CN1151166C - 二尿苷四磷酸或其盐的晶体和其制备方法、以及制备该化合物的方法 - Google Patents

二尿苷四磷酸或其盐的晶体和其制备方法、以及制备该化合物的方法 Download PDF

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Abstract

具有高纯度且稳定的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸(U2P4)或其盐的晶体，制备该晶体的方法，所述方法包括使用阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化U2P4粗品，并用亲水性有机溶剂结晶出晶体。使用UMP作为原料并使用DPC和PPi、以高产率制备U2P4或其盐的方法，其特征在于，至少进行一个下述步骤：(a)在UMP-DPP与PPi-有机碱盐反应的步骤中分批加入UMP-DPP，(b)在UMP-DPP与PPi-有机碱盐反应的步骤中，在碱存在下进行该反应，和(c)U2P4合成反应后，用碱处理该反应产物。

Description

二尿苷四磷酸或其盐的晶体和其制备方法、以及 制备该化合物的方法
                        发明领域
本发明涉及可用作祛痰剂或肺炎治疗剂的活性组分的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸(U2P4)或其盐的稳定晶体；制备该晶体的方法；和高效率地制备U2P4或其盐的方法。
                         背景技术
式(I)所示P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸的四钠盐(U2P4·4Na)
Figure C9981171300031
具有祛痰作用，并且是期望作为祛痰剂或肺炎治疗剂开发的化合物(例如美国专利US 5789391、5763447、和5635160)。
迄今为止没有获得晶体形式的U2P4，仅制得了冻干产物形式的U2P4(参见WO 99/05155的实施例1)。通过常规方法制得的U2P4其纯度低至90％，并含有副产物。副产物的实例包括核苷5′-(多)磷酸，例如尿苷5′-四磷酸(UP4)、尿苷5′-三磷酸(UTP)、尿苷5′-二磷酸(UDP)、尿苷5′-一磷酸(UMP)；和二核苷多磷酸，例如P1，P4-二(尿苷5′-)三磷酸(U2P4)、和P1，P4-二(尿苷5′-)二磷酸(U2P2)。特别是难以将核苷5′-(多)磷酸例如UTP与U2P4分开，并且仅非常困难地通过常规纯化方法、即离子交换色谱法制得了高纯度U2P4(WO 99/05155，Biochimicaet Biophysica Acta，438，(1976)304-309)。
上述纯化和冻干产品具有诸如高吸湿性这样的缺点。因此，由U2P4制备药物必须在湿度被良好控制的特殊装置中进行。甚至在药物制备后，还必须将产品紧密包装起来。此外，因为冻干制剂的稳定性不佳，所以药物的有效期非常短，因而希望获得具有高纯度且稳定的U2P4晶体。
U2P4是由尿苷5′-一磷酸(UMP)通过使用活化剂例如氯磷酸二苯酯(DPC)和磷酸化剂例如焦磷酸盐(PPi)合成的。然而，常规方法提供的合成产率很低，即低至大约10wt.％(WO 99/05155的实施例4B)，并且可能永远不会成为实用方法。因此，还需要开发出能以高产率和大规模制备U2P4的方法。
鉴于上述情况，本发明的目的是提供U2P4或其盐的稳定晶体。本发明的另一目的是提供制备所述晶体的方法。本发明还有一个目的是提供以大规模高效率地制备U2P4的方法。
                      本发明公开
本发明者们已经对纯化U2P4的方法和由UMP合成U2P4的方法进行了深入的研究。本发明者们已经发现，通过阴离子交换色谱法和采用活性炭的色谱法(活性炭色谱法)纯化的U2P4易于结晶，并且在通过使用DPC和PPi由用作原料的UMP合成U2P4的过程中，使用特定反应条件能显著提高U2P4产率。基于这些发现，本发明得以完成。
