CN112135911A - 生产方法 - Google Patents

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Abstract

属于寡糖生产领域的本发明提供了一种生产有用长度的寡糖而不产生大量单糖和二糖的方法(如图1所示)。本文提供了一种用于生产适于掺入食品、化妆品或营养品中的配料的方法，所述配料包含一种或多种寡糖，其中所述寡糖在酶促反应中产生，所述酶促反应包括在溶液或悬浮液中使多糖裂解酶与含多糖原料接触的步骤，其中所述酶促反应基本上不产生单糖和二糖。

Description

生产方法
技术领域
本发明涉及寡糖的酶法生产及其在食品、化妆品和营养品中的用途。
背景技术
含糖食物和饮料是全世界文化和生活习惯的重要组成部分，但其中所含的糖与人们的肥胖、糖尿病、牙齿健康不良和破坏行为有关。由于这些原因，消费者的偏好已经从含糖食物中转移出来，并且政府越来越多地实施法规以鼓励减少糖的食用。
因此，几十年来，业界一直在寻找合适的低热量甜味剂来代替食物和饮料中的糖。不幸的是，许多糖替代品都是由非天然资源生产的，并且常常连同其甜味带有苦味或其他令人讨厌的味道，这两种味道无法吸引消费者。此外，虽然甜味剂能够模拟食物和饮料中糖的甜味，但很少有甜味剂能够模拟糖的其他方面，诸如增加体积、调节质地、提供结构、充当防腐剂以及通过焦糖化和Maillard反应调节颜色和风味。
膳食纤维是积极饮食的重要组成部分，且有助于维持消化系统的健康和肠道菌群的良好调节。这种纤维包括不同链长和糖类型的多糖。除了天然存在于各种各样的食物中，纤维还可以单独生产，并在生产过程中添加到其他食物中。
工业生产膳食寡糖的方法可包括化学或酶促地将长多糖切割成较短的链。然而，除了所需长度的链外，该裂解作用还释放出单糖和二糖。由于单糖和二糖在营养标签中被归类为“糖”，并且由于单糖和二糖导致上述对人类健康的负面影响，因此在许多寡糖食物中都是不可取的。葡萄糖、半乳糖、果糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖尤其不受欢迎，因为它们热量较高。然而，尽管过量的单糖和二糖对人体健康有负面影响，但包含高水平单糖和二糖(诸如100％)的组合物在食物工业中大量使用。
发明内容
本发明人发现，包含更长链的糖(寡糖)来取代目前使用的组合物中的大量单糖和二糖的糖组合物仍然在食品中提供所需的甜味和质地性质。然而，与当前糖组合物相关联的对人类健康的负面影响显著改善；例如，本发明的组合物含有少得多的热量，并且对牙齿健康的影响较小。
此外，本发明人发现了在不产生大量单糖和二糖的情况下生产有用长度的寡糖的酶促方法，并且发现衍生自这些寡糖的食品具有改善的特性。通常将单糖和二糖从寡糖组合物中去除会增加生产过程的时间、复杂性、能耗和费用。因此，本发明人的新颖方法可用于制造食品、营养品和化妆品。
此外，本发明人发现，当酶是多糖裂解单加氧酶(LPMO)时，所生产的一些寡糖链在一个或两个末端具有化学修饰，这些修饰可以以在食品工业中有用的方式调节寡糖的风味、颜色、焦糖化和其他特性。
根据本发明的第一方面，本文提供了一种用于生产适于掺入食品、化妆品或营养品中的配料的方法，所述配料包含一种或多种寡糖，其中所述寡糖在酶促反应中产生，所述酶促反应包括在溶液或悬浮液中使多糖裂解酶与含多糖原料接触的步骤，其中所述酶促反应基本上不产生单糖和二糖。
根据本发明的第二方面，本文提供了一种用于掺入食品、化妆品或营养品中的配料，所述配料包含β-1,4-葡聚糖寡糖，其中一个或多个末端糖残基被氧化为内酯、4-酮醛糖、醛糖酸或偕二醇，并且其中所述配料基本上不包含单糖和二糖。
根据本发明的第三方面，本文提供了一种用于掺入食品、化妆品或营养品中的配料，所述配料包含β-1,4-葡聚糖寡糖和另一种寡糖。
附图说明
图1：PACE凝胶示出了磷酸溶胀的纤维素与PaLPMO9E和/或抗坏血酸盐的缓冲溶液一起孵育的产物，如实施例1所示。
图2：PACE凝胶示出了经洗涤的燕麦与来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的GH16地衣多糖酶的溶液一起孵育的产物，如实施例2所示。
图3：通过向蛋糕糊掺入食糖、混合键葡聚糖寡糖或者既不掺入食糖也不掺入寡糖而制成的蛋糕的照片，如实施例2所示。
图4：PACE凝胶示出了云杉木片与来自热纤瘤胃梭菌(Ruminiclostridiumthermocellum)的GH30木聚糖酶的缓冲溶液一起孵育的产物，如实施例3所示。
图5：PACE凝胶示出了罗望子木葡聚糖与来自类芽孢杆菌属种(Paenibacillussp)的GH5木葡聚糖酶的缓冲溶液一起孵育的产物，如实施例4所示。
具体实施方式
本发明人发现了在不产生大量单糖和二糖的情况下生产长度在食品、化妆品或营养品中有用的寡糖的酶促方法。一些实施方案还提供具有新颖性质的产品。
如本文所用，“食物”和“食品”是指任何供食用的物品，其可由人或任何其他动物食用。其可以是食物、饲料、饮料或用于生产上述任一项的配料。
如本文所用，“营养品”是指为了向人或其他动物提供营养而通过摄取、注射、吸收或任何其他方法引入人或其他动物的任何组合物。在这样的营养品中的使用可采取添加膳食纤维的饮料、益生素添加剂、药丸或其他胶囊、片剂粘合剂的形式；或任何其他合适的用途。
如本文所用，“化妆品”是指旨在用于人或其他动物以增加其美学吸引力或防止将来丧失美学吸引力的任何组合物，以及一般称为化妆品的任何其他组合物。美学吸引力不仅限于视觉美学，而且还适用于结构上或任何其他方面的吸引力。化妆品可以是睫毛膏、粉底、唇彩、眼影膏、眼线膏、妆前乳、口红腮红、指甲油、古铜色化妆品(bronzer)或任何其他化妆品(makeup)；洗发水、护发素、定型摩丝、定型凝胶、发胶、染发剂、发蜡或任何其他发用产品；保湿剂、去角质剂、防晒霜、清洁剂、牙膏或乳霜、洗剂、软膏或有效地以某种美学方式修饰牙齿、皮肤、头发或身体其他部位的任何其他组合物。或者其可以是用作面罩、刷子、卷发器、其他造型装置或其他固体结构的组分的组合物，或任何其他合适的组合物。
本发明方法的一个步骤是酶促反应，在酶促反应中将一种或多种酶与一种或多种可溶于水或不溶于水的原料以及合适的溶剂一起置于合适的反应容器中。
多种酶适用于本发明的酶促反应。当作用于含多糖原料时，产生寡糖而基本上不产生单糖和二糖的任何酶均可以是适当的。优选地，酶促反应包含多糖裂解单加氧酶(LPMO)、地衣多糖酶、木葡聚糖内切葡聚糖酶(XEG)、甘露聚糖酶和/或木聚糖酶，诸如GH5、GH8、GH10、GH11和/或GH30木聚糖酶。更优选地，酶促反应包含LPMO。甚至更优选地，酶促反应包含甘露聚糖酶。又更优选地，酶促反应包含木聚糖酶，诸如GH5、GH8、GH10、GH11或GH30木聚糖酶。还设想了包含多种酶的酶混合物，例如包含LPMO和木聚糖酶的酶混合物，或者包含LPMO、木聚糖酶和地衣多糖酶的酶混合物或包含木聚糖酶和甘露聚糖酶的酶混合物。可以将每种酶作为纯化酶，作为来源于一些自然来源或实验室生长的培养物的半纯化混合物，以工程化以产生酶的微生物菌株的形式，或以任何其他方式提供给酶促反应。这些酶与其他酶或与非酶模块诸如碳水化合物结合模块(CBM)的结合也被认为在每个相应的术语内，例如LPMO结合CBM、木聚糖酶结合CBM或木聚糖酶结合LPMO。
如本文所用，“多糖裂解单加氧酶”和“LPMO”是指能够使用含铜部分并使用氧源(诸如双氧分子、过氧化物或任何其他氧源)以及合适的还原剂将多糖氧化裂解的一类酶。因此，当使用LPMO时，酶促反应可在有氧条件下进行。合适的还原剂没有特别限制，但示例包括抗坏血酸、没食子酸、半胱氨酸、NADH、NADPH、焦性没食子酸、二硫苏糖醇、氰基硼氢化物、硼氢化物、光合色素、木质素、木质素醇以及纤维二糖和纤维二糖脱氢酶的组合。尽管本领域技术人员知道可以使用的多种光合色素，但是类囊体和纯化级分或叶绿素是优选的，并且可以提供光。
将还原剂以相对酶或酶混合物的一定摩尔浓度比率添加到酶促反应中。该比率可以是任何合适的比率，例如从约101:1至约108:1，优选从约103:1至约106:1，更优选从约104:1至约105:1。
有氧条件可以包括添加氧气，其可以通过用含氧气体(诸如空气)向底物混合物曝气来提供。可以通过各种系统(诸如空气注射器、曝气筛板、膜系统或内循环气升式反应器)将含氧气泡引入水性底物混合物中来进行曝气。优选地，酶促反应中分子氧的浓度为约4至约14mg/l。
由于LPMO的氧化活性特别强，它们甚至可以氧化裂解非常顽固的聚合物，诸如纤维素。这使得甚至能够从在传统上视为较差食物源材料并因此非常便宜的原料生产有用的寡糖。这样的原料的示例包括植物生物质，诸如谷物、谷壳、豆荚、种皮和/或其他种子材料；海藻；玉米秸秆、玉米芯、稻草、甘蔗渣、芒草、高粱渣、柳枝稷、竹子和/或其他单子叶植物组织；水葫芦、叶组织、根和/或其他植物物质；硬木、硬木片、硬木木浆、软木、软木片、软木木浆、纸、纸浆、硬纸板和/或其他木质原料；蟹壳、鱿鱼生物质、虾壳和/或其他海洋生物质；和/或适当原料的任何组合。当由LPMO作用时，适于生产本发明的寡糖谱的原料可包括例如纤维素、壳多糖、壳聚糖、木聚糖和/或甘露聚糖，可设想可以被合适地作用的任何原料。
优选地，LPMO选自以下家族：AA9、AA10、AA11、AA13、AA14和AA15。更优选地，LPMO是PaLPMO9E(SEQ ID NO:1)，一种AA9 LPMO，最初从子囊菌真菌鹅柄孢壳菌(Podosporaanserina)中分离出来，其产生特别低水平的单糖和二糖。
当LPMO作用于底物时，在任何给定的裂解反应中产生的两个新末端残基中，一个被氧化。当使用LPMO时，纤维素、壳多糖和壳聚糖是优选的底物。例如，如果纤维素是底物，当β-1,4糖苷键被切割时，与C1碳相连的残基被转化为内酯，且与C4碳相连的残基被转化为4-酮醛糖。然后，两个部分可以与水自发反应以分别形成醛糖酸和偕二醇。因此，所得的寡糖很大程度上等同于以任何其他方式产生的β-葡聚糖，但在一些方面存在微妙差别。优选地，所得的寡糖包含β-葡聚糖和/或葡糖胺的聚合物。
在LPMO生成葡聚糖的情况下，产物可具有与通过非氧化方法产生的等同物相比不同的焦糖化性质、风味、颜色和其他性质。因此，尽管它们可以与其他葡聚糖在相同的应用中使用，但它们在这些性质方面提供了微妙的改进，该微妙的改进在一些应用中可能比其他来源的葡聚糖更优选。类似地，使用不同的LPMO会产生不同比例的不同类型的氧化末端，因此使用不同的LPMO可以将氧化定制成适应不同的食物、营养品和化妆品应用。
在本发明中有用的另一示例性酶是地衣多糖酶，其可以选自GH5、GH7、GH8、GH9、GH12、GH16、GH17或GH26家族，优选GH16酶，更优选衍生自枯草芽孢杆菌的GH16酶(SEQ IDNO:2)。本文要求保护的是一种地衣多糖酶，当该地衣多糖酶作用于适当的多糖底物诸如地衣多糖或其他混合键葡聚糖上时，基本上不产生单糖和二糖。该酶能够作用于例如混合键葡聚糖，混合键葡聚糖是包含β-1,3和β-1,4键的混合并且可以在β-1,4糖苷键处被裂解的葡聚糖。在地衣多糖酶作用于混合键葡聚糖的优选情况下，所产生的β-葡聚糖可能主要落在约3至约7个残基的大小范围内，因此它们在食物、化妆品和营养品行业特别有用。
混合键葡聚糖大量存在于禾本科和木贼科的成员中，因此禾本基原料诸如稻草具有高水平的混合键葡聚糖，并且可以被地衣多糖酶有效地作用。
