CN1606444A - 人磷脂酰肌醇3－激酶δ抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了使用式(I)化合物抑制磷脂酰肌醇3－激酶δ同工型(PI3Kδ)活性的方法，和治疗其中PI3Kδ在白细胞功能中起作用的疾病例如免疫病症和炎症的方法。所述方法优选使用选择性地抑制PI3Kδ，而不明显抑制其它PI3K同工型活性的活性剂。提供了抑制PI3Kδ活性的式(1)化合物，包括选择性地抑制PI3Kδ活性的化合物。还提供了使用PI3Kδ抑制化合物来抑制癌细胞生长或者增殖的方法。因此，本发明提供了使用PI3Kδ抑制化合物来在体外和体内抑制PI3Kδ介导的过程的方法。其中R1－R3、X、Y和A如说明书所定义。

Description

人磷脂酰肌醇3-激酶δ抑制剂
相关申请的交叉参考
本申请是于2001年4月24日提交的美国申请序列号09/841,341的部分继续再申请，该未决美国申请要求于2000年4月25日提交的美国临时申请序列号60/199,655和2000年10月25日提交的美国临时申请序列号60/238,057的优先权。
                       发明领域
本发明一般涉及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)酶，更具体地说，涉及PI3K活性的选择性抑制剂，以及使用这类物质的方法。
                       发明背景
经由3’-磷酸化磷酸肌醇的细胞信号参与多种细胞过程，例如恶性转化、生长因子信号、炎症和免疫(参见Rameh等，J.Biol Chem，274：8347-8350(1999)的综述)。担负生成这些磷酸化信号产物的酶—磷脂酰肌醇3-激酶(PI 3-激酶；PI3K)最初被确定为与病毒癌基因蛋白质和生长因子受体酪氨酸激酶有关的活性，后者使磷脂酰肌醇(PI)及其在肌醇环3’-羟基上的磷酸化衍生物磷酸化(Panayotou等，TrendsCell Biol 2：358-60(1992))。
磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸酯(PIP3)—PI 3-激酶激活的主要产物的水平随着用各种激动剂对细胞处理而得到提高。因此，确信PI 3-激酶激活参与广泛的细胞响应，包括细胞生长、分化和细胞程序死亡(Parker等，Current Biology，5：577-99(1995)；Yao等，Science，267：2003-05(1995))。尽管PI 3-激酶激活后生成的磷酸化类脂的下游靶标尚未很好地鉴定，但是已呈现的证据表明当与各种磷脂酰肌醇类脂结合时，含有血小板-白细胞C激酶底物-同源性区和FYVE-指纹域的蛋白质被激活(Sternmark等，J.Cell Sci，112：4175-83(1999)；Lemmon等，Trends Cell Biol，7：237-42(1997))。在体外，蛋白激酶C(PKC)的一些同工型被PIP3直接激活，并且显示出与PKC有关的蛋白激酶PKB被PI 3-激酶激活(Burgering等，Nature，376：599-602(1995))。
目前，基于底物的特异性将PI 3-激酶酶家族分为三类。I型PI3K能够使磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸酯和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸酯(PIP2)磷酸化，分别产生磷脂酰肌醇-3-磷酸酯(PIP)、磷脂酰肌醇-3，4-二磷酸酯和磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸酯。II型PI3K使PI和磷脂酰肌醇-4-磷酸酯磷酸化，而III型PI3K仅使PI磷酸化。
PI 3-激酶的首次纯化和分子克隆揭示它是由p85和p110亚单位组成的异源二聚体(Otsu等，Cell，65：91-104(1991)；Hiles等，Cell，70：419-29(1992))。自那时起，已鉴定出四种不同的I型PI3K，称为PI3Kα、β、δ和γ，每种由110kDa催化亚单位和调节亚单位组成。更具体地说，三种催化亚单位即p110α、p110β和p110δ，各与相同的调节亚单位p85相互作用；而p110γ与不同的调节亚单位p101相互作用。如下所述，人细胞和组织中这些PI3K中每一种的表达模式也是不同的。尽管近年来已收集到丰富的PI 3-激酶总体的细胞功能的信息，但是对各同工型所起的作用知之甚少。
牛p110α的克隆已有描述。该蛋白已被鉴定为与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白Vps34p有关，它是一种参与液泡蛋白质加工的蛋白。重组p110α产物也显示出与p85α有关，在转染的COS-1细胞中产生PI3K活性。参见Hiles等，Cell，70：419-29(1992))。
在Hu等，Mol Cell Biol，13：7677-88(1993)中描述了第二种称为p110β的人p110同工型的克隆。该同工型的克隆据称与细胞中的p85有关，并且在许多细胞中表达，如在许多人和小鼠组织中以及在人脐静脉内皮细胞、Jurkat人白血病T细胞、293人胚胎肾细胞、小鼠3T3成纤维细胞、HeLa细胞和NBT2大鼠膀胱癌细胞中发现了p110βmRNA。这样广泛的表达表明该同工型在信号途径中一般说来是重要的。
在Chantry等，J.Biol Chem，272：19236-41(1997)中描述了PI 3-激酶的p110δ同工型的鉴定。观察到人p110δ同工型以受组织限制的方式表达。它在淋巴细胞和淋巴组织中高水平地表达表明该蛋白在免疫系统中的PI 3-激酶-介导的信号中起作用。关于p110δ同工型的细节可参见美国专利5,858,753、5,822,910和5,985,589。还可参见Vanhaesebroeck等，Proc Natl Acad Sci USA，94：4330-5(1997)和国际公开WO 97/46688。
在每一种PI3Kα、β和δ亚型中，p85亚单位通过它的SH2区与靶蛋白中的磷酸化酪氨酸残基(存在于合适的序列成分中)相互作用来起作用，以使PI 3-激酶定位于质膜(Rameh等，Cell，83：821-30(1995))。已鉴定出p85的两种同工型：p85α(在多种细胞中表达)和p85β(主要在脑和淋巴组织中发现)(Volinia等，Oncogene，7：789-93(1992))。p85亚单位对PI 3-激酶p110α、β或δ催化亚单位的关联似乎是这些酶的催化活性和稳定性所需要的。另外，Ras蛋白的结合还负调节PI 3-激酶活性。
p110γ的克隆还进一步揭示了PI3K酶家族的复杂性(Stoyanov等，Science，269：690-93(1995))。p110γ同工型与p110α和p110β(在催化区具有45-48％的相同)密切相关，但如所提及的那样，并不利用p85作为标靶亚单位。相反，p110γ包含另一个邻近其氨基末梢的称作“血小板-白细胞C激酶底物同源区”的区。该区使p110γ与异源三聚体G蛋白的βγ亚单位相互作用，并且这种相互作用似乎调节它的活性。
PI3Kγ的p101调节亚单位先在猪中克隆，随后进行人定向进化同源鉴定(Krugmann等，J.Biol.Chem，274：17152-8(1999))。p101的N-末端区与p101γ的N-末端区之间的相互作用显示出对经由以上提及的Gβγ的PI3Kγ激活是至关重要。
在国际公开WO 96/25488中描述了组成型活性PI3K多肽。该专利公开了嵌合融合蛋白的制备，其中称作inter-SH2(iSH2)区的p85的102-残基片段通过连接区与鼠p110的N-末端融合。p85 iSH2区显然能以与完整p85相差不大的方式激活PI3K活性(Klippel等，Mol CellBiol，14：2675-85(1994))。
因此，通过PI 3-激酶的氨基酸同一性或者通过PI 3-激酶的活性可对其作出定义。这个不断增长的基因家族的另外的成员包括更互不相关的类脂和蛋白激酶，包括酿酒酵母的Vps34 TOR1和TOR2(及它们的哺乳动物同源物如FRAP和mTOR)、共济失调毛细血管扩张基因产物(ATR)和DNA-依赖的蛋白激酶(DNA-PK)的催化亚单位。主要参见Hunter，Cell，83：1-4(1995)。
PI 3-激酶也显示出参与白细胞激活的多种方面。与PI 3-激酶活性有关的p85已显示与CD28的细胞质粒区生理相关，CD28是一种用于激活T-细胞以对抗原作出响应的重要的共同刺激分子(Pages等，Nature，369：327-29(1994)；Rudd，Immunity，4：527-34(1996))。T细胞通过CD28的激活降低经抗原激活的阈值，并且提高增殖性响应的大小和持续时间。这些作用增加了包括白介素-2(IL-2)—一种T细胞生长因子在内的多种基因的转录(Fraser等，Science，251：313-16(1991))。使得它不能再与PI 3-激酶相互作用的CD28突变导致无法启动IL2产生，这表明PI 3-激酶在T细胞激活中起了至关重要的作用。
抗酶家族的各个成员的特异性抑制剂可为每种酶的译码功能提供非常有价值的工具。两种化合物，LY294002和渥曼青霉素已经广泛用作PI 3-激酶抑制剂。然而这些化合物是非特异性的PI3K抑制剂，因此它们无法识别I型PI 3-激酶的四个成员。例如，渥曼青霉素对各种I型PI 3-激酶中的每一种的IC50值介于1-10nM之间。类似地，LY294002对这些PI 3-激酶中的每一种的IC50值为约1μM(Fruman等，Ann Rev Biochem，67：481-507(1998))。因此，这些化合物在研究各种I型PI 3-激酶的作用中的用途受到限制。
基于使用渥曼青霉素的研究，有证据表明，对于经由G-蛋白偶联受体的白细胞信号的一些特性也需要PI 3-激酶功能(Thelen等，ProcNatl Acad Sci USA，91：4960-64(1994))。另外，已显示渥曼青霉素和LY294002阻断嗜中性白细胞迁移和超氧化物释放。然而，由于这些化合物不能识别PI3K的各种同工型，特异性PI3K同工型或多种同工型中哪一种参与这些现象也尚不清楚。
                    渥曼青霉素
鉴于以上考虑清楚可见，已有的知识缺少关于PI 3-激酶的结构和功能特征，包括亚细胞定位、激活状态、底物亲和性等。另外，这些酶在正常的和疾病化的组织两者中发挥的功能也待推测。特别是白细胞中的PI3Kδ的功能以前未被鉴定，关于它在人生理学中功能的知识是有限的。其它的PI3K同工型在这些组织中的共表达使得分离每种酶的活性的工作迄今仍是令人感到繁琐的事。此外，由于没有鉴定抑制剂以证实各种选择性抑制特性，各种PI3K同工酶的活性的分离将是不可能的。的确，本申请人至今还没得知PI3K同工酶的这种选择性，或者更确切地说特异性抑制剂已得到证实。
因此，本领域存在对PI3Kδ多肽进行进一步结构表征的需要。也存在对PI3Kδ的功能进行表征的需要。此外，我们对PI3Kδ的理解需要对p110δ与其调节亚单位和细胞中其它的蛋白的结构相互作用的进一步的阐释。为了能够更好地表征每种同工酶的功能，也存在对PI3K同工酶的选择性或者特异性抑制剂的需要。具体地讲，为了开发该同工酶的作用，以及为了开发调节所述同工酶活性的药物，需要PI3Kδ的选择性或者特异性抑制剂。
本发明一方面提供可抑制人PI3Kδ生物活性的化合物。本发明另一方面提供选择性抑制PI3Kδ，而对其它的PI3K同工型具有相对低的抑制效力的化合物。本发明还另一方面提供鉴定人PI3Kδ功能的方法。本发明再一方面提供选择性调节人PI3Kδ活性，由此促进由PI3Kδ机能失调介导的疾病的医学治疗的方法。本发明的其它方面和优点对具有本领域普通技术的人员来说将是显而易见的。
                       发明概述
目前已发现本发明能够实现这些和其它方面，其中一方面为干扰白细胞功能的方法，包括使白细胞与选择性抑制白细胞内的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接触。按照所述方法，白细胞可包括选自嗜中性白细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞和嗜碱性粒细胞的细胞。
例如，在其中白细胞包括嗜中性白细胞的情况下，所述方法可包括干扰至少一种选自受激超氧化物释放、受激胞吐作用和趋化性迁移的嗜中性白细胞功能。优选所述方法基本上不干扰嗜中性白细胞对细菌的吞噬作用或对细菌的杀伤。在其中白细胞包括B淋巴细胞的情况下，所述方法可包括干扰B淋巴细胞的增殖或者B淋巴细胞的抗体产生。在其中白细胞包括T淋巴细胞的情况下，所述方法可包括干扰T淋巴细胞的增殖。在其中白细胞包括嗜碱性粒细胞的情况下，所述方法可包括干扰嗜碱性粒细胞释放组胺。
在采用选择性PI3Kδ抑制剂的本发明方法中，优选在基于细胞的测定中，所述化合物对抑制PI3Kδ的选择性相当于其它I型PI3K同工型的至少约10倍。更优选在基于细胞的测定中，所述化合物对抑制PI3Kδ的选择性相当于其它I型PI3K同工型的至少约20倍。仍更优选在生化测定中，所述化合物抑制PI3Kδ的选择性相当于其它I型PI3K同工型的至少约50倍。
可用于本发明方法的优选的选择性化合物包括具有结构(I)的化合物及其可药用盐和溶剂化物(例如水合物)：
Figure A0282568700251
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所
述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，任选被一个或者多个卤素、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1- 4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代；
其中在基于细胞的测定中，所述化合物抑制PI3Kδ的选择性至少相当于其它I型PI3K同工型的约10倍。
在另一个实施方案中，本发明为用于治疗由嗜中性白细胞介导的医学病症的方法，该方法包括给需要治疗的动物施用有效量的选择性抑制在嗜中性白细胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物。可依据本发明方法治疗的示例性医学病症包括那些特征是具有不需要的选自受激超氧化物释放、受激胞吐作用和趋化性迁移的嗜中性白细胞功能的病症。优选地，本发明方法基本上不抑制嗜中性白细胞吞噬细胞的活性或者对细菌的杀灭。
在另一个实施方案中，本发明为用于干扰破骨细胞功能的方法，该方法包括使破骨细胞与选择性抑制在破骨细胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接触。根据本发明方法，所述化合物可包括优先与骨结合的部分。
在另一个实施方案中，本发明为在需要治疗的动物体内缓解骨再吸收疾病的方法，该方法包括给所述动物施用有效量的抑制动物破骨细胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物。适合用本发明方法治疗的优选的骨再吸收疾病为骨质疏松。
在另一个实施方案中，本发明为用于抑制造血源的癌细胞生长或增殖的方法，该方法包括使癌细胞与选择性抑制癌细胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接触。所述方法可有利地抑制选自淋巴癌、多发性骨髓瘤和白血病的癌症的生长或增殖。
在另一个实施方案中，本发明为抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)多肽的激酶活性的方法，该方法包括使PI3Kδ多肽与具有通式结构(I)的化合物接触。
可用于本发明方法的优选的化合物包括选自下列的化合物：
其中Y不存在或选自S和NH；
R4选自H、卤素、NO2、OH、OCH3、CH3和CF3；
R5选自H、OCH3和卤素；
或者R4和R5与喹唑啉环系的C-6和C-7一起形成任选包含1个或者多个O、N或S原子的5-或6-元芳环；
R6选自C1-C6烷基、苯基、卤代苯基、烷氧基苯基、烷基苯基、联苯基、苄基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和吗啉基；
Rd独立地选自NH2、卤素、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亚烷基苯基)，和
Figure A0282568700282
且
q为1或2；
条件是：当R6是苯基或2-氯苯基时，R4和R5当中至少有一个不为H。
所述化合物更优选选自：
Figure A0282568700291
其中Y不存在或选自S和NH；
R7选自H、卤素、OH、OCH3、CH3和CF3；
R8选自H、OCH3和卤素；
或者R7和R8与喹唑啉环系的C-6和C-7一起形成任选包含1个或者多个O、N或S原子的5-或6-元芳环；
R9选自C1-C6烷基、苯基、卤代苯基、烷基苯基、联苯基、苄基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和吗啉基；
Rd独立地选自NH2、卤素、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亚烷基苯基)；且
q为1或2，
条件是：R7和R8当中至少有一个不是6-卤素或6，7-二甲氧基，且R9不是4-氯苯基。
在另一个实施方案中，本发明为用于干扰白细胞功能的方法，该方法包括使白细胞与具有通式结构(I)的化合物接触。
在另一个实施方案中，本发明为一类化合物，所述化合物在生化和基于细胞的测定中观察到可抑制PI3Kδ活性，并期望在其中PI3Kδ活性是过度的或者不合乎需要的医学病症中呈现出治疗效益。因此，本发明提供一类具有结构(II)的化合物。
所述化合物优选具有通式结构(IV)，
其中Y不存在或选自S和NH；
R10选自H、卤素、OH、OCH3、CH3和CF3；
R11选自H、OCH3和卤素；
或者R10和R11与喹唑啉环系的C-6和C-7一起形成任选包含1个或者多个O、N或S原子的5-或6-元芳环；
R12选自C1-C6烷基、苯基、卤代苯基、烷基苯基、联苯基、苄基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)C2H5和吗啉基；
Rd独立地选自NH2、卤素、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亚烷基苯基)，且
q为1或2；
条件是：
(a)R10和R11当中至少有一个不为6-卤素或6，7-二甲氧基；
(b)R12不是4-氯苯基；和
(c)当R12是苯基或2-氯苯基，且X为S时，R10和R11当中至少有一个不为H。
通过下面详细的描述和实施例，本发明的这些和其它的特征以及优点将变得显而易见。提供详细的描述和实施例以增强对本发明的理解，但不是用来限制本发明的范围。
                      附图简述
附图1显示了本发明的选择性PI3Kδ抑制剂对三种PI3K同工型的活性的影响。
附图2显示了选择性PI3Kδ抑制剂对在TNF或IgG存在下人嗜中性白细胞的超氧化物产生的影响。
附图3显示了选择性PI3Kδ抑制剂对在TNF或fMLP存在下人嗜中性白细胞的超氧化物产生的影响。
附图4显示了选择性PI3Kδ抑制剂对在fMLP存在下人嗜中性白细胞的弹性蛋白酶胞吐作用的影响。
附图5显示了选择性PI3Kδ抑制剂对人嗜中性白细胞的fMLP诱导的趋化性的影响。
附图6显示了选择性PI3Kδ抑制剂不影响嗜中性白细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用和杀伤。
附图7显示了选择性PI3Kδ抑制剂对人B淋巴细胞的增殖和抗体产生的影响。
附图8显示了选择性PI3Kδ抑制剂对抗IgM刺激的小鼠脾B淋巴细胞增殖的影响。
附图9显示了选择性PI3Kδ抑制剂对动物模型中弹性蛋白酶胞吐作用的影响。
                优选实施方案的详细描述
本发明提供了选择性地抑制PI3Kδ活性的化合物。本发明还提供了抑制PI3Kδ活性的方法，包括在细胞，尤其是白细胞、破骨细胞和癌细胞中选择性调节PI3Kδ同工酶活性的方法。该方法包括体外、体内和离体的应用。
特别有利的是为缓解由PI3Kδ活性介导的疾病或病症，在临床中选择性地调节PI3Kδ活性的方法。因此，通过使用本发明的PI3Kδ选择性调节剂，可治疗以过度的或不适合的PI3Kδ活性为特征的疾病或病症。
本发明的其它方法包括使该同工酶的生理学作用的其它的性质得以实现。此外，本发明提供包含选择性PI3Kδ抑制剂的药物组合物。还提供包含选择性PI3Kδ抑制剂化合物(或包含所述化合物的药物组合物)的制造产品和使用所述化合物的指导原则。现在详细描述本发明这些和其它的有用的实施方案。
本文描述的方法得益于使用选择性地抑制、且优选特异性地抑制细胞(包括体外、体内或者离体的细胞)中的PI3Kδ活性的化合物。本发明方法中有用的细胞包括那些表达内源性PI3Kδ的细胞，其中内源性是指在没有将一种或多种编码PI3Kδ多肽或其生物活性片段的多核苷酸重组引入到细胞中的情况下，细胞表达PI3Kδ。本发明方法还包括表达外源性PI3Kδ的细胞的用途，其中采用重组方法，将一种或多种编码PI3Kδ或其生物活性片段的多核苷酸导入到细胞中。
特别有利的是，所述细胞能够在体内，即在生命体例如动物体或人体中，其中PI3Kδ抑制剂可用作抑制个体中PI3Kδ活性的治疗药物。或者，所述细胞能够以分散的细胞分离或者在组织中分离，用于离体或者体外方法。也包括在本发明中的体外方法可包括使PI3Kδ酶或其生物活性片段与本发明抑制剂化合物接触的步骤。PI3Kδ酶可包括已纯化的和已分离的酶，其中所述酶分离自天然来源(例如，在没有通过重组技术修饰下正常表达PI3Kδ多肽的细胞或者组织)，或者分离自通过重组技术修饰以表达外源性酶的细胞。
本文所用的术语“选择性PI3Kδ抑制剂”是指与抑制PI3K家族的其它同工酶相比，能更有效抑制PI3Kδ同工酶的化合物。“选择性PI3Kδ抑制剂”化合物应理解为与常规的和一般称为PI3K抑制剂(如渥曼青霉素或LY294002)的化合物相比，其对PI3Kδ更具选择性。同时将渥曼青霉素和LY294002称为“非选择性PI3K抑制剂”。选择性负调节PI3Kδ表达或活性的任何类型的化合物可用作本发明方法中的选择性PI3Kδ抑制剂。此外，选择性负调节PI3Kδ表达或活性并且具有可接受的药理性质的任何类型的化合物可用作本发明治疗方法中的选择性PI3Kδ抑制剂。
通过测定每种化合物将所述活性抑制到预定程度时的浓度，并且随后比较结果，能够确定作为酶活性(或者其它的生物活性)抑制剂的化合物的相对效力。通常，优选的测定是在生化试验中将活性抑制50％的浓度，即50％抑制浓度或“IC50”。采用本领域已知的常规技术可完成IC50测定。通常，通过在一定浓度范围的所试验的抑制剂存在下测量所给出的酶的活性可测定IC50。然后将实验所得到的酶活性的值对所采用的抑制剂浓度作图。将显示50％酶活性(与不存在任何抑制剂下的活性相比)的抑制剂浓度作为IC50值。类似地，通过合适的活性测定可确定其它的抑制浓度。例如在一些情况中，可能要求确定90％抑制浓度，即IC90等。
因此，“选择性PI3Kδ抑制剂”还可理解为是指对PI3Kδ的50％抑制浓度(IC50)比对任何或所有其它I型PI3K家族成员的IC50值低至少10倍，优选至少20倍，更优选至少30倍的化合物。术语“特异性PI3Kδ抑制剂”可理解为是指对PI3Kδ的50％IC50比对任何或所有其它I型PI3K家族成员的IC50值低至少50倍，优选至少100倍，更优选至少200倍，并仍更优选至少500倍的选择性PI3Kδ抑制剂化合物。
此外，本发明还提供了抑制白细胞功能的方法。更具体地说，本发明提供了抑制嗜中性白细胞和T及B淋巴细胞功能的方法。对于嗜中性白细胞，意外地发现抑制PI3Kδ活性可抑制嗜中性白细胞的功能。例如，已观察到本发明化合物引起抑制嗜中性白细胞的典型的功能，例如受激超氧化物释放、受激胞吐作用和趋化性迁移。然而，已进一步观察到本发明的方法使得可以抑制嗜中性白细胞的一些功能，而同时基本上不影响这些细胞的其它功能。例如，已观察到本发明的选择性PI3Kδ抑制剂化合物基本上不抑制嗜中性白细胞对细菌的吞噬作用。
因此，本发明包括用于抑制嗜中性白细胞功能，而同时基本上不抑制对细菌的吞噬作用的方法。适合用本发明方法抑制的嗜中性白细胞功能包括由PI3Kδ活性或表达介导的任何功能。这些功能包括但不限于受激超氧化物释放、受激胞吐作用或者脱粒、趋化性迁移、粘附于血管内皮(例如，嗜中性白细胞的粘连/翻滚、嗜中性白细胞活性的引发和/或嗜中性白细胞对内皮的封闭)、透壁血细胞渗出或者经由内皮渗出到外周组织中。通常，将这些功能统称为“炎性功能”，因为它们通常与响应炎症的嗜中性白细胞有关。嗜中性白细胞的炎性功能与这些细胞对细菌的杀伤功能例如对细菌的吞噬作用和杀伤不同。因此，本发明还包括治疗其中嗜中性白细胞的一种或多种炎性功能异常或不合乎需要的病症的方法。
通过本发明已进一步确定PI3Kδ在淋巴细胞，包括B细胞和T细胞的受激增殖中起作用。此外，PI3Kδ似乎在通过B细胞刺激的抗体分泌中起作用。本发明的选择性PI3Kδ抑制剂化合物已证实通过对PI3Kδ的抑制作用可以消除这些现象。因此，本发明包括抑制淋巴细胞增殖的方法，和抑制通过B淋巴细胞的抗体产生的方法。通过本发明能够实现的其它方法包括治疗其中一种或多种这些淋巴细胞功能是异常或不合乎需要的病症的方法。
目前已确定能够选择性或者特异性地抑制PI3Kδ活性，以利于治疗PI3Kδ-介导的疾病，同时减少或者消除通常伴随抑制其它的I型PI3-激酶所带来的并发症。为阐述该实施方案，可用所发现的与其它PI3K同工型相比能够选择性地抑制PI3Kδ的一类化合物来实施本发明的方法。
使用具有通式结构(III)的化合物可实施该实施方案的方法。优选的方法使用已经凭经验确定对PI3Kδ的抑制选择性至少为其它PI3Kδ同工型的10倍的化合物。例如，使用以下化合物可实施所述方法：
3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-y-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-吗啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-(2，4-二甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-苄基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-吗啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-异丙基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
还确定通过使用一类具有PI3Kδ抑制活性、由此有利于抑制由PI3Kδ介导的疾病中的PI3Kδ活性的化合物，可有利地实施本发明的方法。例如，在该实施方案中，使用具有通式结构(I)的化合物及其可药用盐和溶剂化物(例如水合物)可实施本发明方法，
Figure A0282568700371
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，任选被一个或者多个卤素、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1- 4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
例如，本发明方法可使用如下具有PI3Kδ抑制活性的化合物：
3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-吗啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-t-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-苄基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-吗啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮；
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮。
本发明还提供了作为PI3Kδ活性的选择性抑制剂的化合物。所述化合物在生化试验中呈现出对PI3Kδ的抑制作用，并且在基于细胞的测定中选择性地干扰表达PI3Kδ的细胞的功能。如在本文其它地方描述的，已证实本发明化合物可抑制嗜中性白细胞和其它白细胞中的某些功能以及破骨细胞的功能。
一般地，本发明提供的化合物和其可药用盐和其溶剂化物(例如水合物)一般具有通式结构(I)，其可药用盐或其前药：
Figure A0282568700421
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Rb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，任选被一个或者多个卤素、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1- 4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
本文所用术语“烷基”定义为包含给定碳原子数目的直链和支链烃基，一般是甲基、乙基以及直链和支链的丙基和丁基。烃基可含有最高达16个碳原子，优选1-8个碳原子。术语“烷基”包括“桥连的烷基”，即C6-C16双环或多环烃基，例如，降冰片烷基、金刚烷基、双环[2.2.2]辛基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或十氢萘基。术语“环烷基”定义为环状C3-C8烃基，例如环丙基、环丁基、环己基和环戊基。
术语“链烯基”的定义除含有碳-碳双键外，与“烷基”相同。“环烯基”的定义除了环中具有碳-碳双键外，与“环烷基”类似。
术语“亚烷基”定义为具有取代基的烷基。例如，术语“C1-3亚烷基芳基”是指含有1-3个碳原子且被芳基取代的烷基。
术语“杂C1-3烷基”定义为还包含选自O、S和NRa的杂原子的C1-3烷基。例如-CH2OCH3或-CH2CH2SCH3。术语“芳基杂C1-3烷基”是指具有杂C1-3烷基取代基的芳基。
术语“卤代”或者“卤素”在本文中定义为包括氟、溴、氯和碘。
术语“卤代烷基”在本文中定义为被一个或多个卤素取代基，即氟、氯、溴、碘或其组合取代的烷基。类似地，“卤代环烷基”定义为具有一个或多个卤素取代基的环烷基。
单独或组合使用的术语“芳基”在本文中定义为单环或多环芳基，优选单环或双环芳基，例如苯基或萘基。除非另外指明，否则“芳基”可以是未取代的或者例如被以下一个或多个，特别是1-3个下列取代基取代：卤素、烷基、苯基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基和烷基磺酰基。示例性的芳基包括苯基、萘基、联苯基、四氢萘基、氯苯基、氟苯基、氨基苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、硝基苯基、羧基苯基等。术语“芳基C1-3烷基”和“杂芳基-C1-3烷基”定义为具有C1-3烷基取代基的芳基或杂芳基。
术语“杂芳基”在本文中定义为含有1或2个芳环，且在芳族环中包含至少一个氮、氧或硫原子的单环或双环系统，并且它们可以是未取代的或者被一个或多个，特别是1-3个取代基，例如下列取代基取代：卤素、烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基和烷基磺酰基。杂芳基的实例包括噻吩基、呋喃基、吡啶基、噁唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、三唑基、异噻唑基、异噁唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。
术语“Het”定义为包含一个或多个选自氧、氮和硫的杂原子的单环、双环和三环基团。“Het”也可包含连接在环上的氧代基团(＝O)。Het基团的非限制性实例包括1，3-二氧杂环戊烷、2-吡唑啉、吡唑烷、吡咯烷、哌嗪、吡咯啉、2H-吡喃、4H-吡喃、吗啉、硫代吗啉、哌啶、1，4-二噻烷和1，4-二氧杂环己烷。
术语“羟基”定义为-OH。
术语“烷氧基”定义为-OR，其中R为烷基。
术语“烷氧基烷基”定义为其中氢被烷氧基置换的烷基。术语“(烷硫基)烷基”的定义与烷氧基烷基类似，不同之处在于存在的是硫原子而非氧原子。
术语“羟基烷基”定义为连接有烷基的羟基。
术语“氨基”定义为-NH2，术语“烷基氨基”定义为-NR2，其中至少有一个R为烷基，而第二个R为烷基或氢。
术语“酰氨基”定义为RC(＝O)N，其中R为烷基或芳基。
术语“烷硫基”定义为-SR，其中R为烷基。
术语“烷基亚磺酰基”定义为R-SO2，其中R为烷基。
术语“氨基”定义为-NH2，术语“烷基氨基”定义为-NR2，其中至少有一个R为烷基，而第二个R为烷基或氢。
术语“酰氨基”定义为RC(＝O)N，其中R为烷基或芳基。
术语“烷硫基”定义为-SR，其中R为烷基。
术语“烷基亚磺酰基”定义为R-SO2，其中R为烷基。
术语“烷基磺酰基”定义为R-SO3，其中R为烷基。
术语“硝基”定义为-NO2。
术语“三氟甲基”定义为-CF3。
术语“三氟甲氧基”定义为-OCF3。
术语“氰基”定义为-CN。
在优选的实施方案中，X选自CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH(CH3)、CH(CH2CH3)、CH2CH(CH3)和C(CH3)2。在另一个优选的实施方案中，Y不存在或选自S和NH。
A环可为单环或者双环。单环A环系为芳环。双环A环系包含至少一个芳环，但可以两个环都是芳环。A环系的实例包括但不限于咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、哒嗪基(pyridizinyl)、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、嘌呤基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基、蝶啶基、1H-吲唑基和苯并咪唑基。
在一组优选的式(I)化合物中，A由选自下列的任选取代的环系代表：
Figure A0282568700461
，和
A环系可任选被1-3个，优选1-2个选自下列的取代基取代：N(Ra)2、卤素、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、ORa，和
具体的取代基包括但不限于NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、NHCH2C6H5、NH(C2H5)、Cl、F、CH3、SCH3、OH和
Figure A0282568700473
在另一组优选的式(I)化合物中，R1和R2独立地为氢、ORa、卤素、C1-6烷基、CF3、NO2、N(Ra)2、NRaC1-3亚烷基N(Ra)2和OC1-3亚烷基ORa。具体的取代基包括但不限于H、OCH3、Cl、Br、F、CH3、CF3、NO2、OH、N(CH3)2、
Figure A0282568700474
和O(CH2)2OCH2C6H5。R1和R2也可一起形成环，例如苯环。
在一个优选的实施方案中，R3选自任选取代的C1-6烷基、芳基、杂芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C(＝O)ORa、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基环烷基、C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基N(Ra)2和C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra。具体的R3基团包括但不限于：
