CN1396957A - 用于鉴定生物样本中原种事件gat－z m1的方法和试剂盒 - Google Patents
用于鉴定生物样本中原种事件gat－z m1的方法和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1396957A CN1396957A CN01803610A CN01803610A CN1396957A CN 1396957 A CN1396957 A CN 1396957A CN 01803610 A CN01803610 A CN 01803610A CN 01803610 A CN01803610 A CN 01803610A CN 1396957 A CN1396957 A CN 1396957A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sequence
- gat
- primer
- seq
- identification
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 67
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 title abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 99
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 92
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 35
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 34
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 29
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 22
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 19
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 15
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 15
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 42
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 18
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 description 16
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 9
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 8
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 6
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 6
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 101150113864 pat gene Proteins 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108700039964 Duplicate Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000187191 Streptomyces viridochromogenes Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 methane amide Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 108010082527 phosphinothricin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
提供了可快速且明确鉴定生物样本中原种事件GAT－ZM1的手段。
Description
发明背景
转基因在植物中的表型表达由该基因自身的结构及其在植物基因组中的位置决定。同时转基因(为外源DNA)在基因组的不同位置存在时，可以不同方式影响植物的总体表型。通过遗传操作在植物中从农业上或工业上成功导入商业感兴趣的性状是一个漫长的、受不同因素影响的过程。经遗传转化的植物的实际转化和再生只是一系列选择步骤的第一步，其中所述选择步骤包括广泛的遗传鉴定、育种及野外试验的评估，最终导致原种事件的选择。
鉴于有关Novel Food/Feed的讨论、GMO和非GMO产物的分离以及对专利物质的鉴定，对原种事件的明确鉴定显得愈发重要。理想的情况是：此类鉴定方法既快速又简单，且不用多方面的实验室设备。进一步地，该方法应提供使原种事件得以明确鉴定且不用专家解释的结果，但如果需要的话可在专家的监视下进行。
在开发玉米对除草剂Liberty的抗性时，GAT-ZM1被选作原种事件，其中所述GAT-ZM1原种事件是通过用质粒pUC/Ac转化玉米而产生的，所述pUC/Ac包含编码对膦丝菌素耐受的pat基因。市场上以Liberty Link玉米为商标出售，例如AgriGold/Akin Seed Company出售的Liberty LinkA6460LL。此处描述了用于以简单明确的方法鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的手段。
发明概述
本发明涉及用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的方法，该方法基于特异性识别GAT-ZM1 5’和/或3’侧翼序列的引物或探针。
更具体地，本发明涉及这样的方法，其包含用聚合酶链反应扩增在生物样本中存在的核酸，以得到一条在100至350bp之间的DNA片段，其中所述聚合酶链反应使用至少两条引物，一条识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区，另一条识别位于外源DNA内的序列。引物分别优选地识别位于GAT-ZM1 5’侧翼区内的序列，最优选地识别位于SEQ ID No.6的5’侧翼区内的序列，以及识别位于外源DNA内的序列。尤其优选地，识别5’侧翼区的引物包含此处所述的SEQ ID No.11核苷酸序列以及识别外源DNA内的序列的引物包含此处所述的SEQ ID No.12核苷酸序列。
本发明尤其涉及用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的方法，该方法包含用聚合酶链反应扩增在生物样本中存在的核酸，以得到一条在180至220bp之间的DNA片段，优选地约200bp，其中所述聚合酶链反应使用的两条引物分别具有SEQ ID No.11和SEQ ID No.12的核苷酸序列
本发明还涉及此处描述的GAT-ZM1特异的侧翼序列，其可用于开发特异的鉴定方法来鉴定生物样本中的GAT-ZM1。更具体地，本发明涉及GAT-ZM1 5’和/或3’侧翼区，其可用于产生特异的引物和探针。本发明还涉及基于此类特异引物或探针的使用而对生物样本中GAT-ZM1的存在进行鉴定的方法。
本发明还涉及用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的试剂盒，所述试剂盒包含至少一条特异识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区的引物或探针。
优选地本发明的试剂盒除了包含一条特异识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区的引物外，还包含第二条特异识别位于GAT-ZM1的外源DNA内序列的引物，以用于PCR鉴定方法。优选地，本发明的试剂盒包含两条特异引物，其中一条识别位于GAT-ZM1 5’侧翼区内的序列，最优选地识别位于SEQ IDNo.6的5’侧翼区内的序列，且另一条识别位于外源DNA内的序列。尤其优选地，识别5’侧翼区的引物包含此处所述的SEQ ID No.11核苷酸序列以及识别转基因的引物包含此处所述的SEQ ID No.12核苷酸序列。
本发明还涉及用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的试剂盒，所述试剂盒包含具有SEQ ID No.11和SEQ ID No.12核苷酸序列的PCR引物，以用于此处描述的GAT-ZM1 PCR鉴定方法。
本发明还涉及用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的试剂盒，所述试剂盒包含特异探针，其序列对应于(或互补于)与GAT-ZM1特异区具有80％至100％序列同一性的序列。优选地探针序列对应于一个特异区，所述特异区包含部分GAT-ZM1 5’或3’侧翼区。最优选地该特异探针具有(或互补于)与SEQ ID No.6的第286位至第466位核苷酸之间的序列具有80％至100％序列同一性的序列。
本发明所包括的方法和试剂盒可用于不同的目的，例如但不限于以下目的：鉴定植物、植物材料或产品(例如但不限于包含或来自植物材料的食品或饲料产品(新鲜或经加工的))中的GAT-ZM1；另外，本发明的方法和试剂盒可用于鉴定转基因植物材料，以分离转基因和非转基因材料；另外，本发明的方法和试剂盒可用于确定包含GAT-ZM1的植物材料的质量(即材料百分纯)。
本发明还涉及GAT-ZM1 5’和/或3’侧翼区以及从GAT-ZM1 5’和/或3’侧翼序列产生的特异引物和探针。详细描述
重组DNA分子掺入植物基因组一般是细胞或组织转化的结果(或其它遗传操作的结果)。掺入的具体位点或源自“随机”整合，或为预定位置(如果使用的是定向整合方法)。
作为用重组DNA或“转化DNA”转化植物细胞或组织的结果而导入植物基因组的DNA此后称为“外源DNA”，其包含一个或多个“转基因”。这样，外源DNA可包含重组DNA及植物的新导入的重排DNA。但在本发明的上下文中术语“植物DNA”指可在对应的野生型植物的相同遗传位置找到的植物DNA。可通过重组DNA分子在植物基因组中掺入位点处的位置和构型来表示外源DNA的特征。重组DNA在植物基因组中的插入位点也称为“插入位点”或“目标位点”。植物基因组中重组DNA的插入可与植物DNA的缺失相关，称为“目标位点缺失”。此处所用的“侧翼区”或“侧翼序列”指的是这样的序列，其为植物基因组的至少20bp序列，优选地至少50bp序列，以及高达5000bp的序列，其位于紧挨着外源DNA的上游且邻近于外源DNA，或位于紧挨着外源DNA的下游且邻近于外源DNA。导致外源DNA随机整合的转化步骤会产生具有不同侧翼区的转化子，对每一个转化子而言它们是特征性的和唯一的。当重组DNA通过常规的杂交导入植物时，其在植物基因组中的插入位点或其侧翼区一般不改变。此处所用的“插入区”指的是对应于至少40bp，优选地至少100bp，以及高达超过10000bp的区域，其被植物基因组中包含外源DNA的上游和/或下游侧翼区的序列包围。考虑到由于种内突变引起的小差异，插入区在杂交入同一种类的植物后，可保留与包含最初从转化获得的植物中外源DNA上游和下游侧翼区的序列至少85％，优选地90％，更优选地95％，且最优选地100％的序列同一性。
“事件”定义为作为遗传操作结果的(人工)基因座，其携带包含至少一拷贝目的基因的外源DNA。一个事件的一般等位基因状态为外源DNA的存在或缺失。事件的表型特征在于转基因的表达。在基因水平上，事件是植物基因组成的一部分。在分子水平上，事件的特征在于转基因的限制性酶切图谱(例如通过Southern印迹确定)、转基因的上游和/或下游侧翼序列、分子标志物的位置和/或转基因的分子构型。通常用包含至少一种目的基因的转化DNA转化植物，导致多个事件，其中每一个均为唯一的。
此处所用的“原种事件”为基于转基因的表达和稳定性以及与含有它的植物之最佳农艺学特性的相容性而从一组事件选择的事件，其通过用同一转化DNA转化或通过与此类转化所获得的植物回交而获得。因此原种事件选择的标准为一种或多种，优选地两种或多种，有利地为所有下列标准：
a)外源DNA的存在不降低其它所期望有的植物特性，例如那些与农学特性或商业价值相关的特性；
b)事件的特征在于充分定义的稳定遗传之分子构型，且可开发用于鉴定对照的合适诊断手段；
c)在事件的杂合(或半合子)和纯合子的情况下，目标基因在一系列的环境条件下以商业可接受水平显示正确、合适且稳定的空间和时间表型表达，其中携带事件的植物可能处于常规的农业用途。
优选外源DNA与植物基因组的某个位置有关，其中所述位置允许基因易于渗入所期望的商业遗传背景。
事件作为原种事件的情形通过将原种事件渗入不同的相关遗传背景并且观察例如上述a)，b)和c)中的一个、两个或所有标准而证实。
因此“原种事件”指的是包含外源DNA的基因座，其满足上述标准。植物、植物材料或子代例如种子可在其基因组中包含一个或多个原种事件。
开发用于鉴定原种事件或鉴定包含原种事件的植物或植物材料，或鉴定包含含有原种事件的植物材料之产品的手段是基于原种事件的特定基因组特性而进行的，其中所述特定基因组特性例如包含外源DNA的基因组区域之特定的限制性图谱、分子标志物或外源DNA侧翼区的序列。
一旦已对外源DNA的一个或两个侧翼区进行了测序，可用分子生物学技术产生特异性识别样本核酸(DNA或RNA)中这种(这些)序列的引物和探针。例如可通过PCR法来鉴定生物样本(如植物、植物材料或包含植物材料的产品样本)中的原种事件。此类PCR基于至少两条特异“引物”，一条识别位于原种事件5’或3’侧翼区中的序列，另一条识别位于外源DNA中的序列。引物优选地为具有15至35个核苷酸的序列，其在优化的PCR条件下分别“特异性识别”位于原种事件5’或3’侧翼区中的序列和原种事件的外源DNA中的序列，这样可从包含原种事件的核酸样本中扩增出特异片段(“整合片段”)。这意味着在优化的PCR条件下植物基因组或外源DNA中只有目标整合片段而没有其它序列被扩增。
优选地，整合片段的长度在50至500个核苷酸之间，最优选地在100至350个核苷酸之间。优选地特异引物的序列分别与原种事件5’或3’侧翼区中的序列和原种事件的外源DNA中的序列具有80％至100％的同一性，只要错配仍允许用这些引物在优化的PCR条件下特异性鉴定原种事件。但允许的错配范围易于实验确定且为本领域技术人员公知。