在本发明中有用的另一备选酶是GH5、GH8、GH10、GH11和/或GH30家族的木聚糖酶，其可作用于例如包含木聚糖骨架的原料。木聚糖酶可以是例如葡糖醛酸木聚糖酶、阿拉伯木聚糖酶或葡糖醛酸阿拉伯木聚糖酶。该酶可以作用于具有木聚糖骨架的多种聚合物，诸如葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖和葡糖醛酸阿拉伯木聚糖。这些聚合物大量存在于各种植物来源的原料中，例如硬木和软木均包含合适的多糖，其中硬木通常包含葡糖醛酸木聚糖并且软木通常包含阿拉伯葡糖醛酸木聚糖。优选的木聚糖酶包括来自热纤瘤胃梭菌(SEQID NO:3)和层出节水霉(Gonapodya prolifera)(SEQ ID NO:4)的GH5木聚糖酶以及来自Dickeya chrysanthemi(SEQ ID NO:5)、枯草芽孢杆菌(SEQ ID NO:6)和卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)(SEQ ID NO:7)的GH30木聚糖酶。
包含软木阿拉伯葡糖醛酸木聚糖的原料是优选的原料，并且当用GH30木聚糖酶进行消化时，产物包含主链长度在食品、化妆品和营养品行业中有用的寡糖。这些寡糖可以包含多于约五个主链残基，并且基本上不包含单糖和二糖。
包含硬木葡糖醛酸木聚糖的原料是另一优选的原料，并且当用GH30木聚糖酶进行消化时，产物包括主要包含约5至约30个主链残基的葡糖醛酸木聚糖链。
在本发明中有用的其他酶包括木葡聚糖酶和木葡聚糖内切葡聚糖酶(XEG)，其由许多生物体，包括植物致病性微生物产生。它们能够作用于木葡聚糖，一种大量存在于高等植物初生细胞壁中的半纤维素β-1,4葡聚糖链，其带有木糖修饰，其中一些木糖残基进一步被其他残基诸如半乳糖修饰。当适当的木葡聚糖酶或XEG作用于木葡聚糖时，产物包含主链长度在食品、化妆品和营养品行业中有用的木葡聚糖寡糖，并且基本上不包含单糖和二糖。一种优选的木葡聚糖酶是来自卵形拟杆菌的GH5木葡聚糖酶(SEQ ID NO:8)。
酶促反应可以在合适的反应容器中在溶液和/或悬浮液中发生。在适于酶和原料的特定组合的温度或温度方案下，可以允许反应进行一定量的时间，或者直至产物达到所需的浓度，或者直至满足其他要求。
如本文所用，“悬浮液”是指包含至少两个不混溶相，例如固相和液相的组合物，其中按组合物重量的百分比计，固相的重量可以为约0.5％至约30％，优选1％至约10％，更优选约2％至约7％，又更优选约3％至约5％。悬浮液可以包含合适的溶剂，优选为水。使用约1％至约35％，优选5％至约30％，更优选约8％至约25％，又更优选约10％至约20％的稍高浓度可能特别有益，例如用于改善过程时间。
为了确保酶和原料之间的最佳接触，可以连续或间歇地搅拌反应混合物。搅拌可以采取有节奏地移动整个反应容器、风扇或其他搅拌装置、鼓泡或任何其他搅拌方法的形式。
酶促反应可以是微生物发酵。温度和反应时间将适于所用微生物的生长。可以对微生物进行转基因以产生适于产生本发明的寡糖而基本上不产生单糖和二糖的酶。例如，微生物可以是细菌，例如大肠杆菌(Escherichia coli)，或者真菌，诸如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
本发明还体现了一种适于修饰受试微生物以使其产生本发明的酶或酶混合物的表达载体。表达载体可以是质粒或任何其他能够诱导酶产生的核酸，在需要时，其可以包含以下调控序列中的一种或多种，以便控制外源酶的表达：热休克基因的调控序列、毒性基因的调控序列和孢子形成基因的调控序列。
酶促反应在适合所用酶和底物的温度或温度方案下进行。例如，酶促反应可以在约10℃至约80℃，优选约20℃至约60℃，更优选约30℃至约40℃范围内的恒定温度下进行。使用约30℃至约70℃，优选约40℃至约60℃的稍高温度可能特别有益，例如用于改善过程时间。如果酶促反应采取微生物发酵的形式，则温度可能适于这样的情况，例如酶促反应可以包括大肠杆菌的生长和/或温度可以恒定且大约为37℃。
溶液或悬浮液的pH可影响酶的活性。pH的控制对于确保酶促反应以合适的速率进行可能是重要的。本发明的酶促反应可在约2至约10，优选约3至约8，更优选约4至约6的pH范围内进行。
允许酶促反应持续一定时间段，然后任选地将其淬灭，并分离或以其他方式收集产物。该时间段可以为约1分钟至约5天，且优选为约0.5至约3天，更优选约16小时至约48小时。或者，可以允许反应进行直至反应完成或大致完成。如果允许反应继续直到反应完成或大致完成，则可能超过5天。
向酶促反应添加的一种或多种原料包含多糖。这样的多糖可以通过在反应容器中同时进行的单独反应产生。酶促反应中存在的多糖被酶切割成有用的寡糖。
包含适当多糖的任何物质都可以形成原料的一部分。由于食品、化妆品和营养品行业使用各种各样的寡糖，因此不特别限制适于参与酶促反应的多糖。优选地，原料包含选自纤维素、壳多糖、壳聚糖、混合键葡聚糖、木聚糖和木葡聚糖的一种或多种多糖。如果存在木聚糖，则木聚糖优选地包含葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖和/或葡糖醛酸阿拉伯木聚糖。
包含这样的多糖的原料也没有特别限制，因为大多数植物物质富含这样的聚合物。因此，原料可以包括植物生物质，诸如谷物、谷壳、豆荚、种皮和/或其他种子材料；海藻；玉米秸秆、玉米芯、稻草、甘蔗渣、芒草、高粱渣、柳枝稷、竹子和/或其他单子叶植物组织；水葫芦、叶组织、根和/或其他营养物质；硬木、硬木片、硬木木浆、软木、软木片、软木木浆、纸、纸浆、硬纸板和/或其他木质原料；蟹壳、鱿鱼生物质、虾壳和/或其他海洋生物质，和/或适当原料的任何组合。优选地，原料包含麦秸或木头。由于任何给定的天然原料都可能包含不同多糖的混合物，因此在有些情况下使用不同酶的混合物是有益的。这样的混合物可以包含任何其他酶。例如，这样的混合物可以包含纤维素酶与木聚糖酶、纤维素酶与甘露聚糖酶、木聚糖酶与甘露聚糖酶、LPMO与木聚糖酶、LPMO与地衣多糖酶、LPMO与甘露聚糖酶或LPMO与另一LPMO，其中酶搭档的摩尔比优选在1:10和10:1之间。此外，由于许多适当原料是顽固的，因此设想对原料进行预处理。
如本文所用，“预处理”是使原料更容易受到在本发明的酶促反应步骤中固有的酶的作用的任何过程。预处理发生在酶促反应之前，并且可以包括例如通过硫酸、磷酸或三氟乙酸进行的酸处理；例如通过氢氧化钠或氨纤维膨胀进行的碱处理；例如通过热水、热蒸汽或热酸进行的热处理；例如通过水解酶、裂解酶或LPMO进行的酶处理，或以上过程的任何混合。
如本文所用，“多糖”是指具有大于两个残基的任何长度的糖类聚合物。多糖可以高度支化、轻度支化或无支化，多糖可以包含任何组合的任意类型的糖苷键、任何数目的例如α或β键，以及单体类型诸如葡萄糖、葡萄糖胺、甘露糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、葡糖醛酸、阿拉伯糖或其衍生物的任何组合，诸如修饰有乙酰基或其他基团的以上单体的任何组合。多糖可以是纤维素或半纤维素聚合物，设想的半纤维素聚合物包括木聚糖、葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖、葡甘露聚糖和木葡聚糖。纤维素是优选的纤维素聚合物。甘露聚糖是甚至更优选的纤维素聚合物。木聚糖是又更优选的纤维素聚合物。
如本文所用，“高度支化”、“轻度支化”和“无支化”是指糖类中每段主链的侧链数目。高度支化的糖类的平均每10个主链残基具有4至10个侧链，轻度支化的糖类的平均每10个主链残基具有1至3个侧链，并且无支化的糖类仅有一个主链且没有侧链。通过将糖类中侧链的数目除以主链残基的数目来计算平均值。
如本文所用，“糖类”是指任何多糖、寡糖、单糖或二糖。
如本文所用，“寡糖”是指链长通常在食品、化妆品或营养品方面有用的范围内的糖类聚合物。寡糖至少包含在酶促反应的产物内。通常链长可为约3至16糖类残基。寡糖可以高度支化、轻度支化或无支化，寡糖可以包含任何组合的糖苷键、任何数目的α或β键，以及单体类型诸如葡萄糖、葡萄糖胺、甘露糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、葡糖醛酸、阿拉伯糖或其衍生物的任何组合。合适的衍生物包括包含乙酰基或其他基团的以上单体。
在本发明的过程中产生的寡糖落入大小上限和下限内。大小下限是基本上不产生单糖和二糖。
如本文所述，“基本上无”单糖和二糖是指在一系列产物中，按重量计小于约60％，优选小于约50％，优选小于约40％，更优选小于约30％，甚至更优选小于约20％，甚至更优选小于约15％，甚至更优选小于约10％，甚至更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，又更优选小于约1％，最优选小于约0.1％的可成像糖类为单糖或二糖。
如本文所述，本发明的酶反应可用于产生寡糖，而基本上不产生单糖和二糖。然而，设想反应将在大容器中进行，其中同时进行其他反应(例如酶促反应)。这些其他酶促反应还将把多糖分解为较小的糖类，包括寡糖，但也可能产生单糖和二糖。因此，该方法还包括可以产生一种或多种二糖的第二酶促反应，该第二酶促反应包括使第二多糖裂解酶与一种或多种含多糖原料接触。在一些情况下也可以产生单糖。这些单糖和二糖可以包括在配料中，因此在特定特征中，所生产的配料中二糖的量适当地小于可成像糖类的约50％，优选小于约40％，更优选小于约35％，更优选小于约30％，甚至更优选小于约25％，甚至更优选小于约20％，甚至更优选小于约15％，甚至更优选小于约10％，又甚至更优选小于约5％。
所生产的配料中单糖的量适当地小于可成像糖类的约25％，优选小于约20％，更优选小于约15％，甚至更优选小于约10％，甚至更优选小于约5％，又甚至更优选小于约3％，又甚至更优选小于约1％。
如本文所用，“可成像多糖”是指当执行以下成像方案之一时在凝胶或光谱中可见的多糖。
评估由本发明生产的不同多糖的重量百分比的一种方法是对酶促反应产物的样品进行处理以使其还原性末端衍生有荧光团，然后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后例如通过荧光成像对所得聚丙烯酰胺凝胶进行成像，并对每个带进行光密度分析，将所得值通过残基计数进行调整以给出质量的指示。本领域技术人员将能够利用本申请内的信息结合Goubet等人,(2002)执行此操作。这是设想用于计算可成像多糖的重量百分比值的方法。
评估由本发明生产的不同多糖的重量百分比的另一种方法是通过高通量液相色谱进行分析，例如在碱性溶液中使用阴离子交换色谱柱，然后进行脉冲安培检测。可以将所得数据通过残基计数进行调整以给出质量的指示。本领域技术人员将能够利用本申请内的信息结合Simmons等人,(2013)执行此操作。
如本文所用，“单糖”和“二糖”是指分别由一个或两个残基组成的糖类化合物。单糖是化合物，诸如葡萄糖、葡萄糖胺、木糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、葡糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸；或其差向异构体或其他衍生物。合适的衍生物包括乙酰基或其他基团。二糖是由通过任何糖苷键连接的两个单糖组成的化合物。本文设想的是在这样的反应中基本上不产生单糖和二糖的酶或酶组合。
寡糖的大小上限取决于所用的酶、原料和反应条件，并且可以是主链上包含16个或更多残基的产物的重量低于可成像多糖重量的一定百分比。
