CN1187540A - 用于产生l－赖氨酸的方法 - Google Patents

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Abstract

一种具有天冬氨酸激酶的棒状杆菌(其中L－苏氨酸和L－赖氨酸的反馈抑制实质上被脱敏),其包含编码二氢二吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸合酶的增强DNA序列、编码二氨基庚二酸脱羧酶的增强DNA序列、编码天冬氨酸转氨酶的增强DNA序列;一种用于产生L－赖氨酸的方法,该方法包括以下步骤:在适当的培养基中培养棒状杆菌使得在所说的细菌的培养物中产生并积累L－赖氨酸,并从培养物收集L－赖氨酸;以及一种可用于产生棒状杆菌的重组DNA。

Description

用于产生L-赖氨酸的方法
本发明涉及通过培养微生物产生L-赖氨酸的方法，所述的微生物是通过借助基于基因工程的技术修饰用于发酵生产氨基酸的棒状杆菌等获得的。
作为饲料添加剂的赖氨酸通常通过利用属于棒状杆菌的L-赖氨酸-产生突变菌株用发酵法产生。现在已知各种L-赖氨酸-产生菌是从属于棒状杆菌的野生型菌株开始经人工突变产生的那些。
就棒状杆菌而言，公开了载体质粒，这种质粒是在细菌细胞中可自主复制的，并具有药物抗性标记基因(参见美国专利4,514,502)，并公开了用于把基因引入细菌细胞的方法(例如日本专利申请公开2207791)。也公开了通过利用以上所述的技术培养L-苏氨酸-或L-异亮氨酸-产生菌的可能性(参见美国专利4,452,890和4,442,208)。培养L-赖氨酸-产生菌的技术是已知的，在其中参与L-赖氨酸生物合成的基因掺入到载体质粒中，以便在细菌细胞中扩增该基因(例如，日本专利申请公开56-160997)。
L-赖氨酸生物合成的已知基因包括，例如，二氢二吡啶甲酸还原酶基因(日本专利申请公开7-75578)和天冬氨酸转氨酶基因(日本专利申请公开6-102028)(其中参与L-赖氨酸生物合成的基因被克隆)，以及磷酸烯醇丙酮酸羧酶基因(日本专利申请公开60-87788)，二氢二吡啶甲酸合酶基因(日本专利出版物6-55149)和二氨基庚二酸脱羧酶基因(日本专利申请公开60-62994)(其中扩增基因影响L-赖氨酸产量)。
就参与L-赖氨酸生物合成的酶而言，在以野生型使用时，经历反馈抑制的酶的情况是已知的。在这种情况下，L-赖氨酸产量通过这样一种方法得到提高，即引入具有脱敏反馈抑制之突变的基因。具体地说，已知这样的基因包括天冬氨酸激酶基因(国际出版物WO 94/25605)。
如上所述，借助L-赖氨酸生物合成系统的基因扩增或突变基因的引入获得了成功的结果。例如，具有突变天冬氨酸激酶基因(脱敏了由赖氨酸和苏氨酸引起的固有抑制)的棒状杆菌产生大量的L-赖氨酸(大约25g/L)。然而，这种细菌与不具有突变天冬氨酸激酶基因的细菌比较生长速度降低。也报道了通过除了引入突变天冬氨酸激酶基因之外进一步引入二氢二吡啶甲酸合酶基因可提高L-赖氨酸产量(应用的和环境的微生物学，57(6)，1746-1752(1991))。然而，这种细菌生长速度进一步降低。
就二氢二吡啶甲酸还原酶基因而言，已有人指出，二氢二吡啶甲酸还原酶的活性在引入了该基因的棒状杆菌中增加，然而，没有报道对L-赖氨酸产量的影响(日本专利申请公开775578)。
目前，对棒状杆菌，没有出现任何人已成功地通过组合L-赖氨酸生物合成的多种基因明显改善L-赖氨酸产量而不抑制生长的情况。也没有报道通过增强L-赖氨酸生物合成基因改善生长的情况。
本发明的目的是通过使用编码以下酶的各种遗传物质DNA序列改善棒状杆菌L-赖氨酸产量：天冬氨酸激酶(如果必要，在下文中称为＂AK＂，前提是编码AK蛋白质的基因在下文中称为＂lysC＂)，二氢二吡啶甲酸还原酶(如果必要，在下文中称为＂DDPR＂，前提是编码DDPR蛋白质的基因在下文中称为为＂dapB＂)，二氢二吡啶甲酸合酶(如果必要，在下文中简化为＂DDPS＂，前提是编码DDPS蛋白质的基因在下文中称为＂dapA＂)，二氨基庚二酸脱羧酶(如果必要，在下文中称为＂DDC＂，前提是编码DDC蛋白质的基因在下文中称为＂lysA＂)，和天冬氨酸转氨酶(如果必要，在下文中称为＂AAT＂，前提是编码AAT蛋白质的基因在下文中称为＂aspC＂)，这些酶在棒状杆菌细胞中是L-赖氨酸生物合成的重要酶。
本发明的原理基于这样一种事实：L-赖氨酸产量可以通过增强突变lysC(如果必要，在下文中简称为＂突变lysC＂)、dapA、dapB、lysA和aspC组合得到提高，所述lysC编码突变AK(如果必要，在下文中简称为＂突变AK＂)，其中由赖氨酸和苏氨酸产生的固有抑制被脱敏。
即，本发明提供了在棒状杆菌细胞中可自主复制的重组DNA，该DNA包含编码天冬氨酸激酶(其中实质上脱敏了L-苏氨酸L-赖氨酸的反馈抑制)的DNA序列，编码二氢二吡啶甲酸还原酶的DNA序列，编码二氢二吡啶甲酸合酶的DNA序列，编码二氨基庚二酸脱羧酶的DNA序列和编码天冬氨酸转氨酶的DNA序列。
在另一方面，本发明提供了一种具有天冬氨酸激酶的棒状杆菌(其中L-苏氨酸和L-赖氨酸的反馈抑制实质上被脱敏)，该棒状杆菌包含编码二氢二吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸合酶的增强DNA序列、编码二氨基庚二酸脱羧酶的增强DNA序列、编码天冬氨酸转氨酶的增强DNA序列。
在另一方面，本发明提供了一种用于产生L-赖氨酸的方法，该方法包括以下步骤：在适当的培养基中培养以上所述的任一棒状杆菌使得在所说的细菌的培养物中产生并积累L-赖氨酸，并从培养物收集L-赖氨酸。
本发明也提供了编码包含SEQ ID NO：31所示氨基酸序列之蛋白质的DNA序列。所述DNA的实例是包含SEQ ID NO：30所示的879-2178位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
本发明还提供了载体pVK7，其是在大肠杆菌和乳发酵短杆菌细胞中可自主复制的，包含一个多克隆位点和lacZ’。
在本发明中所称的棒状杆菌是在Bergey’s细菌学手册(第8版p.599(1974))中限定的一组微生物，其是无孢子-形成能力的需氧革兰氏-阳性-非抗酸棒杆状菌。棒状杆菌包括属于棒杆菌属的细菌，属于短杆菌短的细菌(迄今为止分类为短杆菌属但现在与棒杆菌属细菌合并在一起)和与属于棒杆菌的细菌密切相关的短杆菌属的细菌。
按照本发明，棒状杆菌的L-赖氨酸产量可以得到提高。
附图简要说明
图1说明包含突变lysC的质粒p399AK9B和p399AKYB的构建方法。
图2说明包含dapB和Brevi.-ori质粒pDPRB的构建方法。
图3说明包含dapA和Brevi.-ori质粒pDPSB的构建方法。
图4说明的包含lysA的质粒p299LYSA的构建方法。
图5说明包含lysA和Brevi.-ori的质粒pLYSAB的构建方法。
图6说明包含lysC，dapB和Brevi.-ori的质粒pCRCAB的构建方法。
图7说明包含突变lysC和dapB的质粒pCB的构建方法。
图8说明包含dapAl dapB和Brevi.-ori的质粒pAB的构建方法。
图9说明包含突变lysC，dapA，dapB和Brevi.-ori的质粒pCAB的构建方法。
图10说明包含突变lysC，dapA，aapB，lysA和Brevi.-ori的质粒PCABL的构建方法。
图11说明棒状杆菌新克隆载体pVKG和pVK7的构建方法。
图12说明包含aspC的质粒pOm的构建方法。
图13说明ATCC 13869染色体DNA片段上的两个ORF。
图14说明pORF1的构建方法。
1制备用于本发明的L-赖氨酸生物合成的基因
用于本发明的L-赖氨酸生物合成的基因分别通过以下方法获得：从DNA供体细菌染色体DNA用质粒载体或类似物构建染色体DNA文库，选择具有所需基因的菌株，和从所选择的菌株回收已插入了所述基因的重组DNA。对用于本发明的L-赖氨酸生物合成的基因的DNA供体没有特别的限制，只要L-赖氨酸生物合成的所需基因表达酶蛋白质(其在棒状杆菌细胞中起作用)。然而，DNA供体优选地是棒状杆菌。
来源于棒状杆菌的lysC，aapA，dapB和lysA的所有基因具有已知的序列。因此，可以通过按照聚合酶链反应方法(PCR；see White，T.J.等，Trends Genet.，5,185(1989))进行扩增来获得它们。
用于本发明的L-赖氨酸生物合成的各种基因可以按照以下例举的方法获得：(1)突变lysC的制备
包含突变lysC的DNA片段可以从突变菌株制备，在所述菌株中由L-苏氨酸和L-赖氨酸产生的AK活性的协同反馈抑制实质上被脱敏(国际出版物WO94/25605)。这样一种突变菌株可以通过例如用诱变剂如紫外光和N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(NTG)对来源于棒状杆菌野生型菌株的一组细胞进行常规突变处理获得。AK活性可以通过用由Miyajima，R.等在生物化学杂志(1968)，63(2)，139-148中描述的方法测量。最优选的这样的突变菌株由L-赖氨酸-产生菌AJ3445(FERM 1944)代表，其来源于突变处理乳发酵短杆菌ATCC 13869野生型菌株(现在其改变的名称是Corynebacterium alutamicum)。
另外，突变lysC也可由包含野生型lysC的质粒DNA体外突变处理获得。另一方面，突变脱敏L-赖氨酸和L-苏氨酸产生的对AK活性的协同反馈抑制的信息是十分清楚的(国际出版物WO 94/25605)。因此，在该信息的基础上按照定点突变方法也可以制备突变lysC。
可以按照例如Saito和Miura(H.Saito和K.Miura，生物化学生物物理学报，72，619(1963))的方法通过制备染色体DNA或按照聚合酶链反应方法(PCR；参见White，T.J.等Trends Genet.，5，185(1989))扩增lysC从棒状杆菌分离包含lysC的片段。
以单链DNA例证性地说明DNA引物，所说单链DNA是具有SEQ ID NO：1和2所示的核苷酸序列的23链节和21链节的，以便扩增例如基于谷氨酸棒杆菌已知序列(参见分子微生物学(1991)，5(5)，1197-1204；Mel.Gen.Genet.(1990)，224，317-324)的编码lysC的约1,643bp的区域。可以通过采用AppliedBiosystems生产的DNA合成仪380B型和采用phosphoamidite法(参见Tetrahedron Letters(1981)，22，1859)按照常规方法合成DNA。可以通过用由Takara Shuzo生产的DNA热循环器PJ2000型按照供给者指定的方法和尾端DNA聚合酶进行PCR。
优选的是将经PCR扩增的lysC与在大肠杆菌和/和/或棒状杆菌细胞中可自主复制的载体DNA连接制备重组DNA，把重组DNA引入预先的大肠杆菌细胞中。这一过程使随后的操作容易进行。在大肠杆菌细胞中可自主复制的载体优选地是质粒载体，其是在宿主的细胞中优选的可自主复制的，包括例如，pUC19、pUC18、pBR322、pHSG299、pHSG399、pHSG398和RSF1010。
当具有使得质粒可以在棒状杆菌中自主复制的能力的DNA片段插入到这些载体中时，它们可以用作在大肠杆菌和棒状杆菌中可自主复制的穿梭载体。
这样穿梭载体包括以下载体。含有各载体的微生物和其在国际保藏单位中的保藏号(在括号)显示如下：pHCA：   大肠杆菌AJ12617(FERM BP-3532)pAJ655： 大肠杆菌AJ11882(FERM BP-136)
     谷氨酸棒杆菌SR8201(ATCC39135)pAJ1844：大肠杆菌AJ11883(FERMBP-137)
     谷氨酸棒杆菌SR8202(ATCC39136)PAJ611： 大肠杆菌AJ11884(FERM BP-138)pAJ3148：谷氨酸棒杆菌SR8203(ATCC39137)pAJ440： 枯草芽孢杆菌AJ11901(FERM BP-140)
这些载体可从其后的保藏的微生物获得。采用溶菌酶和SDS裂解在对数的生长期所收集的细胞，接着在30,000×g下从裂解物分离以获得上清液。将聚乙二醇添加到上清液中，借助氯化铯-溴化乙锭均衡密度梯度离心进行分级分离和纯化。
可以通过按照以下方法将质粒引入来转化大肠杆菌，所述方法例如D.M.Morrison(酶学方法，68,326(1979))的方法或其中用氯化钙处理受体细胞以增加DNA渗透性的方法(Mandel，M.和Higa，A.，分子生物学杂志，53,159(1970))。
当按照以上所述的方法从AK野型菌株分离lysC时，获得野生型lysC，而从AK突变菌株分离lysC时，获得突变lysC。
包含野生型lysC的DNA片段的核苷酸序列的例子在序列表中SEQ ID NO：3中显示。野生型AK蛋白质的α亚单位的氨基酸序列是从核苷酸序列推定的，其与DNA序列一起在序列表SEQ ID NO：4中显示。单独的氨基酸序列在SEQID NO：5中显示。野生型AK蛋白质的β亚单位的氨基酸序列是从DNA的核苷酸序列推定的，其与DNA序列一起在序列表SEQ ID NO：6中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：7中显示。在各亚单位中，GTG用作起始密码子，相应的氨基酸由甲硫氨酸代表。然而，这种代表涉及到甲硫氨酸、缬氨酸或甲酰甲硫氨酸。
对用于本发明的突变lysC没有特别的限制，只要其编码AK(其中由L-苏氨酸和L-赖氨酸产生的协同反馈抑制被脱敏)。然而，突变lysC的一个例证性例子包括这样的突变，其中与279位(从N-末端开始计算)丙氨酸残基相应的氨基酸残基改变成为非丙氨酸和非非野生型AK氨基酸序列中的β亚单位中的酸性氨基酸的氨基酸残基，与30位(从N-末端开始计数)丙氨酸残基相应的氨基酸残基改变成为非丙氨酸和非野生型AK氨基酸序列中的β亚单位中的酸性氨基酸的氨基酸残基。野生型AK的氨基酸序列具体来说包括作为α亚单位的在序列表中SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，作为β亚单位的在序列表中SEQ IDNO：7所示的氨基酸序列。
称为非丙氨酸和非酸性氨基酸的那些氨基酸残基优选的包括苏氨酸、精氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸和缬氨酸残基。
对相应于所要替代的氨基酸残基的密码子没有特别的限制，只要它编码所说的氨基酸残基。可以预计，依据细菌物种和细菌菌株的不同，野生型AK的氨基酸序列可以稍微不同。具有基于在一个或多个位置上取代，缺失或插入一个或多个氨基酸残基而不影响以上所述活性的突变的AK也可以用于本发明中。具有自发突变的编码AK的DNA可以通过分离这样一种DNA获得，该DNA在严格条件与例如具有SEQ ID NO：3所示的一部分核苷酸序列的DNA杂交。本文所说的＂严格条件＂意指形成特异性杂交而不形成非特异性杂交的条件。用数值难于清楚表达所述条件。然而，例举性的条件是这样一种条件，在该条件下，具有高同源性的核酸(例如具有不低于90％同源性的DNA)相互杂交或者是这样一种条件，其温度是从熔点温度Tm到(Tm-30)C，优选地是从Tm到(Tm-20)C，盐浓度相当于1×SSC，优选地相当于0.1×SSC。
基于例如，取代、缺失或插入一个或多个氨基酸残基进行过人工突变的其它AK也可以使用，只要对AK活性实质上没有影响和对L-赖氨酸和L-苏氨酸的协同反馈抑制的脱敏没有影响。可以通过例如定点突变修饰核苷酸序列，产生特定位点的缺失或插入，由此来获得编码具有人工突变的AK的DNA。也可以通过已知诱变处理方法获得具有突变的lysC。诱变处理包括用羟胺或类似物体外处理包含lysC的DNA，用诱变如紫外光或诱变剂(其是用于常规人工诱变的，如N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或硝酸)处理具有包含lysC之DNA的微生物的。诱变处理后，可以通过选择编码或产生AK(其具有AK活性，其氨基酸序列从经历诱变处理的DNA或者经历诱变处理的微生物突变)的DNA或微生物测定引入了突变或者发生了突变的位点。对所引入突变的位点没有特定的限制，只要对AK活性实质上没有影响和对反馈抑制的脱敏没有影响。所引入的突变的数目随在蛋白质的立体结构中的氨基酸的位置和种类变化，并且没有特定的限制，只要对AK活性实质上没有影响和对反馈抑制的脱敏没有影响。该数目通常是1至20，优选地是1至10。
本领域技术人员易于测定具有以上所述的突变的相应于氨基酸序列中特定丙氨酸的残基的氨基酸残基。
通过将突变lysC质粒p399AK9B引入乳发酵短杆菌野生型菌株AJ12036菌株(FERM BP-734)获得的AJ12691菌株已于1992年4月10日以保藏号FERM P-12918保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)，基于布达佩斯条约于1995年2月10日转变成国际保藏，以保藏号FERM BP-4999保藏。(2)dapB的制备
可以借助PCR从棒状杆菌的染色体制备包含dapB的DNA片段。对DNA供体没有特别的限制，然而，由乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株所例证。
对乳发酵短杆菌编码DDPR的DNA序列是已知的(生物技术杂志，175(9)，2743-2749(1993))，基于该序列可以制备PCR的DNA引物。这样的DNA引物由分别具有序列表SEQ ID NO：8和9中所示的核苷酸序列的23-链节DNA所具体例证。可以以与以上所述的有关lysC的那些相同的方式进行DNA的合成、PCR和包含获得的dapB的质粒的制备。
包含dapB之DNA片段的核苷酸序列和由所述核苷酸序列编码的推断的氨基酸序列在SEQ ID NO：10中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：11中显示。除编码这种氨基酸序列的DNA片段之外，如果对DDPR活性实质上没有影响，本发明可以等同地使用编码实质上与SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列相同的氨基酸序列(即具有基于例如取代、缺失或插入一个或多个氨基酸之突变的氨基酸序列)的DNA片段。可以用与编码具有突变(只要对AK活性实质上没有影响和对L-赖氨酸和L-苏氨酸的协同反馈抑制的脱敏没有影响)的AK的DNA的那些相同的方式获得具有自发和人工突变的dapB。
基于布达佩斯条约，通过将包含以下实施例中所获得的dapB的质粒pCRDAPB引入到大肠杆菌JM109菌株中获得的转化菌株AJ13107已从1995年5月26日以保藏号FERM BP-5114国际保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)。(3)dapA的制备
可以借助PCR从棒状杆菌的染色体制备包含dapA的DNA片段。对DNA供体没有特别的限制，然而，由乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株所例证。
对乳发酵短杆菌编码DDPS的DNA序列是已知的(参见核酸研究，18(21)，6421，(1990)；EMBL保藏号X53993)，基于该序列可以制备PCR的DNA引物。这样的DNA引物由分别具有序列表SEQ ID NO：12和13中所示的核苷酸序列的23-链节DNA所具体例证。可以以与以上所述的有关lysC的那些相同的方式进行DNA的合成、PCR和包含获得的dapA的质粒的制备。
包含dapA和从核苷酸序列推断的氨基酸序列之DNA片段的核苷酸序列在SEQ ID NO：14中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：15中显示。除编码这种氨基酸序列的DNA片段之外，如果对DDPS活性实质上没有影响，本发明可以等同地使用编码实质上与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列相同的氨基酸序列(即具有基于例如取代、缺失或插入一个或多个氨基酸之突变的氨基酸序列)的DNA片段。可以用与编码具有突变(只要对AK活性实质上没有影响和对L-赖氨酸和L-苏氨酸的协同反馈抑制的脱敏没有影响)的AK的DNA的那些相同的方式获得具有自发和人工突变的dapA。
基于布达佩斯条约，通过将包含以下实施例中所获得的dapA的质粒pCRDAPA引入到大肠杆菌JM109菌株中获得的转化菌株AJ13106已从1995年5月26日以保藏号FERM BP-5113国际保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)。(4)lysA的制备
可以借助PCR从棒状杆菌的染色体制备包含lysA的DNA片段。对DNA供体没有特别的限制，然而，由乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株所例证。
在棒状杆菌中，lysA与argS一道形成操纵子(精氨酰-tRNA合酶基因)，lysA存在于argS下游。lysA的表达由存在于argS上游的启动子调节(参见生物技术杂志，Nov.，7356-7362(1993))。谷氨酸棒杆菌的这些基因的DNA序列是已知的(参见分子微生物学，4(11)，1819-1830(1990)；分子和普通遗传学，212，112-119(1988))，基于该序列可以制备PCR的DNA引物。这样的DNA引物由分别具有序列表SEQ ID NO：16(相应于在分子微生物学4(11)，1819-1830(1990)中描述的核苷酸序列中的11至33位核苷酸)和SEQ ID NO：17(相应于在分子和普通遗传学，212，112-119(1988)中描述的核苷酸序列中的1370至1392位核苷酸)中所示的核苷酸序列的23-链节DNA所具体例证。可以以与以上所述的有关lysC的那些相同的方式进行DNA的合成、PCR和包含获得的lysA的质粒的制备。
在以下描述的实施例中，包含启动子、argS和lysA的DNA片段用来增强lysA。然而，argS对本发明不是必要的。其允许使用在其中lysA就连接在启动子下游的DNA片段。
包含argS和lysA以及由核苷酸序列编码的推断的氨基酸序列的DNA片段的核苷酸序列在SEQ ID NO：18中例证。由argS编码的氨基酸序列的实例在SEQ ID NO：19中显示，由lysA编码的氨基酸序列的实例在SEQ ID NO：20中显示。除编码这些氨基酸序列的DNA片段之外，如果对DDC活性实质上没有影响，本发明可以等同地使用编码实质上与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列相同的氨基酸序列(即具有基于例如取代、缺失或插入一个或多个氨基酸之突变的氨基酸序列)的DNA片段。可以用与编码具有突变(只要对AK活性实质上没有影响和对L-赖氨酸和L-苏氨酸的协同反馈抑制的脱敏没有影响)的AK的DNA的那些相同的方式获得具有自发和人工突变的lysA。(5)aspC的制备
通过采用互补于AAT-缺失菌株的营养缺陷性质为指示，可以从微生物(如棒状杆菌和属于埃希氏杆菌属的细菌)染色体制备的基因文库制备包含aspC的DNA片段。对棒状杆菌的DNA供体没有特别的限制，然而，以乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株例证。对属于埃希氏杆菌属的细菌的DNA供体没有特别的限制，然而，以大肠杆菌JM109菌株例证。
具体地说，用于棒状杆菌的aspC制备的方法是已知的(日本专利出版物6-102028)，可以根据这种方法制备aspC。
对大肠杆菌，编码AAT的DNA序列是已知的(Kuramitsu，S等，生物化学杂志，97(4)，1259-1262(1985))，基于该序列可以制备PCR的DNA引物。这样的DNA引物由分别具有序列表SEQ ID NO：21和22中所示的核苷酸序列的20-链节DNA所具体例证。可以以与以上所述的有关lysC的那些相同的方式进行DNA的合成、PCR和包含获得的aspC的质粒的制备。
包含aspC和以及从核苷酸序列推断的氨基酸序列的DNA片段的核苷酸序列在SEQ ID NO：23中说明。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：24中显示。另一包含aspC和以及从核苷酸序列推断的氨基酸序列的DNA片段的核苷酸序列在SEQ ID NO：30中说明。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：31中显示。除编码这些氨基酸序列的DNA片段之外，如果对AAT活性实质上没有影响，本发明可以等同地使用编码实质上与SEQ ID NO：24或31所示的氨基酸序列相同的氨基酸序列(即具有基于例如取代、缺失或插入一个或多个氨基酸之突变的氨基酸序列)的DNA片段。可以用与编码具有突变(只要对AK活性实质上没有影响和对L-赖氨酸和L-苏氨酸的协同反馈抑制的脱敏没有影响)的AK的DNA的那些相同的方式获得具有自发和人工突变的aspC。
按照本发明以下所述的实施例9的方法已首先获得了来源于乳发酵短杆菌的具有SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列的aspC。这样，本发明提供了编码包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列的蛋白质的DNA。所述DNA的例子包括含有SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列中的879至2174位核苷酸DNA。2本发明的重组DNA和棒状杆菌
本发明的棒状杆菌含有天冬氨酸激酶(突变AK)，在其中由L-赖氨酸和L-苏氨酸产生的反馈抑制实质上被脱敏，其中所说的编码二氢二吡啶甲酸还原酶的DNA序列，编码二氢二吡啶甲酸合酶的DNA序列，编码天冬氨酸转氨酶的DNA序列和编码二氨基庚二酸脱羧酶的DNA序列被增强。
术语＂增强＂本文指这一事实：通过例如，增加基因的拷贝数，用强启动子，使用编码具有高比活性的酶的基因或者组合这些方法，由所说DNA编码的酶的胞内活性得到提高。
含有突变AK的棒状杆菌可以是作为突变的结果产生突变天冬氨酸激酶的那些或通过引入突变lysC转化的那些。
用以引入以上所述的DNA棒状杆菌的例子包括，例如，下列赖氨酸-产生野生型菌株：Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870；Corynebacterium acetocrlutamicum ATCC 15806；美棒杆菌ATCC 15991；谷氨酸棒杆菌ATCC 13032；(Brevibacterium divaricatum)ATCC 14020；(乳发酵短杆菌)ATCC 13869；(Corynebacterium lilium)ATCC 15990；(Brevibacterium flavum)ATCC 14067；Corynebacterium melassecola ATCC 17965；Brevibacterium saccharolvticum ATCC 14066；Brevibacterium immariophilum ATCC 14068；Brevibacterium roseum ATCC 13825；Brevibacterium thioaenitalis ATCC 19240；Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354；Corynebacterium thermoaminoaenes AJ12340(FERM BP-1539)
除了以上所述的细菌菌株外，其他可用的宿主包括，例如，来源于以上所述菌株的具有L-赖氨酸-产生能力的突变菌株。这样的的人工突变菌株包括如下菌株：(2-氨乙基)-半胱氨酸(在下文中简称为＂AEC＂)抗性突变菌株，如乳发酵短杆菌AJ11082(NRRL B-1147)，日本专利出版物56-1914、56-1915、57-14157、57-14158、57-30474、58-10075、594993、61-35840、62-24074、62-36673、5-11958、7-112437和7-112438)；突变菌株，其生长需要氨基酸(如L-高丝氨酸)的突变菌株(日本专利出版物48-28078和56-6499)；显示出对AEC的抗性并需要氨基酸如L-亮氨酸、L-高丝氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸和L-缬氨酸的突变菌株(美国专利3,708,395和3,825,472)；显示出对DL-α-氨基-ε-己内酰胺、α-氨基-月桂内酰胺、天冬氨酸-类似物、磺胺类药、醌型和N-月桂酰亮氨酸抗性的L-赖氨酸-产生突变菌株；显示出对oxyaloacetate脱羧酶抑制剂或呼吸系统酶抗性的L-赖氨酸-产生突变菌株(日本专利申请公开50-53588、50-31093、52-102498、53-9394、53-86089、55-9783、55-9759、56-32995和56-39778，以及日本专利出版物53-43591和53-1833)；需要肌醇或醋酸的L-赖氨酸-产生突变菌株(日本专利申请55-9784和56-8692)；对氟丙酮酸或不低于34℃的温度表现出敏感性的L-赖氨酸-产生突变菌株(日本专利申请公开55-9783和53-86090)；属于短杆菌属或棒杆菌属的表现出对乙二醇抗性并产生L-赖氨酸的产生突变菌株(美国专利4,411,997)。
在一个特定的实施方案中，为了如上所述在宿主中增强L-赖氨酸生物合成基因，通过采用质粒载体、转座子或噬菌体载体或类似物将所述基因引入到宿主中。一旦引入，就预期会有某种程度的增强，即使使用低拷贝型载体。然而，优选地是采用多拷贝型载体。这样载体包括，例如以上所述的质粒载体，pAJ655、pAJ1844、pAJG11、pAJ3148和pAJ440。此外，在以下文献中描述了来源于棒状杆菌的转座子：国际出版物W002/02627和W093/18151，欧洲专利出版物445385，日本专利申请公开6-46867；Vertes，A.A.等，分子微生物学，11,739-746(1994)，；Bonamy，C.，等，分子微生物学，14,571-581(1994)；Vertes，A.A.等，Mel.Gen.Genet.，245,397-405(1994)；Jagar，W.等，FEMS微生物学通讯，126，1-6(1995)，日本专利申请公开7-107976；日本专利申请公开7-327680等。
在本发明中，不可缺少的是突变lysC必需被增强。允许使用在染色体DNA上的lysC的突变的那些或者其中突变lysC掺入到染色体DNA中从那些。另外，突变lysC可以通过用质粒载体引入。另一方面，为了有效地产生L-赖氨酸，优选地是增强dapA、dapB、lysA和aspC。
