CN1954870A - 一种由肿节风和白花蛇舌草制成的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种药物组合物及其制备方法，以及含有该药物组合物的制剂，该药物组合物主要由肿节风和白花蛇舌草制成，其重量比为：1∶0.01～10；也可由肿节风提取物和白花蛇舌草提取物制成，其重量比为：1∶0.004～4。该药物组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。该药物组合物具有抗肿瘤作用，可用于胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等恶性肿瘤。

Description

一种由肿节风和白花蛇舌草制成的药物组合物
[技术领域]
本发明涉及一种主要用于治疗肿瘤的药物组合物，具体涉及一种主要由肿节风或其提取物和白花蛇舌草或其提取物制成的药物组合物及其制备方法，属于医药技术领域。
[背景技术]
2000年全球新发癌症病例约1000万，死亡620万，现患病例2200万。癌症正在成为新世纪人类的第一杀手。70年代以来，我国癌症发病率及死亡率一直呈上升趋势，至90年代的20年间，癌症死亡率上升29.42％，年龄调整死亡率上升11.56％。2000年癌症发病人数约180～200万，死亡140～150万，在城镇居民中，癌症已占死因的首位。目前现代医学对癌症的治疗，主要是手术治疗配合放疗、化疗。手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖，而这正是日后癌症复发和转移的根源；放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以接受进一步治疗：而中医中药治疗癌症更有悠久的历史，经过历代医家反复实践、潜心摸索，已形成了自身独特的理论体系，并在数千年的临床发展中形成了自己独特的一些治疗法则，如扶正祛邪、清热解毒、活血化瘀等法则，特别是近年来经过众多中医、中西医结合工作者的不断努力、大胆实践，也已证实中医药治疗癌症具有抗癌抑瘤，提高机体免疫功能，降低放化疗毒副反应，调节机体阴阳平衡，对癌症的治疗起到了药到病减或药到病除的效果，提高带癌生存率及生存质量的突出作用，特别是中医药对癌症手术后的康复，以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用，深受患者的欢迎。
肿节风属金粟兰科草珊瑚属植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai的干燥全草，又名九节兰、九节茶、节节行、草珊瑚、野靛青、驱骨风、接骨莲，为常绿小灌木，分布在我国江南一带。其味苦、辛，性平，归心、肝经，具有清热凉血，活血消斑之功效。对胰腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、直肠癌、白血病、淋巴肿瘤等恶性肿瘤有显著的效果。肿节风中的香豆素类、有机酸类为其抗肿瘤的主要有效成分。
白花蛇舌草Oldenlandia diffusa(Willd)Roxb始载于《广西中药志》，为茜草科植物白花蛇舌草的带根全草。其叶形似蛇舌，开白花，故名。别名蛇舌草、矮脚白花蛇利草、目目生珠草、节节结蕊草等，广泛分布于长江流域及以南，主产福建、广东、广西等地、其味苦、甘，性寒，入心、肝、脾三经，有清热解毒，活血化瘀，消炎止痛等功效。现代药理研究表明白花蛇舌草具有抗菌消炎、清热解毒、活血化瘀、利水通淋及抗肿瘤等作用，可用于治疗胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等，临床应用广泛。白花蛇舌草中的三萜混合酸，香豆素类和多糖类为抗癌的有效成分。
目前，利用肿节风和白花蛇舌草的相互作用，配伍组方，制备用于抗肿瘤方面的药物，尚未见报道。
[发明内容]
本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤作用的新的药物组合物，它主要由肿节风和白花蛇舌草制成，其重量比为：肿节风∶白花蛇舌草1∶0.01～10，优选为肿节风∶白花蛇舌草1∶0.02～6，最优为肿节风∶白花蛇舌草1∶0.13。
本发明药物组合物的制备方法为：肿节风和白花蛇舌草用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再和药用辅料混合加工制成各种制剂。适宜的溶剂是指药学上常用的溶剂，优选水或乙醇，提取方法可以用药学上常规的方法进行提取，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法等。
上述药物组合物中的肿节风可以通过水提酸沉、醇提、水提醇沉或水提过柱等多种方式制备，本发明对肿节风的提取工艺进行了优选，步骤如下：
取肿节风，加水煎煮二次，每次2小时，每次加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.33(70℃)，加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为70％，第二次含醇量为80％，每次冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至每1ml含生药10g，加入适量新配制的卵蛋白溶液，搅拌，使沉淀，冷藏48小时，滤过，滤液煮沸，使过量的卵蛋白凝固，滤过，滤液加乙醇，使含乙醇量为75％，放置沉淀，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制备的肿节风提取物得率为1～5％，异秦皮啶含量不低于0.1％，反丁烯二酸含量不低于0.02％。
上述药物组合物中的肿节风，还可以通过以下方法提取制备，但不应将此理解为上述药物组合物中的肿节风仅限于通过上述或下列工艺提取制备：
工艺一：取肿节风，加水煎煮三次，每次1小时，加水量为第一次10倍量，二、三次为8、8倍量，合并煎液，滤过，滤液加乙醇沉淀2次，第一次使含醇量为70％，第二次含醇量为80％，每次冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制得的肿节风提取物得率为4～7％，异秦皮啶含量不低于0.05％，反丁烯二酸含量不低于0.012％。
工艺二：取肿节风，加水煎煮三次，每次1小时，加水量为第一次10倍量，二、三次为8、8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，85℃以下减压干燥，即得。
通过本工艺制得的肿节风提取物得率为6～8％，异秦皮啶含量不低于0.04％，反丁烯二酸含量不低于0.01％。
上述药物组合物中的白花蛇舌草的优选提取制备工艺具体如下：
取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照2005版药典一部流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行三次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量70％，第三次使含醇量80％，每次均冷藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制备的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％，按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，应不低于50％。
上述药物组合物中的白花蛇舌还可通过以下方法提取制备，但不应将此理解为上述药物组合物中的白花蛇舌草仅限于上述或下列工艺提取制备：
工艺一：取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照药典2005版一部流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用75％乙醇作溶剂，浸渍12小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加到已处理好的聚酰胺树脂上，先用2～3倍柱体积的水冲柱，再用10％乙醇冲柱，弃去洗涤液，最后用3～4倍柱体积的80％的乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％，含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，不低于45％。
