CN101073611A - 一种抗肿瘤的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种用于抗肿瘤的药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由人参、茯苓、苦参和/或白花蛇舌草制成，也可由人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱和/或白花蛇舌草提取物投料制成，可制成药学上可接受的任一剂型。该组合物具有协同增效作用，副作用小，比单用人参、茯苓、苦参或白花蛇舌草的效果显著提高，产生了意想不到的效果，具有广阔的应用前景。

Description

一种抗肿瘤的药物组合物

1、技术领域

本发明涉及一种主要由人参或人参总皂苷、茯苓或茯苓多糖和苦参或苦参总碱/白花蛇舌草或白花蛇舌草提取物制成的用于抗肿瘤的药物组合物及其制备方法，属于医药技术领域。

2、背景技术

肿瘤，尤其是恶性肿瘤(癌症)，是一类严重威胁人类生命和健康的疾病，死亡率极高。据统计资料报道，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，在全球癌症每年夺去大约600万人的生命，并把1000万人置于死亡的边缘，已成为人类的头号杀手。肿瘤是人体中正在发育的或成熟的正常细胞，在某些不良因素的长期作用下，某部的细胞群，出现的过度增生或异常分化而生成的新生物，在局部形成肿块。但它与正常的组织和细胞不同，不按正常细胞的新陈代谢规律生长，而变得不受约束和控制，不会正常死亡，导致了细胞呈现异常的形态、功能和代谢，以致可以破坏正常的组织器官的结构并影响其功能。且恶性肿瘤细胞还能向周围蔓延，甚至扩散转移到其他器官组织，继续成倍增生，造成对人体或生命极大的威胁。目前，现代医学对癌症的治疗主要是手术治疗配合放疗、化疗。手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖，而这正是日后癌症复发和转移的根源；放疗、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝脏、肾脏、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以接受进一步治疗。中医药治疗癌症有成功的经验和独特的优势，具有抗癌抑瘤，提高机体免疫功能，降低放、化疗毒副反应，调节机体阴阳平衡，提高带癌生存率及生存质量的突出作用，特别是对癌症手术后的康复，以及对放、化疗的增效减毒方面有良好的作用，所以，研究治疗癌症的中药新药为世人所瞩目。

人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根茎，以其根部入药，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效，是著名的珍贵药材。现代实验药理学和临床药理学研究表明，人参具有抗肿瘤活性，其抗肿瘤的活性成分主要是人参皂苷和人参多糖。人参皂苷可直接作用于癌细胞，通过诱导其凋亡抑制肿瘤的生长或诱导其分化使其逆转；可通过作用于肿瘤侵袭的多个环节抑制肿瘤的转移；可逆转肿瘤的耐药性，提高化疗药物的抗肿瘤活性；也可通过影响代谢和调节免疫功能，增强机体对疾病的抵抗能力，从而抑制肿瘤的生长；还可影响细胞连接通讯或抑制酶的活性拮抗致癌剂的作用起化学防癌的作用。

茯苓为多孔菌科真菌茯苓(Poria coco(Schw.)Wolf)的干燥菌核。味甘、淡，性平；归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿，健脾宁心的功效。近年的研究表明，茯苓具有积极的抗肿瘤作用，其抗肿瘤的主要活性成分是茯苓多糖。茯苓多糖积极参与抗肿瘤的免疫应答，促进T淋巴细胞的增殖分化，增强巨噬细胞活力，提高免疫活性细胞的杀伤活性，纠正神经内分泌紊乱，增强对化疗的耐受性，消除疲劳，纠正蛋白质合成，减少出血感染，抑制病灶发展、恶化，延长存活时间。

苦参为豆科槐属植物苦参(sophora flarescen Ait.)的干燥根，具有清热燥湿等作用，近年来研究发现，苦参具有多种药理作用，可用于肿瘤，肝炎等疑难杂症的治疗。苦参总碱是从豆科槐属植物苦参中提取的总生物碱，含有苦参碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱等多种生物碱，能杀伤肿瘤细胞，且毒副作用小，无抑制骨髓和机体免疫功能，是理想的抗癌药物，适用于消化道及生殖系统恶性肿瘤。

白花蛇舌草(Oldenlandia diffusa(Willd)Roxb)始载于《广西中药志》，为茜草科植物白花蛇舌草的带根全草。广泛分布于长江流域及以南，主产福建、广东、广西等地，其味苦、甘、寒，入心、肝、脾三经，有清热解毒，活血化瘀，消炎止痛等功效。现代药理研究表明白花蛇舌草具有抗菌消炎、清热解毒、活血化瘀、利水通淋及抗肿瘤等作用，可用于治疗胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等，临床应用广泛。白花蛇舌草中的黄酮类、三萜混合酸，香豆素类和多糖类为其抗癌的主要有效成分。

目前，利用人参或人参总皂苷、茯苓或茯苓多糖和苦参或苦参总碱/白花蛇舌草或白花蛇舌草提取物相互作用，配伍组方，制备用于抗肿瘤方面的药物，尚未见报道。

3、发明内容

为了满足临床需要，扩大用药品种，更好的治疗癌症，提高人民的健康水平和患者的生活质量，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法，本发明药物组合物主要由人参、茯苓、苦参和/或白花蛇舌草制成，可用于多种癌症的治疗。

本发明药物组合物原料药的重量份数为：人参600～30000份、茯苓1500～65000份、苦参3000～250000份和/或白花蛇舌草200～20000份；优选为：人参1500～12000份、茯苓4000～25000份、苦参7500～100000份和/或白花蛇舌草500～8000份；进一步优选为：人参3000～6000份、茯苓8000～12500份、苦参15000～50000份和/或白花蛇舌草1000～4000份。

