苷25mg/kg，q.d.X5)。在第0天且以每日剂量为基础经口服给予PHY906(1g/kg，b.i.d.)，直到本完成实验为止。如材料和方法部分中所述计算肿瘤重量。
附图15.5-氟尿嘧啶(FU)与PHY906的抗肿瘤作用。给5只雌性BDF-1小鼠(8-10周龄，平均重量约20g)经皮下注射结肠38肿瘤细胞。在第0天经腹膜内仅注射一次剂量的FU(25mg/kg)。在第0天仅口服给予PHY906(1g/kg，b.i.d.)，且以每日剂量为基础直到本完成实验为止。如材料和方法部分中所述计算肿瘤重量。
附图16.5-氟尿嘧啶(FU)与PHY906的抗肿瘤作用。给5只雌性BDF-1小鼠(8-10周龄，平均重量约20g)经皮下注射结肠38肿瘤细胞。仅在第0天经腹膜内注射FU(30mg/kg，q.d.X 5)。在第0天仅口服给予PHY906(1g/kg，b.i.d.)，且以每日剂量为基础直到本完成实验为止。如材料和方法部分中所述计算肿瘤重量。
附图17.CPT-11(FU)和PHY906与洛哌丁胺对带有结肠38的BDF-1小鼠的抗肿瘤作用。给5只雌性BDF-1小鼠(8-10周龄，平均重量约20g)经皮下注射结肠38肿瘤细胞。小鼠分为不接受治疗的、单独接受PHY906的、单独接受CPT-11的、接受CPT-11和PHY906的或单独接受洛哌丁胺的。如附图3中所述给予PHY906和CPT-11。仅在第0天经腹膜内注射一次剂量的洛哌丁胺(2mg/kg，p.o.(口服给药)，b.i.d.)。按照材料和方法部分中所述计算肿瘤重量。
附图18A-C.CPT-11/FU/LV在血浆中的药物动力学特性。PHY906-6是临床批号的PHY906。SN-38是CPT-11的活性代谢物。FUR+FUMP是核苷和FU的核苷代谢物。
附图19A-C.CPT-11/FU/LV在肝脏中的药物动力学特性。PHY906-6是临床批号的PHY906。SN-38是CPT-11的活性代谢物。FUR+FUMP是核苷和FU的核苷代谢物。
附图20A-B.CPT-11/FU/LV在肿瘤中的药物动力学特性。PHY906-6是临床批号的PHY906。SN-38是CPT-11的活性代谢物。
优选实施方案的详细描述
癌症化疗剂通常诱发可以影响患者生命质量并干扰治疗方案的严重不良副作用。本发明部分基于对中草药与标准抗癌药联用用于减轻癌症化疗剂副作用并改善进行化疗的患者的生命质量的发现。在中国已经将由4种不同草药组成的植物性药材制剂PHY906用于治疗各种胃肠疾病和其它疾病。本发明基于在动物模型中进行的实验结果，该结果用于评价PHY906在缓解由癌症化疗剂在结肠直肠癌患者体内诱发的副作用的潜在功效。本发明特别基于对PHY906减轻由CPT-11、FU、FU/LV、CPT-11/FU/LV、L-OddC、VP-16或CPT11/洛哌丁胺疗法诱发的各种宿主毒性并维持且甚至强化所述化疗剂的抗肿瘤活性的发现。更具体地说，PHY906通过强化治疗剂的抗肿瘤活性和减轻不同宿主的毒性而提高了CPT-11和CPT-11/FU/LV三联疗法(triplecombination)的治疗指数。这些发现并不限于一种特定的抗癌药或一种特定的肿瘤模型。
本发明还部分基于对可以用于与各种抗癌药联用以降低限制剂量的毒性和提高所述抗癌药功效的方案的发现。这一发现对用于人癌症治疗手段的医疗设备而言是一个极其重要的补充。
I.定义
除非另有说明，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属的本领域技术人员通常理解相同的含义。尽管在实施或检测本发明的过程中使用与本文所述相似或等同的任意方法和材料，但是描述的是优选的方法和材料。
本文所用的″癌症化疗″或″癌症化疗剂″指的是用于治疗肿瘤疾病或癌症的化疗剂。
本文所用的″化疗″指的是通过化学物质或药物治疗疾病的治疗方法。
本文所用的术语″化疗制剂″指的是包括化疗剂的组合物。
本文所用的术语″提取物″指的是通过使用适宜溶媒(溶剂)提取出活性成分、蒸发全部或接近全部溶剂并将残余物的质量或粉末调节至规定标准而获得的植物或动物药的浓缩制品。制备半固体或糖浆状稠度、丸药状或固体和干粉这三种形式的提取物(参见http：//www.graylab.ac.uk/cgi-bin/omd？query＝extrat)。
在一种实施方案中，提取物是各种固体和半固体剂型中所用粗药物的浓缩形式(在第17版《Remington氏药物科学》(Remington’s PharmaceuticalSciences)(Gennaro，编辑)，第84节，第1516-1517节，Mack PublishingCo，Easton，PA(1985))。例如，丸药状(即塑性团)提取物的稠度使得它适合于丸药团并将其制成丸剂(例如纯甘草属提取物USP)。此外，丸药团充分适用于软膏剂和栓剂。粉状提取物较好地适合于诸如胶囊剂、粉剂和片剂这样的粉状制剂。此外，可以将糖浆状稠度的半固体或提取物用于制备药物制剂(《Remington氏药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，1985)。
在一个相关的方面中，可以认为提取物是通过将植物或动物原料药物浸入或浸泡入液体(浸渍)得到制品或通过使这类原料药物通过多孔物质(渗滤)作为药剂而获得的活性组分溶液。此外，这种类型的药剂可以是酊剂或流浸膏[sic]的形式(《Remington氏药物科学》(Remington’s PharmaceuticalSciences)，1985)。
在一种实施方案中，所述的提取物是酊剂形式。例如，酊剂可以包括但不限于由植物物质或由化学物质制备的醇或氢化醇(hydroalcoholic)溶液。可以通过渗滤或浸渍来制备酊剂且一般以特定重量药物活性的量(按克计)/100ml酊剂产生功效(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，1985)。例如，甜桔皮酊剂含有50g甜桔果皮/100ml酊剂。
在另一种实施方案中，所述的提取物是流浸膏[sic]形式。例如，液体提取物包括但不限于包括醇作为溶剂或作为防腐剂或两者兼而有之的植物药的液体制剂，其中一般每ml含有1克药物代表的药物的治疗成分。可以通过作为一般方法的渗滤法来制备流浸膏(Remington’s PharmaceuticalSciences)，1985)。
本文所用的术语″血液活性″指的是与血液和造血器官相关的活性。
从技术上讲，术语″草药″指的是小的非木本(即带有新鲜茎的)的一年生或多年生含种子的植物，其中所有暴露在空气中的部位均在各生长季节结束时死亡。草药有其医疗、可口或芳香质量的价值。当一般使用该术语或本文使用该术语时，″草药″指的是具有食品添加剂、医疗、药物、治疗或延长生命应用的任意植物或植物部位。因此，本文所用的草药并不限于草药的植物学定义，而是用于这类目的的任意植物性药材、植物或植物部位，包括Metaphyta界中的任意植物种类或亚种的任意植物或植物部位，包括草、灌木、半灌木和树。草药组合物中所用的植物部位包括但不限于种子、叶、茎、桠枝、枝条、芽、花、球茎、谷粒、块茎、根茎、长匐枝、根、果实、球果、浆果、形成层和树皮。
本文所用的″草药组合物或制剂″指的是包括草药、草药植物、草药植物部位和/或草药提取物的任意组合物或制剂。因此，本文所用的草药组合物或制剂包括含有草药食品添加剂、草药和药用食物的草药制剂。草药组合物的实例包括但不限于下列成分：单一植物种的完整植物或植物部位；多植物种的完整植物或植物部位；来源于单一植物种的多种成分；来源于多种植物种的多种成分；草药提取物；或这些不同成分的任意组合。本发明还关注包括来源于单一或多植物种的一种或多种化学物质的草药组合物。
就不同草药组合物的完全综述而言，例如参见Kee ChangHuang，《中草药药理学》(The Pharmacology of Chinese Herbs)，CRC Press(1993)，将该文献的全部内容引入本文。
本文所用的术语″免疫活性″指的是与免疫系统、免疫性、诱发的敏感性和过敏反应相关的活性。
本文所用的术语″死亡率″指的是群体或特定数量群体中死亡的比例，其中将死亡率定义为死亡比例或总死亡数量与总人群之比。例如，局部缺血性中风症状发作后30天的死亡率可以在约13.3％(例如用组织型纤溶酶原激活物治疗后，参见Albers等，JAMA(2000)283(9)：1145-1150)-大于约65％(例如出血性中风，参见Mahaffey等，《美国心脏杂志》(Am HeartJ)(1999)138(3 Pt1)：493-499)之间改变。
本文所用的术语″生命质量(QOL)″指的是动物、尤其是哺乳动物、更具体地说是人的一般健康。可以基于任意一种参数、两个或多个参数的一组或一般总体评价或评分来评价个体的QOL。用于评价QOL的有用指标的实例包括但不限于那些与睡眠行为、进食行为、饮用行为、机敏性、可动性、皮肤色泽、视觉、毛发保留/损耗/生长、肌肉色泽、肌肉质量、力量、体重、静脉窦健康、炎症存在或不存在或程度、不适感、完成特定工作的能力、焦虑程度、反应时间、集中能力、记忆保留、语言能力、声音感觉、头痛存在或不存在或程度、肌肉痉挛、神经损害、味觉、触觉、嗅觉、机会致病性疾病的存在或不存在和寄生虫存在或不存在相关的指标。
本文所用的术语″方案″指的是治疗程序。
本文所用的术语″治疗指数″指的是产生所需疗效时药物选择性如何。治疗指数是LD50-ED50之比。半数有效量ED50是在50％人群中产生特定疗效所需的药物剂量。LD50是在实验动物中测定的半数致死量。
II.具体实施方案
A.化疗
一般来说，化疗指的是使用以一定方式对感染性生物体或肿瘤起作用的化学活性剂治疗疾病、尤其是肿瘤、寄生虫感染和微生物疾病的方法。
1.癌症化疗
介绍：化疗一直是用于治疗癌症患者的最有效方式之一。尽管十分有效，但是也众所周知化疗剂可有害地破坏患者的生命质量。某些通常观察到的副作用包括骨髓抑制和免疫抑制、腹泻、外周神经病、恶心和呕吐、发热、肝脏机能障碍和心脏毒性等(《临床医师工作参见书》(″Physicians DeskReference″)(1999)Medical Economics Company)。在许多情况中，这些不良副作用阻止了患者接受递增剂量或其它治疗过程，由此限制了这些活性剂的功效。减轻这些副作用中的某些或全部而不损害化疗剂的抗癌活性不仅可以改善癌症患者的生命质量(QOL)、而且允许使用更具挑战性的治疗方案，从而产生可能改善的临床成功。目前最具支持性的疗法应用诸如止吐药、抗粘膜炎药和集落生长因子这样的单一活性剂，它们以单一的副作用为靶、但不会对应与癌症化疗相关的广泛副作用(Bleiberg H和Cvitkovic E.，《欧洲癌症杂志》(Eur J Cancer)32A(Suppl 3)：S18-S23(1996)：WierdaD.和Matamoros M.，《毒理学与应用药理学》(Toxicol & AppliedPharmacol)75：25-34(1984)；Goldber R.M.和Erlichman C.，《肿瘤学》(Oncology)12：59-63(1988))。
用于治疗癌症的药物包括：更常用的天然产物，诸如紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL)；半合成药物，诸如依托泊苷(etoposide)；和许多较新的不同活性剂，诸如白细胞介素-2和全反式视黄酸(all-trans-retinoicacid)。就用于治疗肿瘤疾病的化疗剂的综合目录而言，例如参见Calabresi和Chabner(1996)的1227-1229页表X-1.