工艺二：取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行二次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量80％，每次均冷藏12小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
通过本工艺制得的白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％，含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，不低于40％。
本发明药物组合物也可由肿节风提取物和白花蛇舌草提取物组成，按照提取物相对于药材的得率计算(肿节风提取物得率为1～5％，白花蛇舌草提取物得率为0.5～1.5％)肿节风提取物和白花蛇舌草提取物的重量配比为：1∶0.004～4，优选为1∶0.01～0.5，最优为1∶0.04～0.2。
上述药物组合物中，肿节风提取物的主要有效成分为有机酸类和香豆素类，含量测定以异秦皮啶和反丁烯二酸为指标，其中含异秦皮啶最好不低于0.1％，含反丁烯二酸最好不低于0.02％；白花蛇舌草提取物的主要有效成分是黄酮类，含量以芦丁(C27H30O16)计，最好不低于50％。
本发明药物组合物中各组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分的用量在上述重量范围内都有较好疗效。上述组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂。如作为片剂，可以制成100～10000片，每次用量1～10片，每日1～5次。如作为注射剂，可以制成100～10000支，每次用量1～10支，每日1～3次。以上组成在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为原料，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比不变。以上比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
本发明药物组合物对S180实体瘤生长和对荷SRS-82肉瘤小鼠有显著抑瘤作用，对小鼠肝癌(HePA)实体瘤生长有显著抑瘤作用，可显著延长艾氏腹水癌(EAC)小鼠的生命，对环磷酰胺、5氟尿嘧啶和60Co放疗以及化疗均有显著增效作用，可用于胃癌、食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等恶性肿瘤的治疗及辅助治疗。
本发明药物组合物可以与一种或多种药学上可接受的载体混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选口服制剂或注射剂，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。
用于口服给药时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。
制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。
制成注射剂时，可选用水性溶剂或非水性溶剂，可根据药物的性质加入适宜的附加剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的附加剂包括渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
本发明的有益效果是：
(1)本发明提供了一种新的具有良好抗肿瘤作用的药物组合物，满足了临床需要。
(2)首次通过药理学实验研究证明，本发明药物组合物与单用肿节风或白花蛇舌草相比，对S180实体瘤生长和对荷SRS-82肉瘤小鼠有显著抑瘤作用，对小鼠肝癌(HePA)实体瘤生长有显著抑瘤作用，可显著延长艾氏腹水癌(EAC)小鼠的生命，对环磷酰胺、5氟尿嘧啶和60Co放疗以及化疗均有显著增效作用，而且其最佳配比的疗效与阳性对照药康莱特注射液、环磷酰胺的疗效相当、毒性小，这是本领域普通技术人员所意想不到的。
(3)本发明通过药效学实验得出了肿节风与白花蛇舌草的发挥抗肿瘤疗效的最佳配比。
(4)在本发明药物组合物制备中，提取制得的肿节风提取物和白花蛇舌草提取物有效成分含量高，使药品纯度更高，杂质少，安全性更高，药品质量更均匀稳定。
(5)通过特殊安全性试验和稳定性实验证实，本发明药物组合物注射剂安全稳定。
(6)肿节风与白花蛇舌草合并用药呈协同作用，且用药剂量相对减小，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验。以下实验例中所用的肿节风提取物均参照实施例1制得；白花蛇舌草提取物均参照实施例2制得。
实验例1本发明药物组合物对荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤作用
实验动物：ICR种小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
瘤种：小鼠SRS-82细胞株
供试品：
阳性对照组：康莱特注射液，浙江康莱特药业有限公司；
肿节风提取物组：肿节风提取物注射液，自制；
白花蛇舌草提取物组：白花蛇舌草提取物注射液，自制；
本发明药物组合物组：组合物注射液，自制，不同配比。
实验方法：取ICR种小鼠210只，随机分为21组，每组10只，分别为空白对照组，阳性对照组，肿节风提取物组，白花蛇舌草提取物组，本发明药物组合物不同配比组：肿节风提取物+白花蛇舌草提取物，200mg+10mg、200mg+30mg、200mg+60mg、200mg+130mg、300mg+10mg、300mg+20mg、300mg+30mg、300mg+60mg、300mg+130mg、300mg+150mg、400mg+10mg、400mg+30mg、400mg+130mg、1000mg+10mg、1000mg+20mg、1000mg+60mg、1000mg+130mg。
肿瘤接种：分别将培养的SRS-82细胞接种昆明小鼠后第8天，自4只小鼠腹腔中抽取腹水约15ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml后(共30ml)，每只小鼠左腹股沟皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。
给药方式及时间：每只小鼠腹腔注射(ip)给药(各提取物组给药剂量：140mg/kg)，康莱特注射液不稀释直接ip给药(给药剂量：10ml/kg)，于接种肿瘤后的第2天开始给药，1次/天，共10天。
抑瘤率：于接种后的第12天，脱颈椎处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤重量，并按以下公式计算抑瘤率：
抑瘤率＝(模型组平均肿瘤重量-给药组平均肿瘤重量)/模型组平均肿瘤重量×100％。
                     表1本发明组合物对荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤率比较(X±SD)
组别 提取物配比  提取物重量配比(肿提+白提：mg+mg) 瘤重(g)   抑瘤率(％)
  空白对照组康莱特注射液组肿节风提取物组白花蛇舌草提取物组   ----   2.56±0.981.02±0.46**#△1.98±0.75*1.88±0.80*   -60.1626.5622.66
本发明药物组合物组(肿节风提取物+白花蛇舌草提取物)   (1∶0.01)(1∶0.02)(1∶0.025)(1∶0.03)(1∶0.05)(1∶0.06)(1∶0.65)(1∶0.07)(1∶0.075)(1∶0.1)(1∶0.13)(1∶0.15)(1∶0.2)(1∶0.3)(1∶0.325)(1∶0.43)(1∶0.5)   1000+101000+20400+10300+10200+101000+60200+130300+20400+30300+301000+130200+30300+60200+60400+130300+130300+150   1.32±0.82**1.44±0.69**1.34±0.68**1.11±0.83**#△1.48±0.64**1.16±0.76**#△1.28±0.77**#△0.98±0.44**##△△1.37±0.77**1.06±0.93**#△1.37±0.83**1.45±0.82**1.23±0.67**#△1.30±0.49**#△1.25±0.76**#△1.18±0.63**#△1.15±0.27**#△   52.2755.1458.6360.9366.9266.7267.1968.5464.9863.4664.2263.5863.9864.5262.3761.3358.72