由于引物序列和它们在基因组中的相对位置对原种事件是独特的，因此只在包含原种事件(的核酸)的生物样本中存在整合片段的扩增。优选地当用PCR鉴定未知样本中GAT-ZM1的存在时，可包括一组引物对照，其中用该引物对照可扩增出在该事件的植物种类的“管家基因”中的片段。管家基因为在大多数细胞类型中表达且为与所有细胞共有的基本代谢活性相关的基因。优选地，从管家基因扩增的片段较扩增的整合片段大。根据待分析样本，可包括其它对照。
本领域对标准的PCR方法进行了描述，例如在“PCR应用手册”(“PCRApplications Manual”)(Roche Molecular Biochemicals，第二版，1999)一书中的描述。优化的PCR条件(包括特异的引物序列)在用于每个原种事件的“PCR鉴定方法”(“PCR identification protocol”)中进行了说明。但应该清楚需要针对具体的实验室条件调节PCR鉴定方法中的一些参数，并且可作些许修改以获得类似结果。例如使用不同的方法制备DNA时，可能需要调节例如所用引物量、聚合酶和退火条件。同样地，选择其它引物则需要其它用于PCR鉴定方法的优化条件。但这些调节显然为本领域技术人员所知，且在如上所引用的最新PCR应用手册中进行了进一步的详述。
另外，特异引物可用于扩增整合片段，后者可用作鉴定生物样本中GAT-ZM1的“特异探针”。在允许探针与其在核酸中的对应序列进行杂交的条件下，将生物样本的核酸与探针接触，导致核酸/探针杂交体的形成。可检测该杂交体的形成(例如标记核酸或探针)，其中该杂交体的形成表明存在GAT-ZM1。本领域已描述了基于与(在固相载体上或在溶液中的)特异探针杂交的此类鉴定方法。特异探针优选为这样的序列，其在优化的条件下，特异地与原种事件5’或3’侧翼区且优选地也包含与其邻接的部分外源DNA中的区域(此后称之为“特异区”)杂交。优选地，特异探针包含在50至500bp之间，优选在100至350bp之间的序列，其与特异区的核酸序列至少80％，优选地80至85％，更优选地85至90％，尤其优选地90至95％，最优选地95％至100％相同(或互补)。优选地，特异探针包含约15至约100个邻接的与原种事件特异区相同(或互补)的核苷酸序列。
此处所用的“试剂盒”指的是：以本发明方法实施为目的的一套试剂，更具体地，指的是鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的一套试剂。更具体地，本发明试剂盒的一个优选的实施方案包含如上所述的至少一条或两条特异引物。任选地，试剂盒可进一步包含此处在PCR鉴定方法中描述的任一其它试剂。另外，根据本发明的另一个实施方案，该试剂盒可包括如上所述的一条特异探针，其与生物样本的核酸特异性杂交以鉴定其中GAT-ZM1的存在。任选地，该试剂盒可进一步包含任一其它试剂(例如但不限于杂交缓冲液、标记物)，用于用特异探针鉴定生物样本中的GAT-ZM1。
可使用本发明的试剂盒，且试剂盒的组分可具体调节，以用于质量控制(例如种子批次的纯度)，检测植物材料或包含或衍生于植物材料的材料中(例如但不限于食物或饲料产品)的原种事件。
此处所用关于核苷酸序列(DNA或RNA)的“序列同一性”指的是：具有相同核苷酸的位置数除以两个序列中的较短序列的核苷酸数目。两个核苷酸序列的排列用Wilbur和Lipmann算法(Wilbur和Lipmann，1983，美国国家科学院院报(Proc.Nat.Acad.Sci.USA)80：726)进行，所用窗口大小为20个核苷酸，字长为4个核苷酸且缺口罚分为4。例如可用IntelligeneticsTM Suite程序(Intelligenetics Inc.，CA)或GeneticsComputer Group的序列分析软件包(GCG，威斯康星大学生物技术中心)方便地进行计算机辅助分析并解释序列数据，包括上述的序列排列。当此类序列的序列同一性为至少约75％，尤其是至少约80％，更尤其是至少约85％，更尤其是约90％，特别是约95％，更特别是约100％时，序列被表示为“基本相似”。这样当RNA序列被说成是与DNA序列基本相似或具有某种程度的序列同一性时，应清楚DNA序列中的胸腺嘧啶(T)认为与RNA序列中的尿嘧啶(U)是相同的。此处所用的“互补于”是指核酸序列中核苷酸A和T(U)之间以及G和C之间的互补性。
此处所用术语“引物”包括在模板依赖的方法中(如PCR)可引导新生核酸合成的任一核酸。一般引物为10至30bp的寡核苷酸，但也可使用较长的序列。引物可以双链形式提供，但优选以单链形式提供。虽然探针可被用作引物，但探针是设计为与靶DNA或RNA结合且不必用于扩增步骤。
此处当提到特异引物时所用术语“识别”是指这样的事实：在方法中所提的条件(例如PCR鉴定方法的条件)下，特异引物与原种事件中的核酸序列特异性杂交，其中的特异性通过存在的阳性和阴性对照而确定。
此处当提到特异探针时所用术语“杂交”是指这样的事实：在标准的严紧条件下，探针可与原种事件核酸序列中的特异区结合。此处所用标准的严紧条件是指此处所述的用于杂交的条件或由Sambrook等人(1989)(分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，纽约(MolecularCloning：A Laboratory Manual，Second Edition，Cold Spring HarbourLaboratory Press，NY))描述的常规杂交条件，其例如包括以下步骤：1)将植物基因组DNA片段固定在滤膜上，2)将滤膜用50％甲酰胺，5×SSPE，2×Denhardt’s试剂和0.1％SDS，42℃预杂交1至2小时，或用6×SSC，2×Denhardt’s试剂和0.1％SDS，68℃预杂交1至2小时，3)加入已标记的杂交探针，4)孵育16至24小时，5)用1×SSC，0.1％SDS室温洗滤膜20分钟，6)洗滤膜三次，20分钟，每次在68℃于0.2×SSC，0.1％SDS，以及7)用增感屏将滤膜于-70℃暴露于X-射线胶片24至48小时。
如此处所用生物样本为植物、植物材料或含有植物材料的产品之样本。术语“植物”指包含在任一成熟阶段的玉米(玉蜀黍(Zea mays))植物组织以及取自或衍生于任一此类植物的任一细胞、组织或器官，包括(但不限于)任一种子、叶、茎、花、根、单细胞、配子、细胞培养物、组织培养物或原生质体。此处所用的“植物材料”指的是来自或衍生于植物的材料。包含植物材料的产品涉及到食物、饲料或其它用植物材料产生的或可被植物材料污染的产品。应该明白在本发明的上下文中，此类生物材料优选地用于测试GAT-ZM1特异核酸的存在，暗示样本中存在核酸。因此此处所指的用于鉴定生物样本中的原种事件GAT-ZM1的方法优选地涉及鉴定包含原种事件生物样本中的核酸。
此处所用的“包含”可解释为使所述特征、整数、步骤或组成的存在如所指的具体化，但不排除另外的一个或多个特征、整数、步骤、组成或组的存在。这样例如包含核苷酸或氨基酸序列的核酸或蛋白质可包含较实际所引用的要多的核苷酸或氨基酸，即包括在较大的核酸或蛋白质中。包含功能上或结构上确定的DNA序列之嵌合基因可包含额外的DNA序列等。
下列实施例描述了开发用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的手段。
除非另外指出，所有的重组DNA技术均按照描述的标准方法进行，描述见Sambrook等人(1989)，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，纽约以及Ausubel等人，(1994)分子生物学最新方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)，美国。植物分子研究的标准材料和方法的描述见BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和BlackwellScientific Publications，UK R.D.D.Croy出版的植物分子生物学实验室传真(Plant Molecular Biology Labfax)(1993)。
在描述和实施例中，参照以下序列：
SEQ ID No.1： 载体pUC/Ac的遗传成分序列
SEQ ID No.2： 引物MDB286
SEQ ID No.3： 引物MDB391
SEQ ID No.4： 引物MDB411
SEQ ID No.5： 引物MDB420
SEQ ID No.6： 包含GAT-ZM1 5’侧翼区的核苷酸序列
SEQ ID No.7： 引物MDB439
SEQ ID No.8： 引物VDS44
SEQ ID No.9： 引物MDB522
SEQ ID No.10： 包含GAT-ZM1 3’侧翼区的核苷酸序列
SEQ ID No.11： 引物COR17
SEQ ID No.12： 引物COR18
SEQ ID No.13： 引物COR15
SEQ ID No.14： 引物COR16
附图简述
下文的实施例不用于将本发明限制于所述的具体实施方案，其中实施例可通过结合附图来理解，附图于此处引用作为参考，其中：
图1.用PCR鉴定方法评定未知物中产生的GAT-ZM1
凝胶的加样顺序：未知物：泳道1、2、5、6、8、11、13、14，DNA样本来自包含转基因事件GAT-ZM1的玉米植物；泳道4、9、10、12，DNA样本来自不包含原种事件GAT-ZM1的玉米植物；泳道3，PCR失败。对照泳道：泳道19、21，对照DNA样本来自包含原种事件GAT-ZM1的玉米植物；泳道20、22，对照DNA样本来自野生型玉米植物；泳道24，分子量标志物。
实施例
1.鉴定原种事件GAT-ZM1的侧翼区
通过用pUC/Ac载体转化玉米可产生除草剂抗性玉米，其中所述pUC/Ac载体包含在花椰菜花叶病毒(Cauliflower Mosaic Virus)组成型35S启动子控制下编码膦丝菌素乙酰转移酶的pat基因编码序列。表1提供了pUC/Ac遗传成分的详述。SEQ ID No.1提供了pUC/Ac遗传成分的核苷酸序列。
表1：载体pUC/Ac的遗传成分
| 核苷酸no. | 遗传成分 |
| 412-618 | 来自载体pDH51的花椰菜花叶病毒35S终止子(Pietrzak M.等人，核酸研究(Nucl.Acids Res.)14，(1986)，5857-5868页) |
| 619-636 | 合成的多接头序列 |
| 637-1188 | 合成的pat基因(来自绿色产色链霉菌(Streptomycesviridochromogenes)的氨基酸序列)(Strauch等人，(1993)欧洲专利275957 B1) |
| 1189-1216 | 合成的多接头序列 |
| 1217-1746 | 来自载体pDH51中花椰菜花叶病毒35S启动子(Pietrzak M.等人，1986) |
| 1747-411 | 载体pUC18的序列，包括β-内酰胺酶基因(位置2923-3783)和在位置2164处的复制起点(Yanisch-Perron等人，(1985)，基因(Gene)33，103-119页) |
对原种事件GAT-ZM1的选择是在基于除草剂抗性基因的表达和稳定性好且与最佳农业性能具相容性的广泛选择方法基础上进行的。
用Liu等人(1995，植物杂志(Plant J.)8(3)：457-463)描述的温度非对称交互(TAIL-)PCR法确定GAT-ZM1事件中外源DNA侧翼区的序列。该方法将三条巢式引物与一条较短的随机简并引物进行连续反应，这样可热控制特异和非特异产物的相对扩增效率。所选择的特异引物与外源DNA的边界在它们的退火条件下退火。用1％琼脂糖凝胶分析小量(5μl)未纯化的二级和三级PCR产物。三级PCR产物用于制备性扩增、纯化并用DyeDeoxyTerminator循环试剂盒于自动测序仪上测序。
1.1.右(5’)侧翼区
所用引物为
| 序列(5’→3’) | 在pUC/Ac中的位置 | |
| 简并引物MDB286 | NgT.CgA.SWg.ANA.WgA.A(SEQ ID No.2) | - |
| 一级TAILMDB391 | Tgg.ATA.CAA.gCA.Tgg.Tgg.ATg.g(SEQ ID No.3) | 715 736 |
| 二级TAILMDB411 | Agg.CAT.gCC.gCT.gAA.ATC.ACC(SEQ ID NO.4) | 606 626 |
| 三级TAILMDB420 | GgT.TTC.gCT.CAT.gTg.TTg.AgC(SEQ ID No.5) | 507 527 |
其中：N＝A，C，T或g；S＝C或g；W＝A或T
用MDB286-MDB420扩增的片段约1100bp，测定其全序列(SEQ ID No.6)。在第1至第341位核苷酸之间的序列对应于植物DNA，而在第342至第1041位核苷酸之间的序列对应于T-DNA。
1.2.左(3’)侧翼区
所用引物为
| 序列(5’→3’) | 在pUC/Ac中的位置 | |
| 简并引物MDB286 | NgT.CgA.SWg.ANA.WgA.A(SEQ ID No.2) | - |
| 一级TAIL | CTC.ATg.gTT.ATg.gCA.gCA.CTg.C | 3401-3422 |
| MDB439 | (SEQ ID No.7) | |
| 二级TAILVDS44 | CTg.TCA.TgC.CAT.CCg.TAA.gAT.gC(SEQ ID No.8) | 3435-3457 |
| 三级TAILMDB522 | TgC.TTT.gAA.gAC.gTg.gTT.gg(SEQ ID No.9) | 1326-1345 |
其中：N＝A，C，T或g；S＝C或g；W＝A或T
用MDB286-MDB522扩增的片段约450bp，测定其全序列(SEQ ID No.10)。在第1至第342位核苷酸之间的序列对应于T-DNA，而在第343至第484位核苷酸之间的序列对应于植物DNA。
2.聚合酶链反应鉴定方法的进行
2.1.引物
设计识别原种事件中序列的特异引物。更具体地，设计的一条引物识别GAT-ZM1 5’侧翼区序列。然后所选择的第二条引物位于外源DNA的序列中，这样引物所跨序列长约200bp。对GAT-ZM1 DNA进行PCR反应时，发现下列引物可给出特别清晰且可重复的结果：
COR17：5’-ggg.TgA.gCT.CgA.ATg.TTg.TTC.T-3’(SEQ ID 11)
(靶：植物DNA)
COR18：5’-TCT.TAg.ACg.TCA.ggT.ggC.ACT.T-3’(SEQ ID 12)
(靶：T-DNA)
在PCR混合物中，优选地包括靶向内源序列的引物。在未知样本和在DNA阳性对照中，这些引物作为内部控制。用内源引物对所得的阳性结果表明在基因组DNA制备物中有充分的足够质量DNA可用于产生PCR产物。所选择的内源引物识别玉蜀黍的管家基因：
COR15：5’-AgC.gTC.AAg.gAT.CAT.Tgg.TgT.C-3’(SEQ ID 13)
