DE69727239T2

DE69727239T2 - Bis zu 1% enthaltendes flavonoid extrakt von gingko biloba mit ceramiden für die orale hygiene und diese enthaltende zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69727239T2
Application number: DE69727239T
Authority: DE
Inventors: Joseph Glounthaune O'REILLY
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1996-10-25
Filing date: 1997-10-24
Publication date: 2004-11-04
Anticipated expiration: 2017-10-25
Also published as: US20030044476A1; DK0934074T3; CA2269895A1; MY120958A; US6488923B2; EP0934074B1; FR2755015B1; AR008506A1; JP2001503405A; DE69727239D1; JP4598900B2; CN100335062C; FR2755015A1; EP1393736A1; NO991943L; CN1233962A; ES2213820T3; AU4951297A; US6818208B2; US20020064571A1

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung eines Flavonoidextrakts aus Ginkgo biloba und insbesondere eines Extrakts, der maximal 1% Terpene enthält, im Mund- und Zahnbereich. Die Erfindung betrifft ferner eine einen solchen Extrakt enthaltende Zusammensetzung für den Mund- und Zahnbereich.
Ein von Terpenen freier Flavonoidextrakt von Blättern von Ginkgo biloba gemäß der Erfindung enthält Flavonoidheteroside und wenig oder keine Terpene. Wenn der Extrakt Terpene enthält, ist der Gehalt an Terpenen maximal 1% und vorzugsweise maximal 0,5%. Dieser Extrakt enthält 28 bis 35 Flavonoidheteroside und vorzugsweise 28 bis 32%. Derartige Extrakte werden vorzugsweise aus Blättern von jungen geschnitten Ginkgo-biloba-Bäumen erhalten.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Extrakts, das mehrere Schritte der Extraktion von Extrakt von Ginkgo-biloba-Blättern durch Lösungsmittel umfasst und dadurch gekennzeichnet ist, dass einer der Extraktionsschritte ein Deterpenierungsschritt ist und das verwendete Lösungsmittel eine Verbindung der Formel RC(O)OR' ist, in der R und R' unabhängig voneinander ein Niederalkyl darstellen, allein oder in Mischung mit einem gesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoff, der mindestens 5 Kohlenstoffatome enthält. Der Extraktionsschritt kann in jeder beliebigen Phase des Verfahrens durchgeführt werden. Das bei dem Deterpenierungsschritt verwendete Lösungsmittel enthält vorzugsweise 0 bis 20% gesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoff.
Andere Extraktionsschritte als der Deterpenierungsschritt sind in der Literatur bekannt, und zwar insbesondere aus den Patenten EP 431535 , EP 431536 , EP 360556 und EP 324197 . JP 4063545 beschreibt einen Extrakt von Ginkgo-Blättern mit pharmakologischen und deodorierenden Eigenschaften, der in Kaugummi verwendet werden kann. JP 56083416 erwähnt einen Ginkgo-biloba-Extrakt und seine Verwendung für die Behandlung von Krankheiten des Mund- und Zahnbereichs, insbesondere für die Behandlung von Zahnkaries und Parodontitis. EP 0324197 betrifft ein Verfahren zur Extraktion eines trockenen Rückstands aus Ginkgo-biloba-Blättern und bezieht sich auf die mögliche Verwendung eines solchen Extrakts für die Stimulierung der zerebralen und peripheren vasomotorischen Aktivität. EP 0360556 , EP 0431536 und EP 0431535 beschreiben einen Flavonoidextrakt von Ginkgo-biloba-Blättern und seine Verwendung für die Behandlung von zerebralen und peripheren Zirkulationsproblemen, für die Hemmung der Blutplättchenaggregation und als entzündungshemmendes Mittel.
In der oben angeführten Definition stellt der Ausdruck Niederalkyl vorzugsweise einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen und insbesondere einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen dar, wie z. B. die Reste Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl und tert-Butyl. Die Lösungsmittel der Formel RC(O)OR', in der die Reste R und R' Methyl, Ethyl oder Propyl darstellen, und insbesondere Ethylacetat, werden bevorzugt verwendet.
Der gesättigte aliphatische Kohlenwasserstoff kann aus Hexan, Heptan, Octan ausgewählt sein. Vorzugweise wird Heptan verwendet.
Ein Flavonoidextrakt von Ginkgo-biloba-Blättern der oben definierten Art hat eine Elastase-hemmende und entzündungshemmende Wirkung auf menschliches Zahnfleisch. Im Nachstehenden werden diese Eigenschaften im experimentellen Teil illustriert.