上述药物组合物中的人参、茯苓、苦参和/或白花蛇舌草可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。所得总提取物的主要有效成分为人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱和/或白花蛇舌草总黄酮。总提取物中主要有效成分的总含量不低于35％。

本发明药物组合物中的人参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到人参提取物，提取溶剂优选水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种人参的优选提取工艺，具体如下：

取人参药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取二次，每次加乙醇10倍量，提取3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加水饱和的正丁醇提取3次，每次加水饱和的正丁醇1倍量，合并正丁醇液，水浴蒸干后加适量水溶解，加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2～3倍柱体积的水洗脱，再用2倍柱体积的20％的乙醇洗脱，弃去水洗液和20％醇洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集80％醇洗液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。

通过本工艺制得的人参提取物的得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于70％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁的含量和不低于35％。

人参除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下列方法：

方法一：取人参药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取三次，每次加醇10倍量，提取2小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.15～1.20，加1/2倍量水饱和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的人参提取物得率为3～5％，人参总皂苷含量不低于40％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁的含量和不少于20％。

方法二：取人参药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取二次，第一次加醇10倍量，第二、三次加醇8倍量，三次均提取2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制得的人参提取物的得率为4～5％，人参总皂苷含量不低于38％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁的含量和不低于20％。

本发明药物组合物中的茯苓可以用适宜的溶剂经过提取加工得到茯苓提取物，提取溶剂优选水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种优选的茯苓提取工艺，具体如下：

取茯苓药材，粉碎成粗粉，加4～6倍量的水，回流提取三次，提取时间分别为3小时、2小时、1小时，合并3次提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.0～1.1时，加乙醇至含醇量为60％，静置，冷藏过夜，过滤，收集沉淀，加2倍量的水煮沸溶解，趁热滤除不溶物，滤液放冷，加入乙醇使含醇量至80％，冷藏静置24小时，滤过，沉淀用70％乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤多次。加1倍量水溶解，加0.1％的活性炭脱色，用5000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，真空干燥，即得。

通过本工艺制备的茯苓提取物的得率为2～3％，茯苓多糖的含量不低于80％。

茯苓除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下列方法：

方法一：取茯苓药材，粉碎成粗粉，加水回流提取二次，每次加水6倍量，提取3小时，合并2次提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.0～1.1，过滤，滤液用Sevage法除蛋白，再加乙醇至含醇量为60％，静置，冷藏过夜，过滤，收集沉淀，加1倍量的水煮沸溶解，趁热滤除不溶物，滤液放冷，加入乙醇使含醇量至80％，冷藏，静置24小时，滤过，沉淀用70％乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤多次，真空干燥，即得。

通过本工艺制备的茯苓提取物的得率为3～4％，茯苓多糖的含量不低于60％。

方法二：取茯苓药材，粉碎成粗粉，加水回流提取三次，每次加水6倍量，提取2小时，合并3次提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.0～1.1时，加乙醇至含醇量为70％，静置，冷藏过夜，过滤，收集沉淀，加1倍量的水煮沸溶解，趁热滤除不溶物，滤液放冷，加入乙醇使含醇量至85％，冷藏，静置24小时，滤过，沉淀用70％乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤多次，真空干燥，即得。

通过本工艺制备的茯苓提取物的得率为3～4％，茯苓多糖的含量不低于50％。

本发明药物组合物中的苦参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到苦参总碱，溶剂优选酸水或乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法、树脂法。

本发明提供了一种优选的苦参的提取工艺，具体如下：

取苦参药材，粉碎成粗粉，用0.2％盐酸渗漉至无生物碱反应为止，收集渗漉液，并通过已处理好的强酸型阳离子树脂，交换完毕后，将树脂用水洗至中性，干燥。用浓氨水碱化树脂，装入索氏提取器用氯仿连续回流提取至提取液无生物碱反应。氯仿提取液用无水硫酸钠脱水，减压回收氯仿，得稠膏状物，即得。

通过本工艺制备的苦参总碱的得率为1～3％，含苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O)和氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)的总量不低于70％。

苦参除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下列方法：

方法一：取苦参药材，粉碎成粗粉，用乙醇浸泡5次，过滤浸出液，薄膜蒸发浓缩至相对密度为1.04～1.09，减压浓缩除尽乙醇，加2倍的2％盐酸，充分搅拌，放置过夜，滤过，弃去沉淀物。滤液用乙醚洗涤，弃去乙醚液，滤液用氢氧化钠碱化至pH为9～10，加氯化钠饱和，用氯仿萃取至无生物碱反应，减压蒸馏得棕色稠膏状物质，即得。

通过本工艺制备的苦参总碱的得率不低于2～3％，含苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O)和氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)的总量不低于60％。

方法二：取苦参药材，粉碎成粗粉，加浓氨水2倍量，浸润1小时，加氯仿浸泡四次，每次2小时，滤过，滤液减压回收氯仿，加2倍体积的2％盐酸，充分搅拌，放置过夜，滤过，弃去沉淀物。滤液用乙醚洗涤，弃去乙醚液，滤液用氢氧化钠碱化至pH为9～10，加氯化钠饱和，用氯仿萃取至无生物碱反应，减压蒸馏得棕色稠膏状物质，即得。

通过本工艺制备的苦参总碱的得率不低于2～4％，含苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O)和氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)的总量不低于65％。

本发明药物组合物中的白花蛇舌草可以用适宜的溶剂经过提取加工得到白花蛇舌草提取物，提取溶剂优选水或醇，提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种优选的白花蛇舌草的提取工艺，具体如下：

