WO2000020430A1 - Cristal de diuridine tetraphosphate ou sel correspondant et procede de fabrication - Google Patents

Cristal de diuridine tetraphosphate ou sel correspondant et procede de fabrication Download PDF

Info

Publication number
WO2000020430A1
WO2000020430A1 PCT/JP1999/005415 JP9905415W WO0020430A1 WO 2000020430 A1 WO2000020430 A1 WO 2000020430A1 JP 9905415 W JP9905415 W JP 9905415W WO 0020430 A1 WO0020430 A1 WO 0020430A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
salt
ump
peridine
tetraphosphate
dpp
Prior art date
Application number
PCT/JP1999/005415
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hideaki Maeda
Toshio Yamada
Hiroshi Sato
Yutaka Noda
Original Assignee
Yamasa Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to AT99970090T priority Critical patent/ATE222920T1/de
Priority to MXPA01003377A priority patent/MXPA01003377A/es
Priority to EP99970090A priority patent/EP1043329B1/en
Priority to HU0103754A priority patent/HU228681B1/hu
Priority to US09/582,642 priority patent/US6458946B1/en
Priority to BR9914453-0A priority patent/BR9914453A/pt
Priority to NZ510748A priority patent/NZ510748A/xx
Priority to IL14218199A priority patent/IL142181A/xx
Application filed by Yamasa Corporation filed Critical Yamasa Corporation
Priority to DE69902624T priority patent/DE69902624T2/de
Priority to BRPI9917911A priority patent/BRPI9917911B1/pt
Priority to JP2000574541A priority patent/JP3247685B2/ja
Priority to CA002345624A priority patent/CA2345624C/en
Priority to EA200100407A priority patent/EA003167B1/ru
Priority to AU60008/99A priority patent/AU747096C/en
Priority to SK440-2001A priority patent/SK283729B6/sk
Publication of WO2000020430A1 publication Critical patent/WO2000020430A1/ja
Priority to NO20011634A priority patent/NO317305B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/10—Expectorants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical

