CN112051353A - 一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法。其特征在于：用甲醇超声的上清液，作为对照药材与供试品溶液，采用同一供试品溶液，以4种不同极性展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了前胡药材的约58种信息斑点，各斑点相互交叉，但在各自检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、溶剂4ml、展开剂40ml、时间1.5小时。方法简便、快捷、成本低、效率高，各斑点的颜色、荧光多样直观，易于质量监督评价。信息量大，几块薄层板，数十毫升展开剂，可发挥指纹图谱的质控效果。彰显了其创新性、实用性以及显著的有益效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法。即，按脂溶性、中极性和水溶性的梯度顺序，以薄层鉴别的形式，检视到前胡药材中从脂溶性到水溶性约58个信息成分斑点。
背景技术
所谓的中药材梯度全信息薄层鉴别，顾名思义就是将高效液相梯度洗脱的内涵，引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解定律，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中具有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能全的信息斑点图谱，由此组成一套从脂溶性到水溶性成分的全信息薄层色谱图和鉴别方法，提供前胡药材进行整体质量监督；以及多种工艺制备的复方制剂，作为质量评价参考图谱与方法。
所谓的全信息系指在脂溶性成分的检测部分，其薄层板的最前沿，已基本无信息斑点呈现，而在水溶性成分的检测部分，在薄层板的基线处，也不再有明显的斑点残痕，说明所有的信息斑点都已经包括在梯度的薄层展开范围内，再配合多种检视条件，使能检视到的信息斑点，在不同的展开剂与检视条件下全部都呈现出来，获取到从脂溶性到水溶性全信息量。
中药前胡为伞形科植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的干燥根，为中国药典历版所收载品种。具有降气化痰，散风清热之功效。用于痰热喘满，咯痰黄稠，风热咳嗽痰多。是一种临床上常用的中药材。其主要化学成分是香豆素类，以角型二氢吡喃香豆素为主，如白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡丙素、白花前胡丁素、白花前胡E素等，无机元素类，挥发油类，丹参酮类和一些苷类化合物。这些成分从结构分析，既有脂溶性的，又有中极性的，还有水溶性的。但其薄层鉴别中国药典2015年版一部，是以白花前胡甲素和白花前胡乙素为对照，以三氯甲烷提取、提取液蒸干、甲醇定容的供试品溶液，以石油醚和乙酸乙酯(3∶1)为展开剂，检测的脂溶性成分。也有文献报道【1】是采用乙醚提取，提取液蒸干，乙酸乙酯定容，作为供试品溶液，以同法制备的对照药材为对照，以苯和乙酸乙酯 (3∶2)为展开剂，检测的也是脂溶性成分。目前还未查阅到以不同极性的展开剂，鉴别前胡的脂溶性、中极性和水溶性成分的梯度全信息薄层鉴别报道。
为多信息控制前胡药材的质量以及其不同工艺制备的多种制剂，提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息鉴别方法，对前胡药材进行了专题多信息梯度薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的梯度全信息薄层鉴别方法及图谱。
发明内容
本发明涉及一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法。其特征是：用甲醇超声的上清液，作为对照药材与供试品溶液，采用同一供试品溶液，以4种不同极性展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了前胡药材的约58种信息斑点，各斑点相互交叉，但在各自检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、溶剂4ml、展开剂40ml、时间1.5小时。方法简便、快捷、成本低、效率高，各斑点的颜色、荧光多样直观，易于质量监督评价。信息量大，几块薄层板，数十毫升展开剂，可检测数十种成分，发挥指纹图谱的质控效果。其创新性和实用性是不言而喻的。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-中性展开剂 取前胡药材和其对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为供试品溶液和对照药材溶液；吸取上述二种溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点隐约呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的天蓝色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-碱性展开剂 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比20∶4∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)前胡药材中极性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～7μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶3∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(4)前胡药材水溶性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比7∶5∶1的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热约1分钟，将薄层板放置4小时，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的深蓝色主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，从非极性到极性连接起来，就形成一套全息薄层色谱图，所检测的成分信息量不亚于指纹图谱，但其低成本、高效率、应用范围之广、易于普及掌握，却是独具一格的。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.用简便、快捷的前处理方法得到对照药材与供试品溶液，采用同一供试品溶液，以4种不同极性展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了前胡药材的约58种信息斑点，各斑点相互交叉，但在各自检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、溶剂4ml、展开剂40ml、时间 1.5小时。方法简便、快捷、成本低、效率高，各斑点的颜色、荧光多样直观，易于质量监督评价，信息量大，小小的几块薄层板，数十毫升展开剂，可检测数十种成分，发挥指纹图谱的质控效果。其创新性和实用性是不言而喻的。
2.以体积比8∶3的环己烷-乙酸乙酯中性展开剂，展开前胡药材脂溶性成分，置紫外光灯365nm下检视到3个荧光斑点，二个为蓝紫色的，一个为蓝绿色的(图1)；置紫外光灯254nm下检视到2个棕褐色斑点(图2)；喷以10％硫酸乙醇溶液显色后，再置紫外光灯365nm下检视到6个荧光斑点，其中2个天蓝色荧光斑点，非常鲜亮(图3)；再喷以香草醛硫酸乙醇溶液显色，置暗室内透过灯光检视到6个棕褐色颜色斑点(图4)；在4种检视条件下，共检视到前胡脂溶性信息斑点17个。
3.以体积比20∶4∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨碱性展开剂，展开前胡药材脂溶性成分，置紫外光灯365nm下检视到5个蓝紫色荧光斑点，其中3个含量较高(图5)；置紫外光灯254nm下检视到3个棕褐色斑点，其中1个颜色很深(图6)；在2种检视条件下，呈现的信息斑点的从Rf值、颜色和剂量上分析，不是相同化合物，共检视到前胡脂溶性信息斑点8个。
4.以体积比10∶3∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开前胡中极性成分，置紫外光灯365nm下检视到4个亮蓝色荧光斑点(图7)；置紫外光灯254nm下，未检视到任何斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液显色后，再置紫外光灯365nm下检视到6个荧光更强的斑点(图 8)；将薄层板置暗室内透过灯光检视到6个棕红色斑点(图9)；3种检视条件下共检视到前胡中极性成分信息斑点16个。
5.以体积比7∶5∶1的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开前胡药材水溶性成分，置紫外光灯365nm下检视到5个天蓝色荧光斑点(图10)；置紫外光灯254nm下，未检视到任何斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液显色后，置紫外光灯365nm下检视到6个荧光斑点，其中1个黄绿色的，5个亮蓝色的(图11)；置日光下检视到4个颜色斑点，其中1个棕黄色的，3个棕色的(图12)；再喷以香草醛硫酸乙醇溶液显色，薄层板放置4小时后，日光下检视到2 个深蓝色主斑点(图13)；4种检视条件下共检视到前胡水溶性成分信息斑点17个。
6.从脂溶性成分分离的图谱说明其展开剂的前沿已无多余的信息斑点呈现，而在水溶性成分的检测部分，在薄层板的基线处，也不再有明显的斑点残痕，说明所有的信息斑点都已经包括在梯度的薄层展开范围内。