表2中提供了与通常给予的癌症化疗相关的主要副作用。
                    表2.癌症化疗的主要副作用
     主要不良健康作用      抗肿瘤药
    胰腺炎     VP-16，ara C
    脱发     VP-16，阿霉素，紫杉醇(Taxol)，FU，araC
    心脏毒性     紫杉醇，阿霉素(Doxorubicin)
    皮肤影响     阿霉素
    腹泻     CPT-11
    呼吸困难     ara C
    潮红     他莫昔芬(Tamoxifen)
    发热/寒战     VP-16，阿霉素
    肝毒性     VP，紫杉醇，ara C，甲氨蝶呤
    中毒性肾损害     顺铂(Cisplatin)
    耳毒性     顺铂
    骨髓发育不全     几乎全部的抗癌药
5-氟尿嘧啶：氟嘧啶类似物，5-氟尿嘧啶(5-FU或FU)表现出广谱临床活性。它是在治疗结肠直肠癌中的佐剂和已经晚期疾病情况以及在其它GI恶性肿瘤方面中最具活性的药剂之一(Pinedo和Peters，1988)。此外，该活性剂对乳腺癌和头颈癌具有活性。
结肠直肠癌疗法的近期发展已经应用了生化调节方法来选择性地激活特定的嘧啶代谢途径。还原的叶酸盐，亚叶酸(LV)是有效的生化调节剂且已经与FU一起用于临床治疗(Peters和Van Groeningen，1991；Joulia，等，1999)。已经证实添加LV形式的外源性叶酸盐可提高在临床试验中对FU的响应(Calabresi和Chabner，1250页，1996)。LV相互作用的有意义的机制在于胸苷酸合酶抑制增加。
FU在疾病发展患者中的反应率(response rate)由10％-12％(单独FU治疗)改善至20％-30％(FU/LV治疗)。
就包括FU在内的氟嘧啶类似物的治疗应用的具体描述而言，例如参见Chabner等，1996。
CPT-11：伊立替康(Irinotecan)(CPT-11)是一种抑制复制细胞中拓扑异构酶I的半合成喜树碱类似物。它在用一线FU/LV治疗失败的癌症患者中表现出抗肿瘤活性(Bleiberg，1999；Stucky-Marshall，1999)。
尽管FDA将CPT-11批准为患晚期结肠直肠癌患者的二线疗法，但是所观察到的反应率大约仅为10％-15％。
与该药剂相关的主要副作用包括白细胞减少、贫血、恶心/呕吐、食欲缺乏和腹泻。因此，需要开发一种可以提高CPT-11抗肿瘤活性的功效和/或缓解与CPT-11治疗相关的某些毒副作用的调节剂，使得癌症患者的总体生命质量和行为状态得到改善。
CPT-11/FU和CPT-11/FU/LV的联用：据报导结肠直肠癌是北美地区死于癌症的第二位主导原因。目前FDA批准用于治疗结肠直肠癌的两种药物是伊立替康(CPT-11，Camptosar)和5-氟尿嘧啶(FU)。FU是一种抗代谢药物，它抑制合成DNA所需的胸苷酸合成酶。通常将FU与增加FU对胸苷酸合成酶亲合性的还原的叶酸盐LV一起给药。目前将这种疗法用作转移性结肠癌的一线疗法(Murakami K，Sakukawa，R，Sano，M，等，《临床癌症研究》(ClinCancer Res.)5：2304-2310(1999)；van der Wilt C.L，van Groeningen，C.J，Pinedo H.M，等，《癌症研究与临床肿瘤学杂志》(J.Cancer Res.Clin.Oncol.)123：595-601(1997))。CPT-11是涉及DNA在复制过程中解旋的核酶，拓扑异构酶I的有效抑制剂。已经证实了CPT-11作为使用FU失败后二线疗法的对转移性结肠直肠癌的抗肿瘤活性(Kase，Y，Hayakawa，T，Togashi，Y，等，《日本药理学杂志》(Jpn J Pharmacol)，75：399-405(1997)；Araki E，Ishikawa M，Iigo M，等，《日本癌症研究杂志》(Jpn J CancerRes)84：697-702(1993)；Bissery MC，Vrignaud P，Lavelle F，等，《抗癌药物》(Anti-Cancer Drugs)7：437-460(1996)；Saltz L.B，Cox J.V，Blanke C，等，《新英格兰药物杂志》(New.Eng.J.Med.)343：905-914(2000))。近来FDA批准了将CPT-11/FU/LV用作晚期结肠直肠癌的一线疗法的三联疗法。令人遗憾的是已经在使用该联合疗法治疗的患者中将严重的腹泻鉴定为限制剂量的毒性之一(Saltz L.B，Cox J.V，Blanke C，等，《新英格兰药物杂志》(New.Eng.J.Med.)343：905-914(2000)；Murakami K，Sakukawa，R，Sano，M，等，《临床癌症研究》(Clin Cancer Res.)5：2304-2310(1999)；van der Wilt C.L，van Groeningen，C.J，PinedoH.M，等，《癌症研究与临床肿瘤学杂志》(J.Cancer Res.Clin.Oncol.)，123：595-601(1997)。
VP-16(依托泊苷)：也称作依托泊苷的VP-16表现出对小细胞肺癌、睾丸癌、淋巴瘤和白血病(O’Dwyer，P.，等，“依托泊苷(VP-16-213)-活性抗癌药的最新情况”(Current Status of an Active Anti-cancer Drug)，《新英格兰药物杂志》(New.Eng.J.Med.)312：692-700(1985))和包括在霍金奇病、乳头瘤病毒和弥漫性组织细胞淋巴瘤中观察到的肿瘤的显著临床活性。
认为依托泊苷通过使酶-DNA复合物保持稳定而阻断了DNA拓扑异构酶II的催化活性，在所述的复合物中DNA裂解并与所述酶共价连接。参见Chen，G.L.，Yang，L.，Rowe T.C.，Halligan，B.D.，Tewey，K.，和Liu，L.，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)，259：13560(1984)；Ross，W.，Rowe，T.，Glisson，B.，Yalowich，J.，和Liu，L.，《癌症研究》(Cancer Res.)，44：5857(1984)；Rowe，T.，Kuppfer，G.，和Ross，W.，《生物化学与药理学》(Biochem.Pharmacol.)，34：2483(1985)，特别将全部这些文献引入本文作为参考。
根据背景技术中所述，拓扑异构酶是控制DNA拓扑学状态的酶。II型拓扑异构酶催化DNA链通过DNA中短暂的双链断裂处。产生的DNA连接数量的改变使得这些酶介导DNA的互变，诸如超螺旋和超螺旋松弛、链状排列和脱链状排列、打结和不打结。参见Wang，J.C.，《生物化学年鉴综述》(Annu.Rev.Biochem.)，54：665(1985)；以及Maxwell，A.，和Gellert，M.，《高级蛋白质化学》(Adv.Protein Chem.)，38：69(1986)，特别将这些文献引入本文作为参考。
已经证实II型拓扑异构酶涉及存活细胞加工的数量，包括DNA复制和转录以及染色体分离。因此，这些酶是包括依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)在内的抗癌药物广泛作用的关键靶物。导致细胞死亡的关键步骤可能是这些药物如上所述阻断DNA拓扑异构酶II的催化活性的可能性。
β-L-二氧戊环-胞苷(OddC)：β-L-二氧戊环-胞苷[(-)-OddC]是具有证实有抗癌活性的非天然L构象的第一种核苷类似物(Grove等，《癌症研究》(Cancer Res)(1996)56(18)：4187-4191)。已经证实该化合物在人前列腺和肝细胞异种移植肿瘤模型中具有有效的抗肿瘤活性(Grove等，《癌症研究》(Cancer Res)(1995)55：3008-3011)。此外，已经证实OddC在体外对人角质细胞过度增殖具有有效的活性(Schwartz等，《皮肤药理学与皮肤应用生理学》(Skin Pharmacol Appl Skin Physiol)(1998)11(4-5)：207-213)。
该化合物通过经平衡敏感性和平衡不敏感性核苷转运系统快速易位入细胞而起作用，其中它被结合入细胞的DNA。DNA结合导致DNA降解成大片段而没有产生核小体间梯化。
生命质量(QOL)：癌症疗法成功的标准评价措施包括但不限于肿瘤块和类型以及肿瘤扩散速度和量(评价肿瘤的局部和远端)。化疗领域的技术人员还可以确定特定的治疗方法是否可以提高患者的生命预期和生命质量(甚至对那些对常用的治疗方法没有反应的患者而言也是如此)。例如，可以通过几种标准来确定对胃肠疾病的有效治疗，这些标准包括但不限于肠炎评分(基于对诸如腹痛、痛性痉挛、粪便中的愈创木脂和腹泻这样的临床症状的综合评分)以及诸如所使用的化疗剂量百分比、住院天数、输血、静脉输液疗法、抗运动剂(antimotility agent)和饮食能力这样的相关终点。
作为对治疗作用的反应，患者的自觉症状并非始终符合医生进行的试验结果。例如，甚至在获得不利测试结果的情况中，当尿失禁和排泄的发生减少时，患者认为治疗已经起作用，结果是生命质量(QOL)得到改善。在化疗过程中，诸如脱发、体重下降、食欲减退、疲劳、腹泻、恶心、呕吐等这样的患者的生命中的负面副作用可能会持续且对可能对患者而言从身体上和精神上均是无法忍受的日夜缓慢折磨。因此，本发明的有效治疗方法指的是不仅涉及从疼痛或肿瘤生长减少中部分或完全缓解、而且涉及一般与治疗相关的副作用减少或消除的缓解，其中总体结果是生命质量得到提高。
可以进入基线评价作为治疗方案的组成部分，由此确定了各种标准且这些标准与QOL相关。此外，患者可以报告有关诸如感觉″相当″或经受″中度″疼痛这样的患者每日情况。然后在治疗过程中和之后使用这些措施以便评价患者是否感觉生命质量已经得到改善。
2.寄生虫感染的化疗
寄生性原生动物在人和动物体内导致各种感染且由寄生性原生动物导致的许多疾病对宿主的生命产生威胁。例如，尽管国际上作了巨大努力来根除疟疾这种疾病，但是疟疾仍然对人体健康有明显的威胁；诸如由克氏锥虫导致的恰加斯病和由布氏锥虫导致的非洲睡眠病这样的锥虫病在非洲和南美中并不罕见；而由卡氏肺囊虫、鼠弓形体、隐孢子虫属种类导致的无免疫应答宿主体内的机遇性感染在发达国家中正在逐步变得显著。
在诸如恰加斯病这样的某些寄生虫疾病中，没有令人满意的治疗方法；在其它疾病中，可能产生寄生虫的耐药株。因此，存在对鉴定新型和有效抗寄生虫药物的持续需求。然而，就大部分情况而言，抗寄生虫药物的发现已经成为通过对抗一组寄生虫的天然产物和合成化合物的生物筛选的随机和费时过程。
尽管在疫苗开发中有令人鼓舞的进展，但是化疗仍然是单一最有效、有效率和低廉的控制大多数寄生虫感染的方式(Tracy和Webster，“寄生虫感染的化疗”(Chemotherapy of Parasitic Infections)，在Goodman &Gilman的《治疗剂的药理学基础》(The Pharmacological Basis ofTherapeutics)，第9版第955-985页，1996)。目前可得到的药物在治疗由吸虫和肠寄生虫导致的人体感染方面特别有效。但是迫切需要新型或更好的药物来抵抗诸如囊尾蚴病、丝虫病、利什曼病、旋毛虫病和锥虫病这类的全身感染并阻止特别由疟疾和其它原生动物寄生虫表现出的耐药性的发展。原生动物寄生虫对药物产生耐药性远易于蠕虫对药物产生耐药性，这一结果与其在宿主体内更易迅速增殖的情况一致。
抗寄生虫药物在患者体内应安全而有效是必不可少的。抗寄生虫药物的治疗功效是复杂的且取决于宿主、寄生虫和环境因素。因此，最佳药物和最佳剂量方案通常通过试验和误差来决定而非来自对患地方病感染的患者进行的细致的药动学和药效学研究。为了进行适当评价，仅应在适当的流行病学研究公开了对感染疾病的年龄特异性流行性和强度的传播和相关性模式之后制定基于人群的化疗方案。为了得到最佳结果，应将化疗与其它适合于特定感染、环境和宿主人群的公众健康措施联用。用于肿块化疗的理想的活性剂具有对感染性寄生虫所有发育阶段的广谱活性。它在仅每天服用一次的高治疗剂量下也应是安全的；它在应用条件下保持化学稳定性；它作为耐药性的诱导物是有效的；且它是低廉的。目前几乎没有可得到的抗寄生虫药物可满足这些标准。
对无性生殖红细胞疟疾寄生虫有效的化疗剂包括氯喹、奎宁、甲氟喹和卤泛群。其它诸如乙胺嘧啶、磺胺类、砜类和四环素类这样的药物作用缓慢且疗效低于上述活性剂，而由此通常将它们与其它化疗剂联用。诸如阿托伐醌、氯喹、糠酸二氯尼特、依氟乌氨酸、依米丁和去氢依米丁、8-羟基喹啉类、关拉胂醇、甲硝唑、硝呋替莫、喷他脒、米帕林、锑酰葡糖酸钠和舒拉明这样的活性剂可有效地治疗寄生虫感染，包括锥虫病、利什曼病、阿米巴病、甲第虫病和毛滴虫病。最终通常用诸如苯并咪唑、乙胺嗪、伊维菌素、美曲膦酯、氯硝柳胺、奥沙尼喹、哌嗪、吡喹酮和扑酸噻嘧啶这样的驱肠虫药治疗带有寄生虫蠕虫、蠕虫病的感染。就对寄生虫感染化疗的综述而言，参见Tracy和Webster，文献同上。
3.微生物疾病的化疗