注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与肿节风组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与白花蛇舌草组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验结果与结论：实验结果见表1。
与空白对照组比较，各给药组对荷SRS-82瘤小鼠肿瘤有明显抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中本发明药物组合物(肿节风提取物∶白花蛇舌草提取物＝1∶0.01～0.5)组与单用肿节风提取物组或白花蛇舌草提取物组相比较，其疗效均优于单用肿节风提取物组和白花蛇舌草提取物组(p＜0.05，p＜0.01)，且与阳性对照药物康莱特注射液疗效相近，提示肿节风和白花蛇舌草两药配伍有协同增效作用。其中以肿节风提取物∶白花蛇舌草提取物＝1∶0.07配比组疗效最为显著(p＜0.01)，疗效与康莱特注射液相当，提示其在最优配比范围内。
实验例2本发明药物组合物合并用药对S180实体瘤生长的影响
受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性。
瘤种：S180瘤液。
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
阳性对照组：环磷酰胺片，南通精华制药有限公司；
肿节风组：肿节风片剂，自制；
白花蛇舌草组：白花蛇舌草片剂，自制；
本发明药物组合物组：本发明药物组合物片剂，自制。
实验方法：取ICR种小鼠210只，随机分为21组，每组10只，分别为空白对照组，阳性对照组，肿节风组，白花蛇舌草组，本发明药物组合物不同配比组：(肿节风+白花蛇舌草，50g+1g、50g+2g、50g+5g、50g+30g、50g+60g、20g+1g、20g+2g、20g+5g、20g+30g、20g+60g、15g+1g、15g+2g、15g+5g、15g+30g、15g+60g、10g+2g、10g+60g)。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药。
取ICR小鼠，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日称体重。灌胃给药，给药剂量见表2，每天给药一次，共10天，停药次日称体重，处死小鼠并剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。
                      表2本发明药物组合物对S180实体瘤生长的影响(X±SD)
组别 药材配比   重量配比(g)   给药剂量(mg/kg) 瘤重(g)   抑瘤率(％)
  空白对照组阳性对照组肿节风组白花蛇舌草组   ----   -50140140  2.42±0.540.78±0.08**1.34±0.27**1.44±0.30*   -69.8240.3635.42
本发明药物组合物组(肿节风+白花蛇舌草)   (1∶0.02)(1∶0.04)(1∶0.05)(1∶0.07)(1∶0.1)(1∶0.13)(1∶0.2)(1∶0.3)(1∶0.6)(1∶0.75)(1∶1)(1∶1.2)(1∶1.5)(1∶2)(1∶3)(1∶4)(1∶6)   50+150+220+115+120+215+210+250+1550+3020+1515+1550+6020+3015+3020+6015+6010+60   140140140140140140140140140140140140140140140140140  0.95±0.11**#△0.91±0.56**#△0.88±0.84**#△0.86±0.20**#△0.78±0.06**#△0.76±0.37**#△0.77±0.20**#△0.79±0.14**#△0.80±0.29**#△0.81±0.07**#△0.82±0.18**#△0.83±0.68**#△0.83±0.99**#△0.84±0.67**#△0.85±0.77**#△0.86±0.54**#△0.88±0.12**#△   43.4448.7547.6650.6452.1961.6958.0056.7254.4853.5951.9549.2251.1746.4846.3643.9142.32
注：*p＜0.05，**p＜0.01，与空白对照组相比；#p＜0.05，与肿节风组相比；△p＜0.05，与白花蛇舌草组相比。
实验结果与结论：实验结果见表2。
各给药组都具有明显的抑制S180肿瘤生长作用(p＜0.05、p＜0.01)。其中本发明药物组合物组(肿节风∶白花蛇舌草＝1∶0.02～6)作用都明显强于单用肿节风或白花蛇舌草(p＜0.05)，抑瘤率为52.27％～68.54％。证明肿节风和白花蛇舌草配伍有很好的抑制肿瘤生长的作用，且与组合物的配比有关，其中以肿节风∶白花蛇舌草＝1∶0.13作用最好，提示其可能为最佳配比。
实验例3本发明药物组合物对小鼠肝癌(HePA)生长的影响
实验动物：ICR种小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
阳性对照组：注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司；
肿节风组：肿节风注射液，自制；
白花蛇舌草组：白花蛇舌草注射液，自制；
本发明药物组合物组：本发明药物组合物注射液(肿节风+白花蛇舌草＝15g+2g)，自制。
制备方法参见实施例3。
实验方法：取小鼠均皮下接种肝癌(HePA)瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分组，分别为空白对照组、阳性对照组、肿节风组、白花蛇舌草组、本发明药物组合物高、中、低剂量组，称体重。接种瘤小鼠次日开始腹腔注射给药，每天给药一次，共10天，停药次日称体重，处死小鼠并剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。
                 表3本发明药物组合物对小鼠肝癌(HePA)实体瘤生长的影响
组别   动物数   给药剂量(mg/kg) 瘤重(g) 抑瘤率(％)
  空白对照组阳性对照组肿节风组白花蛇舌草组本发明药物组合物高剂量组本发明药物组合物中剂量组本发明药物组合物低剂量组   10101010101010   -3014014014010570   1.98±0.750.46±0.34**##△△1.41±0.68*1.52±0.65*0.80±0.52**##△△0.97±0.59**##△△1.12±0.64**#△   -76.7728.7923.2359.6051.0143.43
注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与肿节风组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与白花蛇舌草组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验结果与结论：实验结果见表3。
表3中的结果表明，与空白对照组比较，肿节风、白花蛇舌草、本发明药物组合物、环磷酰胺均对小鼠肝癌(HePA)瘤生长(p＜0.05，p＜0.01)。其中组合物疗效优于单用肿节风和白花蛇舌草，高剂量组疗效与阳性对照药物环磷酰胺疗效相近，提示合用肿节风和白花蛇舌草，有协同增效作用，且与剂量有关，高剂量效果较优。
实验例4本发明药物组合物对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响
实验动物：ICR种小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
阳性对照组：注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司；
肿节风组：肿节风注射液，自制；
白花蛇舌草组：白花蛇舌草注射液，自制；
本发明药物组合物组：本发明药物组合物注射液(肿节风提取物+白花蛇舌草提取物＝300mg+20mg)，自制。
制备方法参见实施例3。
实验方法：无菌抽取EAC腹水，以生理盐水1∶2倍稀释，每鼠腹腔接种0.2ml，24小时后分组，分别为空白对照组、阳性对照组、肿节风组、白花蛇舌草组、本发明药物组合物不同剂量组，称体重并给药，接种瘤小鼠次日开始腹腔注射给药，每天给药一次，共10天，此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示。
                   表4本发明药物组合物对EAC腹水癌小鼠生命延长率的影响