取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，加70％的乙醇回流提取三次，第一次加10倍量70％乙醇，提取2小时，第二、三次加8倍量的70％乙醇，提取1小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的溶液，搅匀，置冰箱中静置过夜，次日离心，收集上清液，加于已处理好的聚酰胺树脂柱上，调节流速为5ml/min，先用2～3倍柱体积的水冲柱，再用10％乙醇冲柱，最后用3～4倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集80％醇洗液，回收乙醇，浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。

通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物的得率为0.5～1.5％，总黄酮的含量不低于50％。

白花蛇舌草除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下列方法：

方法一：取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，渗漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的溶液，搅匀，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行三次梯度醇沉，醇沉浓度分别为60％、70％、80％，每次均冷藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物的得率为0.5～1.5％，总黄酮的含量不低于45％。

方法二：取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的溶液，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行二次梯度醇沉，醇沉浓度分别为60％、80％，每次均冷藏12小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物的得率为1～2％，总黄酮的含量不低于40％。

本发明的上述药物组合物除可以原药材投料制得外，还可以用人参、茯苓、以及苦参和/或白花蛇舌草的提取物直接投料制成。

根据提取物相对于药材的得率计算，其重量份数为：人参总皂苷5～400份、茯苓多糖40～1500份、苦参总碱100～2500份和/或白花蛇舌草提取物2～150份；优选为：人参总皂苷20～160份、茯苓多糖100～600份、苦参总碱250～1000份和/或白花蛇舌草提取物5～60份；进一步优选为：人参总皂苷60份、茯苓多糖250份、苦参总碱500份和/或白花蛇舌草提取物20份。其中，人参总皂苷中总皂苷的含量最好不低于35％，人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁的含量和最好不低于20％；茯苓多糖中多糖的含量最好不低于50％；苦参总碱中苦参碱和氧化苦参碱的含量最好不低于60％；白花蛇舌草提取物中总黄酮的含量最好不低于40％。上述提取物均可参照前面所述的方法制得，苦参总碱除可用上述方法自制外，还可从市场直接购买或者购买后再精制。

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间的重量配比不变。以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。

以上重量配比是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。

本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。

本发明药物组合物具有抗肿瘤作用，苦参或白花蛇舌草可直接抑制癌细胞的核分裂，使其丧失繁殖能力，并对癌细胞的耗氧能力有直接抑制作用，人参和茯苓作辅助可显著提高免疫力，提高抗癌活性，降低化疗副作用。主要用于治疗胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等恶性肿瘤。

本发明药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。

本发明药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

本发明组合物具有以下优点：

(1)提供了一种新的抗肿瘤药物组合物及其制备方法，满足了临床急需；

(2)对人参、茯苓与苦参和/或白花蛇舌草的相互作用和配伍组方进行了药理药效学研究，发现了组合物具有明显的抗肿瘤作用和放疗、化疗增效作用，对S₁₈₀肉瘤的抑瘤率超过了45％，对EAC小鼠的生命延长率超过了50％，对化疗的抑瘤增效率超过了30％，对放疗的抑瘤增效率超过了35％，表明人参、茯苓与苦参、白花蛇舌草配伍应用，能协同增效，疗效显著，明显优于单用人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草总黄酮，有显著差异性，其结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的；

(3)本发明可以以原药材或提取物投料，制备工艺简单，不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定；

(4)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；

(5)人参、茯苓、苦参和/或白花蛇舌草的新配方，可多靶点共同发挥抗肿瘤作用，降低化疗副作用，提高免疫力，其合并用药出现了意想不到的效果。

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物组合物的有益效果，其中，人参总皂苷、茯苓多糖和苦参碱的组合物以下简称RFK组合物，人参总皂苷、茯苓多糖和白花蛇舌草提取物的组合物以下简称RFB组合物。实验例中所用的人参总皂苷取自实施例1，茯苓多糖取自实施例2、苦参总碱取自实施例3、白花蛇舌草提取物取自实施例4。

实验例1  本发明药物组合物药效学研究—对S₁₈₀实体瘤生长的影响

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

阳性对照组：环磷酰胺注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

茯苓多糖组：茯苓多糖注射液，自制；

苦参总碱组：苦参总碱注射液，自制；

白花蛇舌草提取物组：白花蛇舌草提取物注射液，自制；

RFK组合物组：RFK组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方1)；

RFB组合物组：RFB组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方2)。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，220只。

瘤种：S₁₈₀瘤液。

实验方法：取ICR小鼠220只，均皮下接种S₁₈₀瘤液(2×10⁷/ml)，0.2ml/只，次日随机分为22组，每组10只，称体重。腹腔注射给药，给药剂量见表1，共10天，停药次日称体重，处死小鼠并剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。结果见表1。

实验结果：见表1。

(1)与空白对照组相比，各给药组均能明显抑制S₁₈₀实体瘤的生长。人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱、白花蛇舌草提取物各单独给药组均能明显抑制S₁₈₀实体瘤的生长(p＜0.05)，RFK组合物、RFB组合物各配比组均能显著抑制S₁₈₀实体瘤的生长(p＜0.01)。

(2)与人参总皂苷组和茯苓多糖组相比，RFK组合物、RFB组合物各配比组均能明显抑制S₁₈₀实体瘤的生长(p＜0.05)。

(3)与苦参总碱组相比，RFK组合物各配比组均能明显抑制S₁₈₀实体瘤的生长(p＜0.05)。

(4)与白花蛇舌草提取物组相比，RFB组合物各配比组均能明显抑制S₁₈₀实体瘤的生长(p＜0.05)。

结论：各给药组均能显著抑制S₁₈₀实体瘤的生长，与人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱、白花蛇舌草提取物各单独给药组相比，RFK组合物、RFB组合物各配比组抑制肿瘤生长的效果更为显著。表明，人参总皂苷、茯苓多糖与苦参总碱或白花蛇舌草提取物联合用药，协同增效，且人参总皂苷(20mg～160mg)+茯苓多糖(100mg～600mg)+苦参总碱(250～1000)或白花蛇舌草提取物(5mg～40mg)的范围内提高抗癌的活性显著。其中，人参总皂苷+茯苓多糖+苦参总碱＝60mg+250mg+500mg，人参总皂苷+茯苓多糖+白花蛇舌草提取物＝60mg+250mg+20mg时作用最好。