Diese Eigenschaften machen den Ginkgo-Extrakt der oben definierten Art für eine pharmazeutische Verwendung geeignet. Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist deshalb ein Flavonoidextrakt von Ginkgo-biloba-Blättern der oben definierten Art in Form eines Medikaments und insbesondere in Form eines für den Mund- und Zahnbereich bestimmten Medikaments.
Gegenstand der Erfindung ist ferner eine pharmazeutische Zusammensetzung, die insbesondere für die Behandlung des Mund- und Zahnbereichs bestimmt ist und als Wirkstoff einen Flavonoidextrakt von Ginkgo-biloba-Blättern der oben definierten Art enthält, und zwar gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
Gegenstand der Erfindung ist insbesondere eine Elastasehemmende pharmazeutische Zusammensetzung, die als Elastasehemmenden Wirkstoff mindestens eine wirksame Menge eines Ginkgo-Extrakts der oben definierten Art enthält. Gegenstand der Erfindung ist insbesondere auch eine entzündungshemmende pharmazeutische Zusammensetzung, die als entzündungshemmenden Wirkstoff mindestens eine wirksame Menge eines Ginkgo-Extrakts der oben definierten Art enthält.
Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung enthält vorzugsweise 0,05 bis 0,6% Ginkgo-Extrakt und vorzugsweise 0,1 bis 0,5%. Eine solche Zusammensetzung kann auch mindestens ein anderes Mittel mit ähnlichen oder ergänzenden Wirkungen enthalten. Eine erfindungsgemäße phar mazeutische Zusammensetzung enthält vorzugsweise Ginkgo-Extrakt der oben definierten Art in Kombination mit Ceramiden. Eine solche Zusammensetzung enthält vorzugsweise 0,1 bis 0,5% Ginkgo-Extrakt und 0,05 bis 0,3% Ceramide.
Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung kann in jeder geeigneten Form – je nach der gewählten Verabreichungsart – vorliegen. Sie kann in flüssiger Form vorliegen, wie z. B. als Lösung, Suspension, Emulsion. Sie kann auch in Form von Gel, von Spray, von Zahnpaste, Kaugummi vorliegen. Vorzugsweise liegt sie in Form von Gel oder Kaugummi vor. Sie kann, abgesehen von dem Ginkgo-Extrakt allein oder in Kombination und einem geeigneten Träger, die für die Herstellung solcher Zusammensetzungen gewöhnlich verwendeten Zutaten oder Adjuvantien enthalten.
Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung eines Flavonoidextrakts von Ginkgo der oben definierten Art für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die für die Behandlung des Mund- und Zahnbereichs bestimmt ist.
Gegenstand der Erfindung ist insbesondere die Verwendung eines Flavonoidextrakts von Ginkgo der oben definierten Art für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die zur Hemmung der Elastase bestimmt ist. Gegenstand der Erfindung ist ferner insbesondere die Verwendung eines Flavonoidextrakts von Ginkgo der oben definierten Art für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die zur Hemmung von Entzündungen des Mund- und Zahnbereichs bestimmt sind. Ein solcher Flavonoidextrakt kann je nach dem gesuchten Ergebnis allein oder in Kombination mit einem anderen Mittel mit ähnlichen oder ergänzenden Eigenschaften, gegebenenfalls in Gegenwart eines geeigneten Trägers, ver wendet werden. Ein Extrakt der oben definierten Art wird vorzugsweise in Kombination mit Ceramiden verwendet.
Ceramide sind Sphingolipide, die in allen Zellstrukturen vorliegen. Sie sind auch im Pflanzenreich reichlich vorhanden, und zwar insbesondere in Getreide, Reis, Soja, Hirse und Spinat. Sie können auch synthetisiert werden. Aufgrund ihrer Struktur können sie auf vorteilhafte Weise als Vektor verwendet werden, indem sie die Bioverfügbarkeit des Wirkstoffs, den sie befördern, beträchtlich erhöhen. Der in der vorliegenden Anmeldung verwendete Ausdruck Ceramid hat die gebräuchliche, dem Fachmann bekannte Bedeutung. So umfasst der Begriff Ceramid alle Ceramide synthetischen oder natürlichen Ursprungs (pflanzlich, tierisch oder menschlich), die gegebenenfalls beispielsweise durch einen Zucker substituiert sind, wie z. B. Mono- oder Polyglucosylceramide.