因此，本发明提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的晶体。
本发明还提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸四钠盐的晶体，该晶体具有在采用Cu-Kα射线的X-射线衍射中在下述衍射角(2θ)附近表现出特征峰的晶体结构：5.9、11.5、12.4、15.4、17.2、18.0、19.8、和20.5(°)。
本发明还提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸四钠盐的晶体，该晶体具有在IR吸收光谱中在1690、1277、1233、1146、1116、和890(cm-1)附近波长表现出特征峰的晶体结构。
本发明还提供了制备P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的晶体的方法，该方法包括通过阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的粗产物，并将亲水性有机溶剂加到纯化的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的溶液中，以沉淀出晶体。
本发明还提供了通过使用氯磷酸二苯酯(DPC)和焦磷酸盐(PPi)由作为原料的尿苷5′-一磷酸(UMP)制备P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的方法，该方法包括至少一个下述处理步骤：
(a)在UMP磷酸二苯酯(UMP-DPP)与PPi-有机碱盐反应的步骤期间分批加入UMP-DPP；
(b)在碱存在下进行UMP-DPP与PPi-有机碱盐反应的步骤；
(c)进一步用碱处理合成的U2P4。
                           附图简述
附图1是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na四水合物晶体的X-射线衍射光谱。
附图2是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的X-射线衍射光谱。
附图3是通过冷冻干燥获得的U2P4的X-射线衍射光谱。
附图4是表明从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的晶形的照片。该照片是在偏光显微镜(放大率：440)下拍摄的，其中在影像中的1cm相当于23λm。
附图5是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的IR吸收光谱。
附图6是通过冷冻干燥获得的U2P4的IR吸收光谱。
附图7是从甲醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的X-射线衍射光谱。
                 实施本发明的最佳方式
本发明U2P4或其盐的晶体是这样获得的：使用特殊手段纯化U2P4或其盐的粗产物，将亲水性有机溶剂加到纯化的U2P4或其盐的溶液中，以使溶质作为结晶沉淀出来。在下文中将按照(1)纯化U2P4或其盐和(2)结晶U2P4或其盐来描述本发明。
(1)纯化U2P4或其盐
可通过联合使用的阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化U2P4或其盐。虽然这两种色谱技术可以以任意顺序进行，但是从改善U2P4纯度的角度来看，阴离子交换色谱法优选在活性炭色谱法之前进行。