Definitions

  • the present invention relates to a stable crystal of P 1 , P 4 -di (peridine 5′—) tetraphosphate (U 2 P 4 ) or a salt thereof, which is useful as an expectorant or a therapeutic agent for pneumonia, and its production. And an efficient method for producing U 2 P 4 or a salt thereof.
  • PP is represented by the following formula (I) 4 - di (Urijin 5 '-) tetraphosphate • 4 sodium ⁇ ( ⁇ 2 ⁇ 4 ⁇ 4Na) has a sputum discharge inducing action, expectorant, pneumonia treatment (US Pat. No. 5,879,391, US Pat. No. 5,763,447, US Pat. No. 5,63,5,16) No. 0 publication)
  • U 2 P 4 has not been obtained as crystals, but has been prepared only as a lyophilized product (W099 / 0155, see Example 1). That is, the purity of U 2 P 4 obtained so far is usually as low as about 90%, and by-products generated in the synthesis of U 2 P 4 , for example, peridine 5′-tetraphosphate (UP 4 ) , Peridine 5 ' Nucleosides 5 '-(poly) phosphoric acids such as monotrilinic acid (UTP), peridine 5'-zirinate (UDP), peridine 5'-monophosphate (UMP), and P', P-di ( ⁇ lysine 5 '-) Application Benefits Hosufe Doo (U 2 P 3), P ', P 4 - di (Uriji down 5 '-) dinucleoside polyphosphate such as Jihosufuweto (U 2 P 2) was mixed .
  • UP 4 peridine 5′-tetraphosphate
  • P 4 - di
  • nucleoside 5 UTP etc. '- (poly) separation of the phosphoric acid compound and U 2 P 4 is difficult, the only ion-exchange chromatography one which has been used conventionally purified high purity - to prepare the degree of U 2 P was very difficult (WO 99/0155), Biochimica et Biophysica Acta, 438, (1976) 304-309.
  • freeze-dried products with low purity have disadvantages such as easy absorption of moisture, so when formulating ⁇ 2 ⁇ 4 as pharmaceuticals, special manufacturing equipment that considers moisture is required, Strict packaging was required afterwards, and the stability was poor, so it had to be a drug with a very short expiration date, and it was desired to obtain high-purity stable crystals.
  • U 2 P 4 uses peridine 5′-monophosphoric acid (UMP) as a starting material, and uses an activator such as diphenylphosphochloridate (DPC) and a phosphorylating agent such as pyrophosphate (PP i).
  • DPC diphenylphosphochloridate
  • PP i pyrophosphate
  • An object of the present invention is to provide a stable crystal of U 2 P 4 or a salt thereof suitable for being formulated as a pharmaceutical and a method for producing the same, and an efficient production suitable for mass synthesis of U 2 P 4
  • the purpose is to provide the law. Disclosure of the invention
  • the present inventors have made intensive studies relates Synthesis of U 2 P 4 with purification method and UMP of U 2 P 4, chromatography using an anion exchange chromatography and activated carbon (charcoal chromatography) the U 2 P 4 which is purified using Mochiiruko easily can be crystallized by a, and was used as a starting material UMP, a process for the preparation of U 2 P 4 or a salt thereof with the DPC and PP i, U 2 P by setting the specific reaction conditions
  • the present inventors have found that the synthesis yield of No. 4 is significantly improved, and have completed the present invention.
  • the present invention provides a crystal of P 1 , P 4 —di (peridine 5 ′ —) tetraphosphate or a salt thereof.
  • the present invention also provides a diffraction angle (20) force by X-ray diffraction using Cu-K line, 5.9, 11.5, 12.4, 15.4, 17.2. , 18.0, 19.8 and 20.5 (°) P 1 , P 4 —di (peridine 5 ′ —) tetraphosphate tetrasodium salt crystals with characteristic crystal structures showing characteristic peaks Is provided.
  • the present invention has a characteristic in the infrared absorption spectrum of the following: 169, 127, 127, 311 146, 111, and 890 (characteristics in the vicinity of cm P having a crystal structure showing peaks], P 4 - there is provided a tetraphosphate • 4 Natoriumu salt crystals - di (Urijin 5 ').
  • the present invention provides a method for purifying crude P 1 , P 4 -di (peridine 5′—) tetraphosphate or a salt thereof using anion exchange chromatography and activated carbon chromatography to obtain purified P 1 , P 4 - di (Urijin 5 '-) - di-to tetra-phosphine
  • PP 4 characterized in that to precipitate crystals by adding a hydrophilic organic solvent (Urijin 5' -) tetraphosphate or a It provides a method for producing salt crystals.
  • the present invention uses peridine 5'-monophosphate (UMP) as a starting material and diphenylphosphochloridate (DPC) and pyrophosphate (1).
  • UMP peridine 5'-monophosphate
  • DPC diphenylphosphochloridate
  • pyrophosphate (1) e.g., P 4 -Di (peridine 5')
  • P is characterized by performing at least one of the following (a) to (c): 1
  • P 4 -di (peridine 5'—) Provides a method for producing tetraphosphate or a salt thereof.
  • UMP diphenyl phosphate (UMP—DPP) with PP i—organic alkali salt, adding UMP—DPP in multiple portions;
  • FIG. 1 shows an X-ray diffraction spectrum of tetrahydrate of U 2 P 4 ⁇ 4Na crystals crystallized using ethanol.
  • Figure 2 shows the X-ray diffraction scan Bae spectrum of octahydrate U 2 P 4 ⁇ 4Na crystals were crystallized using ethanol.
  • FIG. 3 shows an X-ray diffraction spectrum of a freeze-dried U 2 P 4 product.
  • FIG. 4 is a photograph showing a crystal structure of an octahydrate of U 2 P 4 ⁇ 4Na crystals crystallized using ethanol. The photograph was taken with a polarizing microscope (magnification: 450 times), and 1 cm is equivalent to 23 m.
  • FIG. 5 shows the infrared absorption spectrum of the octahydrate of U 2 P 4 ⁇ 4Na crystals crystallized using ethanol.
  • FIG. 6 shows an infrared absorption spectrum of a freeze-dried U 2 P 4 product.
  • FIG. 7 shows an X-ray diffraction spectrum of an octahydrate of U 2 P 4 .4Na crystals crystallized using methanol.
  • the crystal of U 2 P 4 or a salt thereof of the present invention is obtained by purifying crude U 2 P 4 or a salt thereof by a specific means, and adding a hydrophilic organic solvent to the purified U 2 P 4 or a salt solution thereof. It is obtained by precipitating crystals.
  • Purification of U 2 P 4 or a salt thereof can be performed by using two types of chromatography, anion exchange chromatography and activated carbon chromatography. Any purification using both chromatography or may be performed first, first anion exchange chromatography row-,, followed by a charcoal chromatography - Kotka, from the viewpoint of improvement of purity U 2 P 4 preferable.
  • the anion exchange resin used here may be a resin based on a styrene or acrylic resin, and may be a strongly basic anion exchange resin (for example, Amber-Light I RA4022 [Rohm & Haas). DIAION PA-312, DIAION SA-11A [Mitsubishi Chemical Corporation]), or a weakly basic anion exchange resin (for example, Amberlite I RA67 [Rohm & Haas Co., Ltd.] And DIAION WA-30 [Mitsubishi Chemical Corporation]).
  • a strongly basic anion exchange resin for example, Amber-Light I RA4022 [Rohm & Haas).
  • DIAION PA-312, DIAION SA-11A Mitsubishi Chemical Corporation
  • DIAION WA-30 Mitsubishi Chemical Corporation
  • crushed or granulated activated carbon for chromatography may be used.
  • commercially available products such as those manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd. and Futmura Chemical Industries can be used.
  • Each chromatography may be in any form, such as a nozzle type or a column type.
  • an eluent for anion exchange column chromatography is an aqueous acid solution such as hydrochloric acid or a salt solution such as a salt solution.
  • Water or an aqueous alkali solution such as sodium hydroxide can be used as an eluent for activated carbon column chromatography.
  • the concentration of each eluent may be suitably determined from a range of 0.001 to 10M by a suitable small-scale test.
  • U 2 P 4 or crystallization of a salt thereof is carried out by the purified U 2 P 4 or a salt thereof obtained by adding a hydrophilic organic Solvent precipitate crystals.
  • hydrophilic organic solvent examples include alcohols having 6 or less carbon atoms, such as methanol and ethanol; ketones, such as acetone; ethers, such as dioxane; Examples thereof include nitriles such as cetonitrile and amides such as dimethylformamide, and particularly include alcohols, and preferably ethanol.
  • the purified U 2 P 4 or a salt solution thereof or a slurry obtained by concentrating the purified U 2 P 4 is adjusted to a pH of 6 to 9 if necessary, and the temperature is adjusted to the following temperature at 60:
  • a stable organic crystal of U 2 P 4 can be obtained by adding a hydrophilic organic solvent under the conditions to precipitate crystals.
  • the U 2 P 4 crystal of the present invention thus obtained has a purity of at least: 1) 95% or more of U 2 P 4 and 2) 5% or less of other related compounds.
  • the other analogous compounds UP 4, UTP, UDP, nucleoside 5 such as UMP '- means (poly) phosphoric acids, and U 2 P 3, U 2 P Jinukureoshi Dopori acid such as 2 .
  • 1 U 2 P 4 9 7% or more, 2 UDP 1% or less, 3 UTP 1% or less preferably has a purity of, in particular 1 upsilon 2 [rho 4 is 98% or more, 2 UDP is 0.5% or less, ⁇ 11? Having a purity of not more than 0.5%.