该百分比可以为约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％；或者，可能地，主链中包含15个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％；或者，可能地，主链中包含14个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％，或者，，以优选性不断递增的方式，包含13、12、11、10、9、8或7个残基的产物也是这种情况。
原料可以包含纤维素，并且当由LPMO或其他酶作用时，主链中包含7个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。或者，可能地，主链中包含8个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含壳多糖，并且当由LPMO或其他酶作用时，主链中包含11个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。或者，可能地，主链中包含12个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含壳多糖，并且当由LPMO或其他酶作用时，主链中仅具有3个或更少残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含混合键葡聚糖，并且当由地衣多糖酶或其他酶作用时，主链中包含6个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。或者，可能地，主链中包含7个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含木聚糖，优选葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖或阿拉伯葡糖醛酸木聚糖，更优选硬木葡糖醛酸木聚糖或软木阿拉伯葡糖醛酸木聚糖。
木聚糖可以包含阿拉伯葡糖醛酸木聚糖，优选软木阿拉伯葡糖醛酸木聚糖，并且当由木聚糖酶诸如GH30木聚糖酶或其他酶作用时，主链中包含9个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。或者，可能地，主链中包含10个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
木聚糖可以包含阿拉伯葡糖醛酸木聚糖，优选软木阿拉伯葡糖醛酸木聚糖，并且当由木聚糖酶诸如GH30木聚糖酶或其他酶作用时，主链中仅具有5个或更少残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含葡糖醛酸木聚糖，优选硬木葡糖醛酸木聚糖，并且当由木聚糖酶诸如GH30木聚糖酶或其他酶作用时，主链中包含31个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含硬木葡糖醛酸木聚糖，优选硬木葡糖醛酸木聚糖，并且当由木聚糖酶诸如GH30木聚糖酶或其他酶作用时，主链中仅具有4个或更少残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
原料可以包含木葡聚糖，并且当由XEG或其他酶作用时，主链中包含6个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。或者，可能地，主链中包含7个或更多个残基的产物的重量低于可成像多糖重量的约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，最优选小于约1％。
当用残基计数描述支化聚合物时，残基的数目仅指残基最长的链，并且不包括任何侧链。
在酶促反应进行到所需的点之后，可以以多种方式处理产物。由于反应混合物将通常包含可溶性和不溶性产物的混合物，还经常还残留至少一些原始原料，因此可以过滤反应混合物以去除不溶性物质并制备可溶性产物以用于进一步加工。
当在本文中使用并且未另外限制时，“可溶性”、“溶解度”和语法变体是指在水中的溶解度。
也可以以多种方式将所需寡糖从酶促反应混合物中分离出来。可以基于溶解度分离所需寡糖，从而仅提取可溶性糖类的组合物用于进一步处理，并且/或者通过色谱分离以产生具有较窄的寡糖链长带的组合物。例如，分离可以基于沉淀、尺寸排阻色谱法、离子交换色谱法或过滤，包括超滤和纳滤。在进行基于溶解度的分离的情况下，所分离的组合物中存在的糖类的分布将取决于原始的酶促反应，因为不同的多糖以不同的速率随着长度的增加而降低溶解度。
在本发明范围内还设想进一步处理所产生的寡糖以在掺入食品、化妆品或营养品之前产生进一步的产物。该进一步处理可以包括任何化学、物理或酶促步骤，诸如还原，适当时优选还原胺化；氧化、焦糖化、用Schiff碱修饰或者通过Maillard反应或通过此类步骤的任何组合进行修饰，并且可以提供具有为所需目的而改进的性能的不同产物。例如，可以改进焦糖化性质、热值、风味和颜色。
可以认为一个或多个酶促反应的产物是适于在该过程的任何阶段掺入食品、化妆品或营养品中的配料。例如，在满足所需的时限或其他完成条件后，反应混合物本身可以直接被视为配料，或者经过滤产物的固体或液体组分可以是配料，或者经分离的寡糖的组合物可以是配料，或者经受进一步处理的寡糖可以是配料。
如本文所用，“配料”是适于掺入食品、化妆品或营养品中的任何组合物，其可包括直接用作产物本身的组合物。
适于掺入食品、化妆品或营养品中的本发明配料可以直接用作食品、化妆品或营养品，或者可以将其与其他配料混合以形成食品、化妆品或营养品。还可以在掺入食品、化妆品或营养品之前或期间以某种物理或化学方法处理该配料。配料可以直接掺入产品，或者配料可以掺入例如面团、蛋糕预混料、巧克力预混料或其他食物前体；化妆品基础组合物；或营养品，并以可导致化学修饰、质地变化、颜色变化或其他修饰的方式进行可选的烹饪或其他处理。
一旦获得了适于所考虑应用的寡糖产物的组合物，并且任选地进行了进一步的处理和/或分离，从该组合物中衍生出的食品、化妆品或营养品就提供了非常广泛的潜在用途。本发明的配料可用于常规使用寡糖的应用中。本发明的配料在单糖和二糖有害且应考虑将被去除的应用中特别有用。
本发明包括包含本发明的配料或由本发明的配料生产的食品、化妆品或营养品。
例如，在食品产业中，通过当前方法生产的寡糖可用作甜味剂、填充剂、添加剂、膳食纤维或润湿剂。它们可以掺入蛋糕、面包或其他烘培食品，或者掺入巧克力或其他糖果，诸如太妃糖、软糖、蛋白酥饼或焦糖；或掺入饮料，例如用于提供良好的味道或颜色特征或增加膳食纤维含量。或者，它们可以掺入动物饲料，例如作为经分离的配料，或直接利用酶促反应混合物作为饲料。
特别值得注意的是用作甜味剂。由于单糖和二糖会导致牙齿疾病、热量过剩、肥胖和糖尿病以及潜在的行为问题，因此在某些应用中，食品制造商不希望在其产品中包含单糖和二糖。由于本发明的寡糖的生产方法基本上不产生单糖和二糖，因此可以将其用作甜味剂，从而使食品变甜而不造成单糖和二糖的有害影响。
在化妆品行业中，如果在制造的某些阶段没有去除单糖和二糖，则可能会导致腐败，而寡糖则可以用作配料，因为寡糖可以改善质地和保湿性、充当吸收UV的分子、保持凝胶或乳霜结构并且/或者用作填充剂。因此，本发明包括包含可通过本发明的方法获得的含寡糖配料的食品、化妆品或营养品。
当掺入营养品组合物中时本发明的寡糖是有用的，因为已经显示，在不会同时大量提供膳食糖的情况下，本发明的寡糖提供的膳食纤维促进消化系统的健康、肠道菌群的良好调节以及其他健康益处。在这种情况下，本发明的寡糖还可以用作益生菌饮料或其他益生素或益生菌制剂中的配料。
实施例
实施例1-用LPMO从纤维素中制备寡糖
1.通过将1g Avicel纤维素与3ml H2O制成浆液，然后添加30ml冰冷的磷酸并在0℃下孵育1h来制备磷酸溶胀纤维素(PASC)。然后，将纤维素用水洗涤数次，直至流出液具有中性pH，然后用于反应。
2.将Apo-PaLPMO9E(SEQ ID NO:1)在5℃下于0.9化学计量的Cu(II)(NO3)2中预孵育0.5-1h，然后紧接着进行酶反应。
3.将25μg PASC、30μg PaLPMO9E(预装载有铜)和500nmol抗坏酸盐于100μl 100mM乙酸铵(pH 6)中在50℃下孵育32小时，伴随间歇摇动。
4.对样品进行离心，并将上清液真空干燥。
5.用ANTS还原性地标记上清液，并通过PACE分析(根据Goubet等人，2002)。图1示出了所得凝胶。
实施例2-用地衣多糖酶从混合链葡聚糖中制备寡糖并将所述寡糖掺入蛋糕
1.将250g磨碎的燕麦粉在2L水中煮沸30min。
2.冷却后，添加2L冰冷的96％(v/v)乙醇，并将悬浮液在5℃下放置过夜。将悬浮液通过miracloth过滤直至干燥，重悬于50％(v/v)乙醇中，并再次通过miracloth过滤。
3.将剩余的物质在1L水中煮沸，并与2000U来自枯草芽孢杆菌的地衣多糖酶(SEQID NO：2，Megazyme)在30℃下孵育16h。
4.冷却后，添加2L水冷的96％(v/v)乙醇，并将悬浮液放置过夜。
5.通过离心收集上清液并真空干燥，产生5.2g混合键葡聚糖寡糖。用ANTS还原性地标记等分试样，并通过PACE分析。图2示出了所得凝胶。
6.在50g黄油和50g普通面粉中打一个中等大小的鸡蛋。
7.取3g混合物并与1g食糖混合。
8.取3g混合物并与1g混合键葡聚糖寡糖混合。
9.取4g混合物并且不与任何东西进一步混合。
10.将所有三种面糊混合物在预热的烤箱中的烤盘上在180℃下烘烤5min。
11.烘烤后，将蛋糕冷却、拍照并品尝。图3示出了照片。
12.没有添加食糖或寡糖的蛋糕无法将黄油保持在里面，而是在烘烤过程中泄漏出来。该蛋糕具有类似于馅饼糕点的光滑表面和柔软质地，并且具有可口的风味。
含食糖的蛋糕很好地保持黄油，并且具有蛋糕特有的更酥脆和松软的质地和表面。它的边缘也变得棕色和酥脆。它的味道很甜。
类似于含食糖蛋糕，含有混合键葡聚糖寡糖的蛋糕很好地保持黄油，并具有典型的蛋糕状质地和表面。像含食糖蛋糕一样，它的边缘也变得棕色和酥脆。它比不添加食糖或寡糖的蛋糕甜，但不如含食糖的蛋糕甜。
实施例3-用GH30木聚糖酶从木聚糖中制备寡糖
1.将云杉木片在食品搅拌机中悬浮混合，直至破碎成小颗粒，然后进行球磨。
2.将含有3.3mg球磨云杉木片和100mM乙酸铵(pH 6)的100μl反应混合物与(或不与)5μg热纤瘤胃梭菌GH30(来自NZYTech)在30℃下孵育16小时。
3.用ANTS还原性地标记反应产物，并通过PACE分析。图4示出了所得凝胶。
实施例4-用木葡聚糖酶从木葡聚糖中制备寡糖
1.将含有1％(w/v)罗望子木葡聚糖和100mM乙酸铵(pH 6)的100μl反应混合物与(或不与)0.1U来自类芽孢杆菌属种的木葡聚糖酶(GH5，CAS：76901-10-5)(Megazyme)在30℃下孵育16小时。
2.用ANTS还原性地标记反应产物，并通过PACE分析。图5示出了所得凝胶。
预示性的实施例5：用所公开的食品配料烘烤香蕉面包
制成10份的基础香蕉面包配方由一杯(US)(192g)食糖(即，用于饮料和谷物的颗粒状纯蔗糖，诸如Tate&Lyle提供的蔗糖)、113.5g黄油、三个熟香蕉、三个鸡蛋、两杯通用面粉、1茶匙小苏打和1/2茶匙盐组成。
将烤箱预热到190℃。用叉子将香蕉捣碎在碗中。在单独的碗中，将面粉、小苏打和盐混合。搅拌黄油和糖，直至混合并成糊状。添加捣碎的香蕉并充分混合，然后逐步加入经搅拌的鸡蛋，直至充分混合。然后，均匀面粉混合物。将混合物倒入涂油脂的烤面包罐中，烘烤45分钟，或直到插入的牙签拿出来是干净的为止。在冷却架上冷却基础面包。将面包切成10份。