(位于玉蜀黍乙醇脱氢酶1基因(X04050)中)
COR16：5’-ggC.CAA.gTT.CAg.CAT.AAg.CTg.T-3’(SEQ ID 14)
(位于玉蜀黍乙醇脱氢酶1基因(X04050)中)
2.2.扩增片段
在PCR反应中预期的扩增片段为：
对于COR15-COR16引物对：513bp(内源对照)
对于COR17-COR18引物对：202bp(GAT-ZM1原种事件)
2.3.模板DNA
按Edwards等人，(核酸研究，19，1349页，1991)用叶钻孔制备模板DNA。当使用用其它方法制备的DNA时，需要用不同量的模板进行测试。通常50ng的基因组模板DNA产生最佳结果。
2.4.设定阳性和阴性对照
为避免假阳性或假阴性，在PCR运行中坚决应包括下列阳性和阴性对照：
-基本的混合物对照(DNA阴性对照)。此为反应中未加入DNA的PCR。当观察到预期结果即无PCR产物时，表明该PCR混合物未污染靶DNA。
-DNA阳性对照(已知含有转基因序列的基因组DNA样本)。该阳性对照的成功扩增表明PCR是在允许靶序列扩增的条件下运行的。
-野生型DNA对照。此为所提供的模板DNA为制备自非转基因植物的基因组DNA的PCR。当观察到预期结果，即转基因PCR产物未被扩增而内源PCR产物被扩增时，表明在基因组DNA样本中无可检测到的转基因背景扩增。
2.5.PCR条件
在下列条件下可获得最佳结果：
-用于25μl反应的PCR混合物中含有：
2.5μl模板DNA
2.5μl 10x扩增缓冲液(与Taq聚合酶同时提供)
0.5μl 10mM dNTP’s
0.5μl COR17(10pmoles/μl)
0.5μl COR18(10pmoles/μl)
0.25μl COR15(10pmoles/μl)
0.25μl COR16(10pmoles/μl)
0.1μl Taq DNA聚合酶(5个单位/μl)
加水至25μl
-为得到最佳结果，应遵循下列热循环参数：
95℃ 4分钟
然后：95℃ 1分钟
57℃ 1分钟
72℃ 2分钟
进行5个循环
然后：92℃ 30秒
57℃ 30秒
72℃ 1分钟
进行25个循环
然后：72℃ 5分钟
2.6.琼脂糖凝胶分析
为显示最佳PCR结果，将10至20μl的PCR样本及合适的分子量标志物(例如100bp梯度PHARMACIA)上样于1.5％琼脂糖凝胶(Tris-硼酸盐缓冲液)。
2.7.结果验证
转基因植物DNA样本的单一PCR循环和单一PCR混合物的数据不可采用，除非1)DNA阳性对照显示预期的PCR产物(转基因和内源片段)，2)PCR扩增的DNA阴性对照为阴性(没有片段)以及3)野生型DNA对照显示预期结果(内源片段扩增)。
当遵循上述GAT-ZM1的PCR鉴定方法时，显示可见量的如预期大小的转基因和内源PCR产物的泳道表明其对应的植物(由其制备的基因组模板DNA)已遗传了GAT-ZM1原种事件。未显示可见量的转基因PCR产物但显示可见量的内源PCR产物的泳道表明其对应的植物(由其制备的基因组模板DNA)不包含原种事件。未显示可见量的内源和转基因PCR产物的泳道表明基因组DNA的质和/或量不能产生PCR产物。这些植物不予以评价。应重复基因组DNA的制备，且必须进行具备合适对照的新一轮PCR循环。
2.8.使用识别PCR法鉴定GAT-ZM1
在尝试筛选未知对象前，需进行具有所有适当对照的试验。对已有的方法，可能需要优化在不同的实验室间可能不同的组分(模板DNA制备物，Taq DNA聚合酶，引物性质，dNTP’s，热循环仪等)。
在方法中对内源序列的扩增起着关键作用。必须达到的PCR和热循环条件为：对已知的转基因基因组DNA模板，可扩增等摩尔量的内源序列和转基因序列。在同样的溴化乙锭染色强度下用琼脂糖凝胶电泳判断时，当目标内源片段未被扩增或目标序列未被扩增时，需要优化PCR条件。
按照上述方法对来自一系列植物(其中一些包含GAT-ZM1)的玉蜀黍叶材料进行试验。来自原种事件GAT-ZM1的样本和来自玉蜀黍野生型的样本分别用作阳性和阴性对照。
图1阐述了用原种事件PCR鉴定法对一系列玉米植物样本中GAT-ZM1的鉴定结果(泳道1至14)。发现在泳道1，2，5，6，7，8，11，13和14中的样本含有原种事件，因为检测到了202bp的条带，而在泳道4，9，10和12中的样本不包含GAT-ZM1。泳道3表明PCR失败，因为未检测到对照条带。泳道19和20代表GAT-ZM1阳性对照样本，泳道20和22代表非转基因玉蜀黍对照；泳道23代表阴性对照(水)样本，以及泳道24为分子量标志物(100bp)。
3.用特异整合片段作为探针，以检测包含GAT-ZM1的材料
用特异性引物COR17(SEQ ID No.11)和COR18(SEQ ID No.12)通过PCR扩增或通过化学合成获得GAT-ZM1的特异整合片段并标记。该整合片段作为特异探针，以检测在生物样本中包含的GAT-ZM1。按照标准步骤从样本中提取核酸。然后在杂交条件下将该核酸与特异探针接触，其中所述杂交条件为优化的，其允许杂交体形成。然后检测杂交体的形成，以表明在样本中存在GAT-ZM1核酸。任选地，样本中的核酸在与特异探针接触前，用特异引物扩增。另外在与特异探针而非整合片段接触前标记该核酸。任选地，在与样本接触前，将该特异探针附着于固相载体(例如但不限于滤膜、条带或珠)。
序列表
序列表<110>阿温提斯作物科学公司<120>用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的方法和试剂盒<130>EE-ZM1<140><141><150>US 09/481049<151>2000-01-11<160>14<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>3983<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：pUC/Ac的遗传成分<220><221>终止子<222>(412)..(618)<223>来自花椰菜花叶病毒的35S终止子<220><221>misc_feature<222>(619)..(636)<223>合成的多接头序列<220><221>基因<222>(637)..(1188)<223>合成的pat-基因编码序列<220><221>启动子<222>(1217)..(1746)<223>来自花椰菜花叶病毒的35S启动子<400>1tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgccaa gcttgaattc gagctcggta 420cccactggat tttggtttta ggaattagaa attttattga tagaagtatt ttacaaatac 480aaatacatac taagggtttc ttatatgctc aacacatgag cgaaacccta taagaaccct 540aattccctta tctgggaact actcacacat tattatagag agagatagat ttgtagagag 600agactggtga tttcagcggc atgcctgcag gtcgactcag atctgggtaa ctggcctaac 660tggccttgga ggagctggca actcaaaatc cctttgccaa aaaccaacat catgccatcc 720accatgcttg tatccagctg cgcgcaatgt accccgggct gtgtatccca aagcctcatg 780caacctaaca gatggatcgt ttggaaggcc tataacagca accacagact taaaaccttg 840cgcctccata gacttaagca aatgtgtgta caatgtggat cctaggccca acctttgatg 900cctatgtgac acgtaaacag tactctcaac tgtccaatcg taagcgttcc tagccttcca 960gggcccagcg taagcaatac cagccacaac accctcaacc tcagcaacca accaagggta 1020tctatcttgc aacctctcta gatcatcaat ccactcttgt ggtgtttgtg gctctgtcct 1080aaagttcact gtagacgtct caatgtaatg gttaacgata tcacaaaccg cggccatatc 1140agctgctgta gctggcctaa tctcaactgg tctcctctcc ggagacatgt cgactctaga 1200ggatccccgg gtaccctgtc ctctccaaat gaaatgaact tccttatata gaggaagggt 1260cttgcgaagg atagtgggat tgtgcgtcat cccttacgtc agtggagata tcacatcaat 1320ccacttgctt tgaagacgtg gttggaacgt cttctttttc cacgatgctc ctcgtgggtg 1380ggggtccatc tttgggacca ctgtcggcag aggcatcttc aacgatggcc tttcctttat 1440cgcaatgatg gcatttgtag gagccacctt ccttttccac tatcttcaca ataaagtgac 1500agatagctgg gcaatggaat ccgaggaggt ttccggatat taccctttgt tgaaaagtct 1560caattgccct ttggtcttct gagactgtat ctttgatatt tttggagtag acaagcgtgt 1620cgtgctccac catgttgacg aagattttct tcttgtcatt gagtcgtaag agactctgta 1680tgaactgttc gccagtcttt acggcgagtt ctgttaggtc ctctatttga atctttgact 1740ccatgggaat tcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac 1800aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt 1860gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc 1920gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg 1980ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt 2040atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa 2100gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc 2160gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag 2220gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt 2280gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg 2340aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg 2400ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg 2460taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac 2520tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg 2580gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt 2640taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg 2700tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 2760tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 2820ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt 2880taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag 2940tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt 3000cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc 3060gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc 3120cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg 3180ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac 3240aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg 3300atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc 3360tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact 3420gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc 3480aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat 3540acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc 3600ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac 3660tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa 3720aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact 3780catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg 3840atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg 3900aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag 3960gcgtatcacg aggccctttc gtc 3983<210>2<211>16<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB286<400>2ngtcgaswga nawgaa 16<210>3<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB391<400>3tggatacaag catggtggat gg 22<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB411<400>4aggcatgccg ctgaaatcac c 21<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB420<400>5ggtttcgctc atgtgttgag c 21<210>6<211>1073<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：包含GAT-ZM1 5’侧翼区的序列<220><221>misc feature<222>(1)..