组别 动物数   给药剂量(mg/kg) 生存天数 生命延长率(％)
  空白对照组阳性对照组肿节风组白花蛇舌草组本发明组合物高剂量组本发明组合物中剂量组本发明组合物低剂量组   10101010101010   -3014014014010570   13.00±3.020.0±4.20**##△△15.00±2.00*14.80±2.10*19.2±2.50**##△△18.3±1.80**##△△17.5±2.30**##△   -53.8515.3813.8547.6940.7734.62
注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与肿节风组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与白花蛇舌草组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验结果与结论：实验结果见表4。
表4中的结果表明，与空白对照组比较，肿节风、白花蛇舌草、本发明药物组合物、环磷酰胺均可延长小鼠EAC艾氏腹水癌小鼠的存活时间(p＜0.05，p＜0.01)。其中组合物疗效优于单用肿节风和白花蛇舌草，高剂量组疗效与阳性对照药物环磷酰胺疗效相近，提示合用肿节风和白花蛇舌草，有协同增效作用。
实验例5本发明药物组合物与氟尿嘧啶(Fu)合用的增效作用
实验动物：ICR种小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
氟尿嘧啶组：氟尿嘧啶注射液，北京紫竹药业有限公司；
Fu+肿节风组：肿节风注射液，自制，每1ml相当于肿节风药材5g；
Fu+白花蛇舌草组：白花蛇舌草注射液，自制，每1ml相当于白花蛇舌草药材1g；
Fu+本发明药物组合物组：Fu+本发明药物组合物注射液，自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物：300mg+20mg(相当于肿节风15g，白花蛇舌草2g)。
实验方法：小鼠皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分组，分为7组，每组10只，分别为空白对照组、Fu+肿节风组、Fu+白花蛇舌草组、Fu+本发明药物组合物高、中、低剂量组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu)，称体重。除空白对照组外，其余各组均腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-Fu)60mg/kg。接种瘤小鼠次日开始腹腔注射给药，每天给药一次共10天。停药次日称体重，处死小鼠剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。
                 表5本发明药物组合物与氟尿嘧啶抗S180肿瘤的增效作用
组别   给药剂量(mg/kg) 瘤重(g)   抑瘤率(％)   增效率(％)
  空白对照组Fu+肿节风组Fu+白花蛇舌草组Fu+本发明药物组合物高剂量组Fu+本发明药物组合物中剂量组Fu+本发明药物组合物低剂量组Fu组   -14014014010570-   2.32±0.590.72±0.23*0.75±0.34*0.51±0.31**##△△0.55±0.29**##△0.64±0.41**#△0.92±0.37   -68.9767.6778.0276.2972.4160.34   -21.7418.4844.5740.2230.43-
注：与Fu组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与5-Fu+肿节风组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与5-Fu+白花蛇舌草组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验结果与结论：实验结果见表5。
表5中的结果表明，与空白对照组比较，肿节风、白花蛇舌草、本发明药物组合物均与氟尿嘧啶有协同增效作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中组合物增效作用强于单用肿节风和白花蛇舌草，高剂量组增效作用最强(p＜0.01)。
实验例6本发明药物组合物对放疗的增效作用
实验动物：ICR种小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
供试品：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
60Co+肿节风组：肿节风注射液，自制，每1ml相当于肿节风药材5g；
60Co+白花蛇舌草组：白花蛇舌草注射液，自制，每1ml相当于白花蛇舌草药材1g；
60Co+本发明药物组合物组：60Co+本发明药物组合物注射液，自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物：300mg+20mg(相当于肿节风15g，白花蛇舌草2g)。
实验方法：取小鼠，均皮下接种S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分组，分为7组，每组10只，分别为空白对照组、60Co+肿节风组、60Co+白花蛇舌草组、60Co+本发明药物组合物高、中、低剂量组、60Co组，称体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第3、第6天用60Co全身照射，照射剂量为0.05Gy。接种瘤小鼠次日开始腹腔注射给药，每天给药一次，共给药10天，停药次日称体重，处死动物。剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率和增效率。
                           表6本发明药物组合物对放疗的增效作用
组别   给药剂量(mg/kg) 瘤重(g)   抑瘤率(％)   增效率(％)
   空白对照组60Co+肿节风组60Co+白花蛇舌草组60Co+本发明药物组合物高剂量组60Co+本发明药物组合物中剂量组60Co+本发明药物组合物低剂量组60Co   -140140140105700.05Gy/min   2.56±0.961.77±0.57*1.82±0.64*1.17±0.46**#△△1.25±0.68**##△△1.32±0.75*#△2.08±0.87   -30.8628.9154.3051.1748.4418.75   -14.9012.5043.7539.9036.54-
注：与60Co组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与60Co+肿节风组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与60Co+白花蛇舌草组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验结果与结论：实验结果见表6。
表6中的结果表明，与空白对照组比较，肿节风、白花蛇舌草、本发明药物组合物均与60Co放疗有协同增效作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中组合物增效作用强于单用肿节风和白花蛇舌草，高剂量组增效作用最强(p＜0.01)。
实验例7本发明药物组合物对化疗的增效作用和减毒的作用
受试动物：健康小鼠，70只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为7组，每组10只。
供试品：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；
阳性对照组：环磷酰胺(CTX)片剂，南通精华制药有限公司；
CTX+肿节风组：CTX+肿节风片剂，自制；
CTX+白花蛇舌草组：CTX+白花蛇舌草片剂，自制；
CTX+本发明药物组合物组：CTX+组合物片剂(肿节风+白花蛇舌草＝15g+2g)：分为高、中、低三个剂量组，自制。
制备方法参见实施例7。
各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药。
瘤株：小鼠肝癌H22。
实验方法：每只小鼠左前肢腋下皮下接种H22瘤株细胞悬液(悬液浓度0.3g/ml，接种量0.01ml/g)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，灌胃给药，给药剂量见表4，隔日1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化，末次给药后24h眼眶采血，计数外周白细胞(WBC)数目；随即处死，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算抑瘤率及增效率。
