CN1414973A - 苏云金芽孢杆菌(bacillus thur_ingiensis)的杀虫蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及来自苏云金芽孢杆菌菌株的新杀虫化合物。本发明提供了被命名为CrylJd、Cry9Fa、和CrylBf的新蛋白及其杀虫片断，以及编码这些蛋白或其杀虫片断的DNA序列。本发明进一步提供了表达这些蛋白的重组宿主，尤其是植物细胞和植株。

Description

苏云金芽孢杆菌(BACILLUS THURINGIENSIS)的杀虫蛋白
引言
本发明涉及编码苏云金芽孢杆菌产生的杀虫蛋白的新的DNA序列。具体地说，本发明提供了编码被命名为Cry9Fa、Cry1Jd和Cry1Bf的蛋白的新的DNA序列，其有益于保护植物免受昆虫侵害。此处也包括用至少一种该新分离基因转化的微生物和植物，这样它们通过表达杀虫蛋白而赋予昆虫抗性。
发明背景
(i)发明领域
Bt或苏云金芽孢杆菌因其对昆虫害虫的特异毒性而广为所知，并被用于控制植物的昆虫害虫几乎达一个世纪之久。最近几年，已经有了表达Bt蛋白的转基因植物，其已被发现能成功控制昆虫对植物的损害(如Vaeck等，1987)。
尽管许多Bt晶体蛋白基因已经得到分离，但是对于编码杀虫蛋白的新基因的搜索仍在继续。实际上，与化学杀虫剂相比，Bt杀虫晶体蛋白的靶标昆虫范围公知为相对较窄。而且，对相同靶标昆虫种类具有多重毒性活性使得可使用具有不同作用方式的蛋白成为可能，从而可以防止或延缓昆虫抗性的发展。
(ii)相关技术描述
先前，Cry1B-、Cry1J-和Cry9蛋白的几种类型已得到鉴定(见Crickmore等，1998，全部详情并入此文以作参考)。
新的Cry1Bf蛋白与Cry1Be蛋白的序列同源性最为接近(Payne等，1998，美国专利5,723,758)，但前者毒性蛋白片断的氨基酸序列与Cry1Be蛋白毒性片断的氨基酸序列相比，仍有约14％的差异。
与Cry1Jd的毒性片断序列同源性最接近的为Cry1Jc1蛋白的毒性片断(美国专利5,723,758)，但这两个蛋白毒性片断的氨基酸序列仍有约18％的差异。
如Midoh等人(PCT专利公开WO 98/26073)和Narva等人(PCT专利公开WO 98/00546)所述，与Cry9Fa的毒性片断序列同源性最接近的为Cry9Ea1蛋白的毒性片断，但Cry9Fa和Cry9Ea蛋白的毒性片断仍有约21％的氨基酸序列差异。
发明概述
本发明提供了一段DNA序列，其编码的蛋白包含选自下列的氨基酸序列：a)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，b)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，以及c)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3984的cry9Fa基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列。
本发明特别优选编码含有下列氨基酸序列的蛋白的DNA序列：SEQ IDNo.2蛋白的杀虫片断的氨基酸序列、SEQ ID No.4蛋白的杀虫片断的氨基酸序列和SEQ ID No.6蛋白的杀虫片断的氨基酸序列；或者可选编码含有下列氨基酸序列的蛋白的DNA序列：SEQ ID No.2的氨基酸序列、SEQ IDNo.4的氨基酸序列、SEQ ID No.6的氨基酸序列；或者含有SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、或SEQ ID No.5 DNA序列的DNA序列。
此外，本发明提供了这样的DNA序列，其至少编码新分离蛋白的下列部分：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列、SEQID No.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列、SEQ ID No.6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列。
此外，本发明提供了含有人工DNA序列的上述DNA序列，该人工DNA序列具有不同于天然存在的DNA序列中的密码子使用，但却编码相同的蛋白或其杀虫片断。
更进一步地，本发明提供了包含选自下列氨基酸序列的蛋白：a)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，b)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，c)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3984的cry9Fa基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列。
此处尤其优选包含选自下列氨基酸序列的蛋白：SEQ ID No.2蛋白的杀虫片断的氨基酸序列、SEQ ID No.4蛋白的杀虫片断的氨基酸序列和SEQID No.6蛋白的杀虫片断的氨基酸序列；或者包含选自下列氨基酸序列的蛋白：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列、SEQID No.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列、SEQ ID No.6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列；或者含有SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、或SEQ ID No.6氨基酸序列的蛋白。
此处，本发明也提供了含有在植物表达启动子控制下的上述DNA的嵌合基因和由转化而含有那些嵌合基因的植物细胞、植株或种子，其中所述植物细胞、植株或种子尤其选自：玉米、棉花、水稻、油菜籽、芸苔、茄子、大豆、土豆、向日葵、西红柿、甘蔗、茶叶、豌豆、烟草、草莓、苜蓿、黄瓜、西瓜、胡椒、燕麦、大麦、小麦、天竺牡丹、剑兰、菊花、甜菜、高粱、紫花苜蓿和花生。按本发明所述，该嵌合基因整合入植物细胞的染色体DNA或叶绿体DNA。
另外，本发明也提供了由转化而含有任何上述DNA序列的、尤其是选自土壤杆菌属(Agrobacterium)、埃希氏菌属(Escherichia)或芽孢杆菌属(Bacillus)的微生物。
此处也提供了一种控制昆虫的方法和使植物抗昆虫的方法，其中所述控制昆虫的方法包括在宿主细胞、尤其是植物细胞中表达任何上述DNA序列，并使昆虫和所述宿主细胞相接触；其中所述使植物抗昆虫的方法包括用任何上述DNA序列或嵌合基因转化植物细胞，并从此类抗昆虫细胞再生出转化植株。
优选实施方案详述
按本发明所述，编码新Bt毒素的DNA序列已被分离得到并得以描述。这些新基因被命名为cry1Bf、cry1Jd和cry9Fa，其编码的蛋白为Cry1Bf、Cry1Jd和Cry9Fa.。
按本发明所述，“Cry1Bf蛋白”指含有SEQ ID No.2氨基酸序列的、保留杀虫活性的最小蛋白片断的任何蛋白，尤其是含有SEQ ID No.2中第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白，包括但不限于具有SEQ ID No.2氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最小毒性蛋白片断的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.2毒性片断三个功能结构域中之一的蛋白。
此处所用术语“含有序列X的DNA/蛋白”是指至少包括或含有此序列X的DNA或蛋白，从而在5’(或N-末端)和/或3’(或C-末端)末端可包括其它核苷酸或氨基酸序列，如EP 0 193 259公开的可选择性标记蛋白(的核苷酸序列)。
按本发明所述，“Cry9Fa蛋白”或“Cry9F蛋白”是指含有SEQ ID No.6氨基酸序列的、保留杀虫活性的最小蛋白片断的任何蛋白，尤其是含有SEQ ID No.6中第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白，包括但不限于具有SEQ ID No.6氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最小毒性蛋白片断的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.6毒性片断三个功能结构域中一个的蛋白。
按本发明所述，“Cry1Jd蛋白”是指含有SEQ ID No.4氨基酸序列的、保留杀虫活性的最小蛋白片断的任何蛋白，尤其是含有SEQ ID No.4中第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白，包括但不限于具有SEQ ID No.4氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最小毒性蛋白片断的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.4毒性片断三个功能结构域中一个的蛋白。
此处所用术语“cry1Bf DNA”、“cry9Fa DNA”或“cry1Jd DNA”分别是指编码如上所述的Cry1Bf、Cry9Fa或Cry1Jd蛋白的任何DNA序列。这包括编码如上所述的新分离蛋白或其杀虫片断的天然存在的、人工的或合成的DNA序列。此处也包括与所保藏的基因组DNA序列或序列列表中所提供序列的编码区足够相似的、编码杀虫蛋白的DNA序列，从而使它们可以(即有能力)与这些DNA序列在严紧的杂交条件下进行杂交。此处所用的严紧的杂交条件具体是指下列条件：将相关基因组DNA序列固定在滤膜上，并将该滤膜在42℃、50％甲酰胺、5％SSPE、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时，或在68℃、6x SSC、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时。然后直接向预杂交液中加入变性的标记探针并在上述适当的温度下温育16到24小时。温育之后，于室温在1x SSC、0.1％SDS中洗涤滤膜20分钟，然后于68℃在0.2x SSC和0.1％SDS中洗涤三次，每次20分钟。使用增感屏于-70℃将此滤膜曝光于X-射线胶片(Kodak XAR-2或等同物)24到48小时，以进行放射自显影。当然，在此步中可以使用等同的条件和参数而仍保持所需的严紧杂交条件。这样的等同条件之一包括：将相关基因组DNA序列固定在滤膜上，并将该滤膜在42℃、50％甲酰胺、5％SSPE、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时，或在68℃、6x SSC、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时。然后直接向预杂交液中加入变性的(地高辛或放射性)标记探针，并在上述适当的温度下温育16到24小时。温育之后，于室温在2x SSC、0.1％SDS中洗涤滤膜30分钟，然后于68℃在0.5x SSC和0.1％SDS中洗涤两次，每次30分钟。使用增感屏于-70℃将此滤膜曝光于X-射线胶片(Kodak XAR-2或等同物)24到48小时，以进行放射自显影。
此处所用的蛋白的“杀虫活性”是指当用蛋白喂饲昆虫时，该蛋白有杀死昆虫的能力，其中所述蛋白优选通过在重组宿主(如植物)中进行表达。此处所用的蛋白的“昆虫控制量”是指在植物上喂饲昆虫时，足以将昆虫对植物的损害限制在可商业用水平的蛋白量，其例如通过杀死昆虫或通过抑制昆虫的发育或成长从而使它们对植物有较少的损害且对植物产量不产生明显的副作用。
按本发明所述，将昆虫控制量、优选杀虫量的本发明的新Cry蛋白与易受该蛋白影响的昆虫接触。
此处所用的“Cry蛋白”或“本发明的Cry蛋白”是指按本发明所述所分离的并被鉴定为Cry1Bf、Cry9Fa或Cry1Jd蛋白的任何一个新的蛋白。此处所用的Cry蛋白可以是全长蛋白(也叫做原毒素)，或是稍微或完全(如N端和C端截短)截短了的形式，只要其保留了杀虫活性，或者可以是杂合或融合蛋白形式的不同蛋白或蛋白部分的组合物。“Cry原毒素”是指如同由天然存在的Bt DNA序列编码的全长晶体蛋白，“Cry毒素”是指其杀虫片断，尤其指其最小的毒性片断，用SDS-PAGE电泳测定的一般分子量范围为约60到约80kD。此处所用的“cry基因”或“cryDNA”是指编码本发明所述的Cry蛋白的DNA序列，指上述cry1Bf、cry9Fa和cry1JdDNA序列的任何一个。
此处所用的Cry蛋白的“最小毒性片断”是指可以通过胰蛋白酶或糜蛋白酶消化溶解了的全长晶体蛋白获得的保留有毒性的片断，或由Cry蛋白的DNA片断编码的毒性蛋白片断。与原毒素相比，该蛋白通常有一个短的N末端和长的C末端截短。虽然对于重组表达来说，开始于或大约开始于原始的第1位氨基酸的毒性片断是本发明所述的优选实施方案，但是我们也应该注意到除了C末端截短以外，一些N末端氨基酸也可以缺失而保留该蛋白的杀虫特点。最小毒性片断的N末端可以以本领域的常规技术，通过胰蛋白酶或糜蛋白酶处理的可溶性晶体蛋白的N末端氨基酸序列测定方便地进行测定。
编码本发明Cry蛋白的DNA可以以传统方法从1999年11月25日保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983、LMBP 3984、LMBP 3985和LMBP 3986的大肠杆菌(E.coli)菌株中分离得到。所编码的Cry蛋白可以用来以传统方法制备特异性单克隆或多克隆抗体(Hfte等，1988)。其毒素形式可以通过Cry原毒素的蛋白酶(如胰蛋白酶)水解获得。
编码该Cry蛋白的DNA序列可以以常规方法从各自菌株中分离得到或者可以基于被编码的氨基酸序列进行合成。
通过用限制酶消化分离自Bt菌株的总DNA对编码本发明Cry蛋白的DNA序列进行了鉴定；使DNA片断化，从而产生5到10Kb的DNA片断；将这些片断连入克隆载体；用克隆载体转化大肠杆菌，再用从已知的Bt晶体蛋白基因构建的DNA探针或用基于特异性PCR片断(使用与已知的Bt晶体蛋白基因相对应的引物，由Bt DNA产生)的DNA探针筛选克隆载体转化的大肠杆菌。
而且，在本发明中使用的DNA序列可以通过合成制得。实际上，由于遗传密码的简并性，一些氨基酸密码子可以用其它的密码子进行替换而不改变该蛋白的氨基酸序列。此外，一些氨基酸可以用其它的等同氨基酸代替而对该蛋白的杀虫活性没有明显的改变。而且，与那些负责结合和毒性的区域的改变不同，在此分子区内氨基酸序列或组成的改变很少有可能引起该蛋白杀虫活性的差异。该基因的这些等同物包括在严紧条件下与Cry毒素或SEQ ID.No.2、4或6的原毒素的DNA序列杂交并编码与本发明(蛋白)毒素具有相同杀虫特性的蛋白的DNA序列，或者编码与该蛋白毒素形式(如在Schnepf等人、1998中所述的，从N端到保守序列框5以外2个氨基酸处)或与本发明Cry1Bf、Cry9FA或Cry1Jd蛋白的原毒素形式具有至少85％、优选90％、最优选95％氨基酸序列同源性蛋白的DNA序列，序列同源性测定使用威斯康星GCG软件包的GAP程序(美国威斯康星州麦迪逊，10.0版；在GAP程序中使用GCG的默认值；为进行氨基酸序列比较，使用了blosum62记分模型)。
当然，根据具体目的的不同，可以构建出任何其它的密码子使用不同而编码基本上有着相同杀虫活性的相同蛋白或相似蛋白的DNA序列。这已经在原核和真核表达系统中有述，其中将密码子使用变成在外源宿主中进行基因表达时宿主细胞所偏好的密码子(Bennetzen & Hall，1982；Itakura，1977)。此外，已知Bt晶体蛋白基因对真核密码子没有偏好，并非常富含AT(Adang等，1985，Schnepf等，1985)。密码子使用表可在文献(Wada等，1990；Murray等，1989)中以及在主要的DNA序列数据库(如德国海德堡的EMBL)中找到。因此，可以构建合成的DNA序列从而产生相同的或基本上相同的蛋白。很明显，一旦知道了本发明Cry蛋白的氨基酸序列就可以设计出几种不同的DNA序列。这些其它的DNA序列包括合成的或半合成的DNA序列，它们为了使基因中的某些位点失活已经发生了改变，例如在PCT公开WO 91/16432和WO 93/09218中描述的，选择性地失活存在于天然序列中的某些隐性调节或加工元件，或使总体密码子使用适合更相关宿主生物体的密码子使用，优选可在宿主生物体表达的密码子使用。在构建这些基因时，虽然只要该蛋白的毒性不受到负面的影响就可以对氨基酸进行截短或次要的替换或添加，但是还是应该最大程度的保持所编码的氨基酸序列。
通常可以通过PCR介导的突变对DNA序列进行上述的小的修饰(Ho等，1989，White等，1989)。
在提到蛋白时的术语“基本上相同”是指包括有些氨基酸不同或有一些氨基酸添加(如融合蛋白，参见Vaeck等，1987)或缺失(如N端或C端截短)的蛋白，只要该蛋白在其杀虫活性上没有明显的差异就行。
此处所用的术语Cry毒素的“功能结构域”是指具有特定结构的、该毒素的任何部分或结构域，其可被转移到另一种(Cry)蛋白上，以产生一种新的、具有本发明Cry毒素至少一种功能特性(如结合和/或毒性特性)的杂合蛋白(Ge等，1991)。这些部分以本发明Cry蛋白的结合和/或毒性特性构成该杂合Bt蛋白的基本特征。这样的杂合蛋白可以有较大的宿主范围，改良的毒性和/或可用于防止昆虫抗性发展的策略中(欧洲专利公开(“EP”)408 403；Visser等，1993)。
可将由本发明Bt菌株的总DNA制备的5到10Kb的片断连入适当的表达载体并转化大肠杆菌，然后可以通过常规的菌落免疫探测法(French等，1986)用抗Cry蛋白的单克隆或多克隆抗体筛选表达该毒素的克隆，或通过与DNA探针杂交筛选克隆。
而且，可将由本发明Bt菌株的总DNA制备的5到10Kb的片断或其被克隆和/或亚克隆到大肠杆菌中的片断，连入适当的Bt穿梭载体(Lereclus等，1992)并转化进入晶体缺失的Bt突变体。然后筛选产生晶体(镜检)或晶体蛋白(SDS-PAGE检测)的克隆。
编码本发明Cry蛋白的基因可以以常规方法测序(Maxam和Gilbert，1980；Sanger，1977)以得到其DNA序列。序列比较表明这些基因与以前描述的、编码具有抗鳞翅类活性的原毒素和毒素(Hfte和Whiteley，1989；Crickmore等，1998)不同；而且可在
http：//epunix.biols.susx.ac.uk/Home/Neil-Crickmore/Bt/index .html
上找到1999年11月15日和2000年10月16日Bt命名网站的升级与Crickmore等(1998)的公开相对应。
编码新鉴定的Cry蛋白原毒素形式的有效杀虫区段的这些DNA序列的有效杀虫部分，在对该基因进行序列分析之后，可以按常规方法制得。在这些片断中，优选保留至少到达Bt蛋白保守序列框5的C端末端(Hofte &Whiteley，1989；Schnepf等1998)，优选到达保守序列框5C端2个氨基酸的序列。这些Cry蛋白的氨基酸序列可由分离的DNA序列得以确定。编码该Cry蛋白的DNA序列的“有效杀虫部分”，在此也指“截短基因”或“截短DNA”，是指编码一段多肽的DNA序列，该多肽比Cry蛋白原毒素形式的氨基酸要少但可以杀虫。
为了在大肠杆菌中、在其它Bt菌株中或在植物中表达编码本发明Cry蛋白的全长DNA序列或其有效杀虫部分，在该DNA序列两侧可以引入适当的限制酶切位点。这可以使用已知工艺，通过定点突变来进行(Stanssens等，1989；White等，1989)。为在植物中提高表达，可以对本发明cry基因或cry基因的有效杀虫部分的密码子使用进行修饰以形成与PCT公开WO 91/16432和WO 93/09218；EP 0 358 962和EP 0 359 472等同的、修饰的或人工基因或部分基因；或将Bt基因或部分基因插入叶绿体基因组中并使用叶绿体活性启动子进行表达(如Mc Bride等，1995)。为在单子叶植物例如玉米中获得增强表达，也可以将单子叶内含子加到嵌合基因中，并且可以以翻译中性方式，通过内含子定点插入和/或通过引入密码子使用的改变(例如将密码子使用调整至特定植物的最优密码子使用(Murray等，1989)而不明显改变所编码的氨基酸序列)，进一步改变本发明cry基因或其杀虫部分的DNA序列，以对可能出现在部分基因中的DNA抑制序列进行修饰。
此外，本发明Cry蛋白的结合特性可通过本领域已知方法进行评价(Van Rie等，1990)，以确定是否本发明的Cry蛋白结合至昆虫的中肠位点，这与由其它已知的Cry蛋白或Bt蛋白所识别的位点不同。在相关易感昆虫中，有着不同结合位点的Bt毒素对于取代已知的、昆虫可能已经对其产生抗性的Bt毒性是非常有价值的，或者对于与具有不同的、防止或延缓昆虫对Bt毒素抗性作用模式的Bt毒素的联合使用是非常有价值的，尤其是在植物中进行表达的时候。由于此新分离得到的Bt毒素的这些特点，使其在改造植物(例如单子叶植物如玉米或水稻及蔬菜如芸苔种植物)以保护这些植物免受昆虫侵害方面十分有用。
编码Cry原毒素有效杀虫区段的cry基因的有效杀虫部分或其等同物(优选cry嵌合基因)可以以常规方法稳定插入单一植物细胞的核基因组，并且这样转化的植物细胞可以以常规方法用于生产昆虫抗性的转化植株。在这点上，可用在根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中的含有cry基因有效杀虫部分的卸甲Ti质粒转化植物细胞，然后使用例如在EP 0116 718、EP 0 270 822、PCT公开WO 84/02913和公开的欧洲专利申请(“EP”)0 242 246和在Gould等(1991)中描述的方法，由该转化的植物细胞再生出转化植株。每种优选的Ti质粒载体都在Ti质粒T-DNA的边界序列之间含有cry基因有效杀虫部分，或至少位于其边界序列的左边或右边。当然，也可以用其它类型的载体转化植物细胞，所用转化方法例如使用直接的基因转移(例如在EP 0 233 247中所述)、花粉介导的转化(例如在EP 0 270356、PCT公开WO 85/01856和美国专利4,684,611中所述)、植物RNA病毒介导的转化(例如在EP 0 067 553和美国专利4,407,956中所述)、脂质体介导的转化(例如在美国专利4,536,475中所述)和其它方法例如最近所述的转化玉米的某些特定品系(Fromm等，1990；Gordon-Kamm等，1990)和水稻的某些特定品系(Shimamoto等，1989；Datta等，1990)的方法和最近所述的通常转化单子叶植物的方法(PCT公开WO 92/09696)。
所得的转化植株可用于常规的植物育种方法，用于生产更多的具有同样特性的植株或用于将该cry基因有效杀虫部分导入其它相同或相关植物品种中。从转化植株获得的种子含有作为稳定的基因组插入物的cry基因有效杀虫部分。转化植株的细胞可以以常规方法进行培养以生产Cry原毒素(优选Cry毒素)的有效杀虫区段，可以对其进行回收以用于常规的抗鳞翅类杀虫组合物中(美国专利5,254,799)。按本发明所述，本发明的植物或种子可通过例如在一块通常有虫害的地里播种或种植，以获得对昆虫的抗性。因此，按照本发明，通过在一块地里，优选在通常存在或预期存在吃该类植物的害虫(其水平为对植物造成了经济上的损害)出现的地里播种或种植产生本发明Cry蛋白的本发明的种子植物，提供了获得昆虫抗性的方法和获得提高的产量或减少虫害的方法。
将cry基因有效杀虫部分，优选截短cry基因，插入植物细胞基因组，使插入的基因位于可指导该基因部分在此植物细胞中进行表达的启动子的下游(即3’)及其控制之下。优选通过在植物细胞基因组中，具体说来就是在核基因组或叶绿体基因组中，插入cry嵌合基因来完成。优选的启动子包括：分离物CM 1841(Gardner等，1981)、CabbB-S(Franck等，1980)和CabbB-JI(Hull和Howell，1987)的花椰菜花叶病毒(CaMV)的35 S组成型强启动子(即“35 S启动子”)；遍在蛋白家族的启动子(例如Christensen等，1992的玉米遍在蛋白启动子，也可参见Cornejo等，1993)，gos2启动子(de Pater等，1992)，emu启动子(Last等，1990)，水稻的肌动蛋白启动子例如Zhang等(1991)描述的启动子；和分别驱动1’和2’基因表达的、T-DNA的TR1′启动子和TR2′启动子(即分别的“TR1启动子”和“TR2启动子”)(Velten等，1984)。另外，启动子可以为非组成型的、但其对植物的一种或多种组织或器官(如叶和/或根)具特异性，从而使插入的cry基因部分仅在特定组织或器官的细胞中进行表达。例如，通过将有效杀虫基因部分置于光诱导启动子(例如在美国专利5,254,799中公开的，植株本身的或另一植株例如豌豆的核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶小亚基基因的启动子)的控制之下，使该cry基因有效杀虫部分可选择性地在植物(例如玉米、棉花)的叶子中进行表达。再一种选择为使用诱导表达启动子(例如通过温度、愈伤或化学因子诱导)。
将cry基因的有效杀虫部分插入植物基因组中，使插入的基因部分处于适合的3’末端转录调节信号(即转录本形成和多聚腺苷酸化信号)的上游。优选通过在植物细胞基因组中插入该cry嵌合基因来进行。优选的多聚腺苷酸化和转录本形成信号包括章鱼碱合成酶基因的那些信号(Gielen等，1984)和T-DNA基因7(Velten和Schell，1985)的那些信号，它们在被转化的植物细胞中作为3’非翻译DNA序列存在。