香蕉面包A使用与基础香蕉面包相同的配方制备，不同的是用本发明公开的配料代替了30％的食糖，因此使用了134g蔗糖和58g本发明公开的配料。
香蕉面包B使用与基础香蕉面包相同的配方制备，不同的是用本发明公开的配料代替了50％的食糖，因此使用了96g蔗糖和96g本发明公开的配料。
香蕉面包C使用与基础香蕉面包相同的配方制备，不同的是用本发明公开的配料代替了100％的食糖，因此使用了0g蔗糖和192g本发明公开的配料。
结果
香蕉面包的营养价值见表1。这些营养价值是使用2018年4月的USDA国家营养数据库旧版参考标准(USDA National Nutrient Database for Standard Reference LegacyRelease)(https://ndb.nal.usda.gov/ndb/search/list？home＝true)，使用以下记录计算得出的：鸡蛋(NDB Id 01123)、蔗糖(NDB Id 45167812)、黄油(NDB Id 01145)、香蕉(NDBId 09040)、通用面粉(NDB Id45054364)、小苏打(NDB Id 18372)、食盐(NDB Id 02047)，并考虑制成10份的整个配方。
与基本面包相比，面包A的热量减少了8％，添加的食糖减少了30％，且总糖减少了24％。与基本面包相比，面包B的热量减少了12％，添加的食糖减少了50％，且总糖减少了39％。与基本面包相比，面包C的热量减少了25％，添加的食糖减少了100％，且总糖减少了79％。
表1：一份所述每种香蕉面包的营养价值。
Figure GDA0002790460360000201
参考文献
Goubet F,Jackson P,Deery MJ,Dupree P.Polysaccharide analysis usingcarbohydrate gel electrophoresis:a method to study plant cell wallpolysaccharides and polysaccharide hydrolases.Anal Biochem.2002,53-68
Simmons TJ,Uhrín D,Gregson T,Murray L,Sadler IH,Fry SC.An unexpectedlylichenase-stable hexasaccharide from cereal,horsetail and lichen mixed-linkageβ-glucans(MLGs):Implications for MLG subunit distributionPhytochemistry.2013,322-332
酶序列
LPMO
来自鹅柄孢壳菌的AA9 LPMO(SEQ ID NO:1)。
基因库ID CAP67740
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地衣多糖酶
来自枯草芽孢杆菌枯草亚种菌株168的GH16地衣多糖酶(SEQ ID NO:2)。
基因库ID CAA86922.1
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241 kk
木聚糖酶
来自热纤瘤胃梭菌的GH5阿拉伯木聚糖酶(SEQ ID NO:3)。
基因库ID ABN53395.1
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来自层出节水霉的GH5木聚糖酶(SEQ ID NO:4)。
基因库ID KXS18720.1
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来自Dickeya chrysanthemi的GH30木聚糖酶(SEQ ID NO:5)。
GenBank ID AAB53151.1
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来自枯草芽孢杆菌枯草亚种菌株168的GH30木聚糖酶(SEQ ID NO:6)。
基因库ID CAA97612.1
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来自卵形拟杆菌的GH30木聚糖酶(SEQ ID NO:7)。
基因库ID SDY64378.1
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木葡聚糖酶
来自卵形拟杆菌的GH5木葡聚糖酶(SEQ ID NO:8)。
基因库ID ALJ47680.1
1 mekqsfsdgl fsplgikrvi fmlvllttsf iscsnsdekg gslevaqeyr nlefdargsr
61 qtiqidgpae whistseswc ksshtigegk qyvnitvean dtqkertatv tvsasgapdi
121 iinvkqslys vpaydeyiap dntgmrdlts mqlsalmkag vnvgntfeav ivgndgslsg
181 detcwgnptp nkvlfegika agfdvvripv ayshqfedaa tykiksawmd kveaavkaal
241 daglyviini hweggwlnhp vdankealde rleamwkqia lrfrdyddrl lfagtnevnn
301 ddangaqpte enyrvqngfn qvfvntvrat ggrnhyrhli vqayntdvak avahftmpld
361 ivqnriflec hyydpydfti mpndenfksq wgaafaggdv satgqegdie atlsslnvfi
421 nnnvpviige ygptlrdqlt gealenhlks rndyieyvvk tcvknklvpl ywdagytekl
481 fdrttgqphn aasiaaimkg ln
来自游海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas haloplanktis)的GH8木聚糖酶(SEQ IDNO:9)
PDB:2A8Z_A
1 afnnnpssvg ayssgtyrnl aqemgktniq qkvnstfdnm fgynntqqly ypytengvyk
61 ahyikainpd egddirtegq swgmtaavml nkqeefdnlw rfakayqknp dnhpdakkqg
121 vyawklklnq ngfvykvdeg papageeyfa fallnasarw gnsgefnyyn daitmlntik
181 nklmenqiir fspyidnltd psyhipafyd yfannvtnqa dknywrqvat ksrtllknhf
241 tkvsgsphwn lptflsrldg spvigyifng qanpgqwyef dawrvimnvg ldahlmgaqa
301 whksavnkal gflsyaktnn skncyeqvys yggaqnrgca gegqkaanav allastnagq
361 aneffnefws lsqptgdyry yngslymlam lhvsgnfkfy nntfn
来自欧文湖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor owensensis)的GH10木聚糖酶(SEQID NO:10)
基因库:ADQ03732.1
1 mseyqdktip slaekykeyf kigaavtvkd legvhgeilv khfnsltpen dmkferihpd
61 ehrynfdavd kmkefaiknn mkmrghtfvw hnqtpewvfk dregndvsre llierlrehi
121 ktvcdryrdi vyawdvvnea vedktekllr dsnwrriigd dyikiafeia keyagegklf
181 yndynnempy klektykllk elidketpid gigiqahwni wdknlidnlk raiemyaslg
241 leiqiteldm svfefedrrt dllepaeemm elqakvyedv fkvfreykgv itsvtfwgis
301 dkhtwkdnfp vigrkdwpll fdvngkpkea ffrivnf
来自耐盐喜热裂孢菌(Thermobifida halotolerans)的GH11木聚糖酶(SEQ ID NO:11)
基因库:AEH04392.1
1 mndapahpks rrhgrirlfv grvctalval vtattmlpgv anaavtsnqt gthdgyfysf
61 wtdspgtvsm elgpggnyst swsntgnfvv gkgwstggrr tvtysgsfnp sgnayltlyg
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241 pggnpggggc tatlsagqqw sdrynlgvsv sgssnwtvtm nvpspakiia twnisasypn
301 aqtltarpng ngnnwgvtiq hngnwtwptv scsan。
序列表
<110> 剑桥糖质科学有限公司
<120> 生产方法
<130> JWJ02395WO
<160> 11
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 293
<212> PRT
<213> 鹅柄孢壳菌
<400> 1
Met Lys Gly Leu Leu Ser Val Ala Ala Leu Ser Leu Ala Val Ser Glu
1 5 10 15
Val Ser Ala His Tyr Ile Phe Gln Gln Leu Ser Thr Gly Ser Thr Lys
20 25 30
His Gly Val Phe Gln Tyr Ile Arg Gln Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Pro
35 40 45
Val Thr Asp Leu Ser Ser Asn Asp Leu Arg Cys Asn Glu Gly Gly Ala
50 55 60
Ser Gly Ala Asn Thr Gln Thr Val Thr Val Arg Ala Gly Asp Ser Phe
65 70 75 80
Thr Phe His Leu Asp Thr Pro Val Tyr His Gln Gly Pro Val Ser Val
85 90 95
Tyr Leu Ser Lys Ala Pro Gly Ser Ala Ser Ser Tyr Asp Gly Ser Gly
100 105 110
Thr Trp Phe Lys Ile Lys Asp Trp Gly Pro Thr Phe Pro Gly Gly Gln
115 120 125
Trp Thr Leu Ala Gly Ser Tyr Thr Ala Gln Leu Pro Ser Cys Ile Thr
130 135 140
