CN114340684A - 用于免疫pet成像的放射性标记的met结合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本文提供了放射性标记的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体以及它们在免疫PET成像中的用途。包括检测受试者或样品中MET蛋白的存在的方法和监测表达Met的肿瘤的治疗功效的方法。

Description

用于免疫PET成像的放射性标记的MET结合蛋白
技术领域
本公开涉及放射性标记的MET结合蛋白及其在免疫PET成像中的用途。
序列表
序列表的正式副本以ASCII格式的序列表与说明书同时通过EFS-Web以电子方式提交，文件名为“10649WO01_SEQ_LIST_ST25.txt”，创建日期为2020年9月15日，大小为约136KB。这个ASCII格式化文件中所含的序列表是说明书的一部分并且以全文引用的方式并入本文中。
背景技术
肝细胞生长因子(HGF)(又名散射因子[SF])是通过与HGF受体(HGFR)相互作用而发挥其活性的异源二聚体旁分泌生长因子。HGFR是c-Met癌基因的产物，且也被称作MET。MET是由通过二硫键连接到细胞外α链的跨膜β链组成的受体酪氨酸激酶。HGF与MET的结合会激活MET的激酶催化活性，从而导致β链的Tyr 1234和Tyr 1235的磷酸化以及随后下游信号传递途径的激活。
已显示MET和/或HGF过表达、活化或扩增涉及非小细胞肺癌(NSCLC)、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌、头颈癌、结肠癌和肾癌(Sierra和Tsao,Ther.Adv.Med.Oncol.,3(增刊1)：S21–S35，2011)。MET扩增被认为是NSCLC和食管胃恶性肿瘤中肿瘤发生的关键驱动因素。另外，导致MET的外显子14缺失的突变已描述为NSCLC子集中的致癌驱动因素。具有MET基因扩增的肿瘤细胞系的生长和存活高度依赖于MET。临床前数据涉及MET信号传导对多种肿瘤类型诸如NSCLC、结直肠癌和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的靶向疗法的抗性。
免疫正电子发射断层扫描(PET)是一种诊断成像工具，其利用用正电子发射体标记的单克隆抗体，将抗体的靶向特性与正电子发射断层扫描摄像机的灵敏度组合。参见例如The Oncologist,12:1379(2007)；Journal of Nuclear Medicine,52(8):1171(2011)。免疫PET使得能够可视化显示和定量体内抗原和抗体积聚，并且因此可以充当用于诊断和补充疗法的重要工具。举例来说，免疫PET可有助于选择针对特定疗法的潜在候选人，以及有助于对治疗的监测。
临床前和近期临床结果两者表明，携带MET遗传改变的肿瘤响应于MET抑制剂，证实MET是癌症驱动因素。因此，需要用于抗MET和/或抗MET疗法的诊断工具，尤其包括能够检测所述疗法的合适候选物的诊断工具。
发明内容
本公开中包括用于免疫PET成像的放射性标记的抗MET抗体缀合物和MET x MET双特异性抗体缀合物。
在一个方面，缀合物包含抗MET抗体、MET x MET双特异性抗体、或它们的抗原结合片段、螯合部分和正电子发射体。
本文还提供了用于合成所述缀合物的方法和适用于其的合成中间体。
本文还提供了对表达MET的组织进行成像的方法，所述方法包括将本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物施用于所述组织；以及通过正电子发射断层扫描(PET)成像来使MET表达可视化。
本文还提供了用于检测组织中的MET的方法，所述方法包括将本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物施用于所述组织；以及通过PET成像来使MET表达可视化。在一个实施方案中，所述组织存在于人类受试者中。在某些实施方案中，所述受试者是非人类哺乳动物。在某些实施方案中，所述受试者患有疾病或病症，诸如癌症。
本文还提供了用于确定受试者中表达MET的细胞的存在的方法。所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物；以及通过PET成像来使MET表达可视化。
本文还提供了用于鉴定患有适合于抗肿瘤疗法的实体瘤的受试者的方法，所述抗肿瘤疗法包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂，例如抗MET抗体、MET x MET双特异性抗体或其抗体药物缀合物(ADC)。所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗体缀合物，以及通过PET成像来使肿瘤中所施用的放射性标记的抗体缀合物可视化，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在将受试者鉴定为适合于包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法。
本文还提供了治疗受试者的实体瘤的方法，所述方法包括确定所述实体瘤是MET阳性的；以及向有需要的所述受试者施用抗肿瘤疗法。在某些实施方案中，抗肿瘤疗法包含抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体。在某些实施方案中，向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗体缀合物，并且经由正电子发射断层扫描(PET)成像对放射性标记的抗体缀合物的定位进行成像，以确定肿瘤是否是MET阳性的。
本文还提供了用于监测正在用抗肿瘤疗法治疗的受试者中的抗肿瘤疗法的功效的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的缀合物；通过PET成像对肿瘤中所施用的放射性标记的缀合物的定位进行成像；以及确定肿瘤生长，其中缀合物或放射性标记的信号的摄取从基线的降低指示肿瘤消退和抗肿瘤疗法的功效。在某些实施方案中，所述抗肿瘤疗法包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂(例如，抗MET抗体或MET xMET双特异性抗体，或任一者的ADC)。
本文还提供了用于预测受试者对包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法的反应的方法，所述方法包括确定所述肿瘤是否是MET阳性的，其中如果所述肿瘤是MET阳性的，则其指示所述受试者对包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法的作出阳性反应。在某些实施方案中，通过施用本公开的放射性标记的抗体缀合物并通过PET成像将放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位来确定肿瘤为阳性，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在指示肿瘤是MET阳性的。
本文提供了用于诊断和治疗患有肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的缀合物，其中经由PET成像对放射性标记的抗体缀合物的定位进行成像以确定肿瘤是否是MET阳性的；诊断患有MET阳性肿瘤的受试者；以及向所述受试者施用包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法。
本文提供了用于诊断患有表达MET的肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物；通过PET成像使MET表达可视化；以及当通过PET成像使MET表达可视化时诊断患有表达MET的肿瘤的所述受试者。
附图说明
图1描绘在UV 280nm吸光度检测的情况下，5μg DFO-MET x MET免疫缀合物缀合物注射液在Superdex 200增加柱上的SE-HPLC色谱图。指示单体(99.6％)和高分子量(HMW)物种(0.4％)。
图2描绘DFO-MET x MET免疫缀合物的SDS-PAGE的图像。凝胶证实，在DFO缀合后，抗体完整性保持不变。泳道标记如下：1)标准梯状条带(BioRad，目录号：161-0374)，2)双特异性抗体非还原，3)DFO-Ab免疫缀合物非还原，4)空白，5)双特异性抗体还原，6)DFO-Ab免疫缀合物非还原。每个孔负载有大约2μg的蛋白质。注意，与标准SDS-PAGE设置的梯状条带相比，非还原抗体通常表现出比预期更低的电泳运动性。
图3描绘在γ发射检测的情况下5μg放射免疫缀合物(DFO-MET x MET双特异性抗体)注射液的代表性SE-HPLC放射色谱图。RCP大于95％，而未掺入的89Zr占总积分活性的不到1％。
图4描绘5μg放射免疫缀合物(DFO-MET x MET双特异性抗体)注射液的代表性SE-HPLC UV吸收色谱图。指出主要(97.9％)和HMW(2.1％)物种。25至31分钟之间的洗脱峰是配制缓冲液/流动相混合的现象，并且被认为并非蛋白质来源。
图5描绘小鼠中EBC-1肿瘤异种移植物的PET/CT图像。向小鼠施用放射性标记的MET x MET双特异性抗体缀合物，并且在几天内，缀合物特异性地定位于表达MET的肿瘤异种移植物。
图6描绘小鼠中NCI-H441肿瘤异种移植物的PET/CT图像。向小鼠施用放射性标记的MET x MET双特异性抗体缀合物，并且在几天内，缀合物特异性地定位于表达MET的肿瘤异种移植物。
图7描绘小鼠中NCI-H358肿瘤异种移植物的PET/CT图像。向小鼠施用放射性标记的MET x MET双特异性抗体缀合物，并且在几天内，缀合物特异性地定位于表达MET的肿瘤异种移植物。
图8A、图8B、图8C、图8D、图8E和图8F提供了具有肿瘤异种移植物的SCID小鼠中89Zr-DFO-MET x MET双特异性抗体缀合物的离体生物分布数据。向小鼠施用单一IV剂量0.1mg/kg、0.5mg/kg或5.0mg/kg的89Zr-DFO-MET x MET双特异性抗体缀合物，并在6天后处死。对经由心脏穿刺收集的血液和指定收获的组织进行称重并测定放射性。相对于来自注射材料(89Zr-DFO-MET x MET双特异性抗体缀合物)的剂量标准的放射性和单个样品的重量，计算在第6天收集的单个样品的每克注射剂量百分比(ID％/g)值。数据以平均值±SD绘制。
图9示出来自三个表达MET的细胞系的肿瘤异种移植物中89Zr-DFO-MET x MET双特异性抗体的摄取与MET表达水平之间的相关性。
图10A和图10B示出三个表达MET的细胞系的抗体饱和结合数据。
具体实施方式
I.定义
在描述本发明前，应当理解，本发明不限于所述的特定方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，而无意进行限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求书限制。
除非本文中另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与所公开的主题所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。本文中使用的术语“约”，当用于提及特定列举的数值时，意指所述值可以与列举的值相差不超过1％。例如，如本文中使用的，表述“约100”包括99和101以及它们之间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料都可以用于实践或试验本发明，但现在描述优选的方法和材料。在本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物通过引用整体并入本文。
MET蛋白
本文中使用的表述“MET”、“c-Met”等表示人跨膜受体酪氨酸激酶，其包含：(1)SEQID NO:145所示的氨基酸序列，和/或具有NCBI登记号NM_001127500.2所示的氨基酸序列，代表异形体“a”的未加工的前蛋白原，(2)SEQ ID NO:146所示的氨基酸序列，和/或具有NCBI登记号NM_000236.2所示的氨基酸序列，代表异形体“b”的未加工的前蛋白原，(3)SEQID NO:147所示的氨基酸序列，和/或具有NCBI登记号NM_001311330.1所示的氨基酸序列，代表异形体“c”的未加工的前蛋白原，和/或(3)包含所有三种异形体共有的细胞质α亚基(SEQ ID NO:148)和跨膜β亚基(分别为异形体a、b和c的SEQ ID NO:149、150或151)的成熟蛋白。表述“MET”包括单体和多聚体MET分子。本文中使用的表述“单体人MET”是指不含或不具有任何多聚化结构域并且在正常条件下作为单个MET分子存在而不与另一个MET分子直接物理连接的MET蛋白或其部分。示例性单体MET分子是本文称为包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列的“hMET.mmh”(参见，例如，US-2018-0134794的实施例3)的分子。本文中使用的表述“二聚体人MET”是指包含两个MET分子的构建体，所述MET分子通过接头、共价键、非共价键或通过多聚化结构域如抗体Fc结构域彼此连接。示例性二聚体MET分子是本文称为包含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的“hMET.mFc”(参见，例如，US-2018-0134794的实施例3)的分子。
本文对蛋白、多肽和蛋白片段的所有提及意图表示各种蛋白、多肽或蛋白片段的人类形式，除非明确指出其来自非人物种。因此，表述“MET”是指人MET，除非指定来自非人物种，例如，“小鼠MET”、“猴MET”等。
本文中使用的表述“细胞表面表达的MET”是指在体外或体内细胞表面上表达使得MET蛋白的至少一部分暴露于细胞膜的细胞外侧并且可接近抗体的抗原结合部分的一种或多种MET蛋白或其细胞外结构域。“细胞表面表达的MET”可以包含在通常表达MET蛋白的细胞表面上表达的MET蛋白或由其组成。可替换地，“细胞表面表达的MET”可以包含在细胞的表面上表达的MET蛋白或由其组成，所述细胞通常在其表面上不表达人MET，但是已经人工工程改造成在其表面上表达MET。
其他定义
如本文所用，术语“抗体”意指免疫球蛋白分子，其由四条多肽链，即两条重(H)链与两条轻(L)链通过二硫键互连(即，“完整抗体分子”)；以及其多聚体(例如IgM)或其抗原结合片段构成。每条重链由重链可变区(“HCVR”或“VH”)和重链恒定区(由域CH1、CH2和CH3构成)构成。每条轻链由轻链可变区(“LCVR”或“VL”)和轻链恒定区(CL)构成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更为保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照以下次序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在某些实施方案中，抗体(或其抗原结合片段)的FR可以与人种系序列相同，或可以是经天然或人工修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并排分析来定义氨基酸共有序列。
取代一个或多个CDR残基或省略一个或多个CDR也是可能的。抗体已在科学文献中描述，其中一个或两个CDR可以被分配用于结合。Padlan等人(1995FASEB J.9:133-139)基于公开的晶体结构分析了抗体与其抗原之间的接触区，并且得出结论，仅约五分之一到三分之一的CDR残基实际接触抗原。Padlan还发现许多抗体，所述抗体中一个或两个CDR没有与抗原接触的氨基酸(另参见Vajdos等人2002 J Mol Biol 320:415-428)。
基于先前的研究，通过分子建模和/或凭经验可以从位于Chothia CDR外部的Kabat CDR区域鉴别出不接触抗原的CDR残基(例如CDRH2中的残基H60-H65通常是不需要的)。如果省略其CDR或一个或多个残基，则其通常由氨基酸取代，所述氨基酸占据另一人类抗体序列或此类序列的共有序列中的对应位置。CDR内取代的位置和用于取代的氨基酸也可以凭经验选择。经验取代可以是保守或非保守取代。
与对应种系序列相比，本文适用的人抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体可在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。通过将表1的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。根据本公开适用的是来源于表1中提供的氨基酸序列中的任一个的抗体和其抗原结合片段，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变成得到所述抗体的种系序列的对应残基，或另一人种系序列的对应残基，或对应种系残基的保守氨基酸置换(此类序列变化在本文中统称为“种系突变”)。本领域的普通技术人员从根据表1的重链和轻链可变区序列开始，可以容易地产生包含一个或多个单独的种系突变或其组合的多种抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回衍生出抗体的原始种系序列中的残基。在其他实施方案中，仅某些残基被突变回原始种系序列，例如，仅存在于FR1的前8个氨基酸内或FR4的后8个氨基酸内的突变残基，或仅存在于CDR1、CDR2或CDR3内的突变残基。在其他实施方案中，框架和/或一个或多个CDR残基中的一个或多个被突变为不同的种系序列(即，与最初衍生出所述抗体的种系序列不同的种系序列)的一个或多个对应残基。此外，本公开的抗体可以含有框架和/或CDR区内的两个或更多个生殖系突变的任何组合，例如，其中某些个别残基突变为特定生殖系序列的对应残基，而不同于原始生殖系序列的某些其它残基得以保持或突变为不同生殖系序列中的相应残基。在获得含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段后，可以容易地测试所述抗体和抗原结合片段的一种或多种所需特性，如结合特异性的改善、结合亲和力的增加、拮抗性或激动性生物特性(视具体情况而定)的改善或增强、免疫原性降低等。以这种通用方式获得的抗体和抗原结合片段涵盖在本公开内。
本文适用的是MET结合蛋白(诸如人抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体)，其包含具有一个或多个保守置换的本文表1中示出的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体。例如，本公开包括具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的MET x MET双特异性抗体，相对于表1的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者，所述HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等等的保守氨基酸置换。
如本文所用，术语“人抗体”意图包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开的人单克隆抗体可以包括例如在CDR中以及特别是在CDR3中，不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”并不意在包括已将源自另一哺乳动物物种(例如，小鼠)的种系的CDR序列移植到人FR序列上的单克隆抗体。
如本文所用，术语“多特异性抗原结合分子”是指双特异性、三特异性或多特异性抗原结合分子和其抗原结合片段。多特异性抗原结合分子可以对一种目标多肽的不同表位具有特异性，或可以含有对超过一种目标多肽的表位具有特异性的抗原结合结构域。多特异性抗原结合分子可以是单个多功能多肽，或者它可以是两种或更多种彼此共价或非共价缔合的多肽的多聚体复合物。术语“多特异性抗原结合分子”包括可以连接至另一种功能分子(例如另一种肽或蛋白质)或与另一种功能分子共表达的本公开的抗体。例如，抗体或其片段可与一个或多个其他分子实体，诸如蛋白质或其片段功能性连接(例如通过化学偶合、基因融合、非共价缔合或其他方式)，以产生具有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗原结合分子。根据本公开，术语“多特异性抗原结合分子”还包括双特异性、三特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，本公开的抗体与另一种抗体或其抗原结合片段功能性连接，以产生具有第二结合特异性的双特异性抗体。本公开的双特异性和多特异性抗体在本文别处描述。
术语“特异性结合”或“特异性结合至”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对较稳定的复合物。特异性结合的特征可在于至少约1×10-8M或更低的平衡解离常数(，更小的KD指示更紧密的结合)。用于确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域众所周知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子共振等。如本文所述，已经通过表面等离子共振(例如，BIACORETM)鉴定出特异性结合至MET的抗体。此外，结合至MET中的一个结构域和一个或多个附加抗原的多特异性抗体或结合至MET的两个不同的区域的双特异性抗体仍然被认为是如本文所用的“特异性结合”的抗体。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、酶促可获得的、合成性或基因工程化的多肽或糖蛋白。如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”是指保留结合至MET的能力的抗体的一个或多个片段。
如本文所用，“分离抗体”意图指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体(Ab)的抗体(例如，特异性结合MET的分离抗体或其片段基本上不含特异性结合除MET以外的抗原的Ab)。
如本文所用，术语“表面等离激元共振”是指一种光学现象，其允许通过例如使用BIACORETM系统(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden和Piscataway,N.J.)检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化分析实时生物分子相互作用。
如本文所用，术语“KD”意图指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
术语“表位”是指与抗体分子的可变区中的特定抗原结合位点(称为互补位)发生相互作用的抗原决定簇。单个抗原可以具有超过一个表位。因此，不同抗体可以与抗原上的不同区域结合并且可以具有不同的生物效应。术语“表位”还指B细胞和/或T细胞起反应的抗原上的位点。其还指抗体所结合的抗原区域。表位可以定义为结构性或功能性的。功能性表位一般是结构性表位的子集并且具有直接促成相互作用的亲和力的那些残基。表位还可以是构形性的，即，由非线性氨基酸构成。在某些实施方案中，表位可以包括作为分子的化学活性表面基团的决定子，所述基团如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在某些实施方案中，可以具有特定三维结构特征和/或荷质比特征。
当提及核酸或其片段时，术语“基本同一性”或“基本相同”指示当通过适当的核苷酸插入或缺失与另一核酸(或其互补链)最佳对齐时，如通过如FASTA、BLAST或GAP等任何众所周知的序列同一性算法所测量的至少约90％，并且更优选地至少约95％、96％、97％、98％或99％的核苷酸碱基的核苷酸序列同一性
当应用于多肽时，术语“基本相似性”或“基本上相似”意指两个肽序列使用默认空位权重，如通过程序GAP或BESTFIT最佳地对准时共有至少90％序列同一性，甚至更优选地至少95％、98％或99％序列同一性。优选地，不同的残基位置因保守氨基酸置换而不同。“保守氨基酸取代”是氨基酸残基被具有相似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一氨基酸残基取代的氨基酸取代。一般而言，保守氨基酸置换不会实质上改变蛋白的功能性质。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情况下，可以上调相似性百分比或程度以校正取代的保守性质。用于进行这种调整的手段是本领域技术人员所熟知的。参见例如，Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331，其以引用的方式并入本文中。侧链具有类似化学特性的氨基酸组的实例包括1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂肪族羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；和7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸置换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守替代是在以下文献中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人(1992)Science 256:1443 45，所述文献以引用的方式并入本文中。“适度保守”替换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。典型地使用序列分析软件测量多肽的序列相似性。蛋白质分析软件使用关于指定到包括保守氨基酸置换的各种取代、缺失和其他修饰的相似性度量来匹配相似序列。例如，GCG软件含有程序诸如GAP和BESTFIT，其可以与默认参数一起用来确定密切相关的多肽(例如来自不同生物物种的同源多肽)之间或野生型蛋白和其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如，GCG 6.1版。多肽序列也可以使用默认或推荐参数，使用FASTA进行比较；所述FASTA是GCG 6.1版中的程序。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供查询与搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson(2000)同上)。当将本公开的序列与含有来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一优选的算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。参见例如Altschul.等人.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402，其各自以引用的方式并入本文中。
短语“治疗有效量”意指产生施用其所希望达成的作用的量。确切量将取决于治疗目的，并且可由本领域的技术人员使用已知技术确定(参见例如Lloyd(1999)The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。
如本文所用，术语“受试者”是指需要改善、预防和/或治疗疾病或病症(诸如癌症)的动物，优选地哺乳动物。
II.用于免疫PET成像的MET抗体的放射性标记的免疫缀合物
本文提供了结合MET蛋白的放射性标记的抗原结合蛋白。在一些实施方案中，放射性标记的抗原结合蛋白包含共价键合至一种或多种螯合部分的抗原结合蛋白，所述螯合部分是能够螯合正电子发射体的化学部分。
在一些实施方案中，本文提供了结合MET的抗原结合蛋白，例如抗MET抗体或MET xMET双特异性抗体，其中结合MET的所述抗原结合蛋白共价键合至一个或多个具有以下结构的部分：
-L-MZ
其中L是螯合部分；M是正电子发射体；并且z在每次出现时独立地是0或1；并且其中z中的至少一个是1。
在一些实施方案中，放射性标记的抗原结合蛋白是式(I)化合物：
M-L-A-[L-MZ]k
(I)
A是结合MET的蛋白质；L是螯合部分；M是正电子发射体；z是0或1；并且k是0-30的整数。在一些实施方案中，k是1。
在某些实施方案中，放射性标记的抗原结合蛋白是式(II)化合物：
A-[L-M]k
(II)
其中A是结合MET的蛋白质；L是螯合部分；M是正电子发射体；并且k是1-30的整数。
在一些实施方案中，本文提供了包含具有以下结构的缀合物的组合物：
A-Lk
其中A是结合MET的蛋白质；L是螯合部分；并且k是1-30的整数；其中所述缀合物与正电子发射体以足以提供适于临床PET成像的比活度的量螯合。
下文提供合适的结合蛋白、螯合部分和正电子发射体。
A.MET结合蛋白
合适的MET结合蛋白是特异性结合MET的蛋白质，包括美国专利公开号2018-0134794中描述的那些，所述专利以全文引用的方式并入本文。本文适用的示例性抗MET抗体的氨基酸序列标识符在美国专利公开号2018-0134794的表1中列出，并且本文适用的示例性MET x MET双特异性抗体的氨基酸序列标识符在美国专利公开号2018-0134794的表5中列出。两个表分别作为表1和表2包括在下面。
表1：氨基酸序列标识符
Figure BDA0003536344320000151
Figure BDA0003536344320000161
表2：MET x MET双特异性抗体组分总结
Figure BDA0003536344320000162
Figure BDA0003536344320000171
*在双特异性抗体标识符下的括号中的数字标记(例如，“No.10”)指示在美国专利公开号2018-0134794，图1的MET x MET双特异性抗体矩阵中描绘的双特异性抗体编号。
表1列出了示例性抗MET抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含HCVR的抗体或抗原结合片段，所述HCVR包含选自表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与它们具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是抗体或抗原结合片段，其包含表1中所示的LCVR氨基酸序列，或与它们具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的抗体或抗原结合片段，所述HCVR和LCVR氨基酸序列对包含与表1中所示的LCVR氨基酸序列配对的表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者。根据某些实施方案，本公开提供了包含表1中列出的所述示例性抗MET抗体中的任一者内所含的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:2/138、10/138、18/138、26/138、34/138、42/138、50/138、58/138、66/138、74/138、82/138、90/138、98/138、106/138、114/138、122/138和130/138。在某些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自SEQ ID NO:58/138(例如，H4H13306P2)和82/138(例如，H4H13312P2)中的一者。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含重链CDR1(HCDR1)的抗体或抗原结合片段，所述重链CDR1包含选自表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含重链CDR2(HCDR2)的抗体或抗原结合片段，所述重链CDR2包含选自表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含重链CDR3(HCDR3)的抗体或抗原结合片段，所述重链CDR3包含选自表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含轻链CDR1(LCDR1)的抗体或抗原结合片段，所述轻链CDR1包含表1中所示的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含轻链CDR2(LCDR2)的抗体或抗原结合片段，所述轻链CDR2包含表1中所示的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含轻链CDR3(LCDR3)的抗体或抗原结合片段，所述轻链CDR3包含表1中所示的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)的抗体或抗原结合片段，所述HCDR3和LCDR3氨基酸序列对包含与表1中所示的LCDR3氨基酸序列配对的表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者。根据某些实施方案，本公开内容提供了抗体或其抗原结合片段，其包含在表1中列出的任何示例性抗-MET抗体内所含的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在某些实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:8/144(例如H4H13290P2)、16/144(例如H4H13291P2)、24/144(H4H13295P2)、32/144(H4H13299P2)、40/144(H4H13300P2)、48/144(H4H13301P2)、56/144(H4H13302P2)、64/144(H4H13306P2)、72/144(H4H13309P2)、80/144(H4H13311P2)、88/144(H4H13312P2)、96/144(H4H13313P2)、104/144(H4H13316P2)、112/144(H4H13318P2)、120/144(H4H13319P2)、128/144(H4H13325P2)和136/144(H4H13331P2)。
在一些实施方案中，结合蛋白是抗体或抗原结合片段，其包含表1中列出的示例性抗MET抗体中的任一者内所含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。在某些实施方案中，所述HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:4-6-8-140-142-144(例如H4H13290P2)、12-14-16-140-142-144(例如H4H13291P2)、20-22-24-140-142-144(H4H13295P2)、28-30-32-140-142-144(H4H13299P2)、36-38-40-140-142-144(H4H13300P2)、44-44-48-140-142-144(H4H13301P2)、52-54-56-140-142-144(H4H13302P2)、60-62-64-140-142-144(H4H13306P2)、68-70-72-140-142-144(H4H13309P2)、76-78-80-140-142-144(H4H13311P2)、84-86-88-140-142-144(H4H13312P2)、92-94-96-140-142-144(H4H13313P2)、100-102-104-140-142-144(H4H13316P2)、108-110-112-140-142-144(H4H13318P2)、116-118-120-140-142-144(H4H13319P2)、124-126-128-140-142-144(H4H13325P2)和132-134-136-140-142-144(H4H13331P2)。