在上述色谱技术中，可使用苯乙烯或丙烯酸树脂作为阴离子交换树脂。可使用的树脂的实例包括强碱性阴离子交换树脂例如AMBERLITEIRA 402(Rohm & Haas Co.)、DIAION PA-312、和DIAION SA-11A(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)，和弱碱性阴离子交换树脂例如AMBERLITE IRA 67(Rohm & Haas Co.)和DIAION WA-30(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)。
活性炭可以是粉碎或定形成颗粒的色谱级活性炭，并可包括市售产品(例如Wako Pure Chemical Industries，Ltd.和FutamuraKagaku Kogyo的产品)。
色谱法可以以分批方式进行，或者可通过使用柱来进行。当进行柱色谱法时，对于阴离子交换色谱法，可使用酸的水溶液或其与具有增强离子强度的盐例如氯化钠的混合物作为洗脱剂；对于活性炭柱色谱法，可使用水或碱例如氢氧化钠的水溶液作为洗脱剂。为了适当确定各洗脱剂的浓度，可在0.001M-10M范围内进行小规模预先试验。
(2)结晶U2P4或其盐
通过将亲水性有机溶剂加到由此纯化的U2P4或其盐的溶液中来结晶U2P4或其盐。
可使用的亲水性有机溶剂的实例包括具有6个或低于6个碳原子的醇，例如甲醇和乙醇；酮例如丙酮；醚例如二氧杂环己烷；腈例如乙腈；和酰胺例如二甲基甲酰胺。其中醇、尤其是乙醇是特别优选的。
更具体而言，任选处理由此纯化的U2P4或其盐的溶液、或通过将该溶液浓缩所获得的浆状物以把pH调节至6-9，在60℃或60℃以下温度将亲水性有机溶剂加到该溶液或浆状物中，以使溶质作为稳定的U2P4晶体沉淀出来。
由此获得的本发明U2P4晶体含有(1)95％或95％以上的U2P4，和(2)5％或低于5％的其它同系化合物。
在本发明中，其它同系化合物包括核苷5′-(多)磷酸，例如UP4、UTP、UDP、和UMP；和二核苷多磷酸例如O和U2P2。
更优选地，U2P4晶体含有(1)97％或97％以上的U2P4，(2)1％或低于1％的UDP，和(3)1％或低于1％的UTP。特别优选地，U2P4晶体含有(1)98％或98％以上的U2P4，(2)0.5％或低于0.5％的UDP，和(3)0.5％或低于0.5％的UTP。
本发明高纯度U2P4晶体可以呈盐、水合物、或盐水合物的形式。盐的实例包括可药用盐例如碱金属盐如钠盐和钾盐；碱土金属盐例如钙盐和镁盐；和铵盐。U2P4可被1-4个金属原子取代以形成盐。
上述水合物可包含3-8个结合或附着在一个U2P4分子上的水分子，上述盐水合物可包含3-8个结合或附着在一个U2P4碱金属盐分子上的水分子。
优选的U2P4晶体的实例包括U2P4·4Na晶体及其水合物。U2P4·4Na晶体在采用Cu-Kα射线的X-射线衍射中在下述衍射角(2θ)附近表现出特征峰：5.9、11.5、12.4、15.4、17.2、18.0、19.8、和20.5(°)(误差范围±0.1°)，并在IR吸收光谱中在1690、1277、1233、1146、1116、和890(cm-1)附近波长表现出特征峰(误差范围±2cm-1)。此外，与常规冻干产品相比。U2P4·4Na晶体易于操作，并非常有用，这是因为该晶体在高温、高湿度条件下是稳定的，并且晶体的水分含量稳定在5-15wt.％、抑制了进一步吸湿。
如上所述，由此获得的本发明U2P4·4Na晶体含有(1)95％或95％以上的U2P4，和(2)5％或低于5％的其它同系化合物。此外，如上所述，优选的U2P4晶体包括含有(1)97％或97％以上的U2P4、(2)1％或低于1％的UDP、和(3)1％或低于1％的UTP的晶体，特别是含有(1)98％或98％以上的U2P4，(2)0.5％或低于0.5％的UDP，和(3)0.5％或低于0.5％的UTP的晶体。
此外，本发明U2P4或其盐的晶体还包括其互变异构体。
可任选将本发明U2P4或其盐的晶体通过常规方法干燥例如减压干燥、在气流下干燥、或通过加热干燥，然后置于容器(例如瓶、袋、罐、安瓿)中。可包装在容器中以使容器开放、封闭、气密、或密封。从维持晶体的贮存稳定性来看，开放条件不是优选的。
下面将描述合成U2P4的高效方法。