通过分别采用不同的载体，可以成功地将lysC、dapA、dapB、lysA和aspC各基因引入宿主中。另外，可以用单一载体将二、三、四或五种基因一起引入。当使用不同的载体时，基因可以以任何秩序引入，然而，优选地使用这样一些载体，它们具有在宿主细胞中的稳定参与和隐藏机制，并且能够相互共存。
特别是，用于把aspC引入棒状杆菌的载体优选地是载体pVK7。载体pVK7是本发明提供的棒状杆菌的克隆载体，其是在大肠杆菌和乳发酵短杆菌的细胞中可自主复制的，包含一个多克隆位点和lacZ’。载体pVK7可以按照以下实施例8所描述的方法构建。
通过例如向宿主棒状杆菌引入在棒状杆菌细胞中可自主复制的包含突变lysC和dapB、dapA、lysA和aspC的重组DNA，获得含有突变AK并包含增强的dapB、dapA、lysA和aspC的棒状杆菌。
可以通过例如把以上所述的参与L-赖氨酸生物合成的各基因插入到载体(如质粒载体，转座子或噬菌体载体)中获得上述重组DNA。
在其中质粒用作载体情况下，按照电脉冲方法(Sugimoto等，日本专利申请公开2207791)可以将重组DNA引入宿主。用转座子的基因扩增可以通过引入质粒进行，该质粒把转座子携带至宿主细胞，并诱导转座子转座。
在用于本发明的棒状杆菌中，除了以上提到的基因外，参与L-赖氨酸生物合成的基因(如编码磷酸烯醇丙酮酸羧酶的DNA序列和编码二氨基庚二酸脱氢酶的DNA序列)也可以增强。3用于产生L-赖氨酸的方法
通过在合适的培养基中培养棒状杆菌(包含如上所述的L-赖氨酸生物合成的增强的基因)，使得L-赖氨酸在细菌培养物中产生和积累，并从培养物收集L-赖氨酸，由此可以有效地产生L-赖氨酸。
所用的培养基的例举性例子是包含碳源、氮源、无机离子和可有可无的其它有机组分的普通培养基。
作为碳源，可以用食糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、糖蜜和淀粉水解物；和有机酸，如富马酸、柠檬酸和琥珀酸。
作为氮源，可以用无机铵盐，如硫酸铵、氯化铵和磷酸铵；有机氮，如大豆水解物；氨气和氨水。
作为有机微量营养源，以合适的量包含所需物质(如维生素B1和L-高丝氨酸或酵母提取物等)是合乎需要的。此外，如果需要，少量添加磷酸钾、硫酸镁、铁离子、锰离子等。
培养优选地在需氧条件下进行大约30至90小时。在培养期间培养温度优选地控制在25℃到37℃，pH优选地控制在5至8。无机或有机，酸性或碱性物质或氨气等可以用于调节pH。可以用普通的离子交换树脂法、沉淀法和其它已知方法结合起来从培养物收集赖氨酸。
实施例
以下参照实施例更详细地解释本发明。实施例1：从乳发酵短杆菌制备野生型lysC基因和突变lysC基因1制备野生型和突变lysC和制备含有它们的质粒
将乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株和通过突变处理从ATCC 13869菌株获得的L-赖氨酸-产生突变菌株AJ3445(FERM P-1944)用作染色体DNA供体。AJ3445菌株已经历突变，使lysC改变得实质上脱敏了由赖氨酸和苏氨酸产生的协同抑制(生物化学杂志，68,701-710(1970))。
用PCR法(聚合酶链反应；参见White，T.J.等，Trends Genet，5,185(1989))从染色体DNA扩增包含lysC的DNA片段，就用于扩增的DNA引物而言，为了扩增编码lysC的1,643bp的区，基于谷氨酸棒杆菌已知的序列(参见分子微生物学(1991)，5(5)，1197-1204；和Mel.Gen.Genet(1990)，224,317-324)合成23链节和21链节(具有SEQ ID NO：1和2所示的核苷酸序列)的单链DNA序列。经Applied Biosystems生产的DNA合成仪380B型用普通方法和用phosphoamidite法(参见Tetrahedron Letters(1981)，22，1859)合成DNA。
通过用Takara Shuzo生产的DNA热循环仪PJ2000型按照供给者指定的方法和用尾端DNA聚合酶经PCR扩增所说的基因。由琼脂糖凝胶电泳确认1,643kb的扩增的基因片段。之后，用普通的方法纯化从凝胶上切下的片段，用限制酶NruI(由Takara Shuzo生产)和EcoRI(由Takara Shuzo生产)消化该片段。
将pHSG399(参见，S等，基因(1987)，61 63-74)用作基因片段的克隆载体。用限制酶SmaI(由Takara Shuzo生产)和EcoRI消化pHSG399，将其与扩增的lysC片段连接。按照指定的方法用DNA连接试剂盒(由Takara Shuzo生产)连接DNA。由此制备质粒，其中从乳发酵短杆菌染色体扩增的lysC片段分别与pHSG399连接。包含ATCC 13869(野生型菌株)lysC的质粒命名为p399AKY，包含AJ3463(L-赖氨酸-产生菌)lysC的质粒命名为p399AK9
将具有使细菌在属于棒杆菌属的细菌中可自主复制能力的DNA片段(在下文中称为“Brevi.-ori”)分别引入到p399AKY和p399AK9中，以制备携带有lysC的在属于棒杆菌属的细菌中可自主复制的质粒。从包含Brevi.-ori并且在大肠杆菌和属于棒杆菌属的细菌两种细胞中可自主复制的质粒载体pHK4制备Brevi.-ori。pHK4通过以下方法构建pHK4：用KpnI(由Takara Shuzo生产)和BamHI(由Takara Shuzo生产)消化pHC4，提取Brevi.-ori片段，与pHSG298(也已由KprI和BamHI消化)连接(参见日本专利申请公开5-7491)。pHK4使宿主具有卡那霉素抗性。含有pHK4的大肠杆菌称命名为大肠杆菌AJ13136，该菌株已于1995年8月1日以保藏号FERM BP-5186保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)。
用限制酶KpnI和BamHI消化pHK4，使切开的末端平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化BamHI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经BamHI消化从pHK4切下。用BamHI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p399AKY和p399AK9(也已分别用BamHI消化)连接，以制备各自含有在属于棒杆菌属的细菌中可自主复制的lysC基因的质粒。
包含源于p399AKY的野生型lysC基因的质粒命名为p399AKYB，包含源于p399AK9的突变lysC基因的质粒命名为p399AK9B。p399AK9B和p399AKYB的构建方法在图1中显示。通过把突变lysC质粒p399AK9B引入乳发酵短杆菌野生型菌株所获得的菌株AJ12691(AJ12036菌株，FERM 734)已于1992年4月10日以保藏号FERM P-12918保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)，基于布达佩斯条约于1995年2月10日转变成国际保藏，以保藏号FERM BP-4999保藏。2测定乳发酵短杆菌野生型lysC和突变lysC的核苷酸序列
从各自的转化体制备包含野生型lysC的质粒p399AKY和包含突变lysC的质粒p399AK9，以测定野生型与突变lysC的核苷酸序列。核苷酸序列测定按照Sanger等(例如F.Sanger等，美国科学院学报，74，5463(1977))的方法进行。
由p399AKY编码的野生型lysC的核苷酸序列在序列表SEQ ID NO：3中显示。另一方面，由p399AK9编码的突变lysC的核苷酸序列仅具有一个核苷酸突变，这样与野生型lysC比较，在SEQ ID NO：3中的1051位G改变成A。已知谷氨酸棒杆菌的lysC有两个在同一DNA链上的同一读框中编码的亚单位(α，β)(参见，Kalinowski，J.等，分子微生物学(1991)5(5)，1197-1204)。从同源性判断，假定此处测序的基因也具有两个在同一DNA链上的同一读框中编码的亚单位(α，β)。
从DNA的核苷酸序列推断的野生型AK蛋白质α-亚单位的氨基酸序列与DNA序列一起在SEQ ID NO：4中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：5中显示。从DNA的核苷酸序列推断的野生型AK蛋白质β-亚单位的氨基酸序列与DNA序列一起在SEQ ID NO：6中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：7中显示。在每一亚单位中，GTG用作起始密码子，相应的氨基酸由甲硫氨酸代表。然而，这种代表指甲硫氨酸、缬氨酸或甲酰甲硫氨酸。
另一方面，在突变lysC序列上的突变指出现氨基酸残基取代，以便在野生型AK蛋白质氨基酸序列中α-亚单位的279位丙氨酸残基改变成为苏氨酸残基，β-亚单位的30位丙氨酸残基改变成为苏氨酸残基(SEQ ID NO：5、7)。实施例2：从短杆菌属制备dapB1制备dapB和构建含有dapB的质粒
乳发酵短杆菌野生型菌株ATCC 13869用作染色体DNA供体。按照普通方法从ATCC 13869菌株制备染色体DNA。按照PCR从染色体DNA扩增包含dapB的DNA片段。就用于扩增的DNA引物而言，为了扩增编码DDPR的2.0kb的区，基于乳发酵短杆菌已知的序列(参见细菌学杂志，175(9)，2743-2749(1993))分别合成23链节(分别具有序列表中SEQ ID NO：8和9所示的核苷酸序列)的DNA，DNA合成和PCR以与实施例1所描述的相同的方式进行。将pCR-Script(由Invitrogen生产)用作扩增2,001bp的基因片段的克隆载体，将其与扩增的dapB片段连接。由此构建质粒，其中从乳发酵短杆菌染色体扩增的2,001bp dapB片段与pCR-Script连接。具有源于ATCC13869的dapB的如上所述获得的质粒命名为pCRDAPB。基于布达佩斯条约，通过把pCRDAPB引入大肠杆菌JM109菌株获得的转化菌株AJ13107已从1995年5月26日以保藏号FERMBP-5114国际保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)。
通过以EcoRV和SphI消化pCRDAPB提取包含DDPR结构基因的1,101bp片段。将这一片段与pHSG399(已由HincII和SghI消化)以制备质粒。该制备的质粒命名为p399DPR。
将Brevi.-ori引入到制备的p399DPR中以构建在棒状杆菌中可自主复制的携带dapB的质粒。用限制酶KpnI(由Takara Shuzo生产)消化pHK4，使切开的末端平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化BamHI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经BamHI消化从pHK4切下。用BamHI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p399DPR(也已用BamHI消化)连接，以制备含有在棒状杆菌中可自主复制的dapB基因的质粒。所制备的质粒命名为pDPRB。pDPRB的构建方法在图2中显示。2测定乳发酵短杆菌dapB的核苷酸序列
从含有p399DPR的AJ13107菌株制备质粒DNA，以与实施例1中描述的相同的方式测定其核苷酸序列。
所测定的核苷酸序列和从该核苷酸序列推断的氨基酸序列在SEQ ID NO：10中显示，单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：11中显示。实施例3：从短杆菌属制备dapA1制备dapA和构建含有dapA的质粒
乳发酵短杆菌野生型菌株ATCC 13869用作染色体DNA供体。按照普通方法从ATCC 13869菌株制备染色体DNA。按照PCR从染色体DNA扩增包含dapA的DNA片段。就用于扩增的DNA引物而言，为了扩增编码DDPS的1.5kb的区，基于谷氨酸棒杆菌已知的序列(核酸研究，18(21)，6421(1990)；EMBL保藏号X53993)合成23链节的分别具有序列表中SEQ ID NO：12和13所示的核苷酸序列的DNA，DNA合成和PCR以与实施例1所描述的相同的方式进行。将pCR-1000(由Invitrogen生产，参见生物技术，9,657-663(1991))用作扩增1,411bp的基因片段的克隆载体，将其与扩增的dapA片段连接。DNA的连接按照指定的方法用DNA连接试剂盒进行。由此构建质粒，其中从乳发酵短杆菌染色体扩增的1,411bp dapA片段与pCR-1000连接。具有源于ATCC13869的dapA的如上所述获得的质粒命名为pCRDAPA。基于布达佩斯条约，通过把pCRDAPA引入大肠杆菌JM109菌株获得的转化菌株AJ13106已从1995年5月26日以保藏号FERM BP-5113国际保藏在国际贸易和工业部工业科学和技术机构的国立生命科学和人体技术研究所(1-3，Higashi L-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，日本)。
将Brevi.-ori引入到制备的pCRDAPA中以构建在棒状杆菌中可自主复制的携带dapA的质粒。用限制酶KpnI和BamHI(由Takara Shuzo生产)消化pHK4，使切开的末端平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化SmaI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经SmaI消化从pHK4切下。用SmaI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与pCRDAPA(也已用SmaI消化)连接，以制备含有在棒状杆菌中可自主复制的dapA基因的质粒。所制备的质粒命名为pDPSB。pDPSB(Kmr)的构建方法在图3中显示。2测定乳发酵短杆菌dapA的核苷酸序列
从含有pCRDAPA的AJ13107菌株制备质粒DNA，以与实施例1中描述的相同的方式测定其核苷酸序列。所测定的核苷酸序列和从该核苷酸序列推断的氨基酸序列在SEQ ID NO：14中显示，单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：15中显示。实施例4：从短杆菌属制备lysA1制备lysA和构建含有lysA的质粒
乳发酵短杆菌野生型菌株ATCC 13869用作染色体DNA供体。按照普通方法从ATCC 13869菌株制备染色体DNA。按照PCR从染色体DNA扩增包含argS、lysA和操纵子的启动子的DNA片段。就用于扩增的DNA引物而言，为了扩增编码精氨酰-tRNA合酶和DDC的3.6kb的区，基于谷氨酸棒杆菌已知的序列(参见分子微生物学，4(11)，1819-1830(1990)；分子和普通遗传学，212，112-119(1988))，使用23链节(分别具有序列表中SEQ ID NO：16和17所示的核苷酸序列)的合成DNA，DNA合成和PCR以与实施例1所描述的相同的方式进行。将pHSG399用作扩增3,579bp的基因片段的克隆载体，用限制酶SmaI(由Takara Shuzo生产)消化pHSG399，该质粒与包含扩增的lysA的DNA片段连接。具有源于ATCC13869的lysA的如上所述获得的质粒命名为p399LYSA。
通过以KpnI(由Takara Shuzo生产)和BamHI(由Takara Shuzo生产)消化p399LYSA提取包含lysA的DNA片段。将这一片段与pHSG299(已由KpnI和BamHI消化)。构建p399LYSA的方法在图4中显示。
将Brevi.-ori引入到制备的p399LYSA中以构建在棒状杆菌中可自主复制的携带lysA的质粒。用限制酶KpnI和BamHI消化pHK4，使切开的末端平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化KpnI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经KpnI消化从pHK4切下。用KpnI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p299LYSA(也已用KpnI消化)连接，以制备含有在棒状杆菌中可自主复制的lysA基因的质粒。所制备的质粒命名为pLYSAB。pLYSAB的构建方法在图5中显示。2测定乳发酵短杆菌lysA的核苷酸序列
制备质粒p299LYSA的DNA，以与实施例1中描述的相同的方式测定其核苷酸序列。所测定的核苷酸序列和从该核苷酸序列推断的氨基酸序列在SEQID NO：18中显示，有关核苷酸序列，由lysA编码的氨基酸序列和由argS编码的氨基酸序列分别在SEQ ID NO：19和20中显示。实施例5：从大肠杆菌制备aspC和构建含有aspC的质粒
大肠杆菌JM109菌株用作染色体DNA的供体。按照普通方法从大肠杆菌JM109菌株制备染色体DNA。按照PCR从染色体DNA扩增包含aspC的DNA片段。就用于扩增DNA引物而言，基于大肠杆菌已知的序列(参见Kuramitsu，S等，生物化学杂志，94(4)，1259-1262(1985))，使用20链节(分别具有序列表中SEQ ID NO：21和22所示的核苷酸序列)的合成DNA，DNA合成和PCR以与实施例1所描述的相同的方式进行。将1,331bp的扩增片段克隆进TA克隆载体pCR1000。所构建的质粒命名为pCRASPC。
包含aspC的扩增DNA的核苷酸序列和从该核苷酸序列推断的氨基酸序列在SEQ ID NO：23中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：24中显示。比较实施例1：构建包含组合的突变lysC和dapA的质粒
从包含dapA的质粒pCRDAPA和包含突变lysC和Brevi.-ori的质粒p399AK9B构建包含突变lysC、dapA和棒状杆菌复制源的质粒。以SalI完全消化p399AK9B，然后平端化，并与EcoRI接头连接，以构建其中SalI位点修饰成EcoRI位点的质粒。所获得的质粒命名为p399AK9BSE。通过以EcoRI部分消化p399AK9BSE作为一个片段切下突变lysC和Brevi.-ori。将这一片段与已用EcoRI消化的pCRDAPA连接。所获得的质粒命名为pCRCAB。这一质粒在大肠杆菌和棒状杆菌中可自主复制，其使宿主具有对卡那霉素的抗性，该质粒包含组合的突变lysC和dapA。pRCAB的构建方法在图6中显示。比较实施例2：构建包含组合的突变lysC和dapB的质粒
从具有突变lysC的质粒p399AK9和具有dapB的质粒p399DPR构建包含突变lysC和dapB的质粒。通过以EcoRV和SphI消化p399DPR提取包含DDPR结构基因的1,101bp的片段。将这一片段与已用SalI消化，然后平端化，并进一步由SphI消化的p399AK9连接，以构建包含组合的突变lysC和dapB的质粒。这一质粒命名为p399AKDDPR。
其次，将Brevi.-ori引入所获得的p399AKDDPR。以限制酶KpnI(由TakaraShuzo生产)消化包含Brevi.-ori的质粒pHK4，使切下的边缘平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化BamHI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经BamHI消化从pHK4切下。用BamHI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p399AKDDPR(也已用BamHI消化)连接，以构建在棒状杆菌中可自主复制的含有突变lysC和dapB的质粒。构建的质粒命名为pCB。pCB的构建方法在图7中显示。比较实施例3：构建包含组合的dapA和dapB的质粒
用KpnI和EcoRI消化包含dapA的质粒pCRDAPA，以提取包含dapA的DNA片段，将其与已用KpnI和EcoRI消化的载体质粒pHSG399连接。所获得的质粒命名为p399DPS。
另一方面，以SacII和EcoRI消化包含dapB的质粒pCRDAPB，以提取包含编码DDPR区的2.0kb的DNA片段，将其与已用SacH和EcoRI消化的p399DPS连接，以构建包含组合的dapA和dapB的质粒。所获得的质粒命名为p399AB。
其次，将Brevi.-ori引入p399AB。以限制酶BamHI(由Takara Shuzo生产)消化包含Brevi.-ori的质粒pHK4，使切下的边缘平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化KpnI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经KpnI消化从pHK4切下。用KpnI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p399AB(也已用KpnI消化)连接，以构建在棒状杆菌中可自主复制的含有突变dapA和dapB的质粒。构建的质粒命名为pAB。pAB的构建方法在图8中显示。实施例6：构建包含组合的突变lysC、dapA和dapB的质粒
以EcoRI和SphI消化p399DPS，平端化，其后提取dapA基因片段。将这一片段与已用SalI消化并平端化的p399AK9连接。以构建其中突变lysC和dapA共存的质粒p399CA。
用EcoRI消化包含dapB的质粒pCRDAPB，平端化，接着用SacI消化，以抽提包含dapB的2.0kb的DNA片段。用SpeI消化包含dapA和突变lysC的质粒p399CA，平端化，之后用SacI消化，并与抽提的dapB片段连接，以便获得包含突变lysC、dapA和dapB的质粒。这一质粒命名为p399CAB。
其次，将Brevi.-ori引入p399CAB。以限制酶BamHI(由Takara Shuzo生产)消化包含Brevi.-ori的质粒pHK4，使切下的边缘平端化。按照指定的方法用平端化试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行平端的形成。形成平端后，连接上磷酸化KpnI接头(由Takara Shuzo生产)进行修饰，使相应于Brevi.-ori部分的DNA片段可以仅经KpnI消化从pHK4切下。用KpnI消化这一质粒，将所产生的Brevi.-ori DNA片段与p399CAB(也已用KpnI消化)连接，以构建在棒状杆菌中可自主复制的含有突变lysA、dapA和dapB的质粒。构建的质粒命名为pCAB。pCAB的构建方法在图9中显示。实施例7：构建包含组合的突变lysC、dapA、dapB和lysA的质粒
用KpnI和BamHI消化包含lysA的质粒p299LYSA，平端化，然后提取lysA基因片段。将这一片段与已用HpaI(由Takara Shuzo生产)消化并平端化的质粒pCAB连接，以构建包含组合的突变lysC、dapA、dapB和lysA的并且在棒状杆菌中可自主复制的质粒。构建的质粒命名为pCABL。pCABL的构建方法在图10中显示。值得注意的是，在pCABL中lysA基因片段以包含dapB基因的DNA片段插入到HpaI位点中，然而，HpaI位点位于dapB基因(SEQIDNO：10中611至616位核苷酸)启动子上游，dapB基因不被分离。实施例8：构建包含aspC的质粒
作为用于把aspC引入棒状杆菌的载体，使用新构建的棒状杆菌的克隆载体pVK7。如以下描述通过将大肠杆菌的载体pFHSG299(Kmr；Takeshita，S.等，基因，61，63-74(1987))与乳发酵短杆菌的隐蔽性质粒pAM330构建pVK7。从乳发酵短杆菌ATCC 13869菌株制备pAM330。以形成一个切割位点的限制酶AvaII(由Takara Shuzo生产)消化pHSG299，用T4 DNA聚合酶平端化，并与已用HindIII(由Takara Shuzo生产)消化和用T4 DNA聚合酶平端化的pAM330连接。根据在pHSG299中所插入的pAM330的方向，两个获得的质粒命名为pVK6和pVK7，pVK7用于下列实验中。pVK7是在大肠杆菌和乳发酵短杆菌两者中可自主复制的，并且具有来源于pHSG299和lacZ’的多克隆位点。pVKG和pVK7的构建方法在图11中显示。
将aspC与构建的穿梭载体pVK7连接。以限制酶EcoRI(由Takara Shuzo生产)消化pCRASPC，并与已用EcoRI消化的pVK7连接。用DNA连接试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行DNA的连接。在其中aspC片段与pVK7连接的哪些中，其中所述片段以与pVK7所具有的lac启动子的转录方向相同的方向插入的一个命名为pOm。pOm的构建方法在图12中显示。实施例9：从短杆菌属制备aspC1制备源于乳发酵短杆菌的aspC
属于棒杆菌属的天冬氨酸营养缺陷菌株缺乏aspC活性(AAT活性)，是天冬氨酸营养缺陷的(I.Shiio和K.Ujikawa，生物化学杂志，84，647(1978))，通过引入基因文库(国际出版物WO 95/23224)转化该菌株，所述文库是经将乳发酵短杆菌野生型ATCC 13869菌株的染色体DNA的各种片段与在属于棒杆菌属的细菌细胞中起作用的载体连接制备的。收集所获得的转化体，以蒸馏水洗涤两次。将几千个转化体中的几十个平板接种到最小培养基(不含有非氨氮源的培养基10(I.Shiio和K.Ujikawa，生物化学杂志84，647(1978)))琼脂平板上，以获得恢复天冬氨酸营养缺陷和在平板上显示出极好的生长的转化体。从获得的恢复天冬氨酸营养缺陷的菌株回收质粒DNA，所获得的质粒命名为pAC。当乳发酵短杆菌野生型ATCC 13869菌株用pAC转化时，转化体的aspC活性增加(第1表)。按照已知方法(参见Sizer，I.W.和Jenkins，W.T.，酶学方法vol.5，677-679(1962))进行活性测定。
从这些结果可以证实，在质粒DNA上，ATCC 13869菌株染色体DNA的大约2.5kb片段包含乳发酵短杆菌的aspC。
表    1
菌株/质粒          aspC活性(相对值)
ATCC13869          1.0
ATCC13869/pCABL    8.92分析来源于乳发酵短杆菌的aspC
根据Sangar等的双脱氧方法(美国科学院学报，74，5463(1977))测定2.5kb DNA片段的核苷酸序列，测定的核苷酸序列在SEQ ID NO：25中显示。用GENETYX-MAC版本7.3个程序(软件Kaihatsu KK)分析核苷酸序列。ORF(开放读框)研究显示如图13中所示的两个以相反方向重叠的ORF。432个氨基酸或426个氨基酸的ORF(其在SEQ ID NO：25所示的核苷酸序列中在作为起始密码子的579至881或897至899位核苷酸的ATG和作为终止密码子的2175至2177位核苷酸的TAG之间以正方向被编码)命名为ORF1。393个氨基酸的ORF(其在SEQ ID NO：25所示的核苷酸序列中在作为起始密码子的互补于2163至2165核苷酸的CAC的GTG和作为终止密码子的2163至2165位核苷酸的CAC之间以反方向被编码)命名为ORF2。3测定编码aspC的ORF
经PCR从pAC扩增不包含全长ORF2和编码全长ORF1的DNA片段，以证实在两个ORF中ORF是否编码AAT蛋白质。就用于扩增的DNA引物而言，基于SEQ ID NO：25所示的序列分别使用具有SEQ ID NO：26和27所示的核苷酸序列的23-链节合成DNA。DNA合成和PCR以与实施例1中描述的相同的方式进行。将在SEQ ID NO：25中所示的核苷酸序列中的126至2,187位核苷酸的2,062bp扩增片段克隆进TA克隆载体pCR2.1(由Invitrogen产生)。所构建的质粒命名为pCRORF1。
按相同的方式，扩增和克隆SEQ ID NO：25中所示的核苷酸序列中的975至2,517位核苷酸的1,543bp基因片段，其仅编码全长ORF2。构建的质粒命名为pCRORF2。
为了将克隆DNA片段引入到属于棒杆菌属的细菌细胞中，将所述DNA片段与实施例8中所描述的穿梭载体连接。以限制酶EcoRI(由Takara Shuzo生产)消化pCRORF1，与已用限制酶EcoRI消化的pVK7连接。用DNA连接试剂盒(由Takara Shuzo生产)进行DNA的连接。构建的质粒命名为pORF1。pORF1的构建方法在图14中显示。
按相同的方式，从pCRORF2和pVK7构建pORF2。
以与实施例9中相同的方式将制备的pORF1和pORF2引入乳发酵短杆菌野生型ATCC 13869菌株细胞中。测定ATCC 13869和质粒-引入菌株ATCC13869/pORF1和ATCC 13869/pORF2的aspC活性。活性测定以与实施例1中描述的相同的方式进行。如表2所示，仅ATCC 13869/pORF1观察到aspC活性增加，表明aspC由ORF1编码。
由以上提到的实验测定的乳发酵短杆菌aspC的核苷酸序列和由该核苷酸序列编码的推断的氨基酸序列在SEQ ID NO：30中显示。单独的氨基酸序列在SEQ ID NO：31中显示。在GENEBANK上的同源性检索显示与来源于其它有机体的已知氨基酸序列(包括AAT蛋白质)无同源性。
表    2
菌株/质粒          aspC活性(相对值)
ATTC13869          1.0
ATTC13869/pORF1    10.1
ATTC13869/pORF2    1.2实施例10：将包含L-赖氨酸生物合成基因的质粒引入到乳发酵短杆菌L-赖氨酸-产生菌中
将在实施例7中构建的pCABL(Cmr)引入乳发酵短杆菌L-赖氨酸-产生菌AJ11082(NRRL B-11470)中。AJ11082菌株具有AEC抗性。按照电脉冲方法引入质粒(Sugimoto等，日本专利申请公开2-207791)，基于质粒具有的药物抗性标记选择转化体，当包含氯霉素抗性基因的质粒被引入时，在包含5μg/ml氯霉素完全培养基上选择转化体，当包含卡那霉素抗性基因的质粒被引入时，在包含25μg/ml卡那霉素完全培养基上选择转化体。