在一些实施方案中，结合蛋白是抗体或抗原结合片段，其包含如表1中列出的示例性抗MET抗体中的任一者所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。例如，在一些实施方案中，结合蛋白是抗体或抗原结合片段，其包含选自由以下项组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组：SEQ ID NO:2/138(例如H4H13290P2)、10/138(例如H4H13291P2)、18/138(H4H13295P2)、26/138(H4H13299P2)、34/138(H4H13300P2)、42/138(H4H13301P2)、50/138(H4H13302P2)、58/138(H4H13306P2)、66/138(H4H13309P2)、74/138(H4H13311P2)、82/138(H4H13312P2)、90/138(H4H13313P2)、98/138(H4H13316P2)、106/138(H4H13318P2)、114/138(H4H13319P2)、122/138(H4H13325P2)和130/138(H4H13331P2)。
用于鉴别在HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术是本领域众所周知的，并且可以用于鉴别在本文适用的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可以用于鉴别CDR的边界的示例性惯例包括，例如，Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义基于序列差异，Chothia定义基于结构环区域的位置，并且AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷方案。参见例如，Kabat,"Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,"National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。公共数据库也可以用于鉴别抗体内的CDR序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是与包含HCVR的所述CDR和LCVR的所述CDR的抗体或其抗原结合片段竞争特异性结合MET的抗体和其抗原结合片段，其中所述HCVR和LCVR各自具有选自表1中列出的所述HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。
表2列出了几种示例性MET x MET双特异性抗体的第一抗原结合结构域(D1)和第二抗原结合结构域(D2)的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。
用于构建本文适用的双特异性抗体的各个抗MET抗原结合结构域衍生自美国公开号2018-0134794的实施例1至3中描述的各种二价单特异性抗MET抗体。本文描述的所有抗MET抗体包含相同的(“共同的”)轻链(包含SEQ ID NO:138的轻链可变区[LCVR]氨基酸序列，和SEQ ID NO:140、142和144的轻链CDR[LCDR1、LCDR2和LCDR3]氨基酸序列)。另外，所有双特异性抗体含有衍生自示例性抗MET抗体H4H13312P2的“D2”臂。因此，在该实施例中描述的所有双特异性抗体的抗原结合结构域(D1和D2)都包含该共同的轻链可变区，并且所有的D2结合臂包含来自H4H13312P2的重链可变区；但是，就其D1重链可变区(HCVR)和重链CDR(HCDR)而言，双特异性抗体彼此不同。D1和D2衍生自不同的抗MET抗体，并且因此结合至MET细胞外结构域上的单独的表位。即，D1可结合人MET的第一表位，例如包含SEQ ID NO:155的氨基酸192-204的表位；并且D2可结合包含SEQ ID NO:155的氨基酸305-315和421-455的人MET的第二表位。
本文中使用的表述“抗原结合结构域”是指能够特异性结合特定目标抗原(例如，人MET)的任何肽、多肽、核酸分子、支架型分子、肽展示分子或含多肽的构建体。本文中使用的术语“特异性结合”等意指抗原结合结构域与特定抗原形成复合物，其特征在于解离常数(KD)为500pM或更低，并且在普通测试条件下不结合其它不相关抗原。“不相关抗原”是彼此具有小于95％氨基酸同一性的蛋白、肽或多肽。
可以在本公开内容的上下文中使用的抗原结合结构域的示例性类别包括抗体、抗体的抗原结合部分、与特定抗原(例如，肽体)特异性相互作用的肽、与特定抗原特异性相互作用的受体分子、包含特异性结合特定抗原的受体的配体结合部分的蛋白、抗原结合支架(例如，DARPins、HEAT重复蛋白、ARM重复蛋白、三十四肽重复蛋白和基于天然存在的重复蛋白的其它支架等[参见，例如，Boersma和Pluckthun,2011,Curr.Opin.Biotechnol.22:849-857，和其中引用的参考文献])、以及适体或其部分。
用于确定两个分子是否彼此特异性结合的方法是本领域众所周知的，包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。例如，如在本公开内容的上下文中使用的，抗原结合结构域包括结合特定抗原(例如，靶分子[T]或内化效应蛋白[E])或其部分的多肽，其中如在表面等离子体共振测定中所测得的，KD小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约5pM、小于约4pM、小于约2pM、小于约1pM、小于约0.5pM、小于约0.2pM、小于约0.1pM或小于约0.05pM。
本文中使用的术语“表面等离子体共振”表示一种光学现象，其允许通过检测生物传感器基质内的蛋白浓度的改变来分析实时相互作用，例如使用BIAcoreTM系统(BiacoreLife Sciences division of GE Healthcare,Piscataway,NJ)。
本文中使用的术语“KD”是指特定蛋白-蛋白相互作用(例如，抗体-抗原相互作用)的平衡解离常数。除非另外指出，否则由本文适用的抗体显示的KD值是指在25℃或37℃下通过表面等离子体共振测定确定的KD值。
如上面指出的，“抗原结合结构域”(D1和/或D2)可以包含抗体或抗体的抗原结合片段或由其组成。本文中使用的术语“抗体”是指包含至少一个与特定抗原(例如人MET)特异性结合或相互作用的互补性决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物。术语“抗体”包括包含通过二硫键相互连接的四个多肽链(两个重(H)链和两个轻(L)链)的免疫球蛋白分子及其多聚体(例如，IgM)。每个重链包含重链可变区(在本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH区和VL区可以进一步再划分为高变区，称为互补性决定区(CDR)，其间插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照以下次序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在不同的实施方案中，本文提供的抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或可以是天然地或人工地修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并排分析来定义氨基酸共有序列。
本文适用的双特异性抗原结合分子的D1和/或D2组分可包含全抗体分子的抗原结合片段或由其组成。本文中使用的术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性地结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、酶促可获得的、合成的或遗传工程改造的多肽或糖蛋白。使用任意合适的标准技术诸如蛋白水解消化或重组基因工程技术(其涉及操作和表达编码抗体可变结构域和任选的恒定结构域的DNA)，可以从例如完整抗体分子衍生出抗体的抗原结合片段。这样的DNA是已知的，和/或可以容易地从例如商业来源、DNA文库(包括，例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以被合成。可以对DNA测序，并化学地或通过使用分子生物学技术进行操作，例如，以将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列为合适的构型，或导入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位(例如，分离的互补性决定区(CDR)诸如CDR3肽)或受限制的FR3-CDR3-FR4肽。其他经工程改造的分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR-移植抗体、双体、三体、四体、微体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域也被包括在本文所用的表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何尺寸或氨基酸组成并且通常将包含与一个或多个框架序列毗邻或符合读框的至少一个CDR。在具有VH结构域与VL结构域缔合的抗原结合片段中，VH和VL结构域可相对于彼此以任何合适的布置定位。例如，可变区可以是二聚体并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可替代地，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。在本公开内容的抗体的抗原结合片段内可以发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型(包括上面列出的任何示例性构型)中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或者可以通过全长或部分铰链或接头区相连。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其导致在单个多肽分子中的相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性的或半柔性的连接。此外，抗原结合片段可以包含彼此非共价结合和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价缔合(例如，通过二硫键)的上文列出的任何可变结构域和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
在一些实施方案中，结合蛋白是双特异性抗原结合分子，其包含人抗体和/或重组人抗体或其片段或由人抗体和/或重组人抗体或其片段组成。本文中使用的术语“人抗体”包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。尽管如此，人抗体还可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机的或位点特异性的体外诱变或体内体细胞突变而导入的突变)，例如在CDR中且特别是在CDR3中。但是，本文中使用的术语“人抗体”不意图包括这样的抗体：其中从另一哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系衍生出的CDR序列已经移植至人框架序列上。
本文中使用的术语“重组人抗体”意图包括通过重组方式制备、表达、建立或分离的所有人抗体，诸如使用转染进宿主细胞中的重组表达载体(在下面进一步描述)表达的抗体，从重组的组合人抗体文库(在下面进一步描述)分离的抗体，从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)分离的抗体(参见例如，Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)，或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、建立或分离的抗体。这样的重组人抗体具有从人种系免疫球蛋白序列衍生出的可变区和恒定区。但是，在某些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变(或，当使用人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，且因而重组抗体的VH和VL区域的氨基酸序列是这样的序列：其尽管源自人种系VH和VL序列和与人种系VH和VL序列有关，但是不可能天然存在于体内人抗体种系谱系内。
用于制备双特异性抗体的方法是本领域已知的，并且可以用于构建适用于本文所述的缀合物的双特异性抗原结合分子。可以在本公开内容的上下文中使用的示例性双特异性形式包括、但不限于，例如，基于scFv的或双抗体双特异性形式、IgG-scFv融合体、双重可变结构域(DVD)-Ig、四源杂交瘤(quadroma)、凸起-进入-孔洞、共同轻链(例如，具有凸起-进入-孔洞的共同轻链等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)body、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双重作用Fab(DAF)-IgG和Mab2双特异性形式(关于前述形式的综述，参见，例如，Klein等人.2012,mAbs 4:6,1-11，和其中引用的参考文献)。
可以被包括在本文适用的MET x MET双特异性抗原结合分子中的示例性抗原结合结构域(D1和D2)包括衍生自表1中公开的任何抗MET抗体的抗原结合结构域。例如，本公开包括MET x MET双特异性抗原结合分子，所述MET x MET双特异性抗原结合分子包含D1或D2抗原结合结构域，所述D1或D2抗原结合结构域包含HCVR，所述HCVR包含选自表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或与它们具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
结合蛋白可以是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含LCVR，所述LCVR包含表1中所示的氨基酸序列，或与它们具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，所述HCVR和LCVR氨基酸序列对包含与表1中所示的LCVR氨基酸序列配对的表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任一者。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含重链CDR1(HCDR1)，所述重链CDR1包含选自表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含重链CDR2(HCDR2)，所述重链CDR2包含选自表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含重链CDR3(HCDR3)，所述重链CDR3包含选自表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含轻链CDR1(LCDR1)，所述轻链CDR1包含表1中所示的LCDR1氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含轻链CDR2(LCDR2)，所述轻链CDR2包含表1中所示的LCDR2氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含轻链CDR3(LCDR3)，所述轻链CDR3包含表1中所示的LCDR3氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，所述HCDR3和LCDR3氨基酸序列对包含与表1中所示的LCDR3氨基酸序列配对的表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任一者。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含表1中列出的示例性抗MET抗体中的任一者内所含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1或D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，所述抗原结合结构域包含如由表1中列出的示例性抗MET抗体中的任一者所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内所含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
本文适用的MET x MET双特异性抗原结合分子可以包含衍生自表1的抗MET抗体中的任一者的D1抗原结合结构域和衍生自表1的任何其他抗MET抗体的D2抗原结合结构域。本公开的MET x MET双特异性抗体的非限制性实例描绘于美国专利公开号2018-0134794的图1中，其示出了272种示例性MET x MET双特异性抗体的组分。矩阵的每个编号单元(编号1至272)表示包含“D1”抗原结合结构域和“D2”抗原结合结构域的独特双特异性抗体，其中所述D1抗原结合结构域包含来自沿Y轴列出的相应抗-MET抗体的免疫球蛋白可变结构域(HCVR/LCVR氨基酸序列对)或CDR，并且其中所述D2抗原结合结构域包含来自沿X轴列出的相应抗-MET抗体的免疫球蛋白可变结构域(HCVR/LCVR氨基酸序列对)或CDR。因此，例如，在矩阵中显示的MET x MET双特异性抗原结合分子“编号10”包含来自示例性抗-MET抗体H4H13290P2的包含HCVR/LCVR对或6-CDR集合的D1抗原结合结构域，和来自示例性抗-MET抗体H4H13321P2的包含HCVR/LCVR对或6-CDR集合的D2抗原结合结构域。本文提供的MET x MET双特异性抗体的附加实例描述于美国专利公开号2018-0134794的实施例4中。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1抗原结合结构域和D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，其中所述D1抗原结合结构域包含SEQ ID NO:58/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，或包含SEQ ID NO:60-62-64-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，并且其中所述D2抗原结合结构域包含SEQID NO:82/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，或包含SEQ ID NO:84-86-88-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1抗原结合结构域和D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，其中所述D1抗原结合结构域包含SEQ ID NO:18/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，或包含SEQ ID NO:20-22-24-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，并且其中所述D2抗原结合结构域包含SEQID NO:82/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列，或包含SEQ ID NO:84-86-88-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1抗原结合结构域和D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，其中所述D1抗原结合结构域包含SEQ ID NO:58/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或包含SEQ ID NO:60-62-64-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，并且其中所述D2抗原结合结构域包含SEQ IDNO:82/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或包含SEQ ID NO:84-86-88-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。具有这些序列特征的示例性METxMET双特异性抗体是命名为H4H14639D的双特异性抗体，也被称作双特异性抗体No.122，其包含衍生自H4H13306P2的D1和衍生自H4H13312P2的D2(参见本文表2)。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含D1抗原结合结构域和D2抗原结合结构域的MET x MET双特异性抗原结合分子，其中所述D1抗原结合结构域包含SEQ ID NO:18/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或包含SEQ ID NO:20-22-24-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，并且其中所述D2抗原结合结构域包含SEQ IDNO:82/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对，或包含SEQ ID NO:84-86-88-140-142-144的一组重链和轻链CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。具有这些序列特征的示例性METxMET双特异性抗体是命名为H4H14635D的双特异性抗体，也被称作双特异性抗体No.42，其包含衍生自H4H13295P2的D1和衍生自H4H13312P2的D2(参见本文表2)。
本文适用的双特异性抗原结合分子也可以包含一种或多种多聚化组分。多聚化组分可以起作用以维持抗原结合结构域(D1和D2)之间的缔合。本文中使用的“多聚化组分”是能够与具有相同或相似结构或构成的第二多聚化组分缔合的任何大分子、蛋白、多肽、肽或氨基酸。例如，多聚化组分可以是包含免疫球蛋白CH3结构域的多肽。多聚化组分的非限制性实例是免疫球蛋白的Fc部分，例如选自同种型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的IgG以及每个同种型组内的任何同种异型的Fc结构域。在某些实施方案中，多聚化组分是Fc片段或长度为1至约200个氨基酸的氨基酸序列，其含有至少一个半胱氨酸残基。在其他实施方案中，多聚化组分是半胱氨酸残基或含半胱氨酸的短肽。其他多聚化结构域包括包含亮氨酸拉链、螺旋环基序或卷曲螺旋基序或由其组成的肽或多肽。
在某些实施方案中，本文适用的双特异性抗原结合分子包含两个多聚化结构域M1和M2，其中D1连接至M1并且D2连接至M2，并且其中M1与M2的缔合促进在单个双特异性抗原结合分子中D1和D2与彼此的物理连接。在某些实施方案中，M1和M2彼此相同。例如，M1可以是具有特定氨基酸序列的Fc结构域，且M2是具有与M1相同的氨基酸序列的Fc结构域。可替换地，M1和M2可以在一个或多个氨基酸位置彼此不同。例如，M1可以包含第一免疫球蛋白(Ig)CH3结构域，且M2可以包含第二Ig CH3结构域，其中第一和第二Ig CH3结构域彼此相差至少一个氨基酸，并且其中与具有相同M1和M2序列的参考构建体相比，至少一个氨基酸差异会降低靶向构建体与蛋白A的结合。在一个实施方案中，M1的Ig CH3结构域结合蛋白A并且M2的Ig CH3结构域含有降低或消除蛋白A结合的突变，例如H95R修饰(根据IMGT外显子编号；根据EU编号的H435R)。M2的CH3可进一步包含Y96F修饰(根据IMGT；根据EU的Y436F)。可以存在于M2的CH3中的另外的修饰包括：在IgG1 Fc结构域的情况下D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(按照IMGT编号；按照EU编号为D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；在IgG2 Fc结构域的情况下N44S、K52N和V82I(按照IMGT编号；按照EU编号为N384S、K392N和V422I)；和在IgG4 Fc结构域的情况下Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(按照IMGT编号；按照EU编号为Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。
在一些实施方案中，结合蛋白可以是“分离的”。本文中使用的“分离的双特异性抗原结合分子”是指已经从其自然环境的至少一种组分鉴定和分离和/或回收的双特异性抗原结合分子。例如，为了本公开内容的目的，已从生物体的至少一种组分或从在其中产生抗体的组织或细胞分离或移出的双特异性抗体是“分离的双特异性抗体”。分离的双特异性抗原结合分子还包括在重组细胞内的原位分子。分离的双特异性抗原结合分子是已经进行至少一个纯化或分离步骤的分子。根据某些实施方案，分离的双特异性抗原结合分子可以基本上不含其它细胞物质和/或化学物质。
与衍生出抗原结合蛋白或抗原结合结构域的相应的种系序列相比，本文适用的双特异性抗原结合分子或其抗原结合结构域(D1和/或D2)可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。通过将表1的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。衍生自表1和表2中所示的氨基酸序列中的任一者的本文适用的双特异性抗原结合分子或其抗原结合结构域(D1和/或D2)可包含一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸，所述氨基酸被突变成衍生出抗体的种系序列的对应残基，或被突变成另一个人种系序列的对应残基，或被突变成对应种系残基的保守氨基酸置换(此类序列变化在本文中统称为“种系突变”)。
从表1和表2的重链和轻链可变区序列开始，本领域的普通技术人员可以容易地产生许多双特异性抗原结合分子或其抗原结合结构域(D1和/或D2)，所述双特异性抗原结合分子或其抗原结合结构域包含一个或多个单独的种系突变或其组合。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回衍生出抗体的原始种系序列中的残基。在其他实施方案中，仅某些残基被突变回原始种系序列，例如，仅存在于FR1的前8个氨基酸内或FR4的后8个氨基酸内的突变残基，或仅存在于CDR1、CDR2或CDR3内的突变残基。在其他实施方案中，框架和/或一个或多个CDR残基中的一个或多个被突变为不同的种系序列(即，与最初衍生出所述抗体的种系序列不同的种系序列)的一个或多个对应残基。
在一些实施方案中，结合蛋白可以含有框架和/或CDR区内的两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些个别残基突变为特定种系序列的对应残基，而不同于原始种系序列的某些其他残基得以保持或突变为不同种系序列的对应残基。例如，可以容易地测试含有一个或多个种系突变的双特异性抗原结合分子，或其抗原结合结构域(D1和/或D2)的一种或多种所需特性，诸如提高的结合特异性、增加的结合亲和力、提高或增强的拮抗或激动生物学特性(视情况而定)、降低的免疫原性等。本公开内涵盖以这种一般方式获得的双特异性抗原结合分子或其抗原结合结构域(D1和/或D2)。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含表1和表2中提供的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体的抗MET抗体或双特异性抗原结合分子。在该方面内包括的示例性变体包括具有一个或多个保守置换的表1和表2的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一者的变体。例如，本文适用的结合蛋白包括抗MET抗体和MET x MET双特异性抗原结合分子，其HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列相对于本文表1所示的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸置换。
示例性变体还包括与表1中提供的抗体的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有实质序列同一性的变体。如本文在氨基酸序列的上下文中所使用的，术语“实质同一性”或“实质相同的”是指，两个氨基酸序列，当最佳比对时，例如通过使用默认缺口权重的程序GAP或BESTFIT，共享至少95％、98％或99％序列同一性。在某些实施方案中，不相同的残基位置因保守氨基酸置换而不同。“保守氨基酸置换”是这样的置换：其中一个氨基酸残基被置换为另一个含有具有类似化学性质(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的氨基酸残基。一般而言，保守氨基酸置换不会实质上改变蛋白的功能性质。在两个或更多个氨基酸序列的保守置换彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似性程度以校正置换的保守性质。用于进行该调整的手段是本领域的技术人员熟知的。参见例如，Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331，该文献以引用的方式并入本文。含有具有相似的化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括：(1)脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及(7)含硫侧链，即半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸置换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守替代是在以下文献中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人(1992)Science 256:1443-1445，该文献以引用的方式并入本文。“适度保守”替换是在PAM250log似然矩阵中具有非负值的任何变化。
通常使用序列分析软件测量两个不同氨基酸序列之间的序列同一性。序列分析软件使用分配给各种置换、缺失和其它修饰(包括保守氨基酸置换)的相似性量度来匹配相似序列。例如，GCG软件含有程序诸如GAP和BESTFIT，其可以与默认参数一起用来确定密切相关的多肽(例如来自不同生物物种的同源多肽)之间或野生型蛋白和其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见，例如，GCG 6.1版。还可以使用FASTA(GCG 6.1版中的程序)使用默认或推荐参数对多肽序列进行比较。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供查询与搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson(2000)同上)。当将本文提供的序列与含有来自不同生物的大量序列的数据库进行对比时，另一种优选的算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。参见例如Altschul.等人.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-402，每个文献均以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，结合蛋白是包含Fc结构域的抗MET抗体或MET x MET双特异性抗原结合蛋白，所述Fc结构域包含例如在酸性pH下与中性pH相比增强或减弱抗体与FcRn受体的结合的一个或多个突变。例如，抗MET抗体和MET x MET双特异性抗原结合蛋白可在Fc结构域的CH2或CH3区中包含突变，其中所述突变在酸性环境下(例如，在pH范围为约5.5至约6.0的胞内体中)增加了Fc结构域对FcRn的亲和力。当向动物施用时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期增加。这样的Fc修饰的非限制性实例包括，例如，在位置250(例如，E或Q)；250和428(例如，L或F)；252(例如，L/Y/F/W或T)、254(例如，S或T)和256(例如，S/R/Q/E/D或T)处的修饰；或在位置428和/或433(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如，H/F或Y)处的修饰；或在位置250和/或428处的修饰；或在位置307或308(例如，308F、V308F)和434处的修饰。在一个实施方案中，修饰包含428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；和307和/或308修饰(例如，308F或308P)。
例如，结合蛋白可以是包含Fc结构域的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗原结合蛋白，所述Fc结构域包含一对或多对或者一组或多组选自由以下项组成的组的突变：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。前述Fc结构域突变的所有可能组合和本文适用的抗体可变结构域内的其他突变都涵盖在本公开的范围内。
在一些实施方案中，结合蛋白是与包含HCVR的所述CDR和LCVR的所述CDR的参考抗体或其抗原结合片段交叉竞争结合MET的抗体和其抗原结合片段，其中所述HCVR和LCVR各自具有选自表1中列出的所述HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。
结合蛋白特征
在一些实施方案中，结合蛋白是以高亲和力结合单体人MET的分离的抗体或抗原结合片段。例如，本文适用的结合蛋白包括以小于约230nM的KD结合单体人MET(例如，hMET.mmh)的抗MET抗体，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。根据某些实施方案，本文适用的抗MET抗体在37℃下以小于约230nM、小于约200nM、小于约150nM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约8nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM或小于约3nM的KD结合单体人MET，如通过表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。
在一些实施方案中，结合蛋白是以大于约1分钟的解离半衰期(t1/2)结合单体人MET(例如，hMET.mmh)的抗体或其抗原结合片段，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。根据某些实施方案，此类抗MET抗体在37℃下以大于约1分钟、大于约2分钟、大于约4分钟、大于约6分钟、大于约8分钟、大于约10分钟、大于约12分钟、大于约14分钟、大于约16分钟、大于约18分钟或大于约20分钟或更长的t1/2结合单体人MET，如通过表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。