  • Such high-purity U 2 P 4 crystals may be in the form of salts, hydrates or hydrated salts, such as sodium salts, alkali metal salts such as potassium salts, calcium salts, magnesium salts, etc. Examples thereof include pharmaceutically acceptable salts such as alkaline earth metal salts, ammonium salts and the like.
  • the number of substitution of the salt includes those substituted with 1 to 4 metals.
  • the hydrate which water from 3 8 molecules to U 2 P 4 1 molecule bound or attached is exemplified.
  • examples of the hydrated salt include those in which 3 to 8 water molecules are bonded or attached to one molecule of an alkali metal salt of U 2 P 4 crystal.
  • U 2 P 4 salt crystals include, for example, U 2 P 4 ′ 4Na crystals or hydrates thereof.
  • U 2 P 4 '4Na crystal has a diffraction angle (2 2) force by X-ray diffraction using Cu-K line, 5.9, 11.5, 12.4, 15.4, 17 Characteristic around 2, 18.0, 19.8 and 20.5 (°) (error range ⁇ 0.1 °) A peak, also 1 6 9 In the infrared absorption spectrum 0, 1 2 7 7, 1 2 3 3 1 1 4 6 1 1 1 6 and 8 9 0 (cm around (error range is 2 cm 1)
  • the U 2 P 4 '4Na crystal has the following physical properties: it is stable under high temperature and high humidity conditions, its water content is stabilized at 5 to 15% by weight, and it does not exhibit hygroscopicity.
  • the crystals of U 2 P 4 or a salt thereof of the present invention are, if necessary, dried by a conventional method such as reduced pressure drying, ventilation drying, heating drying and the like, and then filled into containers (bottles, bags, cans, ampoules, etc.).
  • the sealed state of the container may be any of an open state, a closed state, an airtight state, and a sealed state, but is preferably not an open state from the viewpoint of maintaining storage stability.
  • U 2 P 4 or a salt thereof uses peridine 5′-monophosphate (UMP) as a starting material, which is activated using an activator such as diphenylphosphochloridate (DPC). This is done by reacting a phosphorylating agent such as pyrophosphate (PPi). Specifically, DPC and triptylamine are added to the tributylamine salt of UMP to obtain an activated form of UMP diphenylphosphonate (UMP-DPP), which is combined with triptylaminepyrophosphate. by reacting (TBA -PP i), about 9. had gained U 2 P 4 or a salt thereof is 6% yield (WO 9 9/0 5 1 5 5 , see example 4 B).
  • UMP peridine 5′-monophosphate
  • DPC diphenylphosphochloridate
  • the method of the present invention comprises the use of such a conventional UMP-DPP and PP
  • the step of reacting one of (a) two steps of adding UMP DPP in a plurality of times, (b) coexistence of a base, and (c) two steps of alkali treatment after the U 2 P 4 synthesis reaction
  • two or more types are combined.
  • “(a) UMP—DPP is added in multiple portions” means that the required amount of UMP—DP—required twice at a time is the required amount of UMP—DP, which is twice the molar amount of organic alcohol salt. Instead of adding, it is added in multiple portions. For example, first, PP i.
  • UMP-DPP One organic alkali salt and an equimolar UMP-DPP are reacted, then PP i one organic alkali salt and an equimolar UMP-DPP are added and reacted.
  • the number of additions of UMP-DPP is not particularly limited, and it is preferable to perform the addition twice or three times from the viewpoint of improving the yield.
  • the PPi-organic alkali salt mentioned here includes hexylamine salt, dibutylamine salt, triethylamine salt, triptylamine salt, etc. of PPi, and the reaction with UMP-DPP is carried out using the PPi-organic alkali salt.
  • Organic alkali salts are converted to amide solvents such as DMF and DMAC ⁇ formamide, cyclic ether solvents such as dioxane and tetrahydrofuran, ketone solvents such as acetone, dimethylimidazolidinone, hexamethyl phosphate triamide ', dimethyl It can be carried out by dissolving in a single or mixed solvent such as sulfoxide or acetonitrile, adding UMP-DPP thereto, and reacting at room temperature for about 30 minutes to 5 hours.
  • amide solvents such as DMF and DMAC ⁇ formamide
  • cyclic ether solvents such as dioxane and tetrahydrofuran
  • ketone solvents such as acetone, dimethylimidazolidinone, hexamethyl phosphate triamide ', dimethyl It can be carried out by dissolving in a single or mixed solvent such as sulfoxide or acetonitrile, adding UMP-DPP
  • “(b) coexisting with a base” means that the above-mentioned reaction between PP i—organic alkali salt and UMP—DPP is carried out in the coexistence of an optional base.
  • a base for example, pyridine Pyridine bases such as 2,6-lutidine, 2,4-rutidine, 1,4,6-picoline, 2,4-dimethylaminopyridine, and 2,4,6-collidine. preferable.
  • the case where such a base also serves as a reaction solvent is also included in the base of the present invention.
  • the concentration of the base is not particularly limited, and it is preferable to add 6 equivalents or more, preferably 18 equivalents or more to UMP.
  • (c) alkali treatment after the U 2 P 4 synthesis reaction means that the U 2 P 4 synthesis solution is quenched with water, and then sodium hydroxide, ammonia, hydroxide hydroxide, pyridine, triethylamine, sodium carbonate. Refers to treatment using an organic or inorganic alkaline solution. By performing such a treatment, it is possible to further improve the isolation yield of U 2 P 4 as compared with the conventional method in which purification is performed directly after quenching.
  • Such an alkaline treatment is performed by adding alkali to the U 2 P 4 synthesis solution after quenching with water so that the pH becomes 8 to 13, preferably about 10 to 12, and the mixture is added at room temperature for 10 minutes. The reaction is performed for about 5 hours.
  • UMP trialkylamine salts such as UMP triptylamine salts prepared by a conventional method can be prepared using DMP, dimethylacetamide (DMAC), etc.
  • DMAC dimethylacetamide
  • Dissolve in single or mixed solvents such as amide solvents, cyclic ether solvents such as dioxane, tetrahydrofuran, etc., ketone solvents such as acetone, dimethylimidazolidinone, hexamethylphosphoric triamide, and add DPC and trialkylamine as necessary.
  • the activated form of UMP-DPP can be synthesized by reacting at room temperature for about 30 minutes to 5 hours.
  • U 2 P 4 can be synthesized in less than twice the yield of the conventional method by performing the reaction between UMP-DPP and TEA-PPi in the presence of a base (pyridine). .
  • the yield of 18.3% was 29.5%, and it was found that the yield was improved by about 1.6 times.
  • TEA-PPi triethylamine pyrophosphate salt
  • a separate container 4.3 mL of DMAC, 4.8 mL of dioxane and 5.8 mL of tributylamine (TBA) were added to 12 mmo ⁇ 0 of dehydrated tributylamine salt of peridine 5'-monophosphoric acid (UMP TBA).
  • UMP-TBA (8 Ommo i) was added with 5 OmL of DMAC, 34 mL of dioxane and 3 OmL of tributylamine (TBA), and stirred.
  • the obtained eluate was adjusted to pH 2.5 with a sodium hydroxide solution. Then, it was applied to 40 OmL of activated carbon column (Taiko SGP), washed with water, and eluted with 0.05 M sodium hydroxide solution (recovery rate: 84.9%).
  • the U 2 P 4 .4Na crystals prepared in Example 2 were air-dried at about 60 ° C. for about 4 hours, and then subjected to instrumental analysis and the like. Further, the freeze-dried product of U 2 P 4 ⁇ 4 Na prepared in WO 9 9/0 5 1 5 5 the same way as the method described in Example 1 of comparison physical properties of the crystal products.
  • Table 1 shows the results obtained by analyzing the purity of the U 2 P 4 ⁇ 4Na crystal obtained in Example 2 and the purity of the U 2 P 4 fraction after purification by each chromatography treatment, using a high performance liquid chromatography method.
  • the high performance liquid chromatography method was performed under the following conditions.
  • the decomposition point was about 223 ° C.
  • the decomposition point of the freeze-dried product is about 220. -
  • Figures 1 and 2 show the X-ray diffraction spectrum measured using the Rigaku Denki X-ray diffractometer RINT2500 V under the following measurement conditions, and the peak data are shown in Tables 2 and 3. Show.
  • Angle measurement range 2 to 40.
  • FIG. 1 and Table 2 are data of 4 hydrate of upsilon 2 [rho 4 ⁇ 4Na crystals, 2 ⁇ beauty Table 3 shows the data octahydrate U 2 P 4 '4Na crystals.
  • Figure 3 shows the X-ray diffraction spectrum of the freeze-dried product for reference.
  • Fig. 4 shows a photograph of a typical crystal of U 2 P.,-4Na crystal (octahydrate).
  • Example 3 Production of U 2 P 4.4Na 4 octahydrate crystal Concentrate the U 2 P 4 fraction obtained by the column treatment in Example 2 to prepare a slurry, adjust the pH to 7.0, gradually add methanol with stirring, and cool to 10 ° C the slurry was stirred and allowed to crystallize U 2 P 4 ⁇ 4 Na crystals while.
  • the crystals of U 2 P 4 or a salt thereof obtained by the method of the present invention have high purity, are extremely stable without hygroscopicity compared with freeze-dried products, and are useful as pharmaceutical raw materials.
  • U 2 P 4 or preparation of a salt thereof of the present invention it is possible to manufacture the U 2 P 4 or a salt thereof in a high yield, enables the mass production of U 2 P 4 or a salt thereof I do.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