用具有大肠杆菌aspC的质粒pOm(Kmr)或具有乳发酵短杆菌aspC的pORF1(Kmr)转化如上所获得的转化体AJ11082/pCABL。因为在乳发酵短杆菌细胞中pCABL用pHM1519为复制起点，用Cm抗性基因为标记，在乳发酵短杆菌细胞中，pOm用pAM330为复制起点，用Km抗性基因为标记，所以两种质粒都稳定地包含在乳发酵短杆菌细胞中
这样，获得了菌株AJ11082/pCABL/pOm和AJ11082/pCABL/pORF1，其中质粒包含参与L-赖氨酸生物合成的基因和含有aspC。
以与以上所述相同的方式，将p399AK9B(Cmr)、pDPSB(Kmr)、pDPRB(Cmr)、pLYSAB(Cmr)、pOm、pCRCAB(Kmr)、pAB(Cmr)、pCB(Cmr)和pCAB(Cmr)引入AJ11082菌株中，以获得其中lysC、dapA、dapB、lysA或aspC单独被增强或者这些基因的两种或多种同时被增强的转化体。实施例11：测定转化体活性
测定转化体AJ11082/pCABL、AJ11082/pCABL/pOm和AJ11082/pCABL/pORF1的aspC活性。以与实施例9的3中描述的相同的方法进行活性测定。如表3所示，观察到在pOm载体上的lac启动子也在乳发酵短杆菌中起作用，AJ11082/pCABL/pOm的aspC活性增加约三倍，观察到AJ11082/pCABL/pORF1的aspC活性进一步增加约九倍。
表    3
菌株/质粒              aspC活性(相对值)
AJ11082                1.0
AJ11082/pOm            3.2
AJ11082/pORF1          10.1
AJ11082/pCABL          0.9
AJ11082/pCABL/pOm      2.9
AJ11082/pCABL/pORF1    11.5实施例12：L-赖氨酸的产生
在L-赖氨酸-产生培养基中培养实施例10中所获得的各种转化体，以估价L-赖氨酸产量。L-赖氨酸-产生培养基具有下列组成。[L-赖氨酸-产生培养基]
除了碳酸钙外，溶解下列组分(在1升中)，用KOH调节pH为8.0。于115℃灭菌15分钟，将已经以干燥状态在热气流中分别灭菌过的碳酸钙(50g)加入其中。
葡萄糖         100g
(NH4)2SO4  55g
KH2PO4      1g
MgSO4·7H2O 1g
生物素         500μg
硫胺                     2000μg
FeSO4·7H2O            0.01g
MnSO4·7H2O            0.01g
烟酰胺                   5mg
蛋白质水解物(Mamenou)    30ml
碳酸钙                   50g
将各种类型的转化体和亲本菌株接种到具有以上组成的培养基中，以进行在31.5℃下的往复振荡培养。在培养40或72小时和生长72小时(OD562)后产生的L-赖氨酸的量在表4中显示。在表中，lysC*代表突变lysC。通过在10倍稀释后在562nm测量OD定量测定生长。
表    4
                             在40或72小时培养后积累的L-赖氨酸细菌菌株/质粒          引入的基因                          产生的L-赖氨酸量(g/l)  生    长
                                                       40h后   72h后          (OD562/101)AJ 11082                                                   22.0    29.8           0.450AJ 11082/p399AK9B      lysC*                               16.8    34.5           0.398AJ 11082/pDPSB         dapA                                18.7    33.8           0.410AJ 11082/pDPRB         dapB                                19.9    29.9           0.445AJ 11082/pLYSAB        lysA                                19.8    32.5           0.356AJ 11082/pOm           aspC(E)[注1]                        21.8    30.9           0.457AJ 11082/pOm           aspC(B)[注2]                        21.5    31.2           0.450AJ 11082/pCRCAB        lysC*，dapB                         19.7    36.5           0.360AJ 11082/pAB           dapA，dapB                          19.0    34.8           0.390AJ 11082/pCB           lysC*，dapB                         23.3    35.0           0.440AJ 11082/pCAB          lysC*，dapA，dapB                   23.0    45.0           0.425AJ 11082/pCABL         lysC*，dapA，dapB，lysA             26.2    46.5           0.379AJ 11082/pCABL/pOm     lysC*，dapA，dapB，lysA，aspC(E)    26.7    47.6           0.415AJ 11082/pCABL/pORF1   lysC*，dapA，dapB，lysA，aspC(B)    27.1    48.8           0.410注1：大肠杆菌的aspC注2：乳发酵短杆菌的aspC
如上所示，当突变lysC，dapA，dapB，lysA或aspC单独增强时，培养72小时后产生的L-赖氨酸的量大于或等于由亲本菌株产生的量，然而，培养40小时后产生的L-赖氨酸的量低于由亲本菌株产生的量。即，在短的培养时间内，L-赖氨酸-产生速度降低。同样地，当突变lysC和dapA或者dapA和daB一起增强时，培养72小时后产生的L-赖氨酸的量大于由亲本菌株产生的量，然而，培养40小时后产生的L-赖氨酸的量小于由亲本菌株产生的量。这样，L-赖氨酸-产生速度降低。
相反，在其中dapB与突变lysC一道增强的菌株，其中三种突变lysC、dapA和dapB增强的菌株，以及其中四种突变lysC、dapA、dapB和lysA增强的菌株的情况下，在短的和长的培养时间内所积累的L-赖氨酸的量都得到提高。
在其中五种突变lysC，dapA，dapB，lysA和aspC增强的大肠杆菌菌株，以及其中五种突变lysC，dapA，dapB，lysA和aspC增强的乳发酵短杆菌菌株的情况下，在任何培养时间内L-赖氨酸的产量都得到提高。后者提高的程度高于前者。
            序    列    表(1)一般信息：(i)申请人：AJINOMOTO有限公司(ii)发明名称：用于产生L-赖氨酸的方法(iii)序列数：31个(iv)通讯地址：
 (A)收信人：
 (B)街道：
 (C)城市：
 (E)国家：
 (F)ZIP：(v)计算机可读形式：
 (A)介质类型：软盘
 (B)计算机：IBM PC兼容机
 (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
 (D)软件：Patentln Release#，版本#1.30(vi)当前申请的数据：
 (A)申请号：
 (B)申请日：
 (C)分类号：(vii)在先申请的数据：
 (A)申请号：JP 8-325659
 (B)申请日：1996年12月5日(viii)律师/代理人信息：
 (A)姓名：
 (B)登记号：(ix)电信信息：
 (A)电话：
 (B)传真：(2)SEQ ID NO：1的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：23个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
  (A)描述：/desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：TCGAAGTAGCACCTGTCACTT                                                    23(2)SEQ ID NO：2的信息：(i)序列特征：
 (A)长度：21个碱基
 (B)类型：核酸
 (C)链型：单链
 (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
 (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：ACGGAATTCAATCTTACGGCC                                                    21(2)SEQ ID NO：3的信息：(i)序列特征：
 (A)长度：1643个碱基
 (B)类型：核酸
 (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
  (A)有机体：乳发酵短杆菌
  (B)菌株：ATCC 13869(xi)序列描述：  SEQ ID NO：3：TCGCGAAGTA GCACCTGTCA CTTTTGTCTC AAATATTAAA TCGAATATCA ATATACGGTC     60TGTTTATTGG AACGCATCCC AGTGGCTGAG ACGCATCCGC TAAAGCCCCA GGAACCCTGT    120GCAGAAAGAA AACACTCCTC TGGCTAGGTA GACACAGTTT ATAAAGGTAG AGTTGAGCGG    180GTAACTGTCA GCACGTAGAT CGAAAGGTGC ACAAAGGTGG CCCTGGTCGT ACAGAAATAT    240GGCGGTTCCT CGCTTGAGAG TGCGGAACGC ATTAGAAACG TCGCTGAACG GATCGTTGCC    300ACCAAGAAGG CTGGAAATGA TGTCGTGGTT GTCTGCTCCG CAATGGGAGA CACCACGGAT    360GAACTTCTAG AACTTGCAGC GGCAGTGAAT CCCGTTCCGC CAGCTCGTGA AATGGATATG    420CTCCTGACTG CTGGTGAGCG TATTTCTAAC GCTCTCGTCG CCATGGCTAT TGAGTCCCTT    480GGCGCAGAAG CTCAATCTTT CACTGGCTCT CAGGCTGGTG TGCTCACCAC CGAGCGCCAC    540GGAAACGCAC GCATTGTTGA CGTCACACCG GGTCGTGTGC GTGAAGCACT CGATGAGGGC    600AAGATCTGCA TTGTTGCTGG TTTTCAGGGT GTTAATAAAG AAACCCGCGA TGTCACCACG    660TTGGGTCGTG GTGGTTCTGA CACCACTGCA GTTGCGTTGG CAGCTGCTTT GAACGCTGAT    720GTGTGTGAGA TTTACTCGGA CGTTGACGGT GTGTATACCG CTGACCCGCG CATCGTTCCT    780AATGCACAGA AGCTGGAAAA GCTCAGCTTC GAAGAAATGC TGGAACTTGC TGCTGTTGGC    840TCCAAGATTT TGGTGCTGCG CAGTGTTGAA TACGCTCGTG CATTCAATGT GCCACTTCGC    900GTACGCTCGT CTTATAGTAA TGATCCCGGC ACTTTGATTG CCGGCTCTAT GGAGGATATT    960CCTGTGGAAG AAGCAGTCCT TACCGGTGTC GCAACCGACA AGTCCGAAGC CAAAGTAACC   1020GTTCTGGGTA TTTCCGATAA GCCAGGCGAG GCTGCCAAGG TTTTCCGTGC GTTGGCTGAT   1080GCAGAAATCA ACATTGACAT GGTTCTGCAG AACGTCTCCT CTGTGGAAGA CGGCACCACC   1140GACATCACGT TCACCTGCCC TCGCGCTGAC GGACGCCGTG CGATGGAGAT CTTGAAGAAG   1200CTTCAGGTTC AGGGCAACTG GACCAATGTG CTTTACGACG ACCAGGTCGG CAAAGTCTCC   1260CTCGTGGGTG CTGGCATGAA GTCTCACCCA GGTGTTACCG CAGAGTTCAT GGAAGCTCTG   1320CGCGATGTCA ACGTGAACAT CGAATTGATT TCCACCTCTG AGATCCGCAT TTCCGTGCTG   1380ATCCGTGAAG ATGATCTGGA TGCTGCTGCA CGTGCATTGC ATGAGCAGTT CCAGCTGGGC   1440GGCGAAGACG AAGCCGTCGT TTATGCAGGC ACCGGACGCT AAAGTTTTAA AGGAGTAGTT   1500TTACAATGAC CACCATCGCA GTTGTTGGTG CAACCGGCCA GGTCGGCCAG GTTATGCGCA   1560CCCTTTTGGA AGAGCGCAAT TTCCCAGCTG ACACTGTTCG TTTCTTTGCT TCCCCGCGTT   1620CCGCAGGCCG TAAGATTGAA TTC                                           1643(2)SEQ ID NO：4的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：1643个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：基因组DNA
(vi)原始来源：
  (A)有机体：乳发酵短杆菌
  (B)菌株：  ATCC 13869  (ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：217..1482(xi)序列描述：  SEQ ID NO：4：TCGCGAAGTA GCACCTGTCA CTTTTGTCTC AAATATTAAA TCGAATATCA ATATACGGTC     60TGTTTATTGG AACGCATCCC AGTGGCTGAG ACGCATCCGC TAAAGCCCCA GGAACCCTGT    120GCAGAAAGAA AACACTCCTC TGGCTAGGTA GACACAGTTT ATAAAGGTAG AGTTGAGCGG    180GTAACTGTCA GCACGTAGAT CGAAAGGTGC ACAAAG GTG GCC CTG GTC GTA CAG      234
                                    Met Ala Leu Val Val Gln
                                      1               5AAA TAT GGC GGT TCC TCG CTT GAG AGT GCG GAA CGC ATT AGA AAC GTC      282Lys Tyr Gly Gly Ser Ser Leu Glu Ser Ala Glu Arg Ile Arg Asn Val
         10                  15                  20GCT GAA CGG ATC GTT GCC ACC AAG AAG GCT GGA AAT GAT GTC GTG GTT        330Ala Glu Arg Ile Val Ala Thr Lys Lys Ala Gly Asn Asp Val Val Val
     25                  30                  35GTC TGC TCC GCA ATG GGA GAC ACC ACG GAT GAA CTT CTA GAA CTT GCA        378Val Cys Ser Ala Met Gly Asp Thr Thr Asp Glu Leu Leu Glu Leu Ala
 40                  45                  50GCG GCA GTG AAT CCC GTT CCG CCA GCT CGT GAA ATG GAT ATG CTC CTG        426Ala Ala Val Asn Pro Val Pro Pro Ala Arg Glu Met Asp Met Leu Leu55                  60                  65                  70ACT GCT GGT GAG CGT ATT TCT AAC GCT CTC GTC GCC ATG GCT ATT GAG        474Thr Ala Gly Glu Arg Ile Ser Asn Ala Leu Val Ala Met Ala Ile Glu
             75                  80                  85TCC CTT GGC GCA GAA GCT CAA TCT TTC ACT GGC TCT CAG GCT GGT GTG        522Ser Leu Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Thr Gly Ser Gln Ala Gly Val
         90                  95                 100CTC ACC ACC GAG CGC CAC GGA AAC GCA CGC ATT GTT GAC GTC ACA CCG        570Leu Thr Thr Glu Arg His Gly Asn Ala Arg Ile Val Asp Val Thr Pro
    105                 110                 115GGT CGT GTG CGT GAA GCA CTC GAT GAG GGC AAG ATC TGC ATT GTT GCT        618Gly Arg Val Arg Glu Ala Leu Asp Glu Gly Lys Ile Cys Ile Val Ala
120                 125                 130GGT TTT CAG GGT GTT AAT AAA GAA ACC CGC GAT GTC ACC ACG TTG GGT        666Gly Phe Gln Gly Val Asn Lys Glu Thr Arg Asp Val Thr Thr Leu Gly135                 140                 145                 150CGT GGT GGT TCT GAC ACC ACT GCA GTT GCG TTG GCA GCT GCT TTG AAC        714Arg Gly Gly Ser Asp Thr Thr Ala Val Ala Leu Ala Ala Ala Leu Asn
            155                 160                 165GCT GAT GTG TGT GAG ATT TAC TCG GAC GTT GAC GGT GTG TAT ACC GCT        762Ala Asp Val Cys Glu Ile Tyr Ser Asp Val Asp Gly Val Tyr Thr Ala
        170                 175                 180GAC CCG CGC ATC GTT CCT AAT GCA CAG AAG CTG GAA AAG CTC AGC TTC        810Asp Pro Arg Ile Val Pro Asn Ala Gln Lys Leu Glu Lys Leu Ser Phe
    185                 190                 195GAA GAA ATG CTG GAA CTT GCT GCT GTT GGC TCC AAG ATT TTG GTG CTG        858Glu Glu Met Leu Glu Leu Ala Ala Val Gly Ser Lys Ile Leu Val Leu
200                 205                 210CGC AGT GTT GAA TAC GCT CGT GCA TTC AAT GTG CCA CTT CGC GTA CGC        906Arg Ser Val Glu Tyr Ala Arg Ala Phe Asn Val Pro Leu Arg Val Arg215                 220                 225                 230TCG TCT TAT AGT AAT GAT GCC GGC ACT TTG ATT GCC GGC TCT ATG GAG        954Ser Ser Tyr Ser Asn Asp Pro Gly Thr Leu Ile Ala Gly Ser Met Glu
            235                 240                 245GAT ATT CCT GTG GAA GAA GCA GTC CTT ACC GGT GTC GCA ACC GAC AAG       1002Asp Ile Pro Val Glu Glu Ala Val Leu Thr Gly Val Ala Thr Asp Lys
        250                 255                 260TCC GAA GCC AAA GTA ACC GTT CTG GGT ATT TCC GAT AAG CCA GGC GAG       1050Ser Glu Ala Lys Val Thr Val Leu Gly Ile Ser Asp Lys Pro Gly Glu
    265                 270                 275GCT GCC AAG GTT TTC CGT GCG TTG GCT GAT GCA GAA ATC AAC ATT GAC       1098Ala Ala Lys Val Phe Arg Ala Leu Ala Asp Ala Glu Ile Asn Ile Asp
280                 285                 290ATG GTT CTG CAG AAC GTC TCC TCT GTG GAA GAC GGC ACC ACC GAC ATC       1146Met Val Leu Gln Asn Val Ser Ser Val Glu Asp Gly Thr Thr Asp Ile295                 300                 305                 310ACG TTC ACC TGC CCT CGC GCT GAC GGA CGC CGT GCG ATG GAG ATC TTG       1194Thr Phe Thr Cys Pro Arg Ala Asp Gly Arg Arg Ala Met Glu Ile Leu
            315                 320                 325AAG AAG CTT CAG GTT CAG GGC AAC TGG ACC AAT GTG CTT TAC GAC GAC    1242Lys Lys Leu GLn Val GLn Gly Asn Trp Thr Asn Val Leu Tyr Asp Asp
        330                 335                 340CAG GTC GGC AAA GTC TCC CTC GTG GGT GCT GGC ATG AAG TCT CAC CCA    1290Gln Val Gly Lys Val Ser Leu Val Gly Ala Gly Met Lys Ser His Pro
    345                 350                 355GGT GTT ACC GCA GAG TTC ATG GAA GCT CTG CGC GAT GTC AAC GTG AAC    1338Gly Val Thr Ala Glu Phe Met Glu Ala Leu Arg Asp Val Asn Val Asn
360                 365                 370ATC GAA TTG ATT TCC ACC TCT GAG ATC CGC ATT TCC GTG CTG ATC CGT    1386Ile Glu Leu Ile Ser Thr Ser Glu Ile Arg Ile Ser Val Leu Ile Arg375                 380                 385                 390GAA GAT GAT CTG GAT GCT GCT GCA CGT GCA TTG CAT GAG CAG TTC CAG    1434Glu Asp Asp Leu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Leu His Glu Gln Phe Gln
            395                 400                 405CTG GGC GGC GAA GAC GAA GCC GTC GTT TAT GCA GGC ACC GGA CGC TAA    1482Leu Gly Gly Glu Asp Glu Ala Val Val Tyr Ala Gly Thr Gly Arg
        410                 415                 420AGTTTTAAAG GAGTAGTTTT ACAATGACCA CCATCGCAGT TGTTGGTGCA ACCGGCCAGG  1542TCGGCCAGGT TATGCGCACC CTTTTGGAAG AGCGCAATTT CCCAGCTGAC ACTGTTCGTT  1602TCTTTGCTTC CCCGCGTTCC GCAGGCCGTA AGATTGAATT C                      1643(2)SEQ ID NO：5的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：421个氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：Met Ala Leu Val Val Gln Lys Tyr Gly Gly Ser Ser Leu Glu Ser Ala1              5                  10                  15Glu Arg Ile Arg Asn Val Ala Glu Arg Ile Val Ala Thr Lys Lys Ala
         20                  25                  30Gly Asn Asp Val Val Val Val Cys Ser Ala Met Gly Asp Thr Thr Asp
     35                  40                  45Glu Leu Leu Glu Leu Ala Ala Ala Val Asn Pro Val Pro Pro Ala Arg
 50                  55                  60Glu Met Asp Met Leu Leu Thr Ala Gly Glu Arg Ile Ser Asn Ala Leu65                  70                  75                  80Val Ala Met Ala Ile Glu Ser Leu Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Thr
             85                  90                  95Gly Ser Gln Ala Gly Val Leu Thr Thr Glu Arg His Gly Asn Ala Arg
        100                 105                 110Ile Val Asp Val Thr Pro Gly Arg Val Arg Glu Ala Leu Asp Glu Gly
    115                 120                 125Lys Ile Cys Ile Val Ala Gly Phe Gln Gly Val Asn Lys Glu Thr Arg