Figure A0282568700491
，和
Figure A0282568700492
R3基团可被1-3个取代基，例如下列取代基取代：卤素、ORa、C1-6烷基、芳基、杂芳基、NO2、N(Ra)2、NRaSO2CF3、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)ORa、N(Ra)C1-4亚烷基(Ra)2、SO2N(Ra)2、CN、C(＝O)Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基C≡CRa、OC1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、OC1-4亚烷基芳基、OC1-4亚烷基杂芳基、OC1-4亚烷基Het、OC1-4亚烷基N(Ra)2和N(Ra)C1-4亚烷基N(Ra)2。R3基团的具体的取代基包括但不限于Cl、F、CH3、CH(CH3)2、OH、OCH3、O(CH2)3N(CH3)2、OCH2C≡CH、OCH2C(＝O)NH2、C6H5、NO2、NH2、NHC(＝O)CH3、CO2H、N(CH3)CH2CH2N(CH3)2和
本文使用的喹唑啉环结构和环结构的编号为：
嘌呤环结构和环结构的编号为：
本发明提供的化合物的实例如下：
3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-吗啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-苄基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-吗啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮；
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮。
本发明提供的优选化合物具有结构(IV)，其实例如下：
3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-吗啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苄基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐；
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-苄基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-吗啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
通常为人们所接受的是，生物系统可能对化合物的绝对立体化学性质表现出非常敏感的活性(参见E.J.Ariens，Medicinal ResearchReviews，6：451-466(1986)；E.J.Ariens，Medicinal ResearchReviews，7：367-387(1987)；K.W.Fowler，Handbook ofStereoisomers：Therapeutic Drugs，CRC Press，Donald P.Smith编辑，pp.35-63(1989)；和S.C.Stinson，Chemical and EngineeringNews，75：38-70(1997))。
因此，本发明包括结构式(I)-(IV)化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体，不仅包括外消旋化合物，而且还包括旋光异构体。当希望结构式(I)-(IV)化合物是单一对映体时，其可通过将终产物拆分来获得，或者可通过由异构体纯的原料或使用手性辅助试剂立体有择合成来获得，例如参见Z.Ma等，Tetrahedron：Asymmetry，8(6)，p.883-888(1997)。终产物、中间体或原料的拆分可通过本领域已知的任意适当方法来实现。此外，当结构式(I)-(IV)化合物可能存在互变异构体时，本发明包括所有互变异构形式的这些化合物。特定的立体异构体表现出抑制PI3Kδ激酶活性的优良能力。
在本文中使用的术语“前药”是指在体内通过例如水解而迅速转化为上述具有结构式(I)化合物的化合物。在Hardma等编辑的Goodmanand Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，第11-16页(1996)中一般性地讨论了前药的设计。在Higuchi等的Prodrugs as Novel Delivery Systems，14卷，ASCD专题讨论会系列和在Roche编辑的Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press(1987)中提供了详尽的讨论。简言之，在给药后，接下来是从身体中排出或者发生一些生物转化，由此降低或消除了所述药物的生物活性。或者，生物转化过程会导致产生代谢副产物，后者与最初给予的药物相比具有更强的活性或具有等同的活性。对这些生物转化过程不断深入的理解产生了所谓的“前药”的设计，这种前药在生物转化后，在其改变的状态下变得更具生理学活性。因此，前药包括可转变为具有生物活性的代谢物的药学上无活性的化合物。
例如，通过例如前药的酯或酰胺键的水解，由此在所得的产物上引入或者暴露出其官能团，可将所述前药转化为其药学活性形式。可设计前药使其与内源性化合物反应形成水溶性共轭物，以进一步增强所述化合物的药理性质，例如延长循环半衰期。或者，可设计前药，用例如葡糖醛酸、硫酸酯、谷胱甘肽、氨基酸或者乙酸酯共价改性其官能团。所得共轭物可以是无活性的并从尿中排泄出，或者比母体化合物更有效。高分子量共轭物也可分泌到胆汁中，经历酶促裂解，并释放回到循环中，因而有效延长最初所施用的化合物的生物半衰期。
鉴定PI3Kδ活性的负调节剂的方法
在各种药物筛选技术的任一种中，可使用具有生物活性的PI3Kδ蛋白及其片段以筛选出假定的负调节剂化合物。PI3Kδ的负调节剂是降低或消除PI3Kδ发挥其任一生物功能的能力的化合物。这类化合物的一个实例是降低PI3Kδ多肽磷酸化磷脂酰肌醇或者标靶细胞内合适结构的能力的活性剂。通过将负调节PI3Kδ活性的化合物对PI3Kδ的活性与其对其它蛋白的活性进行比较，可评价该化合物的选择性。选择性负调节剂包括例如与PI3Kδ多肽特异性结合的抗体和其它蛋白或肽，与PI3Kδ多肽特异性结合的寡核苷酸，以及与PI3Kδ多肽特异性相互作用的其它非肽类化合物(例如分离或者合成的有机分子)。负调节剂还包括如上所述的，但与PI3Kδ多肽的特异性结合配偶体相互作用的化合物。
目前开发PI3Kδ的选择性负调节剂的优选靶点包括例如：
(1)接触其它蛋白和/或定位细胞内PI3Kδ的PI3Kδ多肽的胞质区；
(2)结合特异性结合的配偶体的PI3Kδ多肽区；
(3)结合底物的PI3Kδ多肽区；
(4)能够或者不能直接与调节信号的活性部位相互作用的PI3Kδ多肽的别构调节部位；
(5)介导多聚化的PI3Kδ多肽区。
例如，开发调节剂的一个靶点是已鉴定的p85与p110δ的调节相互作用，其能够参与p110δ部分的激活和/或亚细胞定位。而其它选择性调节剂包括那些识别特异性调节或编码PI3Kδ的核苷酸序列的物质。PI3Kδ活性调节剂可在医疗上用于治疗多种涉及异常PI3Kδ活性的疾病和生理病症。
因此，本发明提供了确定作为PI3Kδ多肽抑制剂的受试化合物的效力的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在受试化合物存在下测定PI3Kδ多肽的活性；(b)将在受试化合物存在下的PI3Kδ多肽活性与在等当量的参比化合物(例如本文描述的本发明PI3Kδ抑制剂化合物)存在下的PI3Kδ多肽活性进行比较，其中如果在受试化合物存在下的PI3Kδ多肽活性低于在参比化合物存在下的活性，则表明受试化合物是一种比参比化合物更有效的抑制剂，而如果在受试化合物存在下的PI3Kδ多肽活性高于在参比化合物存在下的活性，则表明受试化合物是比参比化合物效力小的抑制剂。
本发明还提供了确定作为PI3Kδ多肽抑制剂的受试化合物的效力的方法，所述方法包括以下步骤：(a)测定将PI3Kδ多肽活性抑制了某个参比抑制百分比时对照化合物(例如本文所描述的本发明PI3Kδ抑制剂化合物)的量，由此确定所述对照化合物的参比抑制量；(b)测定将PI3Kδ多肽活性抑制了某个参比抑制百分比时受试化合物的量，由此确定所述受试化合物的参比抑制量；(c)将所述受试化合物的参比抑制量与对照化合物的参比抑制量进行比较，其中如果所述受试化合物的参比抑制量低于对照化合物的参比抑制量，则表明受试化合物是一种比对照化合物更有效的抑制剂，而如果受试化合物的参比抑制量高于对照化合物的参比抑制量，则表明受试化合物是一种比对照化合物效力小的抑制剂。一方面，所述方法采用将PI3Kδ多肽活性抑制50％、60％、70％或80％时化合物的量作为参比抑制量。另一方面，所述方法采用将PI3Kδ多肽活性抑制90％、95％或99％时化合物的量作为参比抑制量。这些方法包括在体外生化试验、体外基于细胞的试验或者体内试验中测定所述化合物的参比抑制量。
本发明还提供了鉴定PI3Kδ活性的负调节剂的方法，所述方法包括以下步骤：(i)测定在和不在受试化合物存在下PI3Kδ多肽的活性，和(ii)确定降低PI3Kδ活性并且与结合于PI3Kδ的本发明化合物竞争的受试化合物为负调节剂。此外，本发明提供了鉴定抑制PI3Kδ活性的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在和不在受试化合物存在下使PI3Kδ多肽与本发明化合物接触，和(ii)确定与结合于PI3Kδ的本发明化合物竞争的受试化合物为PI3Kδ活性的负调节剂。因此本发明提供了筛选作为候选的PI3Kδ活性负调节剂和/或确认候选者例如负调节剂的作用模式的方法。对其它的PI3K同工型可以平行采用这样的方法，以确定受试化合物相对于这些同工型和/或相对于本发明化合物的比较活性。
在这些方法中，PI3Kδ多肽可以是呈现激酶活性的p110δ的片段，即包含p110δ的催化部位的片段。或者，PI3Kδ多肽可以是得自p85的p110δ-结合域的片段，并且提供鉴定PI3Kδ变构调节剂的方法。这些方法可用于内源性或外源性表达PI3Kδ或其亚单位的细胞。因此，在这类方法中所采用的多肽可以呈在溶液中的游离形式，固定于固体载体的形式，经过修饰而存在于细胞表面的形式或者定位于细胞内的形式。然后可测定在PI3Kδ多肽与受试药物之间的结合复合物的活性或者形成的调节作用。
按照本领域已知和常用的方法，人PI3K多肽可适合于生化或基于细胞的高流通量筛选试验(HTS)，包括研究受体-配体相互作用的黑色素细胞试验系统、基于酵母的试验系统和哺乳动物细胞表达系统。这方面的综述可参见Jayawickreme和Kost的Curr Opin Biotechnol，8：629-34(1997)。也可包括自动化和小型化的HTS试验，例如在Houston和Banks的Curr Opin Biotechnol，8：734-40(1997)中的描述的那些。
这样的HTS试验用于筛选化合物库以鉴定具有所需性质的特定化合物。可使用任何化合物库，包括化学品库、天然产物库和包含随机或设计的寡肽、寡核苷酸或其它有机化合物的组合库。
化学品库可包含已知化合物、已知化合物的专有结构类似物或者从天然产物筛选鉴定的化合物。
天然产物库是从天然来源，一般为微生物、动物、植物或海洋生物分离的物质的集合。通过微生物发酵，然后分离和提取发酵培养液，或者通过直接从微生物或组织(植物或动物)自身提取可将天然产物从它们的来源中分离出来。天然产物库包括聚酮化合物(polyketides)、非核糖体肽和它们的变体(包括非天然来源的变体)。综述可参见Cane等的Science，282：63-68(1998)。
组合库由大量相关化合物，例如肽、寡核苷酸或其它有机化合物的混合物组成。这样的化合物可相对直接地设计，并且可通过常规自动合成方法、PCR、克隆或专利合成方法制备。其中特别有用的是肽和寡核苷酸组合库。
而其它有用的库包括肽库、蛋白库、肽模拟物库(peptidomimetic)、多平行合成集合库、重组库和多肽库。关于组合化学和由此产生的库的综述可参见Myers的Curr Opin Biotechnol，8：701-07(1997)。
一旦确定化合物表现出作为PI3Kδ功能的负调节剂的活性，可进行优化程序以改进活性的效力和/或选择性。结构-活性关系(SAR)的分析一般包括化合物结构的选择性修饰和它们与生化或生物活性的关系的迭代系列。可设计出都表现出所要求活性的相关化合物的家族，其中该家族的某些成员，即具有适宜药理学特性的成员定性为潜在的治疗候选者。
PI3Kδ活性抑制剂的治疗用途
本发明提供了用于选择性或特异性地抑制PI3Kδ活性的治疗或预防方法。所述方法包括施用有效量的PI3Kδ活性的选择性或特异性抑制剂。该方法可用于治疗患有或可能会患有任何其症状或者病理由PI3Kδ表达或活性介导的的病症的人或动物。
本文所用“治疗”是指预防可以容易患上某种病症，但尚未诊断出患有该病症的动物患该病症；抑制病症，即阻止疾病的发展；缓解病症，即引起病症消退；或改善病症，即减少伴随病症的症状的严重程度。“疾病”意欲非限制性地包括医学上的病症、疾病、症状、综合征等。
本发明方法包括治疗动物个体，优选哺乳动物，更优选灵长目动物，仍更优选为人的各种方式。可被治疗的哺乳动物有例如陪伴性动物(宠物)，包括狗和猫；农业动物，包括牛、马、绵羊、猪和山羊；实验动物，包括大鼠、小鼠、兔子、豚鼠和非人灵长目以及动物园动物。非哺乳动物包括例如鸟类、鱼类、爬虫类和两栖动物。
在一方面，本发明的方法可用于治疗性或者预防性地治疗患有或者容易患上炎性病症的患者。本发明的一个方面是基于PI3Kδ参与炎症过程的介导方面。虽然不想受任何理论的束缚，但是据信由于炎症涉及一般由白细胞(例如嗜中性白细胞、淋巴细胞等)激活和趋化性迁移介导的过程，并且是由于PI3Kδ可介导这样的现象，因此PI3Kδ的拮抗剂可用于抑制与炎症有关的损伤。
本文所用的术语“炎性病症”是指其中过度或不受调节的炎性反应导致过度炎性症状、宿主组织损伤或组织功能丧失的任何疾病、病症或综合征。“炎性病症”还指由白细胞和/或嗜中性白细胞趋化性的流入介导的病理状态。
本文所用的“炎症”是指局部保护性反应，它是由组织损伤或破坏引起的，它可以破坏、稀释或隔绝(隔离)损伤因子和受损的组织。炎症显然与白细胞和/或嗜中性白细胞趋化性的流入相关。炎症可起因于被致病微生物和病毒感染，以及可起因于非感染性方式如创伤或者心肌梗塞或中风后的再灌注、对外部抗原的免疫反应和自身免疫反应。因此，适于本发明的炎性病症包括与特异性防御系统反应以及与非特异性防御系统反应有关的病症。
本文所用术语“特异性防御系统”是指与存在的特异性抗原反应的免疫系统的成分。源自特异性防御系统的炎症的实例包括对外部抗原、自身免疫疾病的一般反应，和T-细胞介导的迟发型过敏反应。慢性炎性疾病、实体移植的组织和器官例如肾和骨髓移植物的排斥和移植物对宿主反应疾病(GVHD)是特异性防御系统的炎性反应的其它实例。
本文所用术语“非特异性防御系统”是指由不能免疫记忆的白细胞(例如粒细胞和巨噬细胞)介导的炎性病症。源自(至少部分源自)非特异性防御系统反应的炎症的实例包括与以下症状有关的炎症：例如成人急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多发性器官损伤综合征；再灌注损伤；急性肾小球性肾炎；反应性关节炎；具有急性炎性成分的皮肤病；急性化脓性脑膜炎或其它的中枢神经系统炎性病症例如中风；热损伤；炎性肠病；粒细胞输血有关的综合征；及细胞因子诱导的毒性。
本文所用术语“自身免疫疾病”是指任何种类的其中组织损伤与对于身体自身成分的体液或细胞介导的反应有关的病症。本文所用术语“变应性疾病”是指由变态反应引起的任何症状、组织损伤或组织功能丧失。本文所用术语“关节疾病”是指特征在于各种病因引起的关节炎性损伤的任何疾病。本文所用术语“皮炎”是指特征在于各种病因引起的皮肤炎症的一大类任何皮肤疾病。本文所用术语“移植排斥”是指特征在于移植组织和周围组织功能丧失、疼痛、肿胀、白细胞增多和血小板减少的直接针对移植组织例如器官或细胞(例如骨髓)的任何免疫反应。
本发明的治疗方法包括治疗与炎性细胞激活有关的病症的方法。“炎性细胞激活”是指通过刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原或自身抗体)诱导的增殖性细胞反应，可溶解介体(包括但不限于细胞因子、氧自由基、酶、前列腺素类或血管活性胺)的产生，或者在炎性细胞(包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒细胞(即多形核白细胞如嗜中性白细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、肥大细胞、树突细胞、胰岛细胞和内皮细胞)中新的或数目增加的各种介体(包括但不限于大部分组织相容性抗原或细胞粘附分子)的细胞表面表达。本领域技术人员应该意识到在这些细胞中这些表型中的一种或者组合的激活能够导致炎性病症的引发、延续或加剧。
已发现本发明化合物可抑制嗜中性白细胞的超氧化物释放。嗜中性白细胞释放超氧化物以对各种刺激，包括感染信号中的任一种作出反应，作为细胞杀伤的机制。例如，已知超氧化物释放由肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导，当与细菌细胞壁成分如脂多糖(LPS)接触时，由巨噬细胞、肥大细胞和淋巴细胞释放TNFα。TNFα是炎性过程中一种常见的有效和混杂激活剂，参与嗜中性白细胞及各种其它的细胞类型的激活，诱导白细胞/内皮细胞粘附，发热，增强MHC I型的产生，以及刺激血管生成。或者，通过甲酰基-Met-Leu-Phe(fMLP)或者其它由甲酰化蛋氨酸在N-末端封端的肽类可刺激超氧化物的释放。通常在真核生物中没有发现这样的多肽，而基本上是细菌所特有的，并对免疫系统发出细菌存在信号。表达fMLP受体的白细胞例如嗜中性白细胞和巨噬细胞受到刺激，将这些多肽朝着感染区呈梯度迁移(即趋化性)。如本文所证实的，本发明化合物抑制由于嗜中性白细胞响应TNFα或fMLP而发生的受激超氧化物释放。还显示出本发明的PI3Kδ抑制剂可抑制嗜中性白细胞的其它功能，包括受激胞吐作用和所涉及的趋化性迁移。因此，可预期本发明化合物可用于治疗各种由这些嗜中性白细胞功能的任一种或者全部所介导的疾病例如炎性疾病。
本发明使治疗以下疾病的方法成为可能，这些疾病是：例如关节炎疾病，如类风湿性关节炎、单关节的关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎；贝切特氏病；脓毒症、脓毒性休克、内毒素休克、革兰氏阴性脓毒症、革兰氏阳性脓毒症和毒性休克综合征；多发性器官损伤综合征、继发性败血病、创伤或出血；眼科疾病如过敏性结膜炎、春季结膜炎、葡萄膜炎和与甲状腺有关的眼病；嗜酸性细胞肉芽肿；肺或呼吸病症如哮喘、慢性支气管炎、过敏性鼻炎、ARDS、慢性肺炎性疾病(如慢性阻塞性肺病)、矽肺、肺肉样瘤病、胸膜炎、牙槽炎、血管炎、肺气肿、肺炎、支气管扩张和肺氧毒性；心肌、脑或肢体的再灌注损伤；纤维变性如胆囊纤维变性；瘢痕瘤形成或瘢痕组织形成；动脉粥样硬化；自身免疫疾病如全身性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化、某些形式的糖尿病和Reynaud’s综合征；及移植排斥病症如GVHD和同种异体移植物排斥；慢性肾小球性肾炎；炎性肠病如慢性炎性肠病(CIBD)、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎和坏死性小肠结肠炎；炎性皮肤病如接触性皮炎、特应性皮炎、牛皮癣或寻麻疹；起因于感染的发热和肌痛；中枢或外周神经系统炎性病症如脑膜炎、脑炎、起因于较小创伤的脑或脊髓损伤；斯耶格伦氏综合征；涉及白细胞渗出的疾病；酒精性肝炎；细菌性肺炎；抗原-抗体复合物介导的疾病；低血容量休克；I型糖尿病；急性和迟发型过敏反应；起因于白细胞体液不调和转移的病症；热损伤；与粒细胞输注有关的综合征；以及细胞因子诱导的毒性。
所述方法可用于治疗患有或可能患有再灌注损伤，即再灌注前组织或器官经历的局部缺血阶段的状况而引起的损伤的个体。术语“局部缺血”指由于动脉血液内流的阻塞而造成的局部组织贫血。再灌注前的短暂性局部缺血的特征在于导致嗜中性白细胞激活和透过受影响区域的血管内皮的迁移。经激活的嗜中性白细胞的聚集依次导致活性氧代谢物的生成，这将损伤所涉及的组织或器官的成分。“再灌注损伤”现象通常与病症例如血管性中风(包括全身或局部缺血)、出血性休克、心肌缺血或心肌梗塞、器官移植和脑血管痉挛有关。例如，当心脏一旦无法接受到血液而开始再灌注时，再灌注在心脏旁路过程的结束或者心绞痛期间发生再灌注损伤。可预期抑制PI3Kδ的活性将导致在这样的情况下减少再灌注损伤的次数。
就神经系统而言，当血液停止流向整个脑部分一段时间，将发生全身缺血。全身缺血会导致心动停止。当脑的一部分缺乏正常的血液供给时，发生局部缺血。局部缺血可由于脑血管血栓性堵塞、创伤性头部损伤、水肿或脑瘤而发生。即使是短暂的，全身或局部缺血都会导致广泛的神经元损伤。尽管在缺血开始后数小时或甚至数天后才发生神经组织损伤，但是在血液开始停止流向大脑的数分钟内可能造成一些永久性的神经组织损伤。
在心脏中也会因心肌梗塞和其中因动脉粥样硬化、血栓形成或者痉挛而发生冠状动脉堵塞的其它心血管病症而发生局部缺血。因此，据信本发明可用于治疗心脏组织损伤，尤其是因心脏局部缺血造成的损坏或者由哺乳动物体内再灌注损伤引起的损伤。
另一方面，PI3Kδ活性的选择性抑制剂例如本发明化合物可用于治疗骨疾病的方法中，尤其治疗是其中破骨细胞功能异常或者不合乎需要的疾病的方法。如下面的实施例6中所示，本发明化合物在体外抑制破骨细胞的功能。因此，这类化合物和其它PI3Kδ选择性抑制剂可用于治疗骨质疏松症、Paget’s病和相关的骨再吸收病症。
另一方面，本发明包括采用PI3Kδ抑制剂化合物抑制血源癌细胞，优选淋巴源癌细胞，更优选与B淋巴细胞或者B淋巴细胞祖代相关或衍生自B淋巴细胞或者B淋巴细胞祖代的癌细胞的生长或增殖的方法。适合于采用本发明方法治疗的癌症包括但不限于淋巴瘤，例如淋巴样和网状内皮组织的恶性肿瘤，如Burkitt淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、成淋巴细胞淋巴瘤等；多发性骨髓瘤；以及白血病如淋巴细胞白血病、慢性骨髓性(骨髓内产生的)白血病等。在一个优选的实施方案中，PI3Kδ抑制剂化合物可用于抑制或者控制慢性骨髓性(骨髓内产生的)白血病细胞的生长或增殖。
另一方面，本发明包括抑制嗜碱性粒细胞和/或肥大细胞的功能的方法，因此使得可以治疗以过度或者不合乎需要的嗜碱性粒细胞和/或肥大细胞活性为特征的疾病或病症。按照本发明方法，可采用本发明化合物选择性地抑制在嗜碱性粒细胞和/或肥大细胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)的表达或活性。所述方法优选采用足以抑制嗜碱性粒细胞和/或肥大细胞的受激组胺释放的量的PI3Kδ抑制剂。因此，这类化合物和其它的PI3Kδ选择性抑制剂可用于治疗以组胺释放为特征的疾病，即包括如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、ARDS、肺气肿和相关疾病在内的变应性疾病。
PI3Kδ活性抑制剂的药物组合物
本发明化合物能够作为纯净的化学物质给药，但一般优选以药物组合物或者制剂的形式施用所述化合物。因此，本发明也提供了包含作为PI3Kδ活性调节剂的化学或生物化合物(“活性剂”)以及生物相容的药用载体、辅助剂或赋形剂的药物组合物。所述组合物可包含作为仅有的活性部分或者与其它活性剂例如寡核苷酸或多核苷酸、寡肽或多肽、药物或激素组合的本发明活性剂以及与其混和的赋形剂或其它可药用载体。只要载体和其它成分与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害，这可认为载体和其它成分是可药用的。
药物组合物的配制和给药技术可参见Remington’sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Co，Easton，PA，1990。本发明的药物组合物可采用任何常规方法制备，这些方法是例如混合、溶解、制粒、糖锭剂制备、研碎、乳化、包囊、包埋、熔纺、喷雾干燥或冷冻干燥方法。然而，依给药途径和所需剂量而定，本领域技术人员可确定最佳的药物制剂。这样的制剂可以影响所施用的活性剂的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。这些药物组合物可根据受治疗的病症进行配制，并采用全身或局部给药。
配制所述药物组合物，使得包含合适的可药用载体，并且可任选包含有利于将活性化合物加工成药学上可用的制剂的赋形剂和辅助剂。给药程式一般决定载体的性质。例如，胃肠外给药的制剂可以包含水溶形式的活性化合物的水溶液。适于胃肠外给药的载体可选自盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水和其它的生理上相容的溶液。用于胃肠外给药的优选载体为生理上相容的缓冲液，例如Hank’s溶液、林格溶液或生理缓冲盐水。对于组织或细胞给药，在所述制剂中可使用适于待穿透的具体屏障的渗透剂。这样的渗透剂通常是本领域已知的。对于包含蛋白的制剂，该制剂可包含稳定材料，例如多元醇(例如蔗糖)和/或表面活性剂(例如非离子表面活性剂)等。
或者，用于胃肠外给药的制剂可包含制成合适的油性注射悬浮液的活性化合物的分散液或悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油例如芝麻油，和合成脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯或脂质体。含水注射悬浮液可包含提高所述悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。悬浮液也任选包含合适的稳定剂或者可提高所述化合物的溶解度以制备高浓度溶液的物质。还可使用提供活性剂的pH-敏感性增溶和/或持续释放的含水聚合物作为包衣或基质结构物，例如异丁烯酸酯聚合物，如得自Rhm America Inc.(Piscataway，NJ)的EUDRAGJT系列。还可使用任选用乳化剂或分散剂(表面活性物质；表面活性剂)稳定的乳剂，如水包油和油包水分散液。悬浮液可包含悬浮剂例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇酯和缩水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、西黄蓍胶和它们的混合物。
胃肠外给药还可使用包含活性成分的脂质体。脂质体通常衍生自磷脂或其它的类脂物质。脂质体形式的组合物还可包含其它成分，例如稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的类脂包括天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法是本领域已知的。参见例如Prescott编辑的Methods in Cell Biology，第XIV卷，33页，AcademicPress，New York(1976)。
采用本领域众所周知的可药用载体可配制包含适于“服给药的剂量的活性剂的药物组合物。配制用于口服给药的制剂能够以片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、糖锭剂、锭剂、液体制剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、酏剂、悬浮液或粉剂的形式存在。例如，通过将活性化合物与固体赋形剂结合，任选将得到的混合物研磨，在加入合适的添加剂(如果需要)后，加工所得颗粒混合物，得到片剂或者糖锭剂的核芯部分，这样可以得到用于口服的药物制剂。口服制剂可使用类似于胃肠外用途所描述的类型的液体载体，例如缓冲水溶液、悬浮液等。
优选的口服制剂包括片剂、糖锭剂和明胶胶囊剂。这些制剂可包含一种或多种赋形剂，这些赋形剂包括但不限于：
a)稀释剂，例如糖，包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；
b)粘合剂，例如硅酸铝镁，得自玉米、小麦、大米、马铃薯等的淀粉；
c)纤维素物质，例如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、树胶例如阿拉伯胶和西黄蓍胶，以及蛋白例如明胶和胶原；
d)崩解剂或增溶剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、琼脂、藻酸或其盐例如藻酸钠或泡腾组合物；
e)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其镁或钙盐以及聚乙二醇；
f)矫味剂和甜味剂；
g)着色剂或颜料，例如其用来表明产物或表征活性化合物的量(剂量)；和
h)其它成分，例如防腐剂、稳定剂、膨胀剂、乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和缓冲剂。
明胶胶囊包括由明胶制成的推入配合型胶囊，以及由明胶和包衣材料例如甘油或山梨醇制成的软的、密封胶囊。推入配合型胶囊可包含与填充剂、粘合剂、润滑剂和/或稳定剂等混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮在合适的流体，例如脂肪油、液体石蜡、或者含有或不含有稳定剂的液体聚乙二醇中。
可给糖锭剂的核芯部分提供合适的包衣，例如浓缩的糖溶液，所述包衣还可以包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波谱凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。
药物组合物可以以活性剂的盐形式提供。盐往往比相应的游离酸或碱形式更易溶于水或者其它质子溶剂中。可药用盐是本领域众所周知的。包含酸性部分的化合物可以与合适的阳离子形成可药用盐。合适的可药用阳离子包括例如碱金属(例如钠或钾)和碱土金属(例如钙或镁)阳离子。
包含碱性部分的结构式(I)化合物可以与合适的酸形成可药用酸加成盐。例如，Berge等在J Pharm Sci，66：1(1977)中详细描述了可药用盐。在本发明化合物的最终分离和纯化期间可在原位制备这些盐，或者在独立的步骤中通过将游离碱官能团与合适的酸反应来制备这些盐。
代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(isothionate)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐或硫酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐或磷酸氢盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成可药用酸加成盐的酸的实例包括但不限于例如无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，和有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
如上所述，本文出现的任何提及本发明化合物均包括结构式(I)-(IV)化合物，以及它们的可药用盐、溶剂化物和前药。
在本发明化合物的最终分离和纯化期间可在就地制备碱加成盐，或者在独立的步骤中通过将含有羧酸的部分与合适的碱例如可药用金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐反应，或者与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备碱加成盐。可药用碱加成盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等的阳离子，和下列非毒性季铵和胺阳离子：包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、乙基铵、二乙基铵、三乙基铵等。用于形成碱加成盐的其它的代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。
用试剂例如下列试剂可将碱性含氮基团季铵化：低级烷基卤化物例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；长链烷基卤化物例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；芳基-烷基卤化物例如苄基和苯乙基溴化物等的试剂。由此得到具有改善的溶解性或分散性的产物。
可制得包含配制在可药用载体中的本发明化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并且贴上表明治疗所指定病症的标签。因此，本发明也涉及制造产品，例如包括本发明化合物的剂型和记载着化合物用途的说明的标签的容器。本发明也包括药盒。例如，药盒可包括药物组合物的剂型，以及记载着所述组合物在治疗医学病症中的用途的说明的包装插页(insert)。在任一种情况下，在标签上所指明的病症可包括治疗炎性病症、癌症等。
PI3Kδ活性抑制剂的给药方法
通过包括胃肠外和肠道技术在内的任何常规方法，可将包含PI3Kδ活性抑制剂的药物组合物施用给患者。胃肠外给药程式包括那些其中通过除胃肠道以外的途径施用组合物的方式，例如静脉内、动脉内、腹膜内、髓内、肌内、关节内、鞘内和脑室内注射。肠道给药程式包括例如口服(包括颊和舌下)和直肠给药。经上皮给药程式包括例如经粘膜给药和经皮给药。经粘膜给药包括例如肠道给药以及鼻、吸入和肺深部给药；阴道给药和直肠给药。经皮给药包括或被动或主动经皮或者经皮肤程式，包括例如贴剂和离子透入装置以及糊剂、油膏剂或软膏剂的局部施用。采用高压技术，例如POWDERJECT，也可完成胃肠外给药。
外科手术技术包括植入贮库(贮存库)组合物、渗透泵等。用于治疗炎症的优选给药途径可以是对例如关节炎这样的局部疾病定位或者局部给药，或者对扩散性疾病全身给药，例如静脉内给药用于再灌注损伤或用于全身疾病如败血症。对于其它的疾病，包括那些涉及呼吸道的疾病，例如慢性阻塞性肺病、哮喘和肺气肿，通过喷雾剂、气雾剂、粉末等吸入或肺深部给药可完成给药。
对于治疗肿瘤疾病，尤其是白血病和其它扩散性癌症，通常优选胃肠外给药。使所述化合物在胃肠外给药后能够最好地进行生物分布的化合物制剂是合乎需要的。可在化疗、放疗和/或手术之前、期间或者之后施用PI3Kδ抑制剂化合物。
另外，通过对所述化合物进行修饰或者衍生物化以靶向递送至表达鉴定这样细胞的标记物的癌细胞，可增加PI3Kδ抑制剂化合物的治疗指数。例如，可将所述化合物连接于可识别对癌细胞具有选择性或特异性的标记物的抗体上，这样如上所述(参见例如Pietersz等，Immunol Rev，129：57(1992)；Trail等，Science，261：212(1993)；和Rowlinson-Busza等，Curr Opin Oncol，4：1142(1992))，化合物通过连接在细胞的周围来局部发挥它们的作用。特别是通过使可由放疗或化疗引起的潜在的非特异性毒性最小化，使得这些化合物瞄准肿瘤传递的治疗效益得到增强。在另一方面，PI3Kδ抑制剂化合物和放射性同位素或化疗药物可缀合在相同的抗肿瘤抗体上。