在1936年，由Colebrook和Kenny以及Buttle和合作者所报导的使用磺胺在产后脓毒病和脑膜炎球菌感染中的有利临床结果使医学领域人员意识到了抗菌化疗的新领域。在1941年，青霉素大量生产且首次用于有限的临床试验。目前全部住院患者中的至少30％接受使用抗生素的一个或多个疗程且已经治愈了数以百万计可能导致死亡的感染。
抗生素是由各种微生物(细菌、真菌和放线菌)产生的物质，它们可抑制其它微生物的生长且最终可以消灭它们。然而，通常将该术语扩展至包括合成的细菌活性剂，诸如磺胺类和喹诺酮类，它们并非微生物的产物。抗生素在物理、化学和药理学特性、抗菌谱以及作用机理方面是不同的。
基于化学结构和指出的作用机理的抗菌剂的最常用分类如下：(1)抑制细菌细胞壁合成的活性剂；例如在结构上相似的青霉素类和头孢菌素类(cephalospoins)和诸如环丝氨酸、万古霉素、杆菌肽这样不相似的活性剂以及诸如咪康唑、酮康唑和克霉唑这样的咪唑类抗真菌药；(2)直接对微生物细胞膜起作用的活性剂，从而影响渗透性并导致胞内化合物泄漏；它们包括洗涤剂、多粘菌素和多粘菌素E甲磺酸以及与细胞壁的固醇类结合的多烯类抗真菌药；(3)影响30S或50S核糖体亚基功能而导致对蛋白质合成的可逆抑制的活性剂；这些制菌药物包括氯霉素、四环素类、红霉素和克林霉素；(4)与30S核糖体亚基结合并改变最终导致细胞死亡的蛋白质合成的活性剂；它们包括氨基糖苷类；(5)影响核酸代谢的活性剂，诸如抑制DNA-依赖性RNA聚合酶的利福霉素(例如利福平)和抑制回旋酶的喹诺酮类；(6)阻断对微生物而言必不可少的特异性代谢步骤的抗代谢物，包括甲氧苄啶和磺胺类；(7)抑制对DNA合成而言必不可少的病毒酶、从而使病毒复制终止的核酸类似物，诸如齐多夫定、更昔洛韦、阿糖腺苷和阿昔洛韦。(参见，Chambers和Sande，“第IX节-微生物疾病化疗：抗菌剂”(Section IX Chemotherapyof Microbial Diseases：Antimicrobial Agents)，在Goodman & Gilman的《治疗剂的药理学基础》(The Pharmacological Basis of Therapeutics)，第9版，第1029页，1996。)
抗生素在治疗感染方面是否有效取决于几种因素。为了使抗生素有效，必须使抗生素在感染部位的浓度足以便抑制细菌生长。然而，药物的浓度必须保持在对人体细胞具有毒性的浓度以下。如果抑制或杀灭微生物所需的抗生素浓度大于可以获得安全性的浓度，那么认为微生物对该抗生素具有抗性。细菌可以对抗菌剂产生耐药性，这是因为该活性剂不能达到其靶物、该活性剂失活或所述靶物改变。某些细菌产生保留在细胞表面上或细胞表面内的酶并使药物失活。其它细菌具有防止药物进入的不透性细胞膜。某些细菌缺乏由亲水剂药剂用以跨过细菌外膜的孔蛋白构成的水通道，而其它细菌缺乏使药物进入细菌细胞所需的转运系统。抗生素抗性病原体的出现导致对治疗抗微生物疾病的新型药物和新型方法存在持久增加的需求。
B.抗病毒疗法
1.病毒和病毒性疾病
病毒是不能由其自身再生的微生物。然而，在感染宿主细胞时，病毒利用宿主细胞的代谢机质产生多种病毒物质。病毒在宿主细胞内的感染和复制一般导致疾病，无论该宿主是动物还是植物。由病毒感染导致的人体疾病例如包括获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和肝炎。对该领域的一般性讨论列在《基础病毒学》(Fundamental Virology)第2版中(编辑B.N.Fields，D.M.Knipe，R.M.Chanock，M.S.Hirsh，J.L.Melnick，T.P.Monath，和B.Roizman，Raven Press，Ltd.，New York，N.Y.1991)。下面讨论几种病毒和它们导致的疾病的实例。
逆转录病毒：逆转录病毒包括主要感染脊椎动物的病毒大家族。包括诱发某些肿瘤在内的许多疾病与逆转录病毒感染有关(参见文献同上的《基础病毒学》(Fundamental Virology)第645-708页)。逆转录病毒含有通过DNA中间体复制的RNA基因组。在逆转录病毒生命周期早期，RNA基因组通过病毒编码的逆转录酶(RT)被拷贝到DNA。该酶可以使用RNA和DNA作模板，从而由感染性RNA基因组产生第一链DNA(负链)和将第一链DNA用作模板产生DNA的互补第二链(正链)。为了合成这些DNA链，RT应用称作脱氧核苷三磷酸(dNTP)的细胞底物。
可以将人逆转录病毒分类成白血病病毒(HTLV型病毒)和免疫缺陷病毒(HIV型病毒)。HTLV感染可以导致一种形式的白血病。HIV感染导致获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。存在两种相关的人免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2。HIV-1的毒力超过HIV-2。HTLV和HIV均感染外周血液淋巴细胞(PBL)。
其它动物逆转录病毒包括猫白血病毒(FeLV)和慢病毒属。有毒力的FeLV感染一般导致猫致死性再生障碍性贫血。慢病毒属导致各种神经和免疫疾病，诸如绵羊的绵羊脱髓鞘性脑白质炎和马的感染性贫血。
感染人、动物和植物的几种其它病毒也依赖于复制用的逆转录酶。它们包括诸如已知在几个种类中存在的白血病病毒这样的逆转录病毒、包括人体内的HTLV-1以及逆转录酶依赖性DNA病毒、诸如花椰菜花叶病毒(一种植物病毒)。
病毒性肝炎：肝炎是人体肝脏的疾病。它以肝脏发炎的形式出现且通常由病毒感染导致且有时因毒性剂所导致。肝炎可以发展成肝硬化、肝癌且最终导致死亡。已知诸如甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒和己型肝炎病毒这样的几种病毒可导致不同类型的病毒性肝炎。在它们中，HBV和HCV最为严重。
乙型肝炎由DNA病毒导致。它具有50-160天的长潜伏期。它通常通过注射感染的血液或血液衍生物或通过使用污染的针头、刺血针或其它器械而传播。乙型肝炎病毒感染导致肝脏广泛损伤。此外，慢性乙型肝炎感染与随后发展成属于死亡主要原因的肝细胞癌相关。
丙型肝炎由RNA病毒导致。潜伏期为6-8周且约75％的感染率为无症状并产生慢性持久性感染。由很高的百分比发展成可导致肝硬化和可能的肝细胞癌的慢性肝病。丙型肝炎难以治疗且据估计全世界有5亿人感染它(约为感染HIV的15倍)。
疱疹病毒：分离自人体的疱疹病毒包括但不限于单纯疱疹1型病毒(″HSV-1″)、单纯疱疹2型病毒(″HSV-2″)、人巨细胞病毒(″HCMV″)、水痘-带状疱疹病毒(″VZV″)、EB病毒(″EBV″)、人6型疱疹病毒(″HHV6″)、单纯疱疹7型病毒(″HSV-7″)、单纯疱疹8型病毒(″HSV-8″)。还从马、牛、猪(假狂犬病病毒(″PSV″)和猪巨细胞病毒)、鸡(感染中性喉气管炎)、黑猩猩、鸟类(马立克氏病1型和2型疱疹病毒)、火鸡和鱼(参见″疱疹病毒科：简介″(“Herpesviridae：A Brief Introduction”)-《病毒学》(Virology)，第2版，由B.N.Fields编辑，第64节，1787(1990))中分离了疱疹病毒。
单纯疱疹病毒(″HSV″)感染一般是复发性病毒感染，其特征在于在炎症轻度增加的基础上充满澄清液体的单一或多簇小泡在皮肤或粘膜上出现。
单纯疱疹病毒是一种相对较大的病毒。HSV-2通常产生唇单纯性疱疹。HSV-2是通常可使生殖器损害恢复的病毒，尽管不始终是这样。一般来说，HSV-2通过性交传播。
由水痘-带状疱疹病毒(人3型疱疹病毒)导致的疾病包括水痘(水痘)和带状疱疹(带状疱疹)。巨细胞病毒(人5型疱疹病毒)导致婴儿体内的巨细胞包含体疾病。EB病毒(人4型疱疹病毒)是传染性单核细胞增多的病原体且与伯基特淋巴瘤和鼻咽癌有关。可以对人造成难题的动物疱疹病毒包括B病毒(Old World猴子的疱疹病毒)和绒猴疱疹病毒(New World猴子的疱疹病毒)。
2.抗病毒剂
抗病毒剂包括从诸如治疗生殖器疱疹的阿昔洛韦(ACV)这样的药物到例如齐多夫定(AZT)和双脱氧肌苷(DDI)这样治疗AIDS的药物。下面讨论几种抗病毒剂的实例。
在许多年中，研究开发了抗逆转录病毒的药物来治疗AIDS。抗逆转录病毒药物例如包括Abacavir(ABC)、Adefovir(ADV)、Amprenavir(APV)、齐多夫定(AZT)、去羟肌苷(ddI)、扎西他滨(ddC)、Stavudine(d4T)、Efavirenz(EFV)、拉米夫定(3TC)、沙奎那韦(SQV)、Indinavir(IDV)、Ritonavir(RTV)、Delavirdine(DLV)、Nelfinavir(NFV)、奈韦拉平(NVP)。然而，用抗病毒药物治疗AIDS的尝试没有满足成功所需的程度。尽管某些抗病毒药物的功效较高，但是最初体外/体内测试的特征在于耐这些药物的HIV-1变体迅速产生。另外，使用抗病毒药物存在潜在的毒性。存在对治疗AIDS有效而安全方式的需求。
已经证实没有局部或全身化疗剂对治疗带状疱疹病毒有效，但可能不包括在表浅疱疹性角膜炎中使用的局部用碘苷(IDU)。对该化合物在皮肤疱疹中作用的报导是不一致的。已经用于治疗HSV的其它药物包括三氟胸苷、阿糖胸苷(阿糖胸苷，ara-A)、阿昔洛韦且其它病毒DNA合成抑制剂可能对疱疹性角膜炎有效。这些药物抑制帝状疱疹病毒的复制且可以抑制临床表现。然而，带状疱疹病毒仍然隐藏在感觉神经节中且复发的比例在药物治疗和未治疗个体中相似。此外，已经出现了某些耐药性疱疹病毒菌株。因此，还存在对开发治疗与单纯疱疹病毒相关疾病的更为有效方式的需求。
乙型肝炎病毒(HBV)感染的最新预防方法是安全而有效的接种乙型肝炎疫苗。然而，接种疫苗对那些已经感染的个体(即携带者和患者)无效。许多药物已经用于治疗慢性乙型肝炎且无一被证明是有效的，但不包括干扰素。
对丙型肝炎而言目前没有可获得的有效免疫方法且丙型肝炎仅可以通过诸如改善卫生保健和卫生条件并阻断传播途径这样其它预防措施来控制。目前，唯一可接受的对慢性丙型肝炎的治疗手段是需要至少6个月治疗期限的干扰素疗法和/或可以在感染细胞中抑制病毒复制并改善某些人肝功的三氮唑核苷疗法。然而，用干扰素、用或不用三氮唑核苷治疗具有有限的长期功效，且反应率约为25％。
C.PHY906
介绍：PHY906是一种由4味各自选自4种草药属之一的草药组成的传统中药制剂。所述的4种草药属通常称作黄芩属(有时称作Scute)、甘草、芍药和枣属的果实(表3)。因此，一种植物种类选自表3中提供的4种植物属中每一种以便生产本发明的所需草药组合物。尽管将所列植物种类的特定组合列为优选PHY906配方的实例，但是本发明的组合物和方法包括4种植物种类的任意组合，其中植物种类选自表3中4组中的每一种。本发明包括这类草药的任意这类组合，所述的草药具有本文所述的PHY906产生的生物活性或所需作用中的至少一种。
                          表3.可以用于制备PHY906的4属特定种类的实例
    TCM草药属的常用英文名
黄芩属(Scutellaria) 甘草(Licorice) 芍药(Peony Alba) 枣属果实(ZiziphiFruit)
草玉梅(Anemone rivularisBuch.-Ham.ex DC.) 毛相思子(Abrus mollisHance) 黄牡丹(Paeonia delavayiFranch.var.lutea(Delavay ex Franch.)Finet et Gagnep.) 枣(Ziziphus ju jubaMill.)
峨眉糖松草(Thalictrum omelenseW.T.Wang et S.H.Wang) 粗毛甘草(Glycyrrhiza asperaPall.) 芍药(Paeonia lactifloraPall.) 无剌枣(Ziziphus ju jubaMill.var.inermis)
扁阔叶十大功劳(Mahonia bealei(Fort.)Carr.) 黄甘草(Glycyrrhizaeurycarpa P.C.Li) 美丽芍药(Paeonia maireiLevi.)
南天竹(Nandinadomestica Thunb.) 洋甘草(Glycyrrhizaglabra L.) 毛叶草芍药(Paeoniaobovata Maxim.var.willmottiae(Stapi)Stern)
滇黄芩(Scutellariaamoena C.H.Wright) 胀果甘草(Glycyrrhizainflata Bat.) 雪花构(Daphne papyraceaWall.ex Steud.)
Scutellaria amoenaC.H.Wright var.cinerea Hand.-Mazz. 圆果甘草(Glycyrrhizasquamulosa Franch.) 青羊参(Cynanchumotophyllum Schneid.)
黄芩(Scutellariabaicalensis Georgi) 甘草(Glycyrrhizauralensis Fisch.) 羊乳(Codonopsislanceolara Sieb.etZucc.Trautv.)