            表1  本发明药物组合物对S₁₈₀实体瘤生长的影响(X±SD)

组别	剂量配比	给药剂量(mg/kg)	瘤重(g)	抑瘤率(％)
					空白对照组阳性对照组人参总皂苷组茯苓多糖组苦参总碱组白花蛇舌草提取物组	------	-10020202020	2.23±0.260.45±0.18***1.73±0.224*1.66±0.28*1.35±0.27*1.46±0.26*	-79.8222.4225.5639.4634.53
RFK组合物组(人参总皂苷+茯苓多糖+苦参总碱)	20mg+100mg+1000mg40mg+160mg+700mg60mg+250mg+500mg80mg+300mg+450mg100mg+350mg+400mg120mg+400mg+350mg140mg+500mg+300mg160mg+600mg+250mg	2020202020202020	1.03±0.29**abc0.89±0.26**abc0.85±0.32**abc0.92±0.31**abc0.98±0.42**abc1.03±0.33**abc1.08±0.45**abc1.12±0.37**abc	53.8160.0961.8858.7456.0553.8151.5749.78
					RFB组合物组(人参总皂苷+茯苓多糖+白花蛇舌草提取物)	20mg+100mg+5mg40mg+160mg+10mg60mg+250mg+20mg80mg+300mg+25mg100mg+350mg+30mg120mg+400mg+35mg140mg+500mg+40mg160mg+600mg+60mg	2020202020202020	1.13±0.34**abd0.97±0.25**abd0.88±0.26**abd0.92±0.36**abd0.97±0.28**abd1.03±0.31**abd1.08±0.36**abd1.15±0.32**abd	49.3356.5060.5458.7456.5053.8151.5748.43

注：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001与空白对照组相比；^ap＜0.05，与人参总皂苷组相比；^bp＜0.05，与茯苓多糖组相比；^cp＜0.05，与苦参总碱组相比；^dp＜0.05，与白花蛇舌草提取物组相比。

实验例2  本发明药物组合物对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响

供试品：

空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

阳性对照组：环磷酰胺注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

茯苓多糖组：茯苓多糖注射液，自制；

苦参总碱组：苦参总碱注射液，自制；

白花蛇舌草提取物组：白花蛇舌草提取物注射液，自制；

RFK组合物组：RFK组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方1)，分高、中、低三个剂量组；

RFB组合物组：RFB组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方2)，分高、中、低三个剂量组。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，120只，随机分为12组。

瘤种：EAC腹水。

实验方法：取ICR小鼠120只，无菌抽取EAC腹水，以生理盐水1∶2倍稀释，每鼠腹腔接种0.2ml，24小时随机分为12组，分别为空白对照组、阳性对照组、人参总皂苷组、茯苓多糖组、苦参总碱组、白花蛇舌草提取物组、RFK组合物低、中、高三个剂量组、RFB组合物低、中、高三个剂量组，称体重。腹腔注射给药，给药剂量见表2，共10天，此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示。结果见表2。

           表2  本发明药物组合物对EAC腹水癌小鼠生命延长率的影响(X±SD)

组别	动物数(只)	给药剂量(mg/kg)	生存天数	生命延长率(％)
					空白对照组阳性对照组人参总皂苷组茯苓多糖组苦参总碱组白花蛇舌草提取物组	101010101010	-10015505020	11.57±3.2619.36±4.73***13.85±2.16*14.18±2.69*15.52±3.61**15.25±3.37**	-67.3319.7122.5634.1431.81
RFK组合物低剂量组RFK组合物中剂量组RFK组合物高剂量组	101010	304050	17.58±2.83***abc18.16±3.22***abc18.35±3.15***abc	51.9456.9658.60
					RFB组合物低剂量组RFB组合物中剂量组RFB组合物高剂量组	101010	101520	17.21±2.76**abd17.82±3.53***abd18.16±2.25***abd	48.7554.0256.96

注：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001与空白对照组相比；^ap＜0.01，与人参总皂苷组相比；^bp＜0.01，与茯苓多糖组相比；^cp＜0.05，与苦参总碱组相比；^dp＜0.05，与白花蛇舌草提取物组相比。

实验结果：见表2。

(1)与空白对照组相比，各给药组均能明显延长EAC腹水癌小鼠的存活天数。人参总皂苷组、茯苓多糖组能明显延长EAC腹水癌小鼠的生存天数(p＜0.05)，苦参总碱组、白花蛇舌草提取物组能显著延长EAC腹水癌小鼠的生存天数(p＜0.01)，RFK组合物、RFB组合物各剂量组均能极显著延长EAC腹水癌小鼠的生存天数(p＜0.001)。

(2)与人参总皂苷组和茯苓多糖组相比，RFK组合物、RFB组合物各剂量组均能显著延长EAC腹水癌小鼠的生存天数(p＜0.01)。

(3)与苦参总碱组相比，RFK组合物各剂量组均能明显延长EAC腹水癌小鼠的生命(p＜0.05)。

(4)与白花蛇舌草提取物组相比，RFB组合物各剂量组均能明显延长EAC腹水癌小鼠的生命(p＜0.05)。

结论：各给药组都能明显使EAC小鼠的生命延长率提高。与人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱、白花蛇舌草提取物各单独给药组相比，RFK组合物、RFB组合物各剂量组对EAC腹水癌小鼠的生命延长率明显提高(p＜0.05、p＜0.01)，表明，人参总皂苷、茯苓多糖与苦参总碱或白花蛇舌草提取物配伍应用有很好的抑制肿瘤生长，延长小鼠生命的作用，且与各组合物的给药剂量有关，高、中剂量时作用都最好。