可任选地将cry基因有效杀虫部分插入到植物基因组中作为与选择标记基因(例如编码卡那霉素抗性的neo基因(EP 0 242 236))处于同一启动子控制之下的杂合基因(美国专利5,254,799；Vaeck等，1987)，从而使该植物表达融合蛋白。
编码抗鳞翅类蛋白的全部cry基因的或部分cry基因也可用来转化其它细菌，例如具有抗鳞翅类或鞘翅类杀虫活性的苏云金芽孢杆菌。因此，可以生产转化的Bt菌株，其在同广谱鳞翅类或鞘翅类昆虫害虫斗争或同其它鳞翅类昆虫害虫斗争方面是十分有用的。用已掺入合适克隆载体的本发明全部或部分cry基因转化细菌，例如土壤杆菌属、芽孢杆菌属或埃希氏菌属的细菌，可以按常规方法进行，优选使用如Mahillon等(1989)和PCT专利公开WO 90/06999中所述的常规电穿孔技术。
含有本发明cry基因的芽孢杆菌转化菌株可通过常规方法(Dulmage，1981；Bernhard和Utz，1993)进行发酵，以提供高产量的细胞。以提供高产量的细胞。在公知的合适条件下(Dulmage，1981)，这些菌株的每一种都形成孢子以产生高产量的含有Cry原毒素的晶体蛋白。
杀虫的，尤其是抗鳞翅类的本发明组合物可以使用用cry基因转化的微生物，或优选其各自的Cry蛋白或Cry原毒素、毒素或有效杀虫原毒素区段作为活性成分，与适当的载体、稀释剂、乳化剂和/或分散剂(例如由Bernhard和Utz，1993所描述的)一起以常规方法进行配制。可以将该杀虫组合物制剂为吸湿粉末、丸粒、颗粒或喷粉，或与水性的或非水性的溶剂以泡沫、凝胶、悬液、浓缩物等等制备为液体制剂。
本发明所述的控制昆虫，尤其是鳞翅类昆虫的方法可以包括将本发明杀虫量的Cry蛋白或用cry基因转化的宿主细胞应用(例如喷洒)到要保护的地点(区域)。被保护的地点包括，例如昆虫害虫的栖息地或种植蔬菜或长有蔬菜的区域。
为获得Cry原毒素或毒素，表达Cry蛋白的重组宿主细胞可以以常规方式在适当的培养基上进行生长，然后使用常规的方法，例如酶解或去污剂等等裂解之。然后，可以用标准技术例如色谱、萃取、电泳等等，将该原毒素分离并纯化。然后可以通过该原毒素的胰蛋白酶消化获得毒素。
下列实施例例证了本发明，而并非是对本发明或保护的目标进行限制。在实施例、权利要求和叙述中所涉及的序列表如下：
序列表：
SEQ ID No.1-Cry1Bf蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.2-Cry1Bf蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.3-Cry1Jd蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.4-Cry1Jd蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.5-Cry9Fa蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.6-Cry9Fa蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.7-引物Cry1B.fw的DNA序列。
SEQ ID No.8-引物B.R的DNA序列。
SEQ ID No.9-引物B.F的DNA序列。
SEQ ID No.10-引物JFW的DNA序列。
SEQ ID No.11-引物JRV的DNA序列。
SEQ ID No.12-引物9FW的DNA序列。
SEQ ID No.13-引物9RV的DNA序列。
如果在实施例中没有其它的说明，所有制备和操作重组DNA的方法都按照在Sambrook等，分子克隆-实验室手册，第二版(Molecular Cloning-A Laboratory Manual，Second Edition)，冷泉港实验室出版社，纽约(1989)一书和在Ausubel等(1994)现代分子生物学技术，现代技术(Current Protocols in Molecular Biology，Current Protoools)，美国的第一卷和第二卷中所述的标准方法进行。植物分子生物学工作的标准材料和方法在由R.R.D.Croy所著的植物分子生物学Labfax(PlantMolecular Biology Labfax)(1993)(由BIOS Scientific PublicationsLtd(UK)和Blackwell Scientific Publications(UK))一书中有述。PCR技术方法可在M.A.Innis、D.H.Gelfand、J.J.Sninsky和T.J.White编辑的“PCR技术：方法与应用指南”(“PCR protocols：a guide to methodsand applications”)(Academic Press，Inc.，1990)一书中找到。
实施例
实施例1：菌株特征
由菲律宾Ilocos的Santo Tomas la Union收集的尘土颗粒样品中分离到菌株BtS02072BG。菌株BtS02739C分离自由菲律宾，South Tagalog的Lucena市收集的尘土颗粒样品中。
每个菌株均可在常规标准培养基上进行培养，优选T3培养基(胰蛋白胨3g/l、胰蛋白
Figure A0081799700181
2g/l、酵母抽提物1.5g/l、5mg MnCl2、0.05MNa2HPO4·2H2O、0.05M NaH2PO4·H2O，pH6.8及1.5％琼脂)，优选在28℃进行培养。为长期保存，优选将等体积的孢晶悬浮物与等体积的50％甘油混合并于-70℃保存或将孢晶悬浮物冻干。为使孢子形成，优选在T3培养基上28℃生长72小时，然后于4℃保存。由菌株在成孢期间产生的晶体蛋白被包裹成晶体状。
实施例2：抗所选鳞翅类昆虫种的BtS02072BG和BtS02739C菌株的杀虫活性
在人工喂养的美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)、烟芽夜蛾(Heliothisvirescens)、玉米螟(Ostrinia nubilalis)、草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)和Sesamia nonagrioides的初生幼虫上用由BtS02072BG或BtS02739C得到的孢晶混合物(约109孢晶/ml)进行毒性分析。
于Costar 24孔板按孔分发人工饲料(Vanderzant，1962)，以对美洲棉铃虫、烟芽夜蛾和玉米螟进行实验。将50微升孢晶混合物施于饲料表面并在层化气流中干燥。为对美洲棉铃虫、烟芽夜蛾进行实验，在每个孔里放1条幼虫，每个样品用20条幼虫。为对玉米螟进行实验，在每个孔里放2条幼虫，每个样品用24条幼虫。于Costar 48孔板按孔分发人工饲料，以对草地夜蛾进行实验。将25微升孢晶混合物施于饲料表面并在层化气流中干燥。在每个孔里放1条幼虫，每个样品用18条幼虫。在第7天计算死亡幼虫和活幼虫。死亡幼虫的百分比如表I所示。表I：晶孢混合物施用于昆虫后死亡幼虫百分比：
    BTS02072BG     BTS02739C
    美洲棉铃虫     70     15
    烟芽夜蛾     85-50     80-60
    玉米螟     92     72
    草地夜蛾     6     未测
    S.nonagroides     100     未测
实施例3：新cry基因的特性
使用靶向已知的cry基因中保守区的简并引物进行PCR以对BtS02739C基因进行检测。用Wizard PCR preps(Promega)纯化系统对所得的扩增产物进行纯化并将其连入pGEM-T载体(Promega)。将连接混合物以电穿孔法转入大肠杆菌JM 101。一次小规模制备物中至少由40个含有插入片段的转化子组成，并用所选的限制酶进行消化。对所消化的小规模制备DNA进行电泳，然后可以观察到不同的DNA片断类型。对每种类型至少选择一个菌落。制备适当的DNA制备物以对每个所选菌落中质粒的插入片段序列进行测定。所测定的扩增产物序列与公开的cry序列的排列表明菌株BtS02739C含有一个新的cry1J-型基因和新的cry9-型基因。
BtS02072BG基因的检测如下。首先，使用菌株BtS02419J的简并晶体蛋白基因引物进行PCR。使用简并晶体蛋白引物，以所得的扩增产物为模板进行二次PCR。
用Wizard PCR preps(Promega)纯化系统对所得的扩增产物进行纯化并将其连入pGEM-T载体(Promega)。将连接产物以电穿孔法转入大肠杆菌XL1 Blue。一次小规模制备至少由40个含有插入片段的转化子组成，并用所选的限制酶进行消化。对所消化的小规模制备DNA进行电泳，然后可以观察到不同的DNA片断类型。对每种类型至少选择一个菌落。制备适当的DNA制备物以对每个所选菌落中质粒插入片段的序列进行测定。
由菌株BtS02419J的克隆扩增产物中，我们发现了一段与cry1Be1相应片断一致的序列，二者只相差一个核苷酸。然后，选择引物对大量Bt菌株(其中一个是BtS02072BG菌株)中是否存在与已测序的BtS02419J菌株的cry基因片断相似的cry序列进行评测。这些引物序列如下(5′to3′)：
正向引物：cry1B.fw：CAG TCC AAA CGG GTA TAA AC
反向引物：B.R：CTG CTT CGA AGG TTG CAG TA
所测定的扩增产物的序列与公开的cry序列的排列表明菌株BtS02072BG含有一个新的cry1B-型基因。
实施例4：cry基因的克隆与表达
为了从菌株BtS02739C中分离出全长的cry1J-型和cry9-型基因，以及从菌株BtS02072BG中分离出cry1B-型基因，制备了这些菌株的总DNA，并以Sau3A进行部分消化。以蔗糖梯度对所消化的DNA依大小分开，并将5Kb到10Kb片断连入以BamH1消化并以TsAP(温敏碱性磷酸酶)处理过的克隆载体pUC19(Yannisch-Perron等，1985)中。将连接混合物以电穿孔法转入大肠杆菌XL1-Blue或大肠杆菌JM109细胞。将转化子铺于含Xgal和IPTG的LB-triacillin平板上并挑取白色菌落进行滤膜杂交实验。然后用合适的DIG标记探针筛选含载体的重组大肠杆菌克隆。这些探针按以下方法制得。首先，用来自重组大肠杆菌克隆作为模板细胞(其包含具有特定cry基因片断的质粒)进行PCR，预先使用表II所示的恰当引物进行扩增。表II：用于分离新Bt DNA序列(Y＝C或T，S＝G或C)的引物：
菌株 基因 引物 扩增片断的长度 引物序列
2739C  cry1J-型     JFW 365 bp  GCA GCT AAT GCT ACC ACA TC
    JRV  GTG GCG GTA TGC TGA CTA AT
 cry9-型     9FW 576  GYT TTT ATT CGC CCG CCA CA
    9RV  CGA CAG TAG SAC CCA CTA CT
 2072BG  cry1B-型     B.F 922  CAG CGT ATT AAG TCG ATG GA
    B.R  CTG CTT CGA AGG TTG CAG TA
将所得的扩增产物进行凝胶纯化，并以它为模板用DIG标记的dNTP进行二次PCR反应。将适当量的该扩增产物用于杂交反应。
用cry1J-型探针和cry9-型探针的混合物进行菌株BtS02739C的菌落杂交。然后将阳性克隆与每个探针分别杂交。菌株BtS02072BG的菌落杂交用cry1B-型探针进行。在鉴定出一个含全长cry基因质粒的阳性克隆后，使用染料终止子标记法及Perkin Elmer ABI Prism-377DNA测序仪对该cry基因两条链的序列进行测定。根据DNA测序的结果对这些基因命名如下：BtS02739C的cry1J-型和cry9-型基因被分别命名为cry1Jd和cry9Fa，BtS02072BG的cry1B-型基因被命名为cry1Bf。
所分离的cry1Jd、cry9Fa和cry1Bf基因的基因组序列及其编码的蛋白的序列也在本发明序列表中列出。这些序列与已知的Cry DNA或蛋白序列的比较表明，这些序列是新的并有相当多的核苷酸和氨基酸与已知的Bt基因及蛋白不同。使用10.0版的Wisconsin GCG软件包(美国，威斯康星麦迪逊)的GAP程序确定最相似基因和蛋白编码区(原毒素和毒素两种形式)的序列同一性，表III-V为其概述。在GAP程序中使用GCG的默认值。对核苷酸序列比较而言，使用的是nwsgapdna计分模型，对氨基酸序列比较而言，使用blosum62计分模型。在表III-V中使用的毒素形式是指起始于Schnepf等(1998)等所定义的保守序列框5的第一个氨基酸并结束于最后一个氨基酸(通常为脯氨酸)后两个氨基酸处的蛋白。原毒素形式是指Bt蛋白/基因的整个蛋白或其编码区。表III：cry1Bf/Cry1Bf的序列同一性：
DNA cry1Ba1 cry1Bb1  cry1Bc1  cry1Bd1  cry1Be1
原毒素 91.912 83.890  77.207  83.565  93.774
毒素 86.562 74.922  74.922  75.342  89.220
蛋白 Cry1Ba1 Cry1Bb1  Cry1Bc1  Cry1Bd1  Cry1Be1
原毒素 89.869 80.193  75.795  80.933  92.170
毒素 82.520 67.868  67.868  70.142  86.499
表IV：cry9Fa/Cry9Fa的序列同一性：
DNA  cry9Aa1  cry9Ba1  cry9Ca1  cry9Da1  cry9Ea1
原毒素  71.592  78.212  76.614  81.197  84.043
毒素  51.782  62.720  68.215  75.593  81.618
蛋白 Cry9Aa1  Cry9Ba1  Cry9Ca1  Cry9Da1  Cry9Ea1
原毒素 62.445  72.064  71.553  76.963  82.578
毒素 35.828  52.167  59.133  68.372  78.858
表V：cry1Jd/Cry1Jd的序列同一性：
    DNA     cry1Ja1     cry1Jb1     cry1Jc1
    原毒素     83.233     83.176     86.323
    毒素     79.526     81.162     88.143
    蛋白     Cry1Ja1     Cry1Jb1     Cry1Jc1
    原毒素     79.759     78.830     82.489
    毒素     71.574     74.746     81.711
这些新分离基因的基因组克隆已保藏于BCCMTM-LMBP(BelgianCoordinated Collections of Microorganisms-Laboratorium voorMoleculaire Biologie-Plasmidencollectie，University of Gent，K.L.Ledeganckstraat 35，B-9000 Gent，比利时)，保藏号为：
LMBP 3983-含pUC2739C/1Jd1质粒(其中含有cry1Jd基因)的大肠杆菌JM109，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用XhoI和SmaI消化该质粒，分离得到约8.4kb的DNA片断)；
LMBP 3984-含pUC2739C/9Fa1质粒(其中含有cry9Fa基因)的大肠杆菌JM109，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用SacI和PstI消化该质粒，分离得到约8kb的DNA片断)；
以及LMBP 3986-含pUC2072BG/1Bf1质粒(其中含有cry1Bf基因)的大肠杆菌XL1Blue，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用SacI和SalI消化该质粒，分离得到约7kb的DNA片断)。
实施例5：cry基因的杀虫活性：
将含cry9Fa基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规方法将所得的质粒pSL2739C/9Fa1转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重组Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在烟芽夜蛾和玉米螟的新生幼虫上以约109滴度/ml的浓度进行检测。对玉米螟幼虫，观察到100％死亡率，而对烟芽夜蛾幼虫，死亡率为72％，而用晶体缺陷的对照菌株进行处理以后，幼虫全都存活。
将含cry1Bf基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规方法将所得的质粒pSL2072BG/1Bf转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重组Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在Sesamia nonagrioides、烟芽夜蛾、美洲棉铃虫和玉米螟幼虫上以不同浓度进行检测。在烟芽夜蛾、玉米螟和Sesamia nonagrioides幼虫上观察到了Cry1Bf毒素有相当高的死亡率，而对美洲棉铃虫的毒性较低。用晶体缺陷的对照菌株进行处理以后，幼虫全部存活。
将含cry1Jd基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规方法将所得的质粒pGI2739C/1Jd转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重组Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在烟芽夜蛾幼虫上以不同浓度进行检测，观察到了Cry1Bf毒素明显的致死性。用晶体缺陷的对照菌株进行处理以后，幼虫全部存活。
实施例6：在转化植物中生产新的Cry蛋白。
使用CaMV 35S(Hull和Howell，1987)和遍在蛋白(Christensen等，1992)启动子，按EP 0 193 259和公开的PCT专利申请WO 94/12264中所描述的方法制得编码Cry1Bf、Cry1Jd和Cry9Fa蛋白截短形式的嵌合基因。如在公开的PCT专利申请WO 94/12264中所述，开放阅读框架的密码子使用与宿主植物的相适应为优选，以使表达效率最佳。
用所得的嵌合基因转化水稻、棉花和玉米细胞。
如在WO 92/09696或美国专利5,641,664中所述(并入本文以作参考)，使用愈伤的和酶降解的胚芽愈伤组织，通过土壤杆菌介导的转化(Ishida等，1996，和美国专利5,591,616)或通过电穿孔法都可以对玉米细胞进行稳定转化。
通过土壤杆菌介导的转化(Umbeck等，1987，生物/技术(Bio/Technology)5，263-266；美国专利；5,004,863，并入本文以作参考)可以对玉米细胞进行稳定转化。
用公开的PCT专利申请WO 92/09696中所描述的方法可对水稻细胞进行稳定转化。
通过ELISA、Northern和Southern印迹及杀虫效果选择再生的转化玉米、棉花和水稻植株。与未转化的对照植株相比，含嵌合基因的后代植株表现出增强的昆虫抵抗力，其具有适当的昆虫抵抗力分离和转化表型。蛋白与RNA测定表明增强的昆虫抵抗力与新Cry蛋白在植株中的较高表达相关。
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                          序列表<110>阿温提斯作物科学公司<120>苏云金芽孢杆菌(BACILLUS THURINGIENSIS)的杀虫蛋白。<130>NEWBTSWO<140><141><150>60/173387<151>1999-12-28<160>13<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>3687<212>DNA<213>苏云金芽孢杆菌<220><221>CDS<222>(1)..(3687)<400>1ttg act tca aat agg aaa aat gag aat gaa att ata aat gct tta tcg   48Leu Thr Ser Asn Arg Lys Asn Glu Asn Glu Ile Ile Asn Ala Leu Ser1               5                  10                  15att cca gct gta tcg aat cat tcc aca caa atg gat cta tca cca gat   96Ile Pro Ala Val Ser Asn His Ser Thr Gln Met Asp Leu Ser Pro Asp
         20                  25                  30gct cgt att gag gat tct ttg tgt ata gcc gag ggg aat aat atc aat   144Ala Arg Ile Glu Asp Ser Leu Cys Ile Ala Glu Gly Asn Asn Ile Asn
     35                  40                  45cca ctt gtt agc gca tca aca gtc caa acg ggt att aac ata gct ggt   192Pro Leu Val Ser Ala Ser Thr Val Gln Thr Gly Ile Asn Ile Ala Gly
 50                  55                  60aga ata cta ggt gta tta ggc gta ccg ttt gct gga caa ata gct agt   240Arg Ile Leu Gly Val Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Ile Ala Ser65                  70                  75                  80ttt tat agt ttt ctt gtt ggt gaa tta tgg ccc cgc ggc aga gat cag   288Phe Tyr Ser Phe Leu Val Gly Glu Leu Trp Pro Arg Gly Arg Asp Gln
             85                  90                  95tgg gaa att ttc cta gaa cat gtc gaa caa ctt ata aat caa caa ata   336Trp Glu Ile Phe Leu Glu His Val Glu Gln Leu Ile Asn Gln Gln Ile
        100                 105                 110aca gaa aat get agg aat acg gca ctt gct cga tta caa ggt tta gga   384Thr Glu Asn Ala Arg Asn Thr Ala Leu Ala Arg Leu Gln Gly Leu Gly
    115                 120                 125gat tcc ttt aga gcc tat caa cag tca ctt gaa gat tgg eta gaa aac   432Asp Ser Phe Arg Ala Tyr Gln Gln Ser Leu Glu Asp Trp Leu Glu Asn
130                 135                 140cgt gat gat gca aga acg aga agt gtt ctt tat acc caa tat ata gcc   480Arg Asp Asp Ala Arg Thr Arg Ser Val Leu Tyr Thr Gln Tyr Ile Ala145                 150                 155                 160tta gaa ctt gat ttt ctt aat gcg atg ccg ctt ttc gca att aga aac   528Leu Glu Leu Asp Phe Leu Asn Ala Met Pro Leu Phe Ala Ile Arg Asn
            165                 170                 175caa gaa gtt cca tta tta atg gta tat gct caa gct gca aat tta cac   576Gln Glu Val Pro Leu Leu Met Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His