Scutellariabaicalensis Georgivar. albifloraK.Onuma 假秦艽(Phlomisbetonicoides Diels)
中甸黄芩Scutellariachungtienensis C.Y.Wu
连翘叶黄芩(Scutellariahypericifolia Levl)
丽江黄芩(Scutellarialikiangensia Diels)
ScutellariaobtusifoliaHemsl.var.trinervata(Vant.)C.Y.Wu etH.W.Li
狭叶黄芩(Scutellariaregeliana Nakai)
Scutellariaregeliana Nakaivar.ikonnikovii(Juz.)C.Y.Wu etH.W.Li
甘肃黄芩(Scutellaria
rehderiana Diels)
Scutellaria tenax W.W.Smith var.patentipilosa(Hand.-Marz.)C.Y.Wu
粘毛黄芩(Scutellariaviscidula Bunge)
这种草药配方已经在亚洲长期使用以治疗诸如心脏扩张、腹部痉挛、发热、头痛、呕吐、干呕、口渴和粘样粪便这样的各种疾病(Hani Oka和TakiNo，1998)。
将优选的PHY906配方列在表4中。
                                表4.TCM配方PHY906的草药组分
科学名   百分比   常用名     传统应用
  黄芩   33.3   黄芩根 用于：降低毛细管通透性；减少炎症；治疗肠炎和痢疾；增加胆汁分泌以治疗黄疸；缓解肌痉挛以治疗咳嗽；排出寄生虫
  甘草   22.2   甘草根 用于：润肺止咳；松弛痉挛并止痛；节制草药的作用；泻火和释放毒素
  枣   22.2   海枣 具有利尿和强身作用
  芍药   22.2   白芍根 用于：抑制和缓解疼痛；安抚韧带并纯化血液
另一种PHY906配方中有黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药，其相对配比分别如下：4/14∶3/14∶4/14∶3/14。
尽管实例中提供了PHY906中草药的特定比例，但是本发明的组合物和方法包括具有本文所述的所需生物活性的任意比例的4种草药成分。
目前由Sun Ten Laboratories，Inc.，in Irvine，CA(中国台湾省SunTen Pharmaceutical Co.Ltd.的子公司)使用表4中提供的配方来生产PHY906的胶囊和颗粒药袋。自1983年以来，这种PHY906制剂由Brion HerbsCorporation(12020 B Centralia Road，Hawaiian Garden，CA，90716)作为食品添加剂处理和销售。
生产：提供了对可以用于生产PHY906的工艺的简单综述。首先，将适当比例的草药粗原料组分置于夹套反应器中并在升高的恒温下通过搅拌用水提取。所述的配比如根据专家配方记录(Master Formula Record)再现的生产说明(Manufacturing Instruction)中所列。然后用120目筛从所述液体中分离固体物质。收集滤液且然后通过在减压条件下蒸发水而浓缩。在升温下将浓缩的液体进行喷雾干燥而得到干粉，接着将其进行处理而得到成粒的粉末。然后将这种批量的物质配制成所需的剂型。
工艺控制用于确保产品的均匀性和完整性。这类工艺控制包括但不限于检查加工液体的体积、进行HPLC测定以建立用于鉴定所述原料同一性的化学指纹分析和对中间体和终产品的检查。为进行的各种分析和制备和生产控制的每一步骤建立可接受的质量水平(AQL)极限。
将用于生产加工的所有成分指定为生产说明记录(ProductionInstruction Record)中特定的批号。在批量投料前复查质量控制记录。
纯化的标记物质用于原料以及草药物质的鉴定和质量控制。表5中列出了用于制备PHY906草药物质的各原料的标记物质。
      表5.用于PHY906中草药组分的标记物质
    草药     草药的原产地     标记物质
    黄芩   中国山西省     贝加因
    甘草   中国内蒙古自治区     甘草甜
    枣   中国河北/山东省     白屈菜酸
    芍药   中国安徽省     芍药苷
D.药物制剂
可以通过非肠道、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、经皮或口含途径给予本发明的组合物。另一方面或同时，可以通过口服途径给药。所给予的剂量取决于接受者的年龄、健康和体重、同时进行的治疗类型(如果有的话)、治疗频率和所需作用的性质。
可以将本发明用于全身给药的药物配方配制成肠道、非肠道或局部给药制剂。实际上，可以将所有这三种类型的制剂同时使用以便实现对活性组分的全身给药。
本发明进一步提供了含有一种或多种治疗各种类型癌症和/或调节造血活性、诸如对肺结核(T.B.)、天然杀伤细胞(NK)、单核细胞和树突细胞进行免疫调节的活性剂的组合物。
尽管个体需要不同，但是测定各成分有效量的最佳范围属于本领域技术人员的职责范围。
除药物活性剂外，本发明的组合物还可以含有合适的药物上可接受的载体，它们包括有利于将所述的活性组分加工成在可以用于将药物转运至作用部位的制剂的赋形剂和助剂。
可以使用例如固体、半固体或液体形式的PHY906的药物制剂形式，在它们中含有PHY906最为活性组分且混有适合于外用、肠内或非肠道应用的有机或无机载体或赋形剂。可以将所述的活性组分例如与常用的无毒性药物上可接受的载体混合成片剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、溶液、乳剂、混悬剂和适合应用的任意其它剂型。本发明的制剂包括那些包括滑石、水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、甘露糖醇、淀粉糊、三硅酸镁、玉米淀粉、角蛋白、胶体二氧化硅、马铃薯淀粉、脲在内的载体和其它适用于生产固体、半固体或液体形式制剂的载体且还可以使用助剂、稳定剂、增稠剂和着色剂和香料。
为了制备诸如片剂或胶囊剂这样的固体组合物，将PHY906与药物载体(例如常用压片组分，诸如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢二钠或树胶)和其它药物稀释剂(例如水)混合成固体预配制组合物，它含有基本上均匀的PHY906混合物或其无毒性的药物上可接受的盐。当预配制组合物为基本上均匀时，指的是将活性组分均匀分散在组合物中，使得可以易于将该组合物再分成诸如片剂、丸剂和胶囊剂这样的等效单位剂型。然后将这种固体预配制组合物再分成含有有效量本发明组合物的上述类型的单位剂型，优选胶囊剂形式。
可以给含有PHY906的片剂或丸剂包衣，否则可以将它们制成可产生延长作用优势的剂型。例如，所述的片剂或丸剂可以包括内层剂量和外层剂量成分，后者是在成品有包敷层的形式。两种成分可以被用于阻止在胃中崩解并使内部成分完整地通过十二指肠或延缓释放的肠溶层分隔开。可以将各种材料用于这类肠溶层或包衣层，这类材料包括许多聚合酸和聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素这样的材料的混合物。
可以混合PHY906以便口服给药或通过注射给药的液体剂型包括水溶液、有适当香味的糖浆剂、水或油混悬剂和含有诸如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油这样的可食用油的有香味的乳剂以及酏剂和类似的药物载体剂型。用于水混悬剂的合适分散剂或悬浮剂包括：合成的天然树胶，诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。
用于口服给药的液体制剂可以采用例如溶液、糖浆剂或混悬剂这样的剂型或可以将它们制成在使用前用水或其它合适载体再溶解的干品。可以通过使用药物上可接受添加剂的常规方式制备这类液体制剂，所述的添加剂诸如：悬浮剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化可食用的脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或金合欢)；非水载体(例如杏仁油、油酯类或乙醇)；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)；和人工或天然着色剂和/或增甜剂。
为进行舌下给药，本发明的组合物可以采用以常规方式配制成的片剂或锭剂形式。
还可以将PHY906配制成可通过包括使用常规的导管插入技术或输注在内的注射给药的非肠道制剂。可以将注射用制剂制成例如安瓿或多剂量容器这样含有添加的防腐剂的单位剂型。所述的组合物可以采用诸如含油或水载体的混悬剂、溶液或乳剂这样的剂型且它们可以含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂这样的配制剂。另一方面，所述的活性组分可以是在应用前用例如无菌的不含致热原的水这样的合适载体再溶解的粉末形式。
非肠道给药用的合适制剂包括水溶性形式的活性化合物的溶液、例如水溶性盐的溶液。此外，可以给予最为适宜油注射混悬剂的活性化合物的混悬剂。合适的亲脂性溶剂或载体包括：脂肪油，例如芝麻油；或合成的脂肪酸酯类，例如油酸乙酯或甘油三酯类。含水注射混悬剂可以含有增加该混悬剂粘度的物质，例如包括羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。该混悬剂还可以含有或不含稳定剂。还可以将脂质体用于给所述活性剂包囊以便转运至细胞。
在实施本发明方法的过程中，可以单独或以组合方式或与其它治疗剂或诊断剂组合的方式使用PHY906。在某些优选的实施方案中，可以将本发明的化合物与一般按照通常医学实践可接受的用于癌症化疗的其它化合物共同给药。可以将本发明的化合物在体内、一般在诸如人、绵羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠这样的哺乳动物体内使用或在体外使用。
用于制备给药用组合物的实际方法和给药所必不可少的调节手段对本领域技术人员而言是公知或显而易见的且例如具体描述在《Remington氏药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)第17版Mack PublishingCompany，Easton，Pa.(1985)中，将该文献引入本文最为参考。
″治疗指数″用于表示在将治疗作用和不良作用进行比较时对药物选择性的定性描述。例如，如果将不良作用标为T(就毒性而言)并将治疗作用标为E，那么将治疗指数定义为TD50/ED50或在一定的其它任意响应水平下的近似比。
E.PHY906的使用方法
本发明提供了PHY906与用于治疗各种疾病、情况或病症的治疗剂联用的使用方法。
本发明特别提供了PHY906与用于治疗各种疾病、情况或病症的化疗剂联用的使用方法。本发明优选提供了一种癌症的治疗方法，该方法包括对患者给予一种或多种癌症化疗剂和PHY906的步骤。本发明更优选提供了一种结肠直肠癌的治疗方法，该方法包括联合给予CPT-11/FU/LV与PHY906的步骤。
本发明关注PHY906与用于治疗各种疾病、情况或病症的抗病毒剂联用的使用方法。本发明优选提供了一种与病毒感染相关的疾病的治疗方法，该方法包括对患者联合给予一种或多种抗病毒剂和PHY906的步骤。本发明更优选提供了一种AIDS的治疗方法，该方法包括联合给予一种或多种抗逆转录病毒药和PHY906的步骤。甚至更优选所述的抗逆转录病毒药选自AZT、D4T、DDC、3TC和DDI。最优选对患者给予三种抗病毒药与PHY906的组合。三种抗病毒药的优选组合包括但不限于1)D4T、3TC和蛋白酶抑制剂；2)AZT、3TC和蛋白酶抑制剂；和3)AZT、DDI和蛋白酶抑制剂。用于治疗HIV的优选蛋白酶抑制剂包括但不限于nelfinavir、indinavir、沙奎那韦(saquinavir)和ritonavir。
在本发明的一个方面中，对例如癌症或癌细胞系和HIV细胞系这样的细胞系给予PHY906以评价PHY906对不同细胞系的毒性。优选所述的癌症或癌细胞系包括但不限于KB、HepG2、T-细胞淋巴瘤(CEM)、结肠38(Colon 38)和HCT116且HIV细胞系包括但不限于H9细胞和MT-2细胞。
在本发明的另一个方面中，对动物联合给予PHY906与一种或多种化疗剂或抗病毒剂以便确定PHY906是否可以有效地提高所述活性剂的治疗指数和进行化疗或抗病毒疗法的动物的生命质量。优选所述的动物是哺乳动物。更优选所述的哺乳动物是人。
动物可以是用于特定癌症或病毒性疾病的动物模型。此外，动物可以具有缺陷型免疫系统。这类动物模型在本领域中是众所周知的。已经将天然发生免疫缺陷的小鼠用于研究免疫系统、癌症和感染性疾病，包括获得性免疫缺陷综合征或AIDS。例如，裸(NU)鼠是无胸腺的，所以不能发生T细胞分化和成熟。裸鼠作为异种移植、尤其是人体肿瘤用宿主和抗癌药的测试已经应用了许多年。严重的联合免疫缺陷综合征(SCID)小鼠表现出TCR(T细胞受体)和免疫球蛋白基因均以有缺陷的方式重排并表现出严重的免疫缺陷。beige(BG)小鼠携带有功能性天然杀伤细胞缺陷，而X-连接的免疫缺陷(XID)小鼠在产生B细胞方面存在缺陷。此外，已经在各种品系中进行了杂交以产生帝有更广泛免疫缺陷表型的品系(例如BG/NU和BG/NU/XID)。
几乎没有或没有自身免疫系统或已经用药物或放射处理或通过传统遗传发育或遗传工程产生的其它实验室动物具有受抑制的免疫系统，它是一种弱免疫系统或改变的免疫系统，或完全没有免疫系统，诸如，例如可以将SCID马和其它SCID动物以及动物的免疫系统破坏或失活后AIDS已经被抑制的甚至有潜在AIDS感染的动物看作用于本发明的实验室动物候选者(PerrymanL.E.，McGuire，T.C.，Torbeck，R.L.，和Magnuson，N.S.，《临床免疫学与免疫病理学》(Clin.Immunol.Immunopath).，23(1)：1-9，1982)。