在一些实施方案中，结合蛋白是以高亲和力结合二聚体人MET(例如，hMET.mFc)的抗体或其抗原结合片段。例如，此类抗MET抗体以小于约3nM的KD结合二聚体人MET，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。本文适用的抗MET抗体可在37℃以小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约0.9nM、小于约0.8nM、小于约0.7nM、小于约0.6nM、小于约0.5nM、小于约0.4nM、小于约0.3nM或小于约0.25nM的KD结合二聚体人MET，如通过表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。
在一些实施方案中，结合蛋白是以大于约4分钟的解离半衰期(t1/2)结合二聚体人MET(例如，hMET.mFc)的抗体或其抗原结合片段，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。根据某些实施方案，本文适用的抗MET抗体在37℃下以大于约4分钟、大于约5分钟、大于约10分钟、大于约20分钟、大于约30分钟、大于约40分钟、大于约50分钟、大于约60分钟、大于约70分钟、大于约80分钟、大于约90分钟、大于约100分钟、大于约105分钟或更长的t1/2结合二聚体人MET，如通过表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例3中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。
在一些实施方案中，结合蛋白是以大于约10分钟的解离半衰期(t1/2)结合二聚体人MET(例如，hMET.mFc)的抗体或其抗原结合片段，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例5中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。根据某些实施方案，本文适用的MET x MET双特异性抗原结合蛋白在37℃下以大于约10分钟、大于约20分钟、大于约30分钟、大于约40分钟、大于约50分钟、大于约60分钟、大于约70分钟、大于约80分钟、大于约90分钟、大于约100分钟、大于约200分钟、大于约300分钟、大于约400分钟、大于约500分钟、大于约600分钟、大于约700分钟、大于约800分钟、大于约900分钟、大于约1000分钟、大于约1100分钟或更长的t1/2结合二聚体人MET，如通过表面等离子体共振，例如使用如美国专利公开号2018-0134794的实施例5中所定义的测定法形式，或基本上相似的测定法所测量。
在一些实施方案中，结合蛋白是抗体或其抗原结合片段，例如MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其例如在体外配体结合测定中阻断HGF和MET之间的相互作用。本文适用的MET x MET双特异性抗原结合蛋白可阻断HGF与表达人MET的细胞的结合，并且在不存在HGF信号传导的情况下诱导最小的MET活化或不诱导MET活化。例如，本文适用的是MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其在基于细胞的MET活性报告分子测定中表现出的MET激动剂活性程度是在使用仅包含D1或D2的单特异性抗体的等效活性报告分子测定中观察到的MET激动剂活性的小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％、小于3％、小于2％或小于1％。
在一个实施方案中，抗体或其片段是结合至MET的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段表现出以下特征中的一个或多个：(i)包含HCVR，其具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(ii)包含LCVR，其具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(iii)包含HCDR3结构域，其具有选自由SEQ ID NO:8、16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96、104、112、120、128和136组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR3结构域，其具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(iv)包含HCDR1结构域，其具有选自由SEQ ID NO:4、12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92、100、108、116、124和132组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；HCDR2结构域，其具有选自由SEQ ID NO:6、14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94、102、110、118、126和134组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；LCDR1结构域，其具有SEQ ID NO:140的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR2结构域，其具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(v)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的第一结合特异性和与肿瘤特异性抗原的第二结合特异性；(vi)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的一个表位的第一结合特异性和与MET的第二表位的第二结合特异性；(vii)以小于约230nM的KD结合至单体人MET(例如，hMET.mmh)，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；(viii)以小于约3nM的KD结合至二聚体人MET，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；(ix)阻断HGF与MET的结合；以及(x)在患有癌症的受试者中抑制肿瘤生长并增加存活率。
在一个实施方案中，抗体或其片段是阻断HGF与MET结合的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段表现出以下特征中的一个或多个：(i)包含HCVR，其具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(ii)包含LCVR，其具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(iii)包含HCDR3结构域，其具有选自由SEQ ID NO:8、16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96、104、112、120、128和136组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR3结构域，其具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(iv)包含HCDR1结构域，其具有选自由SEQ ID NO:4、12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92、100、108、116、124和132组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；HCDR2结构域，其具有选自由SEQ ID NO:6、14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94、102、110、118、126和134组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；LCDR1结构域，其具有SEQ ID NO:140的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR2结构域，其具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；(v)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的第一结合特异性和与肿瘤特异性抗原的第二结合特异性；(vi)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的一个表位的第一结合特异性和与MET的第二表位的第二结合特异性；(vii)以小于约230nM的KD结合至单体人MET(例如，hMET.mmh)，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；(viii)以小于约3nM的KD结合至二聚体人MET，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；以及(ix)在患有癌症的受试者中抑制肿瘤生长并增加存活率。
在某些实施方案中，结合蛋白是MET x MET双特异性抗体或其抗原结合片段，其中第一抗原结合结构域(D1)结合人MET的第一表位，并且第二抗原结合结构域(D2)结合人MET的第二表位，其呈天然形式，或重组产生，或结合至其片段。在某些方面，D1和D2不相互竞争对人MET的结合。在一些实施方案中，结合蛋白在基于细胞的MET活性报告分子测定中表现出最小的激动剂活性。在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子在基于细胞的MET活性报告分子测定中表现出的MET激动剂活性程度小于仅包含D1或D2的单价抗原结合分子的MET激动剂活性的10％。在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子促进细胞表面表达的MET的降解。在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子抑制携带MET遗传改变的肿瘤的生长或促进肿瘤消退。在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子抑制由自分泌HGF信号传导驱动生长的肿瘤的生长或促进肿瘤消退。
在一些实施方案中，本文适用的抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体结合至与本文表1或表2中所述的任何特定示例性抗体或具有表1或表2中所述的任何示例性抗体的CDR序列的抗体相同的表位或该表位的一部分。同样，合适的结合蛋白还包括与本文表1或表2中所述的任何特定示例性抗体或具有表1或表2中所述的任何示例性抗体的CDR序列的抗体竞争结合MET或MET片段的抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体。例如，合适的结合蛋白包括与美国专利公开号2018-0134794中定义的一种或多种抗体交叉竞争结合MET或与美国专利公开号2018-0134794中定义的一种或多种抗体交叉竞争结合MET的抗MET抗体和MET xMET双特异性抗体。
本文所述的抗体和抗原结合片段特异性结合至MET并调节MET与HGF的相互作用。MET x MET双特异性抗体可以高亲和力或低亲和力结合至MET。在某些实施方案中，抗体是阻断抗体，其中抗体结合至MET并阻断MET与HGF的相互作用。在一些实施方案中，本公开的阻断抗体阻断HGF与MET的结合。在一些实施方案中，阻断抗体适用于治疗患有癌症的受试者。它们可用于抑制受试者中肿瘤细胞的生长。它们可以单独或作为辅助疗法与本领域已知的其他治疗部分或模式一起用于治疗癌症。在某些实施方案中，以低亲和力结合至MET的MET x MET双特异性抗体用作多特异性抗原结合分子，其中第一结合特异性以低亲和力结合至MET，并且第二结合特异性结合至MET的不同表位或肿瘤特异性抗原。
本公开的某些抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体能够结合至MET并中和其活性，如由体外或体内测定法所确定。可以使用本领域技术人员已知的任何标准方法(包括如本文所述的结合测定法或活性测定法)来测量本公开的抗体结合至MET并中和其活性的能力。
用于测量结合活性的非限制性、示例性体外测定法在US-2018-0134794A1的实施例3和实施例6中加以说明。在实施例6中，通过表面等离子体共振确定对人MET x MET双特异性抗体人MET的结合亲和力和动力学常数，并且在T200 Biacore仪器上进行测量。在实施例7US-2018-0134794中，使用阻断测定法来确定抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体阻断HGF的MET结合能力的能力。在US-2018-0134794的实施例4中，使用阻断测定法来确定不同抗MET抗体之间的交叉竞争。US-2018-0134794的实施例8描述了通过抗MET抗体和MET xMET双特异性抗体对过度表达MET的细胞的生长抑制。在US-2018-0134794的实施例10中，MET x MET双特异性抗体显示出诱导MET降解并抑制MET和ERK两者磷酸化。US-2018-0134794还提供了证实由MET x MET双特异性抗体诱导的体内和体外肿瘤生长抑制或肿瘤消退的几个实施例。
除非另外具体指示，否则如本文所用，术语“抗体”应理解为涵盖包含两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的抗体分子(即，“完整抗体分子”)以及其抗原结合片段。如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、酶促可获得的、合成性或基因工程化的多肽或糖蛋白。如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”是指保留特异性结合至MET的能力的抗体的一个或多个片段。抗体片段可以包括Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、dAb片段、含有CDR的片段或分离的CDR。在某些实施方案中，术语“抗原结合片段”是指多特异性抗原结合分子的多肽或其片段。在此类实施方案中，术语“抗原结合片段”包括例如特异性结合至MET的HGF的细胞外结构域。可以使用任何合适的标准技术，如蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗体可变域和(任选地)恒定域的DNA的重组基因工程技术，例如，从完整抗体分子衍生抗体的抗原结合片段。这样的DNA是已知的，和/或可以容易地从例如商业来源、DNA文库(包括，例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以被合成。可以对DNA测序，并化学地或通过使用分子生物学技术进行操作，例如，以将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列为合适的构型，或导入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位(例如，分离的互补性决定区(CDR)诸如CDR3肽)或受限制的FR3-CDR3-FR4肽。如本文所用，其他经工程化的分子(诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双体、三体、四体、微体、纳米体(例如，单价纳米体、二价纳米体等)、小模块免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域)也被涵盖在表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何尺寸或氨基酸组成并且一般包含邻近一个或多个框架序列或与一个或多个框架序列同框的至少一个CDR。在具有VH结构域与VL结构域缔合的抗原结合片段中，VH和VL结构域可相对于彼此以任何合适的布置定位。举例来说，可变区可以是二聚体，并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可替代地，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本公开的抗体的抗原结合片段内发现的可变域和恒定域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；以及(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型(包括上面列出的任何示例性构型)中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或者可以通过全长或部分铰链或接头区相连。铰链区可以由在单一多肽分子中相邻可变结构域与/或恒定结构域之间产生柔性或半柔性键联的至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成。此外，本公开的抗体的抗原结合片段可以包含具有上文所列的可变结构域和恒定结构域构型中的任一个的彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域(例如，通过二硫键)呈非共价缔合的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
如同完整抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段将通常包含至少两个不同的可变域，其中每个可变域能够特异性地结合单独的抗原或同一抗原上的不同表位。使用本领域可用的常规技术，可以使任何多特异性抗体形式(包括本文公开的示例性双特异性抗体形式)适用于本公开的抗体的抗原结合片段的语境中。
本文适用的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体和抗体片段涵盖氨基酸序列与所描述的抗体的氨基酸序列不同，但保留结合MET的能力的蛋白质。当与亲本序列对比时，这样的变体抗体和抗体片段包含氨基酸的一个或多个添加、缺失或置换，但显示出与所述抗体的生物学活性基本上等效的生物学活性。同样，本公开的抗体编码DNA序列涵盖当与所公开的序列相比较时包含一个或多个核苷酸添加、缺失或取代，但编码与本公开的抗体或抗体片段基本上生物等效的抗体或抗体片段的序列。
如果例如两种抗原结合蛋白或抗体是当在类似实验条件下以单次剂量或多次剂量施用相同摩尔剂量时，吸收速率和程度不展示显著差异的药物等效物或药物替代物，则将其视为生物等效的。如果某些抗体在吸收程度上是等效的，但是在吸收速率上不是等效的，则将其视为等效物或药物替代物，但因为吸收速率的此类差异是有意的并且反映在标记中，所以可以被视为生物等效的，这些抗体对于例如在长期使用中达到有效体内药物浓度不是必需的，并且被认为对于所研究的特定药品不具有临床意义。
在一个实施方案中，如果两种抗原结合蛋白的安全性、纯度或效力无临床上有意义的差异，则这两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施方案中，如果个体可以在参照产品与生物产品之间切换一次或多次，但不良作用风险相较于无此类切换的持续疗法无预期增加，包括临床上显著的免疫原性变化或有效性降低，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施方案中，如果两种抗原结合蛋白都通过针对一个或多个使用条件的一种或多种共同作用机制来发挥作用，以达到此类机制是已知的程度，则所述两种抗原结合蛋白是生物等效的。
生物等效性可以由体内和/或体外方法证明。生物等效性度量包括，例如，(a)在人或其他哺乳动物中的体内测试，其中测量了随时间推移的血液、血浆、血清或其他生物流体中的抗体或其代谢物的浓度；(b)与人体内生物利用率数据相关联并且可以合理地预测人体内生物利用率数据的体外测试；(c)在人或其他哺乳动物中的体内测试，其中测量了随时间推移的抗体(或其靶标)的适当急性药理作用；以及(d)建立抗体的安全性、功效或生物利用率或生物等效性的良好对照的临床试验。
本公开的抗体的生物等效变体可以通过例如进行残基或序列的各种取代，或使生物活性不需要的末端或内部残基或序列缺失来构建。举例来说，可以缺失不是生物活性必需的半胱氨酸残基或用其他氨基酸替换，以防止在复性时形成不必要的或不正确的分子内二硫桥键。在其他情形下，生物等效抗体可以包括包含氨基酸变化的抗体变体，这些变化修饰抗体的糖基化特征，例如消除或去除糖基化的突变。
本文适用的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体可包含Fc结构域，所述Fc结构域包含例如在酸性pH下与中性pH相比增强或减弱抗体与FcRn受体的结合的一个或多个突变。例如，本公开包括在Fc结构域的CH2或CH3区中包含突变的MET x MET双特异性抗体，其中所述突变在酸性环境下(例如，在pH范围为约5.5至约6.0的胞内体中)增加了Fc结构域对FcRn的亲和力。当向动物施用时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期增加。此类Fc修饰的非限制性实例包括例如位置250(例如，E或Q)；250和428(例如，L或F)；252(例如，L/Y/F/W或T)、254(例如，S或T)和256(例如，S/R/Q/E/D或T)处的修饰；或位置428和/或433(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434处的修饰(例如，A、W、H、F或Y[N434A、N434W、N434H、N434F或N434Y])；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308处的修饰(例如，308F、V308F)以及位置434处的修饰。在一个实施方案中，修饰包含428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；和307和/或308修饰(例如，308F或308P)。在又一个实施方案中，修饰包含265A(例如D265A)和/或297A(例如N297A)修饰。
例如，本文适用的是包含Fc结构域的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体，所述Fc结构域包含一对或多对或者一组或多组选自由以下项组成的组的突变：250Q和248L(例如T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如M428L和N434S)；257I和311I(例如P257I和Q311I)；257I和434H(例如P257I和N434H)；376V和434H(例如D376V和N434H)；307A、380A和434A(例如T307A、E380A和N434A)；以及433K和434F(例如H433K和N434F)。在一个实施方案中，本公开包括MET xMET双特异性抗体，其包含在IgG4的铰链区中包含S108P突变的Fc域以促进二聚体稳定。前述Fc结构域突变的所有可能组合和本文表1中提供的抗体可变结构域内的其他突变都涵盖在本公开的范围内。
本文适用的抗MET抗体和MET x MET双特异性抗体可以包含嵌合重链恒定(CH)区，其中嵌合CH区包含衍生自多于一种免疫球蛋白同种型的CH区的区段。举例来说，抗体可以包含嵌合CH区，所述区包含衍生自人类IgG1、人类IgG2或人类IgG4分子的CH2结构域的部分或全部，其与衍生自人类IgG1、人类IgG2或人类IgG4分子的CH3结构域的部分或全部组合。根据某些实施方案，抗体可以包含具有嵌合铰链区的嵌合CH区。举例来说，嵌合铰链可以包含衍生自人类IgG1、人类IgG2或人类IgG4铰链区的“上铰链”氨基酸序列(根据EU编号，位置216到227的氨基酸残基)，其与衍生自人类IgG1、人类IgG2或人类IgG4铰链区的“下铰链”序列(根据EU编号，位置228到236的氨基酸残基)组合。根据某些实施方案，嵌合铰链区包含衍生自人类IgG1或人类IgG4上铰链的氨基酸残基，和衍生自人类IgG2下铰链的氨基酸残基。包含如本文所描述的嵌合CH区的抗体可以在某些实施方案中呈现修饰的Fc效应功能，而不会不利地影响抗体的治疗或药代动力学特性。(参见例如，2014年1月31日提交的USSN.14/170,166，其公开内容以全文引用的方式并入本文中)。
B.正电子发射体和螯合部分
合适的正电子发射体包括但不限于与螯合部分形成稳定复合物，并且具有适于免疫PET成像目的的物理半衰期的正电子发射体。示例性正电子发射体包括但不限于89Zr、68Ga、64Cu、44Sc和86Y。合适的正电子发射体还包括与MET结合蛋白直接键合的那些正电子发射体，包括但不限于76Br和124I，以及通过辅基引入的那些正电子发射体，例如18F。
本文所述的螯合部分是与MET结合蛋白(例如，MET x MET双特异性抗体)共价键合的化学部分，并且包含能够螯合正电子发射体(即，能够与正电子发射体反应以形成配位螯合复合物)的部分。合适部分包括允许高效负载特定金属，并且形成对于诊断用途(例如，免疫PET成像)来说在体内足够稳定的金属-螯合剂复合物的部分。说明性螯合部分包括使正电子发射体的解离和在矿物骨、血浆蛋白和/或骨髓沉积中的累积减到最少，直到适于诊断用途的程度的螯合部分。
螯合部分的实例包括但不限于与正电子发射体89Zr、68Ga、64Cu、44Sc和/或86Y形成稳定复合物的那些螯合部分。说明性螯合部分包括但不限于以下中所描述的螯合部分：Nature Protocols,5(4):739,2010；Bioconjugate Chem.,26(12):2579(2015)；ChemCommun(Camb),51(12):2301(2015)；Mol.Pharmaceutics,12:2142(2015)；Mol.ImagingBiol.,18:344(2015)；Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging,37:250(2010)；Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging(2016).doi:10.1007/s00259-016-3499-x；BioconjugateChem.,26(12):2579(2015)；WO 2015/140212A1；以及U.S.5,639,879，所述文献以全文引用的方式并入本文中。
示例性螯合部分还包括但不限于包含以下部分的那些：去铁敏(DFO)(也称为去铁胺)、1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸)酸(DOTP)、1R,4R,7R,10R)-α'α”α”'-四甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTMA)、1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸(DOTA)、H4octapa、H6phospa、H2dedpa、H5decapa、H2azapa、HOPO、DO2A、1,4,7,10-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷(DOTAM)、1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸(NOTA)、1,4,7,10-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷(DOTAM)、1,4,8,11-四氮杂双环[6.6.2]十六烷-4,11-二乙酸(CB-TE2A)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷(Cyclen)、1,4,8,11-四氮杂环十四烷(Cyclam)、八齿螯合剂、六齿螯合剂、基于膦酸盐的螯合剂、大环螯合剂、包含大环对苯二甲酰胺配体的螯合剂、双官能螯合剂、镰刀霉氨酸C和镰刀霉氨酸C衍生物螯合剂、三乙酰镰刀霉氨酸C(TAFC)、铁草铵E(FOXE)、铁草铵B(FOXB)、铁色素A(FCHA)等等。
在一些实施方案中，螯合部分通过接头部分共价键合至MET结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，所述接头部分将螯合部分的螯合部与结合蛋白共价连接。在一些实施方案中，这些接头部分由以下反应部分之间的反应形成：MET结合蛋白的反应部分(例如，抗体的半胱氨酸或赖氨酸)和连接至螯合剂的反应部分(包括例如对异硫氰酸根合苯甲基和下文缀合方法中提供的反应部分)。此外，此类接头部分任选地包含用于调节极性、溶解度、空间相互作用、刚度和/或螯合部分与MET结合蛋白之间的长度的目的的化学基团。
C.放射性标记的MET结合蛋白缀合物的制备
放射性标记的抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体缀合物可以通过(1)使MET结合蛋白(例如，MET x MET双特异性抗体)与包含正电子发射体螯合剂和对MET结合蛋白的期望缀合位点具有反应性的部分的分子反应，以及(2)负载期望正电子发射体来制备。
合适的缀合位点包括但不限于赖氨酸和半胱氨酸，其两者可以是例如天然或工程化的，并且可以例如存在于抗体的重链或轻链上。半胱氨酸缀合位点包括但不限于从抗体二硫键突变、插入或减少获得的位点。用于制造半胱氨酸工程化抗体的方法包括但不限于WO2011/056983中所公开的方法。位点特异性缀合方法也可以用于将缀合反应引导到抗体的特定位点、达成期望的化学计量和/或达成期望的药物与抗体(DAR)的比率。此类缀合方法是本领域普通技术人员已知的，并且包括但不限于半胱氨酸工程化和酶促和化学酶促方法，包括但不限于谷氨酰胺缀合、Q295缀合和谷氨酰胺转氨酶介导的缀合，以及描述于J.Clin.Immunol.,36:100(2016)中的方法，所述文献以全文引用的方式并入本文中。对期望缀合位点具有反应性的合适部分一般能够实现MET结合蛋白(例如，抗体)与正电子发射体螯合剂的高效和便捷偶联。对赖氨酸和半胱氨酸位点具有反应性的部分包括普通技术人员已知的亲电子基团。在某些方面，当所需的缀合位点是赖氨酸时，反应性部分是异硫氰酸酯，例如对异硫氰酸根合苯甲基或反应性酯。在某些方面，当所需缀合位点是半胱氨酸时，反应部分是马来酰亚胺。
当螯合剂是去铁敏(DFO)(也称为去铁胺)时，合适的反应部分包括但不限于异硫氰酸根合苯甲基、正羟基琥珀酰亚胺酯、2,3,5,6四氟苯酚酯、正琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯，以及描述于BioMed Research International,第2014卷,文章编号203601中的部分，所述文献以全文引用的方式并入本文中。在某些实施方案中，MET结合蛋白是抗体，并且包含正电子发射体螯合剂和对缀合位点具有反应性的部分的分子是对异硫氰酸根合苯甲基-去铁敏(p-SCN-Bn-DFO)：
Figure BDA0003536344320000531
正电子发射体负载通过以下实现：将MET结合蛋白螯合剂缀合物与正电子发射体一起培育，持续足以允许所述正电子发射体与螯合剂配位的时间，例如通过进行本文提供的实例中所描述的方法或基本上相似的方法。
D.缀合物的说明性实施方案
本公开包括放射性标记的抗体缀合物，其包含结合人MET的抗体或其抗原结合片段(例如，抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体)和正电子发射体。本公开还包括放射性标记的抗体缀合物，其包含抗MET抗体或MET x MET双特异性抗体、螯合部分和正电子发射体。
在一些实施方案中，螯合部分包含能够与89Zr形成复合物的螯合剂。在某些实施方案中，螯合部分包含去铁敏。在某些实施方案中，螯合部分是对异硫氰酸根合苯甲基-去铁敏。
在一些实施方案中，正电子发射体是89Zr。在一些实施方案中，小于1.0％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.9％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.8％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.7％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.6％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.5％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.4％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.3％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，小于0.2％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合，或者小于0.1％的MET结合蛋白与正电子发射体缀合。
在一些实施方案中，缀合物的螯合部分与抗体的比率是1至2。如本文所用，“螯合部分与抗体的比率”是螯合剂部分与抗体的平均比率并且是每抗体螯合剂负载的量度。这种比率类似于由本领域技术人员使用以测量抗体-药物缀合物(ADC)的每抗体药物负载的“DAR”，即药物-抗体比率；在本文针对iPET成像所述的缀合物的情形下，可以使用本文所述的方法和本领域中已知用于测定DAR的其他方法，例如Wang等人,Antibody-DrugConjugates,The 21st Century Magic Bullets for Cancer(2015)中所述的方法确定螯合部分与抗体的比率。在一些实施方案中，螯合部分与抗体的比率是1.0至4.0、或约1.0至3.0、或约1.0至2.0。在一些实施方案中，螯合部分与抗体的比率是约1.26，例如约1.3。
在一个特定实施方案中，螯合部分是对异硫氰酸根合苯甲基-去铁敏，并且正电子发射体是89Zr。在另一个特定实施方案中，螯合部分是对异硫氰酸根合苯甲基-去铁敏，并且正电子发射体是89Zr，并且缀合物的螯合部分与抗体的比率是1至2。
在一些实施方案中，本文提供了结合MET的抗原结合蛋白，其中结合MET的所述抗原结合蛋白共价键合至一个或多个具有以下结构的部分：
-L-MZ
其中L是螯合部分；M是正电子发射体；并且z在每次出现时独立地是0或1；并且其中z中的至少一个是1。在某些实施方案中，放射性标记的抗原结合蛋白是式(I)化合物：
M-L-A-[L-MZ]k
(I)
A是结合MET的蛋白质；L是螯合部分；M是正电子发射体；z是0或1；并且k是0-30的整数。在一些实施方案中，k是1。在一些实施方案中，k是2。
在一些实施方案中，L是：
Figure BDA0003536344320000551
在一些实施方案中，M是89Zr。
在一些实施方案中，k是1至2的整数。在一些实施方案中，k是1。在一些实施方案中，k是2。
在一些实施方案中，-L-M是
Figure BDA0003536344320000552
本公开中还包括合成放射性标记的抗体缀合物的方法，所述方法包括使式(III)化合物：
Figure BDA0003536344320000553
(III)
与89Zr接触，其中A是结合MET的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，式(III)化合物通过使结合MET的抗体或其抗原结合片段与p-SCN-Bn-DFO接触而合成。
本文还提供了式(III)化合物与89Zr之间反应的产物。