为了治疗骨再吸收疾病或破骨细胞介导的疾病，可通过任何合适的方法递送PI3Kδ抑制剂。对局灶给药，例如通过关节内注射来对局灶给药将是理想的。在一些情况下，可按要求使化合物与能使化合物靶向骨的部分偶联。例如，可将PI3Kδ抑制剂与对羟基磷灰石—骨的主要成分具有高亲合性的化合物偶联。通过采用用来将雌激素靶向递送至骨所开发的四环素-偶联方法(Orme等，Bioorg Med Chem Lett，4(11)：1375-80(1994))可以完成这种偶联。
当在外周给药时，为有效地治疗调节中枢神经系统的靶点，在本发明方法中使用的药物应易于透过血脑屏障。然而，不能透过血脑屏障的化合物仍然能够通过静脉内途径有效给药。
如上所述，活性剂本身的特性和活性剂的制剂会影响所给予药物的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。通过临床前体外和体内研究(后者通过临床试验，在人体中的情况也得到证实)可收集到这样的药物动力学和药效信息。因此，对于在本发明方法中所用的任何化合物，可自生化和/或基于细胞的测定初步评价治疗有效量。然后，可在动物模型上计算剂量，以获得所需的调节PI3Kδ表达或活性的循环浓度范围。在进行人体研究时，将得到进一步的关于用于治疗多种疾病和症状的合适的剂量水平和持续时间的信息。
这样的化合物的毒性和治疗效果可以通过细胞培养或者实验动物标准药学方法测定，例如测定LD50(50％群体致死的剂量)和ED50(50％群体有效治疗的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率为“治疗指数”，该指数一般表示为LD50和ED50的比值。优选高治疗指数，即毒性剂量明显高于有效剂量的化合物。由这类细胞培养实验和其它动物研究得到的数据可用于计算用于人的剂量范围。这类化合物的剂量优选在包括几乎没有或者没有毒性的ED50的循环浓度范围内。
对于本发明的方法，可采用任何有效的规定给药时间和顺序的给药方案。活性剂的剂量优选包括含有有效量活性剂的药物剂量单位。本文所用的“有效量”是指通过施用一个或者多个药物剂量单位而足以调节PI3K(δ的表达或活性，和/或使得患者的生理参数发生可测定的变化的量。
对人类患者的示例性剂量水平为每公斤体重约0.001毫克(mg/kg)-约100mg/kg活性剂的数量级。通常，依适应症、给药途径等而定，活性剂的单位剂量为约0.01mg-约10,000mg，优选约0.1mg-约1,000mg。根据给药途径，可按照体重、身体表面积或器官大小计算出合适的剂量。考虑改善药物作用的多种因素，例如活性剂的具体活性、疾病状态的特性和严重性、患者的反应、患者的年龄、身体状况、体重、性别和饮食，任何感染的严重程度等，临床医师根据良好的医学实践应能确定最终的剂量方案。可考虑到的其它因素包括给药的时间和次数、药物的联用、反应敏感性以及疗法的耐受性/反应。尤其是按照所公开的剂量信息和试验、以及在人临床试验中所观察到的药物动力学数据，本领域技术人员可按常规进一步精确确定适于采用本文提及的任何制剂的治疗的剂量，而不须进行过多的实验。通过采用已建立的用于测定体内流体中的药物或其它样品的浓度的试验以及剂量反应的数据一起，可以确定合适的剂量。
给药次数将依药物的药物动力学参数和给药途径而定。调整剂量和给药以提供足够水平的活性部分或者维持要求的作用。因此，按照维持所需的最低水平的活性剂的要求，药物组合物可以以单一剂量、多个分开的剂量、连续输注、持续释放贮库或者它们的组合来给药。短效(即短的半衰期)药物组合物可每天给药一次或者每天给药一次以上(例如每天两、三或四次)。长效药物组合物可每3-4天、每周或者每两周给药一次。对持续输注来说，泵，例如皮下泵、腹膜内泵或者硬膜下泵可以是优选的。
提供以下实施例以进一步帮助理解本发明，预先假定在实施例中所涉及的本领域技术人员所众所周知的常规方法是能被理解的，这些方法是例如载体和质粒的构建，将基因编码的多肽插入到载体和质粒中，或者将载体和质粒引入到宿主细胞中。在以下多种出版物中详细描述了这些方法：包括例如Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)，Ausubel等(编辑)，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley & Sons，Inc.(1994)，以及Ausubel等(编辑)，Short Protocolsin Molecular Biology，第4版，John Wiley & Sohs，Inc.(1999)。以下所描述的具体物质和条件是用于举例说明本发明的具体方面，而不应解释为对它们合理范围的限制。
                          具体实施方式
                             实施例1
重组PI3Kα、β和δ的制备与纯化
采用BAC-TO-BACHT杆状病毒表达系统(GIBCO/BRL)，过量表达由p110催化亚单位和p85调节亚单位组成的重组PI3K异源二聚体复合物，然后经纯化用于生化试验。如下所述将四种I型PI 3-激酶克隆到杆状病毒载体中：
p110δ：采用标准重组DNA技术，将FLAG-标记形式的人p110δ(SEQID No.1)(参见Chantry等，J Biol Chem，272：19236-41(1997))亚克隆到昆虫细胞表达载体pFastbac HTb(Life Technologies，Gaithersburg，MD)的BamHl-Xbal部位上，使得克隆与载体的His尾端适配。FLAG系统描述在美国专利4703004、4782137、4851341和5011912中，并且可自Eastman Kodak Co.得到试剂。
p110α：与以上描述的用于p110δ的方法类似，FLAG-标记形式的p110α(参见Volinia等，Genomics，24(3)：427-477(1994))被亚克隆到pFastbac HTb(Life Technologies)的BamH1-HindIII部位上，使得克隆与载体的His尾端适配。
p110β：按照制造商的方案，采用以下引物，自人MARATHONReady脾cDNA库(Clontech，Palo Alto CA)扩增p110β(参见Hu等，Mol CellBiol，13：7677-88(1993))克隆：
5’-引物
5′-
GATCGAATTCGGCGCCACCATGGACTACAAGGACGACGATGACAAGTGCTTC
AGTTTCATAATGCCTCC-3′(SEQ ID NO：3)
3’引物
5′-GATCGCGGCCGCTTAAGATCTGTAGTCTTTCCGAACTGTGTG-3’
(SEQ ID NO：4)
构建包含与p110β序列适配的FLAG标记物的5’引物。扩增后，采用标准重组技术将FLAG-p110β序列亚克隆到pFastbac Hta(LifeTechnologies)的EcoR1-Not1部位上，使得克隆与载体的His尾端适配。
p110γ：按照制造商的方法，采用以下引物，自人Marathon Ready脾cDNA库(Clotech)扩增p110γ cDNA(参见Stoyahoy等，Science，269：690-93(1995))：
5’-引物
5′-AGAATGCGGCCGCATGGAGCTGGAGAACTATAAACAGCCC-3′(SEQ
ID NO：5)
3’-引物
5′-CGCGGATCCTTAGGCTGAATGTTTCTCTCCTTGTTTG-3′(SEQ ID
NO：6)
随后将FLAG标记物连接于p110γ序列的5’尾端，并且采用标准重组DNA技术使之克隆到pFastbac HTb(Life Technologies)的BamH1-Spe1部位上，FLAG-p110γ序列与载体的His尾端适配。
p85α：将FLAG-标记的p85 cDNA(参见Skolnik等，Cell，65：83-89(1991))的BamH1-EcoR1片段亚克隆到载体pFastbac dual(LifeTechnologies)的BamH1-EcoR1部位上。
采用制造商(Life Technologies)推荐的方案生成包含以上克隆的重组杆状病毒。将表达的His标记的p110α、p110β或p110δ催化亚单位和p85亚单位的杆状病毒共感染到Sf21昆虫细胞中。为使富含异源二聚体酶复合物，感染过量的表达p85亚单位的杆状病毒，在镍亲和柱上纯化与p85复合的His标记的p110催化亚单位。因为p110γ与p85无关，仅用表达His标记的p110γ的重组杆状病毒感染Sf21细胞。在另一个方法中，可将p101克隆到杆状病毒中，使之与其优选的结合配偶体p110γ共表达。
收获72小时转染后的Sf21细胞(3升)，并采用Dounce匀浆器在低渗缓冲液(20mM HEPES-KOH，pH7.8，5mM KCl，完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche Biochemicals，Indianapolis，IN)中匀浆化。在1,000xg下将匀浆离心15分钟。在10,000×g下将上清液进一步离心20分钟，随后在100,000×g下进行超速离心60分钟。将可溶性部分迅速装入10mL的HITRAP镍亲和柱(Pharmacia，Piscataway，NJ)上，用50mL的缓冲液A(50mM HEPES-KOH，pH7.8，0.5M NaCl，10mM咪唑)平衡。用缓冲液A彻底冲洗柱，并用线性梯度的10-500mM咪唑洗脱。冲洗步骤期间，自柱中排出游离的p85亚单位，而在250mM咪唑下仅洗脱出异源二聚体酶复合物。经10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析镍部分的等分试样，用SYPRORed(MolecularProbes，Inc.，Eugene，OR)染色，用STORMPhosphoImager(MolecularDynamics，Sunnyvale，CA)定量。将活性级份合并并直接装入用包含50mM HEPES-KOH，pH7.5，50mM NaCl，2mM二硫苏糖醇(DTT)的缓冲液B预先平衡的5mL高浓度(Hi-trap)肝素柱上。用50mM的缓冲液B冲洗柱，并用线性梯度的0.05-2M NaCl洗脱。在0.8M NaCl洗脱下，出现含有PI3K酶复合物的单峰。SDS-聚丙烯酰胺凝胶分析显示纯化后的PI3K酶部分包含1∶1化学计量的p110和p85亚单位的复合物。肝素层析期间酶复合物的蛋白质分布与脂激酶活性的蛋白质分布相对应。收集活性级份并在液氮下冷冻。
                            实施例2
PI3Kδ高流通量筛选(HTS)和选择性试验
进行专有化合品库的高流通量筛选以确定PI3Kδ活性的候选抑制剂。PI3Kδ在PIP2脂肌醇环的D3’位催化将γ-[32P]ATP磷酸转化为PIP2/PS脂质体。该反应依赖MgCl2，且在包含30mM EDTA的高体积摩尔浓度的磷酸钾缓冲液(pH8.0)中猝灭。在筛选中，在库化合物的存在或者不存在下进行该反应。将反应产物(和所有未标记的产物)转移至96孔的预先润湿的PVDF滤板中，过滤，并以高体积摩尔浓度的磷酸钾冲洗。将闪烁液加入到干燥的孔中，并且将掺合后的放射性定量。
采用BIOMEK1000机器人工作站(Beckman)进行大部分试验操作，并且采用Wallac液体闪烁板计数方法对所有的板读数。
制备底物和酶的3×试验储备液，并在储液槽(trough)(用于机器人测定)或96孔的、V形底的聚丙烯板(用于人工测定)中储存。在室温下将试剂稳定至少3小时。
HTS的3×底物包含0.6mM Na2ATP、0.10mCi/mLγ-[32P]ATP(NEN，Pittsburgh，PA)、6μM PIP2/PS脂质体(Avanti Polar Lipids，Inc.，Atlanta，GA)在20mM HEPES中的溶液(pH7.4)。
HTS的3×酶储备液包含1.8nM PI3Kδ、150μg/mL马IgG(仅用作稳定剂)、15mM MgCl2、3mM DTT在20mM HEPES中的溶液(pH7.4)。
将在二甲亚砜(DMSO)中的化学高流通量筛选(HTS)库样品(每个含有22个化合物的集合体)用二次蒸馏水稀释至18.75μM或者37.8μM，将20μL的稀释液放入到测定用的96孔聚丙烯板的孔中。阴性抑制剂对照组(或者阳性酶对照组)为用水稀释的DMSO，阳性抑制剂对照组使用的LY294002的浓度足以提供50％和100％抑制作用。
向20μL合并的化合品库稀释液中加入20μL的3×底物。用20μL的3X酶启动反应，于室温中培养10分钟。该稀释液在反应体积中得到的最终浓度为200μM ATP。用150μL猝灭缓冲液(1.0M磷酸钾(pH8.0)，30mM EDTA)终止反应。然后将所猝灭的溶液(180μL)的一部分转移至PVDF滤板(Millipore#MAIP NOB，连续用200μL 100％甲醇洗液、水，最后用1.0M磷酸钾(pH8.0)洗涤缓冲液预先润湿)。
在中等真空(2-5mmHg)下，将PVDF滤板吸出，用5×200μL的洗涤缓冲液冲洗，然后通过吸出干燥。随后将滤膜印迹，使之完全空气干燥，并插入Wallac计数盒，向每孔加入50μL的Ecoscint闪烁混合物。将掺入的放射性定量，分析数据，使酶阳性对照组归一化后(在100％下设置)，确定在50％抑制率值下的曲线交叉点，以评价抑制剂的IC50值。
基于在测试浓度下的＜42％残余活性，并且总的接受命中率不超过0.2％的联合标准，选择总共57个合并的主孔用于去卷积法(deconvolution)。在每孔22个化合物下，总共1254个化合物通过该去卷积法鉴定，并且各自在27.7μM的1×浓度下试验以鉴定哪一个化合物呈现要求的活性。从这些试验，选择73个化合物并进一步测定以建立IC50曲线。根据IC50曲线结果，选择34个化合物用于对PI3Kα和PI3Kβ(参见实施例11的试验方案)的选择性试验。
从选择性试验中，选取一个化合物3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(化合物D-000)作为相对有效和选择性化合物。对具有有效和/或选择性的许多类似的化合物的目录搜寻和选择性试验仅得到一个化合物，其为D-000的活性和选择性类似物。这个化合物购自Contract Services Corporation(目录号#7232154)，与D-000的不同之处在于用苯基代替D-000的2-氯苯基。
如上所述，PI 3-激酶抑制剂LY294002(Calbiochem，La Jolla，CA)在不同的受试PI 3-激酶同工型中不具有明显的选择性。在我们的试验条件下，LY294002抑制PI3-激酶所有的三种同工型，具有0.3-1μM的IC50。然而，当化合物D-000对相同的PI 3-激酶同工型试验时，观察到截然不同的选择性。具体地说，如在图1中显示的那样，D-000抑制PI3K的δ同工型的活性，具有约0.3μM的IC50，而在类似的条件下，于100μM化合物的限值下它也不抑制α和β同工型的活性。这些结果表明D-000选择性地抑制PI3Kδ活性。
                      实施例3-7
由于PI3Kδ仅在白细胞中才有明显的表达，因此研究PI3Kδ-选择性抑制剂对白细胞功能的作用是重要的。为此，检测在几种类型的白细胞中对PI3Kδ抑制作用的效果。检测嗜中性白细胞以测定对PI3Kδ选择性抑制作用所得的效果(实施例3，如下)。意外地发现选择性地抑制PI3Kδ活性似乎与抑制激活的嗜中性白细胞的一些但非全部的功能特征有明显的关系。另外，还测试了PI3Kδ抑制对B细胞和T细胞功能的作用(实施例4-5，如下)。此外，由于PI3Kδ也在破骨细胞中表达，因此还研究了PI3Kδ抑制对这些具体的细胞的功能的影响(实施例6，如下)。
                             实施例3
PI3Kδ在嗜中性白细胞功能中的作用的鉴定
测试本发明PI3Kδ抑制剂即D-000对嗜中性白细胞功能，例如超氧化物生成、弹性蛋白酶胞吐作用、趋化性和细菌杀伤的作用。
A. 自人血制备嗜中性白细胞
将得自健康志愿者的肝素化血液的等分试样(8mL)铺展在7.3％FICOLL(Sigma，St.Louis，MO)和15.4％HYPAQUE(Sigma)的3mL垫上，在室温下，在台式顶离心器(Beckman)中，于900rpm下离心30分钟。收集刚好位于FICOLL-HYPAQUE垫上的嗜中性白细胞富集的带，并用含有0.1％明胶的Hank平衡盐溶液(HBSS)冲洗。用0.2％NaCl通过低渗性溶胞作用除去残余的红细胞。用含有0.1％明胶的HBSS洗涤所述嗜中性白细胞制剂两次并立即使用。
B. 嗜中性白细胞的超氧化物产生的测定
超氧化物生成是嗜中性白细胞激活的一个证明。各种激活剂加强通过嗜中性白细胞的超氧化物生成。通过三种不同的激动剂：TNF1α、IgG和fMLP，每种代表各自类型的激活剂，可测定PI3Kδ抑制剂D-000对超氧化物生成的作用。通过下面的修改的Green等(在增刊第12期中14.5.1-14.5.11，Curr Protocols Immunol(Colligan等编辑)(1994))描述的方法，通过监测细胞色素C减少的情况下吸收的变化，可测定由嗜中性白细胞的超氧化物生成。在4℃下，用50μL的2mg/mL人纤维蛋白原或IgG的溶液将96孔板的各个孔覆盖过夜。用PBS洗涤这些孔，随后向每孔加入以下试剂：50μL的HBSS或超氧化物歧化酶(1mg/mL)、50μL的HBSS或TNF1α(50ng/mL)、50μL细胞色素C(2.7mg/mL)及100μL的经纯化的人嗜中性白细胞悬浮液(2×106个细胞/mL)。在200rpm下将平板离心2分钟，且于550nm监测吸收2小时。为测定所生成的超氧化物的相对量，将得自全部孔的值减去含超氧化物歧化酶的孔得到的值，并与不含有任何抑制剂的孔得到的值进行归一化。
如附图2所示，PI3Kδ抑制剂D-000对由TNF诱导的嗜中性白细胞的超氧化物生成的抑制作用按浓度依赖的方式进行。在约3μM D-000下，经TNF诱导的超氧化物生成减少至其最大值的一半。附图2也揭示D-000并不明显抑制经IgG诱导的超氧化物生成。事实上，即使在10μM下，这种PI3Kδ抑制剂对IgG诱导的超氧化物生成也不具有任何作用。
其次，研究了D-000对经另一种有效的诱导剂，细菌肽(即甲酰化的Met-Leu-Phe(fMLP))诱导的超氧化物生成的作用。与TNF诱导的超氧化物生成一样，D-000也抑制fMLP诱导的超氧化物生成(附图3)。这些结果显示PI3Kδ抑制剂D-000能够阻止刺激物特异性诱导的嗜中性白细胞的超氧化物生成，表明PI3Kδ参与了这个过程。
C. 嗜中性白细胞的弹性蛋白酶胞吐作用的测定
除超氧化物生成以外，激活的嗜中性白细胞也通过在炎症期间担负破坏组织和软骨的几种蛋白酶的释放来作出响应。可测定D-000对弹性蛋白酶胞吐作用的作用来作为蛋白酶释放的证明。通过下面由Ossanna等(J Clin Invest，77：1939-1951(1986))描述的方法的改进，可定量测定弹性蛋白酶胞吐作用。在96孔板中，于37℃下用在含0.01mg/mL细胞分裂抑素B、1.0μM叠氮化钠(NaN3)、5μg/mL L-甲硫氨酸和1μM fMLP的PBS中的fMLP刺激经纯化的人嗜中性白细胞(0.2×106)(用DMSO或者D-000在DMSO中系列稀释液处理)90分钟。在培养阶段结束时，于1000rpm下将板离心5分钟，并将90μL的上清液转移至10μL的10mM弹性蛋白酶底物肽，MeO-suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA的溶液中，其中MeO-suc＝甲氧基-琥珀酰基；pNA＝对硝基N-酰苯胺(Calbiochem，San Diego，CA)。在96孔板读数器中监测410nm下的吸收2小时。为测定弹性蛋白酶胞吐作用的相对量，将所有吸收值对不含任何抑制剂的值进行归一化。如在附图4中显示的，PI3Kδ抑制剂D-000明显抑制fMLP诱导的弹性蛋白酶胞吐作用，并且以剂量依赖方式进行。抑制作用为在约2-3μM D-000的浓度下的最大值的一半。
D. fMLP诱导的人嗜中性白细胞迁移的测定
嗜中性白细胞具有通过组织迁移的特性，并且是首先到达炎症或组织损伤部位的细胞类型之一。测定D-000对嗜中性白细胞向fMLP的浓度梯度迁移的作用。迁移试验进行的前一天，用重组的ICAM-1/Fc融合蛋白(Van der Vieren等，Immunity，3：683-690(1995))(25μg/mL碳酸氢盐缓冲液，pH9.3)将6孔板覆盖，并且于4℃下放置过夜。冲洗后，将1％琼脂糖在含有0.5％牛血清白蛋白(BSA)的RPMI-1640的溶液中加入到含有或不含有抑制剂的孔中，将这些板放入到冰箱中，接着在凝胶化的琼脂糖上冲压孔以得到斑(每孔含有1个被6个外周孔围绕的中心孔)。
如以上描述的那样得到人嗜中性白细胞，并再悬浮于RPMI培养基中，用0.5％的BSA补充，浓度为5×106细胞/mL。在将等体积的嗜中性白细胞悬浮液和培养基(用DMSO或者用受试化合物在DMSO中的一系列稀释液)合并后，取嗜中性白细胞等分试样到外周的孔中，而中心孔则加入fMLP(5μM)。在5％CO2存在下，将板于37℃下培养4小时，随后通过加入1％戊二醛在D-PBS中的溶液终止迁移。除去琼脂糖层以后，用蒸馏水冲洗这些孔并干燥。
在Nikon DIAPHOT反相显微镜(1×物镜)视频工作站上采用NIH1.61程序进行嗜中性白细胞迁移的分析。采用Microsoft Excel和Table Curve 4(SSPS，Chicago IL)程序，可得到每一种研究条件下的迁移指数。迁移指数被定义为表示迁移的嗜中性白细胞的数目对每个细胞迁移的净距离所作的曲线下面积。
如附图5中所示，PI3Kδ抑制剂D-000对嗜中性白细胞迁移具有极大的作用，对这一活性的抑制是以剂量依赖的形式进行的。在该试验中这种化合物抑制嗜中性白细胞迁移的EC50为约1μM。基于在这个试验中细胞的可记录途径的目视检验，似乎所述受试化合物并不明显影响嗜中性白细胞的总途径长度。相对而言，所述化合物影响嗜中性白细胞取向或者方向感觉，这样不是沿着化学引诱物梯度的轴向迁移，而是细胞以不定向的或者较小定向的方式迁移。
E. 嗜中性白细胞的杀菌能力的测定
已知PI3Kδ抑制剂D-000影响以上详细描述的某些嗜中性白细胞功能，观察化合物是否影响嗜中性白细胞介导的细菌杀伤也是重要的。按照Clark和Nauseef(第7.23.4-7.23.6页，第2卷，增刊6，CurrProtocol Immunol(Colligan等编辑)(1994))描述的方法，研究D-000对嗜中性白细胞介导的金黄色葡萄球菌(Staphylocouus aureus)杀伤的作用。将经纯化的人嗜中性白细胞(5×106个细胞/mL)(用DMSO或者D-000在DMSO中的一系列稀释液处理)与自体的血清混合。洗涤过夜生长的金黄色葡萄球菌细胞，重新悬浮于HBSS中，并加入到10∶1比例的血清-经调理的嗜中性白细胞中。通过于37℃下培养20分钟，使嗜中性白细胞经吞噬作用将细菌内在化。在37℃下，由10单位/mL的溶葡萄球菌素把非内在化的细菌杀伤5分钟，并于37℃下旋转全部混合物。在最长达90分钟的各个时间点下，取出样品并通过用水稀释将嗜中性白细胞溶胞。通过在类胰蛋白酶-大豆-琼脂板上铺制合适的稀释液并对过夜生长后把金黄色葡萄球菌克隆计数，可计数出活细胞菌。
如附图6所示，嗜中性白细胞介导的金黄色葡萄球菌杀伤在用DMSO(对照组)和用D-000处理的样品中相类似。这些结果表明PI3Kδ抑制剂并不显著影响嗜中性白细胞杀伤金黄色葡萄球菌的能力，这意味着PI3Kδ没有参与嗜中性白细胞的这一项功能。
                            实施例4
PI3Kδ在B淋巴细胞功能中的作用的鉴定
还研究了PI 3-激酶抑制剂对B细胞功能，包括经典诱导(例如抗体产生)和特异性刺激物-诱导增殖的作用。
A. 得自外周人血的B细胞的制备和刺激
将得自健康志愿者的肝素化血(200mL)与等体积的D-PBS混合，铺展在10×10mL FICOLL-PAQUE(Pharmacia)上，在室温下，在1600rpm下离心30分钟。自FICOLL/血清界面收集外周血单核细胞(PBMC)，铺展在10mL胎牛血清(FBS)上，在800rpm下离心10分钟以除去血小板。冲洗后，于4-8℃使细胞与DYNAL抗体Mix(B细胞盒)(DynalCorp.，Lake Success，NY)一起培养20分钟。除去未结合的抗体后，于4-8℃使PBL与抗-小鼠IgG包衣的磁珠(Dynal)在温和的振摇下混合20分钟，随后消除在磁珠分离器上已标记的非-B细胞。再重复该方法一次。将B细胞重悬浮于含有10％FBS的RPMI-1640中，保存在冰上直到下一次使用。
B. 通过人B细胞的抗体产生的测定
为研究抗体产生，将B细胞以50-75×103个细胞/孔的量分配到96孔板的各含有或不含有抑制剂的孔中，向其中加入IL-2(100U/mL)和PANSORBIN(Calbiochem)金黄色葡萄球菌细胞(1∶90,000)。24-36小时后，撤除部分培养基，加入新鲜的培养基(含有或不含有抑制剂)和IL-2。在CO2培养器中于37℃将培养基再培养7天。在每种条件下取样品(重复三次)，按ELISA的测定分析IgG和IgM。简言之，用在碳酸氢盐缓冲液中的150ng/mL驴抗人IgG(H+L)(JacksonImmunoResearch，West Grove PA)或2μg/mL驴抗人IgG+IgM(H+L)(Jackson ImmunoResearch)将IMMULON4 96-孔板包被(50μL/孔)，于4℃放置过夜。在用含有0.1％TWEEN-80(PBST)磷酸缓冲液盐水冲洗(350μL/孔)3次后，在室温下用在PBST(100μL/孔)中的3％羊血清阻断1小时，加入在PBST中稀释的B细胞的废弃培养液的样品(100μL/孔)。对IgG板的稀释范围是1∶500-1∶10000，对IgM板的稀释范围是1∶50-1∶1000。1小时后，将板暴露于生物素结合的抗人IgG(100ng/mL)或者抗人IgM(200ng/mL)(Jackson ImmunoResearch)30分钟，随后暴露于链霉抗生物素蛋白-HRP(1∶20000)中30分钟，最后，在含有H2O2(1∶10000)的TMB溶液(1∶100)中暴露5分钟，各步骤之间用PBST冲洗3次。通过H2SO4溶液终止显色，在ELISA板读数器上读取板。
如附图7所示，D-000明显抑制抗体的产生。对IgM产生的影响多于对IgG产生的影响：在约1μM下观察到对IgM产生的一半最大抑制，而对IgG产生的相同程度抑制作用需约7μM。
C. 对细胞表面IgM刺激响应的B细胞增殖的测定
在以上实验中，采用PANSORBIN刺激B细胞。还测定了当采用抗-IgM抗体通过B细胞的表面IgM刺激这些细胞时，D-000对B细胞增殖响应的影响。将鼠脾细胞(Balb/c)以每孔2×105个细胞的量放入到在含有10％FBS/RPMI的96孔微量滴定板的每个孔中。将在完全培养基中适当稀释的受试抑制剂加入到细胞中，并在加入刺激物前把板预培养30-60分钟。用受试抑制剂预培养后，将对小鼠IgM的μ-链具有特异性的山羊抗体的F(ab’)2制备液加入到这些孔中，使得最终浓度为25μg/mL。将板于37℃下培养3天，并于最后4小时培养期内将1μCi的[3H]-胸苷加入到每孔中。将板收获到经冲洗的纤维滤膜上，采用β计数器(Matrix 96，Packard Instrument Co.，Downers Grove，IL)测定放射标记物的掺入，并以每分钟的读数(CPM)表示。
附图8显示了D-000对抗-IgM刺激的B细胞增殖的作用。该化合物以剂量-依赖形式抑制抗-IgM刺激的B细胞增殖。在约1μM下，增殖减至其最大值的一半。
因为化合物D-000抑制B细胞增殖，所以预计这个化合物和其它PI3Kδ抑制剂能够抑制临床环境中不合乎需要的B细胞增殖。例如，在B细胞恶性肿瘤中，分化的各种阶段的B细胞显示出不受调节的增殖。基于以上显示的结果，可推断PI3Kδ选择性抑制剂能够用来控制、限制或者抑制这类细胞的生长。
                            实施例5
PI3Kδ在T淋巴细胞功能中的作用的鉴定
可测定对CD3+CD28共同刺激产生反应的T细胞增殖。按照制造商的方案(Dynal)，采用抗体包衣的磁珠，通过负选择作用将来自健康人血的T细胞纯化，并再悬浮于RPMI中。用DMSO或者D-000在DMSO中的一系列稀释液处理细胞，并以1×105个细胞/孔的量铺展在预先用山羊抗小鼠IgG覆盖的96孔板上。然后分别以0.2ng/mL和0.2μg/mL的量将小鼠单克隆抗-CD3和抗-CD28抗体加入到每孔中。将板于37℃下培养24小时，并加入[3H]-胸苷(1μCi/孔)。再培养18小时后，用自动化细胞收集器收获细胞，冲洗并定量测定掺入的放射活性。
尽管PI3Kδ抑制剂D-000抑制抗-CD3-和抗-CD28诱导的T细胞增殖，其作用并不像其对B细胞或者对嗜中性白细胞的一些作用那样强。在最高受试浓度即10μM的D-000下，未达到胸苷掺入的一半最大抑制。
                             实施例6
PI3Kδ在破骨细胞功能中的作用的鉴定
为分析PI3Kδ抑制剂D-000对破骨细胞的作用，分离小鼠骨髓细胞，并在含有血清的培养基(含有10％热灭活的FBS的αMEM；Sigma)中，通过用巨噬细胞集落刺激因子-1(mCSF-1)和破骨细胞配体(OPGL)处理细胞3天，将它们分化为破骨细胞。在第4天，当破骨细胞发育时，撤除培养基并收获细胞。将破骨细胞以105个细胞/孔的量铺于生长培养基(即包含1％血清和含有55μg/mL OPGL和10ng/mL mCSF-1的2％BSA的αMEM)中的牙质条上。3小时后，将培养基更换为1％血清和含有或不含有骨桥蛋白(25μg/mL)及PI3K抑制剂(100nM)的1％BSA。每24小时用新鲜的骨桥蛋白和抑制剂把培养基更换一次。在72小时，撤除培养基，用水冲洗牙质表面以除去细胞碎片并用酸性苏木精染色。冲洗过量的染色并且采用聚焦显微镜定量测定纹孔深度。
如表1所示，在两个实验中，PI 3-激酶抑制剂对破骨细胞功能具有抑制作用。非特异性抑制剂LY294002和渥曼青霉素两者均抑制破骨细胞活性。然而，PI3Kδ抑制剂D-000具有最大的作用，因为在100nM下这种化合物几乎完全抑制破骨细胞活性。
                              表1
  破骨蛋白(OPN) D-000+OPN     LY294002+OPN    渥曼青霉素+OPN
    10±0.5     1     4.6±0.22     5.7±0.6
    9±0.4     1     5.8±0.5     5±0.5
                             实施例7
PI3Kδ在嗜碱性粒细胞功能中的作用的鉴定
采用常规组胺释放试验(主要按照Miura等在J Immunol，162：4198-206(1999)中描述的方法)可对本发明化合物对嗜碱性粒细胞功能的作用进行测试评价。简言之，37℃下，用0.1nM-1,000nM范围内的几种浓度的受试化合物将富集的嗜碱性粒细胞预培养10分钟。然后，加入多克隆羊抗人IgE(0.1μg/mL)或fMLP，再培养30分钟。采用自动化荧光技术测定释放到上清液中的组胺。测定如下所示的两种化合物：
Figure A0282568700831
Figure A0282568700841
当用抗-IgE刺激嗜碱性粒细胞时，观察到3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-026)以剂量-依赖的形式抑制组胺的释放。在1,000nM下组胺释放的抑制基本上为100％，具有约25nM的EC50。其中嘌呤环结构重排的另一种化合物3-(2-氯苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]-嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-999)在抑制组胺释放中的效力较低。当用fMLP刺激嗜碱性粒细胞时，两种化合物均不产生任何作用。为了比较，在0.1nM和10,000nM下试验非选择性PI3K抑制剂LY294002，在最高浓度下显示几乎达到100％的抑制组胺释放。
这些数据表明PI 3-激酶δ活性抑制剂能够用于抑制组胺释放，组胺为过敏反应的介体之一。因为在许多细胞类型中需要各种PI 3-激酶的活性以用于蛋白运输、分泌和胞吐作用，以上数据表明也可通过PI 3-激酶δ选择性抑制剂干扰经其它细胞如肥大细胞的组胺释放。
                    化学合成实施例
以下提供本发明化合物的具体非限定性实施例。本领域技术人员应理解的是，在必要时可按照合成化学的一般原理采用保护基。在合成的最后步骤，在本领域技术人员显而易见的碱性、酸性或氢解条件下，可除去这些保护基。通过适当地利用和保护任何化学官能团，在本文中没有具体描述的结构式(I)化合物的合成可通过与以下描述的方案类似的方法来实现。
除非另外指明，否则所有的原料均得自商品供应商且无须进一步纯化即可使用。所有反应和色谱法级份都是通过在250mm硅胶板上的薄层色谱法(TLC)进行分析，用紫外(UV)光显色或碘(I2)染色。通过快速色谱法或反相高效液相色谱法纯化产物和中间体。
以下缩写用于合成实施例中：aq(含水的)、H2O(水)、CHCl3(氯仿)、HCl(盐酸)、MeOH(甲醇)、NaOH(氢氧化钠)、NaOMe(甲醇钠)、TFA(三氟乙酸)、K2CO3(碳酸钾)、SOCl2(亚硫酰氯)、CH2Cl2(二氯甲烷)、EtOAc(乙酸乙酯)、DMF(二甲基甲酰胺)、EtOH(乙醇)、DMSO(二甲亚砜)、NaHCO3(碳酸氢钠)、TLC(薄层色谱法)、HPLC(高效液相色谱法)、HOBT(羟基苯并三唑)、EDC(乙基二乙氨基丙基碳化二亚胺)、DIEA(二异丙基乙胺)和HOAc(乙酸)。
I. 一般方法
方法A
将亚硫酰氯加入到邻氨基苯甲酸或苯甲酸在苯内的快速搅拌着的溶液中，并在回流条件下将混合物搅拌5-18小时。将该反应真空浓缩，用苯汽提两次。把生成的油状物溶于CHCl3中，并向该溶液中加入合适的苯胺。将该反应混合物加热至回流，并搅拌直至反应完全(通过TLC确定)，此时，把反应混合物冷却至室温。经过滤除去沉淀，将滤液真空浓缩。通过色谱法和/或从MeOH中重结晶来纯化粗产物，得到酰胺1a-1r。
方法B
向酰胺在冰醋酸内的快速搅拌着的悬浮液中加入氯乙酰氯。将该反应混合物加热至120℃，并让其在该温度下搅拌直至反应完全(通过TLC确定)。短暂冷却后，将该反应混合物真空浓缩。经萃取、色谱法和/或重结晶纯化粗品残余物，得到氯化物2a-2r。
方法C
在室温下，将氯化物、氮或硫亲核试剂例如巯基嘌呤一水合物或腺嘌呤与K2CO3在DMF中的混合物搅拌15-72小时。把所得悬浮液倒入水中，并在4℃下保持几小时。过滤固体粗产物，用水洗涤，通过色谱法或重结晶纯化，得到终产物。
                       实施例8
制备中间体化合物：酰胺
2-氨基-N-(2-氯苯基)-4，5-二甲氧基苯甲酰胺(1a)
按照方法A，使用在苯(100mL)中的4，5-二甲氧基邻氨基苯甲酸(5.0g，25.4mmol)和SOCl2(5.5mL，76.1mmol)，然后使用2-氯苯胺(6.7mL，63.5mmol)和CHCl3(75mL)进行制备。将产物用NaHCO3水溶液(2×25mL)和HCl(0.5M，75mL)洗涤，在CH2Cl2中色谱纯化，获得了4.3g棕色泡沫状物(55％)。
                  1H NMR(CDCl3)δ：8.42(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)；8.32(br s，1H)；7.40(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.31(dt，J＝1.4，7.9Hz，1H)；7.05(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；7.03(s，1H)；6.24(s，1H)；3.88(s，3H)；3.87(s，3H).MS(ES)：m/z307.0(M+).