(341)<223>植物DNA<220><221>misc_feature<222>(342)..(1073)<223>pUC/Ac的T-DNA<220><221>引物_结合<222>(286)..(307)<223>引物COR17的结合位点<220><221>引物_结合<222>互补序列((466)..(487))<223>引物COR18的结合位点<400>6cgtcgagtga gatgaagtca cgacggggac tgactgcacc gtcgtctcag gtacgagggt 60gacgtccagc aagcgtttcg cgagcvtgcc ggcgtcgtcc gtttgctcgg gattggcgtg 120tcgcggggag acvgcvchcg tctttgtctc aaacvmgagg tcgatgcccg acgcgccccc 180cgttggggcg ctggcgccgt cgactcgatc gacagccgac gaggcgctgc ctcctgcttg 240accttggttg ccctgcctcc tcctccgtcg gcgggggaga ggacggggtg agctcgaatg 300ttgttcttcc accacgcggg gaagacgtcg tcgattccac cctcatactc ttcctttttc 360aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta 420tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg 480tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct 540ttcgtctcgc gcgtttcggt gatgacggtg aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga 600cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag 660cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta actatgcggc atcagagcag attgtactga 720gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca 780ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt 840cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc 900cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgccaagctt gaattcgagc 960tcggtaccca ctggattttg gttttaggaa ttagaaattt tattgataga agtattttac 1020aaatacaaat acatactaag ggtttcttat atgctcaaca catgagcgaa acc 1073<210>7<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB439<400>7ctcatggtta tggcagcact gc 22<210>8<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物VDS44<400>8ctgtcatgcc atccgtaaga tgc 23<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物MDB522<400>9tgctttgaag acgtggttgg 20<210>10<211>484<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：包含GAT-ZM1 3’侧翼区的序列<220><221>misc_feature<222>(1)..(342)<223>pUC/Ac的T-DNA<220><221>misc_feature<222>(343)..(484)<223>植物DNA<400>10tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga tgctcctcgt gggtgggggt 60ccatctttgg gaccactgtc ggcagaggca tcttcaacga tggcctttcc tttatcgcaa 120tgatggcatt tgtaggagcc accttccttt tctactatct tcataataaa gtgacagata 180gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccg gatattaccc tttgttgaaa agtctcaatt 240gccctttggt cttctgagac tgtatctttg atatttttgg agtagacaag cgtgtcgtgc 300tccaccatgt tgacgaagat tttcttcttg tcattgagtc gttccgccat tgtcgctgtc 360gcacggcggt ggaaggagta tcatgtcgta gctgccgtca agctccagat gggcagtctc 420cagcaacctc tccggcccgg gacggtgctc cgtttcggga gtcttgagtt catctcactc 480gacc 484<210>11<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物COR17<400>11gggtgagctc gaatgttgtt ct 22<210>12<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物COR18<400>12tcttagacgt caggtggcac tt 22<210>13<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物COR15<400>13agcgtcaagg atcattggtg tc 22<210>14<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物COR16<400>14ggccaagttc agcataagct gt 22
Claims (27)
1.鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的方法，该方法包含用特异性识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区的特异引物或探针检测GAT-ZM1特异区。
2.权利要求1的方法，所述方法包含用至少两条引物通过聚合酶链反应从所述生物样本中存在的核酸扩增出一条在100和350bp之间的DNA片段，其中所述至少两条引物之一识别GAT-ZM1的5’或3’侧翼区，另一条识别位于外源DNA内的序列。
3.权利要求2的方法，其中所述引物之一识别位于GAT-ZM1 5’侧翼区内的序列，且所述另一条引物识别位于外源DNA内的序列。
4.权利要求3的方法，其中所述引物之一识别位于SEQ ID No.65’侧翼区内的序列，且另一条引物识别位于外源DNA内的序列。
5.权利要求4的方法，其中所述引物分别包含SEQ ID No.11和SEQID No.12的序列。
6.权利要求2的方法，该方法包含用GAT-ZM1鉴定方法扩增出一条在150和220bp之间的片段，其中所述引物序列分别对应于SEQ ID No.11和SEQ ID No.12的核苷酸序列。
7.权利要求6的方法，该方法包含用GAT-ZM1鉴定方法扩增出一条约202bp的片段。
8.用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的试剂盒，所述试剂盒包含至少一条PCR引物，后者识别位于GAT-ZM1 3’或5’边界侧翼区内的序列。
9.权利要求8的试剂盒，其进一步包含至少一条第二条PCR引物，后者识别位于GAT-ZM1的外源DNA内的序列。
10.权利要求8的试剂盒，其中所述至少一条PCR引物识别位于SEQ IDNo.6的5’侧翼区内的序列。
11.权利要求8的试剂盒，其中所述至少两条PCR引物分别包含SEQID No.11和SEQ ID No.12的序列。
12.用于GAT-ZM1 PCR鉴定方法的引物，其具有的序列在优化的PCR条件下特异性识别位于GAT-ZM1 5’或3’侧翼区内的序列。
13.权利要求12的引物，其具有的序列与SEQ ID No.6或SEQ ID No.10内的序列具有至少80％的序列同一性。
14.具有SEQ ID No.11序列的引物。
15.具有SEQ ID No.12序列的引物。
16.权利要求1的方法，该方法包含将生物样本的核酸与GAT-ZM1特异探针杂交。
17.权利要求16的方法，其中所述特异探针的序列与包含部分GAT-ZM1 5’侧翼序列和与其邻接的外源DNA序列的序列具有至少80％的序列同一性。
18.权利要求17的方法，其中所述特异探针的序列与SEQ ID No.6从第286至第487位核苷酸具有至少80％的序列同一性。
19.用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的试剂盒，所述试剂盒包含可特异性与GAT-ZM1特异区杂交的特异探针。
20.权利要求19的试剂盒，其中所述特异探针的序列与包含部分GAT-ZM1 5’侧翼序列和与其邻接的外源DNA序列的序列具有至少80％的序列同一性。
21.权利要求20的试剂盒，其中所述特异探针的序列与SEQ ID No.6从第286至第487位核苷酸或其互补序列具有至少80％的序列同一性。
22.用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的特异探针。
23.权利要求22的探针，其与包含部分GAT-ZM1 5’侧翼序列和与其邻接的外源DNA序列的序列或所述序列的互补序列具有至少80％的序列同一性。
24.权利要求23的探针，其与SEQ ID No.6中从第286至第487位核苷酸或其互补序列具有至少80％的序列同一性。
25.用于鉴定生物样本中原种事件GAT-ZM1的特异探针，其序列基本上类似于SEQ ID No.6中从第286至第487位核苷酸或其互补序列。
26.用于证实种子纯度的方法，该方法包含用特异引物或探针检测种子样本中的GAT-ZM1特异区，其中所述特异引物或探针可特异识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区。
27.筛选种子中存在GAT-ZM1的方法，该方法包含用特异引物或探针检测种子批次样本中的GAT-ZM1特异区，其中所述特异引物或探针可特异识别GAT-ZM1 5’或3’侧翼区。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/481,049 US6395485B1 (en) | 2000-01-11 | 2000-01-11 | Methods and kits for identifying elite event GAT-ZM1 in biological samples |
| US09/481,049 | 2000-01-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1396957A true CN1396957A (zh) | 2003-02-12 |
| CN100400670C CN100400670C (zh) | 2008-07-09 |
Family
ID=23910373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB018036104A Expired - Lifetime CN100400670C (zh) | 2000-01-11 | 2001-01-09 | 用于鉴定生物样本中原种事件gat-zm1的方法和试剂盒 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6395485B1 (zh) |
| EP (1) | EP1250461B1 (zh) |
| JP (1) | JP4623910B2 (zh) |
| CN (1) | CN100400670C (zh) |
| AT (1) | ATE350488T1 (zh) |
| AU (2) | AU2001235414B2 (zh) |
| BR (2) | BR0107574A (zh) |
| CA (1) | CA2396778C (zh) |
| DE (1) | DE60125715T2 (zh) |