用于研究经胎盘或产期抗逆转录病毒疗法的鼠模型是公知的(Sharpe等(1987)《科学》(Science)236：1671-1674；Sharpe等(1988)《美国国家科学院学报》(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA))85：9792-9796；Sharpe等(1989)《病毒学杂志》(J.Virol.)63：1049-1053)。此外，已经确定应用猕猴的哺乳动物模型来研究由猿猴巨细胞病毒、Venezuelan和西方马脑炎病毒以及流行性腮腺炎病毒导致的非逆转录病毒胎儿感染的过程(London等(1986)《畸胎学》(Teratology)33：323-331；London等(1977)《畸胎学》(Teratology)16：285-296；London等(1982)《畸胎学》(Teratology)25：71-79；London等(1979)《非感染性疾病杂志》(J.Inf.Diseases)139：324-328)。猿猴免疫缺陷病毒(SIV)感染猕猴(Macacamulatta)近似地模拟了人体内HIV-1感染。HIV-1和SIV是具有相似分子结构的慢病毒属病毒(Chakrabarti等(1987)《自然》(Nature)328：543-547)且它们均产生免疫缺陷，从而导致机会致病菌感染和中枢神经系统损害(Letvin等(1985)《科学》(Science)230：71-73)。
已经报导了产生用于研究AIDS和骨髓细胞分化的动物模型，其中人淋巴细胞在将人胎儿肝、胸腺和淋巴节共植入SCID小鼠以形成SCID/nu小鼠时短暂增殖(McCune等(1988)《科学》(Science)241：1632-1686)。在这些小鼠体内的人免疫组织对人免疫缺陷病毒(HIV)感染敏感(Namikawa等(1988)《科学》(Science)242：1684-1686)且近来已经将该模型用于测试AZT在延缓AIDS病毒复制中的有效性。
美国专利US 6,184,436中公开了用作AIDS小动物模型的转基因小鼠。该小鼠含有一种转基因，它包括编码可操作地与位于小鼠CD4基因增强子侧翼的人CD4启动子连接的HIV-1的DNA序列。该小鼠发展成了严重的AIDS疾病并导致早期死亡。
在一个优选的实施方案中，对用一种或多种化疗剂或抗病毒剂与PHY906联合应用治疗的动物评价其体重下降和存活率并与仅给予一种或多种化疗剂或抗病毒剂的对照组动物进行比较。还评价了PHY906对抗肿瘤或抗病毒活性的作用以便确定PHY906的功效。
特别可以将PHY906评价为抗病毒、诸如AIDS疗法的调节剂。可以使用上述用于AIDS的任意动物模型。第一步包括通过评价动物体重下降来测定对健康动物给予的抗病毒剂或抗病毒剂组合的最大耐受剂量。第二步包括对诊断为AIDS的动物给予抗病毒剂或抗病毒剂与PHY906的联用。估计动物的体重并与在治疗过程中不接受PHY906的对照组动物进行比较。此外，通过测定红细胞计数或血小板计数来评价PHY906与抗病毒剂或多种抗病毒剂的联用的血液毒性。评价动物的白细胞计数来确定PHY906与抗病毒剂或多种抗病毒剂的联用在治疗AIDS动物中的有效性。将各试验的结果与不给予PHY906的那些对照组动物进行比较。
根据上述一般性讨论，下列特定的实施例仅是解释性的且不用来限定本发明的范围。其它类型和特定的组合对本领域技术人员而言是显而易见的。
实施例
材料和方法
CPT-11(伊立替康，Camptosar)购自Pharmacia & Upjohn Co(Kalamazoo，MI)。5-氟尿嘧啶(FU或FU)、亚叶酸(亚叶酸，LV)、洛哌丁胺、大肠杆菌β-萄糖醛酸糖苷酶、亚甲蓝和酚酞葡糖苷酸(phenolphthaleinglucuronidate)商购自Sigma，Co.(St.Louis，MO)。在Yale University Cancer Center按照标准步骤制备MEME培养基。RPMI1640培养基商购自JRH Co.。卡那霉素、胰酶制剂和锥虫蓝商购自Gibco Co.(Grand Island，NY)。PHY906、PHY-915、PHY-14ST和PHY-15ST植物制剂由Sun Ten Pharmaceutical Inc.(台北，台湾)提供。以前称作TJ-14ST的PHY-14ST由7种草药组成：半夏(Pinelliae ternata Breit.)、黄芩、黄连、甘草、大枣(Fructus ziziphi)、人参(Panaxginseng C.A.Mey.)和姜(Zingiber officinable Rosc.)。预先称作TJ-15ST的PHY-15ST由野葛、黄连、黄芩和甘草组成。PHY-915由5种草药组成：人参、姜、白术、防风和桔组成。
由干粉制备草药提取物：将含有50％(研究批号)或10％(临床批号)淀粉赋形剂的1g的(A)PHY906干粉或(B)含有未知量赋形剂的PHY-915、PHY-14ST或PHY-15ST草药制剂加入到10ml的80℃H2O中并在80℃下保温30分钟。通过离心从残渣中分离上清液(2060g，15分钟)并立即使用。将PHY906上清液的浓度计算为50mg/ml(来自研究批号)或90mg/ml(来自临床批号)，以草药粗原料的水提取物的干重为基准。以粉末干重为基准将其它草药制剂的浓度看作100mg/ml。使用0.45μm无菌Acrodisc滤膜(GelmanSciences)对上清液灭菌以用于组织培养中的生长抑制研究。
小鼠：雌性BDF-1小鼠(4-6周龄)商购自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。雄性无胸腺NCr裸鼠(4周龄)商购自Taconic Farms(Garmantown，NY)。将16g-20g重的这两种小鼠用于本研究。
抗肿瘤研究：分别将鼠结肠38(1-2×106个细胞在0.1ml PBS中)或人HepG2细胞(1-2×106个细胞在0.1ml PBS中)经皮下分别植入BDF1或NCr无胸腺裸鼠。每天用滑动卡钳测量肿瘤的长度和宽度。按照下列公式估算肿瘤重量(Pizzorno G，Wiegand R，Lentz S，等，《癌症研究》(Cancer Res.)52：1660-1665(1992))：肿瘤重量(mg)＝长(mm)×宽(mm)2/2。
10-14天后，选择带有重150-200mg肿瘤的小鼠(5只动物/组)用于药物研究(Guo X，Lerner-Tung M，Chen HX，等，《生物化学与药理学》(BiochemPharmacol)49：1111-1116(1995))。当肿瘤大小达到体重的10％时，处死小鼠。单独通过口服或与抗癌化疗剂一起给予PHY906。评价PHY906对抗肿瘤功效的作用和所述活性剂对毒性的减轻作用。在给予选择剂量的PHY906后30分钟经腹膜内(i.p.)给予CPT-11。如下给予FU/LV联合疗法的方案：
(A)单独用FU/LV治疗：首次剂量的LV(50mg/kg，i.p.)、1小时后是二次剂量的LV(50mg/kg；i.p.)、然后即刻给予FU(100mg/kg，i.p.)；
(B)用FU/LV+PHY906治疗：首次剂量的LV(50mg/kg，i.p.)、30分钟后给予PHY906(500mg/kg，口服)、30分钟后给予二次剂量的LV(50mg/kg，i.p.)、然后即刻给予FU剂量(100mg/kg，i.p.)。
如下给予CPT-11/FU/LV三联药物组合：
(A)组仅用CPT-11/FU/LV：给予小鼠首次剂量的LV(50mg/kg，i.p.)、1小时后给予CPT-11、然后即刻给予LV(50mg/kg，i.p.)和FU(100mg/kg，i.p.)；
(B)组CPT-11/FU/LV+PHY906：给予小鼠首次剂量的LV(50mg/kg，i.p.)、30分钟后给予PHY906(500mg/kg，口服)。接着在第0天在给予PHY906后30分钟用CPT-11、随后立即用LV(50mg/kg，i.p.)和FU(100mg/kg，i.p.)治疗小鼠。
将治疗的第1天定为第0天。从第0天开始每天口服给予两次PHY906(10am和3pm)、持续4天或8天。就对照组而言，给予小鼠载体：腹膜内给予PBS或口服给予H2O(口服给药)。每天监测动物的死亡率、体重下降和肿瘤大小。
血细胞计数：在第0、3、6、9和12天用微量毛细管从小鼠体内取血(20μl)。然后用生理盐水(0.85％氯化钠)将血液稀释到200μl。通过BAKERSYSTEM 9100TM HEMATOLOGY  ANALYZER(Biochem ImmunoSystems Inc.，Allentown，PA 18103-9562)对WBC、RBC和血小板进行计数。
细胞系和培养条件：人HepG2(肝细胞癌)、HCT116(结肠癌)、CEM(白血病)和KB(口腔表皮样瘤)细胞系和鼠结肠38细胞系商购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(Rockville，MD)。通常使HepG2细胞系生长在补充了10％胎牛血清(FBS)和100μg/ml卡那霉素的MEME培养基中。使结肠38、HCT116、KB和CEM细胞系生长在含有10％FBS和100μg/ml卡那霉素的RPMI 1640培养基中。在37℃和5％CO2∶95％空气的湿润气氛下保温细胞。
人或小鼠癌细胞系中的细胞毒性：使用亚甲蓝吸收试验测定细胞生长抑制。在第0天将癌细胞(1×104个)接种入24-孔平板中含有10％FBS和100μg/ml卡那霉素的1ml MEME培养基或RPMI 1640内。在第1天将新近制备和无菌的不同浓度的PHY906提取物加入到细胞中并在37℃下保温3天。然后除去培养基并用0.3ml的0.5％(w/v)亚甲蓝溶液(在50％乙醇溶液中)给细胞层染色30分钟。用自来水将该平板洗涤3次、干燥并用1ml的1％肌氨酰溶液(PBS溶液中)使所述的细胞层裂解。在Elx800动态微量平板读出器(kinetic microplate reader)(Bio-Tek Instruments，Inc.)上的595nm处读取裂解溶液。
实施例1：PHY906对不同细胞系的毒性评价
简单地说，将1g的各批PHY906加入到10ml水中(1mg/ml)。就各批特性而言参见表6。
                表6.PHY906的批次特性
    特性     A批     B批
    原产地     台湾Sun-Ten     台湾Sun-Ten
    制备方法     标准     标准
在离心后收集上清液并通过0.22m滤膜过滤。将4种类型的细胞用于测试各批PHY906的生物作用：a)KB细胞(ATCC号为CCL-17)；b)HepG2细胞(ATCC号为HB-8065)；c)T-细胞淋巴瘤细胞系(CEM细胞)；d)结肠38；和e)HCT116(ATCC号为CCL-247)。
在第0天将癌细胞(1×104个)接种入24-孔平板中含有10％FBS和100μg/ml卡那霉素的1ml MEME培养基或RPMI 1640内。24小时后，将不同浓度的PHY906提取物加入到细胞中并在37℃下保温3天。然后除去培养基并用0.3ml的0.5％(w/v)亚甲蓝溶液(在50％EtOH溶液中)给细胞层染色30分钟。用自来水将该平板洗涤3次、干燥并用1ml的1％肌氨酰溶液(PBS溶液)使所述的细胞层裂解。在Elx800动态微量平板读出器(Bio-Tek Instruments，Inc.)上的595nm处读取裂解溶液。
使用人T-细胞淋巴瘤细胞系(CEM)进行细胞毒性研究。使CEM细胞(5×104个)生长在含有20％展示的(displayed)胎牛血清的1ml RPMI 1640培养基中。在第0天加入PHY906提取物。在添加PHY906后3天评价细胞的生长情况。使用血细胞计数器估计细胞数量。
将使用两批样品进行的试验结果列在表7中。基于这些数据发现A和B来源的PHY906对KB、CEM和HCT116细胞具有相对小的毒性，而对结肠38和HepG2细胞具有明显较大的毒性作用(参见表7)。在实施例11的表10中显示了相似的结果。
                      表7.传统草药制剂在不同细胞系中的细胞毒性
    IC50(mg/ml)a
  草药制剂b     KB     HepG2     CEM   结肠38     HCT116
  PHY906A  1.35±0.52  0.28±0.17  1.45±0.45     0.08     1.3
  PHY906B  1.80±0.99  0.17±0.12  1.28±0.02     0.08     1.2
a以草药制剂的干重为基准。
b含有50％赋形剂的不同研究批号的PHY906。
实施例2：CPT-11对BDF-1和裸鼠的剂量的测定
监测动物体重下降作为由抗癌化疗剂导致的毒性指征。使用6种不同剂量研究CPT-11对不带有肿瘤的BDF-1小鼠体重下降的作用：100、200、300、400、600或800mg/kg体重，从而测定小鼠体内的最大耐受剂量。在研究开始时经腹膜内(i.p.)给予单一快速浓注剂量的CPT-11且每天监测体重下降、持续121天。
在本研究开始时经腹膜内对小鼠给予CPT-11剂量之一且然后每天监测动物的体重下降、持续12天。
低于200mg/kg的剂量对体重几乎没有影响(与不接受CPT-11治疗的对照组小鼠进行比较)。相反，大于或等于600mg/kg的药物剂量在给予CPT-11后第2天导致动物死亡。一般来说，小鼠能够耐受高达400mg/kg的剂量。