本文提供了式(III)化合物：
Figure BDA0003536344320000561
其中A是结合MET的抗体或其抗原结合片段，并且k是1-30的整数。在一些实施方案中，k是1或2。
本文提供了抗体缀合物，其包含(i)结合MET的抗体或其抗原结合片段和(ii)一种或多种螯合部分。
在一些实施方案中，螯合部分包含：
Figure BDA0003536344320000571
Figure BDA0003536344320000572
是与抗体或其抗原结合片段的共价键。
在一些方面，抗体缀合物的螯合部分与抗体的比率是约1.0到约2.0。在一些方面，抗体缀合物的螯合部分与抗体的比率是约1.3。
在一些实施方案中，本文提供了包含具有以下结构的缀合物的组合物：
A-Lk
其中A是结合MET的蛋白质；L是螯合部分；并且k是1-30的整数；其中所述缀合物与正电子发射体以足以提供适于临床PET成像的比活度的量螯合。在一些实施方案中，螯合正电子发射体的量是足以提供每1-50mg结合MET的蛋白质约1至约50mCi的比活度的量。
在一些实施方案中，螯合正电子发射体的量是足以提供每1-50mg结合MET的蛋白质至多25mCi、至多20mCi、至多15mCi、至多12mCi或至多10mCi，例如在约3至约25mCi、约10至约25mCi、约1至约15mCi、约3至约15mCi、约5至约25mCi、约15至约25mCi、或约3至约10mCi、或约12mCi、或约21mCi范围内的比活度的量。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段以小于约230nM的结合解离平衡常数(KD)结合单体人MET，如在25℃或37℃下的表面等离子体共振分析中所测量。
在一些实施方案中，在25℃或37℃下的表面等离子体共振分析中，抗体或其抗原结合片段以小于约3nM的KD结合二聚体人MET。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与参考抗体竞争与人MET的结合，所述参考抗体包含HCVR的互补决定区(CDR)，其中HCVR具有选自由表1中列出的HCVR序列组成的组的氨基酸序列；以及LCVR的CDR，其中LCVR具有表1中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，参考抗体或其抗原结合片段包含如表1中所示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，参考抗体包含选自由SEQ ID NO:2/138、10/138、18/138、26/138、34/138、42/138、50/138、58/138、66/138、74/138、82/138、90/138、98/138、106/138、114/138、122/138和130/138组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段阻断HGF与MET的结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段不增加或减少MET与其配体的结合。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含HCVR的互补决定区(CDR)，其中HCVR具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列；以及LCVR的CDR，其中LCVR具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列。在某些实施方案中，分离抗体包含选自由SEQ ID NO:2/138、10/138、18/138、26/138、34/138、42/138、50/138、58/138、66/138、74/138、82/138、90/138、98/138、106/138、114/138、122/138和130/138组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一些实施方案中，抗体是特异性结合至人MET的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含具有选自由表1中列出的HCVR序列组成的组的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
在一些实施方案中，抗体是特异性结合至人MET的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含具有表1中所示的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)。
在一些实施方案中，抗体是特异性结合至人MET的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含(a)具有选自由表1中列出的HCVR序列组成的组的氨基酸序列的HCVR；和(b)具有表1中所示的氨基酸序列的LCVR。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中列出的重链可变区(HCVR)序列中的任一个中所含的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；和表1中所示的轻链可变区(LCVR)序列中所含的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，其具有选自由SEQ ID NO:4、12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92、100、108、116、124和132组成的组的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，其具有选自由SEQ ID NO:6、14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94、102、110、118、126和134组成的组的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，其具有选自由SEQ ID NO:8、16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96、104、112、120、128和136组成的组的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，其具有SEQ ID NO:140的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，其具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3结构域，其具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含选自由SEQ ID NO:2/138、10/138、18/138、26/138、34/138、42/138、50/138、58/138、66/138、74/138、82/138、90/138、98/138、106/138、114/138、122/138和130/138组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含HCVR的CDR，其中HCVR具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列；以及LCVR的CDR，其中LCVR具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:82/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对内的CDR。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:82的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:18/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对内的CDR。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:18的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:58/138的HCVR/LCVR氨基酸序列对内的CDR。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MET抗体，其包含SEQ ID NO:58的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其包含在SEQ ID NO:58的D1-HCVR氨基酸序列内的CDR和在SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列内的CDR。在一些方面，所述MET x MET双特异性抗原结合蛋白还包含在SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列内的CDR。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:58的D1-HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列。在一些方面，所述MET x MET双特异性抗原结合蛋白还包含SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其包含在SEQ ID NO:18的D1-HCVR氨基酸序列内的CDR和在SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列内的CDR。在一些方面，所述MET x MET双特异性抗原结合蛋白还包含在SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列内的CDR。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是MET x MET双特异性抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:18的D1-HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，放射性标记的抗体缀合物包含结合MET的抗体或其抗原结合片段、螯合部分和正电子发射体，其中结合MET的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:58的D1-HCVR氨基酸序列内的CDR、SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列内的CDR和SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列内的CDR，螯合部分是去铁敏，并且正电子发射体是89Zr。
在一些实施方案中，放射性标记的抗体缀合物包含结合MET的抗体或其抗原结合片段、螯合部分和正电子发射体，其中结合MET的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:58的D1-HCVR氨基酸序列、SEQ ID NO:82的D2-HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列，螯合部分是去铁敏，并且正电子发射体是89Zr。
III.使用放射性标记的免疫缀合物的方法
在某些方面，本公开提供了本公开的放射性标记的抗体缀合物的诊断和治疗使用方法。
根据一个方面，本公开提供了检测组织中的MET的方法，所述方法包括将本文提供的放射性标记的抗体缀合物施用于组织；以及通过正电子发射断层扫描(PET)成像来使MET表达可视化。在某些实施方案中，组织包含细胞或细胞系。在某些实施方案中，组织存在于受试者中，其中受试者是哺乳动物。在某些实施方案中，受试者是人类受试者。在某些实施方案中，受试者患有癌症。
根据一个方面，本公开提供了对表达MET的组织进行成像的方法，所述方法包括将本公开的放射性标记的抗体缀合物施用于组织；以及通过正电子发射断层扫描(PET)成像来使MET表达可视化。在一个实施方案中，组织包含在肿瘤中。在一个实施方案中，组织包含在肿瘤细胞培养物或肿瘤细胞系中。在一个实施方案中，组织包含在受试者中的肿瘤病灶中。
根据一个方面，本公开提供了用于在患有癌症的受试者中测量对抗MET疗法的反应的方法，其中通过MET表达相对于疗法前的MET表达的变化来测量对疗法的反应。根据这一方面，方法包括向有需要的受试者施用本文提供的放射性标记的抗体缀合物，以及通过正电子发射断层扫描(PET)成像来使MET表达可视化。相对于治疗前的MET表达，MET表达的减少与对抗MET疗法的阳性反应相关。
根据一个方面，本公开提供了用于确定患有实体瘤的受试者是否适于包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物，以及通过PET成像将所施用的放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在将受试者鉴别为适于包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法。
根据本文公开的方法适用的抗肿瘤疗法可以是HGF/MET信号传导路径的任何治疗上适用的抑制剂，即HGF的抑制剂、MET的抑制剂、或EKR的抑制剂或HGF/MET信号传导路径中的任何其他下游蛋白。在一些方面，抗肿瘤疗法包含抗MET抗体或其抗原结合片段，例如表1中列出的抗体中的任一个或多个。在一些方面，抗肿瘤疗法包含MET x Met双特异性抗体中的任一个或多个，例如表2中列出的双特异性抗体中的任一个。在一些方面，抗体、双特异性抗体或其抗原结合片段与适用于治疗癌症的药物(即ADC)缀合。US-2018-0134794A1中公开了示例性抗MET ADC。
根据一个方面，本公开提供了用于鉴别包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法的候选受试者的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物，以及通过PET成像将所施用的放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在将受试者鉴别为适于包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法。
根据一个方面，本公开提供了用于预测受试者对抗肿瘤疗法的反应的方法，所述方法包括确定肿瘤是否是MET阳性的，其中如果肿瘤是MET阳性的，则其预测受试者对抗肿瘤疗法的阳性反应。在某些实施方案中，通过施用本公开的放射性标记的抗体缀合物并通过PET成像将放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位来确定肿瘤为阳性，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在指示肿瘤是MET阳性的。
根据一个方面，本公开提供了用于预测患有实体瘤的受试者对抗肿瘤疗法的反应的方法，所述方法包括确定肿瘤是否为MET阳性的，其中如果肿瘤为MET阳性的，则预测受试者发生阳性反应。在某些实施方案中，通过施用本公开的放射性标记的抗体缀合物并通过PET成像将放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位来确定肿瘤为阳性，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在指示肿瘤是MET阳性的。
根据一个方面，本公开提供了用于检测受试者的MET阳性肿瘤的方法。根据这一方面，所述方法包括向受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物；以及通过PET成像确定放射性标记的抗体缀合物的定位，其中肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在指示肿瘤是MET阳性的。在一些方面，用于检测的方法鉴别肿瘤的位置。在一些方面，用于检测的方法准许监测抗肿瘤治疗的进展，例如肿瘤是否消退或停止生长。
根据一个方面，本公开提供了用于确定受试者中MET阳性肿瘤大小的方法。根据这一方面，所述方法包括向受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物；以及通过PET成像来使放射性标记的抗体缀合物可视化，其中可以确定肿瘤的大小。
本文还提供了用于确定受试者中表达MET的细胞的存在的方法。所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物；以及通过PET成像来使MET表达可视化。
本文提供了用于诊断和治疗患有肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的缀合物，其中经由PET成像对放射性标记的抗体缀合物的定位进行成像以确定肿瘤是否是MET阳性的；诊断患有MET阳性肿瘤的受试者；以及向所述受试者施用包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂的抗肿瘤疗法。
本文提供了用于诊断患有表达MET的肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的放射性标记的抗MET抗体缀合物或MET x MET双特异性抗体缀合物；通过PET成像使MET表达可视化；以及当通过PET成像使MET表达可视化时诊断患有表达MET的肿瘤的所述受试者。
如本文所用，表述“有需要的受试者”意指展现癌症的一种或多种症状或指征，和/或已诊断患有癌症(包括实体瘤)以及需要对所述癌症进行治疗的人类或非人类哺乳动物。在许多实施方案中，术语“受试者”可以与术语“患者”互换使用。举例来说，人类受试者可以诊断患有原发性或转移性肿瘤和/或具有一种或多种症状或指征，包括但不限于不可解释的重量减轻、全身虚弱、持续疲劳、食欲不振、发热、盗汗、骨疼痛、呼吸急促、腹部肿胀、胸痛/胸闷、脾脏肿大以及癌症相关生物标记物(例如，CA125)水平升高。所述表述包括患有原发性肿瘤或已建立肿瘤的受试者。在具体实施方案中，所述表述包括患有实体瘤和/或需要对实体瘤进行治疗的人类受试者，所述实体瘤例如结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、骨癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、头颈癌以及脑癌。所述术语包括患有原发性或转移性肿瘤(晚期恶性肿瘤)的受试者。在某些实施方案中，表述“有需要的受试者”包括患有实体瘤的患者，所述实体瘤对先前疗法(例如，用抗癌剂进行的治疗)具有抗性或难以用先前疗法治疗，或不能由先前疗法充分控制。举例来说，所述表述包括已用一线或多线先前疗法治疗的受试者，所述先前疗法如用利用化疗(例如，卡铂或多西他赛)的治疗。在某些实施方案中，表述“有需要的受试者”包括患有实体瘤的患者，所述实体瘤已用一线或多线先前疗法治疗，但其随后复发或转移。
在某些实施方案中，本公开的方法用于患有实体瘤的受试者。术语“肿瘤”、“癌症”和“恶性肿瘤”在本文中可互换使用。如本文所用，术语“实体瘤”是指通常不含囊肿或液体区域的异常组织块。实体瘤可以是良性(非癌症)或恶性的(癌症)。出于本公开的目的，术语“实体瘤”意指恶性实体瘤。所述术语包括以形成实体瘤的细胞类型命名的不同类型的实体瘤，即肉瘤、癌瘤和淋巴瘤。在某些实施方案中，术语“实体瘤”包括癌症，包括但不限于结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、脑癌、宫颈癌、膀胱癌、肛门癌、子宫癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、子宫内膜癌、骨癌、睾丸癌、皮肤癌、肾癌、胃癌、食管癌、头颈癌、唾液腺癌以及骨髓瘤。
在一些方面，肿瘤选自由以下项组成的组：急性骨髓性白血病、成人T细胞白血病、星形细胞瘤、胆管癌、慢性髓性白血病、胃癌(例如，具有MET扩增的胃癌)、成胶质细胞瘤、头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌[HNSCC])、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、肺癌(例如，非小细胞肺癌[NSCLC])、淋巴瘤、恶性神经胶质瘤、恶性间皮瘤、黑素瘤、间皮瘤、MFH/纤维肉瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、骨肉瘤、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、小细胞肺癌、滑膜肉瘤、甲状腺癌和威尔姆氏肿瘤。
根据一个方面，本公开提供了治疗受试者的肿瘤的方法。根据这一方面，所述方法包括确定肿瘤是MET阳性的；以及施用一个或多个剂量的HGF/MET信号传导路径的抑制剂。在一些方面，抑制剂是抗MET抗体、MET x MET双特异性抗体或其药物缀合物。在某些实施方案中，通过向受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物；以及通过PET成像使肿瘤中的放射性标记的抗体缀合物可视化，确定肿瘤是MET阳性的。肿瘤中放射性标记的抗体缀合物的存在指示肿瘤是MET阳性的在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为胃癌。
如本文所用，术语“治疗(treat/treating)”等意指缓解症状；暂时或永久消除症状的起因；延迟或抑制肿瘤生长；减少肿瘤细胞负载或肿瘤负荷；促进肿瘤消退；引起肿瘤收缩、坏死和/或消失；预防肿瘤复发；预防或抑制癌转移；抑制转移瘤生长；和/或延长受试者的存活持续时间。
根据一个方面，本公开提供了用于监测抗肿瘤疗法在经历癌症治疗的受试者中的功效的方法，其中所述方法包括向受试者施用本公开的放射性标记的抗体缀合物；通过PET成像对肿瘤中所施用的放射性标记的缀合物的定位进行成像；以及确定肿瘤生长，其中放射性标记的信号从基线的降低指示肿瘤消退和抗肿瘤疗法的功效。在某些实施方案中，抗肿瘤疗法包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂(例如，MET x MET双特异性抗体)。
如本文所用，就肿瘤中的MET表达来说，术语“基线”意指在施用抗肿瘤疗法的剂量之前或施用时受试者的放射性标记的缀合物的摄取数值。使用本领域中已知的方法(参见例如Oosting等人2015,J.Nucl.Med.56:63-69)测定放射性标记的缀合物的摄取。在某些实施方案中，抗肿瘤疗法包含HGF/MET信号传导路径的抑制剂。
为了确定是否存在肿瘤消退，在基线和施用HGF/MET信号传导路径的抑制剂(例如，MET x MET双特异性抗体)之后的一个或多个时间点对放射性标记的缀合物的摄取进行定量。举例来说，所施用的放射性标记的抗体缀合物(例如，放射性标记的MET x MET双特异性抗体缀合物)的摄取可以在用HGF/MET信号传导路径的抑制剂(例如，MET x MET双特异性抗体)进行的初始治疗后第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第14天、第15天、第22天、第25天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天、第64天、第71天、第85天；或第1周、第2周、第3周、第4周、第5周、第6周、第7周、第8周、第9周、第10周、第11周、第12周、第13周、第14周、第15周、第16周、第17周、第18周、第19周、第20周、第21周、第22周、第23周、第24周结束时或更长的时间测量。在治疗起始后特定时间点的摄取值与基线摄取值之间的差异用于确定肿瘤组织的量是否存在差异(肿瘤消退或进展)。例如，在用至少一个剂量的HGF/MET信号传导路径的抑制剂治疗时，摄取从基线的降低意指肿瘤消退并指示抗肿瘤疗法的功效。
在某些实施方案中，放射性标记的抗体缀合物静脉内或皮下施用于受试者。在某些实施方案中，放射性标记的抗体缀合物瘤内施用。施用后，放射性标记的抗体缀合物在肿瘤中定位。通过PET成像对定位的放射性标记的抗体缀合物进行成像，并且通过本领域中已知的方法测量肿瘤对放射性标记的抗体缀合物的摄取。在某些实施方案中，在施用放射性标记的缀合物后1、2、3、4、5、6或7天进行成像。在某些实施方案中，在施用放射性标记的抗体缀合物后，在同一天进行成像。
在某些实施方案中，放射性标记的抗MET缀合物可以以约0.1mg/kg受试者体重至约100mg/kg受试者体重，例如约0.1mg/kg至约50mg/kg，或约0.5mg/kg至约25mg/kg，或约0.1mg/kg至约1.0mg/kg体重的剂量施用。
IV.实施例
通过以下非限制性实施例说明本公开的某些实施方案。
实施例1：针对MET的人抗体的产生
如US-2018-0134794中所述制备并表征人抗MET抗体(包括表1中列出的那些)，其以全文引用的方式并入本文。简言之，使用包含融合至人Fc的重组人MET细胞外结构域的免疫原(R&D Systems，目录号358-MT，Minneapolis，MN)产生对MET的人抗体。用于免疫接种的小鼠表达“通用轻链”。也就是说，在该小鼠中产生的抗体具有不同的重链可变区，但具有基本上相同的轻链可变结构域。
通过MET特异性的免疫测定监测抗体免疫应答。当达到期望的免疫应答时，收获脾细胞并与小鼠骨髓瘤细胞融合以保持其生存力并形成杂交瘤细胞系。筛选并选择杂交瘤细胞系以鉴定产生MET特异性抗体的细胞系。使用该技术以及上述免疫原，获得了多种抗MET嵌合抗体(即，具有人可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体)。另外，如U.S.2007/0280945中所述，直接从抗原阳性B细胞分离几种全人抗MET抗体而不与骨髓瘤细胞融合。以这种方式产生的示例性抗体指定为H4H13290P2、H4H13291P2、H4H13295P2、H4H13299P2、H4H13300P2、H4H13301P2、H4H13302P2、H4H13306P2、H4H13309P2、H4H13311P2、H4H13312P2、H4H13313P2、H4H13316P2、H4H13318P2、H4H13319P2、H4H13325P2和H4H13331P2；这些抗体的序列在上表1中示出。
MET x MET双特异性抗体由表1的抗MET抗体构建。本文所述的所有抗MET抗体包含相同的(“共同的”)轻链(包含SEQ ID NO:138的轻链可变区[LCVR]氨基酸序列，和SEQ IDNO:140、142和144的轻链CDR[LCDR1、LCDR2和LCDR3]氨基酸序列)。另外，在该实施例中说明的所有双特异性抗体含有衍生自示例性抗MET抗体H4H13312P2的“D2”臂。因此，在该实施例中描述的所有双特异性抗体的抗原结合结构域(D1和D2)都包含该共同的轻链可变区，并且所有的D2结合臂包含来自H4H13312P2的重链可变区；但是，就其D1重链可变区(HCVR)和重链CDR(HCDR)而言，双特异性抗体彼此不同。以这种方式产生的示例性抗体指定为H4H14634D、H4H14635D、H4H14636D、H4H14637D、H4H14638D、H4H14639D、H4H14640D、H4H14641D、H4H16445D、H4H16446D、H4H16447D、H4H16448D和H4H16449D；这些抗体的序列在上表2中示出。举例来说，MET x MET双特异性抗体H4H14639D包含来自H4H13306的抗MET抗体的D1-HCVR(SEQ ID NO:58)和来自H4H13312P2的抗MET抗体的D2-HCVR(SEQ ID NO:82)。
实施例2：MET x MET双特异性抗体H4H14639D与p-SCN-Bn-DFO的缀合
为了修饰亲本MET x MET双特异性抗体H4H14639D和同种型对照抗体以适合于用放射性标记的免疫PET研究，将螯合剂p-SCN-bn-去铁胺(DFO，也称为去铁敏；Macrocylics，目录号：B-705)连接至抗体上。
对于修饰，根据制造商的说明书将100mg的26.1mg/mL H4H14639D分成四个等分试样并经由四个预平衡PD-10脱盐柱(GE Healthcare，目录号：17-0851-01)将缓冲液更换成缀合缓冲液(分别为150mM NaCl，50mM碳酸钠，pH 9.0；Sigma-Aldrich，目录号：S6297-1KG和Gibco，目录号：24740-011)。将洗脱产物合并，并且通过在280nm处测量的UV吸收光谱(Thermo Scientific NanoDrop 2000c，目录号：ND-2000c-US-CAN)确定并由基于一级序列的消光系数计算浓度。用缀合缓冲液将该洗脱产物进一步稀释至10.4mg/mL。在单独的小瓶中，在浓度为13.8mM的纯无水二甲亚砜(DMSO；Sigma-Aldrich，目录号：276855-100ML)中制备p-SCN-Bn-DFO。将p-SCN-Bn-DFO溶液以1/4增量添加到稀释的洗脱产物中，通过轻轻的移液混合，使得最终反应溶液组成是缀合缓冲液2％DMSO中的10mg/mL双特异性抗体和4倍摩尔-摩尔过量的p-SCN-Bn-DFO与双特异性抗体。使该溶液在不进行额外搅拌的情况下在37℃水浴中培育。在37℃下30分钟后，将反应溶液分成四个等分试样，并迅速通过用pH 5.0的含有50mM乙酸钠的缓冲液(配制缓冲液；Sigma-Aldrich，目录号32319-1KG-R)预平衡的四个PD-10脱盐柱。将最终洗脱溶液合并，并经由注射器过滤器(Acrodisc 13mm注射器过滤器，Pall Corporation，目录号：4602)无菌过滤，并且称为DFO-Ab免疫缀合物、DFO-H4H14639D免疫缀合物。
随后通过UV吸收光谱法测量浓度和DFO与抗体的比率(DAR，即螯合剂与抗体的比率)。对于吸光度测量，在252nm(A252)、280nm(A280)和600nm(A600)下相对于配制缓冲液测量DFO缀合抗体；参见表3和表4。对于计算，使用以下等式在每个吸光度值处校正背景：
A′λ＝Aλ-A600
使用以下等式计算抗体浓度、缀合物浓度和DAR：MW＝144950gmol-1，ε280＝207729M-1cm-1，ε252＝79048M-1cm-1。
抗体浓度计算
Figure BDA0003536344320000711
缀合物浓度计算
Figure BDA0003536344320000712
DAR计算
Figure BDA0003536344320000713
最终DFO-Ab免疫缀合物产率为61mg。
使用具有在280nm处监测的在线UV吸光度检测器和0.75mL/min的PBS流动相的Superdex 200 Increase 10/300 GL柱(GE Healthcare，目录号：28990944)，用尺寸排阻高效液相色谱法(SE-HPLC)测定DFO-Ab免疫缀合物的单体纯度(参见图1)。在大约15分钟处的主洗脱峰对应于单体物质。还通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE；Invitrogen，Novex 4-20％Tris-甘氨酸迷你凝胶，目录号：XP04200)针对未修饰的双特异性抗体H4H14639D评估DFO-Ab免疫缀合物，并根据制造商的说明书执行(参见图2)。通过SPR(GE Healthcare，Biacore 8k)测定DFO-Ab免疫缀合物的靶结合平衡常数，即KD，并确定其在双特异性抗体KD的10％内。
表3：缀合物的DAR、浓度和单体纯度
Figure BDA0003536344320000714
表4：背景扣除UV吸收光谱法
抗体 A’<sub>280</sub> A’<sub>252</sub>
H4H14639D 1.08 0.538
如由UV吸收光谱、SE-HPLC和SDS-PAGE所示，双特异性抗体经由伯胺化学成功地与p-SCN-Bn-DFO缀合。计算的1.26的DAR在1.0至2.0的预期范围内。SE-HPLC色谱图显示高单体产物(99.6％)，没有可检测的较低分子量物质。SDS-PAGE显示双特异性抗体在DFO缀合后保持不变。
实施例3.DFO缀合的双特异性抗体的89Zr螯合
为了用于体内免疫PET研究，DFO缀合的MET x MET双特异性抗体H4H14639D和DFO缀合的同种型对照抗体用89Zr进行放射性标记。
首先用1M HEPES，pH 7.4(Teknova，目录号：H1030)使DFO缀合的抗体(250μg)达到200μL的总体积。单独地，将大约5mCi(<150μL)89Zr-草酸溶液(3D Imaging，Little RockAR)中和并通过使1MHEPES，pH 7.4的总体积达到1000μL来缓冲到pH 6.8至7.4。将DFO-Ab免疫缀合物和缓冲的89Zr溶液合并，然后通过移液管轻轻混合，并在室温下静止培育45分钟。在完成后，根据制造商的说明书，将反应混合物通过用250mM乙酸钠pH 5.5(Sigma-Aldrich，目录号：32319-1KG-R)预调理的PD-10柱(GE Healthcare，目录号：17-0851-01)迅速进行缓冲液交换。将洗脱产物(现在称为DFO-Ab放射性免疫缀合物)的浓度通过在280nm处测量的UV吸收光谱(Thermo Scientific NanoDrop 2000c，目录号：ND-2000c-US-CAN)确定并使用以下等式由DFO贡献调节的基于一级序列的消光系数计算：
浓度(以mg/mL为单位)＝280nm处的吸收(以AU为单位)÷1.86mL/mg 1/cm
将DFO-Ab放射性免疫缀合物无菌过滤，并测定蛋白产率、比活度(SA)、放射化学纯度(RCP)、蛋白质纯度和靶特异性结合，即免疫反应性(IR)。数据在表5中报告。使用剂量校准器(Capintec CRC-25R；目录号：5130-3215)测量以mCi为单位的活性产率。使用以下等式确定DFO-Ab放射性免疫缀合物的蛋白产率和比活度：
a.蛋白产率(以mg为单位)＝浓度(以mg/mL为单位)x溶液质量(以克为单位)
b.SA(以mCi/mg为单位)＝活性产率(以mCi为单位)÷缀合物的质量(以mg为单位)
通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)，使用Superdex 200Increase 10/300GL柱(GE Healthcare，目录号28990944)，用串联连接的在线UV 280吸收和γ发射检测器(Agilent Technologies，型号1260，配置有Lablogic SCAN-RAM无线电检测器)，使用PBS流动相，以0.75mL/min的流速测定RCP、未掺入的89Zr和蛋白质纯度。通过将UV 280色谱图中高分子量(HMW)物质峰(～10至～15分钟)与主峰(～15至～18分钟)的相对积分进行比较来确定蛋白质纯度百分比。未观察到低分子量物质(～18至～25分钟)。使用放射色谱图(γ发射)通过主峰与未掺入的89Zr峰(～25分钟)的积分和HMW物质％的相对比较来确定放射化学纯度。
通过细胞结合测定来测量DFO-Ab放射性免疫缀合物的IR，所述细胞结合测定需要EBC-1细胞(JCRB编号JCRB0820)的两个500μL等分试样A和B，A为2.0x107个细胞/mL且B为0.5x107个细胞/mL。将DFO-Ab放射性免疫缀合物(20ng)添加到等分试样A中，并使其在37℃，5％CO2下培育45分钟。将等分试样A和B以1500rpm离心(Eppendorf；型号#5504R)5分钟。丢弃来自细胞沉淀物B的上清液。将来自细胞沉淀物A的上清液转移到细胞沉淀物B中，随后如上进行培育和分离。每种细胞沉淀物(A和B)用1mL新鲜细胞培养基洗涤两次，每次洗涤之间以1500rpm离心5分钟。收集来自洗涤液的上清液。用γ计数器(Perkin Elmer Wizard2；型号#2470-0020)测量所有组分(重悬浮于500μL细胞培养基、上清液和四种洗涤上清液中的每种细胞沉淀物)的最终活性。通过两种沉淀物的活性总和除以所有组分的活性总和乘以100％来确定IR。针对非特异性DFO-Ab放射性免疫缀合物(n＝1)测试该过程，并且IR测定为2.8％。