2-氨基-5-溴-N-(2-氯苯基)苯甲酰胺(1b)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-5-溴苯甲酸(5.0g，23.1mmol)和SOCl2(7.0mL，95.9mmol)，然后使用2-氯苯胺(7.3mL，69.3mmol)和CHCl3(50mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中进行两次色谱纯化，获得了1.48g橙黄色固体(20％)。
                       1H NMR(CDCl3)δ：8.36(dd，J＝1.2，8.2Hz，1H)；8.20(br s，1H)；7.62(d，J＝2.1Hz，1H)；7.42(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；7.34(dd，J＝2.2，8.8Hz，1H)；7.28-7.33(m，1H)；7.09(dt，J＝1.4，7.7Hz，1H)；6.62(d，J＝8.7Hz，1H)；5.57(br s，2H).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-4-氟苯甲酰胺(1c)
按照方法A，使用在苯(25mL)中的2-氨基-4-氟苯甲酸(1.15g，7.41mmol)和SOCl2(1.4mL，18.5mmol)，然后使用2-氯苯胺(1.6mL，14.8mmol)和CHCl3(25mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，然后与己烷一起研磨，获得了1.02g灰白色固体(52％)。
                           1H NMR(CDCl3)δ：12.91(br s，1H)；8.72(dd，J＝2.7，12Hz，1H)；8.34(dd，J＝6.4，9.2Hz，1H)；8.29(dd，J＝5.9，8.8Hz，1H)；7.81(dd，J＝6.2，8.8Hz，1H)；7.28(dt，J＝2.4，8.4Hz，1H)；7.21(dd，J＝2.4，9.0Hz，1H)；6.92(ddd，J＝2.4，7.3，9.1Hz，1H)；6.54(ddd，J＝2.4，7.8，8.8Hz，1H)；6.45(dd，J＝2.4，11Hz，1H)；5.93(br s，2H).MS(ES)：m/z 265.0(M+).
2-氨基-5-氯-N-(2-氯苯基)苯甲酰胺(1d)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-5-氯苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.2mL，29.2mmol)，然后使用2-氯苯胺(2.5mL，23.3mmol)和CHCl3(50mL)进行制备。通过从MeOH中重结晶来纯化产物，获得了1.72g深黄色固体(52％)。
                  1H NMR(CDCl3)δ：8.37(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)；8.22(br s，1H)；7.48(d，J＝2.3Hz，1H)；7.42(dd，J＝1.5，8.1Hz，1H)；7.31(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；7.22(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.67(d，J＝8.8Hz，1H)；5.56(br s，2H).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-6-氟苯甲酰胺(1e)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-6-氟苯甲酸(2.0g，12.9mmol)和SOCl2(2.3mL，32.2mmol)，然后使用2-氯苯胺(2.7mL，25.8mmol)和CHCl3(50mL)进行制备。将产物在EtOAc/己烷中色谱纯化，获得了2.06g浅橙色固体(60％)。
                       1H NMR(CDCl3)δ：9.00(d，J＝17Hz，1H)；8.47(d，J＝8.3Hz，1H)；7.41(d，J＝8.0Hz，1H)；7.30(t，J＝7.9Hz，1H)；7.10-7.20(m，1H)；7.07(t，J＝7.7Hz，1H)；6.49(d，J＝8.3Hz，1H)；6.03(br s，2H).MS(ES)：m/z 265.0(M+).
2-氨基-6-氯-N-(2-氯苯基)苯甲酰胺(1f)
按照方法A，使用在苯(75mL)中的2-氨基-6-氯苯甲酸(2.5g，14.6mmol)和SOCl2(2.7mL，36.4mmol)，然后使用2-氯苯胺(3.1mL，29.1mmol)和CHCl3(75mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了1.05g橙黄色固体(26％)。
                                          1HNMR(CDCl3)δ：8.54(d，J＝8.1Hz，1H)；8.30(br s，1H)；7.41(dd，J＝1.5，8.0Hz，1H)；7.33(t，J＝7.8Hz，1H)；7.10(t，J＝8.1Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.6，7.8Hz，1H)；6.78(dd，J＝0.4，7.9Hz，1H)；6.63(dd，J＝0.9，8.2Hz，1H)；4.69(br s，2H).MS(ES)：m/z303.0(M+22)，281.0(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-6-甲基苯甲酰胺(1g)
按照方法A，使用在苯(75mL)中的2-氨基-6-甲基苯甲酸(2.5g，16.5mmol)和SOCl2(3.0mL，41.3mmol)，然后使用2-氯苯胺(3.5mL，33.0mmol)和CHCl3(75mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了2.19g棕色油状物(51％)。
                                          1HNMR(CDCl3)δ：8.58(d，J＝8.1Hz，1H)；7.99(br s，1H)；7.40(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.34(t，J＝7.7Hz，1H)；7.11(t，J＝7.8Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.64(d，J＝7.5Hz，1H)；6.59(d，J＝8.1Hz，1H)；4.29(br s，2H)；2.45(s，3H).MS(ES)：m/z 283.0(M+22).
2-氨基-3-氯-N-(2-氯苯基)苯甲酰胺(1h)
按照方法A，使用在苯(25mL)中的2-氨基-3-氯苯甲酸(1.0g，5.82mmol)和SOCl2(1.1mL，14.6mmol)，然后使用2-氯苯胺(1.2mL，11.7mmol)和CHCl3(25mL)进行制备。将产物从MeOH中重结晶，获得了1.29g黄色固体(78％)。
                                           1HNMR(CDCl3)δ：8.43(dd，J＝1.4，8.3Hz，1H)； 8.30(br s，1H)；7.47(dd，J＝1.1，8.0Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，2H)；7.33(dt，J＝1.4，7.9Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.68(t，J＝7.9Hz，1H)；6.13(br s，2H).MS(ES)：m/z 281.0(M+).
2-氨基-N-联苯-2-基-6-氯苯甲酰胺(1i)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.3mmol)，然后使用2-氨基联苯胺(4.15g，24.5mmol)和CHCl3(60mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了2.16g泡沫状深琥珀色残余物(57％)。
          1H NMR(CDCl3)δ：8.48(d，J＝8.2Hz，1H)；7.79(br s，1H)；7.34-7.46(m，6H)；7.20-7.30(m，2H)；7.00(t，J＝8.1Hz，1H)；6.63(dd，J＝0.6，7.9Hz，1H)；6.54(d，J＝8.3Hz，1H)；4.58(br s，2H).MS(ES)：m/z 323.1(M+).
 2-氨基-6-氯-N-邻甲苯基苯甲酰胺(1j)
按照方法A，使用在苯(30mL)中的2-氨基-6-氯苯甲酸(1.0g，5.83mmol)和SOCl2(1.1mL，14.6mmol)，然后使用邻甲苯胺(1.4mL，12.8mmol)和CHCl3(30mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了840mg的油状黄色固体(55％)。
                                                1H
NMR(CDCl3)δ：7.96(d，J＝7.9Hz，1H)；7.60(br s，
1H)；7.23-7.30(m，2H)；7.14(t，J＝7.5Hz，1H)；7.11
(t，J＝8.3Hz，1H)；6.78(d，J＝7.9Hz，1H)；6.64(d，
J＝8.2Hz，1H)；4.73(br s，2H)；2.35(s，3H).MS
(ES)：m/z 261.0(M+).
2-氨基-6-氯-N-(2-氟苯基)苯甲酰胺(1k)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.1mmol)，然后使用2-氟苯胺(2.3mL，23.4mmol)和CHCl3(60mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了1.05g黄色固体(34％)。
                                          1HNMR(CDCl3)δ：8.45(t，J＝8.0Hz，1H)；8.01(br s，1H)；7.02-7.22(m，4H)；6.78(dd，J＝0.5，7.9Hz，1H)；6.64(dd，J＝0.8，8.2Hz，1H)；4.73(br s，2H).MS(ES)：m/z 265.0(M+).
2-氨基-6-氯-N-(2-甲氧基苯基)苯甲酰胺(11)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.1mmol)，然后使用邻甲氧基苯胺(2.6mL，23.4mmol)和CHCl3(60mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中色谱纯化，获得了2.61g深黄色油状物(81％)。
                                         1H NMR(CDCl3)δ：8.53(dd，J＝1.7，7.9Hz，1H)；8.39(brs，1H)；7.11(dt，J＝1.6，7.8Hz，1H)；7.09(t，J＝8.1Hz，1H)；7.02(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；6.92(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；6.62(dd，J＝0.9，8.2Hz，1H)；4.66(br s，2H)；3.87(s，3H).MS(ES)：m/z 277.0(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-3-三氟甲基苯甲酰胺(1m)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的3-三氟甲基邻氨基苯甲酸(2.0g，9.75mmol)和SOCl2(1.8mL，24.4mmol)，然后使用2-氯苯胺(2.1mL，19.5mmol)和CHCl3(50mL)进行制备。将产物从MeOH中重结晶以进行纯化，获得了2.38g黄色结晶(78％)。
           1H NMR(CDCl3)δ：8.40(dd，J＝1.4，8.3Hz，1H)；8.25(br s，1H)；7.71(d，J＝7.8Hz，1H)；7.60(d，J＝7.8Hz，1H)；7.43(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.3，7.9Hz，1H)；7.11(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.77(t，J＝7.8Hz，1H)；6.24(brs，2H).MS(ES)：m/z 315.0(M+).
3-氨基萘-2-甲酸(2-氯苯基)酰胺(1n)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的3-氨基-2-萘甲酸(2.0g，10.7mmol)和SOCl2(1.9mL，26.7mmol)，然后使用2-氯苯胺(2.3mL，21.4mmol)和CHCl3(50mL)进行制备。将产物从MeOH中重结晶，获得了1.71g棕色固体(54％)。
                                 1H NMR(CDCl3)δ：10.88(br s，1H)；9.21(s，1H)；8.91(s，1H)；8.70(dd，J＝1.0，8.3Hz，1H)；7.95-8.01(m，1H)；7.87-7.94(m，1H)；7.60-7.68(m，2H)；7.41(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.2，7.8Hz，1H)；7.07(dt，J＝1.4，7.7Hz，1H).MS(ES)：m/z 297.1(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-4-硝基苯甲酰胺(1o)
按照方法A，使用在苯(150mL)中的4-硝基邻氨基苯甲酸(5.0g，27.5mmol)和SOCl2(5.0mL，68.6mmol)，然后使用2-氯苯胺(5.8mL，55.0mmol)和CHCl3(150mL)进行制备。通过在CH2Cl2中色谱层析，然后从MeOH中重结晶来纯化产物，获得了2.20g棕橙色固体(31％)。
                                         1HNMR(CDCl3)δ：8.41(dd，J＝1.3，8.3Hz，1H)；8.31(br s，1H)；7.67(d，J＝8.6Hz，1H)；7.57(d，J＝2.1Hz，1H)；7.52(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；7.44(dd，J＝1.3，8.1Hz，1H)；7.35(dt，J＝1.3，7.9Hz，1H)；7.13(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；5.88(br s，2H).MS(ES)：m/z 292.0(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-5-羟基苯甲酰胺(1p)
按照方法A，使用在苯(150mL)中的2-氨基-5-羟基苯甲酸(5.0g，32.7mmol)和SOCl2(6.0mL，81.6mmol)，然后使用2-氯苯胺(6.9mL，65.4mmol)和CHCl3(150mL)进行制备。将产物在MeOH/CH2Cl2中进行两次色谱纯化，获得了990mg棕色固体(12％)。
                  1H NMR(MeOH-d4)δ：7.92(dd，J＝1.6，8.1Hz，1H)；7.48(dd，J＝1.5，7.7Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；7.20(dt，J＝1.7，7.7Hz，1H)；7.16(d，J＝2.7Hz，1H)；6.83(dd，J＝2.7，8.7Hz，1H)； 6.76(d，J＝8.7Hz，1H)；[6.24(br s，2H)).MS(ES)：m/z 263.0(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-4，5-二氟苯甲酰胺(1q)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的4，5-二氟邻氨基苯甲酸(2.0g，11.6mmol)和SOCl2(2.1mL，28.9mmol)，然后使用2-氯苯胺(2.4mL，23.2mmol)和CHCl3(60mL)进行制备。将产物在CH2Cl2和EtOAc/己烷中进行两次色谱纯化，获得了769mg黄色固体(23％)。
                                1H NMR(CDCl3)δ：8.69-8.82(m，1H)；8.00(dd，J＝8.4，9.0Hz，1H)；7.90(dd，J＝8.9，12Hz，1H)；7.39(dd，J＝6.8，10Hz，1H)；6.53(dd，J＝6.6，12Hz，1H)；6.41(br s，2H)；5.79(br s，1H).MS(ES)：m/z 283.1(M+).
2-氨基-N-(2-氯苯基)-5-氟苯甲酰胺(1r)
按照方法A，使用在苯(30mL)中的2-氨基-5-氟苯甲酸(1.0g，6.45mmol)和SOCl2(1.2mL，16.1mmol)，然后使用2-氯苯胺(1.4mL，12.9mmol)和CHCl3(30mL)进行制备。将产物在CH2Cl2中研磨，获得了985mg芥末黄色固体(58％)。
1H NMR(CDCl3)δ：7.66(dd，J＝2.9，8.7Hz，1H)；7.52-7.55(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.09(dt，J＝3.0，8.5Hz，1H)；6.71(dd，J＝4.3，8.7Hz，1H).MS(ES)：m/z 305.0(M+40).
                           实施例9
制备中间体化合物：氯化物
2-氯代甲基-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(2a)
按照方法B，使用在乙酸(30mL)中的1a(2.95g，9.63mmol)和氯乙酰氯(2.3mL，28.9mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液中萃取并从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了1.61g棕色固体结晶(46％)。
         1H NMR(CDCl3)δ：7.59-7.66(m，2H)；7.45-7.56(m，3H)；7.20(s，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.08(d，J＝12Hz，1H)；4.04(s，3H)；4.00(s，3H).MS(ES)：m/z 365.0(M+).
6-溴-2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2b)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1b(500mg，1.54mmol)和氯乙酰氯(0.37mL，4.61mmol)进行制备。通过从异丙醇中重结晶进行纯化，获得了490mg灰白色固体(83％)。
                         1H NMR(CDCl3)δ：8.43(d，J＝2.3Hz，1H)；7.91(dd，J＝2.3，8.7Hz，1H)；7.67(d，J＝8.7Hz，1H)；7.60-7.65(m，1H)；7.47-7.56(m，2H)；7.52(t，J＝5.3Hz，1H)；7.47-7.56(m，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 385.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2c)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1c(500mg，1.89mmol)和氯乙酰氯(0.45mL，5.67mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液提取，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了501mg黄色结晶固体(82％)。
                           1H NMR(CDCl3)δ：8.32(dd，J＝6.0，8.9Hz，1H)；7.59-7.66(m，1H)；7.50-7.55(m，3H)；7.44(dd，J＝2.4，9.4Hz，1H)；7.27(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 323.0(M+).
6-氯-2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2d)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1d(500mg，1.78mmol)和氯乙酰氯(0.42mL，5.33mmol)进行制备。通过从异丙醇中重结晶进行纯化，获得了555mg黄色固体(92％)。
                     1H NMR(CDCl3)δ：8.27(d，J＝1.9Hz，1H)；7.74-7.78(m，2H)；7.60-7.66(m，1H)；7.48-7.57(m，3H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 339.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2e)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1e(500mg，1.89mmol)和氯乙酰氯(0.45mL，5.67mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液萃取并从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了430mg灰白色结晶固体(70％)。
                     1H NMR(CDCl3)δ：7.76(dt，J＝5.3，8.2Hz，1H)；7.56-7.65(m，2H)；7.47-7.56(m，3H)；7.16-7.25(m，1H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 323.0(M+).
5-氯-2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2f)
按照方法B，使用在乙酸(15mL)中的1f(1.00g，3.56mmol)和氯乙酰氯(0.85mL，10.7mmol)进行制备。通过从异丙醇中重结晶进行纯化，获得了791mg灰白色结晶固体(65％)。
                                  1H NMR(CDCl3)δ：7.70(s，1H)；7.68(d，J＝3.8Hz，1H)；7.61-7.65(m，1H)；7.55(dd，J＝2.7，6.4Hz，1H)；7.51(d，J＝3.1Hz，1H)；7.50(s，2H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.05(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 339.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2g)
按照方法B，使用在乙酸(40mL)中的1g(2.18g，8.36mmol)和氯乙酰氯(2.0mL，25.1mmol)进行制备。通过在CH2Cl2和EtOAc/己烷中进行两次色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了638mg灰白色结晶固体(24％)。
   1H NMR(DMSO-d6)δ：7.73-7.80(m，3H)；7.58-7.64(m，3H)；7.41(d，J＝7.4Hz，1H)；4.40(d，J＝12Hz，1H)，4.26(d，J＝12Hz，1H)；2.74(s，3H).MS(ES)：m/z 319.0(M+).
8-氯-2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2h)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1h(500mg，1.78mmol)和氯乙酰氯(0.49mL，6.13mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液中萃取，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了448mg黄色固体(74％)。
                  1H NMR(CDCl3)δ：8.23(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.90(dd，J＝1.4，7.8Hz，1H)；7.61-7.66(m，1H)；7.51-7.55(m，3H)；7.47(t，J＝8.0Hz，1H)；4.48(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 339.0(M+).
3-联苯-2-基-5-氯-2-氯甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2i)
按照方法B，使用在乙酸(30mL)中的1i(2.0g，6.20mmol)和氯乙酰氯(1.5mL，18.6mmol)进行制备。通过在CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了1.44g灰白色固体(61％)。
               1H NMR(CDCl3)δ：7.61-7.64(m，1H)；7.58-7.59(m，1H)；7.54-7.57(m，2H)；7.52-7.53(m，1H)；7.4 5-7.52(m，2H)；7.24(s，5H)；3.92-4.03(m，2H).MS(ES)：m/z 381.0(M+).
 5-氯-2-氯甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(2j)
按照方法B，使用在乙酸(15mL)中的1j(750mg，2.88mmol)和氯乙酰氯(0.69mL，8.63mmol)进行制备。通过在CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了340mg白色固体(37％)。
         1H NMR(CDCl3)δ：7.69(d，J＝2.1Hz，1H)；7.68(q，J＝7.4Hz，1H)；7.54(dd，J＝2.2，7.0Hz，1H)；7.3 5-7.47(m，3H)；7.21-7.25(m，1H)；4.27(d，J＝12Hz，1H)；4.11(d，J＝12Hz，1H)；2.18(s，3H).MS(ES)：m/z 319.0(M+).
5-氯-2-氯甲基-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2k)
按照方法B，使用在乙酸(20mL)中的1k(1.0g，3.78mmol)和氯乙酰氯(0.90mL，11.3mmol)进行制备。在CH2Cl2中色谱纯化，获得了484mg浅粉红色固体(40％)。
              1H NMR(CDCl3)δ：7.69(s，1H)；7.68(d，J＝3.2Hz，1H)；7.56(d，J＝3.0Hz，1H)；7.54(d，J＝3.0Hz，1H)；7.40-7.47(m，1H)；7.35-7.38(m，1H)；7.27-7.32(m，1H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)；4.18(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 323.0(M+).
5-氯-2-氯甲基-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(21)
按照方法B，使用在乙酸(40mL)中的11(2.6g，9.41mmol)和氯乙酰氯(2.2mL，28.2mmol)进行制备。通过在CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了874mg浅黄色固体(28％)。
              1H NMR(CDCl3)δ：7.55-7.74(m，2H)；7.47-7.54(m，2H)；7.34(dd，J＝1.7，7.8Hz，1H)；7.13(dt，J＝1.2，7.7Hz，1H)；7.08(dd，J＝1.0，8.4Hz，1H)；4.29(d，J＝12Hz，1H)；4.11(d，J＝12Hz，1H)；3.80(s，3H).MS(ES)：m/z 335.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2m)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1m(500mg，1.59mmol)和氯乙酰氯(0.38mL，4.77mmol)进行制备。通过从异丙醇中重结晶进行纯化，获得了359mg白色结晶固体(61％)。
                               1H NMR(CDCl3)δ：8.51(dd，J＝1.0，8.0Hz，1H)；8.14(d，J＝7.3Hz，1H)；7.65(dd，J＝2.5，5.6Hz，1H)；7.62(d，J＝3.9Hz，1H)；7.48-7.60(m，3H)；4.44(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 373.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮(2n)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1n(500mg，1.68mmol)和氯乙酰氯(0.40mL，5.05mmol)进行制备。通过在CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了232mg淡棕色固体(39％)。
                1H NMR(CDCl3)δ：8.92(s，1H)；8.29(s，1H)；8.81(d，J＝8.3，1H)；8.32(d，J＝8.3Hz，1H)；7.51-7.69(m，4H)；7.55(d，J＝5.2Hz，1H)；7.53(d，J＝3.8Hz，1H)；4.43(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 355.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮(2o)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1o(500mg，1.71mmol)和氯乙酰氯(0.41mL，5.14mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液中萃取，然后在CH2Cl2中进行两次色谱层析来进行纯化，获得了338mg黄色油(56％)。
            1H NMR(CDCl3)δ：8.64(d，J＝2.2Hz，1H)；8.48(d，J＝8.8Hz，1H)；8.32(dd，J＝2.2，8.7Hz，1H)；7.66(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)；7.52-7.59(m，3H)；4.41(d，J＝12Hz，1H)，4.10(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 350.0(M+).
乙酸2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-6-基酯(2p)
按照方法B，使用在乙酸(10mL)中的1p(670mg，2.55mmol)和氯乙酰氯(0.61mL，7.65mmol)进行制备。在0-3％MeOH/CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了523mg乙酸酯，为浅粉红色结晶(57％)。
                                          1H NMR
(CDCl3)δ：8.00(d，J＝2.7Hz，1H)；7.82(d，J＝8.8Hz，1H)；7.60-7.66(m，1H)；7.56(dd，J＝2.7，8.8Hz，1H)；7.51(t，J＝4.7Hz，2H)；7.50(s，1H)；4.38(d，J＝12Hz，1H).，4.08(d，J＝12Hz，1H)；2.36(s，3H).MS(ES)：m/z 363.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-3H-喹唑啉-4-酮(2q)
按照方法B，使用在乙酸(12mL)中的1q(700mg，2.48mmol)和氯乙酰氯(0.60mL，7.43mmol)进行制备。通过在CH2Cl2中进行色谱层析，然后从异丙醇中重结晶来进行纯化，获得了219mg黄色结晶固体(26％)。
                       1H NMR(CDCl3)δ：8.07(dd，J＝8.5，9.7Hz，1H)；7.64(dd，J＝2.5，5.6Hz，1H)；7.60(dd，J＝3.5，11Hz，1H)；7.55(q，J＝2.9Hz，3H)；7.52(d，J＝1.9Hz，1H)；7.49-7.51(m，1H)；4.36(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 341.0(M+).
2-氯甲基-3-(2-氯苯基)-6-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2r)
按照方法B，使用在乙酸(15mL)中的1r(850mg，3.21mmol)和氯乙酰氯(0.77mL，9.63mmol)进行制备。通过从K2CO3水溶液中萃取，然后在EtOAc/己烷中进行色谱层析来纯化。在丙酮/己烷中进行第二次色谱层析，获得了125mg白色固体(12％)。
    1H NMR(CDCl3)δ：7.95(dd，J＝2.9，8.2Hz，1H)；7.81(dd，J＝4.8，9.0Hz，1H)；7.61-7.66(m，1H)；7.57(dd，J＝2.7，8.6Hz，1H)；7.57(dd，J＝2.7，8.6Hz，1H)；7.52(dd，J＝3.2，6.9Hz，1H)；7.52(brs，2H)；4.38(d，J＝12Hz，1H)，4.08(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)：m/z 323.0(M+).
                              实施例10
制备PI3Kδ抑制剂化合物
化合物D-001
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2a(200mg，0.546mmol)、腺嘌呤(81mg，0.601mmol)、K2CO3(83mg，0.601mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从乙醇(EtOH)中重结晶，获得了164mg米色固体(65％)，mp281.5-282.7℃(分解)。
                            1H NMR(DMSO-d6)δ：8.06(s，1H)；8.04(s，1H)；7.76-7.81(m，1H)；7.70-7.76(m，1H)；7.60-7.67(m，2H)；7.45(s，1H)；7.22(s，2H)；6.90(s，1H)；5.08(d，J＝17Hz，1H)；4.91(d，J＝17Hz，1H)；3.87(s，3H)；3.87(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.9，156.2，155.4，152.9，150.0，149.7，149.4，143.0，141.9，133.7，132.1，131.9，131.2，130.8，129.3，118.4，113.6，108.4，105.8，56.5，56.1，44.7.MS(ES)：m/z 464.1(M+).元素分析计算值C22H18ClN7O3·0.1C2H6O·0.05KCl：C，56.47；H，3.97；Cl，7.88；N，20.76.实测值：C，56.54；H，4.05；Cl，7.77；N，20.55.
化合物D-002
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2b(100mg，0.260mmol)、腺嘌呤(39mg，0.286mmol)、K2CO3(40mg，0.286mmol)和DMF(2mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了52mg灰白色固体(41％)，mp284.2-284.7℃(分解)。
                          1H NMR(DMSO-d6)δ：8.24(d，J＝2.0Hz，1H)；8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.98(dd，J＝1.9，8.6Hz，1H)；7.74-7.83(m，2H)；7.59-7.68(m，2H)；7.46(d，J＝8.7Hz，1H)；7.22(s，2H)；5.12(d，J＝17Hz，1H)；4.94(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.5，156.2，152.9，152.0，150.1，145.8，141.8，138.4，133.1，132.2，131.9，131.1，130.9，130.1，129.4，128.9，122.4，120.4，118.4，45.0.MS(ES)：m/z 482.0(M+).元素分析计算值
C20H13ClBrN7O·0.1KCl：C，49.01；H，2.67；Cl，7.96；N，20.00.实测值：C，48.82；H，2.82；Cl，8.00；N，19.79.
化合物D-003
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2c(100mg，0.310mmol)、腺嘌呤(46mg，0.340mmol)、K2CO3(47mg，0.340mmol)和DMF(1mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了57mg米色固体(44％)，mp216.8-217.2℃。
          1H NMR(DMSO-d6)δ：8.22(dd，J＝6.3，8.7Hz，1H)；8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.78-7.80(m，2H)；7.61-7.64(m，2H)；7.46(dt，J＝2.1，8.6Hz，1H)；7.32(d，J＝9.8Hz，1H)；7.22(s，2H)；5.13(d，J＝17Hz，1H)；4.95(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：166.1(d，J＝253Hz)，159.6，155.8，152.5，149.7，148.6(d，J＝14Hz)，141.4，132.8，131.8，131.6，130.8，130.5，129.8(d，J＝11Hz)，129.0，118.1，117.4，116.2(d，J＝24Hz)，112.7(d，J＝22Hz)，44.6.MS(ES)：m/z 422.0(M+).元素分析计算值
C20H13ClFN7O·0.1H2O(0.15KCl：C，55.25；H，3.06；Cl，9.38；N，22.55.实测值：C，55.13；H，2.92；Cl，9.12；N，22.30.
化合物D-004
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2d(100mg，0.294mmol)、腺嘌呤(44mg，0.323mmol)、K2CO3(45mg，0.323mmol)和DMF(1mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了50mg黄色固体(39％)，mp294.5-294.8℃(分解)。
                        1H NMR(DMSO-d6)δ：8.10(d，J＝2.2Hz，1H)；8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.86(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)；7.75-7.82(m，2H)；7.59-7.67(m，2H)；7.53(d，J＝8.7Hz，1H)；7.22(brs，2H)；5.13(d，J＝17Hz，1H)；4.95(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.7，156.2，152.9，151.9，150.1，145.5，141.8，135.7，133.1，132.3，132.2，131.9，131.1，130.9，130.0，129.4，125.9，122.0，118.4，44.9.MS(ES)：m/z 438.0(M+).
元素分析计算值C20H13Cl2N7O：C，54.81；H，2.99；N，22.37.
实测值：C，54.72；H，2.87；N，22.18.
化合物D-005
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2e(200mg，0.619mmol)、腺嘌呤(92mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.680mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，获得了168mg灰白色固体(64％)，mp159-172℃(逐渐分解)。
                                      1H NMR(DMSO-d6)δ：8.10(s，1H)；8.08(s，1H)；7.73-7.89(m，3H)；7.57-7.71(m，2H)；7.37-7.48(m，2H)；7.34(d，J＝11Hz，1H)；7.30(d，J＝8.3Hz，1H)；5.14(d，J＝17Hz，1H)；4.94(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.8(d，J＝264Hz)，157.5(d，J＝4.2Hz)，155.8，152.4，152.4，150.0，148.7，142.1，136.4(d，J＝11Hz)，133.0，132.2，132.1，131.2，130.9，129.4，123.8(d，J＝3.6Hz)，118.4，114.5(d，J＝20Hz)，110.2(d，J＝6.0Hz)，44.9.MS(ES)：m/z 422.0(M+).
元素分析计算值C20H13ClFN7O：C，56.95；H，3.11；Cl，8.40；N，23.24.实测值：C，54.62；H，3.32；Cl，9.40；N，21.29.
化合物D-006
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2f(300mg，0.883mmol)、腺嘌呤(131mg，0.972mmol)、K2CO3(134mg，0.972mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，并从EtOH中重结晶，获得了188mg浅橙色固体结晶(49％)，mp245.7-246.0℃(在220℃开始发汗)。
                                   1H NMR(DMSO-d6)δ：8.06(s，1H)；8.04(s，1H)；7.76-7.81(m，2H)；7.72(d，J＝8.0Hz，1H)；7.59-7.66(m，3H)；7.41(d，J＝8.1Hz，1H)；7.26(br s，2H)；5.11(d，J＝17Hz，1H)；4.93(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.5，156.2，152.9，152.2，150.1，149.2，141.8，135.4，133.3，133.2，132.1，132.0，131.2，130.9，130.4，129.4，127.3，118.4，117.7，44.9.MS(ES)：m/z 438.0(M+).元素分析计算值C20H13Cl2N7O·0.1C2H6O·0.05H2O：C，54.67；H，3.11；Cl，15.98；N，22.09.实测值：C，54.35；H，3.00；Cl，15.82；N，22.31.
化合物D-007
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2g(250mg，0.783mmol)、腺嘌呤(116mg，0.862mmol)、K2CO3(119mg，0.862mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了93mg浅黄色固体(28％)，mp190.7-190.9℃。
              1H NMR(DMSO-d6)δ：8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.76-7.79(m，1H)；7.71-7.74(m，1H)；7.59-7.67(m，1H)；7.34(d，J＝7.4 Hz，1H)；7.28(d，J＝8.2Hz，1H)；7.24(br s，2H)；5.07(d，J＝17Hz，1H)；4.92(d，J＝17Hz，1H)；2.73(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：161.1，156.2，152.8，150.9，150.1，148.3，141.9，141.0，134.6，133.6，132.2，131.9，131.3，130.8，130.3，129.3，125.9，119.1，118.4，44.8，22.8.MS(ES)：m/z 418.1(M+).元素分析计算值
C21H16ClN7O·H2O：C，57.87；H，4.16；Cl，8.13；N，22.49.实测值：C，57.78；H，3.99；Cl，8.38；N，22.32.
化合物D-008
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2h(100mg，0.294mmol)、腺嘌呤(44mg，0.324mmol)、K2CO3(45mg，0.324mmol)和DMF(1mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，获得了50mg浅黄色固体(39％)，mp 273.3-273.5℃(褪色)。
                                1H NMR(DMSO-d6)δ：8.11(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；8.08(s，1H)；8.05(s，1H)；8.00(dd，J＝1.3，7.8Hz，1H)；7.79-7.83(m，2H)；7.63-7.66(m，2H)；7.56(t，J＝7.9Hz，1H)；7.21(br s，2H)；5.17(d，J＝17Hz，1H)；4.97(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.2，156.1，152.8，152.2，150.2，143.3，142.0，135.6，133.1，132.3，131.9，131.1，131.0，130.9，129.4，128.4，126.0，122.5，118.4，45.0.MS(ES)：m/z438.0(M+).元素分析计算值C20H13Cl2N7O·0.1CH4O·0.6H2O(0.15KCl：C，52.09；H，3.18；N，21.15.实测值：C，51.85；H，2.93；N，21.01.
化合物D-009
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2i(400mg，1.05mmol)、腺嘌呤(155mg，1.15mmol)、K2CO3(159mg，1.15mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了344mg白色固体(68％)，mp299.9-300.1℃(褪色)。
                     1H NMR(DMSO-d6)δ：8.08(s，1H)；7.89(s，1H)；7.58-7.73(m，5H)；7.51(d，J＝7.9Hz，1H)；7.46(d，J＝7.5Hz，2H)；7.27-7.41(m，3H)；7.14-7.27(m，3H)；5.14(d，J＝17Hz，1H)；4.82(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.6，156.2，152.8，152.5，150.0，149.0，141.7，140.2，137.7，135.0，133.3，133.2，131.8，130.7，130.1，129.8，129.5，128.8，128.6，128.4，127.1，118.4，117.6，45.3.MS(ES)：m/z 480.1(M+).元素分析计算值C26H18ClN7O：C，65.07；H，3.78；Cl，7.39；N，20.43.
实测值：C，64.77；H，3.75；Cl，7.43；N，20.35.
化合物D-010
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2j(200mg，0.626mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(93mg，0.546mmol)、K2CO3(95mg，0.689mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了125mg灰白色固体(46％)，mp213.9℃。
                                      1H NMR(DMSO-d6)δ：13.53(br s，1H)；8.49(s，1H)；8.44(s，1H)；7.78(t，J＝7.9Hz，1H)；7.63(d，J＝8.2Hz，1H)；7.59(d，J＝7.7Hz，1H)；7.49(d，J＝6.9Hz，1H)；7.24-7.41(m，3H)；4.32-4.45(m，2H)；2.14(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.9，157.2，154.2，151.5，149.7，149.6，143.5，136.1，135.9，135.1，133.2，131.3，130.3，130.0，129.9，129.1，127.6，127.1，117.8，32.4，17.5.MS(ES)：m/z 438.0(M+).元素分析计算值C21H15ClN6OS：C，58.00；H，3.48；Cl，8.15；N，19.32；S，7.37.实测值：C，58.05；H，3.38；Cl，8.89；N，18.38；S，7.00.