明 細 書 ジゥリジンテトラホスフヱート又はその塩の結晶及びその製造法、 並びに該化合 物の製造法 技術分野
本発明は、 去痰剤、 肺炎治療薬として有用な P1, P4—ジ （ゥリ ジン 5' —） テ ト ラ ホスフ ェ ー ト （U2P4) 又はその塩の安定結晶及びその製造法、 並び に U2P4又はその塩の効率的製造法に関する。 背景技術
下記式 （ I ) で表される P P 4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート • 4ナトリウ厶塩 （υ2Ρ4· 4Na) は、 痰排出誘導作用を有し、 去痰剤、 肺炎 治療薬としての開発が期待されている化合物である （米国特許 5. 7 8 9, 3 9 1 号公報、 米国特許 5, 7 6 3, 4 4 7号公報、 米国特許 5, 6 3 5, 1 6 0号公報等）
Figure imgf000003_0001
これまでに、 U2P4は結晶としては取得されておらず、 凍結乾燥品としてのみ 調製されていた （W09 9 / 0 5 1 5 5、 実施例 1参照） 。 即ち、 これまでに得 られている U2P4の純度は、 通常 9 0%前後と低く、 U2P4の合成において生成 される副生成物、 例えばゥリジン 5 ' —テトラリン酸 （U P4 ) 、 ゥリジン 5 ' 一 トリ リ ン酸 （UTP) 、 ゥリジン 5' —ジリ ン酸 （UDP) 、 ゥリジン 5' ― モノリン酸 （UMP) 等のヌクレオシド 5' — (ポリ） 燐酸類、 及び P'， P — ジ （ゥ リ ジン 5 ' —） ト リ ホスフェー ト （U2 P 3) 、 P '， P 4—ジ （ゥリジ ン 5' —） ジホスフヱート （U2P2) 等のジヌクレオシドポリ燐酸類が混在して いた。 特に、 UTP等のヌクレオシド 5' — （ポリ） 燐酸類と U2P4との分離は 難しく、 従来精製に使用されていたイオン交換クロマトグラフィ一だけでは高純 - 度の U2P を調製することは非常に困難なことであった （WO 9 9 / 0 5 1 5 5、 Biochimica et Biophysica Acta, 438，（1976)304- 309 ) 。
斯かる純度が低い凍結乾燥品は、 吸湿しやすい等の欠点を有することから、 υ2Ρ4を医薬品として製剤化する際には湿気に配慮した特別の製造装置を必要と したり、 製剤製造後も厳重な包装を要し、 また安定性が悪いため、 有効期限の非 常に短い薬剤とならざるを得ず、 高純度の安定結晶体の取得が望まれていた。
一方、 U2P4は、 ゥリジン 5' —モノリン酸 （UMP) を出発原料とし、 ジフ ェニルホスホクロリデート（DP C)等の活性化剤とピロホスフェート （PP i ) 等のリン酸化剤を用いて合成される力、'、 従来法によれば合成収率は約 1 0%弱と 極めて低く （WO 9 9 / 0 5 1 5 5 , 実施例 4 B参照） 、 到底実用的な方法とは なり得なかった。 従って、 高収率で大量合成に適した製造法の開発が切望されて いた。
本発明の目的は、 医薬品として製剤化するのに適した U2 P 4又はその塩の安定 結晶及びその製造法を提供すること、 並びに U 2 P 4の大量合成に適した効率の良 い製造法を提供することを目的とする。 発明の開示
本発明者らは、 U2P4の精製法及び UMPを用いた U2P4の合成法に関し鋭意 研究を重ねた結果、 陰イオン交換クロマトグラフィーと活性炭を用いたクロマト グラフィー （活性炭クロマトグラフィー） を用いて精製された U2P4を用いるこ とにより容易にこれを結晶化できること、 及び UMPを出発原料とし、 DPCと PP iを用いて U2P4又はその塩を製造する方法において、 特定の反応条件を設 定することにより U2P 4の合成収率が格段に向上することを見いだし、 本発明を 完成するに至った。
即ち本発明は、 P1, P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート又はその 塩の結晶を提供するものである。 - また本発明は、 C u— Kひ線を用いた X線回折による回折角 （ 20) 力、、 5. 9， 1 1. 5, 1 2. 4， 1 5. 4, 1 7. 2, 1 8. 0, 1 9. 8及び 20. 5 (° ) 付近に特徴的ピークを示す結晶構造を有する P1, P4—ジ （ゥリ ジン 5' —） テトラホスフェート ' 4ナトリウム塩結晶を提供するものである。 また本発明は、 赤外吸収スぺク トルにおいて、 1 6 9 0、 1 2 7 7、 1 23 3. 1 1 4 6、 1 1 1 6及び 8 9 0 (cm—リ 付近において特徴的なピー クを示す結晶構造を有する P]， P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート • 4ナトリゥム塩結晶を提供するものである。
また本発明は、 粗 P1, P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート又はそ の塩を陰イオン交換クロマトグラフィ一と活性炭クロマトグラフィ一とを用いて 精製し、 精製された P1, P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフヱート又はそ の塩溶液に、 親水性有機溶媒を加えて結晶を析出させることを特徴とする P P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート又はその塩の結晶の製造法を提 供するものである。
更に本発明は、 ゥリジン 5' —モノリン酸 （UMP) を出発原料とし、 ジフヱ ニルホスホクロリデート （DPC) とピロホスフェート （ 1 ) を用ぃて？'， P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフヱ一ト又はその塩を製造する方法にお いて、 下記 （a) 〜 （c) のいずれか 1つ以上の処理を行うことを特徴とする P1 ， P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート又はその塩の製造法を提 供するものである。 (a) UMPジフエ二ルホスフェート （UMP— DPP) と PP i—有機アル 力リ塩を反応させる工程において、 UMP— DP Pを複数回に分けて添加するこ と、
(b) UMP— DPPと PP i一有機アル力リ塩を反応させる工程において、 塩基を共存させること、
(c) U2P 4合成反応後にアルカリ処理すること。 - 図面の簡単な説明
図 1は、 エタノールを用いて晶析させた U2P4 · 4Na結晶の 4水和物の X線 回折スぺク トルを示したものである。
図 2は、 エタノールを用いて晶析させた U2P4 · 4Na結晶の 8水和物の X線 回折スぺクトルを示したものである。
図 3は、 U 2 P 4の凍結乾燥品の X線回折スぺクトルを示したものである。
図 4は、 エタノールを用いて晶析させた U2P4 · 4 Na結晶の 8水和物の結晶 構造を示す写真である。 該写真は偏光顕微鏡 （倍率 44 0倍） を用いて撮影した もので、 1 cmは 23〃mに相当する。
図 5は、 エタノールを用いて晶析させた U2P4 · 4Na結晶の 8水和物の赤外 吸収スぺク トルを示したものである。
図 6は、 U2P 4の凍結乾燥品の赤外吸収スぺクトルを示したものである。
図 7は、 メタノールを用いて晶析させた U2P4 · 4Na結晶の 8水和物の X線 回折スぺクトルを示したものである。 発明を実施するための最良の形態
本発明の U 2 P 4又はその塩の結晶は、 粗 U2P4又はその塩を特定の手段で精製 し、 精製された U2P4又はその塩溶液に、 親水性有機溶媒を加えて結晶を析出さ せるこ とにより得られる。 以下、 （ 1 ) U2P4又はその塩の精製と、 U2P 4又はその塩の結晶化に分けて説明する。
( 1 ) U2P4又はその塩の精製
U2 P 4又はその塩の精製は、 陰イオン交換クロマトグラフィーと活性炭クロマ トグラフィ一の 2つのクロマトグラフィ一を併用することにより行うことができ る。 両クロマトグラフィーを用いた精製は何れを先に行ってもよいか、 最初に陰 イオン交換クロマトグラフィーを行レ、、 次いで活性炭クロマトグラフィーを行う- ことカ、 U2P 4の純度向上の点から好ましい。
ここで用いられる陰イオン交換樹脂としては、 スチレン系或いはアクリル系樹 脂を基材とする樹脂であればよく、 強塩基性陰イオン交換樹脂 （例えば、 アンバ —ライ ト I RA4 02 〔ローム &ハース社製〕 、 ダイアイオン P A— 3 1 2、 ダ ィァイオン SA - 1 1 A 〔三菱化学社製〕 ） 、 又は弱塩基性陰イオン交換樹脂 (例えば、 アンバーライ ト I RA 6 7 〔ローム &ハース社製〕 、 ダイアイオン WA - 30 〔三菱化学社製〕 ） のいずれを用いてもかまわない。
活性炭としては、 破砕状或し、は粒状に整形されたクロマト用活性炭を使用すれ ばよく、 例えば和光純薬工業社、 二村化学工業社製等の市販品を使用できる。 各クロマトグラフィーは、 ノくツチ式、 カラム式等いずれの形式であってもよく、 カラム式で行う場合、 陰イオン交換カラムクロマトグラフィ一の溶出剤としては、 塩酸等の酸水溶液或いはこれに食塩等を添加してィォン強度を高めたもの、 活性 炭カラムクロマトグラフィ一の溶出剤としては、 水又は水酸化ナトリゥム等のァ ルカリ水溶液をそれぞれ使用することができる。 各溶出剤の濃度は、 0. 00 1 〜 1 0Mの範囲内から好適なものを小規模試験により適宜決定すればよい。
(2) U2P 4又はその塩の結晶化
U2P4又はその塩の結晶化は、 得られた精製 U2P4又はその塩に親水性有機溶 媒を加えて結晶を析出させることにより行われる。
ここで使用できる親水性有機溶媒としては、 メタノール、 エタノール等炭素数 6以下のアルコール類、 アセトン等のケトン類、 ジォキサン等のエーテル類、 ァ セトニトリル等の二トリル類、 ジメチルホルムァミ ド等のァミ ド類等を例示する ことができ、 特にアルコール類、 好ましくはエタノールが挙げられる。