表5中记录了上述产生的DFO-Ab放射性免疫缀合物(n＝5)的测定结果。值得注意的是，平均RCP为94.6±1.2％，存在2.7±1.9％的未掺入的89Zr，并且蛋白质纯度为98.3±1.5％。代表性色谱图分别在图3和图4中示出。SA的范围为11.9至21.3mCi/mg，并且适合于体内给药。平均IR为84±7％，而非特异性对照为2.8％。
表5.用于体内成像和生物分布研究的DFO-Ab放射性免疫缀合物的概述
Figure BDA0003536344320000741
Stdev：标准偏差。NA：不适用。ND：未确定。mAb：H4H14639D
实施例4：METxMET双特异性和DFO缀合的METxMET双特异性的结合亲和力和动力学常数
使用Biacore T-200仪器，使用实时表面等离子共振生物传感器，测定hMET.mmh与纯化的抗METxMET双特异性mAb(H4H14639D)或与DFO缀合的抗METxMET双特异性mAb(H4H14639D-DFO)结合的平衡解离常数(KD值)。CM5 Biacore传感器表面通过与单克隆小鼠抗人Fc抗体胺偶合进行衍生化以捕获纯化的H4H14639D或H4H14639D-DFO。在由0.01MHEPES pH 7.4、0.15M NaCl、0.05％v/v表面活性剂P20构成的缓冲液(HBS-P操作缓冲液)中进行该Biacore结合研究。将在HBS-ET操作缓冲液中制备的具有C末端myc.myc六组氨酸标签的不同浓度的hMET以50μL/分钟的流速注射在抗体捕获的表面上。监测hMET.mmh与所捕获的单克隆抗体的缔合5分钟，并且监测HBS-ET操作缓冲液中hMET.mmh的解离10分钟。所有结合动力学实验在25℃下进行。动力学缔合(ka)和解离(kd)速率常数通过使用Scrubber2.0c曲线拟合软件将实时传感图拟合到1:1结合模型来确定。如下从动力学速率常数计算结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)：
KD(M)＝kd/ka，以及t1/2(min)＝0.693/kd/60
下表6中示出了在25℃下人MET与纯化抗体结合的结合动力学参数。
表6：在25℃下对METxMET双特异性抗体和DFO缀合的METxMET双特异性抗体的人MET结合动力学
Figure BDA0003536344320000761
实施例5：放射性标记的MET x MET双特异性抗体的体内生物分布
选择基于MET表达水平不同的肿瘤异种移植物EBC1(MET高)、NCI-H441(MET中等)和NCI-H358(MET低)用于在免疫受损小鼠中成像。SCID小鼠移植有5x106个肿瘤细胞，并使其生长10-14天。然后给予小鼠0.1mg/kg 89Zr-DFO-H4H14639D和增加量的未标记的未缀合抗体，以达到0.1、0.5和5mg/kg的最终蛋白质剂量。给予对照动物0.1mg/kg89Zr-DFO-同种型对照抗体和未标记的未缀合抗体至0.5mg/kg的最终蛋白质剂量。在第0天、第1天、第4天和第6天时进行PET成像。在第6天进行生物分布。
使用Sofie Biosciences G8 PET/CT来采集PET/CT图像(Sofie Biosciences和Perkin Elmer)。在图像采集之前，将仪器针对89Zr检测进行预校准。能量窗在150到650keV的范围内，视野中心处的重建分辨率为1.4mm。小鼠经历使用异氟醚进行的诱导麻醉，并且在成像期间保持在异氟醚的连续流下。静态10分钟图像使用G8采集软件采集，并且随后使用预配置设置重建。针对衰变和其它参数校正图像数据。CT图像在PET采集之后采集，并且随后与PET图像融合。使用VivoQuant后处理软件(inviCRO Imaging Services)制备图像。
对于生物分布研究，在最终时间点(89Zr-DFO-H4H14639D施用后6天)将小鼠安乐死并且通过心脏穿刺收集血液。然后切除肿瘤和正常组织，置于计数管中并称重。然后通过在自动γ计数器(Wizard 2470，Perkin Elmer)上测量样品来收集CPM中89Zr的计数数据。使用由注射的材料制备的标准品对每个样品计算每克注射剂量百分比(ID％/g)。
成像结果证明89Zr-DFO-H4H14639D特异性地定位表达MET的肿瘤异种移植物(图5-图7)，这通过生物分布数据进一步证明。5mg/kg89Zr-DFO-H4H14639D的阻断剂量与0.1和0.5mg/kg 89Zr-DFO-H4H14639D的较低剂量相比，在NCI-H441(MET中等)和NCI-H358(MET低)肿瘤中示出增加的血液摄取率(ID％/g)和较低的肿瘤摄取率(ID％/g)(图8)。不同肿瘤异种移植物中89Zr-DFO-H4H14639D的总体肿瘤摄取证明了与相对MET表达的良好相关性(图9)。
实施例6：通过饱和放射性配体结合测定的MET x MET双特异性抗体结合能力(ABC)
使用89Zr-DFO-抗Met单臂比较物抗体(Comp1；奥那妥组单抗(Onartuzumab)，在U.S.2016/0222115和Martens等人，Clin Cancer Res 2006,12(20):6144-6152中提及)和89Zr-DFO-H4H14639D作为放射性配体，在EBC-1、NCI-H441、NCI-H358细胞系上进行抗体结合能力(ABC)测定。放射性配体制备(DFO抗体缀合和随后的Zr89-放射性标记)的实施例描述同上。借助于Hamilton Starlet液体处理系统，以类似方式进行所有六个实验。简言之，首先收获细胞，测定活力(通过台盼蓝排阻染色确认>90％)，并在完全培养基中达到2至5x106个细胞/mL。接下来，将100μL(20至50万个细胞，Nc)沿着V底96孔板(“细胞板”)的一式两份或一式四份行等分。将细胞板保持在4℃下，直到在稍后的步骤中给予放射性标记的抗体。在第二V底96孔板(“mAb板”)中，将150μL放射性标记的抗体(0.10至0.12mg/mL)等分至第1列的行以及第12列中的单个孔作为内化对照。然后将第2-9列用冷介质连续稀释2.8倍。接下来，将50μL mAb板压入细胞板中。将细胞板在4℃下在轻轻搅动下培育45分钟。培育后，首先通过移液管轻轻地混合第1至9列的孔，以制备瞬时细胞悬浮液，然后将30μL(或总量的20％)从每个孔收集到代表所给予的总抗体的翻盖管中。将剩余的细胞板以150g旋转5分钟，然后去除上清液并丢弃。然后将细胞板用200μL冷培养基洗涤，在再次旋转板之前进行五次抽吸/分配循环，然后去除上清液并丢弃。将该洗涤过程再重复两次，然后将细胞重悬浮于200μL冷缓冲液(10％FBS于PBS中，v/v)中。在200μL中，收集来自每个孔的180μL并分配到代表细胞结合抗体的翻盖管中。使用γ计数器(Hidex自动γ计数器，型号#425-601)测量总抗体样品和结合抗体样品的活性。基于从初始抗体浓度开始的稀释序列(由于取样而除以五)，使用检测到的计数相对于每孔给予的总抗体T，由给予总抗体的样品产生校准曲线。使用校准曲线将结合分数计数(由于取样而乘以1.38)转换成结合抗体B的质量(或浓度)。
内化对照：
还以最高给予浓度在4℃下测定放射性配体内化45分钟。如果显著，则相应地使用内化抗体的分数按比例调整ABC。对于内化对照，将末端第12列的整个孔内容物(200μL)转移到含有1mL低pH剥离缓冲液(50mM甘氨酸，150mM NaCl，pH 2.4)的1.5mL Eppendorf管中，并在室温下静置十分钟。在十分钟培育后，将Eppendorf管以150g旋转5分钟。去除上清液而不干扰细胞沉淀物并保留用于计数。用1mL冷的缓冲液(10％FBS于PBS中，v/v)通过抽吸10次，旋转，去除并在洗涤之间保留上清液来洗涤细胞沉淀物。使用γ计数器测量细胞沉淀物、剥离上清液和洗涤上清液的活性。内化的分数I计算为细胞沉淀物的活性与细胞沉淀物、剥离上清液和洗涤上清液的总活性的总和的比率。
Comp1的ABC：
假定在单一位点条件下的质量作用定律，使用等式1拟合结合饱和数据。确定边界值并经由等式2将其转换成ABC。根据我们的结合/洗涤方案，非特异性结合被确定为所有操作的可忽略组分，并且不被视为分析的一部分。确定内化对结合放射性的贡献可忽略不计，并且也不被视为分析的一部分。
等式1(对于Comp1)：
Figure BDA0003536344320000791
其中KD是以nM为单位的平衡解离常数(拟合参数)，TAg是以nM为单位的总Ag(拟合参数)，T是以nM为单位的总抗体剂量(测量)，B是以nM为单位的结合浓度(测量)。
等式2：
Figure BDA0003536344320000792
其中NA是阿伏伽德罗数，V是孔体积(150μL)，Nc是每孔的细胞数(已知)。
H4H14639D的ABC：
因为存在H4H14639D的多个结合形式，所以数据集由Hill-Langmuir等式拟合(等式3)。然后使用等式2计算ABC。非特异性结合被确定为所有操作的可忽略组分，不被视为分析的一部分。确定放射性配体内化对结合放射性测定具有不可忽略的贡献，并且因此得到相应的补偿。
等式3(对于H4H14639D)：
Figure BDA0003536344320000793
其中，B和TAg如上，I是内化的分数(测量的)，Kl、n和TAg是拟合参数。
ABC结果汇总于表7和表8中并在图10A和图10B中示出。
表7.使用等式1和等式2测试的三种细胞系的Comp1的ABC。在4℃下内化的分数可忽略不计。
Figure BDA0003536344320000801
表8.使用等式2和等式3测试的三种细胞系的H4H14639D的ABC。
Figure BDA0003536344320000802
使用抗Met、单臂/单价形式抗体Comp1的ABC值是Met受体拷贝数(即，1比1的抗体与受体)的合理估计。然而，使用抗体H4H14639D的ABC值预期不代表先验的1比1Met受体拷贝数。
上文所描述的实施方案和实施例意图仅仅是说明性并且非限制性的。本领域技术人员顶多使用常规实验即可认识到或能够确定特定化合物、材料和程序的许多等同物。所有此类等同物都被视为处于范围内，并且由所附权利要求书涵盖。
序列表
<110> 瑞泽恩制药公司（Regeneron Pharmaceuticals, Inc.）
M·凯利（KELLY, Marcus）
D·马（MA, Dangshe）
W·奥尔森（OLSON, William）
<120> 用于免疫PET成像的放射性标记的MET结合蛋白
<130> 10649WO01
<140> TBD
<141> 2020-09-15
<150> 62/901,003
<151> 2019-09-16
<160> 158
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 372
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
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ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagttgaggt ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag gggagacgat 300
cttttagtgg tgacaagtgt ctactggtac atcgatctct ggggccgtgg caccctggtc 360
accgtctcct ca 372
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<211> 124
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Phe Tyr Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Asp Leu Leu Val Val Thr Ser Val Tyr Trp Tyr Ile Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
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ggtgactcca tcagtagtta ctat 24
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
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<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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1 5
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 7
gcgaggggag acgatctttt agtggtgaca agtgtctact ggtacatcga tctc 54
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<211> 18
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Ala Arg Gly Asp Asp Leu Leu Val Val Thr Ser Val Tyr Trp Tyr Ile
1 5 10 15
Asp Leu
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<211> 360
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Ala Trp Asp Leu Leu Arg Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 11
ggattcacct tcagtggcta tggc 24
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Gly
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<212> DNA
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<400> 13
atatggtatg atggaagtaa tgat 24
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 14
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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Ala Arg Asp Ala Trp Asp Leu Leu Arg Ser Phe Asp Tyr
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 17
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagagtc 60
tcttgtgtag tgtctggatt caccttcagc agctttggca tgcattgggt ccgccaggct 120
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tcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctacaaatga accgcctgag agccgaagac acggctgttt attactgtgc gcgagctaat 300
aactggaacc gttttgatgc ctttgatctc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360
tca 363
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<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
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Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Asn Asn Trp Asn Arg Phe Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly
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Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
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ggattcacct tcagcagctt tggc 24
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly
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<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
atatggtatg atggaagtaa tgat 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 22
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
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gcgcgagcta ataactggaa ccgttttgat gcctttgatc tc 42
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 24
Ala Arg Ala Asn Asn Trp Asn Arg Phe Asp Ala Phe Asp Leu
1 5 10
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Ser Tyr Ile Thr Ser Ser Gly Asn Met Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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gtgagaggag ggcgattttt ggagtggttg acctactacg ttatggtcgt c 51
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Val Arg Gly Gly Arg Phe Leu Glu Trp Leu Thr Tyr Tyr Val Met Val
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Val
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<213> 智人（Homo sapiens）
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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<213> 智人（Homo sapiens）
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Asn Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asn Tyr Val Glu Ser Ile
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 43
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Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe Gly
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<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 45
atatggtttg acggaagtaa tgag 24
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 46
Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu
1 5
<210> 47
<211> 51
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 47
gtgagagagg gaatcctagg aactactaat ccttatgatg cttttgatgt c 51
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 48
Val Arg Glu Gly Ile Leu Gly Thr Thr Asn Pro Tyr Asp Ala Phe Asp
1 5 10 15
Val
<210> 49
<211> 378
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 49
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt cacctttagt aactttggaa tgcactgggt ccgccaggcg 120
ccaggcaagg gactggagtg ggtggcaggt atatggtttg atggaagtaa taaaaactat 180
atagactccg tgaagggccg attcaccatc tcaagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagggc 300
tatgattcgg ggactgatta tatcccctat gatatttttg atatttgggg ccaagggaca 360
atggtcaccg tctcttca 378
<210> 50
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Asn Tyr Ile Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Gly Thr Asp Tyr Ile Pro Tyr Asp Ile
100 105 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 51
ggattcacct ttagtaactt tgga 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Gly
1 5
<210> 53
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 53
atatggtttg atggaagtaa taaa 24
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 54
Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 55
<211> 57
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 55
gcgagagagg gctatgattc ggggactgat tatatcccct atgatatttt tgatatt 57
<210> 56
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 56
Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Gly Thr Asp Tyr Ile Pro Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Phe Asp Ile
<210> 57
<211> 363
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 57
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcacgtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attacttgga atagttataa catagactat 180
gctgactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatgat 300
gactacagta actacgttta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 58
<211> 121
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Trp Asn Ser Tyr Asn Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Asp Asp Tyr Ser Asn Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 59
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 59
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 60
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 61
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 61
attacttgga atagttataa cata 24
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 62
Ile Thr Trp Asn Ser Tyr Asn Ile
1 5
<210> 63
<211> 42
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 63
gcaaaagatg atgactacag taactacgtt tactttgact ac 42
<210> 64
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 64
Ala Lys Asp Asp Asp Tyr Ser Asn Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 65
<211> 360
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 65
caggttcagc tggtgcagtc cggaactgag gtgaaggagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgtaagg cctctggtta ctcctttacc acctatggta tcagctggct gcgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatgggatgg atcagcactt acaatggtga cacaatctct 180
gcacagatgc tccaggacag agtcaccctg accgcagaca catccacgcg cacagcctac 240
atggaactga gaagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaggtcat 300
gagtatgata gtcttgttta ttcttactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 66
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 66
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asp Thr Ile Ser Ala Gln Met Leu
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly His Glu Tyr Asp Ser Leu Val Tyr Ser Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 67
ggttactcct ttaccaccta tggt 24
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 68
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Gly
1 5
<210> 69
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 69
atcagcactt acaatggtga caca 24
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 70
Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 71
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 71
gcgagaggtc atgagtatga tagtcttgtt tattcttac 39
<210> 72
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 72
Ala Arg Gly His Glu Tyr Asp Ser Leu Val Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 73
<211> 360
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 73
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agttatgcca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaggg ggctggagtg ggtggcggtt atatggcatg atggagatgt tgaatactat 180
gtagactccg tgaaggaccg attcaccatc tccagagaca attccaagag cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagat acggctttat attattgtgc gagagaggcg 300
tgggacctac tacgtccctt tgactattgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 74
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp His Asp Gly Asp Val Glu Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Trp Asp Leu Leu Arg Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 75
ggattcacct tcagtagtta tgcc 24
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 76
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 77
atatggcatg atggagatgt tgaa 24
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 78
Ile Trp His Asp Gly Asp Val Glu
1 5
<210> 79
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 79
gcgagagagg cgtgggacct actacgtccc tttgactat 39
<210> 80
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 80
Ala Arg Glu Ala Trp Asp Leu Leu Arg Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 81
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 81
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgggtt catcgtcacc accaactaca tgacctggct ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcactt atttatagca gtggtcacac atactacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agacacaatt ccaagaacac actgtatcta 240
caaatggaca gcctgagagc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag tgctttcgca 300
gcggatgttt ttgatatctg gggccaaggg acaatggtca ccgtctcttc a 351
<210> 82
<211> 117
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Thr Thr Asn
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Tyr Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg His Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Ala Phe Ala Ala Asp Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 83
gggttcatcg tcaccaccaa ctac 24
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 84
Gly Phe Ile Val Thr Thr Asn Tyr
1 5
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 85
atttatagca gtggtcacac a 21
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 86
Ile Tyr Ser Ser Gly His Thr
1 5
<210> 87
<211> 33
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 87