130                 135                 140Asp Val Thr Thr Leu Gly Arg Gly Gly Ser Asp Thr Thr Ala Val Ala145                 150                 155                 160Leu Ala Ala Ala Leu Asn Ala Asp Val Cys Glu Ile Tyr Ser Asp Val
            165                 170                 175Asp Gly Val Tyr Thr Ala Asp Pro Arg Ile Val Pro Asn Ala Gln Tys
        180                 185                 190Leu Glu Lys Leu Ser Phe Glu Glu Met Leu Glu Leu Ala Ala Val Gly
    195                 200                 205Ser Lys Ile Leu Val Leu Arg Ser Val Glu Tyr Ala Arg Ala Phe Asn
210                 215                 220Val Pro Leu Arg Val Arg Ser Ser Tyr Ser Asn Asp Pro Gly Thr Leu225                 230                 235                 240Ile Ala Gly Ser Met Glu Asp Ile Pro Val Glu Glu Ala Val Leu Thr
            245                 250                 255Gly Val Ala Thr Asp Lys Ser Glu Ala Lys Val Thr Val Leu Gly Ile
        260                 265                 270Ser Asp Lys Pro Gly Glu Ala Ala Lys Val Phe Arg Ala Leu Ala Asp
    275                 280                 285Ala Glu Ile Asn Ile Asp Met Val Leu Gln Asn Val Ser Ser Val Glu
290                 295                 300Asp Gly Thr Thr Asp Ile Thr Phe Thr Cys Pro Arg Ala Asp Gly Arg305                 310                 315                 320Arg Ala Met Glu Ile Leu Lys Lys Leu Gln Val Gln Gly Asn Trp Thr
            325                 330                 335Asn Val Leu Tyr Asp Asp Gln Val Gly Lys Val Ser Leu Val Gly Ala
        340                 345                 350Gly Met Lys Ser His Pro Gly Val Thr Ala Glu Phe Met Glu Ala Leu
    355                 360                 365Arg Asp Val Asn Val Asn Ile Glu Leu Ile Ser Thr Ser Glu Ile Arg
370                 375                 380Ile Ser Val Leu Ile Arg Glu Asp Asp Leu Asp Ala Ala Ala Arg Ala385                 390                 395                 400Leu His Glu Gln Phe Gln Leu Gly Gly Glu Asp Glu Ala Val Val Tyr
            405                 410                 415Ala Gly Thr Gly Arg
        420(2)SEQ ID NO：6的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：1643个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：双链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
   (A)有机体：乳发酵短杆菌
   (B)菌株：ATCC13869(ix)特征：
  (A)名称/关键词：CDS
  (B)位置：964..1482(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：TCGCGAAGTA GCACCTGTCA CTTTTGTCTC AAATATTAAA TCGAATATCA ATATACGGTC     60TGTTTATTGG AACGCATCCC AGTGGCTGAG ACGCATCCGC TAAAGCCCCA GGAACCCTGT    120GCAGAAAGAA AACACTCCTC TGGCTAGGTA GACACAGTTT ATAAAGGTAG AGTTGAGCGG    180GTAACTGTCA GCACGTAGAT CGAAAGGTGC ACAAAGGTGG CCCTGGTCGT ACAGAAATAT    240GGCGGTTCCT CGCTTGAGAG TGCGGAACGC ATTAGAAACG TCGCTGAACG GATCGTTGCC    300ACCAAGAAGG CTGGAAATGA TGTCGTGGTT GTCTGCTCCG CAATGGGAGA CACCACGGAT    360GAACTTCTAG AACTTGCAGC GGCAGTGAAT CCCGTTCCGC CAGCTCGTGA AATGGATATG    420CTCCTGACTG CTGGTGAGCG TATTTCTAAC GCTCTCGTCG CCATGGCTAT TGAGTCCCTT    480GGCGCAGAAG CTCAATCTTT CACTGGCTCT CAGGCTGGTG TGCTCACCAC CGAGCGCCAC    540GGAAACGCAC GCATTGTTGA CGTCACACCG GGTCGTGTGC GTGAAGCACT CGATGAGGGC    600AAGATCTGCA TTGTTGCTGG TTTTCAGGGT GTTAATAAAG AAACCCGCGA TGTCACCACG    660TTGGGTCGTG GTGGTTCTGA CACCACTGCA GTTGCGTTGG CAGCTGCTTT GAACGCTGAT    720GTGTGTGAGA TTTACTCGGA CGTTGACGGT GTGTATACCG CTGACCCGCG CATCGTTCCT    780AATGCACAGA AGCT GAAAA GCTCAGCTTC GAAGAAATGC TGGAACTTGC TGCTGTTGGC    840TCCAAGATTT TGGTGCTGCG CAGTGTTGAA TACGCTCGTG CATTCAATGT GCCACTTCGC    900GTACGCTCGT CTTATAGTAA TGATCCCGGC ACTTTGATTG CCGGCTCTAT GGAGGATATT    960CCT  GTG GAA GAA GCA GTC CTT ACC GGT GTC GCA ACC GAC AAG TCC GAA    1008
 Met Glu Glu Ala Val Leu Thr Gly Val Ala Thr Asp Lys Ser Glu
   1               5                  10                  15GCC AAA GTA ACC GTT CTG GGT ATT TCC GAT AAG CCA GGC GAG GCT GCC    1056Ala Lys Val Thr Val Leu Gly Ile Ser Asp Lys Pro Gly Glu Ala Ala
              20                  25                  30AAG GTT TTC CGT GCG TTG GCT GAT GCA GAA ATC AAC ATT GAC ATG GTT    1104Lys Val Phe Arg Ala Leu Ala Asp Ala Glu Ile Asn Ile Asp Met Val
          35                  40                  45CTG CAG AAC GTC TCC TCT GTG GAA GAC GGC ACC ACC GAC ATC ACG TTC    1152Leu Gln Asn Val Ser Ser Val Glu Asp Gly Thr Thr Asp Ile Thr Phe
      50                  55                  60ACC TGC CCT CGC GCT GAC GGA CGC CGT GCG ATG GAG ATC TTG AAG AAG    1200Thr Cys Pro Arg Ala Asp Gly Arg Arg Ala Met Glu Ile Leu Lys Lys
   65                 70                  75CTT CAG GTT CAG GGC AAC TGG ACC AAT GTG CTT TAC GAC GAC CAG GTC    1248Leu Gln Val Gln Gly Asn Trp Thr Asn Val Leu Tyr Asp Asp Gln Val80                  85                  90                  95GGC AAA GTC TCC CTC GTG GGT GCT GGC ATG AAG TCT CAC CCA GGT GTT    1296Gly Lys Val Ser Leu Val Gly Ala Gly Met Lys Ser His Pro Gly Val
             100                 105                 110ACC GCA GAG TTC ATG GAA GCT CTG CGC GAT GTC AAC GTG AAC ATC GAA    1344Thr Ala Glu Phe Met Glu Ala Leu Arg Asp Val Asn Val Asn Ile Glu
         115                 120                 125TTG ATT TCC ACC TCT GAG ATC CGC ATT TCC GTG CTG ATC CGT GAA GAT    1392Leu Ile Ser Thr Ser Glu Ile Arg Ile Ser Val Leu Ile Arg Glu Asp
     130                 135                 140GAT CTG GAT GCT GCT GCA CGT GCA TTG CAT GAG CAG TTC CAG CTG GGC    1440Asp Leu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Leu His Glu Gln Phe Gln Leu Gly
 145                 150                 155GGC GAA GAC GAA GCC GTC GTT TAT GCA GGC ACC GGA CGC TAAAGTTTTAA    1490Gly Glu Asp Glu Ala Val Val Tyr Ala Gly Thr Gly Arg160                 165                 170AGGAGTAGTT TTACAATGAC CACCATCGCA GTTGTTGGTG CAACCGGCCA GGTCGGCCAG  1550GTTATGCGCA CCCTTTTGGA AGAGCGCAAT TTCCCAGCTG ACACTGTTCG TTTCTTTGCT  1610TCCCCGCGTT CCGCAGGCCG TAAGATTGAA TTC                               1643(2)SEQ ID NO：7的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：172个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：Met Glu Glu Ala Val Leu Thr Gly Val Ala Thr Asp Lys Ser Glu Ala1               5                  10                  15Lys Val Thr Val Leu Gly Ile Ser Asp Lys Pro Gly Glu Ala Ala Lys
         20                  25                  30Val Phe Arg Ala Leu Ala Asp Ala Glu Ile Asn Ile Asp Met Val Leu
     35                  40                  45Gln Asn Val Ser Ser Val Glu Asp Gly Thr Thr Asp Ile Thr Phe Thr
 50                  55                  60Cys Pro Arg Ala Asp Gly Arg Arg Ala Met Glu Ile Leu Lys Lys Leu65                  70                  75                  80Gln Val Gln Gly Asn Trp Thr Asn Val Leu Tyr Asp Asp Gln Val Gly
             85                  90                  95Lys Val Ser Leu Val Gly Ala Gly Met Lys Ser His Pro Gly Val Thr
        100                 105                 110Ala Glu Phe Met Glu Ala Leu Arg Asp Val Asn Val Asn Ile Glu Leu
    115                 120                 125Ile Ser Thr Ser Glu Ile Arg Ile Ser Val Leu Ile Arg Glu Asp Asp
130                 135                 140Leu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Leu His Glu Gln Phe Gln Leu Gly Gly145                 150                 155                 160Glu Asp Glu Ala Val Val Tyr Ala Gly Thr Gly Arg
            165                 170(2)SEQ ID NO：8的信息：(i)序列特征：
(A)长度：23个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸(A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：GGATCCCCAATCGATACCTGGAA                                                  23(2)SEQ ID NO：9的信息：(i)序列特征：
(A)长度：23个碱基
(B)类型：核酸   (C)链型：单链(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸(A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iV)反义：是(i)序列描述：SEQ ID NO：9：CGGTTCATCGCCAAGTTTTT CTT(2)SEQ ID NO：10的信息：(i)序列特征：
(A)长度：2001个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：(A)有机体：乳发酵短杆菌(B)菌株：ATCC13869(ix)特征：(A)名称/关键词：CDS(B)位置：730..1473(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：GGATCCCCAA TCGATACCTG GAACGACAAC CTGATCAGGA TATCCAATGC CTTGAATATT     60GACGTTGAGG AAGGAATCAC CAGCCATCTC AACTGGAAGA CCTGACGCCT GCTGAATTGG    120ATCAGTGGCC CAATCGACCC ACCAACCAGG TTGGCTATTA CCGGCGATAT CAAAAACAAC    180TCGCGTGAAC GTTTCGTGCT CGGCAACGCG GATGCCAGCG ATCGACATAT CGGAGTCACC    240AACTTGAGCC TGCTGCTTCT GATCCATCGA CGGGGAACCC AACGGCGGCA AAGCAGTGGG    300GGAAGGGGAG TTGGTGGACT CTGAATCAGT GGGCTCTGAA GTGGTAGGCG ACGGGGCAGC    360ATCTGAAGGC GTGCGAGTTG TGGTGACCGG GTTAGCGGTT TCAGTTTCTG TCACAACTGG    420AGCAGGACTA GCAGAGGTTG TAGGCGTTGA GCCGCTTCCA TCACAAGCAC TTAAAAGTAA    480AGAGGCGGAA ACCACAAGCG CCAAGGAACT ACCTGCGGAA CGGGCGGTGA AGGGCAACTT    540AAGTCTCATA TTTCAAACAT AGTTCCACCT GTGTGATTAA TCTCCAGAAC GGAACAAACT    600GATGAACAAT CGTTAACAAC ACAGACCAAA ACGGTCAGTT AGGTATGGAT ATCAGCACCT    660TCTGAATGGG TACGTCTAGA CTGGTGGGCG TTTGAAAAAC TCTTCGCCCC ACGAAAATGA    720AGGAGCATA ATG GGA ATC AAG GTT GGC GTT CTC GGA GCC AAA GGC CGT        768
      Met Gly Ile Lys Val Gly Val Leu Gly Ala Lys Gly Arg
        1               5                  10GTT GGT CAA ACT ATT GTG GCA GCA GTC AAI GAG TCC GAC GAT CTG GAG     816Val Gly Gln Thr Ile Val Ala Ala Val Asn Glu Ser Asp Asp Ieu Glu
 15                  20                  25CTT GTT GCA GAG ATC GGC GTC GAC GAT GAT TTG AGC CTT CTG GTA GAC     864Leu Val Ala Glu Ile Gly Val Asp Asp Asp Leu Ser Leu Leu Val Asp30                  35                  40                  45AAC GGC GCT GAA GTT GTC GTT GAC TTC ACC ACT CCT AAC GCT GTG ATG     912Asn Gly Ala Glu Val Val Val Asp Phe Thr Thr Pro Asn Ala Val Met
             50                  55                  60GGC AAC CTG GAG TTC TGC ATC AAC AAC GGC ATT TCT GCG GTT GTT GGA     960Gly Asn Leu Glu Phe Cys Ile Asn Asn Gly Ile Ser Ala Val Val Gly
         65                  70                  75ACC ACG GGC TTC GAT GAT GCT CGT TTG GAG CAG GTT CGC GCC TGG CTT    1008Thr Thr Gly Phe Asp Asp Ala Arg Leu Glu Gln Val Arg Ala Trp Leu
     80                  85                  90GAA GGA AAA GAC AAT GTC GGT GTT CTG ATC GCA CCT AAC TTT GCT ATC    1056Glu Gly Lys Asp Asn Val Gly Val Leu Ile Ala Pro Asn Phe Ala Ile
 95                 100                 105TCT GCG GTG TTG ACC ATG GTC TTT TCC AAG CAG GCT GCC CGC TTC TTC    1104Ser Ala Val Leu Thr Met Val Phe Ser Lys Gln Ala Ala Arg Phe Phe110                 115                 120                 125GAA TCA GCT GAA GTT ATT GAG CTG CAC CAC CCC AAC AAG CTG GAT GCA    1152Glu Ser Ala Glu Val Ile Glu Leu His His Pro Asn Lys Leu Asp Ala
            130                 135                 140CCT TCA GGC ACC GCG ATC CAC ACT GCT CAG GGC ATT GCT GCG GCA CGC    1200Pro Ser Gly Thr Ala Ile His Thr Ala Gln Gly Ile Ala Ala Ala Arg
        145                 150                 155AAA GAA GCA GGC ATG GAC GCA CAG CCA GAT GCG ACC GAG CAG GCA CTT    1248Lys Glu Ala Gly Met Asp Ala Gln Pro Asp Ala Thr Glu Gln Ala Leu
    160                 165                 170GAG GGT TCC CGT GGC GCA AGC GTA GAT GGA ATC CCA GTT CAC GCA GTC    1296Glu Gly Ser Arg Gly Ala Ser Val Asp Gly Ile Pro Val His Ala Val
175                 180                 185CGC ATG TCC GGC ATG GTT GCT CAC GAG CAA GTT ATC TTT GGC ACC CAG    1344Arg Met Ser Gly Met Val Ala His Glu Gln Val Ile Phe Gly Thr Gln190                 195                 200                 205GGT CAG ACC TTG ACC ATC AAG CAG GAC TCC TAT GAT CGC AAC TCA TTT    1392Gly Gln Thr Leu Thr Ile Lys Gln Asp Ser Tyr Asp Arg Asn Ser Phe
            210                 215                 220GCA CCA GGT GTC TTG GTG GGT GTG CGC AAC ATT GCA CAG CAC CCA GGC    1440Ala Pro Gly Val Leu Val Gly Val Arg Asn Ile Ala Gln His Pro Gly
        225                 230                 235CTA GTC GTA GGA CTT GAG CAT TAC CTA GGC CTG TAAAGGCTCA TTTCAGCAGC  1493Leu Val Val Gly Leu Glu His Tyr Leu Gly Leu
    240                 245GGGTGGAATT TTTTAAAAGG AGCGTTTAAA GGCTGTGGCC GAACAAGTTA AATTGAGCGT  1553GGAGTTGATA GCGTGCAGTT CTTTTACTCC ACCCGCTGAT GTTGAGTGGT CAACTGATGT  1613TGAGGGCGCG GAAGCACTCG TCGAGTTTGC GGGTCGTGCC TGCTACGAAA CTTTTGATAA  1673GCCGAACCCT CGAACTGCTT CCAATGCTGC GTATCTGCGC CACATCATGG AAGTGGGGCA  1733CACTGCTTTG CTTGAGCATG CCAATGCCAC GATGTATATC CGAGGCATTT CTCGGTCCGC  1793GACCCATGAA TTGGTCCGAC ACCGCCATTT TTCCTTCTCT CAACTGTCTC AGCGTTTCGT  1853GCACAGCGGA GAATCGGAAG TAGTGGTGCC CACTCTCATC GATGAAGATC CGCAGTTGCG  1913TGAACTTTTC ATGCACGCCA TGGATGAGTC TCGGTTCGCT TTCAATGAGC TGCTTAATGC  1973GCTGGAAGAA AAACTTGGCG ATGAACCG                                     2001(2)SEQ ID NO：11的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：248个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质  (xi)序列描述：SEQ ID NO：11：Met Gly Ile Lys Val Gly Val Leu Gly Ala Lys Gly Arg Val Gly Gln1               5                  10                  15Thr Ile Val Ala Ala Val Asn Glu Ser Asp Asp Leu Glu Leu Val Ala
         20                  25                  30Glu Ile Gly Val Asp Asp Asp Leu Ser Leu Leu Val Asp Asn Gly Ala
     35                  40                  45Glu Val Val Val Asp Phe Thr Thr Pro Asn Ala Val Met Gly Asn Leu
 50                  55                  60Glu Phe Cys Ile Asn Asn Gly Ile Ser Ala Val Val Gly Thr Thr Gly65                  70                  75                  80Phe Asp Asp Ala Arg Leu Glu Gln Val Arg Ala Trp Leu Glu Gly Lys
             85                  90                  95Asp Asn Val Gly Val Leu Ile Ala Pro Asn Phe Ala Ile Ser Ala Val
        100                 105                 110Leu Thr Met Val Phe Ser Lys Gln Ala Ala Arg Phe Phe Glu Ser Ala
    1l5                 120                 125Glu Val Ile Glu Leu His His Pro Asn Lys Leu Asp Ala Pro Ser Gly