实验例3  本发明药物组合物对化疗的增效作用

供试品：

空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

阳性对照组：环磷酰胺注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

茯苓多糖组：茯苓多糖注射液，自制；

苦参总碱组：苦参总碱注射液，自制；

白花蛇舌草提取物组：白花蛇舌草提取物注射液，自制；

RFK组合物组：RFK组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方1)，分高、中、低三个剂量组；

RFB组合物组：RFB组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方2)，分高、中、低三个剂量组。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，120只，随机分为12组。

瘤种：S₁₈₀瘤液。

实验方法：取ICR小鼠120只，均皮下接种S₁₈₀瘤液(2×10⁷/ml)0.2ml/只，次日随机分为12组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组、人参总皂苷组、茯苓多糖组、苦参总碱组、白花蛇舌草提取物组、RFK组合物低、中、高三个剂量组、RFB组合物低、中、高三个剂量组，称体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第2、第6天腹腔注射环磷酰胺(CTX)30mg/kg，给药组次日腹腔注射给药，给药剂量见表3，共10天，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率和增效率。结果见表3。增效率(％)＝(化疗药组平均瘤重-化疗药加给药组平均瘤重)/化疗药组平均瘤重×100％。

                  表3  本发明药物组合物对化疗的增效作用(X±SD)

组别	给药剂量(mg/kg)	瘤重(g)	抑瘤率(％)	增效率(％)
					空白对照组阳性对照组CTX+人参总皂苷组CTX+茯苓多糖组CTX+苦参总碱组CTX+白花蛇舌草提取物组	-3015505020	1.87±0.190.92±0.27*0.88±0.19*0.83±0.27*0.74±0.23*0.78±0.25*	-50.8052.9455.6160.4358.29	--4.359.7819.57#15.22#
CTX+RFK组合物低剂量组CTX+RFK组合物中剂量组CTX+RFK组合物高剂量组	304050	0.58±0.22**abc0.52±0.16**abc0.46±0.26**abc	68.9872.1975.40	36.96##43.48##50.00##
					CTX+RFB组合物低剂量组CTX+RFB组合物中剂量组CTX+RFB组合物高剂量组	101520	0.61±0.17**abd0.55±0.23**abd0.51±0.25**abd	67.3870.5972.73	33.70##40.22##44.57##

注：^*p＜0.01，^**p＜0.001，与空白对照组相比；^#p＜0.05，^##p＜0.01，与阳性对照组相比；^ap＜0.01，与CTX+人参总皂苷组相比；^bp＜0.01，与CTX+茯苓多糖组相比；^cp＜0.05，与CTX+苦参总碱组相比；^dp＜0.05，与CTX+白花蛇舌草提取物组相比。

实验结果：见表3。

(1)与空白对照组相比，各给药组均有明显的抗癌作用(p＜0.01，p＜0.001)。

(2)与阳性对照组相比，CTX+苦参总碱组、CTX+白花蛇舌草提取物组能明显增强化疗疗效(p＜0.05)，CTX+RFK组合物、CTX+RFB组合物各剂量组均能显著增强化疗疗效(p＜0.01)。

(3)与CTX+人参总皂苷组和CTX+茯苓多糖组相比，CTX+RFK组合物、CTX+RFB组合物各剂量组均能显著增强化疗的疗效(p＜0.01)。

(4)与CTX+苦参总碱组相比，CTX+RFK组合物各剂量组均能明显增强化疗的疗效(p＜0.05)。

(5)与CTX+白花蛇舌草提取物组相比，CTX+RFB组合物各剂量组均能明显增强化疗的疗效(p＜0.05)。

结论：各给药组与环磷酰胺合用都能增强化疗疗效。且CTX+RFK组合物、CTX+RFB组合物对化疗疗效的增强作用明显强于CTX+人参总皂苷组、CTX+茯苓多糖组、CTX+苦参总碱组以及CTX+白花蛇舌草提取物组。表明，人参总皂苷、茯苓多糖与苦参总碱或白花蛇舌草提取物配伍再与化疗药环磷酰胺合用有很好的化疗增效作用，且与各组合物的给药剂量有关，高剂量时作用都最好。

实验例4  本发明药物组合物对放疗的增效作用

供试品：

空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

阳性对照组：环磷酰胺注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

茯苓多糖组：茯苓多糖注射液，自制；

苦参总碱组：苦参总碱注射液，自制；

白花蛇舌草提取物组：白花蛇舌草提取物注射液，自制；

RFK组合物组：RFK组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方1)，分高、中、低三个剂量组；

RFB组合物组：RFB组合物注射液，自制(制备方法参见实施例6处方2)，分高、中、低三个剂量组。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，120只。

瘤种：S₁₈₀瘤液。

实验方法：取ICR小鼠120只，均皮下接种S₁₈₀瘤液(2×10⁷/ml)0.2ml/只，次日随机分为12组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组、人参总皂苷组、茯苓多糖组、苦参总碱组、白花蛇舌草提取物组、RFK组合物低、中、高三个剂量组、RFB组合物低、中、高三个剂量组，称体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第3、第6天用⁶⁰Co全身照射，照射剂量为0.05Gy/min。给药组次日腹腔注射给药，给药剂量见表4，共10天，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率和增效率。结果见表4。

              表4  本发明药物组合物对放疗的增效作用(X±SD)