gcgagtgctt tcgcagcgga tgtttttgat atc 33
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 88
Ala Ser Ala Phe Ala Ala Asp Val Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 89
<211> 372
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 89
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgttcag cgtctggatt ctccttcagt cactttggca tgcactgggt ccgccaggtt 120
ccaggcgggg gcctggagtg ggtgacaagt atatggtttg atggaagtaa tagatattat 180
gcagactcct tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa tactctgtat 240
ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgt gagagagggg 300
atactgggaa ctactaatcc ttatgatgtt tttgatgtct ggggtcaggg gacaatggtc 360
accgtctctt ca 372
<210> 90
<211> 124
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 90
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser His Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gly Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Ser Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Glu Gly Ile Leu Gly Thr Thr Asn Pro Tyr Asp Val Phe Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 91
ggattctcct tcagtcactt tggc 24
<210> 92
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 92
Gly Phe Ser Phe Ser His Phe Gly
1 5
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 93
atatggtttg atggaagtaa taga 24
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 94
Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Arg
1 5
<210> 95
<211> 51
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 95
gtgagagagg ggatactggg aactactaat ccttatgatg tttttgatgt c 51
<210> 96
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 96
Val Arg Glu Gly Ile Leu Gly Thr Thr Asn Pro Tyr Asp Val Phe Asp
1 5 10 15
Val
<210> 97
<211> 372
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 97
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga agctatgtca tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagga atgagtggga gtggtggaag cacatcctac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attcaaagaa tacgctgtat 240
ctgctaatga acagcctgag aaccgaggac acggccgtat attattgtgc gaaagaaaac 300
ggggctaact ggaactacgg ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 98
<211> 124
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Met Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Leu Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Asn Gly Ala Asn Trp Asn Tyr Gly Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 99
ggattcacct ttagaagcta tgtc 24
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 100
Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Val
1 5
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 101
atgagtggga gtggtggaag caca 24
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 102
Met Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 103
<211> 51
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 103
gcgaaagaaa acggggctaa ctggaactac ggctactacg gtatggacgt c 51
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 104
Ala Lys Glu Asn Gly Ala Asn Trp Asn Tyr Gly Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 105
<211> 360
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 105
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cgtctggatt ctccttcagt aactttggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180
tcagactccg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agtcgacgac acggctgtgt attactgtgc gagattcgat 300
cgctggaaat ttgacgcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 106
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Arg Trp Lys Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 107
ggattctcct tcagtaactt tggc 24
<210> 108
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 108
Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Gly
1 5
<210> 109
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 109
atatggtatg atggaagtaa taaa 24
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 110
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 111
<211> 39
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 111
gcgagattcg atcgctggaa atttgacgct tttgatatc 39
<210> 112
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 112
Ala Arg Phe Asp Arg Trp Lys Phe Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 113
<211> 360
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 113
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctttgcca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa tgattactat 180
gcagcctccg tgaagggccg tttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctggaaatga acagactgag agccgaggac acggctgtgt atcactgtgc gagagataac 300
tggaattact gggggggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 114
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 114
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp Tyr Tyr Ala Ala Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asn Trp Asn Tyr Trp Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 115
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 116
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 117
atatggtatg atggaagtaa tgat 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Asp
1 5
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 119
gcgagagata actggaatta ctgggggggt atggacgtc 39
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<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 120
Ala Arg Asp Asn Trp Asn Tyr Trp Gly Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 121
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 121
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc tgggtgcagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cgcctttagt aattatgcca tgaactgggt ccgccagact 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtagta gtggtggaaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcgccatc tccagagaca attccaggga tacgctgcat 240
ctgcaaatga acagactgag agtcgaggac acggccgtct attactgtgc gaaagaaata 300
cgtccgtatt acgatctttc ctactattac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 122
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 122
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asp Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Ile Arg Pro Tyr Tyr Asp Leu Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 123
ggattcgcct ttagtaatta tgcc 24
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<400> 124
Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 125
attagtagta gtggtggaaa caca 24
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<211> 8
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 126
Ile Ser Ser Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 127
gcgaaagaaa tacgtccgta ttacgatctt tcctactatt acggtatgga cgtc 54
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 128
Ala Lys Glu Ile Arg Pro Tyr Tyr Asp Leu Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 129
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ccagggaagg gactagagtg gattgggcac atcaattaca atgggggcac cgactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaatca gttctccctg 240
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<211> 116
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 130
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Phe
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Asn Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gln Arg Phe Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Pro Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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Gly Gly Ser Ile Arg Asn Phe Tyr
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atcaattaca atgggggcac c 21
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Ile Asn Tyr Asn Gly Gly Thr
1 5
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Ala Arg Gln Arg Phe Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
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<212> DNA
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<400> 137
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caagggacac gactggagat taaa 324
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<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 138
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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cagagcatta gcagctat 18
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Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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gctgcatcc 9
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 142
Ala Ala Ser
1
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<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 143
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 144
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 145
Met Lys Ala Pro Ala Val Leu Ala Pro Gly Ile Leu Val Leu Leu Phe
1 5 10 15
Thr Leu Val Gln Arg Ser Asn Gly Glu Cys Lys Glu Ala Leu Ala Lys
20 25 30
Ser Glu Met Asn Val Asn Met Lys Tyr Gln Leu Pro Asn Phe Thr Ala
35 40 45
Glu Thr Pro Ile Gln Asn Val Ile Leu His Glu His His Ile Phe Leu
50 55 60
Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys
65 70 75 80
Val Ala Glu Tyr Lys Thr Gly Pro Val Leu Glu His Pro Asp Cys Phe
85 90 95
Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp
100 105 110
Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp
115 120 125
Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His
130 135 140
Val Phe Pro His Asn His Thr Ala Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys
145 150 155 160
Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val
165 170 175
Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe
180 185 190
Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp
195 200 205
His Pro Leu His Ser Ile Ser Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp
210 215 220
Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu
225 230 235 240
Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn
245 250 255
Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln
260 265 270
Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu
275 280 285
His Ser Tyr Met Glu Met Pro Leu Glu Cys Ile Leu Thr Glu Lys Arg
290 295 300
Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala
305 310 315 320
Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser
325 330 335
Leu Asn Asp Asp Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp
340 345 350
Ser Ala Glu Pro Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys
355 360 365
Tyr Val Asn Asp Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg
370 375 380
Cys Leu Gln His Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg
385 390 395 400
Thr Leu Leu Arg Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr
405 410 415
Arg Thr Glu Phe Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly
420 425 430
Gln Phe Ser Glu Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly
435 440 445
Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln
450 455 460
Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu
465 470 475 480
Leu Asp Ser His Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu
485 490 495
Asn Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys
500 505 510
Ile Pro Leu Asn Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln
515 520 525
Cys Leu Ser Ala Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys
530 535 540
Cys Val Arg Ser Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile
545 550 555 560
Cys Leu Pro Ala Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu
565 570 575
Gly Gly Thr Arg Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg
580 585 590
Asn Asn Lys Phe Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu
595 600 605
Ser Cys Thr Leu Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys
610 615 620
Thr Val Gly Pro Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile
625 630 635 640
Ser Asn Gly His Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp
645 650 655
Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly
660 665 670
Thr Leu Leu Thr Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg
675 680 685
His Ile Ser Ile Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn
690 695 700
Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe
705 710 715 720
Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe
725 730 735
Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser
740 745 750
Phe Ile Ser Thr Trp Trp Lys Glu Pro Leu Asn Ile Val Ser Phe Leu
755 760 765
Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn
770 775 780
Leu Asn Ser Val Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala
785 790 795 800
Gly Arg Asn Phe Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile
805 810 815
Ile Cys Cys Thr Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro
820 825 830
Leu Lys Thr Lys Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr
835 840 845
Phe Asp Leu Ile Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys
850 855 860
Pro Val Met Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly
865 870 875 880
Asn Asp Ile Asp Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly
885 890 895
Asn Lys Ser Cys Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys
900 905 910
Thr Val Pro Asn Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu
915 920 925
Trp Lys Gln Ala Ile Ser Ser Thr Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln
930 935 940
Pro Asp Gln Asn Phe Thr Gly Leu Ile Ala Gly Val Val Ser Ile Ser
945 950 955 960
Thr Ala Leu Leu Leu Leu Leu Gly Phe Phe Leu Trp Leu Lys Lys Arg
965 970 975
Lys Gln Ile Lys Asp Leu Gly Ser Glu Leu Val Arg Tyr Asp Ala Arg
980 985 990
Val His Thr Pro His Leu Asp Arg Leu Val Ser Ala Arg Ser Val Ser
995 1000 1005
Pro Thr Thr Glu Met Val Ser Asn Glu Ser Val Asp Tyr Arg Ala
1010 1015 1020
Thr Phe Pro Glu Asp Gln Phe Pro Asn Ser Ser Gln Asn Gly Ser
1025 1030 1035
Cys Arg Gln Val Gln Tyr Pro Leu Thr Asp Met Ser Pro Ile Leu
1040 1045 1050
Thr Ser Gly Asp Ser Asp Ile Ser Ser Pro Leu Leu Gln Asn Thr
1055 1060 1065
Val His Ile Asp Leu Ser Ala Leu Asn Pro Glu Leu Val Gln Ala
1070 1075 1080
Val Gln His Val Val Ile Gly Pro Ser Ser Leu Ile Val His Phe
1085 1090 1095
Asn Glu Val Ile Gly Arg Gly His Phe Gly Cys Val Tyr His Gly
1100 1105 1110
Thr Leu Leu Asp Asn Asp Gly Lys Lys Ile His Cys Ala Val Lys
1115 1120 1125
Ser Leu Asn Arg Ile Thr Asp Ile Gly Glu Val Ser Gln Phe Leu
1130 1135 1140
Thr Glu Gly Ile Ile Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val Leu
1145 1150 1155
Ser Leu Leu Gly Ile Cys Leu Arg Ser Glu Gly Ser Pro Leu Val
1160 1165 1170
Val Leu Pro Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile Arg
1175 1180 1185
Asn Glu Thr His Asn Pro Thr Val Lys Asp Leu Ile Gly Phe Gly
1190 1195 1200
Leu Gln Val Ala Lys Gly Met Lys Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Phe
1205 1210 1215
Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asp Glu Lys
1220 1225 1230
Phe Thr Val Lys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Met Tyr
1235 1240 1245
Asp Lys Glu Tyr Tyr Ser Val His Asn Lys Thr Gly Ala Lys Leu
1250 1255 1260
Pro Val Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Leu Gln Thr Gln Lys Phe
1265 1270 1275
Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu
1280 1285 1290
Leu Met Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr Pro Asp Val Asn Thr Phe
1295 1300 1305
Asp Ile Thr Val Tyr Leu Leu Gln Gly Arg Arg Leu Leu Gln Pro
1310 1315 1320
Glu Tyr Cys Pro Asp Pro Leu Tyr Glu Val Met Leu Lys Cys Trp
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His Pro Lys Ala Glu Met Arg Pro Ser Phe Ser Glu Leu Val Ser
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1355 1360 1365
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<211> 1390
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 146
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Ser Glu Met Asn Val Asn Met Lys Tyr Gln Leu Pro Asn Phe Thr Ala
35 40 45
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50 55 60
Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys
65 70 75 80
