CN1233962A - 基本无萜烯的银杏类黄酮提取物在牙颊领域中的应用以及含有这种提取物的组合物 - Google Patents

基本无萜烯的银杏类黄酮提取物在牙颊领域中的应用以及含有这种提取物的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及银杏类黄酮提取物的应用,具体而言是指基本上不含有萜烯的提取物在牙颊领域中的应用。本发明还涉及含有这种提取物的牙颊用组合物。

Description

基本无萜烯的银杏类黄酮提取物在牙颊领域中的应用 以及含有这种提取物的组合物
本发明涉及银杏类黄酮提取物的应用，具体而言是指基本上不含有萜烯的提取物在牙颊领域中的应用。本发明还涉及含有这种提取物的牙颊用组合物。
本发明所述的无萜烯银杏叶类黄酮提取物含有类黄酮糖苷以及微量的萜烯或不存在萜烯。当所述提取物含有萜烯时，萜烯的含量最多为1％，优选最多0.5％。这种提取物含有28至35％的类黄酮糖苷，优选28至32％。这样的提取物适合从修剪下的银杏幼树的叶子中获得。
本发明的一个主题是如何获得上述提取物的方法，该方法包括若干利用溶剂处理银杏叶的提取步骤，并且该方法的特征在于：所述提取步骤中的一个步骤是脱萜烯步骤并且所用溶剂为式RC(O)OR’所示化合物，其中R和R’分别独立地代表低级烷基，这种溶剂可以单独使用或与至少含有5个碳原子的饱和脂族烃混用。该提取步骤可以在所述方法的任何阶段进行。优选的是，脱萜烯步骤所用的溶剂含有0至20％的饱和脂族烃。
除脱萜烯以外的提取步骤都已在文献中公开，尤其是专利EP431535、EP431536、EP360556和EP324197。这些专利在此引入本中请作为参考。
在上述定义中，所述低级烷基是代表含有1至6个碳原子的直链或支链烷基基团，优选含有1至4个碳原子的烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。式RC(O)OR’所示溶剂中R和R’代表甲基、乙基或丙基，优选采用乙酸乙酯。饱和的脂族烃可以选自己烷、庚烷和辛烷，优选使用庚烷。
银杏叶的上述类黄酮提取物在人牙龈上具有抗弹性蛋白酶和抗炎活性。有关这些性质的说明将在下面的试验部分表述。
银杏提取物所具备的上述性质使其适合药用。因此，本发明的一个主题是以银杏叶的上述类黄酮提取物作为药物，特别是作为牙颊区域内使用的药物。
本发明的另一个主题是适合治疗牙颊区域的药物组合物，该组合物含有上述银杏叶类黄酮提取物作为活性组分，该提取物可以任选性地与可药用载体合用。
本发明优选的主题是一种抗弹性蛋白酶的药物组合物，该组合物至少含有一个有效量的上述银杏提取物作为抗弹性蛋白酶剂。本发明的另一个优选主题是至少含有一个有效量的上述银杏提取物作为抗炎剂的抗炎药物组合物。
本发明药物组合物优选含有0.05至0.6％，更优选0.1至0.5％的银杏提取物。该组合物还可以含有至少一种具有相似或互补活性的其它试剂。可取的是，本发明药物组合物含有与神经酰胺合用的银杏提取物。优选这种组合物含有0.1至0.5％的银杏提取物和0.05至0.3％的神经酰胺。
本发明药物组合物可以以任何适当的形式存在，这取决于所选的给药方式。组合物可以是液体形式，例如溶液、悬浮液或乳液。还可以是凝胶、喷剂、牙膏或咀嚼胶的形式。优选组合物是凝胶或咀嚼胶形式。除单用或结合形式的银杏提取物外，组合物还可以含有适当的制备此类组合物的常规载体、成分或辅剂。
本发明的一个主题是上述银杏类黄酮提取物在制备用于牙颊区域治疗的药物组合物中的应用。
本发明的一个优选主题是上述银杏类黄酮提取物在制备抑制弹性蛋白酶的药物组合物中的应用。本发明的另一个优选主题是上述银杏类黄酮提取物在制备抑制牙颊区域内炎症的药物组合物中的应用。可以单独采用该类黄酮提取物，也可以将它与其它具有相似或互补活性的试剂联合使用，这取决于所要达到的效果，合用时也可以任选性地使用适当的载体。优选上述提取物与神经酰胺合用。