より具体的には、 精製 U 2 P 4又はその塩溶液或し、はこれを濃縮して得られるス ラリ一液に、 所望により p Hを 6〜 9に調整後、 6 0で以下の温度条件下で親水 性有機溶媒を添加し、 結晶を析出させることにより U2P4の安定結晶を得ること ができる。 _ 力、く して得られた本発明の U 2 P 4結晶は少なくとも、 ① U2 P 4が 9 5 %以上、 ②その他の類縁化合物が 5 %以下、 の純度を有するものである。
ここで、 その他の類縁化合物としては、 UP4 、 UTP、 UDP、 UMP等の ヌ クレオシド 5 ' — （ポリ） 燐酸類、 及び U2P3、 U2P 2等のジヌクレオシ ドポリ燐酸類を意味する。
このような U2P 4結晶の中でも更に、 ① U2P4が 9 7%以上、 ② UDPが 1 % 以下、 ③ UTPが 1 %以下、 の純度を有するものが好ましく、 特に① υ2 Ρ 4 が 9 8 %以上、 ② UDPが 0. 5%以下、 ©11丁？が0. 5 %以下、 の純度を有 するものが好ましい。
このような高純度の U2P4結晶は、 塩、 水和物又は含水塩の形態であってもよ く、 塩としてはナトリウム塩、 カリウム塩等のアルカリ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩等のアル力リ土類金属塩、 アンモニゥム塩等の薬学的に許容され る塩が例示される。 塩の置換数は、 1〜4個の金属が置換したものが挙げられる。 また、 水和物としては U 2 P 41分子に対し 3〜 8分子の水が結合又は付着した ものが例示される。 さらに、 含水塩としては、 例えば U2P4結晶のアルカリ金属 塩 1分子に 3〜 8分子の水分子が結合又は付着したものを挙げることができる。
U2P4塩結晶の好ましい例としては、 例えば U2P4 ' 4Na結晶又はその水和 物が例示される。 U2P4 ' 4Na結晶は、 C u— K 線を用いた X線回折による 回折角 （ 2 Θ ) 力、 5. 9 , 1 1. 5 , 1 2. 4， 1 5. 4 , 1 7. 2 , 1 8. 0, 1 9. 8及び 20. 5 (° ) 付近 （誤差範囲は ± 0. 1 ° ) に特徴的 ピークを示し、 また赤外線吸収スペク トルにおいて 1 6 9 0、 1 2 7 7、 1 2 3 3、 1 1 4 6、 1 1 1 6及び 8 9 0 ( cm 付近 （誤差範囲は士 2 cm 1) に特徴的なピークを示す。 更に U2P4 ' 4Na結晶は、 高温、 多湿条件 下で安定で、 水分含量は 5〜1 5重量％で安定化し、 吸湿性を示さない、 という 物性を有することから取り扱し、易く、 従来の凍結乾燥品と比べて極めて有用なも のである。 - 斯かる U2P4 ' 4Na結晶は、 当然のことながら上述したように 9 5 %以上の 純度を有し、 その他の類縁化合物総量が 5 %以下である。 また、 上述と同様に、 ① U2P4が 9 7%以上、 ② UDPが 1 %以下、 ③ UTPが 1？ 以下、 の純度を有 するもの、 及び① U 2 P 4が 9 8%以上、 ② UDPが 0. 5 %以下、 ③ UTPが 0. 5%以下、 の純度を有するものを好ましい例として挙げることができる。 尚、 本発明の U2P4又はその塩の結晶には互変異性体も包含されうる。
本発明の U2P 4又はその塩の結晶は、 必要により減圧乾燥、 通風乾燥、 加熱乾 燥等の通常の方法により乾燥後、 容器 （ビン、 袋、 カン、 アンプル等） に充塡す る。 容器における封入状態は、 開放、 密閉、 気密、 密封のいずれの状態であって もよいが、 保存安定性を維持する観点から開放状態でない方が好ましい。
次に U 2 P 4の効率的合成法について説明する。
従来、 U2P4又はその塩の主たる合成は、 ゥリジン 5' —モノリン酸 （UMP) を出発原料とし、 これをジフエニルホスホクロリデート （DPC) 等の活性化剤 を用いて活性体とし、 これにピロホスフェート （PP i ) 等のリン酸化剤を反応 させることにより行われている。 具体的には UMPのトリブチルァミン塩に、 D P Cとトリプチルァミンを加え、 活性化体である UMPジフヱニルホスフエ一 ト （UMP— DPP) を得、 これとトリプチルァミンピロホスフエ一ト （TBA -PP i ) を反応させることにより、 約 9. 6 %の収率で U2P 4又はその塩を 得ていた （WO 9 9/0 5 1 5 5、 実施例 4 B参照） 。
本発明方法は、 斯かる従来法の UMP— DPPと PP i一有機アルカリ塩とを 反応させる工程において、 （a) UMP DPPを複数回に分けて添加する二と、 (b) 塩基を共存させること、 及び （c) U2 P 4合成反応後にアルカリ処理する二 と、 のいずれか或いは二種以上を組み合わせることを特徴とするものである。 ここで、 「 （a) UMP— DPPを複数回に分けて添加する」 とは、 ΡΡ ί— 有機アル力リ塩の 2倍モル必要とされる UMP— DP Ρを、 必要量を一度に反応 させるのではなく、 複数回に分けて添加するものである。 例えば、 最初に P P i . 一有機アルカリ塩と等モルの UMP— DPP反応させた後、 続けて PP i一有機 アル力リ塩と等モルの UMP— DP Pを添加して反応させる如きである。 UMP 一 DP Pの添加回数は特に限定されるものではないか、 2〜 3回に分けて行うこ とが収率向上の点から好ましい。
尚、 ここでいう P P i—有機アルカリ塩としては、 P P iのへキシルァミン塩、 ジブチルァミ ン塩、 トリェチルァミ ン塩、 トリプチルァミ ン塩等が挙げられ、 UMP— DPPとの反応は、 斯かる P P i—有機アルカリ塩を DMF、 DMAC\ ホルムァミ ド等のァミ ド系溶媒、 ジォキサン、 テトラヒドロフラン等の環状エー テル系溶媒、 アセトン等のケトン系溶媒、 ジメチルイミダゾリジノン、 へキサメ チルリン酸トリアミ ド'、 ジメチルスルホキシド、 ァセトニトリル等の単独又は混 合溶媒に溶解し、 これに UMP— DPPを添加し、 室温で 30分〜 5時間程度反 応させることにより行うことができる。
また、 「 （b) 塩基を共存させる」 とは、 上記 P P i—有機アルカリ塩と UMP— DP Pの反応を任意の塩基を共存させて反応させることをいい、 斯かる 塩基としては、 例えばピリジン、 2, 6—ルチジン， 2， 4ールチジン、 1, 4, 6—ピコリン、 2, 4—ジメチルァミノピリジン、 2, 4， 6—コリジン等のピ リジン系塩基等が挙げられ、 特にピリジンが好ましい。 尚、 斯かる塩基が反応溶 媒を兼用している場合も本発明の塩基に包含される。 また、 塩基の濃度は特に制 限されず、 UMPに対して 6当量以上、 望ましくは 1 8当量以上を添加するのが 好ましい。 更に 「 （c) U2P 4合成反応後にアルカリ処理する」 とは、 U2P4合成液を水 でクェンチ後、 水酸化ナトリウム、 ァンモニァ、 水酸化力リウム、 ピリジン、 ト リェチルァミン、 炭酸ナ卜リゥム等の有機又は無機のアル力リ溶液を用いて処理 することをいう。 斯かる処理を行うことで、 クェンチ後そのまま精製していた従 来法に比べ U 2 P 4の単離収率を一層向上させることが可能となる。
斯かるアル力リ処理は、 水でクェンチ後の U 2 P 4合成液にァルカリを p H 8〜- 1 3、 好ましくは 1 0〜 1 2程度のなるように添加し、 室温で 1 0分〜 5時間程 度反応させることにより行われる。
尚、 UMPから UMP DP Pの合成は、 従来法が適用でき、 例えば、 常法に より調製した UMPトリプチルァミン塩等の UMPトリアルキルァミン塩を DM F、 ジメチルァセトアミ ド （DMAC) 等のアミ ド系溶媒、 ジォキサン、 テトラ ヒドロフラン等の環状エーテル系溶媒、 アセトン等のケトン系溶媒、 ジメチルイ ミダゾリジノン、 へキサメチルリン酸トリアミ ド等の単独又は混合溶媒に溶解し、 DPCと必要により トリアルキルァミンを加え、 室温で 30分〜 5時間程度反応 させて活性化体である UMP— DP Pを合成することができる。 実施例
以下、 実施例を示し本発明を具体的に説明する。
実施例 1 U2P 4又はその塩の合成
( 1 ) 塩基の効果
脱水したゥリジン 5'—モノリン酸のトリブチルアミン塩 （UMP— TBA) (6. 2mmo ） に DMAC 8mLを加えて撹拌しながら DPC 1. 7mLを 滴下した。 室温下で 1時間反応させて UMP - DPPを生成させた後、 TBA 7. 6mLを加え、 更に 1 0分間撹拌した。 別途、 脱水した TEA— P P i (3. Ommo ·β) をピリジン 1. 7 m Lに溶解しておき、 UM Ρ— D Ρ Ρ反応 液に添加した。 室温下で 3時間撹拌した後、 水を加えて反応を停止した。 得られ た液を HPLC ( 2 6 2 nm) で分析した結果、 収率 1 8. 3 %で目的とす る U2P を得た。
この結果より、 UMP— DPPと TEA— PP iとの反応を塩基 （ピリジン） 共存下で行なうことにより、 従来法の約 2倍弱の収率で U 2 P 4を合成できること が明らかとなった。
(2) 塩基とアルカリ処理の併用効果 - 脱水したゥリ ジン 5 ' —モノ リ ン酸のトリプチルァミ ン塩 （UM P— T B A )
(6. 2mmo に DMAC 8mLを加えて撹拌しなから DPC 1. 7mLを 滴下した。 室温下で 1時間反応させて UMP - DPPを生成させた後、 TBA 7. 6mLを加え、 更に 1 0分間撹拌した。 別途、 脱水した TEA— P P i
(3. Ommo をピリジン 1. 7 m Lに溶解しておき、 UMP— D P P反応 液に添加した。 室温下で 3時間撹拌した後、 水を加えて反応を停止した。 反応液 に 30 %水酸化ナトリゥム溶液を加えて P H 1 1. 0に調整し、 ー晚放置した。 得られた液を HP LC ( 262 nm) で分析した結果、 収率 29. 7%で目的と する U2P4を得た。
この結果より、 UMP— DPPと TEA— PP iとの反応を塩基 （ピリジン） 共存下で行ない、 さらにアルカリ処理を施すことで、 従来法の約 3倍の収率で
U2P 4を合成できることが明らかとなった。
(3) 塩基と UMP - DPP複数回添加効果