附图1中显示了存活小鼠体重下降的分布。用300mg/kg CPT-11治疗的小鼠的平均体重明显低于不接受CPT-11治疗的小鼠的平均体重，直到治疗后5天为止(附图1)。这两组小鼠的平均体重从治疗后5天直到本试验结束时为止没有显著性差异。体重下降的期限和程度对给予动物的CPT-11的剂量敏感。在用400mg/kg的CPT-11治疗后即刻观察到了小鼠体重下降且持续6天。这些动物在第12天时逐步恢复了其最初体重。基于这些结果，将400mg/kg或300mg/kg CPT-11用于BDF-1小鼠模型。然而，接种人肿瘤细胞的裸鼠对CPT-11治疗明显比BDF-1小鼠更为敏感。CPT-11在带有人HepG2异种移植物的裸鼠体内的最大耐受剂量为200mg/kg(数据未显示)。
实施例3：PHY906对CPT-11诱发的带有肿瘤的BDF-1小鼠体重下降的作用
将PHY906评价为用于接种结肠38肿瘤细胞小鼠体内毒性副作用的CPT-11疗法的调节剂。基于上述发现(实施例2)，选择单一快速浓注剂量(single bolus dose)的400mg/kg CPT-11用于研究PHY906对与CPT-11毒性相关的体重下降的作用。为了评价PHY906是否影响CPT-11的抗肿瘤功效，经皮下给小鼠植入结肠38肿瘤细胞。在接种后10-14天和没有或有PHY906存在的情况下用CPT-11(400mg/kg，i.p.)治疗小鼠，其中以不同剂量(125mg/kg、250mg/kg和500mg/kg)口服给予PHY906，每天两次。以指定剂量持续进行PHY906治疗、连续8天。
附图2表示PHY906对CPT-11治疗的小鼠的体重下降的作用是剂量依赖性的。CPT-11治疗并接受500mg/kg/b.i.d.的PHY906的补充治疗的动物在维持体重和更为迅速地恢复其原始体重方面表现出显著的改善(p＜0.01)。表8概括了统计学结果。然而，接受250mg/kg/b.i.d.的PHY906的小鼠与对照组相比在体重下降方面没有表现出差异。
         表8.PHY-906对用CPT-11治疗的带有肿瘤的小鼠的体重下降的统计学分析
    N＝5 未治疗  CPT-11  CPT-11/PHY906500mg/kg   CPT-11/PHY906250mg/kg   CPT-11/PHY906125mg/kg
 未治疗  ----  P＜0.01   P＜0.05   p＜0.01     p＜0.01
 CPT-11  p＜0.01  ----   p＜0.01   P＞0.1     P＞0.1
 CPT-11/PHY906500mg/kg  p＜0.05  p＜0.01   ----   P＜0.01     p＜0.01
 CPT-11/PHY906250mg/kg  p＜0.01  P＞0.1   p＜0.01   ----     P＞0.1
 CPT-11/PHY906125mg/kg  p＜0.01  P＞0.1   p＜0.01   P＞0.1     ----
实施例4：接种Colon 38并用CPT-11和PHY906治疗的小鼠的肿瘤重量
如实施例3所述治疗小鼠并评价9天期限内的肿瘤重量。
结果表明用PHY906治疗既不会阻碍也不会影响CPT-11的抗肿瘤功效(附图3)。实际上，该数据提示这种草药确实可以提高CPT-11的抗肿瘤活性。
这些初步的结果提示可以将草药组合物PHY906用作CPT-11化疗的调节剂以便显著改善和缓解CPT-11的毒副作用而不会危害CPT11的抗肿瘤功效。
实施例5：PHY906对CPT-11在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体内的抗肿瘤 活性和血液毒性的作用
基于上述研究中获得的结果，500mg/kg/b.i.d.PHY906对由400mg/kg的最大耐受剂量的CPT-11诱发的宿主毒性产生了最佳的预防作用。将该组剂量用于接下来的研究。经口服对用一次剂量的CPT-11(400mg/kg，i.p.)治疗的带有结肠38的BDF-1小鼠给予500mg/kg/b.i.d.PHY906、持续4天或8天。每组中使用5只小鼠且将本实验重复8次。附图3代表全部实验的典型结果。在动物模型中通过伴随给予PHY906疗法不会危害根据肿瘤大小测定的CPT-11的抗肿瘤活性。实际上，肿瘤大小发生轻度的减小，这一结果提示PHY906可以强化CPT-11的抗肿瘤活性。
骨髓抑制是用CPT-11治疗的患者中常见的副作用(Bleiberg H和Cvitkovic E.，《欧洲癌症杂志》(Eur J Cancer)32A(增刊3)：S18-S23(1996))。为了评价PHY906是否有益于使CPT-11诱发的骨髓毒性逆转，在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠中检验血液学活性。正如附图4中所示，在全部方案中发现PHY906对红细胞计数或血小板计数没有影响且没有显示出对由CPT-11诱发的骨髓抑制的预防作用。就抗肿瘤活性和血液学活性而言，在用PHY906与CPT-11共同治疗4天或8天的方案之间没有显著性差异(数据未显示)。
实施例6：PHY906对CPT-11在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠的死亡率方面 的作用
将小鼠分成使用不同治疗方案的组：(A)组：用载体治疗；(B)组：用单剂量的400mg/kg CPT-11经腹膜内注射治疗；(C)组：用单一PHY906(500mg/kg/b.i.d.)治疗；或(D)组：用单剂量的400mg/kg CPT-11+500mg/kg/b.i.d.PHY906治疗4天或8天。各治疗方案的顺序如材料和方法部分中所述。正如表9中所述的，来自A组的35只带有肿瘤的小鼠中的35只(100％)和来自C组的15只小鼠中的15只(100％)在用载体或单一PHY906治疗4天或8天后均存活下来，这一结果表明PHY906没有毒性或毒性极低。相反，单独用CPT-11治疗(B组)8天后在40只带有肿瘤的小鼠中仅有33只(82.5％)存活下来。然而，这一存活率在接受4天或8天PHY906与CPT-11联合疗法(D组)后明显改善到了95％(20只小鼠中的19只)或100％(24只小鼠中的24只)。这一结果提示PHY906疗法可以对由单剂量400mg/kg CPT-11诱发的小鼠死亡率具有预防作用。
         表9.PHY906对CPT-11治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠的存活率的作用
                治疗               小鼠总数
  药物     CPT-11     PHY906  治疗的    存活的  存活率a％
  方案   剂量(mg/kg)   天数    剂量(mg/kg)  天数     N     N
    A     0     0     0     0     35     35     100
    Bb     400     1     0     0     40     33     82.5
    C     00     00     500500     48     3515     3515     100100
    Dc     400400     11     500500     48     2024     1924     95100
a将所有动物观察14天。
b用CPT-11治疗的40只小鼠中的7只在第5天(N＝1)、第6天(N＝3)、第7天(N＝1)和第8天(N＝2)死亡。
c由于使用了CPT-11与PHY906的联合疗法(4天)，所以1只小鼠在第6天死亡。
实施例7：PHY906对FU/LV在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体内抗肿瘤活 性的作用
FU/LV联用表现出有效的抗肿瘤活性且用作对结肠直肠癌患者的一线疗法(Goldber R.M.和Erlichman C.，《肿瘤学》(Oncology)12：59-63(1988)；Saltz L.B，Cox J.V，Blanke C，等，《新英格兰药物杂志》(New.Eng.J.Med.)343：905-914(2000))。因此，使用FU/LV在动物中进行与上述CPT-11疗法相似的实验。将带有结肠38肿瘤的小鼠分成4组：(A)组：用载体治疗；(B)组：单独用PHY906治疗；(C)组：用单一FU/LV治疗；和(D)组：用FU/LV+PHY906治疗。各治疗方案的顺序如材料和方法部分中所述。在该组实验中，在第0天仅对小鼠给予1次FU/LV，而每天给予两次PHY906、连续4天。
分别如附图5和6中所示每天监测体重和肿瘤大小的改变。正如附图5中所示，在4组中体重几乎没有发生变化。运一观察结果与使用CPT-11治疗观察到的结果相反。由于没有进行FU/LV对体重下降的剂量反应研究，所以可能的情况是在本实验中给予的FU/LV剂量不足够高至可诱发毒性和相关的体重下降。尽管体重下降不足以证明PHY906对FU/LV的保护作用，但是附图6表明伴随PHY906治疗不会影响FU/LV在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体内的抗肿瘤活性。D组中动物的肿瘤生长分布慢于C组，这一结果提示PHY906可以提高FU/LV在该动物模型中的抗肿瘤活性。此外，在第4、8和12天监测FU/LV在伴随给予PHY906的治疗小鼠体内的血液毒性。PHY906没有使FU/LV诱发的众所周知的副作用白细胞减少和血小板减少(van der WiltC.L，van Groeningen，C.J，Pinedo H.M，等，《癌症研究和临床肿瘤学杂志》(J.Cancer Res.Clin.Oncol.)123：595601(1997))逆转(附图7)。
实施例8：PHY906对CPT-11/FU/LV在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体内抗 肿瘤活性的作用
FDA近期批准了CPT-11+FU/LV新三联疗法作为用于晚期结肠直肠癌的一线疗法(Goldber R.M.和Erlichman C.，《肿瘤学》(Oncology)12：59-63(1988)；Saltz L.B，Cox J.V，Blanke C，等，《新英格兰药物杂志》(New.Eng.J.Med.)343：905-914(2000))。已经证实该方案可使肿瘤生长和死亡率的发展减缓。然而，在接受这种三联疗法方案的患者中经常观察到严重的迟发的腹泻。预实验表明PHY906可以提高CPT-11在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠中的治疗指数。因此，使用与实施例7中所述相似的方案评价PHY906对缓解三联化疗中限制剂量的毒性的功效。将带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠分成2组：(A)组：仅用CPT-11/FU/LV治疗；(B)组：用CPT-11/FU/LV+PHY906治疗。两组中所用的FU和LV的剂量均各为100mg/kg，因为在这些剂量下在预研究中观察到了极低的毒性。在这种三联方案中不进行对CPT-11的剂量依赖性研究，而使用200mg/kg或300mg/kg CPT-11。各方案的顺序如材料和方法部分中所述。在化疗后每天给予两次PHY906、持续4天。
结果表明PHY906不会影响三联疗法在200mg/kg 和300mg/kg CPT-11下的抗肿瘤功效，分别如附图8和9中所示。正如附图8中所示，由于在三联疗法中使用了200mg/kg CPT-11，所以PHY906在第14天轻度提高了对肿瘤的抑制作用(p＝0.045)。与不接受PHY906治疗的组相比，在300mg/kg CPT-11下，PHY906对肿瘤抑制作用的提高在第14天时并不显著(p＝0.05)，但在第21天时明显(p＝0.014)。这一结果提示可能需要较长时间期限来观察PHY906对CPT-11/FU/LV肿瘤抑制作用的提高。在所研究的剂量下，PHY906表现出对三联疗法和CPT-11疗法中抗肿瘤活性的相似有益作用。
在三联疗法中所用的剂量下，动物表现出体重下降。然而，PHY906在治疗过程中不会表现出使体重下降，正如附图10中所示。此外，PHY906对体重下降的恢复没有影响。
实施例9：在有和没有PHY906存在的情况下CPT-11/FU/LV在带有结肠38 肿瘤的BDF-1小鼠体内的药动学特性
在有和没有PHY906存在的情况下CPT-11/FU/LV在带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠体内的药动学数据如附图18-20中所示。PHY906-6是含有10％赋形剂(淀粉)的临床批号的PHY906。
血浆中CPT-11曲线下的面积(AUC)在共同给予PHY906与三联CPT-11/FU/LV后增加。在联合给予PHY906后在肿瘤或肝脏组织中的CPT-11没有显著改变。
CPT-11的活性代谢物，SN-38，在血浆、肝脏或肿瘤中保持不变。
在将PHY906与CPT-11/FU/LV所列疗法共同给药后血浆或肝脏中FU及其核苷/核苷酸代谢物(FU+FUR+FUMP)的AUCs改变。
实施例10：PHY906对CPT-11在带有人HepG2肿瘤的裸鼠体内的抗肿瘤活性 和毒性的作用
来自上述实施例、特别是实施例5、7和8的结果表明PHY906与化疗剂联用可以强化化疗剂的抗肿瘤作用并进一步延缓了肿瘤生长。基于PHY906中含有的草药的已知药理学分布(表1)推断出这种促进作用可以通过正常小鼠体内的免疫和/或血液系统起作用。因此，设计实验用于在免疫和血液系统有缺陷的裸鼠中测试这种推断。
将人HepG2肿瘤细胞植入NCr-裸鼠以便测试PHY906对CPT-11抗肿瘤活性的作用。预实验表明CPT-11在裸鼠体内的最大耐受剂量为200mg/kg，将它用于本研究。在第0天给予CPT-11(200mg/kg，i.p.)。从第0天开始每天给予两次500mg/kg的PHY906。正如附图11中所示，PHY906不会危害CPT-11对裸鼠体内人HepG2异种移植物的抗肿瘤作用。然而，不同于在BDF-1小鼠中的观察结果，PHY906没有表现出对预防由CPT-11导致的体重下降(附图12)或动物死亡(数据未显示)的有益作用。PHY906可以预防正常小鼠体重下降但不能防止裸鼠体重下降的事实提示PHY906通过血液和免疫系统发挥其作用，而这二者是裸鼠缺乏的。