        180                 185                 190cta tta tta ttg aga gat gcc tct ctt ttt ggt agt gaa ttt ggg ctt   624Leu Leu Leu Leu Arg Asp Ala Ser Leu Phe Gly Ser Glu Phe Gly Leu
    195                 200                 205aca tcg cag gaa att caa cgt tat tat gag cgc caa gtg gaa caa acg   672Thr Ser Gln Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Glu Arg Gln Val Glu Gln Thr
210                 215                 220aga gat tat tcc gac tat tgc gta gaa tgg tat aat aca ggt cta aat   720Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Cys Val Glu Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Asn225                 230                 235                 240agc ttg aga ggg aca aat gcc gca agt tgg gtg cgt tat aat caa ttc   768Ser Leu Arg Gly Thr Asn Ala Ala Ser Trp Val Arg Tyr Asn Gln Phe
            245                 250                 255cgt aga gat cta acg tta ggg gta tta gat cta gtg gca cta ttc cca   816Arg Arg Asp Leu Thr Leu Gly Val Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro
        260                 265                 270agc tat gac act cgc act tat cca ata aat acg agt gct cag tta aca   864Ser Tyr Asp Thr Arg Thr Tyr Pro Ile Asn Thr Ser Ala Gln Leu Thr
    275                 280                 285agg gaa gtt tat aca gac gca att gga gca aca ggg gta aat atg gca   912Arg Glu Val Tyr Thr Asp Ala Ile Gly Ala Thr Gly Val Asn Met Ala
290                 295                 300agt atg aat tgg tat aat aat aat gca cct tcg ttt tcc gct ata gag   960Ser Met Asn Trp Tyr Asn Asn Asn Ala Pro Ser Phe Ser Ala Ile Glu305                 310                 315                 320act gcg gtt atc cga agc ccg cat cta ctt gat ttt cta gaa caa ctt   1008Thr Ala Val Ile Arg Ser Pro His Leu Leu Asp Phe Leu Glu Gln Leu
            325                 330                 335aca att ttt agc act tca tca cga tgg agt gct act agg cat atg act   1056Thr Ile Phe Ser Thr Ser Ser Arg Trp Ser Ala Thr Arg His Met Thr
        340                 345                 350tac tgg cgg ggg cac aca att caa tct cgg cca ata gga ggc gga tta   1104Tyr Trp Arg Gly His Thr Ile Gln Ser Arg Pro Ile Gly Gly Gly Leu
    355                 360                 365aat acc tca acg cat ggg tct acc aat act tct att aat cct gta aga   1152Asn Thr Ser Thr His Gly Ser Thr Asn Thr Ser Ile Asn Pro Val Arg
370                 375                 380tta tca ttc ttc tct cga gac gta tat tgg act gaa tca tat gca gga   1200Leu Ser Phe Phe Ser Arg Asp Val Tyr Trp Thr Glu Ser Tyr Ala Gly385                 390                 395                 400gtg ctt cta tgg gga att tac ctt gaa cct att cat ggt gtc cct act   1248Val Leu Leu Trp Gly Ile Tyr Leu Glu Pro Ile His Gly Val Pro Thr
            405                 410                 415gtt aga ttt aat ttt agg aac cct cag aat act ttt gaa aga ggt act   1296Val Arg Phe Asn Phe Arg Asn Pro Gln Asn Thr Phe Glu Arg Gly Thr
        420                 425                 430gct aac tat agt caa ccc tat gag tca cct ggg ctt caa tta aaa gat   1344Ala Asn Tyr Ser Gln Pro Tyr Glu Ser Pro Gly Leu Gln Leu Lys Asp
    435                 440                 445tca gaa act gaa tta cca cca gaa aca aca gaa cga cca aat tat gaa   1392Ser Glu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Thr Thr Glu Arg Pro Asn Tyr Glu
450                 455                 460tca tat agt cat agg tta tct cac ata ggg ctc att tca caa tct agg   1440Ser Tyr Ser His Arg Leu Ser His Ile Gly Leu Ile Ser Gln Ser Arg465                 470                 475                 480gtg cat gta cca gta tat tct tgg acg cac cgt agt gca gat cgt aca   1488Val His Val Pro Val Tyr Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Asp Arg Thr
            485                 490                 495aat acc att agt tca gat agc ata aca caa ata cca ttg gta aaa tca   1536Asn Thr Ile Ser Ser Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Ser
        500                 505                 510ttc aac ctt aat tca ggt acc tct gta gtc agt ggc cca gga ttt aca   1584Phe Asn Leu Asn Ser Gly Thr Ser Val Val Ser Gly Pro Gly Phe Thr
    515                 520                 525gga ggg gat ata atc cga act aac gtt aat ggt agt gta cta agt atg   1632Gly Gly Asp Ile Ile Arg Thr Asn Val Asn Gly Ser Val Leu Ser Met
530                 535                 540ggt ctt aat ttt aat aat aca tca tta cag cgg tat cgc gtg aga gtt   1680Gly Leu Asn Phe Asn Asn Thr Ser Leu Gln Arg Tyr Arg Val Arg Val545                 550                 555                 560cgt tat gct gct tct caa aca atg gtc ctg agg gta act gtc gga ggg   1728Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Thr Met Val Leu Arg Val Thr Val Gly Gly
            565                 570                 575agt act act ttt gat caa gga ttc cct agt act atg agt gca aat gag   1776Ser Thr Thr Phe Asp Gln Gly Phe Pro Ser Thr Met Ser Ala Asn Glu
        580                 585                 590tct ttg aca tct caa tca ttt aga ttt gca gaa ttt cct gta ggt att   1824Ser Leu Thr Ser Gln Ser Phe Arg Phe Ala Glu Phe Pro Val Gly Ile
    595                 600                 605agt gca tct ggc agt caa act gct gga ata agt ata agt aat aat gca   1872Ser Ala Ser Gly Ser Gln Thr Ala Gly Ile Ser Ile Ser Asn Asn Ala
610                 615                 620ggt aga caa acg ttt cac ttt gat aaa att gaa ttc att cca att act   1920Gly Arg Gln Thr Phe His Phe Asp Lys Ile Glu Phe Ile Pro Ile Thr625                 630                 635                 640gca acc ttc gaa gca gaa tac gat tta gaa agg gcg caa gag gcg gtg   1968Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Glu Ala Val
            645                 650                 655aat gct ctg ttt act aat acg aat cca aga aga ttg aaa aca gat gtg   2016Asn Ala Leu Phe Thr Asn Thr Asn Pro Arg Arg Leu Lys Thr Asp Val
        660                 665                 670aca gat tat cat att gat caa gta tcc aat tta gtg gcg tgt tta tcg   2064Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
    675                 680                 685gat gaa ttc tgc tta gat gaa aag aga gaa tta ctt gag aaa gtg aaa   2112Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Leu Glu Lys Val Lys
690                 695                 700tat gcg aaa cga ctc agt gat gaa aga aac tta ctc caa gat cca aac   2160Tyr Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn705                 710                 715                 720ttc aca tcc atc aat aag caa cca gac ttc ata tct act aat gag caa   2208Phe Thr Ser Ile Asn Lys Gln Pro Asp Phe Ile Ser Thr Asn Glu Gln
            725                 730                 735tcg aat ttc aca tct atc cat gaa caa tct gaa cat gga tgg tgg gga   2256Ser Asn Phe Thr Ser Ile His Glu Gln Ser Glu His Gly Trp Trp Gly
        740                 745                 750agt gag aac att aca atc cag gaa gga aat gac gta ttt aaa gag aat   2304Ser Glu Asn Ile Thr Ile Gln Glu Gly Asn Asp Val Phe Lys Glu Asn
    755                 760                 765tac gtc aca cta ccg ggg act ttt aat gag tgt tat ccg acg tat tta   2352Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asn Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu
770                 775                 780tat caa aaa ata gga gag tcg gaa tta aaa gct tat act cgc tac caa   2400Tyr Gln Lys Ile Gly Glu Ser Glu Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln785                 790                 795                 800tta aga ggg tat att gaa gat agt caa gat tta gag ata tat ttg att   2448Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile
            805                 810                 815cgt tat aat gcg aaa cat gaa aca ttg gat gtt cca ggt acc gag tcc   2496Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Leu Asp Val Pro Gly Thr Glu Ser
        820                 825                 830gta tgg ccg ctt tca gtt gaa agc cca atc gga agg tgc gga gaa ccg   2544Val Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Arg Cys Gly Glu Pro
    835                 840                 845aat cga tgc gca cca cat ttt gaa tgg aat cct gat cta gat tgt tcc   2592Asn Arg Cys Ala Pro His Phe Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys Ser
850                 855                 860tgc aga gat gga gaa aaa tgt gcg cat cat tcc cat cat ttc tct ttg   2640Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu865                 870                 875                 880gat att gat att gga tgc aca gac ttg cat gag aat cta ggc gtg tgg   2688Asp Ile Asp Ile Gly Cys Thr Asp Leu His Glu Asn Leu Gly Val Trp
            885                 890                 895gtg gta ttc aag att aag acg cag gaa ggt cat gca aga cta ggg aat   2736Val Val Phe Lys Ile Lys Thr Gln Glu Gly His Ala Arg Leu Gly Asn
        900                 905                 910ctg gaa ttt att gaa gag aaa cca tta tta gga gaa gca ctg tct cgt   2784Leu Glu Phe Ile Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ser Arg
    915                 920                 925gtg aag aga gca gag aaa aaa tgg aga gac aaa cgt gaa aaa cta caa   2832Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu Gln
930                 935                 940ttg gaa aca aaa cga gta tat aca gag gca aaa gaa gct gtg gat gct   2880Leu Glu Thr Lys Arg Val Tyr Thr Glu Ala Lys Glu Ala Val Asp Ala945                 950                 955                 960tta ttt gta gat tct caa tat aat aga tta caa gcg gat aca aac att   2928Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile
            965                 970                 975ggc atg att cat gcg gca gat aaa ctt gtt cat cga att cga gag gct   2976Gly Met Ile His Ala Ala Asp Lys Leu Val His Arg Ile Arg Glu Ala
        980                 985                 990tat ctg tca gaa tta tct gtt atc ccg ggt gta aat gcg gaa att ttt   3024Tyr Leu Ser Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Glu Ile Phe
    995                1000                1005gaa gaa tta gaa ggt cgc att atc act gca atc tcc cta tac gat gcg   3072Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Ile Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Asp Ala1010                1015                1020aga aat gtc gtt aaa aat ggt gat ttt aat aat gga tta gca tgc tgg   3120Arg Asn Val Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ala Cys Trp1025               1030                1035                1040aat gta aaa ggg cat gta gat gta caa cag agc cat cac cgt tct gtc   3168Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Gln Gln Ser His His Arg Ser Val
           1045                1050                1055ctt gtt atc cca gaa tgg gaa gca gaa gtg tca caa gca gtt cgc gtc   3216Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Ala Val Arg Val
       1060                1065                1070tgt ccg ggg cgt ggc tat atc ctc cgt gtc aca gcg tac aaa gag gga   3264Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
   1075                1080                1085tat gga gag ggt tgt gta acg atc cat gaa atc gag aac aat aca gac   3312Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr Asp1090                1095                1100gaa cta aaa ttt aaa aac tgt gaa gaa gag gaa gtg tat cca acg gat   3360Glu Leu Lys Phe Lys Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro Thr Asp1105               1110                1115                1120aca gga acg tgt aat gat tat act gca cac caa ggt aca gca gta tgt   3408Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gly Thr Ala Val Cys