Aufgrund eines hohen Gehalts an Flavonoidheterosiden legt der Stand der Technik nahe, dass ein Extrakt der oben definierten Art eine antioxidierende Wirkung und eine Wirkung gegen freie Radikale besitzt. Angesichts einerseits seiner entzündungshemmenden, Elastase-hemmenden, jedoch auch vasoregulierenden und collagenaktivierenden Eigenschaften und andererseits eines fast vollständigen Fehlens von Terpenen in seiner Zusammensetzung kann ein solcher Extrakt auf vorteilhafte Weise in der Kosmetik oder in der Dermatologie verwendet werden.
Gegenstand der Erfindung ist ferner eine kosmetische Zusammensetzung, die insbesondere für den Mund- und Zahnbereich bestimmt ist und einen Flavonoidextrakt von Ginkgo-biloba-Blättern der oben definierten Art enthält. Dieser Extrakt kann allein oder in Kombination mit mindestens einem anderen Mittel mit einer ähnlichen oder ergänzenden Wirkung und gegebenenfalls mit einem geeigneten Träger kombiniert verwendet werden. Der Ginkgo-Extrakt wird vorzugsweise in Kombination mit Ceramiden verwendet. Eine erfindungsgemäße kosmetische Zusammensetzung kann 0,05 bis 0,6% Ginkgo-Extrakt der oben definierten Art und 0,05 bis 0,3% Ceramide enthalten. Eine solche Zusammensetzung kann in jeder bei dieser Art Anwendung geeigneten Form vorliegen, wie z. B. in Form von Cremes, Emulsionen, Milchen, Gelen, Ölen, Schminkprodukten, Lippenstiften, Lotionen. Sie kann, abgesehen von dem Ginkgo-Extrakt allein oder in Kombination und einem geeigneten Träger, die bei der Herstellung solcher Zusammensetzungen gewöhnlich verwendeten Zutaten oder Adjuvantien enthalten.
Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung eines Flavonoidextrakts von Ginkgo biloba der oben definierten Art für die kosmetische Behandlung von Erkrankungen des Mund- und Zahnbereichs und insbesondere der Gingivitis.
Die folgenden Beispiele dienen zur Veranschaulichung der Erfindung.
Experimenteller Teil
Verfahren zur Herstellung eines Flavonoidextrakts
Die Ginkgo-biloba-Blätter werden mit 6 bis 12 (vorzugsweise 8) Teilen Wasser, das 60% Aceton enthält, bei 50–60°C extrahiert und die Lösung wird so konzentriert, dass der Prozentsatz an Aceton auf weniger als 3% reduziert wird. Diese Lösung wird gekühlt und die Lipide werden durch Dekantieren entfernt. Die wässrige Lösung wird mit 2 bis 5 Teilen Ethylacetat, das 0 bis 20% Heptan enthält, extrahiert. Die gebildete Lösung wird mit einer minimalen Menge einer Aceton/Butanol-Mischung (Acetonprozentsatz 0 bis 15%) in Gegenwart von Ammoniumsulfat extrahiert. Die organische Phase wird konzentriert; nach Zusatz von Ethanol wird die Lösung wieder konzentriert. Nach einer weiteren Verdünnung mit Ethanol wird die Lösung gekühlt und unlösliche Niederschläge werden abfiltriert. Die erhaltene Lösung wird konzentriert, getrocknet und schließlich gemahlen, um den Flavonoidextrakt in Form eines homogenen Pulvers zu gewinnen.
Untersuchung der Elastase-hemmenden und entzündungshemmenden Wirkung eines von Terpen im Wesentlichen freien Flavonoidextrakts von Ginkgo biloba
1. Untersuchung der Elastase-hemmenden Wirkung ex vivo
Ziel dieser Untersuchung ist es also, die Elastase-hemmende Wirkung eines Extrakts der oben definierten Art allein oder in Kombination mit Ceramiden zu untersuchen. Diese Wirkung wird an Schnitten von menschlichem Zahnfleisch ermittelt.
Die verwendeten Ceramide pflanzlichen Ursprungs werden nach einem Verfahren erhalten, wie es in dem Patent FR 2676936 beschrieben wird und das die Extraktion von Getreide unter Verwendung eines polaren Extraktionslösungsmittels umfasst, worauf eine Umkristallisierung in einem organischen Lösungsmittel folgt. Sie setzen sich im Wesentlichen aus Glucosylceramiden und Ceramiden zusammen.
Zu diesem Zweck wird ein Netz von elastischen Fasern der menschlichen Leukozytenelastase (ELH) mit oder ohne Elastase-hemmendem Produkt ausgesetzt. Die elastischen Fasern, die nach einer Enzymeinwirkung bestehen bleiben, werden mit (+)-Catechin gefärbt.