化合物D-011
5-氯- 3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2k(210mg，0.650mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(122mg，0.715mmol)、K2CO3(99mg，0.715mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了240mg灰白色固体(84％)，mp244.0℃。
                              1H NMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.50(8，1H)；8.45(s，1H)；7.81(t，J＝8.0Hz，1H)；7.74(t，J＝7.7Hz，1H)；7.67(d，J＝8.1Hz，1H)；7.62(d，J＝7.7Hz，1H)；7.46-7.55(m，1H)；7.29-7.42(m，2H)；4.47-4.59(m，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm：158.4，157.3(d，J＝249Hz)，156.4，153.8，151.0，149.1，143.2，135.0，132.9，131.8(d，J＝8.0Hz)，130.8，129.9，126.7，125.3(d，J＝3.5Hz)，123.6(d，J＝13Hz)，117.0，116.2(d，J＝19Hz)，31.7.MS(ES)：m/z 439.0(M+).元素分析计算值
C20H12ClFN6OS：C，54.74；H，2.76 ； Cl，8.08；N，19.15；S，7.31.实测值：C，54.42；H，2.88；Cl，8.08；N，18.87；S，7.08.
化合物D-012
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2k(210mg，0.650mmol)、腺嘌呤(97mg，0.715mmol)、K2CO3(99mg，0.715mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了137mg黄褐色固体(50％)，mp295.6-295.8℃(分解)。
                      1H NMR(DMSO-d6)δ：8.05(s，1H)；8.04(s，1H)；7.75(t，J＝7.6Hz，1H)；7.74(t，J＝7.9Hz，1H)；7.62-7.69(m，1H)；7.61(d，J＝7.6Hz，1H)；7.47-7.55(m，1H)；7.48(d，J＝7.8Hz，1H)；7.41(d，J＝8.0Hz，1H)；7.24(br s，2H)；5.19(d，J＝17Hz，1H)；5.03(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.7，157.6(d，J＝250Hz)，156.2，152.8，152.4，150.0，149.2，141.8，135.4，133.3，132.5(d，J＝8.0Hz)，131.0，130.4，127.3，126.2(d，J＝3.5Hz)，123.1(d，J＝14Hz)，118.4，117.6，117.2(d，J＝19Hz)，45.1.MS(ES)：m/z 422.0(M+).元素分析计算值C20H13ClFN7O·0.05C2H6O：C，56.92；H，3.16；Cl，8.36；N，23.12.实测值：C，56.79；H，3.20；Cl，8.46；N，22.79.
化合物D-013
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2i(400mg，1.05mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(196mg，1.15mmol)、K2CO3(159mg，1.15mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，然后从EtOH中重结晶，获得了439mg浅黄色结晶固体(84％)，mp222.0-222.5℃(分解)。
     1H NMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.55(s，1H)；8.45(s，1H)；7.73(t，J＝8.0Hz，1H)；7.64(d，J＝7.7Hz，1H)；7.50-7.59(m，4H)；7.41-7.48(m，1H)；7.25-7.38(m，5H)；4.41(d，J＝16Hz，1H)；4.16(d，J＝16Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.2，157.0，153.7，151.5，149.7，149.3，143.5，139.9，137.8，135.1，134.1，133.3，131.5，130.5，130.3，130.1，129.1，128.9，128.4，128.4，126.9，117.5，32.3.MS(ES)：m/z 497.0(M+).元素分析计算值C26H17ClN6OS：C，62.84；H，3.45；Cl，7.13；N，16.91；S，6.45.实测值：C，62.60；H，3.47；Cl，7.15；N，16.65；S，6.41.
化合物D-014
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体21(250mg，0.746mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(140mg，0.821mmol)、K2CO3(113mg，0.821mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了254mg灰白色固体(76％)，mp237.0℃(分解；在154.6℃褪色)。
           1H NMR(DMSO-d6)δ：13.53(br s，1H)；
8.52(s，1H)；8.45(s，1H)；7.78(t，J＝7.9Hz，1H)；
7.64(d，J＝8.0Hz，1H)；7.59(d，J＝7.7Hz，1H)；7.48
(d，J＝7.3Hz，1H)；7.42(t，J＝7.7Hz，1H)；7.15(d，
J＝8.2Hz，1H)；7.03(t，J＝7.5Hz，1H)；4.45(s，2H)；
3.76(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.9，157.1，
154.8，154.7，151.5，149.6，143.6，135.1，133.2，
131.3，130.4，130.0，127.0，124.8，121.2，117.8，
112.7，56.1，32.0.MS(ES)：m/z 451.0(M+).
元素分析计算值C21H15ClN6O2S·0.15C2H6O·0.05KCl：C，55.43；
H，3.47；Cl，8.07；N，18.21；S，6.95.实测值：C，
55.49；H，3.68；Cl，7.95；N，17.82；S，6.82.
化合物D-015
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2e(200mg，0.619mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.681mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了152mg白色固体(56％)，mp 222.7-223.8℃(褪色)。
                                        1HNMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；7.89(dt，J＝5.6，8.1Hz，1H)；7.76(dd，J＝1.6，7.3Hz，1H)；7.67(d，J＝7.4Hz，1H)；7.56(d，J＝8.1Hz，1H)；7.47(t，J＝7.1Hz，1H)，7.41-7.53(m，2H)；7.37(dd，J＝8.7，11Hz，1H)；4.38-4.52(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.9(d，J＝264Hz)，157.6，156.8，154.1，151.5，149.6，149.0，143.6，136.4(d，J＝11Hz)，133.9，132.2，131.7，131.6，130.5，130.2，128.8，123.6，114.4(d，J＝20Hz)，110.2，32.0.MS(ES)：m/z 439.0(M+).元素分析计算值C20H12ClFN6OS·0.5C2H6O：C，54.61；H，3.27；Cl，7.68；N，18.19；S，6.94.实测值：C，54.37；H，3.26；Cl，7.89；N，18.26；S，6.55.
化合物D-016
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2a(200mg，0.546mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(102mg，0.601mmol)、K2CO3(83mg，0.601mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了172mg灰白色固体(65％)，mp 160-180℃(逐渐分解)。
         1H NMR(DMSO-d6)δ：13.55(br s，1H)；8.49(s，1H)；8.44(s，1H)；7.72(d，J＝6.9Hz，1H)；7.66(d，J＝6.9Hz，1H)7.38-7.54(m，3H)；7.22(s，1H)；4.36-4.52(m，2H)；3.94(s，3H)；3.89(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.1，155.4，151.5，151.1，149.4，143.2，134.6，132.3，131.6，131.5，130.4，128.7，113.6，108.4，105.8，56.5，56.1，32.0.MS(ES)：m/z 481.1(M+).元素分析计算值C22H17ClN6O3S·0.5C2H6O·0.05KCl：C，54.41；H，3.97；Cl，7.33；N，16.55；S，6.32.实测值：C，54.43；H，3.94；Cl，7.69；N，16.69；S，6.52.
化合物D-017
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2b(200mg，0.519mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(97mg，0.570mmol)、K2CO3(79mg，0.572mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了123mg灰白色固体(47％)，mp 212-242℃(逐渐分解)。
         1H NMR(DMSO-d6)δ：13.07(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.24(d，J＝2.3Hz，1H)；8.06(dd，J＝2.3，8.7Hz，1H)；7.76(dd，J＝1.9，7.4Hz，1H)；7.70(d，J＝8.7Hz，1H)；7.66(d，J＝8.1Hz，1H)；7.51(dd，J＝2.1，7.9Hz，1H)；7.46(dd，J＝1.9，7.9Hz，1H)；4.47(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.7，156.8，153.6，151.5，146.1.，143.6，138.5，134.0，132.1，131.8，131.5，130.5，130.2，129.9，128.9，128.8，122.2，120.3，32.0.MS(ES)：m/z499.0(M+).元素分析计算值
C20H12ClBrN6OS·0.2C2H6O·0.05KCl：C，47.79；H，2.59；N，16.39；S，6.25.实测值：C，47.56；H，2.54；N，16.25；S，6.58.
化合物D-018
3-(2-氯苯基)-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2m(200mg，0.536mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(100mg，0.588mmol)、K2CO3(82mg，0.593mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了148mg白色固体(56％)，mp218.5-219.4℃。
                               1H NMR(DMSO-d6)δ：13.52(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.43(d，J＝6.0Hz，1H)；8.26(d，J＝7.5Hz，1H)，7.84(dd，J＝2.5，6.7Hz，1H)；7.70-7.75(m，2H)；7.51-7.59(m，2H)；4.40-4.55(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.0，157.2，154.2，151.4，149.6，144.4，143.4，133.8，133.0(q，J＝5.1Hz)，132.0，131.9，131.6，131.4，130.6，129.0，127.3，125.2(q，J＝30Hz)，123.6(q，J＝273Hz)，121.8，32.6.MS(ES)：m/z489.0(M+).元素分析计算值C21H12ClF3N6OS：C，51.59；H，2.47；Cl，7.25；N，17.19；S，6.56.实测值：C，51.51；H，2.55；Cl，7.37；N，17.05；S，6.38.
化合物D-019
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2n(200mg，0.563mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(105mg，0.619mmol)、K2CO3(86mg，0.619mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了128mg深黄色固体(48％)，mp 247.8-254.4℃(分解)。
     1H NMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.90(s，1H)；8.50(s，1H)；8.46(s，1H)；8.34(s，1H)；8.27(d，J＝8.2Hz，1H)；8.16(d，J＝8.2Hz，1H)；7.81(dd，J＝1.6，7.3Hz，1H)；7.70(t，J＝7.5Hz，1H)；7.61-7.74(m，2H)；7.49(t，J＝7.5Hz，1H)；7.44-7.53(m，1H)；4.44-4.56(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：161.3，151.6，151.5，143.9，142.2，136.7，134.4，132.5，131.8，131.6，130.5，129.7，129.3，128.8，128.6，128.3，128.3，127.1，125.2，119.5，32.4.MS(ES)：m/z 471.0(M+).元素分析计算值
C24H15ClN6OS·0.2C2H6O·0.05KCl：C，60.57；H，3.37；Cl，7.69；N，17.37；S，6.63.实测值：C，60.24；H，3.46；Cl，7.50；N，17.34；S，6.69.
化合物D-020
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2d(200mg，0.587mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(110mg，0.646mmol)、K2CO3(90mg，0.651mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了113mg黄色固体结晶(42％)，mp 237.1-238.2℃(分解)。
        1H NMR(DMSO-d6)δ：13.55(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.11(s，1H)；7.94(d，J＝8.3Hz，1H)；7.78(d，J＝8.1Hz，2H)；7.66(d，J＝6.7Hz，1H)；7.48-7.56(m，2H)；4.48(s，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm：159.8，156.8，153.5，151.5，149.6，145.8，143.6，135.7，134.0，132.2，132.1，131.7，131.5，130.5，130.2，129.8，128.8，125.8，121.9，32.0.MS(ES)：m/z 455.0(M+).元素分析计算值
C20H12Cl2N6OS·0.1C2H6O·0.6H2O(0.15KCl：C，50.34；H，2.89；Cl，15.82；N，17.44；S，6.65.实测值：C，50.02；H，2.63；Cl，15.51；N，17.39；S，6.81.
化合物D-021
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2h(200mg，0.589mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(124mg，0.726mmol)、K2CO3(100mg，0.726mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了202mg白色固体(75％)，mp211.9-212.7℃(分解)。
                                            1HNMR(DMSO-d6)δ：13.54(br s，1H)；8.47(s，1H)；8.44(s，1H)；8.12(d，J＝7.9Hz，1H)；8.07(d，J＝7.6Hz，1H)；7.78(d，J＝7.5Hz，1H)；7.67(d，J＝7.1Hz，1H)；7.58(t，J＝7.9Hz，1H)；7.42-7.54(m，2H)；4.52(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.3，156.9，153.9，151.5，149.7，143.5，135.7，134.0，132.1，131.8，131.4，131.1，130.5，130.3，128.9，128.3，126.1，122.4，32.5.MS(ES)：m/z 455.0(M+).
元素分析计算值C20H12Cl2N6OS：C，52.76；H，2.66；Cl，15.57；N，18.46；S，7.04.实测值：C，52.65；H，2.79；Cl，15.32；N，18.47；S，7.18.
化合物D-022
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2c(200mg，0.619mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(95mg，0.687mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了143mg白色结晶固体(53％)，mp151.4-154.2℃(褪色)。
         1H NMR(DMSO-d6)δ：13.55(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.23(dd，J＝6.3，8.7Hz，1H)；7.77(dd，J＝1.7，7.4Hz，1H)；7.64(d，J＝7.4Hz，1H)；7.57(d，J＝9.8Hz，1H)；7.45-7.52(m，3H)；4.48(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：169.0(d，J＝253Hz)，162.6，159.3，157.0，154.0，152.2，151.7(d，J＝13Hz)，146.1，136.5，134.7，134.2，134.0，13 3.0，132.6(d，J＝11Hz)，131.3，120.2，118.9(d，J＝24Hz)，115.3(d，J＝22Hz)，34.6.MS(ES)：m/z439.0(M+).元素分析计算值C20H12ClFN6OS·0.4-C2H6O·0.4H2O(0.15KCl：C，52.52；H，3.22；Cl，8.57；N，17.67.实测值：C，52.25；H，3.11；Cl，8.20；N，17.69.
化合物D-023
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2o(216mg，0.617mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.680mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了212mg黄色固体结晶(74％)，mp218.0-218.3℃(分解)。
           1H NMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.49(s，1H)；8.42(s，1H)；8.38-8.45(m，2H)；8.31(d，J＝8.4Hz，1H)；7.81(d，J＝6.5Hz，1H)；7.68(d，J＝6.7Hz，1H)；7.43-7.58(m，2H)；4.53(s，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm：157.7，154.4，153.3，149.8，149.3，147.6，145.2，141.4，131.5，129.8，129.7，129.2，128.4，127.1，126.7，122.7，120.3，119.4，29.9.MS(ES)：m/z 466.0(M+).元素分析计算值C20H12ClN7O3S·0.4C2H6O·0.05KCl：C，51.19；H，2.97；Cl，7.63；N，20.09；S，6.57.实测值：C，51.27；H，2.88；Cl，7.40；N，20.04；S，6.52.
化合物D-024
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2p(200mg，0.552mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(117mg，0.685mmol)、K2CO3(95mg，0.687mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了182mg白色固体，该白色固体是所需产物与乙酰基衍生物的混合物。将一份该白色固体(120mg)悬浮在MeOH(2mL)与NaHCO3水溶液(饱和，1mL)的混合物中，快速搅拌4小时。将该混合物真空浓缩，悬浮在H2O(10mL)中，并在4℃下贮存过夜。收集白色固体并干燥，获得了103mg产物(66％)，mp 186-214℃(逐渐分解)。
1H NMR(DMSO-d6)δ：8.48(s，1H)； 8.45(s，1H)；7.71(d，J＝6.8Hz，1H)；7.62-7.64(m，2H)；7.43-7.51(m，2H)；7.40-7.43(m，1H)；7.35(d，J＝8.8Hz，1H)；4.39-4.52(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.6，157.1，156.2，151.4，150.8，149.3，144.1，140.2，134.5，132.2，131.6，131.4，130.4，129.3，128.7，124.8，121.7，109.8，32.0.MS(ES)：m/z 437.0(M+).
元素分析计算值(2 C20H13ClN6O2S·0.1C2H6O·6H2O：C，49.68；H，3.88；Cl，7.26；N，17.21；S，6.57.实测值：C，49.43；H，3.62；Cl，7.32；N，17.07；S，6.58.
化合物D-025
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2f(300mg，0.883mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(165mg，0.972mmol)、K2CO3(134mg，0.972mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了341mg浅橙色结晶固体(85％)，mp233.7-234.4℃(分解)。
                  1H NMR(DMSO-d6)δ：13.58(brs，1H)；8.50(s，1H)；8.47(s，1H)；7.77-7.85(m，2H)；7.68(d，J＝8.1Hz，2H)；7.65(d，J＝7.7Hz，1H)；7.41-7.56(m，2H)；4.45(d，J＝1.2Hz，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.7，156.8，153.8，151.5，149.6，149.5，143.5，135.4，134.1，133.3，132.2，131.6，131.6，130.5，130.2，128.8，127.1，117.6，32.0.MS(ES)：m/z 455.0(M+).元素分析计算值C20H12Cl2N6-OS·C2H6O·0.3H2：C，52.14；H，3.70；Cl，13.99；N，16.58；S，6.33.实测值：C，52.07；H，3.37；Cl，13.40；N，16.65；S，6.42.
化合物D-026
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2g(300mg，0.940mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(176mg，1.03mmol)、K2CO3(142mg，1.03mmol)和DMF(5mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了324mg白色结晶固体(79％)，mp 227.8-230.1℃(分解)。
           1H NMR(DMSO-d6)δ：13.57(br s，1H)；8.49(s，1H)；8.47(s，1H)；7.69-7.78(m，2H)；7.66(d，J＝7.3Hz，1H)；7.55(d，J＝7.9Hz，1H)；7.39-7.52(m，2H)；7.36(d，J＝6.9Hz，1H)；4.38-4.50(m，2H)；2.74(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：161.2，156.3，152.4，151.5，148.6，143.9，141.0，134.6，134.5，132.3，131.7，131.4，130.4，130.2，128.7，125.7，119.0，32.0，22.8.MS(ES)：m/z 435.0(M+).
元素分析计算值C21H15ClN6OS·0.65C2H6O·0.1H2O：C，57.40；H，4.13；Cl，7.60；N，18.01；S，6.87.实测值：C，57.11；H，3.96；Cl，7.45；N，17.79；S，6.90.
化合物D-027
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2q(200mg，0.586mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(110mg，0.645mmol)、K2CO3(89mg，0.645mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了143mg浅黄色结晶固体(53％)，mp207.8℃(褪色；在136℃熔化)。
                         1H NMR(DMSO-d6)δ：13.57(br s，1H)；8.49(s，1H)；8.46(s，1H)；8.11(t，J＝9.4Hz，1H)；7.88(dd，J＝7.3，11Hz，1H)；7.77(dd，J＝1.7，7.3Hz，1H)；7.67(d，J＝7.4Hz，1H)；7.42-7.55(m，2H)；4.48(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：159.5(d，J＝2.5Hz)，154.6(dd，J＝14，255Hz)，154.0(d，J＝1.5Hz)，151.5，149.3(dd，J＝14，250Hz)，145.1(d，J＝12Hz)，143.9，133.9，132.1，131.8，131.4，130.5，128.9，118.0(d，J＝4.9Hz)，115.8(d，J＝18Hz)，114.6(d，J＝20Hz)，32.0.MS(ES)：m/z457.0(M+).元素分析计算值  C20H11ClF2N6OS：C，52.58；H，2.43；Cl，7.76；N，18.40；S，7.02.实测值：C，51.81；H，2.37；Cl，7.49；N，18.04；S，7.55.
化合物D-028
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中间体2r(118mg，0.365mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(68mg，0.402mmol)、K2CO3(56mg，0.402mmol)和DMF(2mL)进行制备。将粗产物从EtOH中重结晶，获得了103mg灰白色固体结晶(64％)，mp 232.8-233.0℃(褪色)。
         1H NMR(DMSO-d6)δ：13.56(br s，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；7.81-7.86(m，3H)；7.76(d，J＝7.5Hz，1H)；7.67(d，J＝7.5Hz，1H)；7.40-7.54(m，2H)；4.48(br s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：160.8(d，J＝247Hz)，160.2(d，J＝3.3Hz)，156.9，152.3(d，J＝1.9Hz)，151.5，149.7，144.0，143.6，134.1，132.1，131.7，131.5，130.5，130.4，130.2，128.8，124.0(d，J＝24Hz)，122.0(d，J＝8.7Hz)，111.7(d，J＝24Hz)，32.0.MS(ES)：m/z 439.0(M+).元素分析计算值C20H12ClFN6OS·0.2C2H6O·0.1H2O：C，54.46；H，3.00；Cl，7.88；N，18.68.实测值：C，54.09；H，2.73；Cl，7.80；N，18.77.
化合物D-029
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
将亚硫酰氯(2.2mL，30mmol)加到2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)在苯(50mL)内的搅拌着的溶液中，将该混合物加热回流18小时。冷却后，真空除去溶剂，并用苯(25mL)汽提两次。将残余物溶于CHCl3(50mL)中，用2-异丙基苯胺(2.83mL，20mmol)处理。然后将该浆液加热回流3小时。此时，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反应完全。冷却至室温后，将反应混合物倒入4cm硅胶柱上，并用20％EtOAc/己烷洗脱。合并含有产物的级份并真空浓缩。把残余物溶于HOAc(50mL)中，用氯乙酰氯(1.6mL，20mmol)处理，将该混合物加热回流18小时。将该反应冷却，并真空浓缩。通过与甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。将残余物溶于甲苯(10mL)中，倒入4cm硅胶柱上，用20％EtOAc/己烷洗脱。经LCMS(MS(ES)：m/z 327(M+))鉴定含有产物的级份，并真空浓缩，获得了975mg(30％)白色泡沫状物。将该白色泡沫状氯化物(450mg，1.36mmol)溶于DMF(10mL)中，用腺嘌呤(275mg，2.04mmol)和K2CO3(281mg，2.04mmol)处理，将该混合物在室温搅拌过夜。然后将该悬浮液倒入200mL水中，在室温搅拌30分钟，然后在冰箱中冷却30分钟。通过真空过滤收集生成的固体并从EtOH中重结晶，获得了285mg(49％)灰白色固体，mp258.0-258.2℃。
                    1H NMR(DMSO-d6)δ：8.19(s，1H)，8.09(s，1H)，7.60(m，3H)，7.45(m，2H)，7.23(m，3H)，5.11(d，J＝17.5Hz，1H)，4.71(d，J＝17.5Hz，1H)，2.68(s，3H)，2.73(q，J＝6.9Hz，1H)，1.34(d，J＝6.8Hz，3H)，1.13(d，J＝6.8Hz，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：161.9，156.2，152.8，151.6，150.1，148.4，146.1，142.2，140.8，134.3，133.7，130.6，130.0，129.0，127.7，127.6，125.8，119.2，118.4，44.8，28.3，24.4，23.3，22.9.MS(ES)：m/z426.4(M+).元素分析计算值C24H23N7O：C，67.75；H，5.45；N，23.04.实测值：C，67.60；H，5.45；N，22.82.
化合物D-030
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
将亚硫酰氯(2.2mL，30mmol)加到2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)在苯(50mL)内的搅拌着的溶液中，将该混合物加热回流18小时。冷却后，真空除去溶剂并用苯(25mL)汽提两次。将残余物溶于CHCl3(50mL)中，用邻甲苯胺(2.13mL，20mmol)处理。然后将该浆液加热回流3小时。此时，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反应完全。冷却至室温后，将该反应混合物倒入4cm硅胶柱上，并用20％EtOAc/己烷洗脱。合并含有产物的级份并真空浓缩。将残余物溶于HOAc(50mL)中，用氯乙酰氯(1.6mL，20mmol)处理，将该混合物加热回流18小时。将该反应冷却，并真空浓缩。通过与甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。将残余物溶于甲苯(10mL)中，倒入4cm硅胶柱上，用20％EtOAc/己烷洗脱。经LCMS[MS(ES)：m/z 299(M+))鉴定含有产物的级份，真空浓缩，获得了476mg(16％)白色泡沫状物。将该白色泡沫状氯化物(470mg，1.57mmol)溶于DMF(10mL)中，用腺嘌呤(423mg，3.14mmol)和K2CO3(433mg，3.14mmol)处理，将该混合物在室温搅拌过夜。然后将悬浮液倒入200mL H2O中，在室温搅拌30分钟，然后在冰箱中冷却30分钟。通过真空过滤收集生成的固体，从EtOH中重结晶，获得了123mg(20％)灰白色固体，mp281.5-282.7℃(分解)。
                                     1H NMR(DMSO-d6)δ：8.07(s，1H)； 8.05(s，1H)；7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.48(m，4H)，7.25(m，3H)，5.09(d，J＝17.4Hz，1H)，4.76(d，J＝17.4Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.18(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：161.3，156.2，152.8，151.4，150.0，148.5，142.2，140.9，136.1，135.4，134.3，131.7，130.1，130.0，129.0，128.0，125.8，119.2，118.5，44.8，22.9，17.4.MS(ES)：m/z 398.2(M+).元素分析计算值C22H19N7O：C，66.49；H，4.82；N，24.67.实测值：C，66.29；H，4.78；N，24.72.
化合物D-031
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
将亚硫酰氯(2.2mL，30mmol)加到2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)在苯(50mL)内的搅拌着的溶液中，将该混合物加热回流18小时。冷却后，真空除去溶剂并用苯(25mL)汽提两次。将残余物溶于CHCl3(50mL)中，用2-氟苯胺(1.93mL，20mmol)处理。然后将该浆液加热回流3小时。此时，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反应完全。冷却至室温后，将该反应混合物倒入4cm硅胶柱上，用20％EtOAc/己烷洗脱。合并含有产物的级份并真空浓缩。将残余物溶于HOAc(50mL)中，用氯乙酰氯(1.6mL，20mmol)处理，将该混合物加热回流18小时。将该反应冷却，并真空浓缩。通过与甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。将残余物溶于甲苯(10mL)中，倒入4cm硅胶柱上，用20％EtOAc/己烷洗脱。经LCMS[MS(ES)：m/z 303(M+))鉴定含有产物的级份，并真空浓缩，获得了1.12g(37％)白色泡沫状物。将该白色泡沫状氯化物(455mg，1.50mmol)溶于DMF(10mL)中，用6-巯基嘌呤一水合物(510mg，3.0mmol)和K2CO3(414mg，3.0mmol)处理，将该混合物在室温搅拌过夜。然后将该悬浮液倒入200mL水中，在室温搅拌30分钟，然后在冰箱中冷却30分钟。通过真空过滤收集生成的固体，从EtOH中重结晶，获得了487mg(77％)灰白色固体，mp151.9-152.2℃。
                                        1HNMR(DMSO-d6)δ：8.48(s，1H0，8.44(s，1H)，7.70(m，2H)，7.48(m，2H)，7.33(m，3H)，4.55(d，J＝15.1Hz，1H)，4.48(d，J＝15.1Hz，1H)，2.73(s，3H).13CNMR(DMSO-d6)ppm：161.3，157.8(d，J＝249.1Hz)，156.9，152.8，151.5，149.6，148.6，143.6，140.9，134.7，131.9(d，J＝8.0Hz)，131.4，130.2，，125.6(d，J＝3.6Hz)，125.5，124.4(d，J＝13.5Hz)，118.8，116.6(d，J＝19.6Hz)，56.4，22.9.MS(ES)：m/z419.5(M+).元素分析计算值C21H15FN6OS·0.15 C2H6O：C，60.14；H，3.77；F，4.47；N，19.76；S，7.54.
实测值：C，59.89；H，3.88；F，4.42；N，19.42；S，7.23.
化合物D-032
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用2j(200mg，0.626mmol)、腺嘌呤(93mg，0.689mmol)、K2CO3(95mg，0.689mmol)和DMF(3mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，获得了101mg灰白色固体(39％)，mp262.0-266.5℃。
     1H NMR(DMSO-d6)δ：8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.70(t，J＝8.0Hz，1H)；7.58(dd，J＝0.6，7.9Hz，1H)；7.43-7.57(m，4H)；7.36(dd，J＝0.7，8.0Hz，1H)；7.26(br s，2H)；5.12(d，J＝18Hz，1H)；4.78(d，J＝18Hz，1H)；2.20(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm：158.7，156.2，152.9，152.7，1.50.0，149.4，142.1，136.1，135.1，135.0，133.2，131.8，130.3，130.1，128.9，128.1，127.2，118.5，117.9，44.9，17.4.MS(ES)：m/z 418.1(M+).元素分析计算值C21H16ClN7O·0.1H2O·0.05KCl：C，59.57；H，3.86；Cl，8.79；N，23.16.实测值：C，59.65；H，3.80；Cl，8.70；N，22.80.
化合物D-033
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用21(250mg，0.746mmol)、腺嘌呤(111mg，0.821mmol)、K2CO3(113mg，0.821mmol)和DMF(4mL)进行制备。将粗产物在MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，并从EtOH中重结晶，获得了124mg棕色固体(38％)，mp 257.0-257.1℃。
                                1H NMR(DMSO-d6)δ：8.06(s，1H)；8.01(s，1H)；7.71(t，J＝8.0Hz，1H)；7.57(dd，J＝0.9，7.9Hz，1H)；7.52-7.59(m，1H)；7.50(dd，J＝1.6，7.8Hz，1H)；7.38(dd，J＝1.1，8.2Hz，1H)；7.27(dd，J＝0.6，8.3Hz，1H)；7.24(brs，2H)；7.17(dt，J＝0.9，7.6Hz，1H)；5.07(d，J＝17Hz，1H)；4.97(d，J＝17Hz，1H)；3.79(s，3H).13CNMR(DMSO-d6)ppm：158.8，156.2，154.7，153.2，152.8，150.1，149.3，142.0，135.1，133.2，131.8，130.1，130.1，127.2，123.8，121.6，118.4，117.9，113.1，56.2，44.8.MS(ES)：m/z 434.0(M+).
元素分析计算值C21H16ClN7O2·0.5H2O·0.04KCl：C，56.57；H，3.84；Cl，8.27；N，21.99.实测值：C，56.29；H，3.75；Cl，8.21；N，21.61.
一般按照上述方法方法制备下列化合物，以进一步举例说明本发明化合物的具体实施方案：
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-034)
3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-035)
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-036)
3-苄基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-037)
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-038)
3-吗啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐(D-039)
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-040)
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-041)
2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮(D-042)
3-苄基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-043)
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐(D-044)
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯(D-045)
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-046)
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-047)
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-048)
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-苄基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(D-049)
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮(D-050)
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-吗啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸盐(D-051)
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-052)
通过以下合成方法制备其它本发明化合物。
通过上述方法A制备以下中间体。
Figure A0282568701241
3a R＝环丙基
3b R＝环丙基甲基
3c R＝苯乙基
3d R＝环戊基
3e R＝3-(2-氯)吡啶基
3f R＝4-(2-甲基)苯甲酸
3g R＝4-硝基苄基
3h R＝环己基
3i R＝E-(2-苯基)环丙基
在下面的实验部分中讨论具有以下母核结构的其它本发明化合物(D-053至D-070)。所有这些化合物都是按照方法C制备的。
母核结构：
Figure A0282568701242
化合物编号 R R’
 D-053 环丙基 C
 D-054 环丙基甲基 B
 D-055 环丙基甲基 A
 D-056 环丙基甲基 C
 D-057 苯乙基 B
 D-058 苯乙基 C
 D-059 环戊基 B
 D-060 环戊基 A
 D-061 3-(2-氯)吡啶基 B
 D-062 3-(2-氯)吡啶基 A
 D-063 4-(2-甲基)苯甲酸 B
 D-064 环丙基 B
 D-065 环丙基 A
 D-066 4-硝基苄基 B
 D-067 环己基 B
 D-068 环己基 A
 D-069 环己基 C
 D-070 E-(2-苯基)环丙基 B
Figure A0282568701261
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-053)
按照方法C，使用3a(100mg，0.4mmol)、2-氨基-6-巯基嘌呤(80mg，0.48mmol)和K2CO3(77mg，0.56mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                                        1H NMR(DMSO-d6)δ：7.89(d，J＝0.9Hz，1H)；7.54(t，J＝7.4Hz，1H)；7.34(d，J＝8.1Hz，1H)；7.19(d，J＝7.2Hz，1H)；6.28(s，2H)；4.94(s，2H)；2.70(s，3H)；1.24(d，J＝6.5Hz，2H)；0.91(s，2H).MS(ES)：m/z 380(M+H)，190.
3-环丙基甲基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-054)
按照方法C，使用3b(300mg，1.14mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(214mg，1.26mmol)和K2CO3(189mg，1.37mmol)进行制备。通过从H2O中研制，然后从MeOH中重结晶来纯化产物。
                                     1H NMR(DMSO-d6)δ：13.60(br s，1H)；8.72(s，1H)；8.48(s，1H)；7.63(t，J＝7.8Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，1H)；7.28(d，J＝7.3H2，1H)；5.01(s，2H)；4.11(d，J＝6.8Hz，2H)；2.78(s，3H)；1.35(五重峰，J＝6.2Hz，1H)；0.44-0.59(m，4H).MS(ES)：m/z 379(M+H)，325.
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-055)
按照方法C，使用3b(300mg，1.14mmol)、腺嘌呤(170mg，1.26mmol)和K2CO3(189mg，1.37mmol)进行制备。通过从H2O中研制，然后从MeOH中重结晶来纯化产物。
             1H NMR(DMSO-d6)δ：8.21(s，1H)；8.10(s，1H)；7.52(t，J＝7.7Hz，1H)；7.18-7.31(m，3H)；7.06(d，J＝8.1Hz，1H)；5.68(s，2H)；4.14(d，J＝6.8Hz，2H)；2.77(s，3H)；1.34(quint，J＝6.4Hz，1H)；0.45-0.60(m，4H).MS(ES)：m/z 362(M+H)，308.
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-056)
按照方法C，使用3b(280mg，1.1mmol)、2-氨基-6-巯基嘌呤(200mg，1.2mmol)和K2CO3(180mg，1.3mmol)进行制备。通过从MeOH中研制来纯化产物。
                            1H NMR(DMSO-d6)δ：12.70(br s，1H)；7.95(s，1H)；7.64(t.J＝7.8Hz，1H)；7.44(d，J＝7.9Hz，1H)；7.28(d，J＝7.4Hz，1H)；6.41(s，2H)；4.91(s，2H)；4.05(d，J＝6.8Hz，2H)；2.78(s，3H)；1.26-1.43(m，1H)；0.36-0.56(m，4H).MS(ES)：m/z 394(M+H)，340.