130                 135                 140Thr Ala Ile His Thr Ala Gln Gly Ile Ala Ala Ala Arg Lys Glu Ala145                 150                 155                 160Gly Met Asp Ala Gln Pro Asp Ala Thr Glu Gln Ala Leu Glu Gly Ser
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210                 215                 220Val Leu Val Gly Val Arg Asn Ile Ala Gln His Pro Gly Leu Val Val225                 230                 235                 240Gly Leu Glu His Tyr Leu Gly Leu
            245(2)SEQ ID NO：12的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：23个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
  (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：12：CTCGACGGATCGCAAATGGC AAC                                                  23(2)SEQ ID NO：13的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
   (A)描述：desc＝＂合成的DNA″(iv)反义：是(xi)序列描述：  SEQ ID NO：13：GGATCCTTGA GCACCTTGCG CAG                                               23(2)SEQ ID NO：14的信息：(i)序列特征：
(A)长度：1411个碱基
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
(A)有机体：乳发酵短杆菌
(B)菌株：ATCC 13869(ix)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：311..1213(xi)序列描述：  SEQ ID NO：14：CTCTCGATAT CGAGAGAGAA GCAGCGCCAC GGTTTTTCGG TGATTTTGAG ATTGAAACTT     60TGGCAGACGG ATCGCAAATG GCAACAAGCC CGTATGTCAT GGACTTTTAA CGCAAAGCTC    120ACACCCACGA GCTAAAAATT CATATAGTTA AGACAACATT TTTGGCTGTA AAAGACAGCC    180GTAAAAACCT CTTGCTCATG TCAATTGTTC TTATCGGAAT GTGGCTTGGG CGATTGTTAT    240GCAAAAGTTG TTAGGTTTTT TGCGGGGTTG TTTAACCCCC AAATGAGGGA AGAAGGTAAC    300CTTGAACTCT ATG AGC ACA GGT TTA ACA GCT AAG ACC GGA GTA GAG CAC       349
       Met Ser Thr Gly Leu Thr Ala Lys Thr Gly Val Glu His
         1               5                  10TTC GGC ACC GTT GGA GTA GCA ATG GTT ACT CCA TTC ACG GAA TCC GGA         397Phe Gly Thr Val Gly Val Ala Met Val Thr Pro Phe Thr Glu Ser Gly
 15                  20                  25GAC ATC GAT ATC GCT GCT GGC CGC GAA GTC GCG GCT TAT TTG GTT GAT         445Asp Ile Asp Ile Ala Ala Gly Arg Glu Val Ala Ala Tyr Leu Val Asp30                  35                  40                  45AAG GGC TTG GAT TCT TTG GTT CTC GCG GGC ACC ACT GGT GAA TCC CCA         493Lys Gly Leu Asp Ser Leu Val Leu Ala Gly Thr Thr Gly Glu Ser Pro
             50                  55                  60ACG ACA ACC GCC GCT GAA AAA CTA GAA CTG CTC AAG GCC GTT CGT GAG         541Thr Thr Thr Ala Ala Glu Lys Leu Glu Leu Leu Lys Ala Val Arg Glu
         65                  70                  75GAA GTT GGG GAT CGG GCG AAC GTC ATC GCC GGT GTC GGA ACC AAC AAC         589Glu Val Gly Asp Arg Ala Asn Val Ile Ala Gly Val Gly Thr Asn Asn
     80                  85                  90ACG CGG ACA TCT GTG GAA CTT GCG GAA GCT GCT GCT TCT GCT GGC GCA         637Thr Arg Thr Ser Val Glu Leu Ala Glu Ala Ala Ala Ser Ala Gly Ala
 95                 100                 105GAC GGC CTT TTA GTT GTA ACT CCT TAT TAC TCC AAG CCG AGC CAA GAG         685Asp Gly Leu Leu Val Val Thr Pro Tyr Tyr Ser Lys Pro Ser Gln Glu110                 115                 120                 125GGA TTG CTG GCG CAC TTC GGT GCA ATT GCT GCA GCA ACA GAG GTT CCA         733Gly Leu Leu Ala His Phe Gly Ala Ile Ala Ala Ala Thr Glu Val Pro
            130                 135                 140ATT TGT CTC TAT GAC ATT CCT GGT CGG TCA GGT ATT CCA ATT GAG TCT         781Ile Cys Leu Tyr Asp Ile Pro Gly Arg Ser Gly Ile Pro Ile Glu Ser
        145                 150                 155GAT ACC ATG AGA CGC CTG AGT GAA TTA CCT ACG ATT TTG GCG GTC AAG         829Asp Thr Met Arg Arg Leu Ser Glu Leu Pro Thr Ile Leu Ala Val Lys
    160                 165                 170GAC GCC AAG GGT GAC CTC GTT GCA GCC ACG TCA TTG ATC AAA GAA ACG         877Asp Ala Lys Gly Asp Leu Val Ala Ala Thr Ser Leu Ile Lys Glu Thr
175                 180                 185GGA CTT GCC TGG TAT TCA GGC GAT GAC CCA CTA AAC CTT GTT TGG CTT         925Gly Leu Ala Trp Tyr Ser Gly Asp Asp Pro Leu Asn Leu Val Trp Leu190                 195                 200                 205GCT TTG GGC GGA TCA GGT TTC ATT TCC GTA ATT GGA CAT GCA GCC CCC         973Ala Leu Gly Gly Ser Gly Phe Ile Ser Val Ile Gly His Ala Ala Pro
            210                 215                 220ACA GCA TTA CGT GAG TTG TAC ACA AGC TTC GAG GAA GGC GAC CTC GTC        1021Thr Ala Leu Arg Glu Leu Tyr Thr Ser Phe Glu Glu Gly Asp Leu Val
        225                 230                 235CGT GCG CGG GAA ATC AAC GCC AAA CTA TCA CCG CTG GTA GCT GCC CAA        1069Arg Ala Arg Glu Ile Asn Ala Lys Leu Ser Pro Leu Val Ala Ala Gln
    240                 245                 250GGT CGC TTG GGT GGA GTC AGC TTG GCA AAA GCT GCT CTG CGT CTG CAG        1117Gly Arg Leu Gly Gly Val Ser Leu Ala Lys Ala Ala Leu Arg Leu Gln
255                 260                 265GGC ATC AAC GTA GGA GAT CCT CGA CTT CCA ATT ATG GCT CCA AAT GAG        1165Gly Ile Asn Val Gly Asp Pro Arg Leu Pro Ile Met Ala Pro Asn Glu270                 275                 280                 285CAG GAA CTT GAG GCT CTC CGA GAA GAC ATG AAA AAA GCT GGA GTT CTA        1213Gln Glu Leu Glu Ala Leu Arg Glu Asp Met Lys Lys Ala Gly Val Leu
            290                 295                 300TAAATATGAA TGATTCCCGA AATCGCGGCC GGAAGGTTAC CCGCAAGGCG GCCCACCAGA    1273AGCTGGTCAG GAAAACCATC TGGATACCCC TGTCTTTCAG GCACCAGATG CTTCCTCTAA    1333CCAGAGCGCT GTAAAAGCTG AGACCGCCGG AAACGACAAT CGGGATGCTG CGCAAGGTGC    1393TCAAGGATCC CAACATTC                                                  1411(2)SEQ ID NO：15的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：301个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：  SEQ ID NO：15：Met Ser Thr Gly Leu Thr Ala Lys Thr Gly Val Glu His Phe Gly Thr1               5                  10                  15Val Gly Val Ala Met Val Thr Pro Phe Thr Glu Ser Gly Asp Ile Asp
         20                  25                  30Ile Ala Ala Gly Arg Glu Val Ala Ala Tyr Leu Val Asp Lys Gly Leu
     35                  40                  45Asp Ser Leu Val Leu Ala Gly Thr Thr Gly Glu Ser Pro Thr Thr Thr
 50                  55                  60Ala Ala Glu Lys Leu Glu Leu Leu Lys Ala Val Arg Glu Glu Val Gly65                  70                  75                  80Asp Arg Ala Asn Val Ile Ala Gly Val Gly Thr Asn Asn Thr Arg Thr
             85                  90                  95Ser Val Glu Leu Ala Glu Ala Ala Ala Ser Ala Gly Ala Asp Gly Leu
        100                 105                 110Leu Val Val Thr Pro Tyr Tyr Ser Lys Pro Ser Gln Glu Gly Leu Leu
    115                 120                 125Ala His Phe Gly Ala Ile Ala Ala Ala Thr Glu Val Pro Ile Cys Leu
130                 135                 140Tyr Asp Ile Pro Gly Arg Ser Gly Ile Pro Ile Glu Ser Asp Thr Met145                 150                 155                 160Arg Arg Leu Ser Glu Leu Pro Thr Ile Leu Ala Val Lys Asp Ala Lys
            165                 170                 175Gly Asp Leu Val Ala Ala Thr Ser Leu Ile Lys Glu Thr Gly Leu Ala
        180                 185                 190Trp Tyr Ser Gly Asp Asp Pro Leu Asn Leu Val Trp Leu Ala Leu Gly
    195                 200                 205Gly Ser Gly Phe Ile Ser Val Ile Gly His Ala Ala Pro Thr Ala Leu
210                 215                 220Arg Glu Leu Tyr Thr Ser Phe Glu Glu Gly Asp Leu Val Arg Ala Arg225                 230                 235                 240Glu Ile Asn Ala Lys Leu Ser Pro Leu Val Ala Ala Gln Gly Arg Leu
            245                 250                 255Gly Gly Val Ser Leu Ala Lys Ala Ala Leu Arg Leu Gln Gly Ile Asn
        260                 265                 270Val Gly Asp Pro Arg Leu Pro Ile Met Ala Pro Asn Glu Gln Glu Leu
    275                 280                 285Glu Ala Leu Arg Glu Asp Met Lys Lys Ala Gly Val Leu
290                 295                 300(2)SEQ ID NO：的信息：16：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
   (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：16：GTGGAGCCGACCATTCCGCG AGG                                                  23(2)SEQ ID NO：17的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
   (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：17：CCAAACCGC CCTCCACGGC GAA                                                23(2)SEQ ID NO：18的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：3579个碱基
   (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
  (A)有机体：乳发酵短杆菌
  (B)菌株：ATCC 13869(ix)特征：
  (A)名称/关键词：CDS
  (B)位置：533..2182(ix)特征：
  (A)名称/关键词：CDS
  (B)位置：2188..3522(xi)序列描述：SEQ ID NO：18：GTGGAGCCGA CCATTCCGCG AGGCTGCACT GCAACGAGGT CGTAGTTTTG GTACATGGCT     60TCTGGCCAGT TCATGGATTG GCTGCCGAAG AAGCTATAGG CATCGCACCA GGGCCACCCA    120GTTACCGAAG ATGGTGCCGT GCTTTTCGCC TTGGGCAGGG ACCTTGACAA AGCCCACGCT    180GATATCGCCA AGTGAGGGAT CAGAATAGTG CATGGGCACG TCGATGCTGC CACATTGAGC    240GGAGGCAATA TCTACCTGAG GTGGGCATTC TTCCCAGCGG ATGTTTTCTT GCGCTGCTGC    300AGTGGGCATT GATACCAAAA AGGGGCTAAG CGCAGTCGAG GCGGCAAGAA CTGCTACTAC      360CCTTTTTATT GTCGAACGGG GCATTACGGC TCCAAGGACG TTTGTTTTCT GGGTCAGTTA      420CCCCAAAAAG CATATACAGA GACCAATGAT TTTTCATTAA AAAGGCAGGG ATTTGTTATA      480AGTATGGGTC GTATTCTGTG CGACGGGTGT ACCTCGGCTA GAATTTCTCC CC ATG          535
                                                      Met
                                                        1ACA CCA GCT GAT CTC GCA ACA TTG ATT AAA GAG ACC GCG GTA GAG GTT        583Thr Pro Ala Asp Leu Ala Thr Leu Ile Lys Glu Thr Ala Val Glu Val
          5                  10                  15TTG ACC TCC CGC GAG CTC GAT ACT TCT GTT CTT CCG GAG CAG GTA GTT        631Leu Thr Ser Arg Glu Leu Asp Thr Ser Val Leu Pro Glu Gln Val Val
     20                  25                  30GTG GAG CGT CCG CGT AAC CCA GAG CAC GGC GAT TAC GCC ACC AAC ATT        679Val Glu Arg Pro Arg Asn Pro Glu His Gly Asp Tyr Ala Thr Asn Ile
 35                  40                  45GCA TTG CAG GTG GCT AAA AAG GTC GGT CAG AAC CCT CGG GAT TTG GCT        727Ala Leu Gln Val Ala Lys Lys Val Gly Gln Asn Pro Arg Asp Leu Ala50                  55                  60                  65ACC TGG CTG GCA GAG GCA TTG GCT GCA GAT GAC GCC ATT GAT TCT GCT        775Thr Trp Leu Ala Glu Ala Leu Ala Ala Asp Asp Ala Ile Asp Ser Ala
             70                  75                  80GAA ATT GCT GGC CCA GGC TTT TTG AAC ATT CGC CTT GCT GCA GCA GCA        823Glu Ile Ala Gly Pro Gly Phe Leu Asn Ile Arg Leu Ala Ala Ala Ala
         85                  90                  95CAG GGT GAA ATT GTG GCC AAG ATT CTG GCA CAG GGC GAG ACT TTC GGA        871Gln Gly Glu Ile Val Ala Lys Ile Leu Ala Gln Gly Glu Thr Phe Gly
    100                 105                 110AAC TCC GAT CAC CTT TCC CAC TTG GAC GTG AAC CTC GAG TTC GTT TCT        919Asn Ser Asp His Leu Ser His Leu Asp Val Asn Leu Glu Phe Val Ser
115                 120                 125GCA AAC CCA ACC GGA CCT ATT CAC CTT GGC GGA ACC CGC TGG GCT GCC        967Ala Asn Pro Thr Gly Pro Ile His Leu Gly Gly Thr Arg Trp Ala Ala130                 135                 140                 145GTG GGT GAC TCT TTG GGT CGT GTG CTG GAG GCT TCC GGC GCG AAA GTG       1015Val Gly Asp Ser Leu Gly Arg Val Leu Glu Ala Ser Gly Ala Lys Val
            150                 155                 160ACC CGC GAA TAC TAC TTC AAC GAT CAC GGT CGC CAG ATC GAT CGT TTC       1063Thr Arg Glu Tyr Tyr Phe Asn Asp His Gly Arg Gln Ile Asp Arg Phe
        165                 170                 175GCT TTG TCC CTT CTT GCA GCG GCG AAG GGC GAG CCA ACG CCA GAA GAC       1111Ala Leu Ser Leu Leu Ala Ala Ala Lys Gly Glu Pro Thr Pro Glu Asp
    180                 185                 190GGT TAT GGC GGC GAA TAC ATT AAG GAA ATT GCG GAG GCA ATC GTC GAA       1159Gly Tyr Gly Gly Glu Tyr Ile Lys Glu Ile Ala Glu Ala Ile Val Glu
195                 200                 205AAG CAT CCT GAA GCG TTG GCT TTG GAG CCT GCC GCA ACC CAG GAG CTT       1207Lys His Pro Glu Ala Leu Ala Leu Glu Pro Ala Ala Thr Gln Glu Leu210                 215                 220                 225TTC CGC GCT GAA GGC GTG GAG ATG ATG TTC GAG CAC ATC AAA TCT TCC       1255Phe Arg Ala Glu Gly Val Glu Met Met Phe Glu His Ile Lys Ser Ser
            230                 235                 240CTG CAT GAG TTC GGC ACC GAT TTC GAT GTC TAC TAC CAC GAG AAC TCC       1303Leu His Glu Phe Gly Thr Asp Phe Asp Val Tyr Tyr His Glu Asn Ser
        245                 250                 255CTG TTC GAG TCC GGT GCG GTG GAC AAG GCC GTG CAG GTG CTG AAG GAC       1351Leu Phe Glu Ser Gly Ala Val Asp Lys Ala Val Gln Val Leu Lys Asp
    260                 265                 270AAC GGC AAC CTG TAC GAA AAC GAG GGC GCT TGG TGG CTG CGT TCC ACC       1399Asn Gly Asn Leu Tyr Glu Asn Glu Gly Ala Trp Trp Leu Arg Ser Thr
275                 280                 285GAA TTC GGC GAT GAC AAA GAC CGC GTG GTG ATC AAG TCT GAC GGC GAC        1447Glu Phe Gly Asp Asp Lys Asp Arg Val Val Ile Lys Ser Asp Gly Asp290                 295                 300                 305GCA GCC TAC ATC GCT GGC GAT ATC GCG TAC GTG GCT GAT AAG TTC TCC        1495Ala Ala Tyr Ile Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Val Ala Asp Lys Phe Ser
            310                 315                 320CGC GGA CAC AAC CTA AAC ATC TAC ATG TTG GGT GCT GAC CAC CAT GGT        1543Arg Gly His Asn Leu Asn Ile Tyr Met Leu Gly Ala Asp His His Gly
        325                 330                 335TAC ATC GCG CGC CTG AAG GCA GCG GCG GCG GCA CTT GGC TAC AAG CCA        1591Tyr Ile Ala Arg Leu Lys Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Tyr Lys Pro