在常规方法中，U2P4或其盐主要是由用作原料的尿苷5′-一磷酸(UMP)通过使用活化剂例如氯磷酸二苯酯(DPC)和磷酸化剂例如焦磷酸盐(PPi)合成的。具体来说，将DPC和三丁基胺加到UMP的三丁基胺盐中，以制得用作反应性中间体的UMP磷酸二苯酯(UMP-DPP)，该中间体与三丁基胺焦磷酸盐(TBA-PPi)反应，以约9.6％的产率制得U2P4或其盐(WO 99/05155的实施例4B)。
本发明方法的特征在于，进行至少一个下述处理步骤：(a)在UMP-DPP与PPi-有机碱盐反应的常规步骤期间分批加入UMP-DPP；(b)在碱存在下进行UMP-DPP与PPi-有机碱盐的反应；(c)再用碱处理合成的U2P4。2个或更多个上述步骤可联合进行。
步骤“(a)分批加入UMP-DPP”是指，分几批而不是一次性加入UMP-DPP，其中UMP-DPP的总摩尔量必须是PPi-有机碱盐的至少2倍。例如，将PPi-有机碱盐与等摩尔量的UMP-DPP反应，并重复该步骤。虽然对UMP-DPP的分批加入次数没有任何特别限定，但是从提高产率的角度来看，分2-3次加入是优选的。
PPi-有机碱盐的实例包括己胺盐、二丁基胺盐、三乙胺盐、和三丁基胺盐。在与UMP-DPP的反应中，可将PPi-有机碱盐溶于溶剂中。溶剂的实例包括酰胺，例如DMF、DMAC、和甲酰胺；环状醚，例如二氧杂环己烷和四氢呋喃；酮例如丙酮；和二甲基咪唑烷酮、六甲基磷酰三胺、二甲亚砜、乙腈、或它们两种或更多种的混合物。然后将UMP-DPP加到该溶液中，将该混合物在室温反应大约30分钟-5小时。
步骤“(b)在碱存在下进行UMP-DPP与PPi-有机碱盐的反应”是指在碱存在下进行的反应。碱的实例包括吡啶类碱例如吡啶、2，6-二甲基吡啶、2，4-二甲基吡啶、α-，β-，γ-甲基吡啶、2，4-二甲基氨基吡啶、和α-，β-，γ-三甲基吡啶，其中吡啶是特别优选的。用于本发明的碱还包括用于该反应的碱性溶剂。对碱的浓度没有特别限制。按UMP计，优选加入6当量或更多当量、更优选18当量或更多当量的碱。
此外，步骤“再用碱处理合成的U2P4”是指用水将含有合成的U2P4的液体的反应终止，并用有机碱或无机碱例如氢氧化钠、氨、氢氧化钾、吡啶、三乙胺、或碳酸钠的溶液处理该混合物。在常规方法中，是直接纯化该被终止反应的液体。然而，与该常规方法相比，用碱处理能改善U2P4的分离收率。
在用碱的处理中，用水处理含有合成的U2P4的液体，将碱加到该混合物中以使该混合物的pH变为大约8-13、优选10-12。将该混合物在室温反应大约10分钟-5小时。
UMP-DPP可通过常规方法由UMP合成制得。例如，将通过常规方法制得的UMP三烷基胺盐例如UMP三丁基胺盐溶于溶剂中。溶剂的实例包括酰胺，例如DMF和二甲基乙酰胺(DMAC)；环状醚，例如二氧杂环己烷和四氢呋喃；酮例如丙酮；和二甲基咪唑烷酮、六甲基磷酰三胺、或它们的混合物。然后将DPC以及，如果需要的话，三烷基胺加到该溶液中，并将该混合物在室温反应大约30分钟-5小时，以合成用作反应性中间体的UMP-DPP。
                          实施例
下面通过实施例更详细地描述本发明。
实施例1合成U2P4或其盐
(1)碱的作用
将DMAC(8mL)加到脱水尿苷5′-一磷酸三丁基胺盐(UMP-TBA)(6.2mmol)中，在搅拌下向该混合物中滴加DPC(1.7mL)。将由此获得的混合物在室温反应1小时以形成UMP-DPP，然后将TBA(7.6mL)加到该反应混合物中，再搅拌10分钟。其间将脱水TEA-PPi(3.0mmol)溶于吡啶(1.7mL)，将由此制得的溶液加到UMP-DPP反应混合物中。然后将该混合物在室温搅拌3小时，向该混合物中加入水，以终止反应。通过HPLC(在262nm)分析所得反应混合物，结果表明以18.3％的产率制得了目标产物U2P4。
从该结果可清楚地看出，当将UMP-DPP与TEA-PPi在碱(吡啶)存在下反应时，可以以是常规方法所获得的产率的约2倍的产率合成到U2P4。
(2)联合使用碱与碱处理的作用