5-甲基-3-苯乙基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-057)
按照方法C，使用3c(750mg，2.4mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(442mg，2.6mmol)和K2CO3(398mg，2.9mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                                      1H NMR(DMSO-d6)δ：13.61(s，1H)；8.71(s，1H)； 8.48(s，1H)；7.65(t，J＝7.7Hz，1H)；7.44(d，J＝7.9Hz，1H)；7.16-7.35(m，6H)；4.89(s，2H)；4.29(br t，J＝7.9Hz，2H)；3.08(br t，J＝7.8Hz，2H)；2.81(s，3H).MS(ES)：m/z 429(M+H)，105.
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-苯乙基-3H-喹唑啉-4-酮(D-058)
按照方法C，使用3c(750mg，2.4mmol)、2-氨基-6-巯基嘌呤(435mg，2.6mmol)和K2CO3(398mg，2.9mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                                1H NMR(DMSO-d6)δ：12.61(s，1H)；7.95(s，1H)；7.65(t，J＝7.7Hz，1H)；7.45(d，J＝7.9Hz，1H)；7.14-7.32(m，6H)；6.44(s，2H)；4.81(s，2H)；4.24(br t，J＝7.9Hz，2H)；3.04(br t，J＝7.8Hz，2H)；2.81(s，3H).MS(ES)：m/z 444(M+H)，340.
3-环戊基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-059)
按照方法C，使用3d(100mg，0.36mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(73mg，0.43mmol)和K2CO3(100mg，0.72mmol)进行制备。通过从MeOH中重结晶来纯化产物。
1H NMR(DMSO-d6)δ：13.62(br s，1H)；8.77(s，1H)；8.48(s，1H)；7.62(t，J＝7.7Hz，1H)；7.42(d，J＝7.8Hz，2H)；7.26(d，J＝7.4Hz，1H)；5.03(s，2H)；4.80(quint，J＝8.0Hz，1H)；2.76(s，3H)；2.12-2.31(m，2H)；1.79-2.04(m，4H)；1.44-1.58(m，2H).MS(ES)：m/z 393(M+H)，325.
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环戊基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-060)
按照方法C，使用3d(100mg，0.36mmol)、腺嘌呤(58mg，0.43mmol)和K2CO3(100mg，0.72mmol)进行制备。通过从MeOH中重结晶来纯化产物。
                            1H NMR(DMSO-d6)δ：8.15(s，1H)；8.11(s，1H)；7.52(t，J＝7.7Hz，1H)；7.16-7.31(m，3H)；7.10(d，J＝8.0Hz，2H)；5.68(s，2H)；4.78(quint，J＝8.3Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.09-2.32(m，2H)；1.86-2.04(m，2H)；1.68-1.86(m，2H)；1.43-1.67(m，2H).MS(ES)：m/z 376(M+H)，308，154.
3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-061)
按照方法C，使用3e(500mg，1.6mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(289mg，1.7mmol)和K2CO3(262mg，1.9mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。MS(ES)：m/z 436(M+H)，200。
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-062)
按照方法C，使用3e(500mg，1.6mmol)、腺嘌呤(230mg，1.7mmol)和K2CO3(262mg，1.9mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                     1H NMR(DMSO-d6)δ：8.59(dd，J＝1.7，4.8Hz，1H)；8.22(dd，J＝1.7，7.8Hz，1H)：8.025(s，1H)；8.017(s，1H)；7.60-7.72(m，2H)；7.35(t，J＝8.2Hz，2H)；7.22(s，2H)；5.12(d，J＝17.0Hz，1H)；5.02(d，J＝17.0Hz，1H)；2.72(s，3H).MS(ES)：m/z 419(M+H).
3-甲基-4-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]苯甲酸(D-063)
按照方法C，使用3f(400mg，1.17mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(219mg，1.29mmol)和K2CO3(226mg，1.64mmol)进行制备。通过从MeOH中重结晶来纯化产物。
1H NMR(DMSO-d6)δ：13.54(br s，1H)；8.44(s，1H)；8.42(s，1H)；7.80(s，2H)；7.71(t，J＝7.7Hz，1H)；7.59(d，J＝8.6Hz，1H)；7.52(d，J＝7.9Hz，1H)；7.34(d，J＝7.4Hz，1H)；4.46(d，J＝15.4Hz，1H)；4.34(d，J＝15.7Hz，1H)；3.17(d，J＝4.4Hz，1H)；2.73(s，3H)；2.17(s，3H).MS(ES)：m/z 459(M+H).
3-环丙基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-064)
按照方法C，使用3a(100mg，0.40mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(90mg，0.53mmol)和K2CO3(97mg，0.7mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                                        1H NMR(DMSO-d6)δ：8.69(d，J＝0.8Hz，1H)；8.47(s，1H)；7.57(d，J＝7.9Hz，1H)；7.37(d，J＝8.1Hz，1H)；7.23(d，J＝7.3Hz，1H)；5.08(s，2H)；3.06-3.18(m，1H)；2.74(s，3H)；1.14-1.36(m，2H)；0.92-1.06(m，2H).
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-065)
按照方法C，使用3a(100mg，0.40mmol)、腺嘌呤(94mg，0.7mmol)和K2CO3(121mg，0.88mmol)进行制备。通过从H2O中研制来纯化产物。
                     1H NMR(DMSO-d6)δ：8.19(d，J＝0.9Hz，1H)；8.09(d，J＝1.0Hz，1H)；7.48(t，J＝7.8Hz，1H)；7.13-7.29(m，3H)；7.04.(d，J＝8.1Hz，1H)；5.74(s，2H)；3.00-3.13(m，1H)；2.73(s，3H)；1.18-1.38(m，2H)；0.94-1.09(m，2H).
5-甲基-3-(4-硝基苄基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-066)
按照方法C，使用3g(200mg，0.58mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(148mg，0.87mmol)和K2CO3(160mg，1.16mmol)进行制备。通过从MeOH中研制来纯化产物。
                                           1HNMR(DMSO-d6)δ：13.44(br s，1H)；8.50(s，1H)；8.31(s，1H)；8.03(d，J＝8.6Hz，2H)；7.58(t，J＝7.9Hz，1H)；7.37(d，J＝8.3Hz，3H)；7.22(d，J＝7.5Hz，1H)；5.44(s，2H)；4.70(s，2H)；2.66(s，3H).MS(ES)：m/z 460(M+H).
3-环己基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-067)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(97mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)进行制备。通过从MeOH中研制来纯化产物。
                                          1H NMR
(DMSO-d6)δ：13.66(br s，1H)； 8.82(s，1H)；8.50(s，1H)；7.62(t，J＝7.7Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，1H)；7.26(d，J＝7.3Hz，1H)；5.01(s，2H)；4.11(brs，1H)；2.75(s，3H)；2.38-2.65(m，2H)；1.58-1.90(m，4H)；1.37-1.57(m，1H)；0.71-1.26(m，3H).MS(ES)：m/z 407(M+H)，325.
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-068)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、腺嘌呤(77mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)进行制备。通过从MeOH中研制来纯化产物。
                      1H NMR(DMSO-d6)δ：8.15(s，2H)；7.54(t，J＝7.9Hz，1H)； 7.06-7.35(m，4H)；5.65(s，2H)；4.09(br s，1H)；2.73(s，3H)；1.41-1.90(m，6H)；0.99-1.34(m，4H).MS(ES)：m/z 390(M+H)，308.
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-069)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、2-氨基-6-巯基嘌呤(95mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)进行制备。通过反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220)纯化产物。MS(ES)：m/z 422(M+H)，340，170。
5-甲基-3-(E-2-苯基环丙基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-070)
按照方法C，使用3i和6-巯基嘌呤一水合物进行制备。通过反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220)纯化产物。MS(ES)：m/z 441。
以下的方法1和2用作下列化合物的HPLC分析：
HPLC方法1.柱：2×50mm C18 Luna柱(得自Phenomenex)，流速：0.3mL/分钟，在214和254nm进行UV检测。初始条件：2％溶剂B在溶剂A中的混合物；t＝3分钟，20％溶剂B；t＝6分钟，80％溶剂B，其中溶剂A＝含有0.05％甲酸的水，溶剂B＝含有0.05％甲酸的乙腈。
HPLC方法2.柱：2×50mm C18 Luna柱(得自Phenomenex)，流速：0.3mL/分钟，在214和254nm进行UV检测。初始条件：6分钟内10-100％溶剂B在溶剂A中的混合物，其中溶剂A＝水，溶剂B＝乙腈。
化合物D-070A和D-070B是如下所示制备的：
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-苄氧基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-070A)
使用方法A，将6-甲基邻氨基苯甲酸和2-苄氧基苯胺转化成中间体(1s)。使用B，将中间体(1s)转化成中间体(2s)。使用方法C，将中间体(2s)转化成D-070A。使用HPLC方法2的保留时间：4.7分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝490(M+1)。
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-羟基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-070B)
将D-070A(35mg，0.07mmol)和Pd(OH)2(20％重量，以碳为载体，50mg)在乙醇(5mL)中的混合物于40psi氢气下摇动24小时。通过经由0.22μm乙酸纤维素膜(Corning)过滤来除去催化剂，将滤液真空浓缩，获得了固体产物(10mg)。使用HPLC方法2的保留时间：3.6分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝400(M+1)。
依据下述反应方案制备化合物D-070C至D-070F。
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-{2-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)-乙氧基)-苯基}-3H-喹唑啉-4-酮(D-070C)
将D-070B(30mg，0.075mmol)、2-(2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(28mg，0.15mmol)和碳酸钾(50mg，0.36mmol)在DMF(0.3mL)中的混合物于80℃搅拌16小时。真空除去溶剂，然后将残余物溶解在DMSO/水(1mL)中，分两批通过HPLC纯化(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为2-50％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，所有溶剂都含有0.05％TFA，检测器设置在2201)。将适当级份真空浓缩，然后从1N HCl(1mL)中浓缩两次，获得了盐酸盐形式的终产物(10mg)。使用HPLC方法1的保留时间：4.7分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝511(M+1)。
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-070D)
Figure A0282568701361
将D-070B(30mg，0.075mmol)、2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(28mg，0.15mmol)和碳酸钾(50mg，0.36mmol)在DMF(0.3mL)中的混合物于80℃搅拌16小时。真空除去溶剂，然后将残余物溶解在DMSO/水(1mL)中，分两批通过HPLC纯化(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为2-50％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，所有溶剂都含有0.05％TFA，检测器设置在2201)。将适当级份真空浓缩，然后从1N HCl(1mL)中浓缩两次，获得了盐酸盐形式的终产物(14mg)。使用HPLC方法1的保留时间：4.5分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝485(M+1)。
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-(2-丙-2-炔基氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-070E)
Figure A0282568701362
将D-070B(20mg，0.05mmol)、炔丙基氯(0.025mL，0.33mmol)和碳酸钾(14mg，0.1mmol)在DMF(0.3mL)中的混合物于80℃搅拌16小时。将该反应混合物冷却至室温，用水(5mL)处理，通过过滤收集所得深棕色沉淀。将固体粗产物溶解在0.6mL DMSO中，通过HPLC纯化(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在2201)。将适当级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(4mg)。使用HPLC方法2的保留时间：4.1分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝438(M+1)。
2-(2-(2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-苯氧基}-乙酰胺(D-070F)
将D-070B(20mg，0.05mmol)、2-氯乙酰胺(14mg，0.15mmol)和碳酸钾(21mg，0.15mmol)在DMF(0.3mL)中的混合物于80℃搅拌16小时。将该反应混合物冷却至室温，用水(5mL)处理，通过过滤收集所得沉淀。使用HPLC方法2的保留时间：3.4分钟。LRMS(ES pos.)m/z＝457(M+1)。
通过下列合成方法制得了另外的本发明化合物。
以下为另外的本发明化合物以及化合物D-071至D-118的合成途径。
方法D
Figure A0282568701381
方法E
Figure A0282568701401
Figure A0282568701411
Figure A0282568701421
方法F
方法D：将酰胺4a或4b、FMOC-甘氨酰氯和冰醋酸的混合物在120℃加热1-4小时。将所得混合物真空浓缩，通过快速色谱法纯化，获得了保护的、环合的胺。将该胺与10当量的辛硫醇和催化量的DBU在THF中合并，在室温搅拌直至LCMS表明原料完全消耗。将该反应直接倒入快速柱(在CH2Cl2中平衡的)上，用0-5％ MeOH/CH2Cl2洗脱，获得了游离形式的胺5a或5b。按照类似方法，使用(±)-FMOC-丙氨酰氯代替FMOC-甘氨酰氯，制得了化合物5c。
方法D1：将酰胺4a与Cbz-α-氨基丁酸OSu、DIEA、DMAP(催化剂)和甲苯混和，然后在回流状态下搅拌3天。通过快速色谱法纯化所得混合物(EtOAc/己烷)，获得了保护的、环合的胺。将该胺与催化量的Pd/C溶解在EtOH中，在氢气氛下于室温搅拌直至LCMS表明反应完全。将该反应混合物过滤，将滤液真空浓缩。通过快速色谱法纯化(MeOH/CH2Cl2)，获得了游离形式的胺5d。
方法D2：将酰胺4a与Boc-丝氨酸(OBn)-OSu、DIEA、DMAP(催化剂)和甲苯合并，然后在回流状态下搅拌4天。通过快速色谱法纯化所得混合物(EtOAc/己烷)，获得了保护的、环合的胺。将该产物溶解在TFA与CH2Cl2的混合物中，在室温搅拌直至LCMS表明反应完全。将该反应真空浓缩，通过快速色谱法纯化(MeOH/CH2Cl2)，获得了游离形式的胺5e。
方法E：将化合物5(a-e)、合适的6-氯嘌呤或6-溴嘌呤和DIEA与EtOH或DMF在小瓶中合并，加热至80℃。通过LCMS定时监测该反应，并如上所述进行纯化。
方法F：将酰胺4b、乙酰氧基乙酰氯和冰醋酸的混合物加热至120℃，并搅拌2小时。将该冷却的反应过滤，用CH2Cl2洗涤，获得了环合的乙酸酯，为白色固体。将该固体与K2CO3在含水甲醇中合并，搅拌1小时，然后真空浓缩。将所得固体从H2O中研制，获得了6a，为白色固体。
Figure A0282568701431
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3H-喹唑啉-4-酮(D-072)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5b(50mg，0.165mmol)和6-氯嘌呤(26mg，0.165mmol)进行制备。5天后，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该反应。
                                1H NMR(DMSO-d6)δ：12.99(br s，1H)；8.14(br s，1H)；8.12(s，1H)；7.85(dt，J＝5.7，8.1Hz.，1H)；7.68-7.79(m，3H)；7.57(t，J＝6.2Hz.，1H)；7.57(d，J＝7.7Hz.，1H)；7.50(d，J＝8.1Hz.，1H)；7.35(dd，J＝8.4，10.7Hz.，1H)；4.15-4.55(m，2H).MS(ES)：m/z 422(M+H)，211.
Figure A0282568701441
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-(2-氯-苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(D-074)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5b(50mg，0.165mmol)和2-氨基-6-氯嘌呤(28mg，0.165mmol)进行制备。5天后，通过HPLC(C18Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该反应。
1H NMR(DMSO-d6)δ：12.13(br s，1H)；7.86(dt，J＝5.6，8.2Hz.，1H)；7.76-7.83(m，2H)；7.68(br s，1H)；7.61(t，J＝5.7Hz.，1H)；7.61(d，J＝7.2Hz.，1H)；7.53(d，J＝8.2Hz.，1H)；7.35(dd，J＝8.2，10.9Hz.1H)；5.66(br s，2H)；4.16-4.50(m，1H)；4.09(q，J＝5.3Hz.，2H).MS(ES)：m/z 437(M+H)，219.
5-甲基-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-071)
按照方法E，使用6-氯嘌呤(11mg，0.072mmol)和5a(20mg，0.072mmol)进行制备。5天后，用水中止该反应，将所得悬浮液过滤。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该固体。
                      1H NMR(DMSO-d6)δ：12.98(br s，1H)；8.14(br s，1H)；8.10(s，1H)；7.58-7.79(m，2H)；7.37-7.48(m，4H)；7.26-7.36(m，2H)；3.93-4.39(m，2H)；2.75(s，3H)；2.18(s，3H).MS(ES)：m/z 398(M+H)，199.
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-073)
按照方法E，使用在3mL EtOH中的5a(189mg，0.677mmol)和2-氨基-6-氯嘌呤(115mg，0.677)进行制备。3天后，将该反应过滤以除去过量嘌呤，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化滤液，获得了7mg TFA盐形式的产物。
                                    1HNMR(DMSO-d6)δ：8.88(br s，1H)；8.21(s，1H)；7.71(t，J＝7.7Hz.，1H)；7.45-7.56(m，2H)；7.38-7.44(m，3H)；7.35(d，J＝7.5Hz.，1H)；7.30(br s，1H)；4.40(dd，J＝4.5，17.5Hz.，1H)；4.27(dd，J＝5.3，17.4Hz.，1H)；2.75(s，3H)；2.09(s，3H).MS(ES)：m/z 413(M+H)，207，163.
Figure A0282568701461
2-[(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-076)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5a(20mg，0.072mmol)和2-氟-6-氯嘌呤(16mg，0.094mmol)进行制备。18小时后，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该反应，然后从EtOH中重结晶，获得了14mg产物，为黄色固体。
                                        1HNMR(DMSO-d6)δ：13.12(br s，1H)；8.40(br s，1H)；8.15(s，1H)；7.66(t，J＝7.7Hz，1H)；7.35-7.49(m，4H)；7.31(d，J＝7.2Hz.，1H)；4.00-4.22(m，2H)；3.17(s，1H)；2.74(s，3H)；2.18(s，3H).MS(ES)：m/z 416(M+H)，208.
Figure A0282568701462
(2-氯苯基)-二甲基氨基-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-075)
将D-015(100mg，0.228mmol)与氢氧化铝(28-30％，1mL)在DMF(2mL)中合并，加热至80℃。2天后，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该反应，获得了约2mg产物，为黄色固体。
                               1H NMR(DMSO-d6)δ：13.52(br s，1H)；8.46(s，1H)；8.42(s，1H)；7.69(dd，J＝2.1，7.3Hz，1H)；7.62(dd，J＝1.6，7.6Hz.，1H)；7.61(t，J＝8.0Hz.，1H)；7.37-7.48(m，2H)；7.05(d，J＝7.9Hz.，1H)；6.96(d，J＝7.8Hz.，1H)；4.32-4.45(m，2H)；2.80(s，6H).MS(ES)：m/z464(M+H)，232.
5-(2-苄氧基乙氧基)-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-078)
向2-苄氧基乙醇(0.3mL)在DMF(1.0mL)内的溶液中加入NaH(50mg，2.08mmol)。搅拌5分钟后，取出0.5mL该混合物加到D-015(50mg，0.114mmol)在无水DMF(0.75mL)内的溶液中。将该反应加热至50℃，搅拌3天。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化，获得了150μg产物，为不均匀的固体。MS(ES)：m/z571(M+H)，481。
Figure A0282568701481
6-氨基嘌呤-9-甲酸3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基甲酯(D-079)
在0℃，向3b(20mg，0.066mmol)在CH2Cl2(500μL)内的溶液中加入光气(2M/甲苯，36μL，0.072mmol)，然后加入腺嘌呤(10mg，0.072mmol)和DIEA(25μL，0.145mmol)。让该反应达到室温，搅拌8天。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化，获得了作为混合物的产物。
1H NMR (DMSO-d6)δ：11.04(br s，1H)； 8.61(s，1H)；8.40(s，1H)；7.85-7.95(m，1H)；7.76(dd，J＝5.4，9.6Hz，1H)；7.70-7.78(m，1H)；7.52-7.63(m，3H)；7.38(dt，J＝8.3，10.6Hz.，1H)；4.76-4.89(m，2H).MS(ES)：m/z 466(M+H)，331，305.
N-[3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基甲基]-2-(9H-嘌呤-6-基硫基)-乙酰胺(D-077)
将(9H-嘌呤-6-基硫基)-乙酸(63mg，0.296mmol)、5b(108mg，0.355mmol)、EDC(68mg，0.355mmol)、HOBT(48mg，0.355mmol)、DIEA(62μL，0.355mmol)和DMF(1mL)在烧瓶中合并，在室温搅拌1小时。将该反应用EtOAc(20mL)稀释，用稀盐水(2×13mL)洗涤。将有机相真空浓缩，在5％MeOH/CH2Cl2中色谱纯化，获得了91mg产物，为粘稠的粉红色泡沫状物。
                                 1H NMR(DMSO-d6)δ：12.88(br s，1H)；8.72(s，1H)；8.62(t，J＝5.0Hz，1H)；8.49(s，1H)；7.88(dt，J＝5.6，8.2Hz，1H)；7.73-7.78(m，1H)；7.67-7.72(m，1H)；7.57-7.65(m，2H)；7.38(d，J＝8.1Hz.，1H)；7.36(dd，J＝8.3，11.1Hz.，1H)；4.11-4.24(m，2H)；3.96(dd，J＝5.0，17.4Hz，1H)；3.78(dd，J＝5.2，17.4Hz，1H).MS(ES)：m/z 496(M+H)，248.
Figure A0282568701491
2-[1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-080)
按照方法E，使用在1.2mL EtOH中的5c(50mg，0.17mmol)和2-氟-6-氯嘌呤(35mg，0.204mmol)进行制备。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化，获得了两种阻转异构体(atropisomer)，为白色固体。一种阻转异构体的数据如下：
      1H NMR(DMSO-d6)δ：8.48(br d，J＝6.4Hz，1H)；8.17(s，1H)；7.69(t，J＝7.8Hz，1H)；7.53(d，J＝7.8Hz，1H)；7.44(d，J＝7.8Hz，2H)；7.33(d，J＝7.2Hz，2H)；7.07(br t，J＝7.2Hz，1H)；4.80(brt，J＝6.8Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.09(s，3H)；1.38(d，J＝6.7Hz，3H).MS(ES)：m/z 430(M+H)，215.
Figure A0282568701501
5-甲基-2-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081)
按照方法E，使用在1.2mL EtOH中的5c(50mg，0.17mmol)和6-氯嘌呤(32mg，0.204mmol)进行反应。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化，获得了两种阻转异构体，为黄色固体。一种阻转异构体的数据如下：
                                           1HNMR(DMSO-d6)δ：8.39(br s，1H)；8.34(s，1H)；8.18(s，1H)；7.71(t，J＝7.7Hz，1H)；7.56(d，J＝7.9Hz，1H)；7.49(d，J＝6.9Hz，1H)；7.28-7.43(m，3H)；7.20(br s，1H)；5.06(br s，1H)；2.73(s，3H)；2.04(s，3H)；1.51(d，J＝6.6Hz，3H).MS(ES)：m/z 412(M+H)，206.
2-(1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081a)
依据方法E，使用在1mL EtOH中的化合物5c(61mg，0.209mmol)和2-氨基-6-氯嘌呤(43mg，0.251mmol)进行合成。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在2201)纯化，获得了由两种阻转异构体(其NMR在方括号中给出)混合物组成的白色固体。
                        1H NMR(DMSO-d6)δ：8.93-9.02(m，1H)；[8.19(s)，8.15(s)，1H]；[7.76(t，J＝8.1Hz)，7.73(t，J＝7.8Hz)，1H]；[7.64(d，J＝7.9Hz)，7.57(d，J＝8.0Hz)，1H]；[7.50(d，J＝7.7Hz)，7.45(d，J＝7.8Hz)，1H]；7.29-7.40(m，3H)；[7.23(t，J＝7.5Hz)，7.15-7.22(m)，1H]；[7.09(t，J＝7.5Hz)，6.98(d，J＝7.3Hz)，1H]；[5.28(dd，J＝7.2，8.0Hz)，4.96(pent，J＝7.0Hz)，1H]；2.75(s，3H)；[2.10(s)，1.84(s)，3H]；[1.51(d，J＝6.6Hz)，1.39(d，J＝6.7Hz)，3H].MS(ES)：m/z 427(M+H)，214.
5-甲基-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081b)
依据方法E，使用在2mL EtOH中的化合物5d(100mg，0.325mmol)和6-溴嘌呤(78mg，0.390mmol)进行合成。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在22 01)纯化，获得了两种阻转异构体，为黄色固体。一种异构体的数据如下：
1H NMR(DMSO-d6)δ：8.64(br s，1H)；8.44(s，1H)；8.27(s，1H)；7.72(t，J＝7.7Hz，1H)；7.56(d，J＝8.0Hz，1H)；7.50(d，J＝6.6Hz，1H)；7.34-7.44(m，2H)；7.35(d，J＝7.4Hz，1H)；7.18-7.27(m，1H)；4.85-5.01(m，1H)；2.73(s，3H)；2.04-2.19(m，1H)；1.99(s，3H)；1.78-1.91(m，1H)；0.79(t，J＝7.0Hz，3H).MS(ES)：m/z 426(M+H)，213.
Figure A0282568701531
2-(1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081c)
依据方法E，使用在2mL EtOH中的化合物5d(100mg，0.325mmol)和2-氟-6-氯嘌呤(78mg，0.455mmol)进行合成。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在2201)纯化，获得了两种阻转异构体，为灰白色固体。一种异构体的数据如下：
             1H NMR(DMSO-d6)δ：8.46(br d，J＝7.1Hz，1H)；8.20(s，1H)；7.71(t，J＝7.7Hz，1H)；7.55(d，J＝7.9Hz，1H)；7.45(d，J＝7.3Hz，1H)；7.28-7.37(m，3H)；7.00(t，J＝7.3Hz，1H)；4.66(q，J＝6.7Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.10(s，3H)；1.65-1.95(m，2H)；0.80(t，J＝7.1Hz，3H).MS(ES)：m/z 444(M+H)，222.
Figure A0282568701541
2-[1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(化合物081d)
依据方法E，使用在2mL EtOH中的化合物5d(100mg，0.325mmol)和2-氨基-6-溴嘌呤(104mg，0.488mmol)进行合成。通过HPLC(C18Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在2201)纯化，获得了由两种阻转异构体(其NMR在方括号中给出)混合物组成的灰白色固体。
                               1H NMR(DMSO-d6)δ：8.89(br d，J＝7.8Hz，1H)；[8.20(s)，8.17(s)，1H]；7.75(q，J＝7.6Hz，1H)；[7.62(d，J＝7.9Hz)；7.57(d，J＝7.8Hz)，1H]；7.48(t，J＝7.3Hz，1H)；7.25-7.43(m，4H)；7.15(br s，1H)；7.02-7.12(m，1H)；[5.03-5.15(m)，4.77-4.87(m)，1H]；2.74(s，3H)；[2.11(s)，1.83(s)，3H]；1.65-2.19(m，2H)；[0.83(t，J＝7.3Hz，)，0.80(t，J＝7.5Hz)，3H].MS(ES)：m/z 441(M+H)，221.
2-[2-苄氧基-1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081e)
依据方法E，使用在2mL EtOH中的化合物5e(212mg，0.413mmol)和6-溴嘌呤(107mg，0.537mmol)进行合成。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在2201)纯化，获得了两种阻转异构体，为棕色固体。一种异构体的数据如下：
1H NMR(DMSO-d6)δ：8.45-8.63(m，1H)；8.35-8.44(m，1H)；8.27(s，1H)；7.75(t，J＝7.7Hz，1H)；7.59(d，J＝7.8Hz，1H)；7.30-7.44(m，3H)；7.21-7.30(m，4H)；7.13-7.19(m，2H)；6.95-7.07(m 1H)；5.35-5.45(m，1H)；5.14-5.26(m，1H)；4.43(s，2H)；3.94-4.04(m，1H)；3.67(dd，J＝6.0，9.4Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.01(s，3H).MS(ES)：m/z 518(M+H)，410.
按照方法C中所述制备下列本发明化合物(D-082至D-109)，使用在DMF(0.25mL)中的2-氯甲基-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(10mg)、合适的亲核试剂XH(20mg，过量)和碳酸钾(10mg)。将该反应混合物在室温搅拌16小时，用水中止反应，通过过滤收集固体粗产物，并风干。将该粗产物溶解在0.5mL DMSO中，通过反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物。
2-(6-二甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-082)
产量：8.1mg。
             1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.13(s，1H)，8.11(s，1H)，7.60(t，J＝7.8Hz，1H)，7.54-7.38(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.20(d，J＝8.1Hz，1H)，5.11(d，J＝17.4Hz，1H)，4.76(d，J＝17.4Hz，1H)，3.33(s，6H)，2.73(s，3H)，2.20(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝426(M+1).
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘌呤-7-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-083)
Figure A0282568701562
产量：3.3mg。
            1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：12.06(s，1H)，8.12(s，1H)，7.60(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.38(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.15(d，J＝7.9Hz，1H)，5.26(d，J＝17.4Hz，1H)，4.94(d，J＝17.4Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.32(s，3H)，2.24(s，3H).
根据由于羰基的作用而导致的亚甲基质子的低场位移，可断定是在嘌呤N7位上发生烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1)。
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘌呤-9-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-084)
从与D-083相同的反应混合物中纯化。产量：3.6mg。
                  1H NMR(300MHz，d6-DMSO)12.17(s，1H)，7.96(s，1H)，7.63(t，J＝7.8Hz，1H)，7.57-7.39(m，4H)，7.32(d，J＝7.4Hz，1H)，7.26(d，J＝8.1Hz，1H)，5.08(d，J＝17.2Hz，1H)，4.70(d，J＝17.2Hz，1H)，2.73(5，3H)，2.27(s，3H)，2.17(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1).
2-(氨基-二甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-085)
产量：6.7mg。
             1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：7.66(s，1H0，7.61(d，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.40(m，4H)，7.32-7.26(m，2H)，6.74(s，2H)，4.94(d，J＝17.2Hz，1H)，4.63(d，J＝17.2Hz，1H)，4.63(d，J＝17.2Hz，1H)，2.97(s，6H)，2.73(s，3H)，2.17(s，3H)，2.08(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝441(M+1).
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-086)
Figure A0282568701581
产量：9.5mg。
            1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：12.54(s，1H)，7.89(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，7.43(t，J＝3.9Hz，1H)，7.34＝7.26(m，4H)，6.16(s，2H)，4.32(AB四重峰，JAB＝14.8Hz，Δn＝23.7)，2.74(s，3H)，2.09(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝430(M+1).
2-(4-氨基-1，3，5-三嗪-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-087)
Figure A0282568701582
产量：5.8mg。
             1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ：8.10(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.48-7.26(m，6H)，4.08(s，2H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝391(M+1).
5-甲基-2-(7-甲基-7H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-088)
Figure A0282568701591
产量：3.1mg。
             1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.52(s，1H)，8.49(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.8Hz，1H)，7.45(d，J＝7.1Hz，1H)，7.35-7.20(m，4H)，4.41(AB四重峰，JAB＝15.3Hz，Δν＝19.2Hz)，4.08(s，3H)，2.73(s，3H)，2.12(s，3H).LRMS(ESpos.)m/z＝406(M+1).
5-甲基-2-(2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-089)
产量：2.4mg。
             1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：11.49(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.60(brt，J＝6.0Hz，1H)，7.53-7.48(m，2H)，7.46-7.28(m，4H)，6.31(d，J＝6.7Hz，1H)，4.05(s，2H)，2.73(s，3H)，2.12(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝391(M+1).
5-甲基-2-嘌呤-7-基甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-090)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：9.04(s，1H)，8.97(s，1H)，8.48(s，1H)，7.65-7.54(m，2H)，7.53-7.39(m，3H)，7.31(d，J＝7.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，5.31(d，J＝17.6Hz，1H)，5.16(d，J-17.6Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H).
通过嘌呤6-位质子与嘌呤和喹唑啉酮基团之间的连接基团上的亚甲基质子之间的NOE增强，确定是在嘌呤N7位上发生烷基化。LRMS(ESpos.)m/z＝383(M+1)。
5-甲基-2-嘌呤-9-基甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-091)
得自生成D-090的相同反应。
                                  1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ：9.17(s，1H)，8.86(s，1H)，8.55(s，1H)，7.59(t，J-7.8Hz，1H)，7.55-7.42(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，5.26(d，J＝17.5Hz，1H)，4.92(d，J＝17.5Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.19(s，3H).
不存在嘌呤6-位质子与连接基团的亚甲基质子之间的NOE增强，这表明是在嘌呤N9位上发生烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝383(M+1)。
5-甲基-2-(9-甲基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-092)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.52(s，1H)，8.42(s，1H)，7.69(t，J＝7.7Hz，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(d，J＝7.6Hz，1H)，7.36-7.27(m，4H)，4.38(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝21.0Hz)，3.80(s，3H)，2.73(s，3H)，2.12(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝429(M+1).
2-(2，6-二氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-093)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：7.70(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.27(m，5H)，6.22(brs，1H)，5.80(br s，1H)，3.99(AB四重峰，JAB＝14.6Hz，Δν＝26.9Hz，2H)，2.73(s，3H)，2.08(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝405(M+1).
5-甲基-2-(5-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-094)
1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ：8.57(s，1H)，7.73(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.35(m，4H)，7.18(s，1H)，4.27(s，2H)，2.74(s，3H0，2.55(s，3H)，2.08(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝429(M+1).
5-甲基-2-(2-甲基硫基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-095)
1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ：13.30(s，1H)，8.29(s，1H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.54(d，J＝7.8Hz，1H)，7.47 9d，J＝6.3Hz，1H)，7.38-7.26(m，4H)，4.34(AB四重峰，JAB＝16.1Hz，Δν＝23.6Hz，2H)，2.74(s，3H)，2.32(s，3H)，2.10(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝461(M+1).
2-(2-羟基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-096)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.08(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(brd，J＝t.8Hz，2H)，7.33-7.50(m，4H)，4.28(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝21.3Hz，2H)，2.74(s，3H)，2.12(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝431(M+1).