脱水したピロリン酸のトリエチルァミン塩 （TEA— PP i ) ( 6mmo i ) , フオル厶アミ ド 1. 5mL及びピリジン 1. 5 mLを加えて撹拌した。 一方、 別 の容器に脱水したゥリジン 5' —モノ リン酸のトリブチルァミ ン塩 （UMP— TBA) ( 1 2mmo ） に DMAC 4. 3mL、 ジォキサン 4. 8mL及び卜 リブチルァミン （TBA) 5. 8 mLを加えて撹拌し、 その後 DP C 2. 5mL を滴下し室温下で更に一時間撹拌して UMP— DPPを生成させた。 TEA— PP iの人った容器に UMP - DPP溶液の半分量を滴下し、 室温下で 1時間反 応させた。 再度、 ピリジンを 1. 5mL添加した後、 残りの UMP— DPP溶液 を滴下した。 更に室温下で一時間反応させた後、 水を加えて反応を停止した。 得 られた液を H PLC ( 2 6 2 nm) で分析した結果、 収率 2 9. 5 で目的とす る U2P4を得た。
この結果より、 UMP— DP Pの添加を 2回に分けて行なうことと、 UMP— DPPと TEA— PP i との反応を塩基 （ピリジン） 共存下で行なうことにより 従来法の約 3倍弱の収率で U2P4を合成できることが明らかとなった。 また、 上 記 （ 1 ) と比較すると、 UMP— DPPの添加を 2回に分けて行なうことにより、
1 8. 3 %の収率が上記のように収率 2 9. 5 %になり、 収率が約 1. 6倍向上 することが明らかとなった。
(4) アル力リ処理の効果
脱水したピロリン酸のトリェチルアミン塩 （TEA— PP i ) (6mmo ^) 、 フオルムアミ ド 1. 5 m L及びピリジン 1. 5 m Lを加えて撹拌した。 一方、 別の容器に脱水したゥリジン 5' —モノ リ ン酸のトリブチルァミ ン塩 （UMP TBA) ( 1 2mmo ·0 に DMAC 4. 3mL、 ジォキサン 4. 8mL及びト リブチルァミン （TBA) 5. 8mLを加えて撹拌し、 その後 DPC 2. 5mL を滴下し室温下で更に一時間撹拌して UMP - DPPを生成させた。 TEA— PP iの入った容器に UMP - DPP溶液の半分量を滴下し、 室温下で 1時間反 応させた。 再度、 ピリジンを 1. 5 mL添加した後、 残りの UMP— DPP溶液 を滴下した。 更に室温下で一時間反応させた後、 水を加えて反応を停止した。 反 応液に 3 0 %水酸化ナトリゥム溶液を加えて pH 1 1. 0に調整し、 一晩放置し た。 得られた液を HPLC ( 2 6 2 nm) で分析した結果、 収率 32. 2%で目 的とする U2P4を得た。
上記 （3) と比較すると、 アルカリ処理を追加することにより、 2 9. 5 %の 収率が上記のように収率 3 2. 2 %になり、 収率が約 1割向上することか明らか となった。 実施例 2 υ2Ρ4 · 4Na結晶の製造
脱水したピロリ ン酸のトリェチルァミ ン塩 （TEA— P P i ) ( 4 0. 5 mm ο β , フォルムァミ ド 1 0 m L及びピリジン 1 5 m Lを加えて撹拌した。 一方、 別の容器に脱水したゥリジン 5 ' —モノ リ ン酸のトリプチルァミ ン塩
(UMP-TBA) (8 Ommo i) に DM AC 5 OmL, ジォキサン 3 4mL 及び卜リブチルァミ ン （TBA) 3 OmLを加えて撹拌し、 その後、 DP C
1 7. 8mLを滴下し室温下で更に一時間撹拌して UMP— DPPを生成させた。
TEA-PP iの入った容器に UMP - DPP溶液の半分量を滴下し、 室温下で
1時間反応させた。 再度、 ピリジンを 1 5 m Lと 4ージメチルァミノピリジン
(DMAP) 5 Omgを添加した後、 残りの UMP - D P P溶液を滴下した。 更 に室温下で二時間反応させた後、 水を加えて反応を停止した。 合成液を 7 0 0 mLまで水で希釈した後、 水酸化ナトリウム溶液を用いて PHを 1 0に調整した。
20 OmL程度まで濃縮した後、 撹拌しながらエタノール 2 5 OmLを添加した。
4 °Cでー晚静置した後、 上澄みをデカントにより除去した。 得られた液を水で 25 OmLまで希釈し、 HPLC ( 2 6 2 nm) で分析した結果、 収率 3 0. 0 %で112?4を得た。
上記反応液 1 1 OmLを水で 2 0 0 OmLまで希釈し、 弱陰イオン交換樹脂 (アンバーライ ト I RA— 6 7) (C 1型） 2 0 OmLにかけた。 水洗後、 副生 成物を 0. 1 8 M塩酸で溶出し、 0. 3 5 Mの食塩を含む 0. 0 0 5 M塩酸溶液 で目的とする U2P4を溶出した （回収率 8 2. 7%) 。
得られた溶出液を水酸化ナトリゥ厶溶液で P H 2. 5に調整した。 その後、 活 性炭カラム （太閤 SGP) 4 0 OmLにかけ、 水洗した後、 0. 0 5 M水酸化ナ トリウム溶液で溶出した （回収率 8 4. 9%) 。
溶出液の pHを 7. 6に調整した後、 3 8mLまで濃縮した。 濃縮液にェタノ —ル 5 7 mLを加えて結晶化し、 3. 1 gの U2P4 · 4Na結晶 （水分 7. 8 %) を得た （単離収率 1 8. 4%) 。 CU2P4 · 4Na結晶の物性〕
実施例 2で調製した U2P4 · 4Na結晶を約 6 0 °Cで約 4時間通風乾燥後、 機 器分析等に供した。 また、 WO 9 9/0 5 1 5 5の実施例 1記載の方法と同じ方 法で U2P4 · 4 Naの凍結乾燥品を調製し、 結晶品との物性を比較した。
( 1 ) 機器分析
①純度検定
実施例 2で得られた U 2 P 4 · 4 N a結晶及び各クロマトグラフィー処理による 精製後の U2P 4画分の純度を高速液体クロマトグラフィ一法で分析した結果を表 1に示す。 なお、 高速液体クロマトグラフィ一法は、 以下の条件で行った。 カラム ： H I TACH I GEL#3013 - N (日立計測器サービス株式会社製） 溶出液： 10%CH3CN、 0.18M NH4C 1. 0.03MKH2PO4、
Figure imgf000015_0001
検出法： UV 2 6 2 nmによる検出
表 i
Figure imgf000015_0002
(-） ：検出限界以下
②水分 カールフィ ッシヤー法により測定した結果、 乾燥の程度により変動するものの、
5〜 1 5重量％の水分で安定化し、 計算により U2P41分子に対し 3〜8分子の 水分子が結合又は付着していることが明らかとなつた。
③融点
常法により融点を測定した結果、 分解点は約 22 3 °Cであった。 なお、 凍結乾 燥品の分解点は約 22 0でである。 -
④ X線回折
理学電機製 X線回折装置 R I NT 2 5 0 0 V型を用い、 下記の測定条件で測定 した X線回折スぺク トルを図 1及び図 2に、 そのピークデータを表 2及び表 3に 示す。
(測定条件）
X線管球： C u— Kひ
X線出力： 5 0 kV— 3 0 OmA
走査速度： 4. 0 ° Z分
走査間隔： 0. 02°
測角範囲： 2〜4 0。
スリッ ト ： DS— 0. 5° ， RS— 0. 1 5 mm, S S - 0. 5 °
前処理 ： メノウ乳鉢にて粉砕
表 2
Figure imgf000017_0001
なお、 図 1及び表 2は υ2 Ρ 4 · 4Na結晶の 4水和物のデータであり、 図 2及 び表 3は U2P4 ' 4Na結晶の 8水和物のデータである。 また、 参考として凍結 乾燥品の X線回折スぺクトルを図 3に示す。
⑤吸湿性 水分約 1 4 %の112?4 · 4Na結晶 （ 8水和物） を （ァ） 温度 2 5 °C\ 相対湿 度 5 7 %、 （ィ） 温度 2 5 、 相対湿度 7 5 %、 （ゥ） 温度 4 0て、 相対湿 7 5 %のそれぞれの条件下で 9日間保存した場合、 分解、 重量変化とも観察され ず、 安定で吸湿性を有しないことが確認された。 また、 水分約 8%の υ2Ρ4 · 4 N a結晶 （ 4水和物） を温度 4 0て、 相対湿度 7 5 %の条件下で 9日間保存した 場合、 水分含量が 1 4〜 1 5 %まで増加したが、 それ以上の増加は観察されず、 - 安定化した。
これに対し、 凍結乾燥品 （初発水分含量：約 1 %) を温度 4 0で、 相対湿度 7 5 %の条件下で 9日間保存すると、 水分含量が徐々に増加し、 7日目には潮解 し、 どろどろの 4犬態となつた。
⑥安定性
U 2 P 4 · 4 N a結晶 （8水和物） と凍結乾燥品をビンに密封し、 6 0でで 1 3 日間保存した （加速試験） 。 その結果、 結晶品の分解は全く観察されなかったが、 凍結乾燥品は約 1. 4 %の U2P4 ' 4Naの減少が観察され、 一部が分解してい ることが明らかであった。
⑦結晶型
U2P., - 4Na結晶 （8水和物） の代表的な結晶の写真を図 4に示す。
⑧赤外吸収スぺク トラム
J A S C〇 5 0 0 0スぺク トロホトメーターを用いて常法により U2P4 - 4 N a結晶 （ 8水和物） と凍結乾燥品の赤外吸収スペク トルを測定した。 その結果を、 図 5及び図 6に示す。 υ2Ρ4 · 4 N aの凍結乾燥品が、 34 1 6、 1 7 0 2、 1 2 6 6、 1 1 1 6、 1 0 7 9及び 9 0 6 (cm 1) にピークを有す るのに対し （図 6) 、 U2P4 ' 4 N a結晶は 3 3 8 6、 1 6 9 0、 1 2 77、 1 2 3 3、 1 1 4 6、 1 1 1 6及び 8 9 0 ( cm 1) にピークを有する （図 5)
実施例 3 U 2 P 4 · 4 N a · 8水和物結晶の製造 実施例 2のカラム処理で得られた U2P4画分を濃縮してスラリーを調製後、 pH 7. 0に調整し、 攪拌しながら徐々にメタノールを添加し、 さらに 1 0°Cに 冷却しながらスラリーを攪拌して U2P4 · 4 Na結晶を晶析させた。
得られた U 2 P 4 · 4 Na結晶を乾燥後、 カールフ イ ツシャ一法で水分を測定し た結果、 8水和物であることが明らかとなった。 この結晶の X線回折スぺク トノし を図 7に、 そのピークデータを表 4に示す。
表 4
Figure imgf000019_0001
産業上の利用可能性
本発明方法により得られた U2P4又はその塩の結晶は、 高純度であるとともに、 凍結乾燥品に比べて吸湿性もなく極めて安定であり、 医薬品原料として有用であ る。
また、 本発明の U2P4又はその塩の製造法によれば、 高収率で U2P4又はその 塩を製造することができ、 U2P4又はその塩の大量合成を可能とする。