Tiefgefrorene Schnitte von 8 μm werden aus 5 Entnahmen hergestellt, die aus Biopsien von normaler Mundschleimhaut erhalten wurden, die bei Zahnextraktionen entnommen wurden.
Protokoll
Zunächst wird die Konzentration der menschlichen Leukozytenelastase bestimmt, die für die Zerstörung der elastischen Fasern erforderlich ist: die Leukozytenelastase wird während zwei Stunden bei Raumtemperatur und unter feuchter Atmosphäre an Hautschnitte angelegt; nach Fixierung in Aceton und Entwässerung in Ethanol bei 70°C werden die bleibenden elastischen Fasern mit (+)-Catechin gefärbt. Die vollständige Zerstörung der elastischen Fasern wird in Gegenwart von 10 μm/ml menschlicher Leukozytenelastase erhalten.
Um eine eventuelle Fixierung der Produkte an dem Enzym aufzuzeigen, werden ähnliche Mengen von Produkten in Form von Emulsion und von menschlicher Leukozytenelastase in einer Menge von 10 μm/ml gleichzeitig während zwei Stunden bei Raumtemperatur an die Schnitte angelegt. Die Elastasehemmende Wirkung der Produkte wird mit der von (PMSF), einem starken Elastasen-Inhibitor, verglichen.
Die morphometrische Quantifizierung – durch Bildanalyse – ergibt die in der nachstehenden Tabelle 1 angeführten Ergebnisse.
Tabelle 1: % bleibender elastischer Fasern nach Behandlung mit menschlicher Leukozytenelastase in Gegenwart von Ginkgo-Extrakt allein oder in Kombination mit Ceramiden
2. Untersuchung der entzündungshemmenden Wirkung
Die in dieser Untersuchung getestete Zusammensetzung hat die Form von Gel und enthält 0,5% Ginkgo-Extrakt der oben definierten Art und 0,1% pflanzliches Ceramid, wie es in der Untersuchung der Elastase-hemmenden Wirkung definiert wurde.
Die Untersuchung wurde an 20 Patienten durchgeführt, die an einer leichten gutartigen Zahnstein-Gingivitis litten. Die Patienten tragen das Gel während zwei Monaten zweimal täg lich auf ihre Gingivalschleimhaut auf. Die klinische Beurteilung des Zahnfleischzustands wird an den Tagen J₀ und J₂₈ mit Hilfe eines Bewertungssystems vorgenommen. Die Hauptkriterien der Bewertung sind die Einschätzung des Erythems und der Gingivitis. Die entzündungshemmende Wirkung der Behandlung muss sich in einer Verringerung des Erythems und in einer Verringerung der Gingivitis äußern.
Klinisch äußert sich das Erythem in einem erythematösen Aussehen (rote Farbe) des Zahnfleischs und in einem hohen Grad der Gingivitis. Eine Rückkehr des Zahnfleischs in den Normalzustand, eine Verringerung des Erythems, des Stadiums der Gingivitis und der Ausdehnung des Befalls bilden die klinischen Beweise einer entzündungshemmenden Wirkung.
Die sekundären Kriterien sind die Einschätzung des Spontanschmerzes und des Schmerzes beim Kauen und der Blutung (Stärke und Topographie).
Auswertung der Kriterien
Die drei Hauptkriterien, die die Stärke der entzündlichen Wirkung belegen, "Gingivitis", "Farbe des Zahnfleisches" und "Topographie des Befalls" erhalten im Ausdruck der Ergebnisse einen Koeffizienten 2.
Die Indizes "Spontanschmerzen", "Schmerz beim Kauen" und "Papillarblutung" (Stärke und Topographie) erhalten im Ausdruck der Ergebnisse einen Koeffizienten 1.
Für die Einschätzung der Gingivitis wird folgende Bewertung gewählt:

(0) wenn der Grad 0 ist: normales Zahnfleisch, keine Entzündung, keine Farbänderung, keine Blutung;
(2) wenn der Grad 1 ist: wenig ausgedehnte Gingivitis, leichte Entzündung, leichte Veränderung der Zahnfleischoberfläche, keine Blutung;
(4) wenn der Grad 2 ist: Gingivitis mäßiger Ausdehnung, mäßige Entzündung, Erythem, Ödem, Blutung der Sondierung oder nach Druck;
(6) wenn der Grad 3 ist: sehr ausgedehnte Gingivitis, schwere Entzündung, starkes Erythem, Ödem, Neigung zur spontanen Blutung, Ulzeration.