    340                 345                 350GAA GGC GTT GAA GTC CTG ATT GGC CAG ATG GTG AAC CTG CTT CGC GAC        1639Glu Gly Val Glu Val Leu Ile Gly Gln Met Val Asn Leu Leu Arg Asp
355                 360                 365GGC AAG GCA GTG CGT ATG TCC AAG CGT GCA GGC ACC GTG GTC ACC CTA        1687Gly Lys Ala Val Arg Met Sar Lys Arg Ala Gly Thr Val Val Thr Leu370                 375                 380                 385GAT GAC CTC GTT GAA GCA ATC GGC ATC GAT GCG GCG CGT TAC TCC CTG        1735Asp Asp Leu Val Glu Ala Ile Gly Ile Asp Ala Ala Arg Tyr Ser Leu
            390                 395                 400ATC CGT TCC TCC GTG GAT TCT TCC CTG GAT ATC GAT CTC GGC CTG TGG        1783Ile Arg Ser Ser Val Asp Ser Ser Leu Asp Ile Asp Leu Gly Leu Trp
        405                 410                 415GAA TCC CAG TCC TCC GAC AAC CCT GTG TAC TAC GTG CAG TAC GGA CAC        1831Glu Ser Gln Ser Ser Asp Asn Pro Val Tyr Tyr Val Gln Tyr Gly His
    420                 425                 430GCT CGT CTG TGC TCC ATC GCG CGC AAG GCA GAG ACC TTG GGT GTC ACC        1879Ala Arg Leu Cys Ser Ile Ala Arg Lys Ala Glu Thr Leu Gly Val Thr
435                 440                 445GAG GAA GGC GCA GAC CTA TCT CTA CTG ACC CAC GAC CGC GAA GGC GAT        1927Glu Glu Gly Ala Asp Leu Ser Leu Leu Thr His Asp Arg Glu Gly Asp450                 455                 460                 465CTC ATC CGC ACA CTC GGA GAG TTC CCA GCA GTG GTG AAG GCT GCC GCT        1975Leu Ile Arg Thr Leu Gly Glu Phe Pro Ala Val Val Lys Ala Ala Ala
            470                 475                 480GAC CTA CGT GAA CCA CAC CGC ATT GCC CGC TAT GCT GAG GAA TTA GCT        2023Asp Leu Arg Glu Pro His Arg Ile Ala Arg Tyr Ala Glu Glu Leu Ala
        485                 490                 495GGA ACT TTC CAC CGC TTC TAC GAT TCC TGC CAC ATC CTT CCA AAG GTT        2071Gly Thr Phe His Arg Phe Tyr Asp Ser Cys His Ile Leu Pro Lys Val
    500                 505                 510GAT GAG GAT ACG GCA CCA ATC CAC ACA GCA CGT CTG GCA CTT GCA GCA        2119Asp Glu Asp Thr Ala Pro Ile His Thr Ala Arg Leu Ala Leu Ala Ala
515                 520                 525GCA ACC CGC CAG ACC CTC GCT AAC GCC CTG CAC CTG GTT GGC GTT TCC        2167Ala Thr Arg Gln Thr Leu Ala Asn Ala Leu His Leu Val Gly Val Ser530                 535                 540                 545GCA CCG GAG AAG ATG TAACA ATG GCT ACA GTT GAA AAT TTC AAT GAA          2214Ala Pro Glu Lys Met       Met Ala Thr Val Glu Asn Phe Asn Glu
            550         1               5CTT CCC GCA CAC GTA TGG CCA CGC AAT GCC GTG CGC CAA GAA GAC GGC        2262Leu Pro Ala His Val Trp Pro Arg Asn Ala Val Arg Gln Glu Asp Gly10                  15                  20                  25GTT GTC ACC GTC GCT GGT GTG CCT CTG CCT GAC CTC GCT GAA GAA TAC        2310Val Val Thr Val Ala Gly Val Pro Leu Pro Asp Leu Ala Glu Glu Tyr
             30                  35                  40GGA ACC CCA CTG TTC GTA GTC GAC GAG GAC GAT TTC CGT TCC CGC TGT        2358Gly Thr Pro Leu Phe Val Val Asp Glu Asp Asp Phe Arg Ser Arg Cys
         45                  50                  55CGC GAC ATG GCT ACC GCA TTC GGT GGA CCA GGC AAT GTG CAC TAC GCA        2406Arg Asp Met Ala Thr Ala Phe Gly Gly Pro Gly Asn Val His Tyr Ala
     60                  65                  70TCT AAA GCG TTC CTG ACC AAG ACC ATT GCA CGT TGG GTT GAT GAA GAG        2454Ser Lys Ala Phe Leu Thr Lys Thr Ile Ala Arg Trp Val Asp Glu Glu
 75                  80                  85GGG CTG GCA CTG GAC ATT GCA TCC ATC AAC GAA CTG GGC ATT GCC CTG        2502Gly Leu Ala Leu Asp Ile Ala Ser Ile Asn Glu Leu Gly Ile Ala Leu90                  95                 100                 105GCC GCT GGT TTC CCC GCC AGC CGT ATC ACC GCG CAC GGC AAC AAC AAA        2550Ala Ala Gly Phe Pro Ala Ser Arg Ile Thr Ala His Gly Asn Asn Lys
            110                 115                 120GGC GTA GAG TTC CTG CGC GCG TTG GTT CAA AAC GGT GTG GGA CAC GTG        2598Gly Val Glu Phe Leu Arg Ala Leu Val Gin Asn Gly Val Gly His Val
        125                 130                 135GTG CTG GAC TCC GCA CAG GAA CTA GAA CTG TTG GAT TAC GTT GCC GCT        2646Val Leu Asp Ser Ala Gln Glu Leu Glu Leu Leu Asp Tyr Val Ala Ala
    140                 145                 150GGT GAA GGC AAG ATT CAG GAC GTG TTG ATC CGC GTA AAG CCA GGC ATC        2694Gly Glu Gly Lys Ile Gln Asp Val Leu Ile Arg Val Lys Pro Gly Ile
155                 160                 165GAA GCA CAC ACC CAC GAG TTC ATC GCC ACT AGC CAC GAA GAC CAG AAG        2742Glu Ala His Thr His Glu Phe Ile Ala Thr Ser His Glu Asp Gln Lys170                 175                 180                 185TTC GGA TTC TCC CTG GCA TCC GGT TCC GCA TTC GAA GCA GCA AAA GCC        2790Phe Gly Phe Ser Leu Ala Ser Gly Ser Ala Phe Glu Ala Ala Lys Ala
            190                 195                 200GCC AAC AAC GCA GAA AAC CTG AAC CTG GTT GGC CTG CAC TGC CAC GTT        2838Ala Asn Asn Ala Glu Asn Leu Asn Leu Val Gly Leu His Cys His Val
        205                 210                 215GGT TCC CAG GTG TTC GAC GCC GAA GGC TTC AAG CTG GCA GCA GAA CGC        2886Gly Ser Gln Val Phe Asp Ala Glu Gly Phe Lys Leu Ala Ala Glu Arg
    220                 225                 230GTG TTG GGC CTG TAC TCA CAG ATC CAC AGC GAA CTG GGC GTT GCC CTT        2934Val Leu Gly Leu Tyr Ser Gln Ile His Ser Glu Leu Gly Val Ala Leu
235                 240                 245CCT GAA CTG GAT CTC GGT GGC GGA TAC GGC ATT GCC TAT ACC GCA GCT        2982Pro Glu Leu Asp Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Ile Ala Tyr Thr Ala Ala250                 255                 260                 265GAA GAA CCA CTC AAC GTC GCA GAA GTT GCC TCC GAC CTG CTC ACC GCA        3030Glu Glu Pro Leu Asn Val Ala Glu Val Ala Ser Asp Leu Leu Thr Ala
            270                 275                 280GTC GGA AAA ATG GCA GCG GAA CTA GGC ATC GAC GCA CCA ACC GTG CTT        3078Val Gly Lys Met Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Ala Pro Thr Val Leu
        285                 290                 295GTT GAG CCC GGC CGC GCT ATC GCA GGC CCC TCC ACC GTG ACC ATC TAC        3126Val Glu Pro Gly Arg Ala Ile Ala Gly Pro Ser Thr Val Thr Ile Tyr
    300                 305                 310GAA GTC GGC ACC ACC AAA GAC GTC CAC GTA GAC GAC GAC AAA ACC CGC        3174Glu Val Gly Thr Thr Lys Asp Val His Val Asp Asp Asp Lys Thr Arg
315                 320                 325CGT TAC ATC GCC GTG GAC GGA GGC ATG TCC GAC AAC ATC CGC CCA GCA        3222Arg Tyr Ile Ala Val Asp Gly Gly Met Ser Asp Asn Ile Arg Pro Ala330                 335                 340                 345CTC TAC GGC TCC GAA TAC GAC GCC CGC GTA GTA TCC CGC TTC GCC GAA    3270Leu Tyr Gly Ser Glu Tyr Asp Ala Arg Val Val Ser Arg Phe Ala Glu
            350                 355                 360GGA GAC CCA GTA AGC ACC CGC ATC GTG GGC TCC CAC TGC GAA TCC GGC    3318Gly Asp Pro Val Ser Thr Arg Ile Val Gly Ser His Cys Glu Ser Gly
        365                 370                 375GAT ATC CTG ATC AAC GAT GAA ATC TAC CCA TCT GAC ATC ACC AGC GGC    3366Asp Ile Leu Ile Asn Asp Glu Ile Tyr Pro Ser Asp Ile Thr Ser Gly
    380                 385                 390GAC TTC CTT GCA CTC GCA GCC ACC GGC GCA TAC TGC TAC GCC ATG AGC    3414Asp Phe Leu Ala Leu Ala Ala Thr Gly Ala Tyr Cys Tyr Ala Met Ser
395                 400                 405TCC CGC TAC AAC GCC TTC ACA CGG CCC GCC GTC GTG TCC GTC CGC GCT    3462Ser Arg Tyr Asn Ala Phe Thr Arg Pro Ala Val Val Ser Val Arg Ala410                 415                 420                 425GGC AGC TCC CGC CTC ATG CTG CGC CGC GAA ACG CTC GAC GAC ATC CTC    3510Gly Ser Ser Arg Leu Met Leu Arg Arg Glu Thr Leu Asp Asp Ile Leu
            430                 435                 440TCA CTA GAG GCA TAACGCTTTT CGACGCCTGA CCCCGCCCTT CACCTTCGCC        3562Ser Leu Glu Ala
        445GTGGAGGGCG GTTTTGG                                                 3579(2)SEQ ID NO：19的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：550个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：19：
Met Thr Pro Ala Asp Leu Ala Thr Leu lle Lys Glu Thr Ala Val Glu
  1               5                  10                  15
Val Leu Thr Ser Arg Glu Leu Asp Thr Ser Val Leu Pro Glu Gln Val
             20                  25                  30
Val Val Glu Arg Pro Arg Asn Pro Glu His Gly Asp Tyr Ala Thr Asn
         35                  40                  45
Ile Ala Leu Gln Val Ala Lys Lys Val Gly Gln Asn Pro Arg Asp Leu
     50                  55                  60
Ala Thr Trp Leu Ala Glu Ala Leu Ala Ala Asp Asp Ala Ile Asp Ser
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Ile Ala Gly Pro Gly Phe Leu Asn Ile Arg Leu Ala Ala Ala
                 85                  90                  95
Ala Gln Gly Glu Ile Val Ala Lys Ile Leu Ala Gln Gly Glu Thr Phe
            100                 105                 110
Gly Asn Ser Asp His Leu Ser His Leu Asp Val Asn Leu Glu Phe Val
        115                 120                 125
Ser Ala Asn Pro Thr Gly Pro Ile His Leu Gly Gly Thr Arg Trp Ala
    130                 135                 140
Ala Val Gly Asp Ser Leu Gly Arg Val Leu Glu Ala Ser Gly Ala Lys
145                 150                 155                 160
Val Thr Arg Glu Tyr Tyr Phe Asn Asp His Gly Arg Gln Ile Asp Arg
                165                 170                 175
Phe Ala Leu Ser Leu Leu Ala Ala Ala Lys Gly Glu Pro Thr Pro Glu
        180                 185                 190Asp Gly Tyr Gly Gly Glu Tyr Ile Lys Glu Ile Ala Glu Ala Ile Val
    195                 200                 205Glu Lys His Pro Glu Ala Leu Ala Leu Glu Pro Ala Ala Thr Gln Glu
210                 215                 220Leu Phe Arg Ala Glu Gly Val Glu Met Met Phe Glu His Ile Lys Ser225                 230                 235                 240Ser Leu His Glu Phe Gly Thr Asp Phe Asp Val Tyr Tyr His Glu Ash
            245                 250                 255Ser Leu Phe Glu Ser Gly Ala Val Asp Lys Ala Val Gln Val Leu Lys
        260                 265                 270Asp Ash Gly Asn Leu Tyr Glu Asn Glu Gly Ala Trp Trp Leu Arg Ser
    275                 280                 285Thr Glu Phe Gly Asp Asp Lys Asp Arg Val Val Ile Lys Ser Asp Gly
290                 295                 300Asp Ala Ala Tyr Ile Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Val Ala Asp Lys Phe305                 310                 315                 320Ser Arg Gly His Asn Leu Asn Ile Tyr Met Leu Gly Ala Asp His His
            325                 330                 335Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Lys Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Tyr Lys
        340                 345                 350Pro Glu Gly Val Glu Val Leu Ile Gly Gln Met Val Asn Leu Leu Arg
    355                 360                 365Asp Gly Lys Ala Val Arg Met Ser Lys Arg Ala Gly Thr Val Val Thr
370                 375                 380Leu Asp Asp Leu Val Glu Ala Ile Gly Ile Asp Ala Ala Arg Tyr Ser385                 390                 395                 400Leu Ile Arg Ser Ser Val Asp Ser Ser Leu Asp Ile Asp Leu Gly Leu
            405                 410                 415Trp Glu Ser Gln Ser Ser Asp Ash Pro Val Tyr Tyr Val Gln Tyr Gly
        420                 425                 430His Ala Arg Leu Cys Ser Ile Ala Arg Lys Ala Glu Thr Leu Gly Val
    435                 440                 445Thr Glu Glu Gly Ala Asp Leu Ser Leu Leu Thr His Asp Arg Glu Gly
450                 455                 460Asp Leu Ile Arg Thr Leu Gly Glu Phe Pro Ala Val Val Lys Ala Ala465                 470                 475                 480Ala Asp Leu Arg Glu Pro His Arg Ile Ala Arg Tyr Ala Glu Glu Leu
            485                 490                 495Ala Gly Thr Phe His Arg Phe Tyr Asp Ser Cys His Ile Leu Pro Lys
        500                 505                 510Val Asp Glu Asp Thr Ala Pro Ile His Thr Ala Arg Leu Ala Leu Ala
    515                 520                 525Ala Ala Thr Arg Gln Thr Leu Ala Asn Ala Leu His Leu Val Gly Val
530                 535                 540Ser Ala Pro Glu Lys Met545                 550(2)SEQ ID NO：20的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：445个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：20：Met Ala Thr Val Glu Asn Phe Asn Glu Leu Pro Ala His Val Trp Pro1               5                  10                  15Arg Asn Ala Val Arg Gln Glu Asp Gly Val Val Thr Val Ala Gly Val
         20                  25                  30Pro Leu Pro Asp Leu Ala Glu Glu Tyr Gly Thr Pro Leu Phe Val Val
     35                  40                  45Asp Glu Asp Asp Phe Arg Ser Arg Cys Arg Asp Met Ala Thr Ala Phe
 50                  55                  60Gly Gly Pro Gly Asn Val His Tyr Ala Ser Lys Ala Phe Leu Thr Lys65                  70                  75                  80Thr Ile Ala Arg Trp Val Asp Glu Glu Gly Leu Ala Leu Asp Ile Ala
             85                  90                  95Ser Ile Asn Glu Leu Gly Ile Ala Leu Ala Ala Gly Phe Pro Ala Ser
        100                 105                 110Arg Ile Thr Ala His Gly Asn Asn Lys Gly Val Glu Phe Leu Arg Ala
    115                 120                 125Leu Val Gln Asn Gly Val Gly His Val Val Leu Asp Ser Ala Gln Glu