| ES (1) | ES2277912T3 (zh) |
| WO (1) | WO2001051654A2 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103103262A (zh) * | 2005-04-08 | 2013-05-15 | 拜尔作物科学公司 | 原种事件a2704-12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒 |
Families Citing this family (210)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6395485B1 (en) * | 2000-01-11 | 2002-05-28 | Aventis Cropscience N.V. | Methods and kits for identifying elite event GAT-ZM1 in biological samples |
| US6818807B2 (en) * | 2001-08-06 | 2004-11-16 | Bayer Bioscience N.V. | Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1 |
| NZ543450A (en) | 2003-05-02 | 2008-03-28 | Pioneer Hi Bred Int | Insect resistant maize plant TC1507 and assays for detecting the presence of corn plant TC1507 DNA in a sample and compositions thereof |
| JP2008514233A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド | トウモロコシイベントｄａｓ−５９１２２−７およびその検出のための方法 |
| EP2308986B1 (en) | 2006-05-17 | 2014-10-08 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Artificial plant minichromosomes |
| BR122017022360B1 (pt) * | 2007-06-11 | 2023-12-19 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Dna genômico de algodão, molécula de ácido nucleico isolada e uso de uma planta compreendendo o evento elite |
| CN101978074A (zh) * | 2008-03-20 | 2011-02-16 | 西门子医疗保健诊断公司 | 用于核酸测试的非竞争性内部对照物 |
| US20110154524A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event DP-032316-8 and methods for detection thereof |
| WO2011075593A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-040416-8 and methods for detection thereof |
| CN102892284B (zh) | 2009-12-17 | 2016-03-23 | 先锋国际良种公司 | 玉米事件dp-004114-3及其检测方法 |
| US20110154526A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event DP-043A47-3 and methods for detection thereof |
| CN102939383B (zh) | 2009-12-30 | 2015-04-29 | 先锋国际良种公司 | 用于靶向多核苷酸修饰的方法和组合物 |
| EP2529018B1 (en) | 2009-12-30 | 2016-06-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for the introduction and regulated expression of genes in plants |
| MA33933B1 (fr) | 2010-01-22 | 2013-01-02 | Bayer Ip Gmbh | Combinaisons de principes actifs acaricides et/ou insecticides |
| US9206137B2 (en) | 2010-11-15 | 2015-12-08 | Bayer Intellectual Property Gmbh | N-Aryl pyrazole(thio)carboxamides |
| CN103476749A (zh) | 2010-11-29 | 2013-12-25 | 拜耳知识产权有限责任公司 | α,β-不饱和亚胺 |
| KR20180096815A (ko) | 2010-12-01 | 2018-08-29 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도 |
| EP2460407A1 (de) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe |
| EP2683239A1 (en) | 2011-03-10 | 2014-01-15 | Bayer Intellectual Property GmbH | Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds |
| EP3295797A1 (en) | 2011-03-23 | 2018-03-21 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compound combinations |
| EP2694494A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-02-12 | Bayer Intellectual Property GmbH | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| JP5870186B2 (ja) | 2011-04-22 | 2016-02-24 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | （チオ）カルボキサミド誘導体と殺菌活性化合物を含んでいる活性化合物組合せ |
| WO2012171914A1 (en) | 2011-06-14 | 2012-12-20 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent |
| BR112014002855A2 (pt) | 2011-08-10 | 2017-02-21 | Bayer Ip Gmbh | combinações do composto ativo que incluem derivados específicos do ácido tetrâmico |
| MX348003B (es) | 2011-08-22 | 2017-03-08 | Bayer Cropscience Nv | Metodos y medios para modificar un genoma vegetal. |
| EP2561759A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience AG | Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth |
| WO2013037717A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 4-substituted-3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-1,2,4-oxadizol-5(4h)-one derivatives |
| IN2014CN01860A (zh) | 2011-09-16 | 2015-05-29 | Bayer Ip Gmbh | |
| CN103917097A (zh) | 2011-09-16 | 2014-07-09 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 5-苯基-或5-苄基-2-异噁唑啉-3-甲酸酯用于改善植物产量的用途 |
| WO2013037955A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of acylsulfonamides for improving plant yield |
| UA115132C2 (uk) | 2011-10-04 | 2017-09-25 | Байєр Інтелекчуал Проперті Гмбх | Спосіб боротьби з грибами та ооміцетами шляхом інгібування гена сахаропіндегідрогенази |
| US9617286B2 (en) | 2011-11-21 | 2017-04-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicide N-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives |
| US9725414B2 (en) | 2011-11-30 | 2017-08-08 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal N-bicycloalkyl and N-tricycloalkyl pyrazole-4-(thio)carboxamide derivatives |
| CN104270946B (zh) | 2011-12-19 | 2017-05-10 | 拜耳农作物科学股份公司 | 邻氨基苯甲酸二酰胺衍生物用于防治转基因作物中的害虫的用途 |
| US9556158B2 (en) | 2011-12-29 | 2017-01-31 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 3-[(pyridin-2-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2H)-one derivatives |
| WO2013098146A1 (en) | 2011-12-29 | 2013-07-04 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 3-[(1,3-thiazol-4-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives |
| RU2615834C2 (ru) | 2012-01-25 | 2017-04-11 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Комбинация активных соединений, а также содержащая комбинацию композиция и их применение, семя, обработанное комбинацией или композицией, и способ борьбы для защиты сельскохозяйственных культур |
| EP2806739A1 (en) | 2012-01-25 | 2014-12-03 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent |
| PE20190344A1 (es) | 2012-02-27 | 2019-03-07 | Bayer Ip Gmbh | Combinaciones de compuestos activos |
| WO2013139949A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield |
| WO2013153143A1 (en) | 2012-04-12 | 2013-10-17 | Bayer Cropscience Ag | N-acyl- 2 - (cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides |
| JP2015516396A (ja) | 2012-04-20 | 2015-06-11 | バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ | Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（三置換シリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体 |
| JP6109295B2 (ja) | 2012-04-20 | 2017-04-05 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（ヘテロシクリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体 |
| AR090558A1 (es) | 2012-04-24 | 2014-11-19 | Pioneer Hi Bred Int | Evento de maiz dp-004114-3 y metodos para su deteccion |
| EP2662364A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides |
| EP2662370A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides |
| EP2662362A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662360A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662361A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazol indanyl carboxamides |
| WO2013167545A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-14 | Bayer Cropscience Ag | Pyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662363A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides |
| MX2014013489A (es) | 2012-05-09 | 2015-02-12 | Bayer Cropscience Ag | 5-halogenopirazolindanil carboxamidas. |
| AR091104A1 (es) | 2012-05-22 | 2015-01-14 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida |
| BR112014029903A2 (pt) | 2012-05-30 | 2017-06-27 | Bayer Cropscience Ag | composições que compreendem um agente de controle biológico e um fungicida |
| CN108184905B (zh) | 2012-05-30 | 2021-12-28 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物 |
| US9380787B2 (en) | 2012-05-30 | 2016-07-05 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of ATP production and inhibitors of the cell wall synthesis |
| MX358794B (es) | 2012-05-30 | 2018-08-17 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un insecticida. |
| US9596860B2 (en) | 2012-05-30 | 2017-03-21 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the mitosis and cell division or compounds having a multi-site action |
| WO2013178650A1 (en) | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the respiratory chain at complex iii |
| BR112014029222A2 (pt) | 2012-05-30 | 2017-06-27 | Bayer Cropscience Ag | composições que compreendem um agente de controle biológico e um inseticida |
| AR091200A1 (es) | 2012-05-30 | 2015-01-21 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida |
| WO2014019983A1 (en) | 2012-07-31 | 2014-02-06 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide |
| BR112015005674B1 (pt) | 2012-09-14 | 2022-09-06 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Polipeptídeos recombinantes para conferir tolerância à herbicidas |
| EP2719280A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-16 | Bayer CropScience AG | Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi |
| DK2908641T3 (da) | 2012-10-19 | 2018-04-23 | Bayer Cropscience Ag | Fremgangsmåde til behandling af planter mod svampe, der er resistente over for fungicider, ved anvendelse af carboxamid- eller thiocarboxamidderivater |
| US20150259294A1 (en) | 2012-10-19 | 2015-09-17 | Bayer Cropscience Ag | Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives |
| PL2908642T3 (pl) | 2012-10-19 | 2022-06-13 | Bayer Cropscience Ag | Sposób wzmacniania tolerancji roślin na stres abiotyczny z zastosowaniem pochodnych karboksyamidowych lub tiokarboksyamidowych |
| CN105357968A (zh) | 2012-10-19 | 2016-02-24 | 拜尔农科股份公司 | 包含羧酰胺衍生物的活性化合物复配物 |
| EP2735231A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-28 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| UA117820C2 (uk) | 2012-11-30 | 2018-10-10 | Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт | Подвійна фунгіцидна або пестицидна суміш |
| US9775351B2 (en) | 2012-11-30 | 2017-10-03 | Bayer Cropscience Ag | Ternary fungicidal and pesticidal mixtures |
| CN104994736B (zh) | 2012-11-30 | 2018-02-06 | 拜耳作物科学股份公司 | 二元农药和杀真菌混合物 |
| US9943082B2 (en) | 2012-11-30 | 2018-04-17 | Bayer Cropscience Ag | Ternary fungicidal mixtures |
| US9615578B2 (en) | 2012-11-30 | 2017-04-11 | Bayer Cropscience Ag | Binary fungicidal mixtures |
| CN105025721A (zh) | 2012-12-03 | 2015-11-04 | 拜耳作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物 |
| US9867377B2 (en) | 2012-12-03 | 2018-01-16 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| JP2015535531A (ja) | 2012-12-03 | 2015-12-14 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 生物農薬および殺菌剤を含む組成物 |
| CA2893080A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| WO2014086753A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| EP2925146A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| US20150305348A1 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-29 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| CA2893083A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| WO2014090765A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Bayer Cropscience Ag | Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| EP2935218A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Bayer CropScience AG | Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides |
| US20150366199A1 (en) | 2013-02-11 | 2015-12-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising gougerotin and an insecticide |
| WO2014124375A1 (en) | 2013-02-11 | 2014-08-14 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising gougerotin and a biological control agent |
| JP2016511245A (ja) | 2013-02-11 | 2016-04-14 | バイエル クロップサイエンス エルピーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｐ | ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に基づく生物学的防除剤および殺真菌剤を含む組成物 |
| US10221429B2 (en) | 2013-03-07 | 2019-03-05 | Bayer Cropscience Lp | Toxin genes and methods for their use |
| BR112015025907A2 (pt) | 2013-04-19 | 2017-07-25 | Bayer Cropscience Ag | mistura binária inseticida ou pesticida |
| US20160058001A1 (en) | 2013-04-19 | 2016-03-03 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| EP3013802B1 (en) | 2013-06-26 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| RU2685723C1 (ru) | 2013-12-05 | 2019-04-23 | Байер Кропсайенс Акциенгезелльшафт | Производные n-циклоалкил-n-{ [2-(1-замещенный циклоалкил)фенил]метилен} -(тио)карбоксамида |
| WO2015082587A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| EP2885970A1 (en) | 2013-12-21 | 2015-06-24 | Bayer CropScience AG | Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide |
| WO2015138394A2 (en) | 2014-03-11 | 2015-09-17 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| BR112017022000A2 (pt) | 2015-04-13 | 2018-07-03 | Bayer Cropscience Ag | derivados de n-cicloalquil-n-(biheterocicliletileno)-(tio)carboxamida. |
| EP3097782A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents |
| UA126550C2 (uk) | 2015-09-11 | 2022-11-02 | Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт | Рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти, що кодує гфпд, і спосіб її застосування |
| AR108600A1 (es) * | 2016-06-07 | 2018-09-05 | Syngenta Participations Ag | Evento de élite de maíz mzhg0jg |