Claims

請求の範囲
1. P1, P4—ジ （ゥリジン 5' ―) テトラホスフエ一ト又はその塩の結晶。
2. 9 5 %以上の純度を有する請求項 1記載の結晶。
3. 9 7%以上の純度を有し、 ゥリジン 5' — トリ リン酸及びゥリジン 5' ― ジリン酸が 1 %以下である請求項 1記載の結晶。
4. C u— Kひ線を用いた X線回折による回折角 （20) 力、、 5. 9, 1 1. 5, 1 2. 4, 1 5. 4, 1 7. 2, 1 8. 0, 1 9. 8及び 2 0. 5 (° ) 付 近に特徴的ピークを示す結晶構造を有する P1, P4—ジ （ゥリジン 5' —） テ トラホスフェート · 4ナトリウ厶塩結晶。
5. 赤外吸収スぺク トルにおいて、 1 6 9 0、 1 2 7 7、 1 23 3、 1 1 1 6 及び 8 9 0 (cm— 1) 付近において特徴的ピークを示す結晶構造を有する P1, p 4ージ （ゥリジン 5 ' -) テトラホスフェート ' 4ナ卜リウ厶塩結晶。
6. 粗 P], P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフエ一ト又はその塩を陰ィ ォン交換クロマ トグラフィーと活 '[生炭クロマトグラフィ一とを用いて精製し、 精 製された P1, P4—ジ （ゥリジン 5' ―) テトラホスフェート又はその塩溶液に、 親水性有機溶媒を加えて結晶を析出させることを特徴とする Ρ', Ρ4—ジ （ゥリ ジン 5' ―) テトラホスフヱ一ト又はその塩の結晶の製造法。
7. 精製が、 陰イオン交換クロマトグラフィ一を行った後、 次いで活性炭クロ マトグラフィ一を行うものである請求項 6記載の Ρ1, Ρ4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフヱート又はその塩の結晶の製造法。
8. ゥリジン 5' —モノ リ ン酸 （UMP) を出発原料とし、 ジフエニルホ スホクロリデート （DPC) とピロホスフェート （PP i ) を用いて P P4— ジ （ゥリジン 5' -) テトラホスフエ一ト （U2P4) 又はその塩を製造する方法 において、 下記 （a) 〜 （c) のいずれか 1つ以上の処理を行うことを特徴とす る P1, P4—ジ （ゥリジン 5' —） テトラホスフェート又はその塩の製造法。 (a) UMPジフエニルホスフエート （UMP— DPP) と PP i—有機ァ儿 力リ塩を反応させる工程におし、て、 U P-DPPとを複数回に分けて添加する こと、
(b) UMP— DPPと PP i一有機アル力リ塩を反応させる工程において、 塩基を共存させること、
(c) U2P4合成反応後にアルカリ処理すること。 - 9. 処理 （a) 、 （b) 及び （c) を組み合わせて行うものである請求項 8記 載の P1, P4—ジ （ゥリジン 5' ―) テトラホスフェート又はその塩の製造法。
PCT/JP1999/005415 1998-10-02 1999-10-01 Cristal de diuridine tetraphosphate ou sel correspondant et procede de fabrication WO2000020430A1 (fr)

Priority Applications (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE69902624T DE69902624T2 (de) 1998-10-02 1999-10-01 Ein kristall von diuridine tetraphosphat oder ein solches salz und verfahren zu seiner herstellung, verfahren und herstellung der vorgenannten zusammensetzung
MXPA01003377A MXPA01003377A (es) 1998-10-02 1999-10-01 Cristal de tetrafosfato de diuridina o una sal del mismo, metodo para prepararlo y metodo para producir dicho compuesto.
BRPI9917911A BRPI9917911B1 (pt) 1998-10-02 1999-10-01 processo de produção de 5'-tetrafosfato de p1,p4 - di(uridina) ou um de seus sais
US09/582,642 US6458946B1 (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystals of diuridine tetraphosphate or salt thereof, process for producing the crystals, and process for producing the compounds
BR9914453-0A BR9914453A (pt) 1998-10-02 1999-10-01 Cristal de tetrafosfato de diuridina ou seu sal, método de sua preparação e método de produção do mencionado composto
NZ510748A NZ510748A (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof
IL14218199A IL142181A (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same and method forproducing said compound
AT99970090T ATE222920T1 (de) 1998-10-02 1999-10-01 Ein kristall von diuridine tetraphosphat oder ein solches salz und verfahren zu seiner herstellung, verfahren und herstellung der vorgenannten zusammensetzung
EP99970090A EP1043329B1 (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound
HU0103754A HU228681B1 (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound
JP2000574541A JP3247685B2 (ja) 1998-10-02 1999-10-01 ジウリジンテトラホスフェート又はその塩の結晶及びその製造法、並びに該化合物の製造法
CA002345624A CA2345624C (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound
EA200100407A EA003167B1 (ru) 1998-10-02 1999-10-01 Кристалл диуридин тетрафосфата или его соли и способ его получения и способ получения указанного соединения
AU60008/99A AU747096C (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound
SK440-2001A SK283729B6 (sk) 1998-10-02 1999-10-01 Kryštály P1, P4-di(uridín-5')-tetrafosfátu alebo kryštály jeho soli, spôsob ich výroby, kryštály tetrasodnej soli P1, P4-di(uridín-5')-tetrafosfátu a kryštály jej hydrátov
NO20011634A NO317305B1 (no) 1998-10-02 2001-03-30 Krystall av diuridintetrafosfat eller salter derav, og fremgangsmate for fremstilling av samme og fremgangsmate for fremstilling av nevnte forbindelse

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP28166398 1998-10-02
JP10/281663 1998-10-02
JP17068199 1999-06-17
JP11/170681 1999-06-17

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US09/582,642 A-371-Of-International US6458946B1 (en) 1998-10-02 1999-10-01 Crystals of diuridine tetraphosphate or salt thereof, process for producing the crystals, and process for producing the compounds
US10/120,367 Continuation US6780988B2 (en) 1998-10-02 2002-04-12 Processes for producing P1,P4-diuridine-5′-tetraphosphate

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2000020430A1 true WO2000020430A1 (fr) 2000-04-13

Family

ID=26493605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP1999/005415 WO2000020430A1 (fr) 1998-10-02 1999-10-01 Cristal de diuridine tetraphosphate ou sel correspondant et procede de fabrication

Country Status (21)