7.综上，以4种不同极性展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，13张色谱图上，共检视到前胡药材从脂溶性到水溶性成分信息斑点共约58个，信息量之多，不亚于指纹图谱，但检测成本却比指纹图谱低廉的多。多信息的薄层色谱图，提供了前胡药材整体评价的质量依据；并为不同组方的制剂排除干扰提供了可供选择的专属色谱图；具有非常重要的实用价值。
附图说明
图1为中性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图2为中性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分在紫外光灯254nm下的薄层TLC图。
图3为中性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图4为中性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，又喷以香草醛硫酸乙醇溶液显色后，暗室内透过灯光检视的薄层TLC图。
图5为碱性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图6为碱性展开剂展开的前胡药材脂溶性成分在紫外光灯254nm下的薄层TLC图。
图7为前胡药材中极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图8为前胡药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图9为前胡药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，暗室内透过灯光检视的薄层TLC图。
图10为前胡药材水溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图11为前胡药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图12为前胡药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的薄层TLC图。
图13为前胡药材水溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，又香草醛硫酸乙醇溶液显色，放置4小时后，日光下检视的薄层TLC图。
图1、2、3、4为同一薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中1.前胡对照药材；2、3、4、5药材。
图5、6为同一薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中1.前胡对照药材；2、 3、4、5药材。
图7、8、9为同一薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中1.前胡对照药材； 2、3、4、5药材。
图10、11、12、13为同一薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中1.前胡对照药材；2、3、4、5药材。
本发明具体实施方式如下
(1)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-中性展开剂取前胡药材和其对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为供试品溶液和对照药材溶液；吸取上述二种溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点隐约呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的天蓝色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-碱性展开剂吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比20∶4∶0.5的氯仿-甲醇 -浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)前胡药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～7μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶3∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(4)前胡药材水溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比7∶5∶1的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；目光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热约1分钟，将薄层板放置4小时，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的深蓝色主斑点。
参考文献
【1】宋吉莲，邢忠，介绍一种前胡薄层色谱鉴别方法[J]时珍国医国药，2000.11(2)143。
Claims (2)
1.一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-中性展开剂 取前胡药材和其对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为供试品溶液和对照药材溶液；吸取上述二种溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点隐约呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的天蓝色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)前胡药材脂溶性成分薄层鉴别-碱性展开剂 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比20∶4∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)前胡药材中极性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～7μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶3∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(4)前胡药材水溶性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比7∶5∶1的氯仿-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热约1分钟，将薄层板放置4小时，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的深蓝色主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于在4块薄层板上，多种检视条件下，鉴别了前胡药材从脂溶性到水溶性信息斑点约58个，隶属于30余种化学成分。
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Denomination of invention: A gradient full-information TLC identification method for Radix Peucedanae Effective date of registration: 20230223 Granted publication date: 20221011 Pledgee: Bank of Jinhua Limited by Share Ltd. science and Technology Branch Pledgor: ZHEJIANG DKCOM ANIMAL HEALTH PRODUCTS Co.,Ltd. Registration number: Y2023980033287 |
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Date of cancellation: 20231108 Granted publication date: 20221011 Pledgee: Bank of Jinhua Limited by Share Ltd. science and Technology Branch Pledgor: ZHEJIANG DKCOM ANIMAL HEALTH PRODUCTS Co.,Ltd. Registration number: Y2023980033287 |
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Denomination of invention: A gradient full information thin-layer identification method for medicinal herbs of Peucedanum Effective date of registration: 20231114 Granted publication date: 20221011 Pledgee: Bank of Jinhua Limited by Share Ltd. science and Technology Branch Pledgor: ZHEJIANG DKCOM ANIMAL HEALTH PRODUCTS Co.,Ltd. Registration number: Y2023980065314 |