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Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp
100 105 110
Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp
115 120 125
Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His
130 135 140
Val Phe Pro His Asn His Thr Ala Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys
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Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val
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Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe
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Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp
195 200 205
His Pro Leu His Ser Ile Ser Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp
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Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu
225 230 235 240
Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn
245 250 255
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Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu
275 280 285
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690 695 700
Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe
705 710 715 720
Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe
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Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser
740 745 750
Phe Ile Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn
755 760 765
Ser Val Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg
770 775 780
Asn Phe Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys
785 790 795 800
Cys Thr Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys
805 810 815
Thr Lys Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp
820 825 830
Leu Ile Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val
835 840 845
Met Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp
850 855 860
Ile Asp Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys
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Ser Cys Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val
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Pro Asn Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys
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Gln Ala Ile Ser Ser Thr Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp
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Leu Leu Leu Leu Leu Gly Phe Phe Leu Trp Leu Lys Lys Arg Lys Gln
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Ile Lys Asp Leu Gly Ser Glu Leu Val Arg Tyr Asp Ala Arg Val His
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<210> 147
<211> 934
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 147
Met Lys Ala Pro Ala Val Leu Ala Pro Gly Ile Leu Val Leu Leu Phe
1 5 10 15
Thr Leu Val Gln Arg Ser Asn Gly Glu Cys Lys Glu Ala Leu Ala Lys
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100 105 110
Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp
115 120 125
Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His
130 135 140
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165 170 175
Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe
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195 200 205
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Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu
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Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn
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Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln
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Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala
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Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser
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915 920 925
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930
<210> 148
<211> 281
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 148
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<210> 149
<211> 1101
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 149
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Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile
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580 585 590
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645 650 655
Leu Leu Leu Leu Gly Phe Phe Leu Trp Leu Lys Lys Arg Lys Gln Ile
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675 680 685
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Leu Val Val Leu Pro Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile
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885 890 895
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 150
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Ser Leu Leu Gly Ile Cys Leu Arg Ser Glu Gly Ser Pro Leu Val Val
835 840 845
Leu Pro Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile Arg Asn Glu
850 855 860
Thr His Asn Pro Thr Val Lys Asp Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gln Val
865 870 875 880
Ala Lys Gly Met Lys Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Phe Val His Arg Asp
885 890 895
Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asp Glu Lys Phe Thr Val Lys Val
900 905 910
Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Met Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Ser
915 920 925
Val His Asn Lys Thr Gly Ala Lys Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Leu
930 935 940
Glu Ser Leu Gln Thr Gln Lys Phe Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser
945 950 955 960
Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Leu Met Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr
965 970 975
Pro Asp Val Asn Thr Phe Asp Ile Thr Val Tyr Leu Leu Gln Gly Arg
980 985 990
Arg Leu Leu Gln Pro Glu Tyr Cys Pro Asp Pro Leu Tyr Glu Val Met
995 1000 1005
Leu Lys Cys Trp His Pro Lys Ala Glu Met Arg Pro Ser Phe Ser
1010 1015 1020
Glu Leu Val Ser Arg Ile Ser Ala Ile Phe Ser Thr Phe Ile Gly
1025 1030 1035
Glu His Tyr Val His Val Asn Ala Thr Tyr Val Asn Val Lys Cys
1040 1045 1050
Val Ala Pro Tyr Pro Ser Leu Leu Ser Ser Glu Asp Asn Ala Asp
1055 1060 1065
Asp Glu Val Asp Thr Arg Pro Ala Ser Phe Trp Glu Thr Ser
1070 1075 1080
<210> 151
<211> 626
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 151
Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys
1 5 10 15
Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp
20 25 30
Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro
35 40 45
Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp
50 55 60
Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His
65 70 75 80
Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg
85 90 95
Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe
100 105 110
Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu
115 120 125
Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile
130 135 140
Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser
145 150 155 160
Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His
165 170 175
Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly
180 185 190
Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn
195 200 205
Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala
210 215 220
Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser
225 230 235 240
Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala
245 250 255
Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg
260 265 270
Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe
275 280 285
Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu
290 295 300
Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro
305 310 315 320
Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His
325 330 335
Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr
340 345 350
Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr
355 360 365
Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile
370 375 380
Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu
385 390 395 400
Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu
405 410 415
Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu
420 425 430
Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Gly
435 440 445
Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val Ser Val
450 455 460
Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe Thr Val
465 470 475 480
Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr Thr Pro
485 490 495
Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys Ala Phe
500 505 510
Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile Tyr Val
515 520 525
His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile Ser Met
530 535 540
Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp Pro Glu
545 550 555 560
Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys Glu Asn
565 570 575
Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn Asp Leu
580 585 590
Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Val Gly Phe Leu His Ser
595 600 605
Ser His Asp Val Asn Lys Glu Ala Ser Val Ile Met Leu Phe Ser Gly
610 615 620
Leu Lys
625
<210> 152
<211> 650
<212> PRT
<213> 人工（Artificial）
<220>
<223> 合成
<400> 152
Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys
1 5 10 15
Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp
20 25 30
Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro
35 40 45
Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp
50 55 60
Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His
65 70 75 80
Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg
85 90 95
Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe
100 105 110
Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu
115 120 125
Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile
130 135 140
Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser
145 150 155 160
Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His
165 170 175
Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly
180 185 190
Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn
195 200 205
Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala
210 215 220
Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser
225 230 235 240
Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala
245 250 255
Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg
260 265 270
Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe
275 280 285
Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu
290 295 300
Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro
305 310 315 320
Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His
325 330 335
Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr
340 345 350
Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr
355 360 365
Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile
370 375 380
Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu
385 390 395 400
Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu
405 410 415
Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu
420 425 430
Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Thr
435 440 445
Trp Trp Lys Glu Pro Leu Asn Ile Val Ser Phe Leu Phe Cys Phe Ala
450 455 460
Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val
465 470 475 480
Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe
485 490 495
Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr
500 505 510
Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys
515 520 525
Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile
530 535 540
Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile
545 550 555 560
Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp
565 570 575
Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys
580 585 590
Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn
595 600 605
Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala
610 615 620
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Glu Gln Lys Leu Ile Ser
625 630 635 640
Glu Glu Asp Leu His His His His His His
645 650
<210> 153
<211> 838
<212> PRT
<213> 人工（Artificial）
<220>
<223> 合成
<400> 153
Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys
1 5 10 15
Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp
20 25 30
Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro
35 40 45
Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp
50 55 60
Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His
65 70 75 80
Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg
85 90 95
Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe
100 105 110
Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu
115 120 125
Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile
130 135 140
Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser
145 150 155 160
Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His
165 170 175
Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly
180 185 190
Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn
195 200 205
Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala
210 215 220
Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser
225 230 235 240
Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala
245 250 255
Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg
260 265 270
Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe
275 280 285
Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu
290 295 300
Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro
305 310 315 320
Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His
325 330 335
Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr
340 345 350
Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr
355 360 365
Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile
370 375 380
Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu
385 390 395 400
Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu
405 410 415
Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu
420 425 430
Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Thr
435 440 445
Trp Trp Lys Glu Pro Leu Asn Ile Val Ser Phe Leu Phe Cys Phe Ala
450 455 460
Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val
465 470 475 480
Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe
485 490 495
Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr
500 505 510
Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys
515 520 525
Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile
530 535 540
Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile
545 550 555 560
Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp
565 570 575
Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys
580 585 590
Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn
595 600 605
Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala
610 615 620
Met Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val
625 630 635 640
Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile
645 650 655
Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val
660 665 670
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
675 680 685
Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu
690 695 700
Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala
705 710 715 720
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro
725 730 735
Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys
740 745 750
Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr
755 760 765
Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr
770 775 780
Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
785 790 795 800
Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser
805 810 815
Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser
820 825 830
His Ser Pro Gly Lys Glu
835
<210> 154
<211> 1100
<212> PRT
<213> 人工（Artificial）
<220>
<223> 合成
<400> 154
Ser Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp
20 25 30
Asp Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu
35 40 45
Pro Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn
50 55 60
Asp Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln
65 70 75 80
His Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu
85 90 95
Arg Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Ala Glu
100 105 110
Phe Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser
115 120 125
Glu Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Val Lys Gly Asp Leu Thr
130 135 140
Ile Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val
145 150 155 160
Ser Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser
165 170 175
His Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Pro Leu Asn Gln Asn
180 185 190
Gly Tyr Thr Leu Val Val Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu
195 200 205
Asn Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser
210 215 220
Ala Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg
225 230 235 240
Ser Glu Glu Cys Pro Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro
245 250 255
Ala Ile Tyr Lys Val Phe Pro Thr Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr
260 265 270
Arg Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys
275 280 285
Phe Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr
290 295 300
Leu Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly
305 310 315 320
Pro Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly
325 330 335
His Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Ile Ile
340 345 350
Thr Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu
355 360 365
Thr Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser
370 375 380
Ile Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu
385 390 395 400
Glu Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys
405 410 415
Leu Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg
420 425 430
Glu Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser
435 440 445
Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu His Ser Val Ser
450 455 460
Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe Thr
465 470 475 480
Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr Thr
485 490 495
Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys Ala
500 505 510
Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile Tyr
515 520 525
Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile Ser
530 535 540
Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp Pro
545 550 555 560
Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys Glu
565 570 575
Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn Asp
580 585 590
Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala Ile
595 600 605
Ser Ser Thr Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp Gln Asn Phe
610 615 620
Thr Gly Leu Ile Ala Gly Val Val Ser Ile Ser Ile Ala Leu Leu Leu
625 630 635 640
Leu Leu Gly Leu Phe Leu Trp Leu Lys Lys Arg Lys Gln Ile Lys Asp
645 650 655
Leu Gly Ser Glu Leu Val Arg Tyr Asp Ala Arg Val His Thr Pro His
660 665 670
Leu Asp Arg Leu Val Ser Ala Arg Ser Val Ser Pro Thr Thr Glu Met
675 680 685
Val Ser Asn Glu Ser Val Asp Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Glu Asp Gln
690 695 700
Phe Pro Asn Ser Ser Gln Asn Gly Ser Cys Arg Gln Val Gln Tyr Pro
705 710 715 720
Leu Thr Asp Met Ser Pro Ile Leu Thr Ser Gly Asp Ser Asp Ile Ser
725 730 735
Ser Pro Leu Leu Gln Asn Thr Val His Ile Asp Leu Ser Ala Leu Asn
740 745 750
Pro Glu Leu Val Gln Ala Val Gln His Val Val Ile Gly Pro Ser Ser
755 760 765
Leu Ile Val His Phe Asn Glu Val Ile Gly Arg Gly His Phe Gly Cys
770 775 780
Val Tyr His Gly Thr Leu Leu Asp Asn Asp Gly Lys Lys Ile His Cys
785 790 795 800
Ala Val Lys Ser Leu Asn Arg Ile Thr Asp Ile Gly Glu Val Ser Gln
805 810 815
Phe Leu Thr Glu Gly Ile Ile Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val
820 825 830
Leu Ser Leu Leu Gly Ile Cys Leu Arg Ser Glu Gly Ser Pro Leu Val
835 840 845
Val Leu Pro Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile Arg Asn
850 855 860
Glu Thr His Asn Pro Thr Val Lys Asp Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gln
865 870 875 880
Val Ala Lys Gly Met Lys Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Phe Val His Arg
885 890 895
Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asp Glu Lys Phe Thr Val Lys
900 905 910
Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Met Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr
915 920 925
Ser Val His Asn Lys Thr Gly Ala Lys Leu Pro Val Lys Trp Met Ala
930 935 940
Leu Glu Ser Leu Gln Thr Gln Lys Phe Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp
945 950 955 960
Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Leu Met Thr Arg Gly Ala Pro Pro
965 970 975
Tyr Pro Asp Val Asn Thr Phe Asp Ile Thr Val Tyr Leu Leu Gln Gly
980 985 990
Arg Arg Leu Leu Gln Pro Glu Tyr Cys Pro Asp Pro Leu Tyr Glu Val
995 1000 1005
Met Leu Lys Cys Trp His Pro Lys Ala Glu Met Arg Pro Ser Phe
1010 1015 1020
Ser Glu Leu Val Ser Arg Ile Ser Ala Ile Phe Ser Thr Phe Ile
1025 1030 1035
Gly Glu His Tyr Val His Val Asn Ala Thr Tyr Val Asn Val Lys
1040 1045 1050
Cys Val Ala Pro Tyr Pro Ser Leu Leu Ser Ser Glu Asp Asn Ala
1055 1060 1065
Asp Asp Glu Val Asp Thr Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp
1070 1075 1080
Leu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His
1085 1090 1095
His His
1100
<210> 155
<211> 936
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成
<400> 155
Glu Cys Lys Glu Ala Leu Ala Lys Ser Glu Met Asn Val Asn Met Lys
1 5 10 15
Tyr Gln Leu Pro Asn Phe Thr Ala Glu Thr Pro Ile Gln Asn Val Ile
20 25 30
Leu His Glu His His Ile Phe Leu Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val
35 40 45
Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys Val Ala Glu Tyr Lys Thr Gly Pro
50 55 60
Val Leu Glu His Pro Asp Cys Phe Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys
65 70 75 80
Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu
85 90 95
Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val
100 105 110
Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His Val Phe Pro His Asn His Thr Ala
115 120 125
Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu
130 135 140
Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val
145 150 155 160
Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr
165 170 175
Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp His Pro Leu His Ser Ile Ser Val
180 185 190
Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln
195 200 205
Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys
210 215 220
Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val
225 230 235 240
Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg
245 250 255
Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu His Ser Tyr Met Glu Met Pro Leu
260 265 270
Glu Cys Ile Leu Thr Glu Lys Arg Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu
275 280 285
Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln
290 295 300
Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp Ile Leu Phe Gly
305 310 315 320
Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro Met Asp Arg Ser
325 330 335
Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp Phe Phe Asn Lys
340 345 350
Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His Phe Tyr Gly Pro
355 360 365
Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg Asn Ser Ser Gly
370 375 380
Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe Thr Thr Ala Leu
385 390 395 400
Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu Val Leu Leu Thr
405 410 415
Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly
420 425 430
Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro
435 440 445
Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His Pro Val Ser Pro
450 455 460
Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Val
465 470 475 480
Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn Gly Leu Gly Cys
485 490 495
Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala Pro Pro Phe Val
500 505 510
Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser Glu Glu Cys Leu
515 520 525
Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala Ile Tyr Lys Val
530 535 540
Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Leu Thr Ile Cys
545 550 555 560
Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe Asp Leu Lys Lys
565 570 575
Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu Thr Leu Ser Glu
580 585 590
Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro Ala Met Asn Lys
595 600 605
His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His Gly Thr Thr Gln
610 615 620
Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro
625 630 635 640
Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr Leu Thr Gly Asn
645 650 655
Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile Gly Gly Lys Thr
660 665 670
Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro
675 680 685
Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu
690 695 700
Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val
705 710 715 720
Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Gly Gly Ser Thr Ile
725 730 735
Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val Ser Val Pro Arg Met Val
740 745 750
Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe Thr Val Ala Cys Gln His
755 760 765
Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr Thr Pro Ser Leu Gln Gln
770 775 780
Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys Ala Phe Phe Met Leu Asp
785 790 795 800
Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile Tyr Val His Asn Pro Val
805 810 815
Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn
820 825 830
Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp Pro Glu Ala Val Lys Gly
835 840 845
Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys Glu Asn Ile His Leu His
850 855 860
Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn Asp Leu Leu Lys Leu Asn
865 870 875 880
Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala Ile Ser Ser Thr Val Leu
885 890 895
Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp Gln Asn Phe Thr Glu Gln Lys Leu
900 905 910
Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu
915 920 925
Asp Leu His His His His His His
930 935
<210> 156
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成
<400> 156
Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp Gly Phe Met
1 5 10
<210> 157
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成
<400> 157
Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp
1 5 10
<210> 158
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成
<400> 158
Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly
1 5 10 15
Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His
20 25 30
Val Asn Phe
35

Claims (38)

1.一种放射性标记的抗体缀合物，其包含结合MET的抗体或其抗原结合片段、螯合部分和正电子发射体。
2.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物包含结合MET的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段共价键合至一个或多个式(A)的部分：
-L-MZ
(A)
其中L是螯合部分；M是正电子发射体；并且z在每次出现时独立地是0或1；并且其中z中的至少一个是1。
3.如权利要求1或权利要求2中任一项所述的缀合物，其中所述螯合部分包含去铁敏。
4.如权利要求1至3中任一项所述的缀合物，其中所述正电子发射体是89Zr。
5.如权利要求1至4中任一项所述的缀合物，其中-L-M是
Figure FDA0003536344310000011
其中Zr是所述正电子发射体89Zr。
6.如权利要求1至5中任一项所述的缀合物，其中抗体或其抗原结合片段共价键合至一个、两个或三个式(A)的部分。
7.如权利要求1至6中任一项所述的缀合物，其中所述抗体具有选自由以下项组成的组的一种或多种特性：
(i)包含HCVR，其具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；
(ii)包含LCVR，其具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；
(iii)包含HCDR3结构域，其具有选自由SEQ ID NO:8、16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96、104、112、120、128和136组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR3结构域，其具有SEQ IDNO:144的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；
(iv)包含HCDR1结构域，其具有选自由SEQ ID NO:4、12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92、100、108、116、124和132组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；HCDR2结构域，其具有选自由SEQID NO:6、14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94、102、110、118、126和134组成的组的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；LCDR1结构域，其具有SEQ ID NO:140的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；和LCDR2结构域，其具有SEQ IDNO:142的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的它们的基本上相似的序列；
(v)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的第一结合特异性和与肿瘤特异性抗原的第二结合特异性；
(vi)是多特异性抗原结合分子，其包含与MET的一个表位的第一结合特异性和与MET的第二表位的第二结合特异性；
(vii)以小于约230nM的KD结合至单体人MET(例如，hMET.mmh)，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；
(viii)以小于约3nM的KD结合至二聚体人MET，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量；
(ix)阻断HGF与MET的结合；以及
(x)在患有癌症的受试者中抑制肿瘤生长并增加存活率。
8.如权利要求1至7中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含重链可变区(HCVR)中的三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述HCVR具有选自由SEQ ID NO:2、10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90、98、106、114、122和130组成的组的氨基酸序列；和轻链可变区(LCVR)中的三个轻链互补决定区(LCDR)，其中所述LCVR具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列。
9.如权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:18的HCVR中的三个CDR。
10.如权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:58的HCVR中的三个CDR。
11.如权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:82的HCVR中的三个CDR。
12.如权利要求1至11中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含SEQ ID NO:138的LCVR中的三个CDR。
13.如权利要求1至12中任一项所述的缀合物，其中所述抗体包含：
(i)第一抗原结合结构域(D1)；和
(ii)第二抗原结合结构域(D2)；
其中D1特异性地结合人MET的第一表位；并且
其中D2特异性地结合人MET的第二表位。
14.如权利要求13所述的缀合物，其中：
(i)D1包含SEQ ID NO:58的HCVR氨基酸序列内的所述CDR；以及
(ii)D2包含SEQ ID NO:82的HCVR氨基酸序列内的所述CDR。
15.如权利要求13所述的缀合物，其中：
(i)D1包含SEQ ID NO:60-62-64-140-142-144的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组；以及
(ii)D2包含SEQ ID NO:84-86-88-140-142-144的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。
16.一种对表达MET的组织进行成像的方法，所述方法包括将如权利要求1至15中任一项所述的放射性标记的抗体缀合物施用于所述组织；以及通过正电子发射断层扫描(PET)成像来使MET表达可视化。
17.一种鉴定受试者中表达MET的肿瘤的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至15中任一项所述的放射性标记的抗体缀合物；经由正电子发射断层扫描(PET)对所述放射性标记的抗体缀合物进行成像；其中所述放射性标记的抗体缀合物在所述受试者中的定位指示表达MET的肿瘤。
18.一种用于治疗患有实体瘤的受试者的方法，所述方法包括：
(a)确定所述实体瘤是MET阳性的；以及
(b)向有需要的所述受试者施用一个或多个剂量的HGF/MET信号传导路径的抑制剂。
19.如权利要求19所述的方法，其中步骤(a)包括：
(i)向有需要的所述受试者施用如权利要求1至15中任一项所述的放射性标记的抗体缀合物；以及
(ii)通过正电子发射断层扫描(PET)成像对所述放射性标记的抗体缀合物在所述肿瘤中的定位进行成像，其中所述肿瘤中所述放射性标记的抗体缀合物的存在指示所述肿瘤是MET阳性的。
20.如权利要求19所述的方法，其中向所述受试者施用0.1-10mg/kg的所述放射性标记的抗体缀合物。
21.如权利要求19或权利要求20中任一项所述的方法，其中向所述受试者皮下或静脉内施用所述放射性标记的抗体缀合物。
22.如权利要求19至21中任一项所述的方法，其中PET成像在施用所述放射性标记的抗体缀合物后2-7天进行。
23.如权利要求18至22中任一项所述的方法，其中步骤(a)在用所述HGF/MET信号传导路径的抑制剂治疗所述受试者之前进行。
24.如权利要求18至23中任一项所述的方法，所述方法还包括：
(a)在用至少一个剂量的所述HGF/MET信号传导路径的抑制剂治疗所述受试者之后施用所述放射性标记的抗体缀合物；以及
(b)通过PET成像对所述放射性标记的抗体缀合物在所述肿瘤中的定位进行成像，其中所述放射性标记的抗体缀合物在所述肿瘤中的定位区域从基线的降低指示肿瘤消退。
25.如权利要求19至24中任一项所述的方法，其中在施用所述HGF/MET信号传导路径的所述抑制剂后1-20周，向所述受试者施用所述放射性标记的抗体缀合物。
26.如权利要求18至25中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自由以下项组成的组：急性骨髓性白血病、成人T细胞白血病、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、慢性髓性白血病、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌(例如，具有MET扩增的胃癌)、成胶质细胞瘤、头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌[HNSCC])、卡波西氏肉瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌[NSCLC])、淋巴瘤、恶性神经胶质瘤、恶性间皮瘤、黑素瘤、间皮瘤、MFH/纤维肉瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、小细胞肺癌、滑膜肉瘤、甲状腺癌和威尔姆氏肿瘤。
27.如权利要求18至26中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自由胃癌或非小细胞肺癌组成的组。
28.如权利要求18至27中任一项所述的方法，其中所述HGF/MET信号传导路径的所述抑制剂是抗体或其抗原结合片段。
29.如权利要求18至28中任一项所述的方法，其中所述HGF/MET信号传导路径的所述抑制剂是MET x MET双特异性抗体或其抗原结合片段。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述MET x MET双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
(i)第一抗原结合结构域(D1)，其包含SEQ ID NO:58的HCVR氨基酸序列内的所述CDR；以及
(ii)第二抗原结合结构域(D2)，其包含SEQ ID NO:82的HCVR氨基酸序列内的所述CDR。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述Met x MET双特异性抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:138的LCVR氨基酸序列内的所述CDR。
32.如权利要求30所述的方法，其中：D1包含SEQ ID NO:58的重链可变区(HCVR)；并且D2包含氨基酸序列NO:82的HCVR。
33.一种式(III)化合物，
Figure FDA0003536344310000071
其中A是结合MET的抗体或其抗原结合片段，并且k是1-30的整数。
34.如权利要求33所述的化合物，其中k是1或2。
35.一种抗体缀合物，其包含(i)结合MET的抗体或其抗原结合片段和(ii)一个或多个螯合部分。
36.如权利要求35所述的抗体缀合物，其中所述螯合部分是
Figure FDA0003536344310000072
其中
Figure FDA0003536344310000073
是与所述抗体或其抗原结合片段的共价键。
37.如权利要求35或权利要求36中任一项所述的抗体缀合物，其中所述缀合物的螯合部分与抗体的比率是1.0至3.0。
38.如权利要求35至37中任一项所述的抗体缀合物，其中所述螯合部分与抗体的比率是约1.3。
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