实施例11：不同中草药制剂对CPT-11的抗肿瘤作用、小鼠体重下降和存活率 的作用
腹泻是用癌症化疗剂治疗的患者中限制剂量的毒性之一。除PHY906外，还检验了其它抗腹泻药物。它们包括诸如PHY-14ST、PHY-15ST和PHY915这样的中药以及目前推荐为用于CPT-11诱发的迟发腹泻的抗腹泻药的洛哌丁胺。
除肿瘤生长抑制和体重下降外，我们还检查了接受不同草药制剂联合单一快速浓注给予的CPT-11的小鼠的存活率。在所检验的几种制剂中，PHY906是唯一一种观察到提高CPT-11抗肿瘤活性的制剂(表9)，即使PHY906中含有的某些草药也存在于其它草药制剂中。在死亡率研究中，PHY906没有表现出对动物死亡率的统计学作用(P＝0.044)。观察到所测试的诸如PHY-14ST、PHY-15ST和洛哌丁胺这样的其它抗腹泻药物在防止体重下降或提高CPT-11抗肿瘤作用方面完全无效。令人意外的是观察到PHY-915可降低CPT-11的抗肿瘤活性(表10)。
    表10.不同草药制剂对CPT-11治疗的带有结肠38肿瘤的BDF-1小鼠的作用
草药制剂       预防体重下降   P值b，d  抗肿瘤作用      P值b，e   动物死亡a(死
(1gc/kg，bid，8                                                      亡数/总数)
天)
无                                                                   7/40
PHY906             显著       0.0004       提高        0.0027        0/24
PHY14ST            无变化     0.1072       无变化      0.2742        1f/10
PHY15ST            无变化     0.3259       无变化      0.6535        0/3
PHY915             显著       0.0306       降低        0.0885        0/5
洛哌丁胺           无变化     0.9706       无变化      0.1595        3g/10
a将全部动物观察14天。
b使用斯氏配对t-检验(Student’s paired t-test)计算p值。
c以含有赋形剂的制剂干重为基准。
d在CPT-11治疗小鼠体重下降达到最大的当天计算。
e最初药物治疗后第6天对肿瘤大小进行计算。
f1只小鼠在第6天死亡。
g小鼠在第3天(N＝1)、第4天(N＝1)和第5天(N＝1)死亡。
实施例12：PHY906在不同细胞系中的细胞毒性
为了评价体外细胞模型作为质量保证的措施，研究两种不同PHY906制剂(PHY906A和PHY906B)对不同人肿瘤细胞系和小鼠结肠38肿瘤细胞系的生长抑制的作用。正如表11中所示，PHY906A和PHY906B对所述细胞系中的生长抑制活性没有显著性差异。发现所关注的HepG2细胞系对PHY906的敏感性高于其它人细胞系。
                    表11.PHY906在不同细胞系中的细胞毒性
                              IC50(mg/ml)a
草药制剂b     KB            HepG2          CEM          HCT116       结肠38
PHY906A     0.67±0.26     0.14±0.08     0.73±0.17       0.65      0.08±0.02
PHY906B     0.90±0.5      0.09±0.06     0.64±0.01       0.6       0.07±0.02
a以粗草药的水提取物的干重为基准。
b不同研究批号的PHY906。
上述实验结果提示PHY906减轻了CPT-11、FU/LV或使用CPT-11/FU/LV三联疗法治疗诱发的某些宿主毒性。植物药PHY906不仅可以维持、而且可以强化所测试化疗剂的抗肿瘤活性。实际上，PHY906通过增加带有结肠38肿瘤的小鼠和带有人HepG2异种移植物的裸鼠的总体抗肿瘤活性而提高了CPT-11、FU/LV和CPT-11/FU/LV的治疗指数。在两种不同肿瘤模型中使用几种抗癌剂测试出了这些观察结果(附图3、6、8、9和11)。
实施例13：PHY906对接种结肠38的用L-OddC治疗的小鼠的肿瘤生长的作 用
将PHY906评价为用于接种了结肠38肿瘤细胞的小鼠肿瘤生长的L-OddC(β-L-二氧戊环-胞苷)疗法的调节剂。给小鼠皮下注射鼠结肠38肿瘤细胞。接种癌细胞后7天，用OddC(25mg/kg)经腹膜内治疗小鼠并口服给予PHY906(500mg/kg，b.i.d.)。然后只在剩余的实验期内连续给予动物相同剂量的PHY906。
正如附图13中所示，使用L-OddC治疗表明PHY906既不会阻碍也不会影响L-OddC的抗肿瘤活性。实际上，数据提示该草药药物确实可以提高L-OddC的抗肿瘤活性。
因此，这些结果提示可以将草药PHY906用作L-OddC化疗的调节剂以便显著改善和减轻毒副作用而不会危害L-OddC的抗肿瘤功效。
实施例14：PHY906对接种结肠38的用VP-16治疗的小鼠肿瘤生长的作用
将PHY906评价为用于接种了结肠38肿瘤细胞的小鼠肿瘤生长的VP-16(依托泊苷，拓扑异构酶II抑制剂)疗法的调节剂。给小鼠皮下注射鼠结肠38肿瘤细胞。接种癌细胞后7天，用VP-16(25mg/kg)经腹膜内治疗小鼠并口服给予PHY906(500mg/kg，b.i.d.)。然后在剩余的实验期内连续给予动物相同剂量的PHY906。
正如附图14中所示，使用VP-16治疗表明PHY906既不会阻碍也不会影响VP-16的抗肿瘤活性。实际上，该数据提示草药药物确实可以提高VP-16的抗肿瘤活性。
因此，这些结果提示可以将草药PHY906用作VP-16化疗的调节剂以便显著改善和减轻毒副作用而不会危害VP-16的抗肿瘤功效。
实施例15：PHY906对接种结肠38的用5-氟尿嘧啶治疗的小鼠肿瘤生长的作 用
将PHY906评价为用于接种了结肠38肿瘤细胞的小鼠肿瘤生长的5-氟尿嘧啶(FU)疗法的调节剂。给小鼠皮下注射鼠结肠38肿瘤细胞。接种癌细胞后7天，以两种剂量(250mg/kg，第0天一次给予或在第0天-第4天每天给予30mg/kg剂量)用5-氟尿嘧啶经腹膜内治疗小鼠并口服给予PHY906(500mg/kg，b.i.d.)。然后在剩余的实验期内连续只给予动物相同剂量的PHY906。
正如附图15和16中所示，使用5-氟尿嘧啶治疗表明PHY906既不会阻碍也不会影响5-氟尿嘧啶的抗肿瘤活性。实际上，该数据提示该草药药物确实可以提高5-氟尿嘧啶的抗肿瘤活性。
因此，这些结果提示可以将草药PHY906用作5-氟尿嘧啶化疗的调节剂以便显著改善和减轻毒副作用而不会危害5-氟尿嘧啶的抗肿瘤功效。
实施例16：PHY906对接种结肠38的用CPT-11和洛哌丁胺治疗的小鼠肿瘤 生长的作用
在有抗腹泻药物洛哌丁胺存在的情况下将PHY906评价为用于接种了结肠38肿瘤细胞的小鼠肿瘤生长的CPT-11疗法的调节剂。给小鼠皮下注射鼠结肠38肿瘤细胞。接种癌细胞后7天，单独或在口服给予PHY906(500mg/kg，b.i.d.)存在的情况下用CPT-11(400mg/kg，b.i.d.)，或用洛哌丁胺(2mg/kg，p.o.，b.i.d.)治疗小鼠。
附图17比较了PHY906与洛哌丁胺的抗肿瘤作用。正如附图17中所示，在有PHY906存在的情况下CPT-11在减少肿瘤生长(以起始肿瘤重量百分比测定)方面比洛哌丁胺更为有效。
这些初步结果提示草药PHY906比以标准方式给予洛哌丁胺在减轻CPT-11诱发的腹泻方面更为有效。
实施例17：在与伊立替康联用时测定PHY906给药的最低有效剂量(MED)和最 佳期限
介绍：几种研究表明由7种草药组成的Kampo药可有效地预防CPT-11-诱发的动物腹泻和CPT-11-诱发的体内腹泻的严重性(Mori，1998)。
还在体内动物模型中评价了PHY906且已经证实它可减轻伊立替康诱发的毒性的严重程度。因此，基于证实在人体体内安全性的长期历史性实验(1500年)、这种化合物在动物模型中有希望的临床前期活性和对相关草药化合物在该环境中所关注到的潜在活性，可以进行研究以便评价PHY906对诸如体重下降、腹泻、总体行为状态和生命质量这样化疗诱发的毒性的严重程度的作用和对伊立替康或其它药物在患顽固性晚期结肠直肠癌患者体内的抗肿瘤活性的作用。
这项研究包括经组织学证实的FU-顽固性晚期结肠直肠癌的患者。不需要可确定或可评价的疾病。患有中枢神经系统(CNS)转移瘤的患者是适合的，条件是CNS疾病在手术、化疗和/或放疗完成后已经保持稳定了至少4周。
在本研究中的参与者在年龄上≥18岁且没有明显潜在的疾病。所有患者的ECOG行为状态为0-2、生命预期至少为3个月且已经获得通知得到许可。(ECOG是″东方合作肿瘤机构″(Eastern Cooperative Oncology Group)的缩写。ECOG 0＝患者可进行正常活动；ECOG 1＝患者具有最低限度的症状；ECOG 2＝对患者而言要花费＜50％的时间在病床上；ECOG 3＝患者将＞50％的时间花费在病床上；ECOG 4＝患者始终在病床上)。进入本研究的患者必须在4周内从任何前期手术的影响中完全恢复且不再接受广泛放疗或任何化疗(对亚硝基脲类或丝裂霉素C为6周)。对进入本研究的要求是ANC(绝对嗜中性白细胞计数)≥1500/μl、血小板计数≥40ml/分钟且总胆红素≤2.0mg/μl。
治疗前评价：在治疗开始前，全部患者均有完整的病史、身体检查及其行为状态的测定值。实验室研究包括含有差异的全血计数(CBC)、血清清蛋白、电解质、葡萄糖、血脲氮(BUN)、肌酸苷、血清钙和镁、肝功检验、凝血酶原和部分组织促凝血酶原激酶时间和尿分析。
治疗方法：将伊立替康从冻干粉再溶解入2ml无菌水、用100ml的DSW(5％葡萄糖水溶液)稀释并在90分钟内以125mg/m2的剂量给药。在各参与医院的门诊治疗中按照每周方案将伊立替康化疗给予4周，还有2周休息期。
在饮食前30分钟空腹服用PHY906。在化疗的当天服用首次剂量，随后给予伊立替康。
从0.60g的起始剂量开始在各餐前口服给予PHY906、每天3次。(每日总剂量为1.80gm/天)。目前在东方(Orient)患者使用的PHY906剂量为7.2gm/天且迄今为止还没有观察到不良情况。因此，提出开始本试验的该剂量为所述草药常用剂量的1/4。在化疗过程中将PHY906与伊立替康一起给予完整的4周，还有2周休息。在该起始剂量水平的PHY906下治疗的患者最少有3人。一旦3位患者完成了整个6周的周期，那么对随后组的3位患者使用接下来的较高剂量，条件是3位患者中没有1位出现限制剂量的毒性(DLT)。在全部患者中，在开始第一个化疗周期后24小时进行药动学研究。
如果3位患者中有1位出现DLT，那么以相同剂量水平治疗3位以上的患者。如果接下来的3位患者中≤1的患者出现DLT(总共6位患者中的1或2位)，使剂量逐步增加至下一剂量水平，但不包括那些在双盲方案中发生情况时、接下来在使用改进的Fibonacci方案逐步增加至n+1水平时(表12)的剂量。
                                 表12.PHY906的剂量递增方案
    剂量水平     递增     总剂量(gm/天)
    1     开始     1.8
    2     2×水平1     3.6
    3     2×水平2     7.2
一旦达到7.2gm/天剂量水平且在该水平“n”上没有观察到≥2级的毒性，则进行如下所示的改进的Fibonacci递增方案
    N+1     1.5×水平n
    N+2     1.33×水平n+1
    N+3     1.25×水平n+2
    所有随后的水平：25％的递增值，直到达到最大耐受剂量为止
PHY906的剂量递增方案：如果在临床上由主要研究者指定和考虑必不可少，那么可以使用较低的剂量水平而非上述特定的剂量水平。
进入并递增至下一剂量方案的受治疗者的比例取决于对在各剂量水平下进入的患者安全性分布的评价。按照NCI临床试验指南(CTG)扩充的常用毒性标准来评价毒性并对其进行分级。
用于该方案的止吐药方案由1-2mg混入50ml生理盐水的格拉司琼(granisetron)组成并在化疗前的各治疗当天经1/2小时给药。将该止吐药(静脉内或口服给药)每隔8小时重复给药一次作为对控制恶心和/或呕吐的需要。隔周重复一次治疗，连续4周，随后是2周的休息。该过程构成了一个治疗周期。
用阿托品(0.5-1mg)通过静脉内治疗伊立替康输注过程中或之后不久发生的腹泻。就给予伊立替康后≥12小时发生的腹泻而言，在患者首次出现腹泻症候时给予口服4mg洛哌丁胺进行治疗，随后每隔2小时口服一次2mg洛哌丁胺(在夜晚每隔3小时口服一次4mg洛哌丁胺)，直到腹泻完全消除至少12小时为止。如果腹泻带血并伴有≥101.6°F的发热且持续不退≥12小时，那么认为该患者应去医院进一步检查和治疗。
伊立替康的剂量改变：在本研究中没有进行伊立替康的剂量递增。按照制造商提供的包装说明书中的建议进行针对毒性的剂量改变(表13)。
表13.推荐的每周和每隔3周1次的剂量改变方案
新的治疗过程在粒细胞计数恢复至≥1500/mm3和血小板计数恢复至≥100，000/mm3且与治疗相关的腹泻完全消除才应开始。应使治疗延缓1-2周以便从与治疗相关的毒性中恢复。如果在2周延缓后该患者尚未恢复，那么应考虑对其终止Camptosar。