【增效率＝(化疗组平均瘤重-化疗与组合物胶囊剂联合治疗组平均瘤重)/化疗组平均瘤重×100％】；解剖分离胸腺、脾脏及靶器官，称重并计算脏器指数。
                           表7本发明药物组合物对化疗的增效和减毒的作用(X±SD)
组别   给药剂量(mg/kg)   平均瘤重(g)   抑瘤率(％)   增效率(％)   WBC(×109) 脾指数
  空白对照组阳性对照组CTX+肿节风组CTX+白花蛇舌草组CTX+本发明药物组合物高剂量组CTX+本发明药物组合物中剂量组CTX+本发明药物组合物低剂量组   -3014014014010570   2.54±0.651.40±0.57*1.20±0.41**#1.32±0.25**#0.72±0.45##&$0.85±0.30#&$0.91±0.16#&$   -39.2552.7**#46.74**#68.54##&$66.25#&$64.02#&$   --27.1519.5351.2347.3244.15   8.87±2.173.42±1.17*6.26±1.79**#6.50±1.22**#8.11±1.54##&$7.84±1.82#&$7.25±1.49#&$   26.12±4.5010.37±2.26*15.36±2.54**#15.97±2.13**#22.14±4.22##&$21.10±3.57#&$19.33±4.21#&$
注：*p＜0.05，**p＜0.01，与空白对照组相比较；#p＜0.05，##p＜0.01，与阳性对照组相比较，&p＜0.05，与肿节风相比较；$p＜0.05，与白花蛇舌草组相比较。
实验结果与结论：结果见表7。
(1)化疗的增效作用：
①与空白对照组相比较，环磷酰胺单独用药对小鼠肝癌H22有显著的抑制作用(p＜0.05)；
②与环磷酰胺单独用药相比较，环磷酰胺与肿节风或环磷酰胺与白花蛇舌草合并用药对小鼠肝癌H22有显著的抑制作用(p＜0.05)；
③与环磷酰胺单独用药相比较，环磷酰胺与中、低剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠肝癌H22的抑制作用显著增强(p＜0.05)，环磷酰胺与高剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠肝癌H22的抑制作用极显著增强(p＜0.01)。
④与环磷酰胺与单独肿节风或白花蛇舌草合并用药相比较，环磷酰胺与高、中、低剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠肝癌H22的抑制作用显著增强(p＜0.05)。
(2)对化疗的减毒作用：
①与空白对照组相比较，环磷酰胺单独用药对小鼠的外周白细胞数、脾指数均显著降低(p＜0.05)。
②与环磷酰胺单独用药相比较，环磷酰胺与肿节风或环磷酰胺与白花蛇舌草合并用药对小鼠的外周白细胞数、脾指数均显著降低(p＜0.05)。
③与环磷酰胺单独用药相比较，环磷酰胺与中、低剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠的外周白细胞数、脾指数均显著降低(p＜0.05)，环磷酰胺与高剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠的外周白细胞数、脾指数均极显著降低(p＜0.01)。
④与环磷酰胺与单独肿节风或白花蛇舌草合并用药相比较，环磷酰胺与高、中、低剂量组合物胶囊剂联合用药对小鼠的外周白细胞数、脾指数均显著降低(p＜0.05)。
上述实验结果表明，本发明药物组合物可以显著增强环磷酰胺在化疗中的疗效，且降低环磷酰胺的毒性，提示组合物在化疗中的增效和减毒作用，另外肿节风和白花蛇舌草合并用药具有协同增效作用，且与剂量有关，高剂量时效果较好。
实验例8本发明药物组合物水针剂特殊安全性实验
1、过敏性实验
实验动物：豚鼠，18只，体重280～310g，雌雄兼用，随机分为供试药组、阴性对照和阳性对照三组，每大组6只。
供试品：
本发明药物组合物注射液：自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物300mg+20mg(相当于肿节风15g，白花蛇舌草2g)；使用时取本发明药物组合物注射液1支溶于100ml0.9％氯化钠注射液中，配成供试液。
阴性对照：氯化钠注射液，山东华信制药有限公司。
阳性对照药：5％卵白蛋白生理盐水溶液(自制)。
给药剂量：致敏剂量0.5ml/只；致敏次数：隔日腹腔注射1次，连续3次；攻击剂量1ml/只，静脉注射。
实验方法：按上述分组分别给豚鼠隔日腹腔注射上述药液0.5ml，共注射三次。然后将每大组豚鼠再分成两小组，每小组3只。第一小组豚鼠于第一次致敏后14天，第二小组于第一次致敏后14天进行抗原攻击，每只豚鼠均静脉注射上述药液1ml。观察并记录攻击后15min内豚鼠的表现。
实验结果及结论：供试药组和阴性对照药组豚鼠均未发现过敏反应，而卵白蛋白组产生过敏反应并死亡。表明，本发明药物组合物注射液无明显致敏作用。
2、溶血性实验
实验动物：雄性家兔，1只，体重2.5kg。
供试品：本发明药物组合物注射液(自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物300mg+20mg)，使用时取组合物注射液1支溶于100ml0.9％氯化钠注射液中，配成供试液。
实验方法：制备2％红细胞生理盐水混悬液备用。取洁净试管7支，编号并排列在试管架上，按下表顺序操作，混匀后置37℃水浴中温育，观察记录15min、30min、45min、1h、2h、3h的结果。
  试管号   1   2   3   4   5   6   7
  本发明药物组合物注射液(ml)生理盐水(ml)蒸馏水(ml)2％红细胞悬液(ml)   0.12.4-2.5   0.22.3-2.5   0.32.2-2.5   0.42.1-2.5   0.52.0-2.5   -2.5-2.5   --2.52.5
实验结果及结论：供试品0.1～0.5ml各管在15min、30min、45min、1h、2h、3h均未出现溶血和红细胞凝集现象。表明，本发明药物组合物注射液无明显溶血性。
3、血管刺激性实验
实验动物：家兔，体重2.1～2.3kg，雌雄兼用。
供试品：
本发明药物组合物注射液(自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物300mg+20mg)，使用时取组合物注射液1支溶于100ml0.9％氯化钠注射液中，配成供试液。
对照药：氯化钠注射液，山东华信制药有限公司。
给药剂量：家兔静滴给药剂量为100ml/kg。
实验方法：取健康家兔6只，随机分为供试药组和0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只，剂量均为20ml/kg。给药前将兔置固定箱中，于耳缘静脉按上述分组分别滴注供试药和0.9％氯化钠注射液，滴速为1ml/min(20滴/min)，观察给药后24h注射局部有无充血、水肿、出血、坏死。连续给药3天，于末次给药后24h在远离注射部位1cm的向心端取兔耳用10％福尔马林固定，做病理学检查。
实验结果及结论：肉眼观察及病理检查表明，给药组与对照组无明显差别，用药部位的血管及周围组织均未见充血、水肿、出血、坏死，病理检查无异常。表明，本发明药物组合物注射液静脉静滴对血管无刺激性。
实验例9本发明药物组合物注射液稳定性实验
样品：本发明药物组合物注射液：自制，每5ml含肿节风提取物+白花蛇舌草提取物300mg+20mg(相当于肿节风15g，白花蛇舌草2g)。
考察项目：性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速实验6个月和长期实验期末增加无菌和热原检查。
1、影响因素实验
强光照射实验：取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。
高温实验：取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。
低温实验：取供试品，在4℃冰箱中放置10天。
上述实验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。
结果：光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，外观变为淡黄色澄明液体，标示含量下降，有关物质略有升高。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。