神经酰胺是存在于所有细胞结构中的鞘脂。它们也大量存在于植物界，尤其是小麦、稻米、大豆、小米和菠菜中。也可以合成神经酰胺。鉴于其结构，神经酰胺适合用作载体，以显著提高其所运载的活性剂的生物利用度。本申请所用的术语神经酰胺具有所属领域专业人员公知的标准含义。因此，术语神经酰胺包括所有合成的或天然(植物、动物或人)的神经酰胺，它们可以被选择性取代，例如被糖取代，如单-或多聚葡糖基神经酰胺。
鉴于类黄酮糖苷的高含量，有关专业人士提出，上述提取物具有抗氧剂活性和抗游离基活性。此外的一方面是，该提取物具有抗炎、抗弹性蛋白酶性质以及血管调节和胶原活化性，另一方面，其组成中几乎不存在萜烯，所以这种提取物适合在化妆品或皮肤病领域使用。
本发明的一个主题是上述银杏叶类黄酮提取物在制备血管调节和/或胶原活化药物中的应用。本发明还涉及含有上述类黄酮提取物作为血管调节剂和/或胶原活化剂的化妆品组合物。本发明的主题之一是一种美容处理方法，其特征在于将上述类黄酮提取物用作血管调节剂和/或胶原活化剂。
本发明的另一个主题是特别适用于牙颊区域的化妆品组合物，该组合物含有上述银杏叶类黄酮提取物。该提取物可以单独使用，或与至少一种具有相似或互补活性的其它试剂以及任选性的适当载体合用。优选该银杏提取物与神经酰胺合用。本发明所述的化妆品组合物可以含有0.05至0.6％的上述银杏提取物以及优选0.05至0.3％的神经酰胺。这种组合物可以以适当的形式应用于此类用途，例如膏霜、乳液、奶液、凝胶、油、上妆品、唇膏或洗液。除含有单独或结合形式的银杏提取物以及适当载体外，该化妆品组合物可以含有制备此类组合物的常规成分或辅剂。
本发明的另一个主题是用于美容性处理牙颊区域感染，尤其是齿龈炎的上述银杏类黄酮提取物。
下列实施例用于说明本发明，但决不限定本发明的保护范围。试验部分获得类黄酮提取物的方法
用6至12份(优选8份)含有60％丙酮的水在50至60℃下提取银杏叶，将该溶液浓缩，使丙酮的百分含量减至3％以下。将该溶液冷却，通过倾析除去类脂。水溶液用2至5份含有0至20％庚烷的乙酸乙酯提取。所得溶液用最少量的含有硫酸铵的丙酮/丁醇混合液(丙酮百分量为0至15％)提取。浓缩有机相；加入乙醇后，再次浓缩该溶液。用乙醇重新稀释后，将溶液冷却下来，过滤除去不溶的沉淀物。浓缩所得溶液，干燥、精细研磨，从而回收得到均匀粉末形式的类黄酮提取物。对基本不含萜烯的银杏类黄酮提取物的抗弹性蛋白酶和抗炎活性的研究1-体外抗弹性蛋白酶活性的试验
本试验的目的是研究所述提取物的抗弹性蛋白酶活性，该提取物可以是单用或与神经酰胺结合使用。这种活性是在人牙龈切片上进行评估。
所用神经酰胺是按照专利FR 2676936(该专利在此引入作为参考)公开的方法从植物中获得的神经酰胺，该方法包括将小麦用极性溶剂提取且随后自有机溶剂中重结晶。它们基本上由葡糖基神经酰胺和神经酰胺组成。
为达到目的，在抗弹性蛋白酶产物存在或不存在的条件下，将弹性纤维网络用人白细胞弹性蛋白酶(HLE)处理。酶促作用后残留的弹性纤维用(+)儿茶素染色。
在牙科摘出术中，从正常颊粘膜的活组织检查中获取样品，本试验在5个这种样品的8μm冷冻切片上进行。试验方案
在第一阶段中，测定破坏弹性纤维所需的人白细胞弹性蛋白酶的浓度：在室温和湿润的气氛下，将白细胞弹性蛋白酶涂敷在皮肤切片上并保持2小时；在丙酮中固定，并在70℃下和乙醇中脱水，此后将残留的弹性纤维用(+)儿茶素染色。测定10μm/ml人白细胞弹性蛋白酶存在条件下被破坏的全部弹性纤维。
为了证实酶上固定的产品，在常温下，将相似量的产品以乳液形式与10μm/ml的人白细胞弹性蛋白酶同时涂敷在切片上并保持2小时。将产品的抗弹性蛋白酶活性与PMSF的进行比较，PMSF是一种粉末状的弹性蛋白酶抑制剂。
下表1中列出了通过图象分析进行的形态学定量测定的结果。表1：在银杏提取物单独或与神经酰胺结合存在的条件下，用人白细胞弹性蛋白酶处理后的残余弹性纤维百分量