将DMAC(8mL)加到脱水尿苷5′-一磷酸三丁基胺盐(UMP-TBA)(6.2mmol)中，在搅拌下向该混合物中滴加DPC(1.7mL)。将由此获得的混合物在室温反应1小时以形成UMP-DPP，然后将TBA(7.6mL)加到该反应混合物中，再搅拌10分钟。其间将脱水TEA-PPi(3.0mmol)溶于吡啶(1.7mL)，将由此制得的溶液加到UMP-DPP反应混合物中。然后将该混合物在室温搅拌3小时，向该混合物中加入水，以终止反应。将30％氢氧化钠溶液加到上述所得反应混合物中以把pH调节至11.0，将该混合物静置过夜。通过HPLC(在262nm)分析所得反应混合物，结果表明以29.7％的产率制得了目标产物U2P4。
从该结果可清楚地看出，当将UMP-DPP与TEA-PPi在碱(吡啶)存在下反应、并且还用碱处理时，可以以是常规方法所获得的产率的约3倍的产率合成出U2P4。
(3)碱和分批加入UMP-DPP的作用
将甲酰胺(1.5mL)和吡啶(1.5mL)加到脱水焦磷酸的三乙胺盐(TEA-PPi)(6mmol)中，将该混合物在容器中搅拌。其间，在另一容器中，将DMAC(4.3mL)、二氧杂环己烷(4.8mL)和三丁基胺(TBA)(5.8mL)加到脱水尿苷5′-一磷酸三丁基胺盐(UMP-TBA)(12mmol)中，并搅拌该混合物。然后将DPC(2.5mL)滴加到该混合物中，把由此获得的混合物在室温再搅拌1小时，以形成UMP-DPP。将一半UMP-DPP反应混合物滴加到含有TEA-PPi的容器中，将该反应在室温进行1小时。然后将吡啶(1.5mL)加到该混合物中，把剩余的UMP-DPP反应混合物滴加到该容器中。将由此获得的反应混合物在室温再反应1小时，把水加到该混合物中以终止该反应。通过HPLC(在262nm)分析所得反应混合物，结果表明以29.5％的产率制得了目的产物U2P4。
从该结果可清楚地看出，当将UMP-DPP分2次加入、并且UMP-DPP与TEA-PPi在碱(吡啶)存在下反应时，可以以是常规方法所获得的产率的约3倍的产率制得U2P4。
从该结果还可清楚地看出，将UMP-DPP分2次加入提供了29.5％的产率，是在上述(1)中获得的产率(18.3％)的约1.6倍。
(4)碱处理的作用
将甲酰胺(1.5mL)和吡啶(1.5mL)加到脱水焦磷酸的三乙胺盐(TEA-PPi)(6mmol)中，将该混合物在容器中搅拌。其间，在另一容器中，将DMAC(4.3mL)、二氧杂环己烷(4.8mL)和三丁基胺(TBA)(5.8mL)加到脱水尿苷5′-一磷酸三丁基胺盐(UMP-TBA)(12mmol)中，并将搅拌混合物。然后将DPC(2.5mL)滴加到该混合物中，把由此获得的混合物在室温再搅拌1小时，以形成UMP-DPP。将一半UMP-DPP反应混合物滴加到含有TEA-PPi的容器中，将该反应在室温进行1小时。然后将吡啶(1.5mL)加到该混合物中，把剩余的UMP-DPP反应混合物滴加到该容器中。将由此获得的反应混合物在室温再反应1小时，把水加到该混合物中以终止该反应。将30％氢氧化钠溶液加到上述所得反应混合物中以把pH调节至11.0，将该混合物放置过夜。通过HPLC(在262nm)分析所得反应混合物，结果表明以32.2％的产率制得了目标产物U2P4。
从该结果可清楚地看出，当在上述(3)中加上碱处理步骤时，产率提高了约10％，即从29.5％提高至32.2％。
实施例2制备U2P4·4Na晶体
将甲酰胺(10mL)和吡啶(15mL)加到脱水焦磷酸的三乙胺盐(TEA-PPi)(40.5mmol)中，将该混合物在容器中搅拌。其间，在另一容器中，将DMAC(50mL)、二氧杂环己烷(34mL)和三丁基胺(TBA)(30mL)加到脱水尿苷5′-一磷酸三丁基胺盐(UMP-TBA)(80mmol)中，并搅拌该混合物。然后将DPC(17.8mL)滴加到该混合物中，把由此获得的混合物在室温再搅拌1小时，以形成UMP-DPP。将一半UMP-DPP反应混合物滴加到含有TEA-PPi的容器中，将该反应在室温进行1小时。