组别	给药剂量(mg/kg)	瘤重(g)	抑瘤率(％)	增效率(％)
					空白对照组60Co照射组60Co+人参总皂苷组60Co+茯苓多糖组60Co+苦参总碱组60Co+白花蛇舌草提取物组	-0.05Gy/min15505020	2.35±0.162.06±0.27*1.88±0.41**1.82±0.39**1.71±0.38**1.75±0.46**	-12.3420.0022.5527.23#25.53#	--8.7411.6516.9915.05
60Co+RFK组合物低剂量组60Co+RFK组合物中剂量组60Co+RFK组合物高剂量组	304050	1.30±0.44***abc1.27±0.39***abc1.21±0.48***abc	44.68##45.96##48.51##	36.8938.3541.26
					60Co+RFB组合物低剂量组60Co+RFB组合物中剂量组60Co+RFB组合物高剂量组	101520	1.35±0.53***abd1.31±0.47***abd1.23±0.45***abd	42.55##44.26##47.66##	34.4736.4140.29

注：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，与空白对照组相比；^#p＜0.05，^##p＜0.01，与⁶⁰Co照射组相比；^ap＜0.05，与⁶⁰Co+人参总皂苷组相比；^bp＜0.05，与⁶⁰Co+茯苓多糖组相比；^cp＜0.05，与⁶⁰Co+苦参总碱组相比；^dp＜0.05，与⁶⁰Co+白花蛇舌草提取物组相比。

实验结果：见表4。

(1)与空白对照组相比，⁶⁰Co照射组以及各给药组均能有效地抑制肿瘤生长(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。

(2)与⁶⁰Co照射组相比，⁶⁰Co+苦参总碱组、⁶⁰Co+白花蛇舌草提取物组能明显提高放疗疗效(p＜0.05)，⁶⁰Co+RFK组合物、⁶⁰Co+RFB组合物各剂量组均能显著提高放疗疗效(p＜0.01)。

(3)与⁶⁰Co+人参总皂苷组和⁶⁰Co+茯苓多糖组相比，⁶⁰Co+RFK组合物、⁶⁰Co+RFB组合物各剂量组均能明显增强放疗疗效(p＜0.05)。

(4)与⁶⁰Co+苦参总碱组相比，⁶⁰Co+RFK组合物各剂量组均能明显增强放疗的疗效(p＜0.05)。

(5)与⁶⁰Co+白花蛇舌草提取物组相比，⁶⁰Co+RFB组合物各剂量组均能明显增强放疗的疗效(p＜0.05)。

结论：各给药组与放疗⁶⁰Co照射合用均有明显的放疗增效作用。且⁶⁰Co+RFK组合物、⁶⁰Co+RFB组合物对放疗疗效的增强作用明显强于⁶⁰Co+人参总皂苷组、⁶⁰Co+茯苓多糖组、⁶⁰Co+苦参总碱组以及⁶⁰Co+白花蛇舌草提取物组。表明，人参总皂苷、茯苓多糖与苦参总碱或白花蛇舌草提取物配伍再配合⁶⁰Co照射放疗，有很好的放疗增效作用，且与各组合物的给药剂量有关，高剂量时作用都最好。

实验例5  小鼠注射给药急性毒性实验

(1)实验方法

供试品：RFK组合物注射液(人参总皂苷+茯苓多糖+苦参总碱＝60mg+250mg+500mg)

RFB组合物注射液(参总皂苷+茯苓多糖+白花蛇舌草提取物＝60mg+250mg+20mg)

受试动物：小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。

给药途径：静脉注射、腹腔注射。

观察项目：死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。

(2)实验结果

按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量：尾静脉分别注射RFK组合物注射液、RFB组合物注射液各0.1ml/10g，腹腔分别注射RFK组合物注射液、RFB组合物注射液各0.1ml/10g，一日2次。

死亡数：未出现死亡。

一般状态：未见异常变化。

体重：于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。

剖检：心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。

(3)结论

本实验中未出现死亡，推测RFK组合物注射液、RFB组合物注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为0.2ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量10ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。

实验例6  本发明药物组合物注射液稳定性实验

供试品：RFK组合物注射液(人参总皂苷+茯苓多糖+苦参总碱＝60mg+250mg+500mg)

RFB组合物注射液(人参总皂苷+茯苓多糖+白花蛇舌草提取物＝60mg+250mg+20mg)

考察项目：性状、PH值、澄明度、有关物质、有效成分的含量

长期稳定性实验方法及结果：将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品各组合物注射液长期放置基本稳定。

4、具体实施方式

以下通过实施例的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例5～12中所用的人参总皂苷取自实施例1，茯苓多糖取自实施例2，苦参总碱取自实施例3，白花蛇舌草提取物取自实施例4。

实施例1  人参总皂苷的制备

人参总皂苷的制备工艺：

取人参药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取二次，每次加乙醇10倍量，提取3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加水饱和的正丁醇提取3次，每次加水饱和的正丁醇1倍量，合并正丁醇液，水浴蒸干后加适量水溶解，加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2～3倍柱体积的水洗脱，再用2倍柱体积的20％的乙醇洗脱，弃去水洗液和20％醇洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集80％醇洗液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。

人参总皂苷的鉴别：

取本品0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。

人参总皂苷的含量测定：

对照品溶液制备：取人参皂甙Rg1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含Rg1对照品0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：精密称取本品50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀；同时做空白对照。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在560nm波长处测定吸收度，计算，即得。

人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁含量测定

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水(22∶78)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。

供试品溶液的制备：取本品0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见下表。

根据上述工艺，制得三批人参总皂苷样品，其含量和得率见下表5。由结果可以看出，通过本工艺制得的人参提取物的得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于80％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁的含量和不低于35％。

                       表5  人参提取物含量测定结果及得率

批号	人参总皂苷含量(％)	人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量(％)	得率(％)
				123平均	84.385.288.786.1	36.738.541.839.0	1.321.511.741.52