上层真皮 中层真皮 下层真皮
HLE单用HLE+PMSF     0     0     0
    25     55     70
银杏提取物+神经酰胺(10％)  (10％)0       0.10       0.20.1     00.3     00.5     00.1     0.10.3     0.10.5     0.10.1     0.20.3     0.20.5     0.2 00002.50056.70070 000031.85017.64701953.2 27.6522.5013.853361.2024.5236515.23080
2-抗炎活性的试验
本试验中的待测组合物是以凝胶形式存在，它含有0.5％所述银杏提取物和0.1％在抗弹性蛋白酶活性试验中所提及的植物神经酰胺。
本试验选用了20位患有轻度和中度酒石性(tartaric)齿龈炎的患者。这些患者每天在其齿龈粘膜上涂敷两次所述凝胶并持续一个月。在第0天和第28天按照评分规则对患者的齿龈状态进行临床评估。对红斑和齿龈炎的评定是主要的评估标准。必须以红斑的减少以及齿龈炎的减轻来证实上述处理具有抗炎作用。
临床上，牙龈的红斑外观(红色)和严重的齿龈炎都可以导致红斑。牙龈恢复正常状态、红斑减少、齿龈炎级别和症状程度的降低都是抗炎活性的证据。
第二个评估标准是对自发性疼痛和咀嚼性疼痛以及流血(强度和局部形状)的判断。标准的操作
在表示结果时，指示抗炎活性程度的三个主要标准，即“齿龈炎”、“牙龈颜色和“局部症状形状”都被指定为系数2。
在表示结果时，“自发性疼痛”、“咀嚼性疼痛”和“乳突出血”都被指定为系数1。-对于齿龈炎的评估，评分如下：
(0)若为0级：牙龈正常，无炎症，颜色无变化，没有出血；
(2)若为1级：轻度齿龈炎，轻度炎症，齿龈表面轻微改变，无出血；
(4)若为2级：中度发展的齿龈炎，中度炎症，红斑，水肿，探触或按压时出血；
(6)若为3级：大范围的齿龈炎，严重的炎症，明显的红斑，水肿，有自发性出血的趋势，溃疡。-对于牙龈颜色的评估，评分如下：
(0)正常
(2)轻微红斑
(4)中度红斑
(6)严重红斑-对牙龈颜色的形状评估：定义6个部分：RiUp、FrUp、LeUp、RiLo、FrLo和LeLo(Fr、Up、Lo、Ri和Le分别代表：前、上、下、右和左)
(0)无感染部分
(2)有一个部分被感染
(4)有两个部分被感染
(6)有三个部分被感染
(8)有三个以上的部分被感染-对于乳突出血的评估(Engelberger et Coll.,1993)，评分如下：
(0)若为0级：刺探后10至30秒无出血现象
(2)若为1级：轻微出血(细小血滴)
(4)若为2级：中度出血
(6)若为3级：严重出血-乳突出血的形状评估：
(0)无感染部分
(1)有一个部分被感染
(2)有两个部分被感染
(3)有三个部分被感染
(4)有三个以上的部分被感染-对“自发性疼痛和咀嚼性疼痛”改变的评估标准是在第0天和第28天时用目测标尺进行评定：
(0)如果无疼痛或轻微疼痛(目测标尺上的量度在0至2.5厘米)
(1)如果中度疼痛(目测标尺上的量度为2.5至5厘米)
(2)如果明显疼痛(目测标尺上的量度为5至7.5厘米)
(3)如果严重疼痛(目测标尺上的量度为7.5至10厘米)-随后，通过将各个评分值相加计算出总分值：
·恢复正常状态时的相应分值是0
·程度最严重时相应分值是33分。结果如表2所列。表2：
    第0天     第28天
    齿龈炎的评估     3.50±1  1.0±1.2(p＜0.05)
牙龈颜色的评估(红斑)     4.00±1.4  1.1±1.45(p＜0.05)
    牙龈红斑的形状     4.80±1.7  1.6±11.8(p＜0.05)
    乳突出血的评估     0.85±0.8  0.1±0.43(p＜0.05)