           1125                1130                1135aat tcc cgt aat gct gga tat gag gat gca tat gaa gtt gat act aca   3456Asn Ser Arg Asn Ala Gly Tyr Glu Asp Ala Tyr Glu Val Asp Thr Thr
       1140                1145                1150gca tct gtt aat tac aaa ccg act tat gaa gaa gaa acg tat aca gat   3504Ala Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr Glu Glu Glu Thr Tyr Thr Asp
   1155                1160                1165gta cga aga gat aat cat tgt gaa tat gac aga ggg tat gtg aat tat   3552Val Arg Arg Asp Asn His Cys Glu Tyr Asp Arg Gly Tyr Val Asn Tyr1170                1175                1180cca cca cta cca gct ggt tat atg aca aaa gaa tta gaa tac ttc cca  3600Pro Pro Leu Pro Ala Gly Tyr Met Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro1185               1190                1195                1200gaa acc gat aag gta tgg att gag att gga gaa acg gaa ggg aag ttt  3648Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Lys Phe
           1205                1210                1215att gta gac agc gtg gaa tta ctc ctt atg gag gaa tag              3687Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
       1220                1225<210>2<211>1228<212>PRT<213>苏云金芽孢杆菌<400>2Leu Thr Ser Asn Arg Lys Asn Glu Asn Glu Ile Ile Asn Ala Leu Ser1               5                  10                  15Ile Pro Ala Val Ser Asn His Ser Thr Gln Met Asp Leu Ser Pro Asp
         20                  25                  30Ala Arg Ile Glu Asp Ser Leu Cys Ile Ala Glu Gly Asn Asn Ile Asn
     35                  40                  45Pro Leu Val Ser Ala Ser Thr Val Gln Thr Gly Ile Asn Ile Ala Gly
 50                  55                  60Arg Ile Leu Gly Val Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Ile Ala Ser65                  70                  75                  80Phe Tyr Ser Phe Leu Val Gly Glu Leu Trp Pro Arg Gly Arg Asp Gln
             85                  90                  95Trp Glu Ile Phe Leu Glu His Val Glu Gln Leu Ile Asn Gln Gln Ile
        100                 105                 110Thr Glu Asn Ala Arg Asn Thr Ala Leu Ala Arg Leu Gln Gly Leu Gly
    115                 120                 125Asp Ser Phe Arg Ala Tyr Gln Gln Ser Leu Glu Asp Trp Leu Glu Asn
130                 135                 140Arg Asp Asp Ala Arg Thr Arg Ser Val Leu Tyr Thr Gln Tyr Ile Ala145                 150                 155                 160Leu Glu Leu Asp Phe Leu Asn Ala Met Pro Leu Phe Ala Ile Arg Asn
            165                 170                 175Gln Glu Val Pro Leu Leu Met Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His
        180                 185                 190Leu Leu Leu Leu Arg Asp Ala Ser Leu Phe Gly Ser Glu Phe Gly Leu
    195                 200                 205Thr Ser Gln Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Glu Arg Gln Val Glu Gln Thr
210                 215                 220Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Cys Val Glu Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Asn225                 230                 235                 240Ser Leu Arg Gly Thr Asn Ala Ala Ser Trp Val Arg Tyr Asn Gln Phe
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        260                 265                 270Ser Tyr Asp Thr Arg Thr Tyr Pro Ile Asn Thr Ser Ala Gln Leu Thr
    275                 280                 285Arg Glu Val Tyr Thr Asp Ala Ile Gly Ala Thr Gly Val Asn Met Ala
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370                 375                 380Leu Ser Phe Phe Ser Arg Asp Val Tyr Trp Thr Glu Ser Tyr Ala Gly385                 390                 395                 400Val Leu Leu Trp Gly Ile Tyr Leu Glu Pro Ile His Gly Val Pro Thr
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    435                 440                 445Ser Glu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Thr Thr Glu Arg Pro Asn Tyr Glu
450                 455                 460Ser Tyr Ser His Arg Leu Ser His Ile Gly Leu Ile Ser Gln Ser Arg465                 470                 475                 480Val His Val Pro Val Tyr Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Asp Arg Thr
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        500                 505                 510Phe Asn Leu Asn Ser Gly Thr Ser Val Val Ser Gly Pro Gly Phe Thr
    515                 520                 525Gly Gly Asp Ile Ile Arg Thr Asn Val Asn Gly Ser Val Leu Ser Met
530                 535                 540Gly Leu Asn Phe Asn Asn Thr Ser Leu Gln Arg Tyr Arg Val Arg Val545                 550                 555                 560Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Thr Met Val Leu Arg Val Thr Val Gly Gly
            565                 570                 575Ser Thr Thr Phe Asp Gln Gly Phe Pro Ser Thr Met Ser Ala Asn Glu
        580                 585                 590Ser Leu Thr Ser Gln Ser Phe Arg Phe Ala Glu Phe Pro Val Gly Ile
    595                 600                 605Ser Ala Ser Gly Ser Gln Thr Ala Gly Ile Ser Ile Ser Asn Asn Ala
610                 615                 620Gly Arg Gln Thr Phe His Phe Asp Lys Ile Glu Phe Ile Pro Ile Thr625                 630                 635                 640Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Glu Ala Val
            645                 650                 655Asn Ala Leu Phe Thr Asn Thr Asn Pro Arg Arg Leu Lys Thr Asp Val
        660                 665                 670Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
    675                 680                 685Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Leu Glu Lys Val Lys
690                 695                 700Tyr Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn705                 710                 715                 720Phe Thr Ser Ile Asn Lys Gln Pro Asp Phe Ile Ser Thr Asn Glu Gln
            725                 730                 735Ser Asn Phe Thr Ser Ile His Glu Gln Ser Glu His Gly Trp Trp Gly
        740                 745                 750Ser Glu Asn Ile Thr Ile Gln Glu Gly Asn Asp Val Phe Lys Glu Asn
    755                 760                 765Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asn Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu
770                 775                 780Tyr Gln Lys Ile Gly Glu Ser Glu Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln785                 790                 795                 800Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile
            805                 810                 815Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Leu Asp Val Pro Gly Thr Glu Ser
        820                 825                 830Val Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Arg Cys Gly Glu Pro
    835                 840                 845Asn Arg Cys Ala Pro His Phe Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys Ser
850                 855                 860Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu865                 870                 875                 880Asp Ile Asp Ile Gly Cys Thr Asp Leu His Glu Asn Leu Gly Val Trp
            885                 890                 895Val Val Phe Lys Ile Lys Thr Gln Glu Gly His Ala Arg Leu Gly Asn
        900                 905                 910Leu Glu Phe Ile Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ser Arg
    915                 920                 925Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu Gln
930                 935                 940Leu Glu Thr Lys Arg Val Tyr Thr Glu Ala Lys Glu Ala Val Asp Ala945                 950                 955                 960Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile
            965                 970                 975Gly Met Ile His Ala Ala Asp Lys Leu Val His Arg Ile Arg Glu Ala
        980                 985                 990Tyr Leu Ser Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Glu Ile Phe
    995                1000                1005Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Ile Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Asp Ala1010                1015                1020Arg Asn Val Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ala Cys Trp1025               1030                1035                1040Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Gln Gln Ser His His Arg Ser Val
           1045                1050                1055Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Ala Val Arg Val
       1060                1065                1070Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
   1075                1080                1085Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr Asp1090                1095                1100Glu Leu Lys Phe Lys Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro Thr Asp105                1110                1115                1120Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gly Thr Ala Val Cys
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       1140                1145                1150Ala Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr Glu Glu Glu Thr Tyr Thr Asp
   1155                1160                1165Val Arg Arg Asp Asn His Cys Glu Tyr Asp Arg Gly Tyr Val Asn Tyr1170                1175                1180Pro Pro Leu Pro Ala Gly Tyr Met Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro1185               1190                1195                1200Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Lys Phe
           1205                1210                1215Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
       1220                1225<210>3<211>3507<212>DNA<213>苏云金芽孢杆菌<220><221>CDS<222>(1)..(3507)<400>3atg gag ata aat aat cag aac caa tgc ata cca tat aat tgc tta agt   48Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Ile Pro Tyr Asn Cys Leu Serl               5                  10                  15aag cct gag gaa gta ttt ttg gat ggg gag agg ata tta cct gat atc   96Lys Pro Glu Glu Val Phe Leu Asp Gly Glu Arg Ile Leu Pro Asp Ile
         20                  25                  30gat cca ctc gaa gtt tct ttg tcg ctt ttg caa ttt ctt ttg aat aac   144Asp Pro Leu Glu Val Ser Leu Ser Leu Leu Gln Phe Leu Leu Asn Asn
     35                  40                  45ttt gtt ccg ggg ggg ggg ttt att tca gga tta att gac aaa ata tgg   192Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Ser Gly Leu Ile Asp Lys Ile Trp
 50                  55                  60ggg gct ttg aga cca tct gaa tgg gaa tta ttt ctt gca cag att gaa   240Gly Ala Leu Arg Pro Ser Glu Trp Glu Leu Phe Leu Ala Gln Ile Glu65                  70                  75                  80cag ttg att gat cga aga ata gaa gca aca gta aga gca aaa gca atc   288Gln Leu Ile Asp Arg Arg Ile Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Ile