然后将4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(50mg)和吡啶(15mL)加到该混合物中，把剩余的UMP-DPP反应混合物滴加到该容器中。将由此获得的反应混合物在室温再反应2小时，把水加到该混合物中以终止该反应。用水将该反应混合物稀释至总体积为700mL，将氢氧化钠溶液加到该溶液中以把pH调节至10。将该溶液浓缩至200mL，在搅拌下将乙醇(250mL)加到该浓缩溶液中。将该溶液在4℃静置过夜，并通过倾析除去上清液。用水将由此获得的溶液稀释至总体积为250mL，通过HPLC(在262nm)分析，结果表明以30.0％的产率制得了目标产物U2P4。
用水将上述所得溶液(110mL)稀释至总体积为2000mL，将该稀释的溶液加到弱阴离子交换柱(AMBERLITE IRA-67)(C1型)(200mL)上。然后用水洗脱该柱，用0.18M盐酸洗脱下副产物，然后用含有0.35M NaCl的0.005M盐酸洗脱下目标产物U2P4(回收百分比：82.7％)。
将氢氧化钠溶液加到由此所得的洗脱液中以把pH调节至2.5。然后，将该洗脱液施加到活性炭柱(Taiko SGP)上，用水洗涤该柱，并用0.05M氢氧化钠溶液洗脱(回收百分比：84.9％)。
将由此所得的洗脱液的pH调节至7.6，将该洗脱液浓缩至38mL。然后将乙醇(57mL)加到该浓缩的溶液中，获得了3.1g U2P4·4Na晶体(水含量：7.8％)(分离收率：18.4％)。
(U2P4·4Na晶体的物理性质)
用迫风干燥器将在实施例2中制得的U2P4·4Na晶体在60℃干燥4小时，并进行仪器分析。此外，按照与WO 99/05155实施例1所述方法相同的方法制备U2P4·4Na冻干产品，并比较由此制得的产品和上述晶体的物理性质。
(1)仪器分析
1)纯度分析
通过高效液相色谱法将在实施例2中获得的U2P4·4Na晶体、和通过各色谱法纯化后含有U2P4的级分进行纯度分析。所得结果如表1所示。高效液相色谱法的条件如下：
柱：HITACHIGEL#3013-N(Hitachi Keisokuki Service的产品)
洗脱剂：10％CH3CN、0.18M NH4Cl、0.03M KH2PO4、和0.03MK2HPO4
检测方法：在262nm进行UV检测
表1
                     物质比例(wt.％)
U2P4及其类似物 反应混合物 阴离子交换柱后 活性炭柱后   结晶后
    UMPU2P2UDPU2P3UTPU2P4UP4     7.529.82.517.613.021.07.3     0.50.40.10.20.897.9(-)     0.3(-)0.2(-)0.498.6(-)     (-)(-)0.1(-)0.199.8(-)
(-)：低于检测限
2)水含量
通过卡尔·费歇尔法测定U2P4·4Na晶体的水分含量，结果发现水分含量为5-15wt.％，随着干燥程度而变。该结果清楚地表明，有3-8个水分子结合或附着在U2P4分子上。
3)熔点
通过常规方法测定U2P4·4Na晶体的熔点，结果测得其分解点约为223℃。冻干产品的分解点约为220℃。
4)X-射线衍射
使用X-射线衍射仪(型号：RINT2500V，Rigaku Denki的产品)在下述条件下进行U2P4·4Na晶体的X-射线测定。由此获得的X-射线衍射光谱如附图1和2所示，峰值数据如表2和3所示。
(测定条件)
X-射线管：Cu-Kα
X-射线输出：50kV-300mA
扫描速率：4.0°/分钟
扫描步长：0.02°
角测量范围：2-40°
狭缝：DS-0.5°，RS-0.15mm，SS-0.5°
预处理：用玛瑙研钵研磨
表2
  峰编号     2θ(°)   相对强度(I/I0)
    1561013151617181925293035     5.9611.5812.4215.4217.1818.0419.8620.5621.1821.4025.2227.5227.9830.60     10038794845558473515142454740