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145 150 155 160
Tyr Pro Ala Gly Thr Pro Gln Phe Tyr Ile Ser Cys Ala Gln Ile Lys
165 170 175
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Thr Leu Val Thr Ser Thr Arg Ala Pro Val Ala Thr Gln Pro Ala Gly
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260 265 270
Cys Thr Thr Cys Ala Ala Gly Ser Thr Cys Asn Thr Gln Asn Ala Tyr
275 280 285
Tyr His Gln Cys Val
290
<210> 2
<211> 242
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 2
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1 5 10 15
Met Ser Leu Phe Ala Val Thr Ala Thr Ala Ser Ala Gln Thr Gly Gly
20 25 30
Ser Phe Phe Asp Pro Phe Asn Gly Tyr Asn Ser Gly Phe Trp Gln Lys
35 40 45
Ala Asp Gly Tyr Ser Asn Gly Asn Met Phe Asn Cys Thr Trp Arg Ala
50 55 60
Asn Asn Val Ser Met Thr Ser Leu Gly Glu Met Arg Leu Ala Leu Thr
65 70 75 80
Ser Pro Ala Tyr Asn Lys Phe Asp Cys Gly Glu Asn Arg Ser Val Gln
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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Ile Val Asp Leu Gly Phe Asp Ala Ala Asn Ala Tyr His Thr Tyr Ala
165 170 175
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Lys His Thr Ala Thr Asn Gln Ile Pro Thr Thr Pro Gly Lys Ile Met
195 200 205
Met Asn Leu Trp Asn Gly Thr Gly Val Asp Glu Trp Leu Gly Ser Tyr
210 215 220
Asn Gly Val Asn Pro Leu Tyr Ala His Tyr Asp Trp Val Arg Tyr Thr
225 230 235 240
Lys Lys
<210> 3
<211> 948
<212> PRT
<213> 热纤瘤胃梭菌
<400> 3
Met Gly Ala Ser Ile Lys Thr Ser Ile Lys Ile Arg Thr Val Ala Phe
1 5 10 15
Val Ser Ile Ile Ala Ile Ala Leu Ser Ile Leu Ser Phe Ile Pro Asn
20 25 30
Arg Ala Tyr Ala Ser Pro Gln Arg Gly Arg Pro Arg Leu Asn Ala Ala
35 40 45
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50 55 60
Thr Ser Thr Glu Trp Thr Ala Ala Ala Pro Tyr Asp Gln Ile Ala Arg
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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180 185 190
Glu Ile Asp Val Tyr Arg Ile Ile Arg Thr Tyr Ala Pro Glu Thr Pro
195 200 205
Val Leu Leu Phe Ser Tyr Ala Val Phe Gly Gly Lys Gly Gly Ala Ala
210 215 220
Glu Ala Leu Lys Asp Ile Arg Ala Phe Asn Lys Ala Val Phe Gly Asn
225 230 235 240
Glu Asn Ala Val Trp Thr Asn Glu Ala Val Ala Phe His Gly Tyr Ala
245 250 255
Gly Trp Gln Glu Thr Thr Ile Ala Val Glu Glu Leu Leu Lys Ala Gly
260 265 270
Tyr Pro Cys Phe Met Thr Glu Tyr Ala Gly Gly Ala Trp Gly Ser Gly
275 280 285
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290 295 300
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325 330 335
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340 345 350
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435 440 445
Val Ala Gly Ile Ser Gly Ser Arg Val Gln Val Ser Phe Gly Asn Gln
450 455 460
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465 470 475 480
Trp Thr Thr Ala Thr Arg Gln Val Phe Leu Gly Ala Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Leu Arg Ile Asn Ala Leu Ser Gly Gly Phe Asn Leu Asn Trp Ile Glu
500 505 510
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515 520 525
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545 550 555 560
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565 570 575
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Leu Asp Phe Gly Glu Gly Val Arg Asn Val Ile Thr Gln Ile Lys Phe
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Cys Pro Arg Ser Gly Tyr Glu Gln Arg Met Ile Gly Gly Ile Phe Gln
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Gly Ala Asn Lys Glu Asp Phe Ser Asp Ala Val Thr Leu Phe Thr Ile
820 825 830
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<212> PRT
<213> 层出节水霉
<400> 4
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1 5 10 15
Val Ser Ala Pro Ala Leu Ala Ala Arg Gly Arg Pro Arg Leu Asn Gly
20 25 30
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35 40 45
Ser Thr Glu Trp Thr Pro Ala Val Pro Ala Ala Asn Ile Ala Asn Met
50 55 60
Arg Asn Tyr Asn Phe Asn Ala Ile His Leu Tyr Ala Glu Thr Phe Asp
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85 90 95
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100 105 110
Val Ile Val Leu Ala Asn Gly Ala Asn Asn Gly Lys Phe Asn Leu Asn
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Tyr Ala Lys Asp Phe Trp Ser Phe Tyr Ala Ala Arg Tyr Lys Asn Glu
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Pro Tyr Ile Ser Ser Thr Gln Ser Pro Gly Ala Val Ser Met Asn Ala
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Asp Cys Tyr Lys Ile Ile Arg Ala Val Ala Pro Asp Thr Pro Val Leu
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Leu Phe Thr Tyr Ala Ser Ile Gly Gly Gly Ser Ser Ala Ala Gly Ala
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Ala Gln Trp Thr Asn Glu Ala Ile Ala Ile His Gly Tyr Trp Gly Ala
225 230 235 240
Gln Gly Ala Ser Asp Ala Ala Lys Ala Leu Asn Ala Ala Gly Phe Ser
245 250 255
Val Val Leu Thr Glu Phe Ala Ala Ala Thr Ser Pro Thr Ser Pro Asn
260 265 270
Gly Gly Gln Asp Thr Val Leu Thr Gly Phe Met Glu Gln Gln Gly Val
275 280 285