2、加速实验
方法：置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在实验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。
结果：温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速实验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。
3、长期实验
方法：置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。
结果：温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期实验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论：由上述考察结果得出结论，各项实验中，本发明药物组合物注射液比较稳定。
[具体实施方式]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。
实施例1肿节风提取物的制备
制备方法：
取肿节风，加水煎煮二次，每次2小时，每次加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.33(70℃)，加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为70％，第二次含醇量为80％，每次冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至每1ml含生药10g，加入适量新配制的卵蛋白溶液，搅拌，使沉淀，冷藏48小时，滤过，滤液煮沸，使过量的卵蛋白凝固，滤过，滤液加乙醇，使含乙醇量为75％，放置沉淀，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，喷雾干燥即得肿节风提取物。
共制备4批，每批50kg，得率及含量测定见表8。
鉴别：
(1)取本品50mg，置试管中，加锌粉少量及0.1％氯化铵溶液1滴，微火加热至干。在试管口盖上用5％对二甲氨基苯甲醛-20％三氯醋酸的苯溶液润湿的滤纸，继续微火加热，滤纸显粉红色或紫色。
(2)取本品50mg，加乙醇0.5ml，置水浴中微热，搅拌，取上清液少许点于滤纸上，干燥，在紫外光灯(365nm)下观察，显亮蓝绿色荧光。用氨气熏后，显黄色斑点，荧光增强。
异秦皮啶含量测定：
高效液相色谱法
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为344nm。理论板数按异秦皮啶峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取经五氧化二磷干燥24小时的异秦皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取肿节风提取物50mg，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率25kHz)40分钟，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
反丁烯二酸含量测定：
照高效液相色谱法(2005版药典一部附录VID)。
系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.16mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值为2.80)为流动相，检测波长为210nm；理论板数按反丁烯二酸计算，应不低于5000。
对照品溶液的制备：精密称取经105℃干燥至恒重的反丁烯二酸对照品10mg，置25ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含反丁烯二酸8μg)。
供试品溶液的制备：精密称取本品50mg，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
                            表84批肿节风提取物得率及含量测定
批次 药材(kg) 提取物(kg) 得率(％)   异秦皮啶含量(％)   反丁烯二酸含量(％)
  1234平均   5050505050   5.7017.9023.1011.1514.46   2.241.882.121.922.04   0.1030.1120.1090.1220.112   0.0220.0280.0270.0260.026
以下实施例中所用的肿节风提取物，均为本实施例中制备。
实施例2白花蛇舌草提取物的制备
制备方法：
取白花蛇舌草，粉碎成粗粉，照2005版药典一部流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释成每1ml相当于1g原药材的量，冷藏，静置12小时，滤过，滤液加乙醇进行三次梯度醇沉，第一次使含醇量60％，第二次使含醇量70％，第三次使含醇量80％，每次均冷藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，喷雾干燥，即得。
共制备4批，每批10kg，得率及含量测定见表9。
含量测定：
对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量70％乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(2005版药典一部附录VA)，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲。
测定法：精密量取本品适量，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12～15mm，湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(2005版药典一部附录VA)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。
4批提取物的得率及含量测定数据见下表。
                  表94批白花蛇舌草提取物得率及含量测定
  批次   药材(kg)   提取物(kg)   得率(％)   总黄酮含量(％)
  1234平均   1010101010   0.0780.1240.1030.1820.122   0.780.951.031.441.05   65.458.762.354.560.2
以下实施例中所用的白花蛇舌草提取物，均为本实施例中制备。
实施例3本发明药物组合物水针剂的制备
处方一：
肿节风提取物           300g
白花蛇舌草提取物       20g
聚山梨酯-80            100ml
注射用水               加至5000ml
共制备                 1000支
处方二：
肿节风提取物                 300g
白花蛇舌草提取物             30g
聚山梨酯-80                  110ml
注射用水                     加至5000ml
共制备                       1000支
处方三：
肿节风提取物                 300g
白花蛇舌草提取物             60g
聚山梨酯-80                  150ml
注射用水                     加至5000ml
共制备                       1000支
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌加热溶解，然后加入处方量的肿节风提取物和白花蛇舌草提取物，加热搅拌溶解完全。
3)补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例4本发明药物组合物粉针剂的制备
处方一：
肿节风提取物                   400g
白花蛇舌草提取物               20g
聚山梨酯-80                    110ml
甘露醇                         320g
无菌注射用水                   加至5000ml
共制备                         1000支
处方二：