表3
  峰编号     2θ(°)   相对强度(I/I0)
    1561012141516171824293035     5.9611.5612.4215.4217.1818.0419.8620.5821.2021.4225.2027.5427.9630.60     10041905148639090565950565748
附图1和表2显示的是U2P4·4Na四水合物晶体的数据，附图2和表3显示的U2P4·4Na八水合物晶体的数据。此外，附图3显示了冻干产品的X-射线衍射光谱以作为参考。
5)吸湿性
将水分含量约为14％的U2P4·4Na晶体(八水合物)在下述条件下放置9天：a)25℃和57％的相对湿度；b)25℃和75％的相对湿度；和c)40℃和75％的相对湿度。在上述3种情形下没有观察到任何分解或重量改变。这证实了该晶体是稳定的并且没有任何吸湿性。将水分含量约为8％的U2P4·4Na晶体(四水合物)在40℃和75％相对湿度条件下放置9天。在该情形下水分含量增加至14-15％。然而，水分含量没有进一步增加，并且晶体是稳定的。
与之相反，当把冻干产品(初始水分含量：大约1％)在40℃和75％相对湿度条件下放置9天时，水分含量逐渐增加，并且在贮存的第7天，产物由于潮解而呈现泥浆状。
6)稳定性
将U2P4·4Na晶体(八水合物)和冻干产品分别置于各自的瓶子中，然后将瓶子密封并在60℃放置13天(加速试验)。没有观察到晶体分解，而观察到冻干产品U2P4·4Na纯度降低了约1.4％，这表明冻干产品有部分分解。
7)晶形
附图4显示了U2P4·4Na(八水合物)晶体的一般晶形的照片。
8)IR吸收光谱
使用JASCO 5000分光光度计以常规方式测定U2P4·4Na晶体(八水合物)和冻干产品的IR光谱。结果如附图5和6所示。U2P4·4Na的冻干产品在3416、1702、1266、1116、1079、和906(cm-1)处出现峰(附图6)，而U2P4·4Na晶体在3386、1690、1277、1233、1146、1116、和890(cm-1)处出现峰(附图5)。
实施例3制备U2P4·4Na八水合物晶体
将在实施例2中通过用柱处理而获得的含有U2P4的级分浓缩，以获得浆状物，将其pH调节至7.0。在搅拌下向该浆状物中逐渐加入甲醇，在冷却至10℃的条件下将该浆状物进一步搅拌，沉淀出了U2P4·4Na晶体。
通过卡尔·费歇尔法测定由此获得且干燥的U2P4·4Na晶体的水分含量，结果证实该晶体为八水合物。该晶体的X-射线衍射光谱如附图7所示，其峰值数据如表4所示。
             表4
  峰编号     2θ(°)   相对强度(I/I0)
    1568101112131419232430     5.9611.5812.4215.4017.2018.0419.8420.6221.4225.3827.5827.9830.64     100307750383882664836393733
                    工业实用性
如上所述，与冻干产品相比，通过本发明方法获得的U2P4或其盐的晶体具有高的纯度和稳定性以及较低的吸湿性，因此可以用作制备药物的原料。
本发明制备U2P4或其盐的方法实现了高产率，并使得能够大规模合成。

Claims (2)

1.制备P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸·4Na晶体的方法，该方法包括通过阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的粗品，并将C1-6醇溶剂加到纯化的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的溶液中，以将溶质作为晶体沉淀出。
2.根据权利要求1的方法，其中纯化包括阴离子交换色谱法和然后进行的活性炭色谱法。
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