             85                  90                  95gct gaa tta gaa ggt tta ggg aga agt tat caa cta tat gga gag gca   336Ala Glu Leu Glu Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Gln Leu Tyr Gly Glu Ala
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130                 135                 140cct tcg ttt cgg gtt tcc gga ttt gaa gtg cca ctt cta tcg gtt tat   480Pro Ser Phe Arg Val Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr145                 150                 155                 160acc caa gca gct aat ttg cat ctc gct cta tta aga gat tct gtt att   528Thr Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Leu Leu Arg Asp Ser Val Ile
            165                 170                 175ttt gga gag aga tgg gga ttg tcg act aca aat gtc aat gat atc tat   576Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Ser Thr Thr Asn Val Asn Asp Ile Tyr
        180                 185                 190aat aga caa gtt aag aga att cat gaa tat agc gat cat tgt gta gat   624Asn Arg Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Ser Asp His Cys Val Asp
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210                 215                 220tgg aga ata tat aat cag ttt aga agg gaa ttg aca cta acg gta tta   720Trp Arg Ile Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Leu Thr Val Leu225                 230                 235                 240gat att gtc gct ctt ttc ccg aac tat gat ggt aga ctg tat ccg att   768Asp Ile Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Gly Arg Leu Tyr Pro Ile
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    275                 280                 285att gaa cgg cag cta agg cga cca cat ctt atg gac ttc ttt aac tcc   912Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Pro His Leu Met Asp Phe Phe Asn Ser
290                 295                 300atg acc atg tat aca tca gat aat aga cgg gaa tat tat tgg tca gga   960Met Thr Met Tyr Thr Ser Asp Asn Arg Arg Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly305                 310                 315                 320ctt gaa atg acg gct act ctt act tca gga aat caa gtg tca ttc cct   1008Leu Glu Met Thr Ala Thr Leu Thr Ser Gly Asn Gln Val Ser Phe Pro
            325                 330                 335tta gcc ggg act aga ggg aat tca gct cca cca gta tct gtt aga aag   1056Leu Ala Gly Thr Arg Gly Asn Ser Ala Pro Pro Val Ser Val Arg Lys
        340                 345                 350act ggt gag gga att tat aga ata tta tcg gaa cca ttt tat tca gca   1104Thr Gly Glu Gly Ile Tyr Arg Ile Leu Ser Glu Pro Phe Tyr Ser Ala
    355                 360                 365cct ttt cta ggc acc agt gtg cta gga agt cgc ggg gaa gaa ttt gct   1152Pro Phe Leu Gly Thr Ser Val Leu Gly Ser Arg Gly Glu Glu Phe Ala
370                 375                 380ttt gca tct aat act act aca agt ctg cca tct aca ata tat aga aat   1200Phe Ala Ser Asn Thr Thr Thr Ser Leu Pro Ser Thr Ile Tyr Arg Asn385                 390                 395                 400cgt gga aca gta gat tca tta gtc agc ata ccg cca caa gat tat agc   1248Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Val Ser Ile Pro Pro Gln Asp Tyr Ser
            405                 410                 415gta cca ccg cac agg ggg tat agt cat tta tta agt cac gtt acg atg   1296Val Pro Pro His Arg Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser His Val Thr Met
        420                 425                 430cac aat agt tct cct ata ttc cac tgg acg cat cgt agt gcg aca cct   1344His Asn Ser Ser Pro Ile Phe His Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Pro
    435                 440                 445aga aat ata att tat cca gat agt atc act caa atc cca gta gtt aag   1392Arg Asn Ile Ile Tyr Pro Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys
450                 455                 460gct tcg cac ctc tct ggt ggt tca gtt ata aaa gga cct gga cat aca   1440Ala Ser His Leu Ser Gly Gly Ser Val Ile Lys Gly Pro Gly His Thr465                 470                 475                 480ggt gga gat tta ata agc cta cct gta aat aac ttt act cat ttc cga   1488Gly Gly Asp Leu Ile Ser Leu Pro Val Asn Asn Phe Thr His Phe Arg
            485                 490                 495atc cca ttt cag gca aac act cca caa agg tat cgt att aga att tgt   1536Ile Pro Phe Gln Ala Asn Thr Pro Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Ile Cys
        500                 505                 510tat gcg gca gac tca gat ggg act ttg gat agt gga gtt ttc tta agt   1584Tyr Ala Ala Asp Ser Asp Gly Thr Leu Asp Ser Gly Val Phe Leu Ser
    515                 520                 525gca gca gca ggg gat ggt ttt aat aca act tct tat agg gcc aca atg   1632Ala Ala Ala Gly Asp Gly Phe Asn Thr Thr Ser Tyr Arg Ala Thr Met
530                 535                 540agc cct gaa ggt tcc tta aca tct cgt gat ttt caa ttt tta gat tta   1680Ser Pro Glu Gly Ser Leu Thr Ser Arg Asp Phe Gln Phe Leu Asp Leu545                 550                 555                 560aac aca tcg ttt acc tcc gat gta gca tct aac tta tgg tta cat ttt   1728Asn Thr Ser Phe Thr Ser Asp Val Ala Ser Asn Leu Trp Leu His Phe
            565                 570                 575ata cgt tat ata cga cca ggg aat ttg tat ata gat aga gcg gaa ttt   1776Ile Arg Tyr Ile Arg Pro Gly Asn Leu Tyr Ile Asp Arg Ala Glu Phe
        580                 585                 590atc cca gtg gat gca acc ttc gag gca ggt tat aat tta gaa agg gcg   1824Ile Pro Val Asp Ala Thr Phe Glu Ala Gly Tyr Asn Leu Glu Arg Ala
    595                 600                 605caa aag gcg gtg aat gcc ctg ttt act tct aca aac caa aaa gga tta   1872Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Lys Gly Leu
610                 615                 620caa aca gat gtg acg gat tat cat att gat caa gta tcc aat cta gtt   1920Gln Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val625                 630                 635                 640gat tgt tta tct gat gag ttt tgc tta gat gaa aag cga aaa ttg tcc   1968Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Lys Leu Ser
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    675                 680                 685aga gga agt acg gat att act atc caa gga gga aac gat gtt ttc aaa   2112Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asn Asp Val Phe Lys
690                 695                 700gag aat tac gtt aca cta cca ggt acc ttt gat gcg tgt tat cca aca   2160Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Ala Cys Tyr Pro Thr705                 710                 715                 720tat ttg tat caa aaa gtc gat gaa tca aaa tta aaa gcc tat acc cgt   2208Tyr Leu Tyr Gln Lys Val Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg
            725                 730                 735tat caa tta aga ggc tat atc gaa gat agt caa gat tta gaa gtc tat   2256Tyr Gln Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Val Tyr
        740                 745                 750ttg atc cgt tat aat gca aaa tat gaa acg tta aat gtg cca ggt atg   2304Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys Tyr Glu Thr Leu Asn Val Pro Gly Met
    755                 760                 765ggt tct tta tgg cca ctt tca gtc gaa agt cca att gga aag tgt gga   2352Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Lys Cys Gly
770                 775                 780gaa ccg aat cga tgt gtg cca caa ctt gaa tgg aat ccc gat ttc gat   2400Glu Pro Asn Arg Cys Val Pro Gln Leu Glu Trp Asn Pro Asp Phe Asp785                 790                 795                 800tgt tcc tgc aga gac gga gaa aaa tgt gcg cat cat tcg cat cat ttc   2448Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe
            805                 810                 815tcc ttg gac att gat gtt gga tgt aca gac ttg aat gag aac cta ggt   2496Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asn Leu Gly
        820                 825                 830ata tgg gtg ata ttc aag att aag aca cag gat ggt cat gca aga cta   2544Ile Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu
    835                 840                 845gga aat cta gaa ttt ctc gaa gag aaa ccg tta tta gga gaa gcg tta   2592Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu
850                 855                 860gcc cgt gtg aag aga gcg gag aaa aaa tgg aga gac aaa cgt gaa ata   2640Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Ile865                 870                 875                 880ttg caa tca gaa act aat att gtt tat aaa gaa gca aaa gaa gct gta   2688Leu Gln Ser Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ala Val
            885                 890                 895gat ggt tta ttc gta gat tcc caa tat gag aga tta caa tct gat acg   2736Asp Gly Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Glu Arg Leu Gln Ser Asp Thr
        900                 905                 910aat atc gcc atg att cat gcg gca gat aaa cgc gtt cac cga atc cga   2784Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg
    915                 920                 925gag gct tat ctg cca gag ctc tcc gtg att cca ggt gtc aat gca gcg   2832Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala
930                 935                 940att ttc gaa gaa tta gaa gga cgt att ttc aca gcc tac tct cta tat   2880Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Tyr Ser Leu Tyr945                 950                 955                 960gat gcg aga aat gtc att aaa aac ggt gat ttc aat aat ggc tta tca   2928Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ser
            965                 970                 975tgc tgg aat gtg aaa ggg cat gta gat ata aaa cag aat ggt cat cgt   2976Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Ile Lys Gln Asn Gly His Arg
        980                 985                 990tct gtt ctt gtt atc cca gaa tgg gaa gca caa gtt tca caa gaa gtt   3024Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Gln Val Ser Gln Glu Val
    995                1000                1005cgt gta tgt cca ggt cgt ggc tac atc ctt cgt gtt aca gcg aac aaa   3072Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Asn Lys1010                1015                1020gaa gga tat gga gaa ggc tgc gta acg att cat gag att gag aat cat   3120Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn His1025               1030                1035                1040act gaa aaa ctg aag ttt aga aac tgc gaa gaa gag gaa gta tat cca   3168Thr Glu Lys Leu Lys Phe Arg Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro
           1045                1050                1055aac aat aca gga acg tgt aat gat tat act gca cac caa caa ggt aca   3216Asn Asn Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gln Gly Thr
       1060                1065                1070gca gga tgc gca gat gca tgt aat acc cgt aat gtc gga tat gaa gat   3264Ala Gly Cys Ala Asp Ala Cys Asn Thr Arg Asn Val Gly Tyr Glu Asp
   1075                1080                1085gca tat gaa atg aat act aca aca tct gtt aat tac aaa ccg act tac   3312Ala Tyr Glu Met Asn Thr Thr Thr Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr1090                1095                1100gag gaa gaa gta tat aca gat gga cga aga gat aat cct tgt gaa atg   3360Glu Glu Glu Val Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp Asn Pro Cys Glu Met1105               1110                1115                1120gaa aga ggt tac aca cca tta cca gtt ggt tat gta aca aaa gaa tta  3408Glu Arg Gly Tyr Thr Pro Leu Pro Val Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu
       1125                    1130                1135gaa tac ttc cct gaa aca aat aca gta tgg att gaa att gga gaa acg  3456Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asn Thr Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr
       1140                1145                1150gaa ggg aag ttt att gta gac agt gtc gaa tta ctc ctt atg gaa gaa  3504Glu Gly Lys Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
   1155                1160                1165tag                                                              3507<210>4<211>1168<212>PRT<213>苏云金芽孢杆菌<400>4Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Ile Pro Tyr Asn Cys Leu Ser1               5                  10                  15Lys Pro Glu Glu Val Phe Leu Asp Gly Glu Arg Ile Leu Pro Asp Ile
         20                  25                  30Asp Pro Leu Glu Val Ser Leu Ser Leu Leu Gln Phe Leu Leu Asn Asn
     35                  40                  45Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Ser Gly Leu Ile Asp Lys Ile Trp
 50                  55                  60Gly Ala Leu Arg Pro Ser Glu Trp Glu Leu Phe Leu Ala Gln Ile Glu65                  70                  75                  80Gln Leu Ile Asp Arg Arg Ile Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Ile
             85                  90                  95Ala Glu Leu Glu Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Gln Leu Tyr Gly Glu Ala
        100                 105                 110Phe Lys Glu Trp Glu Lys Thr Pro Asp Asn Thr Ala Ala Arg Ser Arg
    115                 120                 125Val Thr Glu Arg Phe Arg Ile Ile Asp Ala Gln Ile Glu Ala Asn Ile
130                 135                 140Pro Ser Phe Arg Val Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr145                 150                 155                 160Thr Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Leu Leu Arg Asp Ser Val Ile
            165                 170                 175Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Ser Thr Thr Asn Val Asn Asp Ile Tyr
        180                 185                 190Asn Arg Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Ser Asp His Cys Val Asp
    195                 200                 205Thr Tyr Lys Thr Glu Leu Glu Arg Leu Glu Phe Arg Ser Ile Ala Gln
210                 215                 220Trp Arg Ile Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Leu Thr Val Leu225                 230                 235                 240Asp Ile Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Gly Arg Leu Tyr Pro Ile
            245                 250                 255Arg Thr Ile Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Ser Pro Val Ser
        260                 265                 270Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Ile Tyr Asn His Asn Met Ile Gly Thr Phe
    275                 280                 285Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Pro His Leu Met Asp Phe Phe Asn Ser
290                 295                 300Met Thr Met Tyr Thr Ser Asp Asn Arg Arg Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly305                 310                 315                 320Leu Glu Met Thr Ala Thr Leu Thr Ser Gly Asn Gln Val Ser Phe Pro
            325                 330                 335Leu Ala Gly Thr Arg Gly Asn Ser Ala Pro Pro Val Ser Val Arg Lys
        340                 345                 350Thr Gly Glu Gly Ile Tyr Arg Ile Leu Ser Glu Pro Phe Tyr Ser Ala
    355                 360                 365Pro Phe Leu Gly Thr Ser Val Leu Gly Ser Arg Gly Glu Glu Phe Ala
370                 375                 380Phe Ala Ser Asn Thr Thr Thr Ser Leu Pro Ser Thr Ile Tyr Arg Asn385                 390                 395                 400Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Val Ser Ile Pro Pro Gln Asp Tyr Ser
            405                 410                 415Val Pro Pro His Arg Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser His Val Thr Met
        420                 425                 430His Asn Ser Ser Pro Ile Phe His Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Pro
    435                 440                 445Arg Asn Ile Ile Tyr Pro Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys
450                 455                 460Ala Ser His Leu Ser Gly Gly Ser Val Ile Lys Gly Pro Gly His Thr465                 470                 475                 480Gly Gly Asp Leu Ile Ser Leu Pro Val Asn Asn Phe Thr His Phe Arg
            485                 490                 495Ile Pro Phe Gln Ala Asn Thr Pro Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Ile Cys
        500                 505                 510Tyr Ala Ala Asp Ser Asp Gly Thr Leu Asp Ser Gly Val Phe Leu Ser
    515                 520                 525Ala Ala Ala Gly Asp Gly Phe Asn Thr Thr Ser Tyr Arg Ala Thr Met
530                 535                 540Ser Pro Glu Gly Ser Leu Thr Ser Arg Asp Phe Gln Phe Leu Asp Leu545                 550                 555                 560Asn Thr Ser Phe Thr Ser Asp Val Ala Ser Asn Leu Trp Leu His Phe
            565                 570                 575Ile Arg Tyr Ile Arg Pro Gly Asn Leu Tyr Ile Asp Arg Ala Glu Phe
        580                 585                 590Ile Pro Val Asp Ala Thr Phe Glu Ala Gly Tyr Asn Leu Glu Arg Ala
    595                 600                 605Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Lys Gly Leu
610                 615                 620Gln Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val625                 630                 635                 640Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Lys Leu Ser
            645                 650                 655Glu Lys Val Lys Gln Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu
        660                 665                 670Gln Asp Ser Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Glu Gln Asp Arg Gly Trp
    675                 680                 685Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asn Asp Val Phe Lys
690                 695                 700Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Ala Cys Tyr Pro Thr705                 710                 715                 720Tyr Leu Tyr Gln Lys Val Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg
            725                 730                 735Tyr Gln Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Val Tyr
        740                 745                 750Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys Tyr Glu Thr Leu Asn Val Pro Gly Met
    755                 760                 765Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Lys Cys Gly
770                 775                 780Glu Pro Asn Arg Cys Val ProGln Leu Glu Trp Asn Pro Asp Phe Asp785                 790                795                 800Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe
            805                 810                 815Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asn Leu Gly
        820                 825                 830Ile Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu
    835                 840                 845Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu
850                 855                 860Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Ile865                 870                 875                 880Leu Gln Ser Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ala Val
            885                 890                 895Asp Gly Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Glu Arg Leu Gln Ser Asp Thr
        900                 905                 910Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg
    915                 920                 925Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala
930                 935                 940Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Tyr Ser Leu Tyr945                 950                 955                 960Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ser
            965                 970                 975Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Ile Lys Gln Asn Gly His Arg
        980                 985                 990Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Gln Val Ser Gln Glu Val
    995                1000                1005Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Asn Lys1010                1015                1020Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn His1025               1030                1035                1040Thr Glu Lys Leu Lys Phe Arg Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro
           1045                1050                1055Asn Asn Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gln Gly Thr
       1060                1065                1070Ala Gly Cys Ala Asp Ala Cys Asn Thr Arg Asn Val Gly Tyr Glu Asp
   1075                1080                1085Ala Tyr Glu Met Asn Thr Thr Thr Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr1090                1095                1100Glu Glu Glu Val Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp Asn Pro Cys Glu Met1105               1110                1115                1120Glu Arg Gly Tyr Thr Pro Leu Pro Val Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu
           1125                1130                1135Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asn Thr Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr
       1140                1145                1150Glu Gly Lys Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
   1155                1160                1165<210>5<211>3459<212>DNA<213>苏云金芽孢杆菌<220><221>CDS<222>(1)..(3459)<400>5atg aac cga aat aat caa aat gat tat gaa gtt att gac gct tcc aat   48Met Asn Arg Asn Asn Gln Asn Asp Tyr Glu Val Ile Asp Ala Ser Asn1               5                  10                  15tgt ggt tgt gcg tca gat gat gtt gtt caa tac cct ttg gca aga gat   96Cys Gly Cys Ala Ser Asp Asp Val Val Gln Tyr Pro Leu Ala Arg Asp
         20                  25                  30ccg aat gct gta ttc caa aat atg cat tat aaa gat tat ttg caa acg   144Pro Asn Ala Val Phe Gln Asn Met His Tyr Lys Asp Tyr Leu Gln Thr
     35                  40                  45tat gat gga gac tat aca ggt tct ttt ata aat cct aac tta tct att   192Tyr Asp Gly Asp Tyr Thr Gly Ser Phe Ile Asn Pro Asn Leu Ser Ile
 50                  55                  60aat cct aga gat gta ctg caa act gga att aat att gtg gga aga tta   240Asn Pro Arg Asp Val Leu Gln Thr Gly Ile Asn Ile Val Gly Arg Leu65                   70                  75                  80cta gga ttt cta ggt gtt cca ttt gct ggt cag tta gtt act ttc tat   288Leu Gly Phe Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Leu Val Thr Phe Tyr