肿节风提取物                 300g
白花蛇舌草提取物             20g
聚山梨酯-80                  100ml
甘露醇                       300g
无菌注射用水                 加至5000ml
共制备                       1000支
处方三：
肿节风提取物                 400g
白花蛇舌草提取物             30g
聚山梨酯-80                  120ml
甘露醇                       330g
无菌注射用水                 加至5000ml
共制备                       1000支
处方四：
肿节风提取物                 400g
白花蛇舌草提取物             60g
聚山梨酯-80                  150ml
甘露醇                       350g
无菌注射用水                 加至5000ml
共制备                       1000支
制备工艺：
1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原辅料。
3)取配液量80％的无菌注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌加热溶解，然后将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物加入加热搅拌溶解完全。再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22μm的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例5本发明药物组合物氯化钠输液的制备
处方一：
肿节风提取物              200g
白花蛇舌草提取物          20g
聚山梨酯-80               80ml
氯化钠                    900g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
处方二：
肿节风提取物              300g
白花蛇舌草提取物          20g
聚山梨酯-80               100ml
氯化钠                    900g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
处方三：
肿节风提取物              400g
白花蛇舌草提取物          20g
聚山梨酯-80               120ml
氯化钠                    900g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
制备工艺：
1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量20％的注射用水加入聚山梨酯-80搅拌加热溶解，然后将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物加入加热搅拌溶解完全。将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并两溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6本发明药物组合物葡萄糖输液的制备
处方一：
肿节风提取物              200g
白花蛇舌草提取物          30g
聚山梨酯-80               220ml
葡萄糖                    5000g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
处方二：
肿节风提取物              300g
白花蛇舌草提取物          20g
聚山梨酯-80               250ml
葡萄糖                    5000g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
处方三：
肿节风提取物              1000g
白花蛇舌草提取物          30g
聚山梨酯-80               300ml
葡萄糖                    5000g
注射用水                  加至100000ml
共制备                    1000瓶
制备工艺：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量20％的注射用水加入聚山梨酯-80搅拌加热溶解，然后将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物加入加热搅拌溶解完全。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并两溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例7本发明药物组合物片剂的制备
处方一：
肿节风                    15kg
白花蛇舌草                2kg
淀粉                      120.0g
微晶纤维素                40.0g
2％HPMC水溶液             适量
硬脂酸镁                  2.0g
羧甲淀粉钠                4.0g
共制备                    1000片
处方二：
肿节风提取物              300g(相当于肿节风15kg)
白花蛇舌草提取物          20g(相当于白花蛇舌草2kg)
淀粉                      120.0g
微晶纤维素                40.0g
2％HPMC水溶液             适量
硬脂酸镁                  2.0g
羧甲淀粉钠                4.0g
共制备                    1000片
制备工艺：
原料中的肿节风和白花蛇舌草参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。
1)将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将肿节风提取物、白花蛇舌草提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例8本发明药物组合物胶囊剂的制备
处方一：
肿节风提取物          200g
白花蛇舌草提取物      10g
淀粉                  50.0g
微晶纤维素            15.0g
2％HPMC水溶液         适量
硬脂酸镁              1.0g
共制备                1000粒
处方二：
肿节风提取物          300g
白花蛇舌草提取物      20g
淀粉                  60.0g
微晶纤维素            20.0g
2％HPMC水溶液         适量
硬脂酸镁              1.0g
共制备                1000粒
处方三：
肿节风提取物          300g
白花蛇舌草提取物      60g
淀粉                  80g
微晶纤维素            30g
2％HPMC水溶液         适量
硬脂酸镁              2.0g
共制备                1000粒
制备工艺：
1)将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将肿节风提取物、白花蛇舌草提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例9本发明药物组合物颗粒剂的制备
处方一：
肿节风提取物               200g
白花蛇舌草提取物           60g
糖粉                       2000.0g