| US20190159451A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-05-30 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants |
| EP3544991A1 (en) | 2016-11-23 | 2019-10-02 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use |
| US11286498B2 (en) | 2017-01-18 | 2022-03-29 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Use of BP005 for the control of plant pathogens |
| CA3049775A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-07-26 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Bp005 toxin gene and methods for its use |
| CA3055317A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Hppd variants and methods of use |
| WO2018195256A1 (en) | 2017-04-21 | 2018-10-25 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving crop safety |
| US20210127681A1 (en) | 2017-07-27 | 2021-05-06 | Basf Se | Use of herbicidal compositions based on l-glufosinate in tolerant field crops |
| WO2019068811A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Bayer Aktiengesellschaft | COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE |
| WO2019083810A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Basf Se | IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE FOR 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE (HPPD) INHIBITORS BY NEGATIVE REGULATION OF HPPD EXPRESSION IN SOYBEANS |
| WO2019083808A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Basf Se | IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS |
| WO2019163064A1 (ja) * | 2018-02-22 | 2019-08-29 | 学校法人 慶應義塾 | Ｐｃｒ成否判定法 |
| EP3802521A1 (de) | 2018-06-04 | 2021-04-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole |
| CA3139524A1 (en) | 2019-05-10 | 2020-11-19 | Bayer Cropscience Lp | Active compound combinations |
| US20220289691A1 (en) | 2019-07-22 | 2022-09-15 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino-substituted pyrazoles and triazoles as pest control agents |
| WO2021013719A1 (en) | 2019-07-23 | 2021-01-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| JP2022541808A (ja) | 2019-07-23 | 2022-09-27 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 農薬としての新規ヘテロアリール－トリアゾール化合物 |
| WO2021022069A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| US20220403410A1 (en) | 2019-09-26 | 2022-12-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| EP4037485A1 (en) | 2019-10-02 | 2022-08-10 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| AR120176A1 (es) | 2019-10-09 | 2022-02-02 | Bayer Ag | Compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas |
| KR20220081359A (ko) | 2019-10-09 | 2022-06-15 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 살충제로서의 신규 헤테로아릴-트리아졸 화합물 |
| WO2021089673A1 (de) | 2019-11-07 | 2021-05-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| US20220408727A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| TW202136248A (zh) | 2019-11-25 | 2021-10-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| UY39058A (es) | 2020-01-31 | 2021-08-31 | Pairwise Plants Services Inc | Suppresión de la respuesta de evasión a la sombra en plantas |
| BR112022016400A2 (pt) | 2020-02-18 | 2022-10-25 | Bayer Ag | Compostos inovadores de heteroaril-triazol como pesticidas |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| EP4135512A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| BR112022021264A2 (pt) | 2020-04-21 | 2023-02-14 | Bayer Ag | Derivados heterocíclicos fundidos substituídos por 2-(het)aril como pesticidas |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| EP4146628A1 (en) | 2020-05-06 | 2023-03-15 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds |
| CN115605462A (zh) | 2020-05-12 | 2023-01-13 | 拜耳公司（De） | 作为杀真菌化合物的三嗪和嘧啶(硫代)酰胺 |
| CN115803317A (zh) | 2020-05-19 | 2023-03-14 | 拜耳作物科学股份公司 | 作为杀真菌化合物的氮杂双环(硫代)酰胺 |
| MX2022015107A (es) | 2020-06-02 | 2023-03-01 | Pairwise Plants Services Inc | Metodos para controlar el tama?o del meristema para mejorar los cultivos. |
| US20230278994A1 (en) | 2020-06-04 | 2023-09-07 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides |
| MX2022015625A (es) | 2020-06-10 | 2023-01-11 | Bayer Ag | Heterociclos sustituidos con azabiciclilo como nuevos fungicidas. |
| CN115943212A (zh) | 2020-06-17 | 2023-04-07 | 成对植物服务股份有限公司 | 控制分生组织大小以改良作物的方法 |
| BR112022025344A2 (pt) | 2020-06-18 | 2023-01-03 | Bayer Ag | Composição para uso na agricultura |
| CN116157017A (zh) | 2020-06-18 | 2023-05-23 | 拜耳公司 | 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物 |
| WO2021255089A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides |
| BR112022025692A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-02-28 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| CN116033828A (zh) | 2020-07-02 | 2023-04-28 | 拜耳公司 | 作为害虫防治剂的杂环衍生物 |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| MX2023007290A (es) | 2020-12-18 | 2023-07-04 | Bayer Ag | Uso del inhibidor de dhodh para el control de hongos fitopatogenicos resistentes en cultivos. |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| US20220259612A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants |
| WO2022182834A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| WO2022207496A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| BR112023019400A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-12-05 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| EP4334315A1 (en) | 2021-05-06 | 2024-03-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides |
| TW202311258A (zh) | 2021-05-12 | 2023-03-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為除蟲劑之經2-(雜)芳基取代之稠合雜環衍生物 |
| CA3223995A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| CN117794358A (zh) | 2021-07-01 | 2024-03-29 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于增强根系发育的方法和组合物 |
| US20230078990A1 (en) | 2021-08-12 | 2023-03-16 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| CN118102874A (zh) | 2021-08-13 | 2024-05-28 | 拜耳公司 | 活性化合物组合以及包含它们的杀真菌剂组合物 |
| EP4388110A1 (en) | 2021-08-17 | 2024-06-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| EP4392419A1 (en) | 2021-08-25 | 2024-07-03 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides |
| CN118265446A (zh) | 2021-08-30 | 2024-06-28 | 成对植物服务股份有限公司 | 修饰植物中的泛素结合肽酶基因以改善产量性状 |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| US20230087522A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