实施例2  茯苓多糖的制备

茯苓多糖的制备工艺：

取茯苓药材，粉碎成粗粉，加4～6倍量的水，回流提取三次，提取时间分别为3小时、2小时、1小时，合并3次提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.0～1.1时，加乙醇至含醇量为60％，静置，冷藏过夜，过滤，收集沉淀，加2倍量的水煮沸溶解，趁热滤除不溶物，滤液放冷，加入乙醇使含醇量至80％，冷藏静置24小时，滤过，沉淀用70％乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤多次。加1倍量水溶解，加0.1％的活性炭脱色，用5000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，真空干燥，即得。

茯苓多糖的鉴别

(1)取茯苓提取物粉末1g，加丙酮10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加冰醋酸1ml使溶解，在加硫酸1滴，显淡红色，后变为褐色。

(2)取茯苓提取物粉末少量，加碘化钾试液1滴，显深红色。

茯苓多糖的含量测定

标准葡萄糖溶液的配制：精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

标准曲线绘制：精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成2ml，再分别加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，然后加浓硫酸5.0ml，充分摇匀，放置5分钟，在60℃水浴中加热20分钟取出，迅速冷却至室温，同时作空白对照，在490nm波长处，测定其最大吸收度，绘制标准曲线，即得。

测定法：精密称取70℃干燥恒重的茯苓提取物40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，摇匀，备用，精确量取0.1ml，加水至2ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸收度值，计算，即得。

根据上述工艺，制得三批茯苓多糖样品，其含量和得率见表6。由结果可以看出，通过本工艺制备的茯苓提取物的得率为2～3％，茯苓多糖的含量不低于80％。

      表6  茯苓多糖的含量测定结果和得率

批次	茯苓多糖含量(％)	得率(％)
			123平均	81.2683.8585.2783.46	2.432.522.642.53

实施例3  苦参总碱的制备

苦参总碱的制备方法

取苦参药材，粉碎成粗粉，用0.2％盐酸渗漉至无生物碱反应为止，收集渗漉液，并通过已处理好的强酸型阳离子树脂，交换完毕后，将树脂用水洗至中性，干燥。用浓氨水碱化树脂，装入索氏提取器用氯仿连续回流提取至提取液无生物碱反应。氯仿提取液用无水硫酸钠脱水，减压回收氯仿，得稠膏状物，即得。

苦参总碱鉴别实验

(1)取本品约10mg，加1％盐酸溶液10ml使溶解，滤过，滤液分置三支试管中，一管中加碘化铋钾实验生成红棕色沉淀；一管中加碘化汞钾试液，生成黄白色沉淀；另一管中加碘化钾碘实验，生成棕褐色沉淀。

(2)取本品适量，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为供试品溶液。另取苦参药材粉末0.5g，加氯仿25ml，浓氨试液0.3ml，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。再取苦参碱和氧化苦参碱对照品适量，分别加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试夜(50∶6∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个斑点。

苦参总碱含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验用氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液(75∶10∶15)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，分别加乙腈-无水乙醇(80∶20)溶解，制成每1ml含苦参碱0.05mg，氧化苦参碱0.15mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，通过中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)各20ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取上述对照品溶液各5μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

根据上述工艺制得三批苦参总碱，提取物得率和含量见表7。由结果可知，苦参总碱的得率为1～3％，含量不低于80％。

       表7  苦参总碱的得率和含量

批号	苦参总碱含量(％)	得率(％)
			123平均	83.8685.3786.5885.27	1.852.132.432.14

实施例4  白花蛇舌草提取物的制备

白花蛇舌草提取物的制备工艺：

取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，加70％的乙醇回流提取三次，第一次加10倍量70％乙醇，提取2小时，第二、三次加8倍量的70％乙醇，提取1小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的溶液，搅匀，置冰箱中静置过夜，次日离心，收集上清液，加于已处理好的聚酰胺树脂柱上，调节流速为5ml/min，先用2～3倍柱体积的水冲柱，再用10％乙醇冲柱，最后用3～4倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集80％醇洗液，回收乙醇，浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。

白花蛇舌草提取物的含量测定：

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量70％乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法：精密量取本品适量，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12～15mm，湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。

根据上述工艺，制得三批白花蛇舌草提取物样品，其含量和得率见表8。由结果可以看出，通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物的得率为0.5～1.5％，总黄酮的含量不低于50％。

表8  白花蛇舌草提取物中总黄酮的含量和得率

批号	总黄酮含量(以芦丁计)(％)	得率(％)
			123平均	53.658.262.758.2	0.790.861.230.96

实施例5  本发明药物组合物粉针剂的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷          40g

茯苓多糖            160g

苦参总碱            700g

甘露醇              300g

无菌注射用水        加至5000ml

共制备              1000支

RFB组合物处方2

人参总皂苷          40g

茯苓多糖            160g

白花蛇舌草提取物    10g

甘露醇              300g

无菌注射用水        加至5000ml

共制备              1000支

2、具体步骤：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)取配液量70％的注射用水加入处方量的甘露醇加热搅拌溶解完全，再加入人参总皂苷、茯苓多糖，苦参总碱或白花蛇舌草提取物加热搅拌溶解完全。补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库。

实施例6  本发明药物组合物水针剂的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷        60g

茯苓多糖          250g

苦参总碱          500g

注射用水          加至2000ml

共制备            1000支

RFB组合物处方2

人参总皂苷          60g

茯苓多糖            250g

白花蛇舌草提取物    20g

注射用水            加至2000ml

共制备              1000支

2、具体步骤：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的注射用水，加入处方量的人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

11)灯检，成品全检，包装入库。

实施例7  本发明药物组合物氯化钠输液的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷        80g