5-甲基-2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-097)
Figure A0282568701641
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：7.69t，J＝7.8Hz，1H)，7.46-7.37(m，5H)，7.32(d，J＝7.3Hz，1H)，7.20(d，J＝1.0Hz，1H)，6.48(d，J＝1.0Hz)，3.83(AB四重峰，JAB＝15.0Hz，Δν＝18.8Hz，1H)，3.55(s，3H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝364(M+1).
5-甲基-3-邻甲苯基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-098)
Figure A0282568701642
1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ：13.98(s，1H)，8.47(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.49(d，J＝7.9Hz，1H)，7.44-7.31(m，5H)，4.04(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝19.1Hz，1H)，2.74(s，3H)，2.10(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝364(M+1).
2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-099)
Figure A0282568701643
LRMS(ES pos.)432(M+1).
2-(6-氨基嘌呤-7-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-100)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.19(s，3H)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H)，7.59-7.43(m，5H)，7.34 9d，J＝7.4Hz，1H)，7.23(d，J＝8.0Hz，1H)，6.90(s，2H)，5.21(AB四重峰，JAB＝17.4Hz，Δν＝22.1Hz，2H)，2.72(s，3H)，1.93(s，3H).
通过以下质子之间的NOE增强证实了是在嘌呤N7位上发生烷基化：1)环外胺与亚甲基质子；2)环外胺与甲苯甲酰基甲基质子。LRMS(ES pos.)m/z＝398(M+1)。
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-101)
Figure A0282568701652
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.43(br s，1H)，8.19(s，1H)，8.10(br s，1H)，7.62(t，J＝7.8Hz，1H)，7.49-7.28(m，5H)，7.22(d，J＝8.1Hz，1H)，5.49(d，J＝17.0Hz，1H)，5.19(d，J＝17.0Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.11(s，3H).
通过与D-030的NMR光谱类似性确定了是在嘌呤N7位上发生烷基化。
LRMS(ES pos.)m/z＝399(M+1)。
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-1-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-102)
Figure A0282568701661
得自与D-101相同的反应混合物。
                               1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.27(s，1H)，8.20(br s，1H)，8.05(br s.1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.47-7.26(m，6H)，5.61(AB四重峰，JAB＝16.0Hz，Δν＝20.7Hz，2H)，2.75(s，3H)，1.98(s，3H)).
通过与D-100的NMR光谱类似性确定了是在嘌呤N7位上发生烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝399(M+1)。
2-(6-氨基-9H-嘌呤-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-103)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：12.62(s，1H)，7.93(s，1H)，7.69(t，J＝7.7Hz，1H)，7.51(d，J＝8.1Hz，1H)，7.42(dd，J＝7.6，1.7Hz，1H)，7.35-7.15(m，6H)，4.12(AB四重峰，JAB＝14.5Hz，Δν＝18.2Hz，2H)，2.73(s，3H)，2.10(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝430(M+1).
2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-104)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：7.70(T，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44-7.31(m，5H)，6.69(brs，1H)，5.83，(br s，2H)，5.61(s，1H)，4.03(d，J＝14.6Hz，1H)，3.95(d，J＝14.6Hz，1H)，3.22-3.11(m，2H)，2.73(s，3H)，2.08(s，3H)，1.06(t，J＝7.1Hz，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝433(M+1).
2-(3-氨基-5-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-105)
产量：5.0mg。
              1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ：7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.37(m，4H)，7.35-7.27(m，2H)，4.77(d，J＝17.1Hz，1H)，4.60(d，J＝17.1Hz，1H)，2.80(s，3H)，2.43(s，3H)，2.14(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝393(M+1).
2-(5-氨基-3-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-106)
Figure A0282568701681
产量：0.6mg。由与D-105相同的反应混合物纯化得到。
1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ：7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50-7.24(m，6H)，4.83(d，J＝16.5Hz，1H)，4.70(d，J＝16.5Hz，1H)，2.79(s，3H)，2.47(s，3H)，2.14(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝393(M+1).
5-甲基-2-(6-甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-107)
Figure A0282568701682
产量：5.0mg
             1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ：8.17(s，1H)，8.03(s，1H)，7.54-7.43(m 4H)，7.31-7.23(m，2H)，5.14(d，J＝17.5Hz，1H)，4.90(d，J＝17.5Hz，1H)，3.14(br s，3H)，2.79(s，3H)，2.22(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝412(M+1).
2-(6-苄基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-108)
Figure A0282568701691
产量：6.7mg。
             1H NMR(300MHz，d4-MeOH)δ：8.13(s，1H)，8.04(s，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51-7.21(m，11H)，5.15(d，J＝17.5Hz，1H)，4.91(d，J＝17.5Hz，1H)，4.83(s，2H，在H2O峰下)，2.79(s，3H)，2.22(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝488(M+1).
2-(2，6-二氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-109)
将所有反应物的量加倍。产量：14mg。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.53(br s，2H)，8.01(s，1H)，7.64(t，J＝7.8Hz，1H)，7.53-7.40(m，4H)，7.33(d，J＝7.4Hz，1H)，7.279d，J＝7.9Hz，1H)，4.96(d，J＝17.5Hz，1H)，4.64(d，J＝17.5Hz，1H)，2.74(s，3H)，2.17(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1).
由下列中间体E-1至E-3制备以下通式结构的化合物D-110至D-115。
中间体E-1.
5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3，1-苯并噁嗪-4-酮
            步骤1                    步骤2
Figure A0282568701702
步骤1.在密封的瓶内，将6-甲基邻氨基苯甲酸(2g，13.2mmol)在氯乙酰氯(12mL，大大过量)中的悬浮液于115℃搅拌30分钟。将所得溶液冷却至室温，用乙醚(~5mL)处理。在4℃冷却过夜后，通过过滤收集所得沉淀，用乙醚洗涤，真空干燥，获得了氯代中间体(1.39g，50％)
                                 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.46(d，J＝7.9Hz，1H)，7.3 5(d，J＝7.6Hz，1H)，4.39(s，2H)，2.81(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝210，(M+1).
步骤2.将上面获得的氯代中间体(50mg，0.25mmol)、6-巯基嘌呤一水合物(43mg，0.25mmol)和碳酸钾(25mg，0.25mmol)在无水DMF(0.5mL)中的混合物于室温搅拌30分钟。将该混合物倒入乙酸乙酯(20mL)内，过滤出所有不溶物并弃去。将滤液真空浓缩以除去所有乙酸乙酯，用乙醚处理残余物，析出了浅橙色沉淀。通过过滤收集沉淀，用乙醚洗涤，真空干燥，获得了中间体E-1(41mg，51％)。
      1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：8.64(s，1H)，8.39(s，1H)，7.73(t，J＝7.8Hz，1H)，7.44-7.37(m，2H)，4.69(s，2H)，2.69(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝326(M+1).
中间体E-2
Figure A0282568701711
将2-硝基-N-乙酰苯胺(1.0g，5.6mmol)在EtOH中的溶液用氮气吹扫，用Pd(OH)2(20％重量，以碳为载体，200mg，催化剂)处理，在H2下(20psi)摇动2小时。通过经由0.22μm乙酸纤维素膜(Corning)过滤来除去催化剂，将滤液真空浓缩，获得了白色固体结晶产物(800mg，96％)。
                              1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：9.12(s，1H)，7.14(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)，6.88(dt，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.70(dd，J＝8.0，1.3Hz，1H)，6.52(dt，J＝7.5，1.4Hz，1H)，4.85(brs，2H)，2.03(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝151(M+1).
中间体E-3
将2-氟-硝基苯(1.41g，10mmol)和NaHCO3在EtOH(20mL)中的混合物用(N，N，N’-三甲基)-1，2-二氨基乙烷(1.1g，11mmol)处理，在80℃搅拌16小时。真空除去溶剂，用0.1M NaOH(120mL)处理残余物，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取该混合物。将有机层合并，用20mL水(1×)和盐水(2×)洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，获得了橙色液体(2.2g，100％；ESMS：m/z＝224，M+1)。
将该中间体溶解在EtOH中，用氮气吹扫该溶液，用Pd(OH)2(20％重量，以碳为载体，180mg，催化剂)处理，在H2下(50psi)摇动2小时。通过经由0.22μm乙酸纤维素膜(Corning)过滤来除去催化剂，将滤液真空浓缩，获得了红色液体产物E-3(1.8g，95％)。
          1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.64(s，1H)，7.03(dd，J＝8.3，1.4Hz，1H)，6.91(ddd，J＝7.6，7.2，1.4Hz，1H)，6.73-6.67(m，2H)，4.20(br s，2H)，2.95(t，J＝6.7Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.41(t，J＝6.7Hz，1H)，2.26(s，6H).LRMS(ES pos.)m/z＝194(M+1).
如下所述制备化合物D-110至D-115：
5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-110)
在密封的瓶中，将中间体E-1(40mg)和邻甲苯胺(0.3mL，大大过量)的混合物于100℃温热16小时。将该反应混合物冷却，用1N HCl(2mL)和乙醚(2mL)处理，过滤收集所得灰色沉淀，用乙醚洗，并且风干(19mg粗产物)。将该固体粗产物溶解在0.5mL DMSO中，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(4mg)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.52(s，1H)，8.47(s，1H)，8.43(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.46-7/43(m，1H)，7.37-7.25(m，4H)，4.37(AB quartet，JAB＝15.4Hz，Δν＝22.4Hz，2H)，2.74(5，3H)，2.12(5，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝415(M+1).
3-异丁基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-111)
在密封的瓶中，将中间体E-1(40mg)和异丁基胺(0.4mL，大大过量)的混合物于120℃温热16小时。将过量异丁基胺蒸发，将残余物溶解在1mL DMSO中，分两批通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(4mg)。
                  1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.75(br s，1H)，8.73(s，1H)，8.50(s，1H)，7.63(t，J＝7.7Hz，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28(d，J＝7.3Hz，1H)，4.96(s，2H)，4.00(d，J＝7.5Hz，2H)，2.77(s，3H)，2.30-2.15(m，1H)，0.98(d，J＝6.7Hz，1H).LRMS(ES pos.)m/z＝381(M+1).
N-{2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯基}-乙酰胺(D-112)
Figure A0282568701741
在密封的瓶中，用加热枪将中间体E-1(80mg，0.25mmol)和中间体E-2(75mg，0.5mmol，2当量)的混合物温热直至熔化。用乙醚研制该反应混合物，通过过滤收集固体。将粗产物溶解在1mL DMSO中，分两批通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体。
                                    1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.52(s，1H)，9.52(s，1H)，8.48(s，3H)，8.42(s，3H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(d，J＝7.9 Hz，1H)，7.45-7.37(m，2H)，7.31(d，J＝7.3Hz，1H)，7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，4.38(s，2H)，2.74(s，3H)，1.93(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝458(M+1).
5-甲基-3-(E-2-甲基-环己基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-113)
Figure A0282568701751
在密封的瓶中，将中间体E-1(80mg，0.25mmol)和反式-2-甲基-1-氨基环己烷(0.25mL，大大过量)的混合物于100℃温热16小时。用乙醚研制该反应混合物，通过过滤收集固体。将粗产物溶解在0.5mLDMSO中，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(1.5mg)。
                                      1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.5(br s，1H)，8.82(s，1H)，8.51(s，1H)，7.63(t，J＝7.7Hz，1H)，7.43(d，J＝7.9Hz，1H)，7.27(d，J＝7.4Hz，1H)，5.11(d，J＝14.5Hz，1H)，3.78-3.69(m，1H)，2.73(s，3H)，2.55-2.40(m，3H)，1.88-1.46(m，4H)，1.31-1.11(m，1H)，0.90-0.65(m，1H)，0.74(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝421(M+1).
2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸(D-114)
在密封的瓶中，将中间体E-1(80mg，0.25mmol)和邻氨基苯甲酸甲酯(0.25mL，大大过量)的混合物于100℃温热16小时。用乙醚研制该反应混合物，通过过滤收集固体。将粗产物溶解在0.5mL DMSO中，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(8mg)。
                                  1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.51(s，1H)，8.51(s，1H)，8.42(s，1H)，8.11(dd，J＝7.4，1.1Hz，1H)，7.88(dt，J＝7.7，1.4Hz，1H)，7.70(d，J＝8.0Hz，1H)，7.57(t，J＝7.2Hz，1H)，7.49-7.35(m，3H)，4.58(d，J＝15.5Hz，1H)，4.35(d，J＝15.5Hz，1H)，2.44(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝445(M+1).
3-{2-[(2-二甲基氨基-乙基)-甲基-氨基]-苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-
6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-115)
在密封的瓶中，将中间体E-1(40mg，0.25mmol)和中间体E-3(0.2mL，大大过量)的混合物于100℃温热16小时。用乙醚研制该反应混合物，通过过滤收集固体。将粗产物溶解在1mL DMSO中，分两批通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，所有溶剂都含有0.05％TFA，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了TFA盐形式的终产物(11mg)。
                     1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.4(br s，1H)，9.27(s，1H)，8.52(s，1H)，8.44(s，1H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝7.9Hz，1H)，7.40-7.33(m，4H)，7.10-7.04(m，1H)，4.42(s，3H)，3.5(m，2H)，3.23-3.03(m，3H)，2.75(s，3H)，2.68-2.56(m，8H).LRMS(ES pos.)m/z＝501(M+1).
如下所述制备化合物D-116至D-118：
3-(2-氯苯基)-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-116)
(R＝Me，X＝O)
在密封的瓶内，将D-015(25mg)在0.5M NaOMe(2mL在MeOH中的溶液；大大过量)中的混合物于50℃搅拌16小时。将该反应混合物冷却至室温，用水(5mL)处理，通过过滤收集所得沉淀，用水洗涤，风干。将该粗产物溶解在0.5mL DMSO中，通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(5.3mg)。
         1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.52(s，1H)，8.48(s，1H)，8.44(br s，1H)，7.77(t，J＝8.2Hz，1H)，7.71-7.60(m，2H)，7.51-7.34(m，2H)，7.23(d，J＝8.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，4.39(AB四重峰，JAB＝5.2Hz，Δν＝23.2Hz，2H)，3.85(s，3H).LRMS(ES正)m/z＝451(M+1).
3-(2-氯苯基)-5-(2-吗啉-4-基-乙基氨基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-117)
Figure A0282568701781
将D-015(25mg)与4-(氨基乙-2-基)吗啉(650mg，大大过量)的混合物在50℃搅拌16小时。通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化该反应混合物粗品。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物。
               1H NMR(300MHz，d6-丙酮)δ：8.57(br s，1H)，8.47(s，1H)，8.37(s，1H)，7.72(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.49(dt，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.40(dt，J＝7.7，1.5Hz，1H)，6.86(d，J＝7.4Hz，1H)，6.82(d，J＝8.3Hz，1H)，4.55(d，J＝15.0Hz，1H)，4.42(d，J＝15.1Hz，1H)，4.05-3.90(m，4H)，3.90(t，J＝6.9Hz，2H)，3.75-3.4(m，4H)，3.54(t，J＝6.9Hz，2H).LRMS(ES正)m/z＝549(M+1).
3-苄基-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-118)
反应方案H
Figure A0282568701782
在密封的瓶内，将D-043(25mg)在0.5M NaOMe(2mL在MeOH中的溶液；大大过量)中的混合物于50℃搅拌16小时。将该反应混合物用1NHCl(1mL)处理，将等份试样的该溶液(分别是0.5mL)通过HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分钟，15分钟内为10-75％乙腈/水，在第18分钟是100％乙腈，检测器设置在220λ)纯化。将合适的级份真空浓缩，获得了终产物，为白色固体(6.6mg)。
                   1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：13.57(s，1H)，8.60(S，1H)，8.45(s，1H)，7.72(t，J＝8.1Hz，1H)，7.42-7.30(m，2H)，7.30-7.19(m，3H)，7.15(d，J＝8.0Hz，1H)，7.06(d，J＝8.3Hz，1H)，5.43(s，2H)，4.80(s，2H)，3.87(s，3H).LRMS(ES正)m/z＝431(M+1).
化合物D-999(比较)
3-(2-氯苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
还一般按照所述方法，除了在最后一个步骤中使用4-巯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶代替巯基嘌呤，还合成了类似化合物3-(2-氯苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮。
                          实施例11
P13K效力和选择性的生化试验
A. 采用20μM ATP的生化试验
采用以上实施例2中描述的方法，测试本发明的化合物对P13Kδ的抑制活性和效力，以及相对于其它I型P13K同工酶对P13Kδ的选择性。在表2中，给出P13Kα(“Alpha”)、P13Kβ(“Beta”)、P13Kγ(“Gamma”)和P13Kδ(“Delta”)的IC50值(μM)。为表明所述化合物的选择性，分别给出化合物对P13Kα、P13Kβ和P13Kγ相对于P13Kδ的IC50值的比率，以“Alpha/Delta比率”、“Beta/Delta比率”和“Gamma/Delta”比率表示。
除采用100μL Ecoscint进行放射标记检测外，按照与实施例2相同的选择性试验方案进行初步选择性试验。随后采用除包含0.05mCi/mLγ[32P]ATP和3mM PIP2外，其余都相同的3×底物储备液进行下面的选择性试验。随后的选择性试验液采用除包含3nM任何给定的P13K同工型外，其余都相同的3×酶储备液。
对于所有的选择性试验，将受试化合物称重并溶解在100％DMSO(依它们个自的溶解度而定)中的10-50mM储备液中，于-20℃贮存。将化合物融化(至室温或37℃)，在水中稀释至300μM，由此制备3-倍稀释的系列水溶液。从这些稀释液中取出20μL加到试验孔中，在其旁侧为水空白，这些作为酶(阳性)对照组和无酶(背景)对照组，试验的其余部分基本按照在实施例2中的选择性试验方案进行。
对于在试验中采用最大浓度(即100μM)的情况，并不将酶活性抑制至少50％，该表列出了在该浓度(即在100μM)下保留的活性百分数。在这些情况下，不能计算化合物的真实的活性比率，这是因为缺少一个所需要的IC50值。然而，为深入了解这些化合物的特征，采用100μM替代缺失的值来计算假设的活性比率。在这样的情况下，选择性比率必须事实上大于假设值，这采用大于(＞)符号来表示。
                                                                  表2
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50  Alpha/Delta比率   Beta/Delta比率  Gamma/Delta比率
    D-000     86％     74％     0.33     7.7     ＞302     ＞302     23
    D-001     83％     45     68     ＞1.5     0.66
    D-002     88％     78％     44     ＞2.3     ＞2.3
    D-003     92     53％     4     22     ＞24
    D-004     93％     89％     64     ＞2     ＞1.6
    D-005     89％     46     0.8     ＞121     56
    D-006     78％     6     0.15     ＞652     38
    D-007     82％     30     0.16     ＞619     188
    D-008     82％     68     1.2     ＞85     57
    D-009     82     6     0.12     683     50
    D-010     48     11     0.06     0.70     800     183     12
    D-011     72％     55     0.10     1.0     ＞1,000     550     10
    D-012     69％     11     0.17     ＞588     65
    D-013     71％     13     0.05     2.1     ＞2,000     260     42
    D-014     63％     3.6     0.06     0.56     ＞1,667     60     9.3
    D-015     65％     69％     0.21     3.6     ＞480     ＞480     17
    D-016     91％     81％     40     ＞2.5     ＞3
                                                                 表2
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50  Alpha/Delta比率   Beta/Delta比率 Gamma/Delta比率
    D-017     89％     108％     12     ＞8     ＞8
    D-018     88％     93％     4.2     ＞24     ＞24
    D-019     67     105     7     10     15
    D-020     69％     69％     1.9     ＞53     ＞53
    D-021     100     110     1.6     62     68
    D-022     81％     110     0.8     40     ＞125     137.50     50
    D-023     83％     91％     26     ＞4     ＞3.9
    D-024     100     76％     2.6     38     ＞38
    D-025     73％     61％     0.11     1.5     ＞909     ＞909     14
    D-026     68％     54％     0.08     1.7     ＞1,250     ＞1,250     21
    D-027     59％     58     0.6     ＞169     97
    D-028     67％     13     0.18     ＞556     69
    D-029     49     3.0     0.06     882     54
    D-030     50     5     0.07     758     70
    D-031     74     10     0.12     ＞833     83
    D-034     19     11     0.15     131     74
    D-035     9     3     0.05     199     65
                                                                表2
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50  Alpha/Delta比率   Beta/Delta比率   Gamma/Delta比率
    D-036     63％     31     0.4     ＞226     69
    D-037     64％     80     0.8     ＞125     100
    D-039     77％     66％     0.9     38     ＞111     ＞111     42
    D-038     77％     63％     0.6     60     ＞167     ＞170     100
    D-040     77％     64％     1.7     ＞61     ＞61
    D-041     67％     65％     4     ＞25     ＞25
    D-042     70％     25     3     ＞32     8
    D-043     83％     77％     2.1     ＞47     ＞47
    D-044     105     61     4.2     25     15
    D-045     98％     74％     7.6     ＞13     ＞13
    D-046     64％     95     9     ＞11     11
    D-047     30     9     0.09     0.5     333     100     5.6
    D-048     70     14     0.16     449     90
    D-049     110％     30     1.0     ＞100     30
    D-050     99％     41     1.6     ＞63     26
    D-051     89％     57％     3.3     ＞31     ＞31
    D-052     0.7     69％     8     0.09     ＞13
                                                        表2
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50  Alpha/Delta比率  Beta/Delta比率 Gamma/Delta比率
    D-121     69％     70％     0.48     ＞211     ＞211
    D-999     105     71％     47     60     2.2       2.1     1.3
  LY294002     1.2     0.4     0.23     5.3       1.7
1)化合物D-121是3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
Figure A0282568701841
B. 采用200μM ATP的生化试验
在上面的部分A中，采用20μM ATP测定本发明化合物以确立它们它们的P13K的α、β、γ和δ同工型的抑制作用的IC50。实施进一步的筛选以确定这4种P13K同工型在最终浓度为200μM ATP，比细胞中正常ATP生理浓度高10倍以上以及基本上接近该浓度时的抑制作用的IC50。这个选择性方案除了3×储备液ATP浓度为600μM以外，其余与以上描述一致。表3中总结了得自该试验的数据。所观察到的对ATP浓度的敏感性表明这些P13Kδ抑制剂化合物起ATP竞争剂的作用。
                                                                          表3
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50 Alpha/Delta比率   Beta/Delta比率   Gamma/Delta比率
    D-000     91±1％     84±2％     2±1     35±35     91     84     18
    D-005     104％     82％     11     91％     20     16     17
D-006 104±1％ 44±5 0.92±0.1 87±33 226 48 95
    D-007     92±11％     72±12     0.73±0.2     88±4     252     99     121
    D-009     70％     18     0.7     53     200     26     76
    D-010     74±18％     33±4     0.23±0.2     6±3     658     144     27
    D-011     88±4％     105±35     0.25±0.2     61±70     700     420     244
    D-012     70±4％     108±4     1.3±0.4     50±0     107     83     38
    D-013     117±8％     73±24％     0.51±0.6     12±1     461     289     24
    D-014     100±6％     13±0     0.5±0.4     5±3     398     26     10
    D-015     95±22％     81±3％     1.1±0.5     83±37％     180     154     160
    D-019     100％     100     30     33     7     3     1
    D-022     88％     101％     4.2     60％     42     48     29
    D-025     89±11％     77±6％     0.32±0.3     7.8±3     556     478     24
    D-026     83±1％     77±8％     0.38±0.2     13±10     443     411     34
    D-027     74％     110     4     60     37     28     15
    D-028     100％     81％     1.6     29     125     101     18
    D-029     110±12％     34±4     0.34±0.08     13±0.7     653     101     37
                                                      表3
化合物 Alpha IC50 Beta IC50 Delta IC50 Gamma IC50  Alpha/Delta比率   Beta/Delta比率 Gamma/Delta比率
    D-030     95±11％     80±14     0.53±0.05     31±10     362     152     59
    D-031     87±10％     137±23     0.2±0.01     155±60     903     707     802
D-034 92±11％ 103±4 1.2±0.3 34±1 153 85 28
    D-035     95±6     34±6     0.49±0.1     6.8±1     193     69     14
    D-036     99％     73％     4.1     72     48     36     18
    D-037     112％     58％     3.5     45     64     33     13
    D-038     69％     74％     1.8     55     77     82     31
    D-039     85％     65％     2.6     57％     65     50     44
D-047 81％ 30 0.2 4.5 810 150 23
    D-048     90±57     95±7     1.4±0.9     123±40     67     70     91
    D-121     71％     62％     0.9     61％     158     138     136
    D-999     62％     71％     75     90     2     2     1
    LY294002     23±5     3.7±2     2.1±1.5     29±13     11     2     13
                             实施例12
P13Kδ活性抑制剂的基于细胞的试验数据
采用以上实施例3-5中描述的方法，测定本发明的化合物在受激的B和T细胞增殖、嗜中性白细胞(PMN)的迁移和嗜中性白细胞(PMN)的弹性蛋白酶释放的试验中的抑制活性和效力。下表4中总结了得自这些试验的数据。在表4中，所显示的值为化合物的有效浓度(EC50；μM)。当没有值给出时，表示没有实施试验。
表4
化合物     小鼠BCR刺激剂(EC50)     小鼠TCE刺激剂(EC50)    人PMN弹性蛋白酶(EC50) 人PMN迁移(EC50)
    D-000     0.9±0.4     5.5±4     2.2±2     1-5
    D-003     3.9     5.7
    D-005     0.7±0.1     3.9     4.3±1
    D-006     0.2±0.1     5.3     0.3±0.1
    D-007     0.3±0.1     4.2     0.4
    D-008     1.0
    D-009     0.3±0.2     10.5
    D-010     0.2±0.1     0.3±0.3
    D-011     0.3±0.1     0.9±0.7
    D-012     0.3±0.2     0.3
    D-013     1.4
    D-014     0.2±0.1     4.3
    D-015     1.2±0.2     1.8     1.3±0.4     2.0
    D-019     0.9±0.01     0.9
    D-021     1.8     3.5
    D-022     1.8     2.3
    D-024     2.9
    D-025     0.3±0.1     4.4±0.6     0.3±0.2     0.3±0.3
    D-026     0.3±0.1     3.5     0.2±0.2     0.3±0.3
    D-027     ＞2     2
    D-028     0.4±0.2     1
    D-029     0.1±0.03     3.4±2     0.5±0.6     0.3
    D-030     0.1±0.1     6     0.4±0.5     0.2
    D-031     0.2±0.1     0.7±0.1
    D-034     0.6±0.4
    D-035     0.2±0.1     2.9±0.7     0.3±0.1
    D-036     0.9±0.04     4.1     5.5±5     0.2
    D-037     1.2±0.4     1.3±0.4     2.0
    D-038     1.4±0.1     2.9     5
                                    表4
化合物     小鼠BCR刺激剂(EC50)     小鼠TCE刺激剂(EC50)    人PMN弹性蛋白酶(EC50) 人PMN迁移(EC50)
    D-039     0.9±0.1     5
    D-043     1.4     2.6
    D-045     9.0
    D-047     0.3±0.1     0.5±0.2
    D-048     0.4±0.2     5     0.9±0.2
    D-049     2.0     6.3     5.0
    D-121     1.4
    D-999     3.1±0.7     5.9     ＞20     1
  LY294002     0.9±0.5
                    实施例13
P13Kδ活性抑制剂在癌细胞中的活性的试验
通过对一种所述化合物对包括KU812、RWLeu4、K562和MEG-01在内的一组Chronic Myeloid Leukemia(CML)细胞系进行测定，评价本发明化合物在癌细胞增殖中的作用。
如下所述测定化合物(D-000，溶于DMSO)的抑制活性。将受试化合物以一系列浓度(0.001μM-20μM)加到含有细胞(1000-5000个细胞/孔)的96孔微量滴定板中。于37℃将所述板培养5天，在此期间，不含有受试化合物的对照组培养基能够经历至少两个细胞分化周期。在第3、4和5天加入[3H]-胸苷，分别掺和18小时，以测定细胞生长。将细胞转移至滤器上，冲洗并采用Matrix 96β读数器(Packard)进行放射性计数。如下计算细胞生长的百分比：
由导致放射性值比不含抑制剂的对照组观察到的放射性值低50％的受试化合物的浓度确定在这些实验中的EC50值。D-000化合物呈现抑制活性，对KU812和RWLeu4系具有约2μM的EC50。在K562和MEG-01细胞系中未发现所述化合物呈现作用。
本发明的P13Kδ抑制剂显示出能抑制CML细胞的生长，因此能够用于治疗良性或恶性肿瘤。迄今已证实P13Kδ的表达大多在血源细胞中进行。然而，其能够存在于更广泛的增殖细胞中。因此，在白血病和实体瘤两者中或在肿瘤源的增殖中，可使用本发明化合物诱导肿瘤退化和预防肿瘤转移的形成。另外，所述化合物可单独和与其它的药理活性化合物联合或者与作为敏感剂的放射作用联合使用。
                           实施例14
在小鼠气囊灌洗法中测定弹性蛋白酶胞吐作用
测定D-030对动物模型内白细胞内流和嗜中性白细胞弹性蛋白酶胞吐作用的作用。6天气囊模型为体内炎症模型，在组织上类似于关节滑膜。由单核细胞和成纤维细胞有机组合形成的内膜与滑膜腔及其相似。所述模型代表慢性疾病(例如类风湿性关节炎)的“急性“模型。这个模型可用于在体内评价在炎性刺激物的影响下活性剂阻断细胞内流进入气囊。
如下进行该试验：在实验当天，将各组的大鼠剃去毛发，并在每只鼠的背部皮下注射10ml的空气，形成气囊。第3天，再次注射10ml的空气。第6天，在TNF活化前6小时，给一组大鼠(n＝6)口服D-030(在PEG400载体中，100mg/kg)，而给另一组(n＝12)仅口服载体。给药后6小时后，两组动物的气囊均接受了2.5ng的TNF。给药后12小时后，用盐水洗涤气囊，分析得到的灌洗流体中白细胞数量和嗜中性白细胞弹性蛋白酶活性。另外，将血抽出以测定血液循环中D-030的水平。结果如下：接受D-030 12小时后的大鼠在血液循环中含有平均8.7μM的化合物，并且与载体对照组相比在灌洗流体中总白细胞中减少了82％，具体白细胞数目的减少如下：嗜中性白细胞(90％)，嗜酸性粒细胞(66％)和淋巴细胞(70％)。嗜中性白细胞弹性蛋白酶的量显示经过D-030处理大鼠与载体对照组的比较稍微降低(15％)的弹性蛋白酶水平。
在另一个试验中，采用剪刀将小鼠背部的区域减去毛发，通过皮下注射3ml空气产生气囊。第3天，重复空气注射。第6天，在TNF-α(0.5ng，在1ml PBS中)，或仅用PBS活化前1小时和活化后2小时，给所述动物施用D-030(32mg/kg，在LABRAFIL中)或仅是LABRAFIL。PBS为磷酸盐缓冲盐水。TNF活化后4小时，将动物麻醉，用2ml含有2mM EDTA的0.9％盐水灌洗气囊。在微型离心器中于14,000rpm将灌洗液离心。按照以上描述的方法，将50微升上清液用于测量弹性蛋白酶胞吐作用。
如附图9所示，与PBS活化的动物比较，TNF活化诱导高水平的弹性蛋白胞吐作用。然而，当用D-030处理TNF活化的动物时，在气囊灌洗液中观察到弹性蛋白酶活性显著减少。
在本说明书中引用的全部出版物和专利文件均通过引用它们公开的全部内容而结合到本文中来。
虽然为了清楚说明和易于理解的目的，已具体参考某些优选的实施方案对本发明作了描述，但是本领域技术人员显然会意识到在如所附权利要求书所定义的本发明范围内可作出进一步的变化和修改。因此，除了那些在权利要求书中特别指出的以外，本发明不应受任何限制。
                          序列表
<110>SADHU，Chanchal等人。
<120>人磷脂酰肌醇3-激酶δ的抑制剂
<130>27866/36170C
<140>待测定
<141>2001-10-19
<150>09/841,341
<151>2001-04-24
<150>60/199,655
<151>2000-04-25
<150>60/238,057
<151>2000-10-25
<160>6
<170>PatentIn版本3.0
<210>1
<211>5220
<212>DNA
<213>人p110δ全cDNA
<220>
<221>CDS
<222>(196)..(3327)
<400>1
cagtcgctcc gagcggccgc gagcagagcc gcccagccct gtcagctgcg ccgggacgat     60
aaggagtcag gccagggcgg gatgacactc attgattcta aagcatcttt aatctgccag    120
gcggaggggg ctttgctggt ctttcttgga ctattccaga gaggacaact gtcatctggg    180
aagtaacaac gcagg atg ccc cct ggg gtg gac tgc ccc atg gaa ttc tgg     231
                 Met Pro Pro Gly Val Asp Cys Pro Met Glu Phe Trp
                 1               5                   10
acc aag gag gag aat cag agc gtt gtg gtt gac ttc ctg ctg ccc aca      279
Thr Lys Glu Glu Asn Gln Ser Val Val Val Asp Phe Leu Leu Pro Thr
        15                  20                  25
ggg gtc tac ctg aac ttc cct gtg tcc cgc aat gcc aac ctc agc acc      327
Gly Val Tyr Leu Asn Phe Pro Val Ser Arg Asn Ala Asn Leu Ser Thr
    30                  35                  40
atc aag cag ctg ctg tgg cac cgc gcc cag tat gag ccg ctc ttc cac      375
Ile Lys Gln Leu Leu Trp His Arg Ala Gln Tyr Glu Pro Leu Phe His
45                  50                  55                  60
atg ctc agt ggc ccc gag gcc tat gtg ttc acc tgc atc aac cag aca      423
Met Leu Ser Gly Pro Glu Ala Tyr Val Phe Thr Cys Ile Asn Gln Thr
                65                  70                  75
gcg gag cag caa gag ctg gag gac gag caa cgg cgt ctg tgt gac gtg      47l
Ala Glu Gln Gln Glu Leu Glu Asp Glu Gln Arg Arg Leu Cys Asp Val
            80                  85                  90
cag ccc ttc ctg ccc gtc ctg cgc ctg gtg gcc cgt gag ggc gac cge      519
Gln Pro Phe Leu Pro Val Leu Arg Leu Val Ala Arg Glu Gly Asp Arg
        95                  100                 105
gtg aag aag ctc atc aac tca cag atc agc ctc ctc atc ggc aaa ggc      567
Val Lys Lys Leu Ile Asn Ser Gln Ile Ser Leu Leu Ile Gly Lys Gly
    110                 115                 120
ctc cac gag ttt gsc tcc ttg tgc gac cca gaa gtg aac gsc ttt cgc      615
Lau His Glu Phe Asp Ser Leu Cys Asp Pro Glu Val Asn Asp Phe Arg
125                 130                 135                 140
gcc aag atg tgc cas ttc tgc gag gag gcg gcc gcc cgc cgg cag cag      663
Ala Lys Met Cys Gln Phe Cys Glu Glu Ala Ala Ala Arg Arg Gln Gln
                145                 150                 155
ctg ggc tgg gag gcc tgg ctg cag tac agt ttc ccc ctg cag ctg gag      711
Leu Gly Trp Glu Ala Trp Leu Gln Tyr Ser Phe Pro Leu Gln Leu Glu
            160                 165                 170
ccc tcg gct caa acc tgg ggg cct ggt acc ctg cgg ctc ccg aac cgg       759
Pro Ser Ala Gln Thr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Arg Leu Pro Asn Arg
        175                 180                 185
gcc ctt ctg gtc aac gtt aag ttt gag ggc agc gag gag agc ttc acc       807
Ala Leu Leu Val Asn Val Lys Phe Glu Gly Set Glu Glu Set Phe Thr
    190                 195                 200
ttc cag gtg tcc acc aag gac gtg ccg ctg gcg ctg atg gcc tgt gcc       855
Phe Gln Val Ser Thr Lys Asp Val Pro Leu Ala Leu Met Ala Cys Ala
205                 210                 215                 220
ctg cgg aag aag gcc aca gtg ttc cgg cag ccg ctg gtg gag cag ccg       903
Leu Arg Lys Lys Ala Thr Val Phe Arg Gln Pro Leu Val Glu Gln Pro
                225                 230                 235
gaa gac tac acg ctg cag gtg aac ggc agg cat gag tac ctg tat ggc       951
Glu Asp Tyr Thr Leu Gln Val Asn Gly Arg His Glu Tyr Leu Tyr Gly
            240                 245                 250
aac tac ccg ctc tgc cag ttc cag tac atc tgc agc tgc ctg cac agt       999
Asn Tyr Pro Leu Cys Gln Phe Gln Tyr Ile Cys Ser Cys Leu His Ser
        255                 260                 265
ggg ttg acc cct cac ctg acc atg gtc cat tcc tcc tcc atc ctc gcc      1047
Gly Leu Thr Pro His Leu Thr Met Val His Ser Ser Ser Ile Leu Ala
    270                 275                 280
atg cgg gat gag cag agc aac cct gcc ccc cag gtc cag aaa ccg cgt      1095
Met Arg Asp Glu Gln Ser Asn Pro Ala Pro Gln Val Gln Lys Pro Arg
285                 290                 295                 300
gcc aaa cca cct ccc att cct gcg aag aag cct tcc tct gtg tcc ctg      1143
Ala Lys Pro Pro Pro Ile Pro Ala Lys Lys Pro Ser Ser Val Ser Leu
                305                 310                 315
tgg tcc ctg gag cag ccg ttc cgc atc gag ctc atc cag ggc agc aaa      1191
Trp Ser Leu Glu Gln Pro Phe Arg Ile Glu Leu Ile Gln Gly Ser Lys
            320                 325                 330
gtg aac gcc gac gag cgg atg aag ctg gtg gtg cag gcc ggg ctt ttc      1239
Val Asn Ala Asp Glu Arg Met Lys Leu Val Val Gln Ala Gly Leu Phe
        335                 340                 345
cac ggc aac gag atg ctg tgc aag acg gtg tcc agc tcg gag gtg agc      1287
His Gly Asn Glu Met Leu Cys Lys Thr Val Ser Ser Ser Glu Val Ser
    350                 355                 360
gtg tgc tcg gag ccc gtg tgg aag cag cgg ctg gag ttc gac atc aac      1335
Val Cys Ser Glu Pro Val Trp Lys Gln Arg Leu Glu Phe Asp Ile Asn
365                 370                 375                 380