Ser Trp Leu Thr Phe Leu His Val Pro Pro Thr Gly Val Ser Gly Asp
290 295 300
Val Thr Asp Pro Asn Gln Tyr Thr Asn Arg Met Thr Ala Ala Gly Ile
305 310 315 320
Gly Phe Asp Arg Asp Pro Gly Leu Asn Ala Val Gly Gly Gly Gln Ala
325 330 335
Ala Pro Val Pro Val Pro Ala Pro Ala Pro Val Pro Ser Pro Val Pro
340 345 350
Ala Pro Val Pro Ala Val Pro Ala Val Arg Thr Thr Thr Ala Arg Pro
355 360 365
Ala Pro Ser Pro Ser Pro Val Pro Ala Pro Val Pro Ala Pro Ala Pro
370 375 380
Val Pro Ala Pro Val Pro Ala Pro Val Pro Ala Pro Val Pro Ala Pro
385 390 395 400
Val Pro Ala Pro Val Pro Ala Ser Pro Ala Ala Thr Thr Thr Arg Arg
405 410 415
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<210> 5
<211> 413
<212> PRT
<213> Dickeya chrysanthemi
<400> 5
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Leu Phe Val Ser Ala Thr Ala Gly Ser Phe Ser Val Tyr Ala Asp Thr
20 25 30
Val Lys Ile Asp Ala Asn Val Asn Tyr Gln Ile Ile Gln Gly Phe Gly
35 40 45
Gly Met Ser Gly Val Gly Trp Ile Asn Asp Leu Thr Thr Glu Gln Ile
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Arg Val Arg Ile Asp Pro Asp Ser Ser Lys Trp Asn Ile Gln Leu Pro
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Ser Ala Arg Gln Ala Val Ser Leu Gly Ala Lys Ile Met Ala Thr Pro
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Gly Arg Leu Leu Pro Ala Asn Tyr Ser Ala Tyr Thr Ser His Leu Leu
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Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Trp Lys Pro Asp Tyr Glu Ser Cys Glu
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Trp Ser Gly Asp Glu Phe Lys Ser Tyr Leu Lys Ser Gln Gly Ser Lys
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Phe Gly Ser Leu Lys Val Ile Val Ala Glu Ser Leu Gly Phe Asn Pro
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Ala Leu Thr Asp Pro Val Leu Lys Asp Ser Asp Ala Ser Lys Tyr Val
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Ser Ile Ile Gly Gly His Leu Tyr Gly Thr Thr Pro Lys Pro Tyr Pro
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Leu Ala Gln Asn Ala Gly Lys Gln Leu Trp Met Thr Glu His Tyr Val
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Gly Ala Leu Arg Ile Gln Ala Thr Glu Asn Pro Gln Ser Asn Val His
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Asn Val Thr Lys Phe Glu Lys Tyr Ser Thr Ser Ala Ser Leu Asn Val
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<210> 6
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<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
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Thr Met Leu Ser Val Met Leu Gly Pro Gly Ala Thr Glu Val Leu Ala
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Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn
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<210> 7
<211> 547
<212> PRT
<213> 卵形拟杆菌
<400> 7
Met Lys Asn Ile Thr Leu Leu Phe Cys Leu Phe Leu Ala Asn Ile Leu
1 5 10 15
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Gly Ala Gly Gly Leu Gly Tyr Ser Ile Leu Arg Leu Met Ile Tyr Pro
180 185 190
Asn Glu Ser Asp Trp Ser Ala Asp Val Glu Ala Ala Lys Ala Ala Gln
195 200 205
Ala Asn Gly Ala Ile Ile Phe Ala Cys Pro Trp Asp Cys Thr Asp Ala
210 215 220
Leu Ala Asp Lys Ile Thr Val Asn Gly Lys Glu Met Lys His Leu Lys
225 230 235 240
Lys Glu Asn Tyr Glu Ala Tyr Ala Asn His Leu Ile Arg Tyr Val Thr
245 250 255
Phe Met Lys Glu Lys Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn
260 265 270
Glu Pro Asp Met Glu Phe Thr Tyr Trp Thr Pro Ser Glu Val Val Asp
275 280 285
Phe Val Lys Gln Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Val Lys Leu
290 295 300
Met Ser Pro Glu Ala Cys Gly Met Gln Pro Glu Tyr Thr Asp Pro Ile
305 310 315 320
Ile Asn Asn Ala Glu Ala Phe Ala Gln Thr Asp Ile Leu Ala Gly His
325 330 335
Leu Tyr Gln Gly Phe Thr Asp Leu Ser Ser Gly Tyr Val Lys Asn Arg
340 345 350
His Asp Tyr Ile Cys Gly Val Tyr Ser Arg Ile Gln Gly Lys Thr Trp
355 360 365
Trp Met Thr Glu His Leu Phe Asn Asp Gly Glu Asn Ser Asp Asp Ser
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Ser Pro Thr Ser Glu Gly Glu Ile Thr Lys Asn Gly Tyr Ile Met Ala
435 440 445
His Tyr Ala Gln Tyr Ala Thr Glu Thr Thr Arg Ile Lys Val Val Thr
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515 520 525
Glu Gly Ile Thr Val Leu Leu Ser Ala Asn Ser Ile Thr Ser Val Arg
530 535 540
Leu Thr Phe
545
<210> 8
<211> 502
<212> PRT
<213> 卵形拟杆菌
<400> 8
Met Glu Lys Gln Ser Phe Ser Asp Gly Leu Phe Ser Pro Leu Gly Ile
1 5 10 15
Lys Arg Val Ile Phe Met Leu Val Leu Leu Thr Thr Ser Phe Ile Ser
20 25 30
Cys Ser Asn Ser Asp Glu Lys Gly Gly Ser Leu Glu Val Ala Gln Glu
35 40 45
Tyr Arg Asn Leu Glu Phe Asp Ala Arg Gly Ser Arg Gln Thr Ile Gln
50 55 60
Ile Asp Gly Pro Ala Glu Trp His Ile Ser Thr Ser Glu Ser Trp Cys
65 70 75 80
Lys Ser Ser His Thr Ile Gly Glu Gly Lys Gln Tyr Val Asn Ile Thr
85 90 95
Val Glu Ala Asn Asp Thr Gln Lys Glu Arg Thr Ala Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ala Ser Gly Ala Pro Asp Ile Ile Ile Asn Val Lys Gln Ser Leu
115 120 125