| CA3237641A1 (en) | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| US20230116819A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| WO2023099445A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| AR128372A1 (es) | 2022-01-31 | 2024-04-24 | Pairwise Plants Services Inc | Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas |
| WO2023148030A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in corn |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| US20230357789A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| WO2023205714A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20230348922A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
| WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
| WO2023215809A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| US20230416771A1 (en) | 2022-06-27 | 2023-12-28 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| WO2024006792A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| US20240000031A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024030984A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20240060081A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024054880A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| EP4385326A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-19 | Kimitec Biogorup | Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants |
| WO2024137438A2 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Insect toxin genes and methods for their use |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN87100603A (zh) | 1987-01-21 | 1988-08-10 | 昂科公司 | 抗黑素瘤疫苗 |
| US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
| US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
| US5605793A (en) * | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
| US6096947A (en) | 1997-01-14 | 2000-08-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for improving transformation efficiency |
| US6509516B1 (en) | 1999-10-29 | 2003-01-21 | Plant Genetic Systems N.V. | Male-sterile brassica plants and methods for producing same |
| US6395485B1 (en) * | 2000-01-11 | 2002-05-28 | Aventis Cropscience N.V. | Methods and kits for identifying elite event GAT-ZM1 in biological samples |
-
2000
- 2000-01-11 US US09/481,049 patent/US6395485B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-01-09 EP EP01907442A patent/EP1250461B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-09 AT AT01907442T patent/ATE350488T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-01-09 BR BR0107574-8A patent/BR0107574A/pt active IP Right Grant
- 2001-01-09 WO PCT/EP2001/000306 patent/WO2001051654A2/en active IP Right Grant
- 2001-01-09 DE DE60125715T patent/DE60125715T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-09 AU AU2001235414A patent/AU2001235414B2/en not_active Expired
- 2001-01-09 CA CA2396778A patent/CA2396778C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-09 CN CNB018036104A patent/CN100400670C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-09 BR BRPI0107574-8A patent/BRPI0107574B1/pt unknown
- 2001-01-09 ES ES01907442T patent/ES2277912T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-09 AU AU3541401A patent/AU3541401A/xx active Pending
- 2001-01-09 JP JP2001551228A patent/JP4623910B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-11 US US09/758,987 patent/US6951929B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103103262A (zh) * | 2005-04-08 | 2013-05-15 | 拜尔作物科学公司 | 原种事件a2704-12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒 |
| CN103103262B (zh) * | 2005-04-08 | 2017-07-04 | 拜尔作物科学公司 | 原种事件a2704‑12以及用于鉴定生物样品中此事件的方法和试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6951929B2 (en) | 2005-10-04 |
| CA2396778C (en) | 2012-11-27 |
| DE60125715T2 (de) | 2007-10-25 |
| DE60125715D1 (de) | 2007-02-15 |
| US20010029014A1 (en) | 2001-10-11 |
| AU3541401A (en) | 2001-07-24 |
| JP4623910B2 (ja) | 2011-02-02 |
| EP1250461A2 (en) | 2002-10-23 |
| ES2277912T3 (es) | 2007-08-01 |
| WO2001051654A3 (en) | 2002-01-31 |
| EP1250461B1 (en) | 2007-01-03 |
| BR0107574A (pt) | 2002-10-01 |
| CA2396778A1 (en) | 2001-07-19 |
| ATE350488T1 (de) | 2007-01-15 |
| JP2003524416A (ja) | 2003-08-19 |
| WO2001051654A2 (en) | 2001-07-19 |
| AU2001235414B2 (en) | 2005-12-15 |
| CN100400670C (zh) | 2008-07-09 |
| BRPI0107574B1 (pt) | 2018-02-27 |
| US6395485B1 (en) | 2002-05-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100400670C (zh) | 用于鉴定生物样本中原种事件gat-zm1的方法和试剂盒 | |
| CN111088405A (zh) | 用于检测冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合物、试剂盒及方法 | |
| CN109777761B (zh) | 一种分泌表达几丁二糖脱乙酰酶的工程菌构建及其应用 | |
| CN103215372B (zh) | 基于dpo引物检测布氏杆菌的引物序列及其检测试剂盒 | |
| CN109609636B (zh) | 一种肺腺癌差异性表达circRNA的检测试剂盒及其应用 | |
| US6573053B1 (en) | Analysis method | |
| CN112359057B (zh) | CRISPR/Cas12a基因编辑系统在84K杨树基因编辑中的应用 | |
| CN108531510B (zh) | 一种转基因斑马鱼在制备慢性粒细胞白血病的动物模型中的应用 | |
| CN110944656B (zh) | 编码人类fkrp蛋白的新型多核苷酸 | |
| CN107604004A (zh) | 用于痘苗病毒天坛株tk基因的示踪打靶质粒及其制备方法 | |
| CN113862235B (zh) | 一种嵌合酶及其在体外一步反应合成Cap0 mRNA的用途和方法 | |
| CN101538611B (zh) | Rna和dna双外参实时定量荧光pcr检测方法及其应用 | |
| CN103952483A (zh) | 利用dpo-pcr方法检测溶藻弧菌的dpo引物序列及检测试剂盒 | |
| CN111718953B (zh) | 一种针对甘蔗的CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用 | |
| DK3022290T3 (en) | MODIFIED ALGE STREAMS AND PROCEDURE FOR TRIACYLGYCLEROL ACCUMULATION WITH USING THESE STRAINS | |
| CN109022469B (zh) | 一种酵母表达载体的构建方法及其制备木聚糖酶的方法和应用 | |
| CN107034233B (zh) | 一种内源性启动子驱动外源基因表达的方法 | |
| US20030186266A1 (en) | Highly sensitive nucleic acid hybridization method and gene analysis method by using the same | |
| CN108385170B (zh) | 枯草芽孢杆菌f4启动子的调控序列文库 | |
| CN114457113B (zh) | 一种抑制单倍体胚胎干细胞二倍化的方法 | |
| CN114231663A (zh) | 一种快速定量腺病毒的E1A基因拷贝数的qPCR方法 | |
| CN114164225B (zh) | 一种使大肠杆菌获得有效nhej系统的高通量筛选工具及其应用 | |
| CN111560392B (zh) | miRNA表达载体及其应用 | |
| CN112301066B (zh) | 发酵生产长链二元酸的菌株及其制备方法与应用 | |
| CN103898138A (zh) | 用于检测单核细胞增生李斯特菌的质粒及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BAYER CROPSCIENCE N.V. Free format text: FORMER OWNER: BAYER BIOCHEMICAL SCIENCES S.A. Effective date: 20120418 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20120418 Address after: Belgium Patentee after: Bayer Cropscience NV Address before: Ghent Patentee before: Bayer Biochemical Sciences S. A. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200323 Address after: new jersey Patentee after: Bayer CropScience L.P. Address before: Diheim, Belgium Patentee before: Bayer CropScience N.V. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20080709 |
|
| CX01 | Expiry of patent term |