130                 135                 140Leu Glu Leu Leu Asp Tyr Val Ala Ala Gly Glu Gly Lys Ile Gln Asp145                 150                 155                 160Val Leu Ile Arg Val Lys Pro Gly Ile Glu Ala His Thr His Glu Phe
            165                 170                 175Ile Ala Thr Ser His Glu Asp Gln Lys Phe Gly Phe Ser Leu Ala Ser
        180                 185                 190Gly Ser Ala Phe Glu Ala Ala Lys Ala Ala Asn Asn Ala Glu Asn Leu
    195                 200                 205Asn Leu Val Gly Leu His Cys His Val Gly Ser Gln Val Phe Asp Ala
210                 215                 220Glu Gly Phe Lys Leu Ala Ala Glu Arg Val Leu Gly Leu Tyr Ser Gln225                 230                 235                 240Ile His Ser Glu Leu Gly Val Ala Leu Pro Glu Leu Asp Leu Gly Gly
            245                 250                 255Gly Tyr Gly Ile Ala Tyr Thr Ala Ala Glu Glu Pro Leu Asn Val Ala
        260                 265                 270Glu Val Ala Ser Asp Leu Leu Thr Ala Val Gly Lys Met Ala Ala Glu
    275                 280                 285Leu Gly Ile Asp Ala Pro Thr Val Leu Val Glu Pro Gly Arg Ala Ile
290                 295                 300Ala Gly Pro Ser Thr Val Thr Ile Tyr Glu Val Gly Thr Thr Lys Asp305                 310                 315                 320Val His Val Asp Asp Asp Lys Thr Arg Arg Tyr Ile Ala Val Asp Gly
            325                 330                 335Gly Met Ser Asp Asn Ile Arg Pro Ala Leu Tyr Gly Ser Glu Tyr Asp
        340                 345                 350Ala Arg Val Val Ser Arg Phe Ala Glu Gly Asp Pro Val Ser Thr Arg
    355                 360                 365Ile Val Gly Ser His Cys Glu Ser Gly Asp Ile Leu Ile Asn Asp Glu
370                 375                 380Ile Tyr Pro Ser Asp Ile Thr Ser Gly Asp Phe Leu Ala Leu Ala Ala385                 390                 395                 400Thr Gly Ala Tyr Cys Tyr Ala Met Ser Ser Arg Tyr Asn Ala Phe Thr
            405                 410                 415Arg Pro Ala Val Val Ser Val Arg Ala Gly Ser Ser Arg Leu Met Leu
        420                 425                 430Arg Arg Glu Thr Leu Asp Asp Ile Leu Ser Leu Glu Ala
    435                 440                 445(2)SEQ ID NO：21的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：20个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
  (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：21：AACCTCGTCATGTTTGAGAA                                                    20(2)SEQ ID NO：22的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：20个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
  (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：22：CCGGCCTACAAAATCGTGCA                                                    20(2)SEQ ID NO：23的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：1331个碱基
  (B)类型：核酸
  (C)链型：双链
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
(A)有机体：大肠杆菌
(B)菌株：JM109(ix)特征：
(A)名称/关键词：  CDS
(B)位置：10..1197(xi)序列描述：SEQ ID NO：23：AACCTCGTC ATG TTT GAG AAC ATT ACC GCC GCT CCT GCC GAC CCG ATT       48
      Met Phe Glu Asn Ile Thr Ala Ala Pro Ala Asp Pro Ile
        1               5                  10CTG GGC CTG GCC GAT CTG TTT CGT GCC GAT GAA CGT CCC GGC AAA ATT     96Leu Gly Leu Ala Asp Leu Phe Arg Ala Asp Glu Arg Pro Gly Lys Ile
 15                  20                  25AAC CTC GGG ATT GGT GTC TAT AAA GAT GAG ACG GGC AAA ACC CCG GTA    144Asn Leu Gly Ile Gly Val Tyr Lys Asp Glu Thr Gly Lys Thr Pro Val30                  35                  40                  45CTG ACC AGC GTG AAA AAG GCT GAA CAG TAT CTG CTC GAA AAT GAA ACC    192Leu Thr Ser Val Lys Lys Ala Glu Gln Tyr Leu Leu Glu Asn Glu Thr
             50                  55                  60ACC AAA AAT TAC CTC GGC ATT GAC GGC ATC CCT GAA TTT GGT CGC TGC    240Thr Lys Asn Tyr Leu Gly Ile Asp Gly Ile Pro Glu Phe Gly Arg Cys
         65                  70                  75ACT CAG GAA CTG CTG TTT GGT AAA GGT AGC GCC CTG ATC AAT GAC AAA    288Thr Gln Glu Leu Leu Phe Gly Lys Gly Ser Ala Leu Ile Asn Asp Lys
     80                  85                  90CGT GCT CGC ACG GCA CAG ACT CCG GGG GGC ACT GGC GCA CTA CGC GTG    336Arg Ala Arg Thr Ala Gln Thr Pro Gly Gly Thr Gly Ala Leu Arg Val
 95                 100                 105GCT GCC GAT TTC CTG GCA AAA AAT ACC AGC GTT AAG CGT GTG TGG GTG    384Ala Ala Asp Phe Leu Ala Lys Asn Thr Ser Val Lys Arg Val Trp Val110                 115                 120                 125AGC AAC CCA AGC TGG CCG AAC CAT AAG AGC GTC TTT AAC TCT GCA GGT    432Ser Asn Pro Ser Trp Pro Asn His Lys Ser Val Phe Asn Ser Ala Gly
            130                 135                 140CTG GAA GTT CGT GAA TAC GCT TAT TAT GAT GCG GAA AAT CAC ACT CTT    480Leu Glu Val Arg Glu Tyr Ala Tyr Tyr Asp Ala Glu Asn His Thr Leu
        145                 150                 155GAC TTC GAT GCA CTG ATT AAC AGC CTG AAT GAA GCT CAG GCT GGC GAC    528Asp Phe Asp Ala Leu Ile Asn Ser Leu Asn Glu Ala Gln Ala Gly Asp
    160                 165                 170GTA GTG CTG TTC CAT GGC TGC TGC CAT AAC CCA ACC GGT ATC GAC CCT    576Val Val Leu Phe His Gly Cys Cys His Asn Pro Thr Gly Ile Asp Pro
175                 180                 185ACG CTG GAA CAA TGG CAA ACA CTG GCA CAA CTC TCC GTT GAG AAA GGC    624Thr Leu Glu Gln Trp Gln Thr Leu Ala Gln Leu Ser Val Glu Lys Gly190                 195                 200                 205TGG TTA CCG CTG TTT GAC TTC GCT TAC CAG GGT TTT GCC CGT GGT CTG    672Trp Leu Pro Leu Phe Asp Phe Ala Tyr Gln Gly Phe Ala Arg Gly Leu
            210                 215                 220GAA GAA GAT GCT GAA GGA CTG CGC GCT TTC GCG GCT ATG CAT AAA GAG    720Glu Glu Asp Ala Glu Gly Leu Arg Ala Phe Ala Ala Met His Lys Glu
        225                 230                 235CTG ATT GTT GCC AGT TCC TAC TCT AAA AAC TTT GGC CTG TAC AAC GAG    768Leu Ile Val Ala Ser Ser Tyr Ser Lys Asn Phe Gly Leu Tyr Asn Glu
    240                 245                 250CGT GTT GGC GCT TGT ACT CTG GTT GCT GCC GAC AGT GAA ACC GTT GAT    816Arg Val Gly Ala Cys Thr Leu Val Ala Ala Asp Ser Glu Thr Val Asp
255                 260                 265CGC GCA TTC AGC CAA ATG AAA GCG GCG ATT CGC GCT AAC TAC TCT AAC    864Arg Ala Phe Ser Gln Met Lys Ala Ala Ile Arg Ala Asn Tyr Ser Asn270                 275                 280                 285CCA CCA GCA CAC GGC GCT TCT GTT GTT GCC ACC ATC CTG AGC AAC GAT    912Pro Pro Ala His Gly Ala Ser Val Val Ala Thr Ile Leu Ser Asn Asp
            290                 295                 300GCG TTA CGT GCG ATT TGG GAA CAA GAG CTG ACT GAT ATG CGC CAG CGT    960Ala Leu Arg Ala Ile Trp Glu Gln Glu Leu Thr Asp Met Arg Gln Arg
        305                 310                 315ATT CAG CGT ATG CGT CAG TTG TTC GTC AAT ACG CTG CAG GAA AAA GGC   1008Ile Gln Arg Met Arg Gln Leu Phe Val Asn Thr Leu Gln Glu Lys Gly
    320                 325                 330GCA AAC CGC GAC TTC AGC TTT ATC ATC AAA CAG AAC GGC ATG TTC TCC   1056Ala Asn Arg Asp Phe Ser Phe Ile Ile Lys Gln Asn Gly Met Phe Ser
335                 340                 345TTC AGT GGC CTG ACA AAA GAA CAA GTG CTG CGT CTG CGC GAA GAG TTT   1104Phe Ser Gly Leu Thr Lys Glu Gln Val Leu Arg Leu Arg Glu Glu Phe350                 355                 360                 365GGC GTA TAT GCG GTT GCT TCT GGT CGC GTA AAT GTG GCC GGG ATG ACA   1152Gly Val Tyr Ala Val Ala Ser Gly Arg Val Asn Val Ala Gly Met Thr
            370                 375                 380CCA GAT AAC ATG GCT CCG CTG TGC GAA GCG ATT GTG GCA GTG CTG       1197Pro Asp Asn Met Ala Pro Leu Cys Glu Ala Ile Val Ala Val Leu
        385                 390                 395TAAGCATTAA AAACAATGAA CGCGCTGAAA AGCGGGCTGA GACTGATGAC AAACGCAACA 1257TTGCCTGATG GCTACGCTTA TCAGGCCTAC GCGTCCCCTG CAATATTTTG AATTTGCACG 1317ATTTTGTAGG CCGG                                                   1331(2)SEQ ID NO：24的信息：(i)序列特征：
  (A)长度：396个氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：24：Met  Phe Glu Asn Ile Thr Ala Ala Pro Ala Asp Pro Ile Leu Gly Leu1                5                  10                  15Ala Asp Leu Phe Arg Ala Asp Glu Arg Pro Gly Lys Ile Asn Leu Gly
         20                  25                  30Ile Gly Val Tyr Lys Asp Glu Thr Gly Lys Thr Pro Val Leu Thr Ser
     35                  40                  45VaI Lys Lys Ala Glu Gln Tyr Leu Leu Glu Asn Glu Thr Thr Lys Asn
 50                  55                  60Tyr Leu Gly Ile Asp Gly Ile Pro Glu Phe Gly Arg Cys Thr Gln Glu65                  70                  75                  80Leu Leu Phe Gly Lys Gly Ser Ala Leu Ile Asn Asp Lys Arg Ala Arg
             85                  90                  95Thr Ala Gln Thr Pro Gly Gly Thr Gly Ala Leu Arg Val Ala Ala Asp
        100                 105                 110Phe Leu Ala Lys Asn Thr Ser Val Lys Arg Val Trp Val Ser Asn Pro
    115                 120                 125Ser Trp Pro Asn His Lys Ser Val Phe Asn Ser Ala Gly Leu Glu Val
130                 135                 140Arg Glu Tyr Ala Tyr Tyr Asp Ala Glu Asn His Thr Leu Asp Phe Asp145                 150                 155                 160Ala Leu Ile Asn Ser Leu Asn Glu Ala Gln Ala Gly Asp Val Val Leu
            165                 170                 175Phe His Gly Cys Cys His Asn Pro Thr Gly Ile Asp Pro Thr Leu Glu
        180                 185                 190Gln Trp Gln Thr Leu Ala Gln Leu Aer Val Glu Lys Gly Trp Leu Pro
    195                 200                 205Leu Phe Asp Phe Ala Tyr Gln Gly Phe Ala Arg Gly Leu Glu Glu Asp
210                 215                 220Ala Glu Gly Leu Arg Ala Phe Ala Ala Met His Lys Glu Leu Ile Val225                 230                 235                 240Ala Ser Ser Tyr Ser Lys Asn Phe Gly Leu Tyr Asn Glu Arg Val Gly
            245                 250                 255Ala Cys Thr Leu Val Ala Ala Asp Ser Glu Thr Val Asp Arg Ala Phe
        260                 265                 270Ser Gln Met Lys Ala Ala Ile Arg Ala Asn Tyr Ser Asn Pro Pro Ala
    275                 280                 285His Gly Ala Ser Val Val Ala Thr Ile Leu Ser Asn Asp Ala Leu Arg
290                 295                 300Ala Ile Trp Glu Gln Glu Leu Thr Asp Met Arg Gln Arg Ile Gln Arg305                 310                 315                 320Met Arg Gln Leu Phe Val Asn Thr Leu Gln Glu Lys Gly Ala Asn Arg
            325                 330                 335Asp Phe Ser Phe Ile Ile Lys Gln Asn Gly Met Phe Ser Phe Ser Gly
        340                 345                 350Leu Thr Lys Glu Gln Val Leu Arg Leu Arg Glu Glu Phe Gly Val Tyr
    355                 360                 365Ala Val Ala Ser Gly Arg Val Asn Val Ala Gly Met Thr Pro Asp Asn
370                 375                 380Met Ala Pro Leu Cys Glu AlaIle Val Ala Val Leu385                 390                395(2)SEQ ID NO：25的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：2517个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：双链
   (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：基因组DNA
(vi)原始来源：
   (A)有机体：乳发酵短杆菌
   (B)菌株：ATCC 13869(xi)序列描述：SEQ ID NO：25：GATCAGCTTC GGGTGTTGAA GGGGCCGAAT AAGGAACTCG CGCAGTTGGG TCGTAGTTTG      60TTTAAACGAC TTGGTGATGT GTTGGCGTAT TTCGATGTTG GTGTCTCCAA CGGTCCGGTC     120GAAGCGATCA ACGGACGGTT GGAGCATTTG CGTGGGATTG CTCTAGGTTT CCGTAATTTG     180AACCACTACA TTCTGCGGTG CCTTATCCAT TCAGGGCAGT TGGTCCATAA GATCAATGCA     240CTCTAAAACA GGAAGAGCCC CTTTACAAGC GGCAAGACCA AACTGGGTGA CCGAAAATCT     300TCAGGCCAAT CAGTTTTGGT CATATGGGAT GGTTTTTAGA CCTCGAAACC ATCCCATATG     360ACCGAAGCCC GCGAAACTCT GTGTTCGTTG GTCGCCTGGT TCGGTCTCAA TGCCTTGCCG     420AAACCACAAC GCCCCGAAAC CCAAAACTCC CCAATACATG AAAAAACCAG CTTCCCACCG     480AAGTGAGAAG CTGGTTTAGT TTGCGGAGGA TAGGGGATTT GAACCCCTGA GGGATTGCTC     540CCAACCCGCG TTCCAGGCGA GCGACATAGG CCGCTAGTCG AATCCTCCAG CTAGAACGGC     600TGCAACGCAT GGCTGCTTTG TTCTGGGGAT TAGATTACAC AAAAGTCGTT TAGAAACTCA     660AATCCGCTCG CAGTTGGCGT TTTCTGGGGC GGTTCAGCTA GAGTTATGCG AAGGATCCCG     720TGCGGCGTTT ATCTTGTGAA CTCCCCCAGG GCAGGAATGC AGCAAGGGTC AGCGAGCTCT     780GACGGGTGCG CGGGGTCCCC TAAAACGTCT AGAGTAGTGG CTTGAGGTCA CTGCTCTTTT     840TTTGTGCCCT TTTTTTGGTC CGTCTATTTT GCCACCACAT GCGGAGGTAC GCAGTTATGA     900GTTCAGTTTC GCTGCAGGAT TTTGATGCAG AGCGAATTGG TCTGTTCCAC GAGGACATTA     960AACGCAAGTT TGATGAGCTC AAGTCAAAAA ATCTGAAGCT GGATCTTACT CGCGGTAAGC    1020CTTCGTCGGA GCAGTTGGAT TTCGCTGATG AGCTGTTGGC GTTGCCTGGT AAGGGCGATT    1080TCAAGGCTGC GGATGGTACT GATGTCCGTA ACTATGGCGG GCTGGATGGC ATTGTTGATA    1140TTCGTCAGAT TTGGGCGGAT TTGCTGGGTG TTCCTGTGGA GCAGGTGCTG GCGGGGGATG    1200CTTCGAGCTT GAACATCATG TTTGATGTGA TCAGCTGGTC GTACATTTTT GGTAACAATG    1260ATTCGGTTCA GCCTTGGTCG AAGGAAGAAA CTGTTAAGTG GATTTGTCCT GTTCCGGGAT    1320ATGATCGCCA TTTCTCCATC ACGGAGCGTT TCGGCTTTGA GATGATTTCT GTGCCAATGA    1380ATGAAGACGG CCCTGATATG GATGCTGTTG AGGAATTGGT CAAGGATCCG CAGGTTAAGG    1440GCATGTGGGT TGTGCCGGTA TTTTCTAACC CGACTGGTTT CACGGTGTCG GAGGACGTCG    1500CAAAGCGTCT GAGCACGATG GAAACTGCGG CGCCGGACTT CCGCGTGGTG TGGGATAACG    1560CTTACGCCGT TCATACTCTG ACCGATGAGT TCCCTGAGGT CATCGACATC GTTGGGCTTG    1620GTGAGGCGGC GGGTAACCCG AACCGTTTCT GGGCGTTCAC TTCTACTTCG AAGATCACTC    1680TCGCGGGTGC GGGCGTGTCC TTCTTCATGA CTTCTGCGGA GAACCGTAAG TGGTACTCCG    1740GTCATGCGGG TATCCGTGGC ATTGGCCCTA ACAAGGTCAA TCAGTTGGCT CATGCGCGTT    1800ACTTTGGCGA TGCTGAGGGA GTGCGCGCGG TGATGCGTAA GCATGCTGCG TCGTTGGCTC    1860CGAAGTTCAA CAAGGTTCTG GAGATCCTGG ATTCTCGCCT TGCTGAGTAC GGTGTCGCGC    1920AGTGGACTGT CCCTGCGGGC GGTTACTTCA TTTCCCTTGA TGTGGTTCCT GGTACGGCAT    1980CTCGTGTGGC TGAGTTGGCT AAGGAAGCCG GCATTGCGTT GACGGGTGCG GGTTCTTCTT    2040ACCCGCTGCG TCAGGATCCG GAGAACAAGA ACCTCCGTTT GGCGCCTTCT CTGCCTCCTG    2100TTGAGGAACT TGAGGTTGCC ATGGATGGCG TGGCTACGTG TGTTTTGCTG GCAGCTGCGG    2160AGCACTACGC TAGCTAGAGT GAATACCGCG GAAACTGCAC ATTGGATTAA CCGTTTGCTG    2220CCGGGTCAGC CGGAGTTTCA CCAGGTTGGC GCGTTTAAAG TGGCGGGTTA CACGCTTGAT    2280GATGAGTCAA TTGCGTGTTC TGTCAATTTC GGGCGCGTCA ACACGGGCCT GGTCACCGAG    2340ACAGGCGCGG AAACCGTCGA TGTGCGAAGT GAGATTTTGA GCCTGGCCAG GGCCGACGTG    2400TCCGTGCCTG GGCGCGCCGT CGGCGCTGCT GCAACAATGC TTCTCGACGC CTCCCTCTCC    2460TTCAAATCCG CCACCGATTC CAGTGTCACT CCCATGCATG CCCAACCGGG ACAGATC       2517(2)SEQ ID NO：26的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