Tyr Ser Val Pro Ala Tyr Asp Glu Tyr Ile Ala Pro Asp Asn Thr Gly
130 135 140
Met Arg Asp Leu Thr Ser Met Gln Leu Ser Ala Leu Met Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Asn Val Gly Asn Thr Phe Glu Ala Val Ile Val Gly Asn Asp Gly
165 170 175
Ser Leu Ser Gly Asp Glu Thr Cys Trp Gly Asn Pro Thr Pro Asn Lys
180 185 190
Val Leu Phe Glu Gly Ile Lys Ala Ala Gly Phe Asp Val Val Arg Ile
195 200 205
Pro Val Ala Tyr Ser His Gln Phe Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Lys Ile
210 215 220
Lys Ser Ala Trp Met Asp Lys Val Glu Ala Ala Val Lys Ala Ala Leu
225 230 235 240
Asp Ala Gly Leu Tyr Val Ile Ile Asn Ile His Trp Glu Gly Gly Trp
245 250 255
Leu Asn His Pro Val Asp Ala Asn Lys Glu Ala Leu Asp Glu Arg Leu
260 265 270
Glu Ala Met Trp Lys Gln Ile Ala Leu Arg Phe Arg Asp Tyr Asp Asp
275 280 285
Arg Leu Leu Phe Ala Gly Thr Asn Glu Val Asn Asn Asp Asp Ala Asn
290 295 300
Gly Ala Gln Pro Thr Glu Glu Asn Tyr Arg Val Gln Asn Gly Phe Asn
305 310 315 320
Gln Val Phe Val Asn Thr Val Arg Ala Thr Gly Gly Arg Asn His Tyr
325 330 335
Arg His Leu Ile Val Gln Ala Tyr Asn Thr Asp Val Ala Lys Ala Val
340 345 350
Ala His Phe Thr Met Pro Leu Asp Ile Val Gln Asn Arg Ile Phe Leu
355 360 365
Glu Cys His Tyr Tyr Asp Pro Tyr Asp Phe Thr Ile Met Pro Asn Asp
370 375 380
Glu Asn Phe Lys Ser Gln Trp Gly Ala Ala Phe Ala Gly Gly Asp Val
385 390 395 400
Ser Ala Thr Gly Gln Glu Gly Asp Ile Glu Ala Thr Leu Ser Ser Leu
405 410 415
Asn Val Phe Ile Asn Asn Asn Val Pro Val Ile Ile Gly Glu Tyr Gly
420 425 430
Pro Thr Leu Arg Asp Gln Leu Thr Gly Glu Ala Leu Glu Asn His Leu
435 440 445
Lys Ser Arg Asn Asp Tyr Ile Glu Tyr Val Val Lys Thr Cys Val Lys
450 455 460
Asn Lys Leu Val Pro Leu Tyr Trp Asp Ala Gly Tyr Thr Glu Lys Leu
465 470 475 480
Phe Asp Arg Thr Thr Gly Gln Pro His Asn Ala Ala Ser Ile Ala Ala
485 490 495
Ile Met Lys Gly Leu Asn
500
<210> 9
<211> 405
<212> PRT
<213> 游海假交替单胞菌
<400> 9
Ala Phe Asn Asn Asn Pro Ser Ser Val Gly Ala Tyr Ser Ser Gly Thr
1 5 10 15
Tyr Arg Asn Leu Ala Gln Glu Met Gly Lys Thr Asn Ile Gln Gln Lys
20 25 30
Val Asn Ser Thr Phe Asp Asn Met Phe Gly Tyr Asn Asn Thr Gln Gln
35 40 45
Leu Tyr Tyr Pro Tyr Thr Glu Asn Gly Val Tyr Lys Ala His Tyr Ile
50 55 60
Lys Ala Ile Asn Pro Asp Glu Gly Asp Asp Ile Arg Thr Glu Gly Gln
65 70 75 80
Ser Trp Gly Met Thr Ala Ala Val Met Leu Asn Lys Gln Glu Glu Phe
85 90 95
Asp Asn Leu Trp Arg Phe Ala Lys Ala Tyr Gln Lys Asn Pro Asp Asn
100 105 110
His Pro Asp Ala Lys Lys Gln Gly Val Tyr Ala Trp Lys Leu Lys Leu
115 120 125
Asn Gln Asn Gly Phe Val Tyr Lys Val Asp Glu Gly Pro Ala Pro Ala
130 135 140
Gly Glu Glu Tyr Phe Ala Phe Ala Leu Leu Asn Ala Ser Ala Arg Trp
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gly Glu Phe Asn Tyr Tyr Asn Asp Ala Ile Thr Met Leu
165 170 175
Asn Thr Ile Lys Asn Lys Leu Met Glu Asn Gln Ile Ile Arg Phe Ser
180 185 190
Pro Tyr Ile Asp Asn Leu Thr Asp Pro Ser Tyr His Ile Pro Ala Phe
195 200 205
Tyr Asp Tyr Phe Ala Asn Asn Val Thr Asn Gln Ala Asp Lys Asn Tyr
210 215 220
Trp Arg Gln Val Ala Thr Lys Ser Arg Thr Leu Leu Lys Asn His Phe
225 230 235 240
Thr Lys Val Ser Gly Ser Pro His Trp Asn Leu Pro Thr Phe Leu Ser
245 250 255
Arg Leu Asp Gly Ser Pro Val Ile Gly Tyr Ile Phe Asn Gly Gln Ala
260 265 270
Asn Pro Gly Gln Trp Tyr Glu Phe Asp Ala Trp Arg Val Ile Met Asn
275 280 285
Val Gly Leu Asp Ala His Leu Met Gly Ala Gln Ala Trp His Lys Ser
290 295 300
Ala Val Asn Lys Ala Leu Gly Phe Leu Ser Tyr Ala Lys Thr Asn Asn
305 310 315 320
Ser Lys Asn Cys Tyr Glu Gln Val Tyr Ser Tyr Gly Gly Ala Gln Asn
325 330 335
Arg Gly Cys Ala Gly Glu Gly Gln Lys Ala Ala Asn Ala Val Ala Leu
340 345 350
Leu Ala Ser Thr Asn Ala Gly Gln Ala Asn Glu Phe Phe Asn Glu Phe
355 360 365
Trp Ser Leu Ser Gln Pro Thr Gly Asp Tyr Arg Tyr Tyr Asn Gly Ser
370 375 380
Leu Tyr Met Leu Ala Met Leu His Val Ser Gly Asn Phe Lys Phe Tyr
385 390 395 400
Asn Asn Thr Phe Asn
405
<210> 10
<211> 337
<212> PRT
<213> 欧文湖热解纤维素菌
<400> 10
Met Ser Glu Tyr Gln Asp Lys Thr Ile Pro Ser Leu Ala Glu Lys Tyr
1 5 10 15
Lys Glu Tyr Phe Lys Ile Gly Ala Ala Val Thr Val Lys Asp Leu Glu
20 25 30
Gly Val His Gly Glu Ile Leu Val Lys His Phe Asn Ser Leu Thr Pro
35 40 45
Glu Asn Asp Met Lys Phe Glu Arg Ile His Pro Asp Glu His Arg Tyr
50 55 60
Asn Phe Asp Ala Val Asp Lys Met Lys Glu Phe Ala Ile Lys Asn Asn
65 70 75 80
Met Lys Met Arg Gly His Thr Phe Val Trp His Asn Gln Thr Pro Glu
85 90 95
Trp Val Phe Lys Asp Arg Glu Gly Asn Asp Val Ser Arg Glu Leu Leu
100 105 110
Ile Glu Arg Leu Arg Glu His Ile Lys Thr Val Cys Asp Arg Tyr Arg
115 120 125
Asp Ile Val Tyr Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ala Val Glu Asp Lys
130 135 140
Thr Glu Lys Leu Leu Arg Asp Ser Asn Trp Arg Arg Ile Ile Gly Asp
145 150 155 160
Asp Tyr Ile Lys Ile Ala Phe Glu Ile Ala Lys Glu Tyr Ala Gly Glu
165 170 175
Gly Lys Leu Phe Tyr Asn Asp Tyr Asn Asn Glu Met Pro Tyr Lys Leu
180 185 190
Glu Lys Thr Tyr Lys Leu Leu Lys Glu Leu Ile Asp Lys Glu Thr Pro
195 200 205
Ile Asp Gly Ile Gly Ile Gln Ala His Trp Asn Ile Trp Asp Lys Asn