茯苓多糖          300g

苦参总碱          450g

氯化钠            900g

注射用水          加至100000ml

共制备            1000瓶

RFB组合物处方2

人参总皂苷        80g

茯苓多糖          300g

白花蛇舌草提取物  25g

氯化钠            900g

注射用水          加至100000ml

共制备            1000瓶

2、具体步骤：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的注射用水，加入处方量的氯化钠、人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物加少量注射用水，加热使之溶解。将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例8  本发明药物组合物葡萄糖输液的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷        60g

茯苓多糖          250g

苦参总碱          500g

葡萄糖            5000g

注射用水          加至100000ml

共制备            1000瓶

RFB组合物处方2

人参总皂苷        60g

茯苓多糖          250g

白花蛇舌草提取物  20g

葡萄糖            5000g

注射用水          加至100000ml

共制备            1000瓶

2、具体步骤：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的注射用水，加入处方量的葡萄糖、人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物加少量注射用水，加热后使之溶解。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例9  本发明药物组合物片剂的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷          40g

茯苓多糖            160g

苦参总碱            700g

预胶化淀粉          100.0g

微晶纤维素          40.0g

2％HPMC水溶液       适量

硬脂酸镁            2.0g

羧甲淀粉钠          4.0g

共制备              1000片

RFB组合物处方2

人参总皂苷          40g

茯苓多糖            160g

白花蛇舌草提取物    10g

预胶化淀粉          100.0g

微晶纤维素          40.0g

2％HPMC水溶液       适量

硬脂酸镁            2.0g

羧甲淀粉钠          4.0g

共制备              1000片

2、具体步骤：

1)将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛，备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例10  本发明药物组合物胶囊剂的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷          80g

茯苓多糖            300g

苦参总碱            450g

预胶化淀粉          100.0g

微晶纤维素          20.0g

2％HPMC水溶液       适量

硬脂酸镁            1.0g

共制备              1000粒

RFB组合物处方2

人参总皂苷          80g

茯苓多糖            300g

白花蛇舌草提取物    25g

预胶化淀粉          100.0g

微晶纤维素          20.0g

2％HPMC水溶液       适量

硬脂酸镁            1.0g

共制备              1000粒

2、具体步骤：

1)将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例11  本发明药物组合物颗粒剂的制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷           60g

茯苓多糖             250g

苦参总碱             500g

糖粉                 2500.0g

甜蜜素               10g

香精                 适量

2％HPMC50％乙醇溶液  适量

共制备               1000包

RFB组合物处方2

人参总皂苷           60g

茯苓多糖             250g

白花蛇舌草提取物     20g

糖粉                 2500.0g

甜蜜素               10g

香精                 适量

2％HPMC50％乙醇溶液  适量

共制备               1000包

2、具体步骤：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物与糖粉、甜蜜素、香精以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。

实施例12本发明药物组合物口服液制备

1、处方：

RFK组合物处方1

人参总皂苷           40g

茯苓多糖             160g

苦参总碱             700g

聚山梨酯80           50g

氢氧化钠             适量

苯甲酸钠             15g

甜菊甙               20g

香精                 适量

水                 加至10000ml

共制备             1000支

RFB组合物处方2

人参总皂苷         40g

茯苓多糖           160g

白花蛇舌草提取物   10g

聚山梨酯80         50g

氢氧化钠           适量

苯甲酸钠           15g

甜菊甙             20g

香精               适量

水                 加至10000ml

共制备             1000支

2、具体步骤：

1)先将聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再将苦参总碱或白花蛇舌草提取物加入加热搅拌溶解完全，人参总皂苷、茯苓多糖加少量水加热后加适量氢氧化钠溶解完全。

2)将苯甲酸钠、甜菊甙和香精用配液量20％的水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加水至全量。

4)过0.8um的微孔滤膜过滤。

5)半成品化验，灌装，成品全检，包装入库。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，该药物组合物主要由下列重量份的原料药制成：人参600～30000份、茯苓1500～65000份、苦参3000～250000份和/或白花蛇舌草200～20000份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物原料药的重量份数为：人参1500～12000份、茯苓4000～25000份、苦参7500～100000份和/或白花蛇舌草500～8000份。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物原料药的重量份数为：人参3000～6000份、茯苓8000～12500份、苦参15000～50000份和/或白花蛇舌草1000～4000份。

4.如权利要求1～3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的人参、茯苓、苦参和/或白花蛇舌草可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂，其中，总提取物的主要有效成分为人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱和/或白花蛇舌草总黄酮，总提取物中主要有效成分的总含量不低于35％。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物还可以由下列原料药制成：人参总皂苷、茯苓多糖、苦参总碱或白花蛇舌草提取物，其原料药的重量份数为：人参总皂苷5～400份、茯苓多糖40～1500份、苦参总碱100～2500份和/或白花蛇舌草提取物2～150份。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物原料药的重量份数为：人参总皂苷20～160份、茯苓多糖100～600份、苦参总碱250～1000份和/或白花蛇舌草提取物5～60份。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物原料药的重量份数为：人参总皂苷60份、茯苓多糖250份、苦参总碱500份和/或白花蛇舌草提取物20份。

8.如权利要求5～7所述的药物组合物，其特征在于，人参总皂苷中总皂苷的含量不低于35％，人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁的含量和不低于20％；茯苓多糖中多糖的含量不低于50％；苦参总碱中苦参碱和氧化苦参碱的含量不低于60％；白花蛇舌草提取物中总黄酮的含量不低于40％。

9.如权利要求1～3、5～7所述的任一药物组合物，其特征在于，该药物组合物可以与药学上可接受的辅料混合制成临床上或药学上可接受的剂型。

10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物可以制成口服制剂或注射剂。