2％HPMC50％乙醇溶液        适量
共制备                     1000包
处方二：
肿节风提取物               300g
白花蛇舌草提取物           20g
糖粉                       2000.0g
2％HPMC50％乙醇溶液        适量
共制备                     1000包
处方三：
肿节风提取物               200g
白花蛇舌草提取物           130g
糖粉                       2000.0g
2％HPMC50％乙醇溶液        适量
共制备                     1000包
制备工艺：
1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将肿节风提取物、白花蛇舌草提取物与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，
4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例10本发明药物组合物软胶囊剂的制备
处方一：
肿节风提取物               400g
白花蛇舌草提取物           130g
大豆油                     550.0g
大豆磷脂                   60g
蜂蜡                       55g
共制备                     2000粒
处方二：
肿节风提取物               300g
白花蛇舌草提取物           20g
大豆油                     500.0g
大豆磷脂                   50g
蜂蜡                       50g
共制备                     2000粒
处方三：
肿节风提取物               1000g
白花蛇舌草提取物           10g
大豆油                     700.0g
大豆磷脂                   65g
蜂蜡                       70g
共制备                     2000粒
制备工艺：
将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物分别粉碎过100目筛，备用。将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入肿节风提取物和白花蛇舌草提取物研匀，压制成软胶囊即可。
实施例11本发明药物组合物滴丸剂的制备
处方一：
肿节风提取物               300g
白花蛇舌草提取物           130g
聚乙二醇6000               650g
共制备                     1000粒
处方二：
肿节风提取物               300g
白花蛇舌草提取物           20g
聚乙二醇6000               600g
共制备                     1000粒
处方三：
肿节风提取物               1000g
白花蛇舌草提取物           60g
聚乙二醇6000               700g
共制备                     1000粒
制备工艺：
将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入肿节风提取物和白花蛇舌草提取物，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例12本发明药物组合物口服液体剂的制备
处方一：
肿节风                     15kg
白花蛇舌草                 2kg
苯甲酸钠                   15g
甜蜜素                     10g
水                         加至10000ml
共制备                     1000支
处方二：
肿节风提取物               300g
白花蛇舌草提取物           20g
苯甲酸钠                   15g
甜蜜素                     10g
水                         加至10000ml
共制备                     1000支
制备工艺：
原料中的肿节风和白花蛇舌草参照实施例1、2中的制备方法制成提取物。
1)先将肿节风提取物和白花蛇舌草提取物加入配液量60％的水中，加热搅拌溶解完全。
2)将苯甲酸钠和甜蜜素用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述两个溶液，补加水至全量。
4)过0.8μm的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。

Claims (10)

1、一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物主要由肿节风和白花蛇舌草制成，二者的重量配比为：1∶0.01～10。
2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，肿节风和白花蛇舌草的重量配比为：1∶0.02～6。
3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，肿节风和白花蛇舌草的重量配比为：1∶0.13。
4、根据权利要求1～3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的肿节风和白花蛇舌草可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再和药用辅料混合加工制成任何一种制剂，所得总提取物的主要有效成分为有机酸类、香豆素类和黄酮类。
5、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该药物还可以由肿节风提取物、白花蛇舌草提取物制成，二者的重量配比为：1∶0.004～4。
6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，肿节风提取物和白花蛇舌草提取物的重量配比为1∶0.01～0.5。
7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，肿节风提取物和白花蛇舌草提取物的重量配比为1∶0.04～0.2。
8、根据权利要求5～7所述的任一药物组合物，其特征在于，所述肿节风提取物的主要有效成分为有机酸类和香豆素类，含异秦皮啶不低于0.1％，含反丁烯二酸不低于0.02％；白花蛇舌草提取物的主要有效成分为白花蛇舌草总黄酮，含量不低于50％。
9、根据权利要求1～3、5～7所述的任一药物组合物，其特征在于，该药物组合物可以与任一药学上可接受的辅料结合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
10、根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述的临床上或药学上可接受的剂型为口服制剂或注射剂。
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CN106267029A (zh) * 2016-10-12 2017-01-04 南宁多灵生物科技有限公司 一种治疗卵巢癌的中药组合物
CN106309749A (zh) * 2016-10-12 2017-01-11 南宁多灵生物科技有限公司 一种治疗宫颈癌的中药
CN106421386A (zh) * 2016-10-13 2017-02-22 南宁多灵生物科技有限公司 一种治疗食管癌的中药

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106267029A (zh) * 2016-10-12 2017-01-04 南宁多灵生物科技有限公司 一种治疗卵巢癌的中药组合物
CN106309749A (zh) * 2016-10-12 2017-01-11 南宁多灵生物科技有限公司 一种治疗宫颈癌的中药
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