– Bei der Einschätzung der Farbe des Zahnfleisches wird folgende Bewertung verwendet:
(0) normal
(2) leichtes Erythem
(4) mäßiges Erythem
(6) starkes Erythem
– Die topografische Bewertung der Farbe des Zahnfleisches: Es werden sechs Sektoren definiert: RO, VO, LO, RU, VU und LU (V, O, U, R und L bedeuten Vorne, Oben, Unten, Rechts und Links).
(0) kein Sektor befallen
(2) ein Sektor befallen
(4) zwei Sektoren befallen
(6) drei Sektoren befallen
(8) mehr als drei Sektoren befallen
– Bei der Einschätzung der Papillarblutung (Engelberger und Mitarbeiter, 1993) wird folgende Bewertung gewählt:
(0) wenn der Grad 0 ist: keine Blutung 10 bis 30 Sekunden nach Sondierung
(2) wenn der Grad 1 ist: leichte Blutung (dünne Blutspur)
(4) wenn der Grad 2 ist: mäßige Blutung
(6) wenn der Grad 3 ist: starke Blutung
– Die topografische Bewertung der Papillarblutung:
(0) kein Sektor befallen
(1) ein Sektor befallen
(2) zwei Sektoren befallen
(3) drei Sektoren befallen
(4) mehr als drei Sektoren befallen
– Die Änderungen der Kriterien "Spontanschmerz und Schmerz beim Kauen" werden mit Hilfe einer Sichtskala am Tag J₀ und J₂₈ bewertet:
(0) wenn kein Schmerz oder leichter Schmerz (Messung zwischen 0 und 2,5 cm auf der visuellen Skala)
(1) wenn Schmerz mäßig (Messung zwischen 2,5 und 5 cm auf der visuellen Skala)
(2) wenn Schmerz bedeutend (Messung zwischen 5 und 7,5 cm auf der visuellen Skala)
(3) wenn Schmerz stark (Messung zwischen 7,5 und 10 cm auf der visuellen Skala)
– Dann wird ein Gesamtindex errechnet, indem die einzelnen Indizes summiert werden.
– Die Rückkehr zum Normalzustand erhält den Index 0.
– Die maximale Schwere erhält den Index 33.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle 2 zusammengefasst.
Tabelle 2
Diese Untersuchungen an 20 an Zahnstein-Gingivitis erkrankten Patienten gestattete es, die entzündungshemmende Wirkung eines Ginkgo-Extrakts der oben definierten Art in Kombination mit pflanzlichen Ceramiden nachzuweisen.
Diese entzündungshemmende Wirkung äußert sich klinisch auf signifikante Weise durch ein Verschwinden der Gingivitis und des Zahnfleischerythems in 11 von 20 Fällen und durch eine Verbesserung in 8 weiteren Fällen.
Es wurde eine signifikante Verbesserung des Index der Papillarblutung und in allen Fällen ein vollständiges Verschwinden des Gingivalschmerzes (Spontanschmerz und Schmerz beim Kauen) beobachtet.

Claims

Verwendung eines Flavonoidextrakts aus Blättern von Ginkgo biloba zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die für die Behandlung von Erkrankungen des Mund- und Zahnbereichs bestimmt ist, dadurch gekennzeichnet, daß dieser Extrakt mit Ceramiden kombiniert ist und höchstens 1% Terpene enthält.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt 28 bis 35% und vorzugsweise 28 bis 32% Flavonoidheteroside enthält.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt höchstens 0,5% Terpene enthält.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die insbesondere für die Behandlung des Mund- und Zahnbereichs bestimmt ist und als Wirkstoff einen Flavonoidextrakt aus Blättern von Ginkgo biloba sowie Trägersubstanzen enthält, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt mit Ceramiden kombiniert ist und höchstens 1% Terpene enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß sie 0,05 bis 0,3% Ceramide enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 5 in Form von Gel oder Kaugummi.
Kosmetische Zusammensetzung, die für den Mund- und Zahnbereich bestimmt ist und einen Flavonoidextrakt aus Blättern von Ginkgo biloba enthält, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt mit Ceramiden kombiniert ist und höchstens 1% Terpene enthält.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt 28 bis 35% und vorzugsweise 28 bis 32% Flavonoidheteroside enthält.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt höchstens 0,5% Terpene enthält.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß sie 0,05 bis 0,6% dieses Extrakts enthält.