atc tgc gac ctg ccc cgc atg gcc cgt ctc tgc ttt gcg ctg tac gcc      1383
Ile Cys Asp Leu Pro Arg Met Ala Arg Leu Cys Phe Ala Leu Tyr Ala
                385                 390                 395
gtg atc gag aaa gcc aag aag gct cgc tcc acc aag aag aag tcc aag       1431
Val Ile Glu Lys Ala Lys Lys Ala Arg Ser Thr Lys Lys Lys Ser Lys
            400                 405                 410
aag gcg gac tgc ccc att gcc tgg gcc aac ctc atg ctg ttt gac tac       1479
Lys Ala Asp Cys Pro Ile Ala Trp Ala Asn Leu Met Leu Phe Asp Tyr
        415                 420                 425
aag gac cag ctt aag acc ggg gaa cgc tgc ctc tac atg tgg ccc tcc       1527
Lys Asp Gln Leu Lys Thr Gly Glu Arg Cys Leu Tyr Met Trp Pro Ser
    430                 435                 440
gtc cca gat gag aag ggc gag ctg ctg aac ccc acg ggc act gtg cgc       1575
Val Pro Asp Glu Lys Gly Glu Leu Leu Asn Pro Thr Gly Thr Val Arg
445                 450                 455                 460
agt aac ccc aac acg gat agc gcc gct gcc ctg ctc atc tgc ctg ccc       1623
Ser Asn Pro Asn Thr Asp Ser Ala Ala Ala Leu Leu Ile Cys Leu Pro
                465                 470                 475
gag gtg gcc ccg cac ccc gtg tac tac ccc gcc ctg gag aag atc ttg       1671
Glu Val Ala Pro His Pro Val Tyr Tyr Pro Ala Leu Glu Lys Ile Leu
            480                 485                 490
gag ctg ggg cga cac agc gag tgt gtg cat gtc acc gag gag gag cag       1719
Glu Leu Gly Arg His Ser Glu Cys Val His Val Thr Glu Glu Glu Gln
        495                 500                 505
ctg cag ctg cgg gaa atc ctg gag cgg cgg ggg tct ggg gag ctg tat       1767
Leu Gln Leu Arg Glu Ile Leu Glu Arg Arg Gly Ser Gly Glu Leu Tyr
    510                 515                 520
gag cac gag aag gac ctg gtg tgg aag ctg cgg cat gaa gtc cag gag       1815
Glu His Glu Lys Asp Leu Val Trp Lys Leu Arg His Glu Val Gln Glu
525                 530                 535                 540
cac ttc ccg gag gcg cta gcc cgg ctg ctg ctg gtc acc aag tgg aac       1863
His Phe Pro Glu Ala Leu Ala Arg Leu Leu Leu Val Thr Lys Trp Asn
                545                 550                 555
aag cat gag gat gtg gcc cag atg ctc tac ctg ctg tgc tcc tgg ccg       1911
Lys His Glu Asp Val Ala Gln Met Leu Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Pro
            560                 565                 570
gag ctg ccc gtc ctg agc gcc ctg gag ctg cta gac ttc agc ttc ccc       1959
Glu Leu Pro Val Leu Ser Ala Leu Glu Leu Leu Asp Phe Ser Phe Pro
        575                 580                 585
gat tgc cac gta ggc tcc ttc gcc atc aag tcg ctg cgg aaa ctg acg       2007
Asp Cys His Val Gly Ser Phe Ala Ile Lys Ser Leu Arg Lys Leu Thr
    590                 595                 600
gac gat gag ctg ttc cag tac ctg ctg cag ctg gtg cag gtg ctc aag       2055
Asp Asp Glu Leu Phe Gln Tyr Leu Leu Gln Leu Val Gln Val Leu Lys
605                 610                 615                 620
tac gag tcc tac ctg gac tgc gag ctg acc aaa ttc ctg ctg gac cgg       2103
Tyr Glu Ser Tyr Leu Asp Cys Glu Leu Thr Lys Phe Leu Leu Asp Arg
                625                 630                 635
gcc ctg gcc aac cgc aag atc ggc cac ttc ctt ttc tgg cac ctc cgc       2151
Ala Leu Ala Asn Arg Lys Ile Gly His Phe Leu Phe Trp His Leu Arg
            640                 645                 650
tcc gag atg cac gtg ccg tcg gtg gcc ctg cgc ttc ggc ctc atc ctg       2199
Ser Glu Met His Val Pro Ser Val Ala Leu Arg Phe Gly Leu Ile Leu
        655                 660                 665
gag gcc tac tgc agg ggc agc acc cac cac atg aag gtg ctg atg aag       2247
Glu Ala Tyr Cys Arg Gly Ser Thr His His Met Lys Val Leu Met Lys
    670                 675                 680
cag ggg gaa gca ctg agc aaa ctg aag gcc ctg aat gac ttc gtc aag       2295
Gln Gly Glu Ala Leu Ser Lys Leu Lys Ala Leu Asn Asp Phe Val Lys
685                 690                 695                 700
ctg agc tct cag aag acc ccc aag ccc cag acc aag gag ctg atg cac       2343
Leu Ser Ser Gln Lys Thr Pro Lys Pro Gln Thr Lys Glu Leu Met His
                705                 710                 715
ttg tgc atg cgg cag gag gcc tac cta gag gcc ctc tcc cac ctg cag       2391
Leu Cys Met Arg Gln Glu Ala Tyr Leu Glu Ala Leu Ser His Leu Gln
            720                 725                 730
tcc cca ctc gac ccc agc acc ctg ctg gct gaa gtc tgc gtg gag cag       2439
Ser Pro Leu Asp Pro Ser Thr Leu Leu Ala Glu Val Cys Val Glu Gln
        735                 740                 745
tgc acc ttc atg gac tcc aag atg aag ccc ctg tgg atc atg tac agc       2487
Cys Thr Phe Met Asp Ser Lys Met Lys Pro Leu Trp Ile Met Tyr Ser
    750                 755                 760
aac gag gag gca ggc agc ggc ggc agc gtg ggc atc atc ttt aag aac       2535
Asn Glu Glu Ala Gly Ser Gly Gly Ser Val Gly Ile Ile Phe Lys Asn
765                 770                 775                 780
ggg gat gac ctc cgg cag gac atg ctg acc ctg cag atg atc cag ctc       2583
Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Met Ile Gln Leu
                785                 790                 795
atg gac gtc ctg tgg aag cag gag ggg ctg gac ctg agg atg acc ccc       2631
Met Asp Val Leu Trp Lys Gln Glu Gly Leu Asp Leu Arg Met Thr Pro
            800                 805                 810
tat ggc tgc ctc ccc acc ggg gac cgc aca ggc ctc att gag gtg gta       2679
Tyr Gly Cys Leu Pro Thr Gly Asp Arg Thr Gly Leu Ile Glu Val Val
        815                 820                 825
ctc cgt tca gac acc atc gcc aac atc caa ctc aac aag agc aac atg       2727
Leu Arg Ser Asp Thr Ile Ala Asn Ile Gln Leu Asn Lys Ser Asn Met
    830                 835                 840
gca gcc aca gcc gcc ttc aac aag gat gcc ctg ctc aac tgg ctg aag       2775
Ala Ala Thr Ala Ala Phe Asn Lys Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys
845                 850                 855                 860
tcc aag aac ccg ggg gag gcc ctg gat cga gcc att gag gag ttc acc       2823
Ser Lys Asn Pro Gly Glu Ala Leu Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr
                865                 870                 875
ctc tcc tgt gct ggc tat tgt gtg gcc aca tat gtg ctg ggc att ggc       2871
Leu Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Tyr Val Leu Gly Ile Gly
            880                 885                 890
gat cgg cac agc gac aac atc atg atc cga gag agt ggg cag ctg ttc       2919
Asp Arg His Ser Asp Asn Ile Met Ile Arg Glu Ser Gly Gln Leu Phe
        895                 900                 905
cac att gat ttt ggc cac ttt ctg ggg aat ttc aag acc aag ttt gga       2967
His Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Gly Asn Phe Lys Thr Lys Phe Gly
    910                 915                 920
atc aac cgc gag cgt gtc cca ttc atc ctc acc tat gac ttt gtc cat       3015
Ile Asn Arg Glu Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Val His
925                 930                 935                 940
gtg att cag cag ggg aag act aat aat agt gag aaa ttt gaa cgg ttc       3063
Val Ile Gln Gln Gly Lys Thr Asn Asn Ser Glu Lys Phe Glu Arg Phe
                945                 950                 955
cgg ggc tac tgt gaa agg gcc tac acc atc ctg cgg cgc cac ggg ctt       3111
Arg Gly Tyr Cys Glu Arg Ala Tyr Thr Ile Leu Arg Arg His Gly Leu
            960                 965                 970
ctc ttc ctc cac ctc ttt gcc ctg atg cgg gcg gca ggc ctg cct gag       3159
Leu Phe Leu His Leu Phe Ala Leu Met Arg Ala Ala Gly Leu Pro Glu
        975                 980                 985
ctc agc tgc tcc aaa gac atc cag tat ctc aag gac  tcc ctg gca ctg      3207
Leu Ser Cys Ser Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys Asp  Ser Leu Ala Leu
    990                 995                 1000
ggg  aaa aca gag gag gag  gca ctg aag cac ttc  cga gtg aag ttt        3252
Gly  Lys Thr Glu Glu Glu  Ala Leu Lys His Phe  Arg Val Lys Phe
1005                 1010                 1015
aac  gaa gcc ctc cgt gag  agc tgg aaa acc aaa  gtg aac tgg ctg        3297
Asn  Glu Ala Leu Arg Glu  Ser Trp Lys Thr Lys  Val Asn Trp Leu
1020                 1025                 1030
gcc  cac aac gtg tcc aaa  gac aac agg cag tagtggctcc tcccagccct       3347
Ala  His Asn Val Ser Lys  Asp Asn Arg Gln
1035                 1040
gggcccaaga ggaggcggct gcgggtcgtg gggaccaagc acattggtcc taaaggggct     3407
gaagagcctg aactgcacct aacgggaaag aaccgacatg gctgcctttt gtttacactg     3467
gttatttatt tatgacttga aatagtttaa ggagctaaac agccataaac ggaaacgcct     3527
ccttcattca gcggcggtgc tgggcccccc gaggctgcac ctggctctcg gctgaggatt     3587
gtcaccccaa gtcttccagc tggtggatct gggcccagca aagactgttc tcctcccgag    3647
ggaaccttct tcccaggcct cccgccagac tgcctgggtc ctggcgcctg gcggtcacct    3707
ggtgcctact gtccgacagg atgcctcgat cctcgtgcga cccaccctgt gtatcctccc    3767
tagactgagt tctggcagct ccccgaggca gccggggtac cctctagatt cagggatgct    3827
tgctctccac ttttcaagtg ggtcttgggt acgagaattc cctcatcttt ctctactgta    3887
aagtgatttt gtttgcaggt aagaaaataa tagatgactc accacacctc tacggctggg    3947
gagatcaggc ccagccccat aaaggagaat ctacgctggt cctcaggacg tgttaaagag    4007
atctgggcct catgtagctc accccggtca cgcatgaagg caaaagcagg tcagaagcga    4067
atactctgcc attatctcaa aaatcttttt tttttttttt ttgagatggg gtcttcctct    4127
gttgcccagg ctggagtgca gtggtgcaat cttggctcac tgtaacctcc gcctcccagg    4187
ttcaagtgat tcttcttgcc tcagcctcct gagtagctgg gattacaggt gtgcaccacc    4247
cgtacccagc taatttttgt attttagtag agacgggggt ttcaccatgt tggctgggct    4307
ggtctcgaac tcctgacctc aggtgatcca cccgcctgag cctcccaaag tgctgggatt    4367
acaggcatga gccaccacgc ccggcccact ctgccattgt ctaagccacc tctgaaagca    4427
ggttttaaca aaaggatgag gccagaactc ttccagaacc atcacctttg ggaacctgct    4487
gtgagagtgc tgaggtacca gaagtgtgag aacgaggggg cgtgctggga tctttctctc    4547
tgactatact tagtttgaaa tggtgcaggc ttagtcttaa gcctccaaag gcctggattt    4607
gagcagcttt agaaatgcag gttctagggc ttctcccagc cttcagaagc caactaactc    4667
tgcagatggg gctaggactg tgggctttta gcagcccaca ggtgatccta acatatcagg    4727
ccatggactc aggacctgcc cggtgatgct gttgatttct caaaggtctt ccaaaactca    4787
acagagccag aagtagccgc ccgctcagcg gctcaggtgc cagctctgtt ctgattcacc    4847
aggggtccgt cagtagtcat tgccacccgc ggggcacctc cctggccaca cgcctgttcc    4907
cagcaagtgc tgaaactcac tagaccgtct gcctgtttcg aaatggggaa agccgtgcgt    4967
gcgcgttatt tatttaagtg cgcctgtgtg cgcgggtgtg ggagcacact ttgcaaagcc    5027
acagcgtttc tggttttggg tgtacagtct tgtgtgcctg gcgagaagaa tattttctat    5087
ttttttaagt catttcatgt ttctgtctgg ggaaggcaag ttagttaagt atcactgatg    5147
tgggttgaga ccagcactct gtgaaacctt gaaatgagaa gtaaaggcag atgaaaagaa    5207
aaaaaaaaaa aaa                                                       5220
<210>2
<211>1044
<212>PRT
<213>人p110δ蛋白
<400>2
Met Pro Pro Gly Val Asp Cys Pro Met Glu Phe Trp Thr Lys Glu Glu
1               5                   10                  15
Asn Gln Ser Val Val Val Asp Phe Leu Leu Pro Thr Gly Val Tyr Leu
            20                  25                  30
Asn Phe Pro Val Ser Arg Asn Ala Asn Leu Ser Thr Ile Lys Gln Leu
        35                  40                  45
Leu Trp His Arg Ala Gln Tyr Glu Pro Leu Phe His Met Leu Ser Gly
    50                  55                  60
Pro Glu Ala Tyr Val Phe Thr Cys Ile Asn Gln Thr Ala Glu Gln Gln
65                  70                  75                  80
Glu Leu Glu Asp Glu Gln Arg Arg Leu Cys Asp Val Gln Pro Phe Leu
                85                  90                  95
Pro Val Leu Arg Leu Val Ala Arg Glu Gly Asp Arg Val Lys Lys Leu
            100                 105                 110
Ile Asn Ser Gln Ile Ser Leu Leu Ile Gly Lys Gly Leu His Glu Phe
        115                 120                 125
Asp Ser Leu Cys Asp Pro Glu Val Asn Asp Phe Arg Ala Lys Met Cys
    130                 135                 140
Gln Phe Cys Glu Glu Ala Ala Ala Arg Arg Gln Gln Leu Gly Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ala Trp Leu Gln Tyr Ser Phe Pro Leu Gln Leu Glu Pro Ser Ala Gln
                165                 170                 175
Thr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Arg Leu Pro Asn Arg Ala Leu Leu Val
            180                 185                 190
Asn Val Lys Phe Glu Gly Ser Glu Glu Ser Phe Thr Phe Gln Val Ser
        195                 200                 205
Thr Lys Asp Val Pro Leu Ala Leu Met Ala Cys Ala Leu Arg Lys Lys
    210                 215                 220
Ala Thr Val Phe Arg Gln Pro Leu Val Glu Gln Pro Glu Asp Tyr Thr
225                 230                 235                 240
Leu Gln Val Asn Gly Arg His Glu Tyr Leu Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu
                245                 250                 255
Cys Gln Phe Gln Tyr Ile Cys Ser Cys Leu His Ser Gly Leu Thr Pro
            260                 265                 270
His Leu Thr Met Val His Ser Ser Ser Ile Leu Ala Met Arg Asp Glu
        275                 280                 285
Gln Ser Asn Pro Ala Pro Gln Val Gln Lys Pro Arg Ala Lys Pro Pro
    290                 295                 300
Pro Ile Pro Ala Lys Lys Pro Ser Ser Val Ser Leu Trp Ser Leu Glu
305                 310                 315                 320
Gln Pro Phe Arg Ile Glu Leu Ile Gln Gly Ser Lys Val Asn Ala Asp
                325                 330                 335
Glu Arg Met Lys Leu Val Val Gln Ala Gly Leu Phe His Gly Asn Glu
            340                 345                 350
Met Leu Cys Lys Thr Val Ser Ser Ser Glu Val Ser Val Cys Ser Glu
        355                 360                 365
Pro Val Trp Lys Gln Arg Leu Glu Phe Asp Ile Asn Ile Cys Asp Leu
    370                 375                 380
Pro Arg Met Ala Arg Leu Cys Phe Ala Leu Tyr Ala Val Ile Glu Lys
385                 390                 395                 400
Ala Lys Lys Ala Arg Ser Thr Lys Lys Lys Ser Lys Lys Ala Asp Cys
                405                 410                 415
Pro Ile Ala Trp Ala Asn Leu Met Leu Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Leu
            420                 425                 430
Lys Thr Gly Glu Arg Cys Leu Tyr Met Trp Pro Ser Val Pro Asp Glu
        435                 440                 445
Lys Gly Glu Leu Leu Asn Pro Thr Gly Thr Val Arg Ser Asn Pro Asn
    450                 455                 460
Thr Asp Ser Ala Ala Ala Leu Leu Ile Cys Leu Pro Glu Val Ala Pro
465                 470                 475                 480
His Pro Val Tyr Tyr Pro Ala Leu Glu Lys Ile Leu Glu Leu Gly Arg
                485                 490                 495
His Ser Glu Cys Val His Val Thr Glu Glu Glu Gln Leu Gln Leu Arg
            500                 505                 510
Glu Ile Leu Glu Arg Arg Gly Ser Gly Glu Leu Tyr Glu His Glu Lys
        515                 520                 525
Asp Leu Val Trp Lys Leu Arg His Glu Val Gln Glu His Phe Pro Glu
    530                 535                 540
Ala Leu Ala Arg Leu Leu Leu Val Thr Lys Trp Asn Lys His Glu Asp
545                 550                 555                 560
Val Ala Gln Met Leu Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Pro Glu Leu Pro Val
                565                 570                 575
Leu Ser Ala Leu Glu Leu Leu Asp Phe Ser Phe Pro Asp Cys His Val
            580                 585                 590
Gly Ser Phe Ala Ile Lys Ser Leu Arg Lys Leu Thr Asp Asp Glu Leu
        595                 600                 605
Phe Gln Tyr Leu Leu Gln Leu Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu Ser Tyr
    610                 615                 620
Leu Asp Cys Glu Leu Thr Lys Phe Leu Leu Asp Arg Ala Leu Ala Asn
625                 630                 635                 640
Arg Lys Ile Gly His Phe Leu Phe Trp His Leu Arg Ser Glu Met His
                645                 650                 655
Val Pro Ser Val Ala Leu Arg Phe Gly Leu Ile Leu Glu Ala Tyr Cys
            660                 665                 670
Arg Gly Ser Thr His His Met Lys Val Leu Met Lys Gln Gly Glu Ala
        675                 680                 685
Leu Ser Lys Leu Lys Ala Leu Asn Asp Phe Val Lys Leu Ser Ser Gln
    690                 695                 700
Lys Thr Pro Lys Pro Gln Thr Lys Glu Leu Met His Leu Cys Met Arg
705                 710                 715                 720
Gln Glu Ala Tyr Leu Glu Ala Leu Ser His Leu Gln Ser Pro Leu Asp
                725                 730                 735
Pro Ser Thr Leu Leu Ala Glu Val Cys Val Glu Gln Cys Thr Phe Met
            740                 745                 750
Asp Ser Lys Met Lys Pro Leu Trp Ile Met Tyr Ser Asn Glu Glu Ala
        755                 760                 765
Gly Ser Gly Gly Ser Val Gly Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu
    770                 775                 780
Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Met Ile Gln Leu Met Asp Val Leu
785                 790                 795                 800
Trp Lys Gln Glu Gly Leu Asp Leu Arg Met Thr Pro Tyr Gly Cys Leu
                805                 810                 815
Pro Thr Gly Asp Arg Thr Gly Leu Ile Glu Val Val Leu Arg Ser Asp
            820                 825                 830
Thr Ile Ala Asn Ile Gln Leu Asn Lys Ser Asn Met Ala Ala Thr Ala
        835                 840                 845
Ala Phe Asn Lys Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys Ser Lys Asn Pro
    850                 855                 860
Gly Glu Ala Leu Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr Leu Ser Cys Ala
865                 870                 875                 880
Gly Tyr Cys Val Ala Thr Tyr Val Leu Gly Ile Gly Asp Arg His Ser
                885                 890                 895
Asp Asn Ile Met Ile Arg Glu Ser Gly Gln Leu Phe His Ile Asp Phe
            900                 905                 910
Gly His Phe Leu Gly Asn Phe Lys Thr Lys Phe Gly Ile Asn Arg Glu
        915                 920                 925
Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Val His Val Ile Gln Gln
    930                 935                 940
Gly Lys Thr Asn Asn Ser Glu Lys Phe Glu Arg Phe Arg Gly Tyr Cys
945                 950                 955                 960
Glu Arg Ala Tyr Thr Ile Leu Arg Arg His Gly Leu Leu Phe Leu His
                965                 970                 975
Leu Phe Ala Leu Met Arg Ala Ala Gly Leu Pro Glu Leu Ser Cys Ser
            980                 985                 990
Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys Asp  Ser Leu Ala Leu Gly  Lys Thr Glu
        995                 1000                 1005
Glu Glu  Ala Leu Lys His Phe  Arg Val Lys Phe Asn  Glu Ala Leu
    1010                 1015                 1020
Arg Glu  Ser Trp Lys Thr Lys  Val Asn Trp Leu Ala  His Asn Val
1025                     1030                 1035
Ser Lys Asp Asn Arg Gln
                1040
<210>3
<211>69
<212>DNA
<213>p110β的5′引物
<400>3
gatcgaattc ggcgccacca tggactacaa ggacgacgat gacaagtgct tcagtttcat      60
aatgcctcc                                                              69
<210>4
<211>42
<212>DNA
<213>p110β的3′引物
<400>4
gatcgcggcc gcttaagatc tgtagtcttt ccgaactgtg tg                         42
<210>5
<211>40
<212>DNA
<213>p110γ的5′引物
<400>5
agaatgcggc cgcatggagc tggagaacta taaacagccc                            40
<210>6
<211>37
<212>DNA
<213>p110γ的3′引物
<400>6
cgcggatcct taggctgaat gtttctctcc ttgtttg                               37

Claims (15)

1.干扰白细胞功能的方法，所述方法包括使白细胞与具有以下结构的化合物及其可药用盐和溶剂化物以足以抑制所述白细胞中磷脂酰肌醇3-激酶δ活性的量接触：
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Rb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，被一个或者多个SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
2.权利要求1的方法，其中所述化合物选自：
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-邻-基甲基)-5-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-联苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-联苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6-羟基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-异丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基-苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-环丙基甲基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-苯乙基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基-甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-苯乙基-3H-喹唑啉-4-酮
3-环戊基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基-甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环戊基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-甲基-4-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]苯甲酸
3-环丙基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-(4-硝基苄基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-环己基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-环己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-环己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-(E-2-苯基环丙基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-(2-氯-苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
(2-氯苯基)-二甲基氨基-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-(2-苄氧基乙氧基)-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
6-氨基嘌呤-9-羧酸3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基甲酯
N-[3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基甲基]-2-(9H-嘌呤-6-基硫基)-乙酰胺
2-[1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-二甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘌呤-7-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘌呤-9-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(氨基-二甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(4-氨基-1，3，5-三嗪-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(7-甲基-7H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-嘌呤-7-基甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-嘌呤-9-基甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(9-甲基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2，6-二氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(5-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基硫基-9H-嘌呤-6-基硫基-甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-羟基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-邻甲苯基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-7-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-1-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基-9H-嘌呤-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(3-氨基-5-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基-甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(5-氨基-3-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(6-甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-苄基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2，6-二氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
3-异丁基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
N-{2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯基}-乙酰胺
5-甲基-3-(E-2-甲基-环己基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸
3-{2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]苯基}-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-(2-吗啉-4-基-乙基氨基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-苄基-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-苄氧基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-羟基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-[1-(9 H-嘌呤-6-基氨基)丙基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-苄氧基-1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-{2-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)-乙氧基)-苯基}-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-(2-丙-2-炔基氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-{2-(1-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-苯氧基}-乙酰胺。
3.抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ多肽的激酶活性的方法，所述方法包括使所述多肽与具有以下结构的化合物及其可药用盐和溶剂化物接触：
Figure A028256870009C1
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Rb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C1-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，任选被一个或者多个卤素、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
4.具有以下通式结构的化合物及其可药用盐和溶剂化物：
其中A为任选取代的包含至少两个氮原子的单环或双环系统，并且所述环系当中至少有一个环为芳环；
X选自C(Rb)2、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或选自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2独立地选自氢、C1-6烷基、芳基、杂芳基、卤素、NHC(＝O)C1-3亚烷基N(Ra)2、NO2、ORa、CF3、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亚烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa、C(＝O)NRaSO2Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、C2-6亚链烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亚烷基Het、OC2-4亚烷基ORa、OC2-4亚烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亚烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亚烷基芳基、C1-4亚烷基Het、C1-6亚烷基ORb、C1-3亚烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亚烷基-芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基OC1-3亚烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Rb、NHC(＝O)C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、NHC(＝O)C1-3亚烷基Het、OC1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亚烷基Het和NHC(＝O)卤代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成任选包含至少一个杂原子的5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或者亚链烯基链成分；
R3选自任选取代的氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-4亚烷基环烷基、C2-6链烯基、C1-3亚烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、杂芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亚烷基Het、C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基，任选被一个或者多个卤素、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2和OC1-4亚烷基N(Ra)2取代的C1-4亚烷基芳基，C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基杂芳基、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亚烷基OC1-4亚烷基ORa、C1-4亚烷基N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)ORa和C1-4亚烷基OC1-4亚烷基C(＝O)ORa；
Ra选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基N(Rc)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基、杂芳基、杂芳基C1-3烷基和C1-3亚烷基杂芳基；
或者两个Ra基团一起形成5-或6-元环，所述环任选包含至少1个杂原子；
Rb选自氢、C1-6烷基、杂C1-3烷基、C1-3亚烷基杂C1-3烷基、芳基杂C1-3烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-3烷基、杂芳基C1-3烷基、C1-3亚烷基芳基和C1-3亚烷基杂芳基；
Rc选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基和杂芳基；
Het为饱和或部分不饱和或完全不饱和的5-或6-元杂环，所述杂环包含至少1个选自氧、氮和硫的杂原子，且任选被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代，
条件是：如果X-Y是CH2S，则R3不是
Figure A028256870013C1
Figure A028256870014C1
并且如果X-Y是CH2S，则R3不是-CH2CH(OH)CH2OH取代的苯基。
5.权利要求4的化合物，其中X选自CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH(CH3)、CH(CH2CH3)、CH2CH(CH3)和C(CH3)2。
6.权利要求5的化合物，其中Y不存在或选自S和NH。
7.权利要求5的化合物，其中A环系选自：
Figure A028256870015C1
和
Figure A028256870015C2
8.权利要求7的化合物，其中A环系被1-3个选自下列的取代基取代：N(Ra)2、卤素、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、ORa，和
Figure A028256870015C3
9.权利要求8的化合物，其中A环系被1-3个选自下列的取代基取代：NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、NHCH2C6H5、NH(C2H5)、Cl、F、CH3、SCH3、OH和
10.权利要求5的化合物，其中R1和R2独立地选自氢、ORa、卤素、C1-6烷基、CF3、NO2、N(Ra)2、NRaC1-3亚烷基N(Ra)2和OC1-3亚烷基ORa，具体的取代基包括但不限于H、OCH3、Cl、Br、F、CH3、CF3、NO2、OH、N(CH3)2、
Figure A028256870016C2
和O(CH2)2OCH2C6H5，或者R1和R2一起形成5或6元环。
11.权利要求5的化合物，其中R3选自C1-6烷基、芳基、杂芳基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、C(＝O)ORa、C1-4亚烷基Het、C1-4亚烷基环烷基、C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基C(＝O)ORa、C1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亚烷基C(＝O)Het、C1-4亚烷基N(Ra)2和C1-4亚烷基NRaC(＝O)Ra。
12.权利要求5的化合物，其中R3选自ORa、C1-6烷基、芳基、杂芳基、NO2、N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)OC2H5、CH2CH(CH3)2、
Figure A028256870017C1
Figure A028256870018C1
和
13.权利要求4的化合物，其中R3被选自下列的取代基取代：卤素、ORa、C1-6烷基、芳基、杂芳基、NO2、N(Ra)2、NRaSO2CF3、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)ORa、SO2N(Ra)2、CN、C(＝O)Ra、C1-4亚烷基N(Ra)2、OC1-4亚烷基C≡CRa、OC1-4亚烷基C(＝O)N(Ra)2、OC1-4亚烷基芳基、OC1-4亚烷基杂芳基、OC1-4亚烷基Het、OC1-4亚烷基N(Ra)2和N(Ra)C1-4亚烷基N(Ra)2。
14.权利要求4的化合物，其中R3被选自下列的取代基取代：Cl、F、CH3、CH(CH3)2、OH、OCH3、OCH2C6H5、O(CH2)3N(CH3)2、OCH2C≡CH、OCH2C(＝O)NH2、C6H5、NO2、NH2、NHC(＝O)CH3、CO2H、N(CH3)CH2CH2N(CH3)2和
15.权利要求4的化合物，其中所述化合物选自：
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-苄氧基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-羟基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-甲基-2-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基]-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(2-苄氧基-1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-邻甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-{2-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)-乙氧基)-苯基}-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-(2-丙-2-炔基氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-{2-(1-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基]苯氧基}-乙酰胺。
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