Country Link
US (2) US6458946B1 (ja)
EP (1) EP1043329B1 (ja)
JP (2) JP3247685B2 (ja)
KR (1) KR100475008B1 (ja)
CN (2) CN100396692C (ja)
AT (1) ATE222920T1 (ja)
AU (1) AU747096C (ja)
BR (2) BRPI9917911B1 (ja)
CA (1) CA2345624C (ja)
CZ (1) CZ300402B6 (ja)
DE (1) DE69902624T2 (ja)
EA (2) EA003167B1 (ja)
ES (1) ES2183650T3 (ja)
HU (1) HU228681B1 (ja)
IL (1) IL142181A (ja)
MX (1) MXPA01003377A (ja)
NO (1) NO317305B1 (ja)
NZ (1) NZ510748A (ja)
PL (1) PL199434B1 (ja)
SK (1) SK283729B6 (ja)
WO (1) WO2000020430A1 (ja)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001002416A1 (fr) * 1999-06-30 2001-01-11 Yamasa Corporation Cristaux dinucleotidiques
US6872710B2 (en) 1997-07-25 2005-03-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof
US7223744B2 (en) 1997-02-10 2007-05-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation comprising dinucleoside polyphosphates and salts thereof
WO2017002827A1 (ja) * 2015-06-29 2017-01-05 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ビス（５'－ウリジル）テトラホスフェート結晶の保管方法
WO2018079503A1 (ja) 2016-10-25 2018-05-03 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの精製方法
KR20180091689A (ko) 2017-11-06 2018-08-16 주식회사 종근당 무정형 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6818629B2 (en) 1997-02-10 2004-11-16 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation comprising P1-(2'-deoxycytidine 5'-)P4-(uridine 5'-) tetraphosphate
US7078391B2 (en) 1997-02-10 2006-07-18 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating edematous retinal disorders
US6867199B2 (en) 2000-08-21 2005-03-15 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Dinucleoside polyphosphate compositions and their therapeutic use
CN100363376C (zh) * 2006-06-12 2008-01-23 南京工业大学 一种5’-核苷三磷酸钠盐的结晶方法
CN109021049B (zh) * 2018-06-14 2020-12-08 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 一种尿苷5′-二磷酸-苯并咪唑二钠的合成方法
KR20210110055A (ko) * 2020-02-28 2021-09-07 주식회사 종근당바이오 P1, p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트 나트륨염 4 수화물 결정형 a의 제조방법

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005155A2 (en) * 1997-07-25 1999-02-04 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Salts of di(uridine 5'-tetraphosphate), method for preparation and uses thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6423694B1 (en) * 1996-02-21 2002-07-23 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating otitis media with uridine triphosphates and related compounds
ATE335492T1 (de) * 1996-03-27 2006-09-15 Inspire Pharmaceuticals Inc Verfahren zur behandlung der ziliardyskinesie mit uridintriphosphaten und verwandten verbindungen
US6319908B1 (en) * 1996-07-03 2001-11-20 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method for large-scale production of di(uridine 5′-tetraphosphate) and salts thereof
US5763447C1 (en) * 1996-07-23 2002-05-07 Inspire Pharmaceuticals Method of preventing or treating pneumonia in immobilized patients with uridine triphosphates and related compounds

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005155A2 (en) * 1997-07-25 1999-02-04 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Salts of di(uridine 5'-tetraphosphate), method for preparation and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COSTE H. ET AL.: "Non-adenylylated Bis(5'-nucleosidyl) Tetraphosphates Occur in Saccharomyces Cerevisiae and in Escherichia coli and Accumulate upon Temperature Shift or Exposure to Cadmium", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 262, no. 25, September 1987 (1987-09-01), pages 12096 - 12103, XP002925798 *
VALLEJO C. G. ET AL.: "Dinucleosidasetetraphosphatase in Rat Liver and Artemia Salina", BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA., vol. 438, no. 1, 1976, pages 304 - 309, XP002925797 *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7223744B2 (en) 1997-02-10 2007-05-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation comprising dinucleoside polyphosphates and salts thereof
US7939510B2 (en) 1997-07-25 2011-05-10 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′-)tetraphosphate and salts thereof
US6872710B2 (en) 1997-07-25 2005-03-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof
US7132410B2 (en) 1997-07-25 2006-11-07 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′-)tetraphosphate and salts thereof
US7528119B2 (en) 1997-07-25 2009-05-05 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′-)tetraphosphate and salts thereof
US6617444B1 (en) * 1999-06-30 2003-09-09 Yamasa Corporation Dinucleotide tetraphosphate crystals
WO2001002416A1 (fr) * 1999-06-30 2001-01-11 Yamasa Corporation Cristaux dinucleotidiques
CZ303172B6 (cs) * 1999-06-30 2012-05-09 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Krystalická forma P1-(2'-deoxycytidin-5'-)P4-(uridin-5'-)tetrafosfátu
WO2017002827A1 (ja) * 2015-06-29 2017-01-05 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ビス（５'－ウリジル）テトラホスフェート結晶の保管方法
US10493091B2 (en) 2015-06-29 2019-12-03 Yamasa Corporation Method for storing P1, P4-bis(5′-uridyl)teraphosphate crystals
WO2018079503A1 (ja) 2016-10-25 2018-05-03 ヤマサ醤油株式会社 Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの精製方法
US10815263B2 (en) 2016-10-25 2020-10-27 Yamasa Corporation Method for purifying P1,P4-di(uridine 5′-)tetraphosphate
KR20180091689A (ko) 2017-11-06 2018-08-16 주식회사 종근당 무정형 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법
KR101963570B1 (ko) 2017-11-06 2019-03-29 주식회사 종근당 무정형 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법
KR20190051850A (ko) 2017-11-06 2019-05-15 주식회사 종근당 무정형 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
PL199434B1 (pl) 2008-09-30
SK4402001A3 (en) 2001-11-06
NO317305B1 (no) 2004-10-04
KR100475008B1 (ko) 2005-03-08
EP1043329B1 (en) 2002-08-28
CA2345624C (en) 2006-12-05
EP1043329A1 (en) 2000-10-11
EA004513B1 (ru) 2004-04-29
AU747096B2 (en) 2002-05-09
CZ20011028A3 (cs) 2001-08-15
MXPA01003377A (es) 2003-06-24
US6780988B2 (en) 2004-08-24
SK283729B6 (sk) 2003-12-02
DE69902624D1 (de) 2002-10-02
IL142181A (en) 2005-12-18
EA003167B1 (ru) 2003-02-27
CN100396692C (zh) 2008-06-25
AU747096C (en) 2003-01-23
CZ300402B6 (cs) 2009-05-13
DE69902624T2 (de) 2003-04-03
KR20020013471A (ko) 2002-02-20
EP1043329A4 (en) 2001-03-14
US6458946B1 (en) 2002-10-01
EA200100407A1 (ru) 2001-10-22
BRPI9917911B1 (pt) 2016-08-23
HUP0103754A3 (en) 2003-01-28
PL347070A1 (en) 2002-03-11
JP3824894B2 (ja) 2006-09-20
IL142181A0 (en) 2002-03-10
HUP0103754A2 (hu) 2002-04-29
NZ510748A (en) 2002-10-25
JP3247685B2 (ja) 2002-01-21
EA200200695A1 (ru) 2002-10-31
CN1502622A (zh) 2004-06-09
CN1321163A (zh) 2001-11-07
ES2183650T3 (es) 2003-03-16
BR9914453A (pt) 2001-05-22
NO20011634L (no) 2001-05-30
HU228681B1 (en) 2013-05-28
JP2002053590A (ja) 2002-02-19
CN1151166C (zh) 2004-05-26
ATE222920T1 (de) 2002-09-15
NO20011634D0 (no) 2001-03-30
AU6000899A (en) 2000-04-26
US20020156269A1 (en) 2002-10-24
CA2345624A1 (en) 2000-04-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2008012949A1 (fr) Procédé servant à produire un di(nucléoside pyrimidique-5'-)polyphosphate
WO2000020430A1 (fr) Cristal de diuridine tetraphosphate ou sel correspondant et procede de fabrication
JP3421666B2 (ja) ジヌクレオチド結晶
KR20180091689A (ko) 무정형 디뉴클레오사이드 폴리포스페이트 화합물의 제조방법
ZA200102683B (en) Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound.
JP3964809B2 (ja) ジヌクレオチドの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 99811713.7

Country of ref document: CN

AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY CA CH CN CR CU CZ DE DK DM EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MD MG MK MN MW MX NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK SL TJ TM TR TT UA UG US UZ VN YU ZA ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW SD SL SZ TZ UG ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN GW ML MR NE SN TD TG

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1999970090

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 09582642

Country of ref document: US

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1999970090

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 142181

Country of ref document: IL

Ref document number: PV2001-1028

Country of ref document: CZ

Ref document number: 60008/99

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 510748

Country of ref document: NZ

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2345624

Country of ref document: CA

Ref document number: 2345624

Country of ref document: CA

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: IN/PCT/2001/00330/MU

Country of ref document: IN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 4402001

Country of ref document: SK

Ref document number: PA/a/2001/003377

Country of ref document: MX

Ref document number: 1020017004083

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2001/02683

Country of ref document: ZA

Ref document number: 200102683

Country of ref document: ZA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200100407

Country of ref document: EA

REG Reference to national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8642

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: PV2001-1028

Country of ref document: CZ

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1020017004083

Country of ref document: KR

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 60008/99

Country of ref document: AU

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1999970090

Country of ref document: EP

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1020017004083

Country of ref document: KR