  每周毒性NCI等级b值   化疗过程中 下一次治疗过程开始时(足够的恢复后)，与上述过程中的起始剂量相比较a
  每周 每周     每3周一次
  无毒性   维持剂量水平   ↑25mg/m2-150mg/m2的最大剂量     1维持剂量水平
  嗜中性白细胞减少症1(1500-1999/mm3)2(1000-1499/mm3)3(550-999/mm3)4(＜500/mm3)   维持剂量水平↓25mg/m2不使用剂量，然后↓25mg/m2，此时消除至≤2级不使用剂量，然后↓50mg/m2，此时消除至≤2级   维持剂量水平维持剂量水平↓25mg/m2↓50mg/m2     维持剂量水乎维持剂量水平↓25mg/m2↓50mg/m2
  中性白细胞减少性发热(4级的中性白细胞减少症&≥2级的发热)   不使用剂量，然后↓50mg/m2，此时消除   ↓50mg/m2     ↓50mg/m2
  其它血液毒性 对上述白细胞减少症推荐的用于白细胞减少、血小板减少的剂量改变且也基于NCI毒性标准且与随后治疗过程开始时相同
  腹泻1(2-3次排便/天＞pretxc)2(4-6次排便/天＞pretxc)3(7-9次排便/天＞pretxc)4(＝10次排便/天＞pretxc) 维持剂量水平↓25mg/m2不使用剂量，然后↓25mg/m2，此时消除至≤2级不使用剂量，然后↓50mg/m2，此时消除至≤2级     维持剂量水平    维持剂量水平维持剂量水平    维持剂量水平↓25mg/m2      ↓50mg/m2↓50mg/m2      ↓50mg/m2
  其它非血液毒性1234     维持剂量水平    维持剂量水平维持剂量水平    维持剂量水平↓25mg/m2       ↓25mg/m2↓50mg/m2
a所有剂量改变应基于最坏的前述毒性
b国家癌症研究所常用毒性标准
c治疗前
反应和毒性评价：通过每周临床医师的检查和血液计数评价毒性并按照国家癌症研究所的常用毒性标准进行分级。在每次治疗前重复这些评价和完全的化学分布。
患者还保持每天记录其肠道习性和抗蠕动剂的使用情况。该日记包括摄取PHY906的时间、其肠运动频率和持久性记录(成形的、松散的或水样)且由患者使用该抗蠕动疗法来控制这种症状。
参与研究的护士在第一个周期过程中的巡视期间每周至少与患者接触一次以便强化对腹泻控制和完成日记的指导。还使用确定的FAST方法评价了包括衰弱、恶心、呕吐和食欲下降在内的总体生命质量。
由进行各次临床治疗巡视的药剂师对药丸进行计数以便评价使用PHY906的配合性。对疾病反应的评价在每隔2次治疗周期后进行。按照ECOG标准确定反应并在患可确定或可评价疾病的所有患者中评价该反应，但这并不构成本研究的终点。
伊立替康的药动学研究：在选择的患者中，进行药动学研究以便评价PHY906是否可以影响伊立替康的代谢和消除。在这些患者中，单独给予首次剂量的伊立替康(第1个周期/第1天)并在第2天开始给予PHY906。
在给予伊立替康前、输注伊立替康过程中的30分钟、60分钟、90分钟和第1个周期的第1天和第1个周期的第8天输注结束后0.5、1.5、3.5和6小时立即将血样收集在肝素化试管内。立即用2.50μl血浆处理血样并加入到聚苯乙烯试管内的500μl的内标溶液中。内标溶液由用冰醋酸酸化的50g/ml喜树碱的乙腈溶液组成、4.0ml溶于100ml。将该样品涡旋30秒、置于40℃的水浴中15分钟、在室温下冷却且然后与900μl的25mM三乙胺缓冲液(pH4.2)混合。将上清液转入1.5ml微量离心管、以13,000xg在微量离心机中离心4分钟并通过高效液相色谱(HPLC)分析澄清上清液的等分部分。
应用带有λEX 372nm和λEm 535nm的荧光检测器(Pharmacia & UpjohnSOP#UPJ-120-5)、在Microsorh C 18(4.5×250mm，5μm颗粒大小)反相HPLC柱上进行层析分析，用72∶28(v/v)25mM TEA/乙腈缓冲液以1ml/分钟洗脱。通过应用PC-NONLIN软件(Scientific Consulting Lexington，KY)和标准药动学方程对数据进行非区划分析来测定最大血浆浓度、末端半衰期和AUC(曲线下的面积)。在第1个周期/第1天和第1个周期/第8天进行药动学研究以便确定延长与PHY906接触是否可以产生对伊立替康血浆清除的累积作用。
应理解上述讨论和实施例仅作为对某些优选实施方案的详细描述出现。因此，本领域技术人员显然可以进行各种修改和等同替换而不会脱离本发明的实质和范围。将在本专利申请中确定的所有杂志的文章、其它参考文献、专利和专利申请的全部内容引入作为参考。
上述具体描述仅用于清楚地理解的目的而不应将改变理解为起不必要的限定作用，这对本领域技术人员而言是显而易见的。
尽管已经结合特定实施方案描述了本发明，但是可以理解的是能够进行进一步修改且本申请用于包括一般根据本发明机理的任何变化形式、应用或适应性且包括作为本领域技术人员从本发明所涉及的本申请公开内容中衍生出的其它技术方案且它们适用于上文所列的主要特征且属于待批权利要求的范围。
       在说明书正文中未给出完全引用的参考文献
所有在此引用的文献均全文引入。
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Claims (56)

1.一种组合物，它包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种化疗用化合物。
2.权利要求1所述的组合物，其中的植物种类是黄芩、甘草、枣和芍药。
3.权利要求1所述的组合物，其中所述的一种或多种化疗用化合物是癌症化疗药。
4.权利要求3所述的组合物，其中所述的癌症化疗药选自伊立替康制剂、5-氟尿嘧啶、VP-16和β-L-二氧戊环-胞苷。
5.一种提高用于治疗癌症的癌症化疗化合物的治疗指数的方法，该方法通过根据哺乳动物的需要对其给予治疗有效量的组合物来进行，该组合物包括药物上可接受的载体和下列各草药属的植物种类：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
6.权利要求5所述的方法，其中来自所述草药的所述物质是由浓缩含水液体得到的成粒提取物的形式。
7.权利要求5所述的方法，其中所述的组合物是可摄取的形式。
8.权利要求7所述的方法，其中所述的可摄取的形式选自粉剂、胶囊剂、液体和片剂。
9.权利要求5所述的方法，其中所述的组合物是栓剂形式。
10.权利要求5所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
11.一种根据哺乳动物需要对其疾病进行治疗的方法，该方法包括给予治疗有效量的一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种化疗用化合物。
12.权利要求11所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
13.一种根据哺乳动物需要对其疾病进行治疗的方法，该方法包括给予治疗有效量的一种或多种化疗用化合物和一种组合物的步骤，所述的组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
14.权利要求13所述的方法，其中在给予一种或多种化疗用化合物之前给予所述的组合物。
15.权利要求13所述的方法，其中在给予一种或多种化疗用化合物之后给予所述的组合物。
16.权利要求13所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
17.一种调节疾病治疗的血液学或免疫学活性的方法，该方法通过根据哺乳动物的需要对其给予治疗有效量的一种组合物的步骤来进行，该组合物主要由药物上可接受的载体和来自下列各草药属的植物种类的物质组成：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
18.权利要求17所述的方法，其中来自所述草药的物质是由浓缩含水液体得到的成粒提取物的形式。
19.权利要求17所述的方法，其中所述的组合物是可摄取的形式。
20.权利要求19所述的方法，其中所述的可摄取的形式选自粉剂、胶囊剂、液体和片剂。
21.权利要求17所述的方法，其中所述的组合物是栓剂形式。
22.权利要求17所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
23.一种改善进行化疗的哺乳动物的生命质量的方法，该方法包括给予治疗有效量的一种或多种化疗用化合物和一种组合物的步骤，所述的组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属。
24.权利要求23所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
25.一种组合物，它包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括一种化疗用化合物的化疗制剂。
26.权利要求25所述的组合物，其中所述的草药制剂由黄芩、甘草、枣和芍药组成。
27.权利要求25所述组合物，其中所述化疗制剂包括一种癌症化疗剂。
28.权利要求27所述的组合物，其中所述的癌症化疗剂选自伊立替康制剂、5-氟尿嘧啶、VP-16和β-L-二氧戊环-胞苷。
29.一种根据哺乳动物需要对其进行治疗的方法，该方法包括给予治疗有效量的一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括一种化疗用化合物的化疗制剂。
30.一种减轻化疗用化合物在哺乳动物体内的副作用的方法，该方法包括给予一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括所述化疗用化合物的化疗制剂。
31.权利要求30所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
32.一种提高化疗制剂在哺乳动物体内的治疗有效性的方法，该方法包括给予一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括一种化疗用化合物的化疗制剂。
33.权利要求32所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
34.一种提高化疗用化合物在哺乳动物体内的抗肿瘤活性的方法，该方法包括给予一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括所述化疗用化合物的化疗制剂。
35.权利要求34所述的方法，其中所述的哺乳动物是人。
36.一种使用化疗剂的方法，该方法包括给予一种组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂；和
iii)包括一种化疗用化合物的化疗制剂。
37.一种治疗方法，该方法包括一种化疗方案，该方案包括使用一种化疗用化合物和一种组合物的步骤，所述的组合物包括：
i)药物上可接受的载体；和
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂。
38.一种治疗方案，该方案包括使用化疗用化合物和组合物的步骤，所述的组合物包括：
i)药物上可接受的载体；和
ii)包括黄芩属、甘草属、枣属和芍药属的草药制剂。
39.权利要求1所述的组合物，其中该组合物包括三种化疗用化合物。
40.权利要求39所述的组合物，其中所述的化疗用化合物是CPT-11、FU和LV。
41.权利要求25所述的组合物，其中所述的化疗制剂包括三种化疗用化合物。
42.权利要求41所述的组合物，其中所述的化疗用化合物是CPT-11、FU和LV。
43.权利要求11、13或23中任意一项所述的方法，其中该方法包括给予三种化疗用化合物。
44.权利要求43所述的方法，其中所述的三种化疗用化合物是CPT-11、FU和LV。
45.权利要求29、30、32、34、36或37中任意一项所述的方法，其中该方法包括含三种化疗用化合物的化疗制剂。
46.权利要求45所述的方法，其中所述的三种化疗用化合物是CPT-11、FU和LV。
47.一种组合物，它包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种抗病毒剂。
48.权利要求47所述的组合物，其中所述的植物种类是黄芩、甘草、枣和芍药。
49.权利要求47所述的组合物，其中所述的一种或多种抗病毒剂是抗逆转录病毒剂。
50.权利要求47所述的组合物，其中所述的抗病毒剂选自AZT、DDI、3TC和D4T。
51.权利要求47所述的组合物，其中该组合物包括三种抗病毒剂。
52.权利要求51所述的组合物，其中所述的三种抗病毒剂选自包括下列物质在内的组：1)d4T、3TC和蛋白酶抑制剂；2)AZT、3TC和蛋白酶抑制剂；和3)AZT、DDI和蛋白酶抑制剂。
53.权利要求52所述的组合物，其中所述的蛋白酶抑制剂选自nelfinavir、indinavir、沙奎那韦和ritonavir。
54.一种根据患者需要对其进行治疗的方法，该方法包括给予治疗有效量的组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种抗病毒剂。
55.一种提高抗病毒疗法的治疗有效性的方法，该方法包括给予治疗有效量的组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种抗病毒剂。
56.一种提高抗病毒疗法的抗病毒活性的方法，该方法包括给予治疗有效量的组合物的步骤，该组合物包括：
i)药物上可接受的载体；
ii)来自下列各草药属的植物种类的材料或化学物质：黄芩属、甘草属、枣属和芍药属；和
iii)一种或多种抗病毒剂。
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