             85                  90                  95act ttt ctt tta aat caa cta tgg cca aca aat gat aat gca gta tgg   336Thr Phe Leu Leu Asn Gln Leu Trp Pro Thr Asn Asp Asn Ala Val Trp
        100                 105                 110gaa gct ttt atg gca caa ata gaa gag ctt att aat caa aga ata tcc   384Glu Ala Phe Met Ala Gln Ile Glu Glu Leu Ile Asn Gln Arg Ile Ser
    115                 120                 125gaa gca gta gta ggg aca gca gcg gat cat tta acg gga tta cac gat   432Glu Ala Val Val Gly Thr Ala Ala Asp His Leu Thr Gly Leu His Asp
130                 135                 140aat tat gag tta tat gta gag gca ttg gaa gaa tgg ctg gaa aga ccg   480Asn Tyr Glu Leu Tyr Val Glu Ala Leu Glu Glu Trp Leu Glu Arg Pro145                 150                 155                 160aat gct gct aga act aat cta ctt ttt aat aga ttt acc acc cta gat   528Asn Ala Ala Arg Thr Asn Leu Leu Phe Asn Arg Phe Thr Thr Leu Asp
            165                 170                 175agt ctt ttt aca caa ttt atg cca agc ttt ggt act gga cct gga agt   576Ser Leu Phe Thr Gln Phe Met Pro Ser Phe Gly Thr Gly Pro Gly Ser
        180                 185                 190caa aac tac gca gtt cca tta ctt aca gta tac gca caa gca gcg aac   624Gln Asn Tyr Ala Val Pro Leu Leu Thr Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn
    195                 200                 205ctt cat ttg tta tta tta aag gat gct gaa ata tat gga gca aga tgg   672Leu His Leu Leu Leu Leu Lys Asp Ala Glu Ile Tyr Gly Ala Arg Trp
210                 215                 220gga ctg aac caa aat cag att aac tca ttc cat acg cgc caa caa gag   720Gly Leu Asn Gln Asn Gln Ile Asn Ser Phe His Thr Arg Gln Gln Glu225                 230                 235                 240cgt act caa tat tat aca aat cat tgc gta acg acg tat aat acc ggt   768Arg Thr Gln Tyr Tyr Thr Asn His Cys Val Thr Thr Tyr Asn Thr Gly
            245                 250                 255tta gat aga tta aga ggc aca aat act gaa agt tgg tta aat tat cat   816Leu Asp Arg Leu Arg Gly Thr Asn Thr Glu Ser Trp Leu Asn Tyr His
        260                 265                 270cga ttc cgt aga gag atg aca tta atg gca atg gat tta gtg gcc tta   864Arg Phe Arg Arg Glu Met Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Val Ala Leu
    275                 280                 285ttc cca tac tat aat gtg cga caa tat cca aat ggg gca aat cca cag   912Phe Pro Tyr Tyr Asn Val Arg Gln Tyr Pro Asn Gly Ala Asn Pro Gln
290                 295                 300ctt aca cgt gaa ata tat acg gat cca atc gta tat aat cca cca gct   960Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Asp Pro Ile Val Tyr Asn Pro Pro Ala305                 310                 315                 320aat cag gga atc tgc cga cgt tgg ggg aat aat cct tat aat aca ttt   1008Asn Gln Gly Ile Cys Arg Arg Trp Gly Asn Asn Pro Tyr Asn Thr Phe
            325                 330                 335tct gaa ctt gaa aat gct ttt att cgc ccg cca cat ctt ttt gat agg   1056Ser Glu Leu Glu Asn Ala Phe Ile Arg Pro Pro His Leu Phe Asp Arg
        340                 345                 350ttg aat aga tta act att tct aga aac cga tat aca gct cca aca act   1104Leu Asn Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Arg Tyr Thr Ala Pro Thr Thr
    355                 360                 365aat agc tac cta gac tat tgg tca ggt cat act tta caa agc cag tat   1152Asn Ser Tyr Leu Asp Tyr Trp Ser Gly His Thr Leu Gln Ser Gln Tyr
370                 375                 380gca aat aac ccg acg aca tat gaa act agt tac ggt cag att acc tct   1200Ala Asn Asn Pro Thr Thr Tyr Glu Thr Ser Tyr Gly Gln Ile Thr Ser385                 390                 395                 400aac aca cgt tta ttc aat acg act aat gga gcc aat gca ata gat tca   1248Asn Thr Arg Leu Phe Asn Thr Thr Asn Gly Ala Asn Ala Ile Asp Ser
            405                 410                 415agg gca aga aat ttt ggt aac tta tac gct aat ttg tat ggt gtt agc   1296Arg Ala Arg Asn Phe Gly Asn Leu Tyr Ala Asn Leu Tyr Gly Val Ser
        420                 425                 430tat ttg aat att ttc cca aca ggt gtg atg agt gaa atc acc tca gcc   1344Tyr Leu Asn Ile Phe Pro Thr Gly Val Met Ser Glu Ile Thr Ser Ala
    435                 440                 445cct aat acg tgt tgg caa gac ctt act aca act gag gaa cta cca cta   1392Pro Asn Thr Cys Trp Gln Asp Leu Thr Thr Thr Glu Glu Leu Pro Leu
450                 455                 460gtg aat aat aat ttt aat ctt tta tct cat gtt act ttc tta cgc ttc   1440Val Asn Asn Asn Phe Asn Leu Leu Ser His Val Thr Phe Leu Arg Phe465                 470                 475                 480aat act act cag ggt ggc ccc ctt gca act gta ggg ttt gta ccc aca   1488Asn Thr Thr Gln Gly Gly Pro Leu Ala Thr Val Gly Phe Val Pro Thr
            485                 490                 495tat gtg tgg aca cgt caa gat gta gat ttt aat aat ata att act ccc   1536Tyr Val Trp Thr Arg Gln Asp Val Asp Phe Asn Asn Ile Ile Thr Pro
        500                 505                 510aat aga att act caa ata cca gtg gta aag gca tat gag cta agt agt   1584Asn Arg Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys Ala Tyr Glu Leu Ser Ser
    515                 520                 525ggt gct act gtc gtg aaa ggt cca gga ttc aca gga gga gat gta atc   1632Gly Ala Thr Val Val Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Val Ile
530                 535                 540cga aga aca aat act ggt gga ttc gga gca ata agg gtg tcg gtc act   1680Arg Arg Thr Asn Thr Gly Gly Phe Gly Ala Ile Arg Val Ser Val Thr545                 550                 555                 560gga ccg cta aca caa cga tat cgc ata agg ttc cgt tat gct tcg aca   1728Gly Pro Leu Thr Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Thr
            565                 570                 575ata gat ttt gat ttc ttt gta aca cgt gga gga act act ata aat aat   1776Ile Asp Phe Asp Phe Phe Val Thr Arg Gly Gly Thr Thr Ile Asn Asn
        580                 585                 590ttt aga ttt aca cgt aca atg aac agg gga cag gaa tca aga tat gaa   1824Phe Arg Phe Thr Arg Thr Met Asn Arg Gly Gln Glu Ser Arg Tyr Glu
    595                 600                 605tcc tat cgt act gta gag ttt aca act cct ttt aac ttt aca caa agt   1872Ser Tyr Arg Thr Val Glu Phe Thr Thr Pro Phe Asn Phe Thr Gln Ser
610                 615                 620caa gat ata att cga aca tct atc cag gga ctt agt gga aat ggg gaa   1920Gln Asp Ile Ile Arg Thr Ser Ile Gln Gly Leu Ser Gly Asn Gly Glu625                 630                 635                 640gta tac ctt gat aga att gaa atc atc cct gta aat cca aca cga gaa   1968Val Tyr Leu Asp Arg Ile Glu Ile Ile Pro Val Asn Pro Thr Arg Glu
            645                 650                 655gcg gaa gag gat tta gaa gcg gcg aag aaa gcg gtg gcg agc ttg ttt   2016Ala Glu Glu Asp Leu Glu Ala Ala Lys Lys Ala Val Ala Ser Leu Phe
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    675                 680                 685gat caa gcg gca aat tta gtg tca tgc tta tca gat gaa caa tat gcg   2112Asp Gln Ala Ala Asn Leu Val Ser Cys Leu Ser Asp Glu Gln Tyr Ala
690                 695                 700cat gat aaa aag atg tta ttg gaa gcg gta cgc gcg gca aaa cgc ctc   2160His Asp Lys Lys Met Leu Leu Glu Ala Val Arg Ala Ala Lys Arg Leu705                 710                 715                 720agc cga gaa cgt aac tta ctt cag gat cca gat ttt aat aca atc aat   2208Ser Arg Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asp Phe Asn Thr Ile Asn
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    755                 760                 765cga gaa aat tac cca aca tac atc tat caa aaa gta gat gca tcg gag   2352Arg Glu Asn Tyr Pro Thr Tyr Ile Tyr Gln Lys Val Asp Ala Ser Glu
770                 775                 780tta aaa cct tat aca cga tat aga ctg gat ggg ttc gtg aag agt agt   2400Leu Lys Pro Tyr Thr Arg Tyr Arg Leu Asp Gly Phe Val Lys Ser Ser785                 790                 795                 800caa gat tta gaa att gat ctc att cac cat cat aaa gtc cat ctt gtg   2448Gln Asp Leu Glu Ile Asp Leu Ile His His His Lys Val His Leu Val
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850                 855                 860aca cat gag ttt tct tcc tat att gat aca ggg gat tta aat tcg act   2640Thr His Glu Phe Ser Ser Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Leu Asn Ser Thr865                 870                 875                 880gta gac cag gga atc tgg gtg atc ttt aaa gtt cga aca aca gat ggt   2688Val Asp Gln Gly Ile Trp Val Ile Phe Lys Val Arg Thr Thr Asp Gly
            885                 890                 895tat gcg acg cta gga aat ctt gaa ttg gta gag gtc gga ccg tta ttg   2736Tyr Ala Thr Leu Gly Asn Leu Glu Leu Val Glu Val Gly Pro Leu Leu
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930                 935                 940aaa caa tcc atc aat cat tta ttt gtg gat tat caa gat caa caa tta   2880Lys Gln Ser Ile Asn His Leu Phe Val Asp Tyr Gln Asp Gln Gln Leu945                 950                 955                 960aat cca caa ata ggg atg gca gat att atg gac gct caa aat ctt gtc   2928Asn Pro Gln Ile Gly Met Ala Asp Ile Met Asp Ala Gln Asn Leu Val
            965                 970                 975gca tca att tca gat gta tat agc gat gca gta ctg caa atc cct gga   2976Ala Ser Ile Ser Asp Val Tyr Ser Asp Ala Val Leu Gln Ile Pro Gly
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           1045                1050                1055tcc caa caa ttt aga gtg cag ccg aat tgt aaa tat gta tta cgt gta   3216Ser Gln Gln Phe Arg Val Gln Pro Asn Cys Lys Tyr Val Leu Arg Val
       1060                1065                1070aca gca gag aaa gta ggc ggc gga gac gga tac gtg act atc cgg gat   3264Thr Ala Glu Lys Val Gly Gly Gly Asp Gly Tyr Val Thr Ile Arg Asp
   1075                1080                1085ggt gct cat cat aca gaa acg ctt aca ttt aat gca tgt gat tat gat   3312Gly Ala His His Thr Glu Thr Leu Thr Phe Asn Ala Cys Asp Tyr Asp1090                1095                1100ata aat ggc acg tac gtg act gat aat acg tat cta aca aaa gaa gtg   3360Ile Asn Gly Thr Tyr Val Thr Asp Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Glu Val1105               1110                1115                1120ata ttc tat tca cat aca gaa cac atg tgg gta gag gta aat gaa aca   3408Ile Phe Tyr Ser His Thr Glu His Met Trp Val Glu Val Asn Glu Thr
           1125                1130                1135gaa ggt gca ttt cat ata gat agt att gaa ttc gtt gaa aca gaa aag   3456Glu Gly Ala Phe His Ile Asp Ser Ile Glu Phe Val Glu Thr Glu Lys
     1140                1145                1150taa                                                              3459<210>6<211>1152<212>PRT<213>苏云金芽孢杆菌<400>6Met Asn Arg Asn Asn Gln Asn Asp Tyr Glu Val Ile Asp Ala Ser Asn1               5                  10                  15Cys Gly Cys Ala Ser Asp Asp Val Val Gln Tyr Pro Leu Ala Arg Asp
         20                  25                  30Pro Asn Ala Val Phe Gln Asn Met His Tyr Lys Asp Tyr Leu Gln Thr
     35                  40                  45Tyr Asp Gly Asp Tyr Thr Gly Ser Phe Ile Asn Pro Asn Leu Ser Ile
 50                  55                  60Asn Pro Arg Asp Val Leu Gln Thr Gly Ile Asn Ile Val Gly Arg Leu65                  70                  75                  80Leu Gly Phe Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Leu Val Thr Phe Tyr