210 215 220
Leu Ile Asp Asn Leu Lys Arg Ala Ile Glu Met Tyr Ala Ser Leu Gly
225 230 235 240
Leu Glu Ile Gln Ile Thr Glu Leu Asp Met Ser Val Phe Glu Phe Glu
245 250 255
Asp Arg Arg Thr Asp Leu Leu Glu Pro Ala Glu Glu Met Met Glu Leu
260 265 270
Gln Ala Lys Val Tyr Glu Asp Val Phe Lys Val Phe Arg Glu Tyr Lys
275 280 285
Gly Val Ile Thr Ser Val Thr Phe Trp Gly Ile Ser Asp Lys His Thr
290 295 300
Trp Lys Asp Asn Phe Pro Val Ile Gly Arg Lys Asp Trp Pro Leu Leu
305 310 315 320
Phe Asp Val Asn Gly Lys Pro Lys Glu Ala Phe Phe Arg Ile Val Asn
325 330 335
Phe
<210> 11
<211> 335
<212> PRT
<213> 耐盐喜热裂孢菌
<400> 11
Met Asn Asp Ala Pro Ala His Pro Lys Ser Arg Arg His Gly Arg Ile
1 5 10 15
Arg Leu Phe Val Gly Arg Val Cys Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Thr
20 25 30
Ala Thr Thr Met Leu Pro Gly Val Ala Asn Ala Ala Val Thr Ser Asn
35 40 45
Gln Thr Gly Thr His Asp Gly Tyr Phe Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Ser
50 55 60
Pro Gly Thr Val Ser Met Glu Leu Gly Pro Gly Gly Asn Tyr Ser Thr
65 70 75 80
Ser Trp Ser Asn Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Ser Thr
85 90 95
Gly Gly Arg Arg Thr Val Thr Tyr Ser Gly Ser Phe Asn Pro Ser Gly
100 105 110
Asn Ala Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Pro Leu Val Glu
115 120 125
Tyr Tyr Ile Val Asp Asn Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr
130 135 140
Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Glu Thr
145 150 155 160
Thr Arg Thr Asn Ala Pro Ser Ile Glu Gly Thr Ala Thr Phe Lys Gln
165 170 175
Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Arg Arg Thr Gly Gly Thr Ile Thr Ala
180 185 190
Gly Asn His Phe Asp Ala Trp Ala Arg His Gly Met Asn Leu Gly Ser
195 200 205
His Asp Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser
210 215 220
Ser Asn Ile Thr Val Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn Pro Gly Gly Asn
225 230 235 240
Pro Gly Gly Asn Pro Gly Gly Gly Gly Cys Thr Ala Thr Leu Ser Ala
245 250 255
Gly Gln Gln Trp Ser Asp Arg Tyr Asn Leu Gly Val Ser Val Ser Gly
260 265 270
Ser Ser Asn Trp Thr Val Thr Met Asn Val Pro Ser Pro Ala Lys Ile
275 280 285
Ile Ala Thr Trp Asn Ile Ser Ala Ser Tyr Pro Asn Ala Gln Thr Leu
290 295 300
Thr Ala Arg Pro Asn Gly Asn Gly Asn Asn Trp Gly Val Thr Ile Gln
305 310 315 320
His Asn Gly Asn Trp Thr Trp Pro Thr Val Ser Cys Ser Ala Asn
325 330 335

Claims (23)

1.一种用于生产适于掺入食品、化妆品或营养品中的配料的方法，所述配料包含一种或多种寡糖，其中所述寡糖在酶促反应中产生，所述酶促反应包括在溶液或悬浮液中使多糖裂解酶与含多糖原料接触的步骤，其中所述酶促反应基本上不产生单糖和二糖。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述多糖裂解酶是木聚糖酶，优选GH5、GH8、GH10、GH11或GH30木聚糖酶。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述多糖裂解酶是甘露聚糖酶。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述含多糖原料包含木聚糖，并且所述多糖裂解酶是GH5、GH8、GH10、GH11和/或GH30木聚糖酶，优选地，其中所述含多糖原料包含葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖和/或葡糖醛酸阿拉伯木聚糖。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述含多糖原料包含纤维素、壳多糖和/或壳聚糖，所述多糖裂解酶是多糖裂解单加氧酶(LPMO)，并且所述酶促反应在一种或多种合适的还原剂的存在下进行，优选地，其中所述LPMO选自AA9、AA10、AA11、AA13、AA14和AA15。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述一种或多种合适的还原剂选自抗坏血酸、没食子酸、半胱氨酸、NADH、NADPH、焦性没食子酸、二硫苏糖醇、氰基硼氢化物、硼氢化物、光合色素、木质素、木质素醇以及纤维二糖和纤维二糖脱氢酶的组合。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中在所述酶促反应中产生的所述寡糖包含β-葡聚糖，优选β-1,4-葡聚糖。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述含多糖原料包含混合键葡聚糖，并且所述多糖裂解酶是地衣多糖酶，优选地，其中所述地衣多糖酶选自GH16家族，并且/或者优选地，其中在所述酶促反应中产生的所述寡糖包含β-葡聚糖。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述含多糖原料包含木葡聚糖，并且所述多糖裂解酶是木葡聚糖酶，优选木葡聚糖内切葡聚糖酶(XEG)。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述含多糖原料包含生物质，优选地，其中所述方法还包括在进行所述酶促反应之前的通过酸、碱、热或酶处理对所述生物质进行预处理的一个或多个步骤。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述酶促反应中产生的可成像糖类的按重量计小于约60％，优选小于约50％，优选小于约40％，更优选小于约30％，甚至更优选小于约20％，甚至更优选小于约15％，又更优选小于约10％，还更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，又更优选小于约1％为单糖或二糖；并且/或者其中在所述酶促反应中产生的可成像糖类的按重量计小于约15％，优选小于约10％，更优选小于约5％，甚至更优选小于约2％，又更优选小于约1％包含十六个或更多残基，更优选十个或更多残基，又更优选七个或更多残基。
12.如前述权利要求中任一项所述的方法，还包括产生一种或多种二糖的第二酶促反应，所述第二酶促反应包括使第二多糖裂解酶与一种或多种含多糖原料接触。
13.如权利要求12所述的方法，其中二糖的量小于所述酶促反应产生的可成像糖类的约50％。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述酶促反应产生一种或多种单糖，所述一种或多种单糖的量小于所述酶促反应产生的可成像糖类的约25％。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多糖裂解酶由所述酶促反应中存在的一种或多种微生物产生。
16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多糖裂解酶可操作地连接至催化或非催化模块，优选地，其中所述多糖裂解酶可操作地连接至非催化模块并且所述非催化模块是碳水化合物结合模块。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，还包括将所述寡糖从所述酶促反应中分离的步骤，优选地，其中将可溶性寡糖从不溶性寡糖和多糖中分离。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述酶促反应之后进行以下步骤：使所述寡糖经受化学、物理或酶处理，诸如还原、氧化、焦糖化或Maillard反应。
19.一种用于掺入食品、化妆品或营养品中的配料，所述配料包含β-1,4-葡聚糖寡糖，其中一个或多个末端糖残基被氧化为内酯、4-酮醛糖、醛糖酸或偕二醇，并且其中所述配料基本上不包含单糖和二糖。
20.一种用于掺入食品、化妆品或营养品中的配料，所述配料可通过权利要求1至18中任一项所述的方法获得。
21.一种用于掺入食品、化妆品或营养品中的配料，所述配料包含β-1,4-葡聚糖寡糖和另一种寡糖，所述配料可通过权利要求1至18中任一项所述的方法获得。
22.如权利要求21所述的配料，其中所述配料包含二糖，所述二糖的量小于所述酶促反应产生的可成像糖类的约40％。
23.如权利要求21或22所述的配料，其中所述配料包含单糖，所述单糖的量小于所述酶促反应产生的可成像糖类的约25％。
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