   (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：GATCAACGGACGGTTGGAGC ATT                                                 23(2)SEQ ID NO：27的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
   (A)描述：dese＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：27：GGTATTCACTCTAGCTAGCG TAG                                                 23(2)SEQ ID NO：28的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：23个碱基
   (B)类型：核酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性  (ii)分子类型：其它核酸
(A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：否(xi)序列描述：SEQ ID NO：28：GAGCTCAAGTCAAAAAATCT GAA                                                 23(2)SEQ ID NO：29的信息：(i)序列特征：
 (A)长度：23个碱基
 (B)类型：核酸
 (C)链型：单链
 (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：其它核酸
 (A)描述：desc＝＂合成的DNA＂(iv)反义：是(xi)序列描述：SEQ ID NO：29：GATCTGTCCCGGTTGGGCAT GCA                                                 23(2)SEQ ID NO：30的信息：(i)序列特征：
 (A)长度：2517个碱基
 (B)类型：核酸
 (C)链型：双链
 (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：基因组DNA(vi)原始来源：
 (A)有机体：乳发酵短杆菌
 (B)菌株：ATCC 13869(ix)特征：
 (A)名称/关键词：CDS   (B)位置：  879..2174(xi)序列描述：SEQ ID NO：30：GATCAGCTTC GGGTGTTGAA GGGGCCGAAT AAGGAACTCG CGCAGTTGGG TCGTAGTTTG     60TTTAAACGAC TTGGTGATGT GTTGGCGTAT TTCGATGTTG GTGTCTCCAA CGGTCCGGTC    120GAAGCGATCA ACGGACGGTT GGAGCATTTG CGTGGGATTG CTCTAGGTTT CCGTAATTTG    180AACCACTACA TTCTGCGGTG CCTTATCCAT TCAGGGCAGT TGGTCCATAA GATCAATGCA    240CTCTAAAACA GGAAGAGCCC CTTTACAAGC GGCAAGACCA AACTGGGTGA CCGAAAATCT    300TCAGGCCAAT CAGTTTTGGT CATATGGGAT GGTTTTTAGA CCTCGAAACC ATCCCATATG    360ACCGAAGCCC GCGAAACTCT GTGTTCGTTG GTCGCCTGGT TCGGTCTCAA TGCCTTGCCG    420AAACCACAAC GCCCCGAAAC CCAAAACTCC CCAATACATG AAAAAACCAG CTTCCCACCG    480AAGTGAGAAG CTGGTTTAGT TTGCGGAGGA TAGGGGATTT GAACCCCTGA GGGATTGCTC    540CCAACCCGCG TTCCAGGCGA GCGACATAGG CCGCTAGTCG AATCCTCCAG CTAGAACGGC    600TGCAACGCAT GGCTGCTTTG TTCTGGGGAT TAGATTACAC AAAAGTCGTT TAGAAACTCA    660AATCCGCTCG CAGTTGGCGT TTTCTGGGGC GGTTCAGCTA GAGTTATGCG AAGGATCCCG    720TGCGGCGTTT ATCTTGTGAA CTCCCCCAGG GCAGGAATGC AGCAAGGGTC AGCGAGCTCT    780GACGGGTGCG CGGGGTCCCC TAAAACGTCT AGAGTAGTGG CTTGAGGTCA CTGCTCTTTT    840TTTGTGCCCT TTTTTTGGTC CGTCTATTTT GCCACCAC ATG CGG AGG TAC GCA        893
                                      Met Arg Arg Tyr Ala
                                        1               5GTT ATG AGT TCA GTT TCG CTG CAG GAT TTT GAT GCA GAG CGA ATT GGT      941Val Met Ser Ser Val Ser Leu Gln Asp Phe Asp Ala Glu Arg Ile Gly
             10                  15                  20CTG TTC CAC GAG GAC ATT AAA CGC AAG TTT GAT GAG CTC AAG TCA AAA      989Leu Phe His Glu Asp Ile Lys Arg Lys Phe Asp Glu Leu Lys Ser Lys
         25                  30                  35AAT CTG AAG CTG GAT CTT ACT CGC GGT AAG CCT TCG TCG GAG CAG TTG     1037Asn Leu Lys Leu Asp Leu Thr Arg Gly Lys Pro Ser Ser Glu Gln Leu
     40                  45                  50GAT TTC GCT GAT GAG CTG TTG GCG TTG CCT GGT AAG GGC GAT TTC AAG     1085Asp Phe Ala Asp Glu Leu Leu Ala Leu Pro Gly Lys Gly Asp Phe Lys
 55                  60                  65GCT GCG GAT GGT ACT GAT GTC CGT AAC TAT GGC GGG CTG GAT GGC ATT     1133Ala Ala Asp Gly Thr Asp Val Arg Asn Tyr Gly Gly Leu Asp Gly Ile70                  75                  80                  85GTT GAT ATT CGT CAG ATT TGG GCG GAT TTG CTG GGT GTT CCT GTG GAG     1181Val Asp Ile Arg Gln Ile Trp Ala Asp Leu Leu Gly Val Pro Val Glu
             90                  95                 100CAG GTG CTG GCG GGG GAT GCT TCG AGC TTG AAC ATC ATG TTT GAT GTG     1229Gln Val Leu Ala Gly Asp Ala Ser Ser Leu Asn Ile Met Phe Asp Val
        105                 110                 115ATC AGC TGG TCG TAC ATT TTT GGT AAC AAT GAT TCG GTT CAG CCT TGG     1277Ile Ser Trp Ser Tyr Ile Phe Gly Asn Asn Asp Ser Val Gln Pro Trp
    120                 125                 130TCG AAG GAA GAA ACT GTT AAG TGG ATT TGT CCT GTT CCG GGA TAT GAT     1325Ser Lys Glu Glu Thr Val Lys Trp Ile Cys Pro Val Pro Gly Tyr Asp
135                 140                 145CGC CAT TTC TCC ATC ACG GAG CGT TTC GGC TTT GAG ATG ATT TCT GTG     1373Arg His Phe Ser Ile Thr Glu Arg Phe Gly Phe Glu Met Ile Ser Val150                 155                 160                 165CCA ATG AAT GAA GAC GGC CCT GAT ATG GAT GCT GTT GAG GAA TTG GTC     1421Pro Met Asn Glu Asp Gly Pro Asp Met Asp Ala Val Glu Glu Leu Val
            170                 175                 180AAG GAT CCG CAG GTT AAG GGC ATG TGG GTT GTG CCG GTA TTT TCT AAC       1469Lys Asp Pro Gln Val Lys Gly Met Trp Val Val Pro Val Phe Ser Asn
        185                 190                 195CCG ACT GGT TTC ACG GTG TCG GAG GAC GTC GCA AAG CGT CTG AGC ACG       1517Pro Thr Gly Phe Thr Val Ser Glu Asp Val Ala Lys Arg Leu Ser Thr
    200                 205                 210ATG GAA ACT GCG GCG CCG GAC TTC CGC GTG GTG TGG GAT AAC GCT TAC       1565Met Glu Thr Ala Ala Pro Asp Phe Arg Val Val Trp Asp Asn Ala Tyr
215                 220                 225GCC GTT CAT ACT CTG ACC GAT GAG TTC CCT GAG GTC ATC GAC ATC GTT       1613Ala Val His Thr Leu Thr Asp Glu Phe Pro Glu Val Ile Asp Ile Val230                 235                 240                 245GGG CTT GGT GAG GCG GCG GGT AAC CCG AAC CGT TTC TGG GCG TTC ACT       1661Gly Leu Gly Glu Ala Ala Gly Asn Pro Asn Arg Phe Trp Ala Phe Thr
            250                 255                 260TCT ACT TCG AAG ATC ACT CTC GCG GGT GCG GGC GTG TCC TTC TTC ATG       1709Ser Thr Ser Lys Ile Thr Leu Ala Gly Ala Gly Val Ser Phe Phe Met
        265                 270                 275ACT TCT GCG GAG AAC CGT AAG TGG TAC TCC GGT CAT GCG GGT ATC CGT       1757Thr Ser Ala Glu Asn Arg Lys Trp Tyr Ser Gly His Ala Gly Ile Arg
    280                 285                 290GGC ATT GGC CCT AAC AAG GTC AAT CAG TTG GCT CAT GCG CGT TAC TTT       1805Gly Ile Gly Pro Asn Lys Val Asn Gln Leu Ala His Ala Arg Tyr Phe
295                 300                 305GGC GAT GCT GAG GGA GTG CGC GCG GTG ATG CGT AAG CAT GCT GCG TCG       1853Gly Asp Ala Glu Gly Val Arg Ala Val Met Arg Lys His Ala Ala Ser310                 315                 320                 325TTG GCT CCG AAG TTC AAC AAG GTT CTG GAG ATC CTG GAT TCT CGC CTT       1901Leu Ala Pro Lys Phe Asn Lys Val Leu Glu Ile Leu Asp Ser Arg Leu
            330                 335                 340GCT GAG TAC GGT GTC GCG CAG TGG ACT GTC CCT GCG GGC GGT TAC TTC       1949Ala Glu Tyr Gly Val Ala Gln Trp Thr Val Pro Ala Gly Gly Tyr Phe
        345                 350                 355ATT TCC CTT GAT GTG GTT CCT GGT ACG GCA TCT CGT GTG GCT GAG TTG       1997Ile Ser Leu Asp Val Val Pro Gly Thr Ala Ser Arg Val Ala Glu Leu
    360                 365                 370GCT AAG GAA GCC GGC ATT GCG TTG ACG GGT GCG GGT TCT TCT TAC CCG       2045Ala Lys Glu Ala Gly Ile Ala Leu Thr Gly Ala Gly Ser Ser Tyr Pro
375                 380                 385CTG CGT CAG GAT CCG GAG AAC AAG AAC CTC CGT TTG GCG CCT TCT CTG       2093Leu Arg Gln Asp Pro Glu Asn Lys Asn Leu Arg Leu Ala Pre Ser Leu390                 395                 400                 405CCT CCT GTT GAG GAA CTT GAG GTT GCC ATG GAT GGC GTG GCT ACG TGT       2141Pro Pro Val Glu Glu Leu Glu Val Ala Met Asp Gly Val Ala Thr Cys
            410                 415                 420GTT TTG CTG GCA GCT GCG GAG CAC TAC GCT AGC TAGAGTGAAT ACCGCGGAAA     2194Val Leu Leu Ala Ala Ala Glu His Tyr Ala Ser
        425                 430CTGCACATTG GATTAACCGT TTGCTGCCGG GTCAGCCGGA GTTTCACCAG GTTGGCGCGT     2254TTAAAGTGGC GGGTTACACG CTTGATGATG AGTCAATTGC GTGTTCTGTC AATTTCGGGC     2314GCGTCAACAC GGGCCTGGTC ACCGAGACAG GCGCGGAAAC CGTCGATGTG CGAAGTGAGA     2374TTTTGAGCCT GGCCAGGGCC GACGTGTCCG TGCCTGGGCG CGCCGTCGGC GCTGCTGCAA     2434CAATGCTTCT CGACGCCTCC CTCTCCTTCA AATCCGCCAC CGATTCCAGT GTCACTCCCA     2494TGCATGCCCA ACCGGGACAG ATC                                             2517(2)SEQ ID NO：31的信息：(i)序列特征：
   (A)长度：432个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)序列描述：SEQ ID NO：31：Met Arg Arg Tyr Ala Val Met Ser Ser Val Ser Leu Gln Asp Phe Asp
1               5                  10                  15Ala Glu Arg Ile Gly Leu Phe His Glu Asp Ile Lys Arg Lys Phe Asp
           20                  25                  30Glu Leu Lys Ser Lys Asn Leu Lys Leu Asp Leu Thr Arg Gly Lys Pro
       35                  40                  45Ser Ser Glu Gln Leu Asp Phe Ala Asp Glu Leu Leu Ala Leu Pro Gly
   50                  55                  60Lys Gly Asp Phe Lys Ala Ala Asp Gly Thr Asp Val Arg Asn Tyr Gly65                  70                  75                  80Gly Leu Asp Gly Ile Val Asp Ile Arg Gln Ile Trp Ala Asp Leu Leu
               85                  90                  95Gly Val Pro Val Glu Gln Val Leu Ala Gly Asp Ala Ser Ser Leu Asn
          100                 105                 110Ile Met Phe Asp Val Ile Ser Trp Ser Tyr Ile Phe Gly Asn Asn Asp
    115                 120                 125Ser Val Gln Pro Trp Ser Lys Glu Glu Thr Val Lys Trp Ile Cys Pro
130                 135                 140Val Pro Gly Tyr Asp Arg His Phe Ser Ile Thr Glu Arg Phe Gly Phe145                 150                 155                 160Glu Met Ile Ser Val Pro Met Asn Glu Asp Gly Pro Asp Met Asp Ala
            165                 170                 175Val Glu Glu Leu Val Lys Asp Pro Gln Val Lys Gly Met Trp Val Val
        180                 185                 190Pro Val Phe Ser Asn Pro Thr Gly Phe Thr Val Ser Glu Asp Val Ala
    195                 200                 205Lys Arg Leu Ser Thr Met Glu Thr Ala Ala Pro Asp Phe Arg Val Val
210                 215                 220Trp Asp Asn Ala Tyr Ala Val His Thr Leu Thr Asp Glu Phe Pro Glu225                 230                 235                 240Val Ile Asp Ile Val Gly Leu Gly Glu Ala Ala Gly Asn Pro Asn Arg
            245                 250                 255Phe Trp Ala Phe Thr Ser Thr Ser Lys Ile Thr Leu Ala Gly Ala Gly
        260                 265                 270Val Ser Phe Phe Met Thr Ser Ala Glu Asn Arg Lys Trp Tyr Ser Gly
    275                 280                 285His Ala Gly Ile Arg Gly Ile Gly Pro Asn Lys Val Asn Gln Leu Ala
290                 295                 300His Ala Arg Tyr Phe Gly Asp Ala Glu Gly Val Arg Ala Val Met Arg305                 310                 315                 320Lys His Ala Ala Ser Leu Ala Pro Lys Phe Asn Lys Val Leu Glu Ile
            325                 330                 335Leu Asp Ser Arg Leu Ala Glu Tyr Gly Val Ala Gln Trp Thr Val Pro
        340                 345                 350Ala Gly Gly Tyr Phe Ile Ser Leu Asp Val Val Pro Gly Thr Ala Ser
    355                 360                 365Arg Val Ala Glu Leu Ala Lys Glu Ala Gly Ile Ala Leu Thr Gly Ala
370                 375                 380Gly Ser Ser Tyr Pro Leu Arg Gln Asp Pro Glu Asn Lys Asn Leu Arg385                 390                 395                 400Leu Ala Pro Ser Leu Pro Pro Val Glu Glu Leu Glu Val Ala Met Asp
            405                 410                 415Gly Val Ala Thr Cys Val Leu Leu Ala Ala Ala Glu His Tyr Ala Ser
        420                 425                 430

Claims (12)

1.一种在棒状杆菌细胞中可自主复制的重组DNA，该DNA包含编码天冬氨酸激酶(其中L-苏氨酸和L-赖氨酸的反馈抑制实质上被脱敏)的DNA序列、编码二氢二吡啶甲酸还原酶的DNA序列、编码二氢二吡啶甲酸合酶的DNA序列、编码二氨基庚二酸脱羧酶的DNA序列以及编码天冬氨酸转氨酶的DNA序列。
2.按照权利要求1的重组DNA，其中所说的天冬氨酸激酶(其中L-苏氨酸和L-赖氨酸的反馈抑制实质上被脱敏)是来源于棒状杆菌的天冬氨酸激酶，并且其中所说的天冬氨酸激酶是突变天冬氨酸激酶，在该突变天冬氨酸激酶中，相应于279位(在SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列中从N-末端开始计数)丙氨酸残基的氨基酸残基改变成非丙氨酸和非其α-亚单位中的酸性氨基酸的氨基酸残基，相应于30位(在SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列中从N-末端开始计数)丙氨酸残基的氨基酸残基改变成非丙氨酸和非其β-亚单位中的酸性氨基酸的氨基酸残基。
3.按照权利要求1的重组DNA，其中所说的编码二氢吡啶甲酸还原酶的DNA序列编码SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列。
4.按照权利要求1的重组DNA，其中所说的编码二氢吡啶甲酸合酶的DNA序列编码SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列。
5.按照权利要求1的重组DNA，其中所说的编码二氨基庚二酸脱羧酶的DNA序列编码SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列。
6.按照权利要求1的重组DNA，其中所说的编码天冬氨酸转氨酶的DNA序列编码SEQ ID NO：24或31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：24或31所示的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列。
7.一种具有天冬氨酸激酶(其中L-苏氨酸和I-赖氨酸的反馈抑制实质上被脱敏)的棒状杆菌，该棒状杆菌包含编码二氢二吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸还原酶的增强DNA序列、编码二氢吡啶甲酸合酶的增强DNA序列、编码二氨基庚二酸脱羧酶的增强DNA序列、编码天冬氨酸转氨酶的增强DNA序列。
8.按照权利要求7的棒状杆菌，该棒状杆菌是通过引入如权利要求1所限定的重组DNA转化过的。
9.一种用于产生L-赖氨酸的方法，该方法包括以下步骤：在适当的培养基中培养如权利要求8所限定的棒状杆菌，使得在所说的细菌的培养物中产生并积累L-赖氨酸，并从培养物收集L-赖氨酸。
10.一种编码包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列之蛋白质的DNA。
11.按照权利要求10的DNA，该DNA包含SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列中的879至2147位核苷酸的核苷酸序列。
12.载体pVK7，该载体在大肠杆菌和乳发酵短杆菌细胞中是可自主复制的，并且包含一个多克隆位点和lacZ’。
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