    乳突出血的形状     1.20±1.12  0.1±0.43(p＜0.05)
  自发性疼痛的评估     1.35±1.2  0(p＜0.05)
  咀嚼性疼痛的评估     1.10±1.17  0(p＜0.05)
     总分     16.80±4.8  3.9±4.6(p＜0.05)
本试验对20名酒石性齿龈炎患者的研究证实了，上述与植物神经酰胺合用的银杏提取物具有抗炎活性。
抗炎活性表现为：20个病例中有11例出现齿龈炎和牙龈红斑消失的显著临床形式，而另外中的8例有所改善。
在所有病例中，可以观察到乳突出血评分值的明显改善以及牙龈疼痛(自发性和咀嚼性)的完全消失。

Claims (21)

1．基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物在制备用于治疗牙颊区域感染的药物组合物中的用途。
2．根据权利要求1所述的用途，它是在制备用于抑制弹性蛋白酶的组合物中的用途。
3．根据权利要求1所述的用途，它是在制备用于抑制炎症的组合物中用途。
4．基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物在制备用于血管调节和/胶原活化药物中的用途。
5．含有基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物的化妆品组合物作为血管调节剂和/胶原活化剂的用途。
6．根据权利要求1至5任一项所述的用途，其特征在于所述提取物含有28至35％的类黄酮糖苷，优选28至32％。
7．根据权利要求1至6任一项所述的用途，其特征在于所述提取物最高含有1％，优选最高0.5％的萜烯。
8．根据权利要求1至7任一项所述的用途，其特征在于所述提取物与神经酰胺合用。
9．特别适用于治疗牙颊区域的药物组合物，该组合物含有基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物作为活性组分以及赋形剂。
10．根据权利要求9所述的组合物，其特征在于它具有抗弹性蛋白酶活性。
11．根据权利要求9所述的组合物，其特征在于它具有抗炎活性。
12．特别适用于治疗牙颊区域的化妆品组合物，该组合物含有基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物。
13．根据权利要求9至12任一项所述的组合物，其特征在于所述提取物含有28至35％的类黄酮糖苷，优选28至32％。
14．根据权利要求9至13任一项所述的组合物，其特征在于所述提取物最高含有1％，优选最高0.5％的萜烯。
15．根据权利要求9至14任一项所述的组合物，其特征在于所述提取物含有0.05％至0.6％的所述提取物。
16．根据权利要求9至15任一项所述的组合物，其特征在于所述提取物与神经酰胺合用。
17．根据权利要求16所述的组合物，其特征在于其含有0.05至0.3％的神经酰胺。
18．根据权利要求17所述的组合物，该组合物是凝胶或咀嚼胶的形式。
19．基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物在美容性处理牙颊区域感染，特别是齿龈炎中的应用。
20．基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物作为药物，尤其是作为牙颊区域用药物。
21．基本无萜烯的银杏叶类黄酮提取物的制备方法，该方法包括若干利用溶剂处理银杏叶的提取步骤，该方法的特征在于包括一个脱萜烯步骤，并且所用溶剂为式RC(O)OR’所示化合物，其中R和R’分别代表低级烷基，这种溶剂可以单独使用或与至少含有5个碳原子的饱和脂族烃混用。
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