             85                  90                  95Thr Phe Leu Leu Asn Gln Leu Trp Pro Thr Asn Asp Asn Ala Val Trp
        100                 105                 110Glu Ala Phe Met Ala Gln Ile Glu Glu Leu Ile Asn Gln Arg Ile Ser
    115                 120                 125Glu Ala Val Val Gly Thr Ala Ala Asp His Leu Thr Gly Leu His Asp
130                 135                 140Asn Tyr Glu Leu Tyr Val Glu Ala Leu Glu Glu Trp Leu Glu Arg Pro145                 150                 155                 160Asn Ala Ala Arg Thr Asn Leu Leu Phe Asn Arg Phe Thr Thr Leu Asp
            165                 170                 175Ser Leu Phe Thr Gln Phe Met Pro Ser Phe Gly Thr Gly Pro Gly Ser
        180                 185                 190Gln Asn Tyr Ala Val Pro Leu Leu Thr Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn
    195                 200                 205Leu His Leu Leu Leu Leu Lys Asp Ala Glu Ile Tyr Gly Ala Arg Trp
210                 215                 220Gly Leu Asn Gln Asn Gln Ile Asn Ser Phe His Thr Arg Gln Gln Glu225                 230                 235                 240Arg Thr Gln Tyr Tyr Thr Asn His Cys Val Thr Thr Tyr Asn Thr Gly
            245                 250                 255Leu Asp Arg Leu Arg Gly Thr Asn Thr Glu Ser Trp Leu Asn Tyr His
        260                 265                 270Arg Phe Arg Arg Glu Met Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Val Ala Leu
    275                 280                 285Phe Pro Tyr Tyr Asn Val Arg Gln Tyr Pro Asn Gly Ala Asn Pro Gln
290                 295                 300Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Asp Pro Ile Val Tyr Asn Pro Pro Ala305                 310                 315                 320Asn Gln Gly Ile Cys Arg Arg Trp Gly Asn Asn Pro Tyr Asn Thr Phe
            325                 330                 335Ser Glu Leu Glu Asn Ala Phe Ile Arg Pro Pro His Leu Phe Asp Arg
        340                 345                 350Leu Asn Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Arg Tyr Thr Ala Pro Thr Thr
    355                 360                 365Asn Ser Tyr Leu Asp Tyr Trp Ser Gly His Thr Leu Gln Ser Gln Tyr
370                 375                 380Ala Asn Asn Pro Thr Thr Tyr Glu Thr Ser Tyr Gly Gln Ile Thr Ser385                 390                 395                 400Asn Thr Arg Leu Phe Asn Thr Thr Asn Gly Ala Asn Ala Ile Asp Ser
            405                 410                 415Arg Ala Arg Asn Phe Gly Asn Leu Tyr Ala Asn Leu Tyr Gly Val Ser
        420                 425                 430Tyr Leu Asn Ile Phe Pro Thr Gly Val Met Ser Glu Ile Thr Ser Ala
    435                 440                 445Pro Asn Thr Cys Trp Gln Asp Leu Thr Thr Thr Glu Glu Leu Pro Leu
450                 455                 460Val Asn Asn Asn Phe Asn Leu Leu Ser His Val Thr Phe Leu Arg Phe465                 470                 475                 480Asn Thr Thr Gln Gly Gly Pro Leu Ala Thr Val Gly Phe Val Pro Thr
            485                 490                 495Tyr Val Trp Thr Arg Gln Asp Val Asp Phe Asn Asn Ile Ile Thr Pro
        500                 505                 510Asn Arg Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys Ala Tyr Glu Leu Ser Ser
    515                 520                 525Gly Ala Thr Val Val Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Val Ile
530                 535                 540Arg Arg Thr Asn Thr Gly Gly Phe Gly Ala Ile Arg Val Ser Val Thr545                 550                 555                 560Gly Pro Leu Thr Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Thr
            565                 570                 575Ile Asp Phe Asp Phe Phe Val Thr Arg Gly Gly Thr Thr Ile Asn Asn
        580                 585                 590Phe Arg Phe Thr Arg Thr Met Asn Arg Gly Gln Glu Ser Arg Tyr Glu
    595                 600                 605Ser Tyr Arg Thr Val Glu Phe Thr Thr Pro Phe Asn Phe Thr Gln Ser
610                 615                 620Gln Asp Ile Ile Arg Thr Ser Ile Gln Gly Leu Ser Gly Asn Gly Glu625                 630                 635                 640Val Tyr Leu Asp Arg Ile Glu Ile Ile Pro Val Asn Pro Thr Arg Glu
            645                 650                 655Ala Glu Glu Asp Leu Glu Ala Ala Lys Lys Ala Val Ala Ser Leu Phe
        660                 665                 670Thr Arg Thr Arg Asp Gly Leu Gln Val Asn Val Thr Asp Tyr Gln Val
    675                 680                 685Asp Gln Ala Ala Asn Leu Val Ser Cys Leu Ser Asp Glu Gln Tyr Ala
690                 695                 700His Asp Lys Lys Met Leu Leu Glu Ala Val Arg Ala Ala Lys Arg Leu705                 710                 715                 720Ser Arg Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asp Phe Asn Thr Ile Asn
            725                 730                 735Ser Thr Glu Glu Asn Gly Trp Lys Ala Ser Asn Gly Val Thr Ile Ser
        740                 745                 750Glu Gly Gly Pro Phe Tyr Lys Gly Arg Ala Leu Gln Leu Ala Ser Ala
    755                 760                 765Arg Glu Asn Tyr Pro Thr Tyr Ile Tyr Gln Lys Val Asp Ala Ser Glu
770                 775                 780Leu Lys Pro Tyr Thr Arg Tyr Arg Leu Asp Gly Phe Val Lys Ser Ser785                 790                 795                 800Gln Asp Leu Glu Ile Asp Leu Ile His His His Lys Val His Leu Val
            805                 810                 815Lys Asn Val Leu Asp Asn Leu Val Ser Asp Thr Tyr Pro Asp Asp Ser
        820                 825                 830Cys Ser Gly Ile Asn Arg Cys Glu Glu Gln Gln Met Val Asn Ala Gln
    835                 840                 845Leu Glu Thr Glu His His His Pro Met Asp Cys Cys Glu Ala Ala Gln
850                 855                 860Thr His Glu Phe Ser Ser Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Leu Asn Ser Thr865                 870                 875                 880Val Asp Gln Gly Ile Trp Val Ile Phe Lys Val Arg Thr Thr Asp Gly
            885                 890                 895Tyr Ala Thr Leu Gly Asn Leu Glu Leu Val Glu Val Gly Pro Leu Leu
        900                 905                 910Gly Glu Pro Leu Glu Arg Glu Gln Arg Glu Asn Ala Lys Trp Asn Ala
    915                 920                 925Glu Leu Gly Arg Lys Arg Ala Glu Thr Asp Arg Val Tyr Gln Asp Ala
930                 935                 940Lys Gln Ser Ile Asn His Leu Phe Val Asp Tyr Gln Asp Gln Gln Leu945                 950                 955                 960Asn Pro Gln Ile Gly Met Ala Asp Ile Met Asp Ala Gln Asn Leu Val
            965                 970                 975Ala Ser Ile Ser Asp Val Tyr Ser Asp Ala Val Leu Gln Ile Pro Gly
        980                 985                 990Ile Asn Tyr Glu Ile Tyr Thr Glu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Gln Ala
    995                1000                1005Ser Tyr Leu Tyr Thr Ser Arg Asn Ala Val Gln Asn Gly Asp Phe Asn1010                1015                1020Asn Gly Leu Asp Ser Trp Asn Ala Thr Ala Gly Ala Ser Val Gln Gln1025               1030                1035                1040Asp Gly Asn Thr His Phe Leu Val Leu Ser His Trp Asp Ala Gln Val
           1045                1050                1055Ser Gln Gln Phe Arg Val Gln Pro Asn Cys Lys Tyr Val Leu Arg Val
       1060                1065                1070Thr Ala Glu Lys Val Gly Gly Gly Asp Gly Tyr Val Thr Ile Arg Asp
   1075                1080                1085Gly Ala His His Thr Glu Thr Leu Thr Phe Asn Ala Cys Asp Tyr Asp1090                1095                1100Ile Asn Gly Thr Tyr Val Thr Asp Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Glu Val1105               1110                1115                1120Ile Phe Tyr Ser His Thr Glu His Met Trp Val Glu Val Asn Glu Thr
           1125                1130                1135Glu Gly Ala Phe His Ile Asp Ser Ile Glu Phe Val Glu Thr Glu Lys
       1140                1145                1150<210>7<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物cry1B.fw<400>7cagtccaaac gggtataaac                                                 20<210>8<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物B.R<400>8ctgcttcgaa ggttgcagta                                                 20<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物B.F<400>9cagcgtatta agtcgatgga                                                 20<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物 JFW<400>10gcagctaatg ctaccacatc                                    20<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物JRV<400>11gtggcggtat gctgactaat                                    20<210>12<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物 9FW<400>12gyttttattc gcccgccaca                                    20<210>13<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：引物9RV<400>13cgacagtags acccactact                                   20

Claims (21)

1.编码蛋白的DNA，其中蛋白含有下列氨基酸序列：a)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，b)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，和c)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3984的cry9Fa基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列。
2.编码一个蛋白的DNA，该蛋白含有下列氨基酸序列：SEQ ID No.2蛋白杀虫片断的氨基酸序列，SEQ ID No.4蛋白杀虫片断的氨基酸序列，SEQ ID No.6蛋白杀虫片断的氨基酸序列。
3.权利要求2所述的编码一个蛋白的DNA，该蛋白含有下列氨基酸序列：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列，SEQ IDNo.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列，SEQ ID No.6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列。
4.权利要求3所述的编码一个蛋白的DNA，该蛋白含有下列氨基酸序列：SEQ ID No.2的氨基酸序列，SEQ ID No.4的氨基酸序列，SEQ ID No.6的氨基酸序列。
5.权利要求1到4中任何一项所述的DNA，其含有SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ ID No.5的DNA序列。
6.权利要求5所述的DNA，其含有一段人工DNA序列，该人工DNA序列的密码子使用与天然存在的DNA序列不同但编码相同的蛋白或其杀虫片断。
7.权利要求1到4中任何一项所述的DNA，其含有一段人工DNA序列，该人工DNA序列的密码子使用与天然存在的DNA序列不同但编码相同的蛋白或其杀虫片断。
8.含有下列氨基酸序列的蛋白：a)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，b)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列，和c)由保藏于BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3984的cry9Fa基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片断的氨基酸序列。
9.含有下列氨基酸序列的蛋白：SEQ ID No.2蛋白杀虫片断的氨基酸序列，SEQ ID No.4蛋白杀虫片断的氨基酸序列，SEQ ID No.6蛋白杀虫片断的氨基酸序列。
10.权利要求9所述的蛋白，其含有下列氨基酸序列：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列，SEQ ID No.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列，SEQ ID No.6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列。
11.权利要求8到10中任何一项所述的蛋白，其含SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6的氨基酸序列。
12.在植物表达启动子控制之下的嵌合基因，其含有权利要求1到7中任何一项所述的DNA。
13.植物细胞，其被转化从而含有权利要求12所述的嵌合基因。
14.植株或种子，其包含整合在其细胞中的权利要求12所述的嵌合基因。
15.植株或种子，其包含整合在其细胞的核DNA或叶绿体DNA的权利要求12所述的嵌合基因。
16.权利要求14所述的植株或种子，其选自：玉米、棉花、水稻、油菜籽、芸苔、茄子、大豆、土豆、向日葵、西红柿、甘蔗、茶叶、豌豆、烟草、草莓、苜蓿、黄瓜、西瓜、胡椒、燕麦、大麦、小麦、天竺牡丹、剑兰、菊花、甜菜、高粱、紫花苜蓿和花生。
17.微生物，其被转化从而含有权利要求1到7中任何一项所述的DNA。
18.权利要求17所述的微生物，其选自土壤杆菌属、埃希氏菌属或芽孢杆菌属。
19.控制昆虫的方法，其包括在宿主细胞中表达权利要求1到7中任何一项所述的DNA，并将所说的宿主细胞与昆虫相接触。
20.获得抗昆虫植株的方法，其包括用权利要求1到7中任何一项所述的DNA或用权利要求12所述的嵌合基因转化植物细胞，并从这些抗昆虫的细胞中再生出转化植株。
21.权利要求20所述的方法，其进一步包括由含所述DNA的所述植株获得种子。
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