CN105004834A - 一种白亮独活的薄层检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白亮独活的薄层检测方法，它包括以下步骤a、制备供试品溶液b、制备对照品溶液；c、检测供试品溶液和对照品溶液：分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，以体积比(1.5-4)：1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开后取出检视，将供试品溶液薄层板上各斑点与对照品溶液上斑点进行比对，可检测出待测样品的真伪或是质量情况。本发明薄层色谱检测方法，简便易行，可以分离出白亮独活中的多个成分，各成分分离良好，可以有效区分白亮独活与其近伪品康定独活，为全面监控白亮独活的真伪和质量提供了有效保障。
Description
技术领域
本发明涉及白亮独活的检测方法。
背景技术
藏医用伞形科植物白亮独活Heracleum candicans Wall.ex DC.的根作珠嘎药用，白亮独活植物形态与《晶珠本草》等书对珠嘎的叙述相符，白亮独活为正品入药。珠嘎具有杀虫，止血，愈疮痈，治麻风等功效。因此对珠嘎进行深入研究和开发具有重大意义。
但是，已有研究报道，白亮独活很难从其性状进行鉴别。
为解决上述问题，高必兴、兰志琼等人(白亮独活的HPLC指纹图谱，中国实验方剂学杂志，2015年4月，第21卷第8期，61-63页)报道了一种白亮独活的HPLC指纹图谱的建立方法，可以有效鉴别出白亮独活与其混伪品康定独活。
但是，HPLC指纹图谱的建立工序繁琐，时间较长，且需要专业的人员和专业的仪器。而白亮独活多分布于西藏及青海、云南、四川等省的藏区，上述地区的人才条件和物质条件相对落后，在实际中难以有效建立HPLC的指纹图谱。
因此，目前亟需一种更为简便易行的白亮独活检测方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种白亮独活的薄层检测方法，它包括以下步骤：
a、制备供试品溶液：取待测样品，加入甲醇或乙醇，超声或回流提取，过滤，得供试品溶液；
b、制备对照品溶液；
c、检测供试品溶液和对照品溶液：分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，以体积比(1.5-4)：1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开后取出检视，将供试品溶液薄层板上各斑点与对照品溶液上斑点进行比对，可检测出待测样品的真伪或是质量情况；
所述对照品溶液选自白亮独活对照品溶液或/和欧前胡素对照品溶液；
进一步优选地，所述白亮独活对照品溶液是按照下述步骤制备得到的：取白亮独活药材，以步骤a的相同方法制备得到白亮独活对照品溶液；
所述欧前胡素对照品溶液是按照下述步骤制备得到的：取欧前胡素对照品，加入与供试品溶液相同的溶剂，得欧前胡素对照品溶液。
进一步优选地，所述步骤a包括以下步骤：
取待测样品，加入甲醇，待测样品与甲醇的重量体积比为1:10g/mL，超声提取，过滤，即得供试品溶液；
或步骤a包括以下步骤：
取待测样品，加入乙醇A，待测样品与乙醇A的重量体积比为1:20g/mL，回流提取，过滤，蒸干，残渣加乙醇B溶解，待测样品与乙醇B的重量体积比为1:2g/mL，即得供试品溶液；
或步骤a包括以下步骤：
待测样品，加入无水乙醇C，待测样品与无水乙醇C的重量体积比为1:20g/mL，超声提取，过滤，蒸干，残渣加无水乙醇D溶解，待测样品与无水乙醇D的重量体积比为1:2g/mL，即得供试品溶液；
进一步优选地，所述展开剂为体积比7:3的石油醚-乙酸乙酯。
进一步优选地，步骤c的点样中，点样的量为4μL。
进一步优选地，步骤c的展开中，展距大于等于10cm。
进一步优选地，步骤c的展开中，温度为10℃。
进一步优选地，步骤c的检视中，检视波长为365nm或254nm。
进一步优选地，步骤c的检测中，所述薄层板为硅胶GF254板。
进一步优选地，所述欧前胡素对照品溶液的制备中，欧前胡素对照品与溶剂的重量体积比为1mg/mL。
本发明薄层色谱检测方法，简便易行，可以分离出白亮独活中的多个成分，各成分分离良好，可以有效区分白亮独活与其近伪品康定独活，为全面监控白亮独活的真伪和质量提供了有效保障。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图10-20中，最右的斑点为欧前胡素对照品斑点。
图1为三种提取方法的薄层色谱图，1为方法1，2为方法2，3为方法3。
图2为石油醚(60～90℃)-乙醚(8.5:1.5)展开系统的薄层色谱图。
图3为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开系统的薄层色谱图。
图4为石油醚(60～90℃)-甲苯-乙酸乙酯(8:2:2)展开系统的薄层色谱图。
图5为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开系统的薄层色谱图。
图6为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4:1)展开系统的薄层色谱图。
图7为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9:1)展开系统的薄层色谱图。
图8为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:2)展开系统的薄层色谱图。
图9为不同点样量下的薄层色谱图，1-5的点样量依次为2μL、4μL、6μL、8μL、10μL。
图10为展距8cm下的薄层色谱图。
图11为展距10cm下的薄层色谱图。
图12为展距12cm下的薄层色谱图。
图13为展距14cm下的薄层色谱图。
图14为302nm检视下的薄层色谱图。
图15为365nm检视下的薄层色谱图。
图16为T＝16℃，RH＝50％下的薄层色谱图。
图17为T＝26℃，RH＝50％下的薄层色谱图。
图18为T＝10℃，RH＝50％下的薄层色谱图。
图19为T＝26℃，RH＝30％下的薄层色谱图。
图20为T＝26℃，RH＝80％下的薄层色谱图。
图21为白亮独活药材1-8号样品和9欧前胡素对照品的薄层色谱图。
图22为白亮独活药材1-10号样品和11欧前胡素对照品的薄层色谱图。
图23为白亮独活药材样品、康定独活样品以及欧前胡素对照品的薄层色谱图：1为欧前胡素，2为白亮独活4号样品，3为康定独活6号样品。
具体实施方式
材料：
供实验所用的白亮独活药材10批，采自于四川省甘孜州，经成都中医药大学卢先明教授鉴定为伞形科植物白亮独活Heracleum candicans Wall.ex DC.的干燥根，洗去泥土及杂质，晾干，备用。药材来源见表1。
表1 白亮独活药材样品产地
供实验用的康定独活均经成都中医药大学卢先明教授鉴定为伞形科植物康定独活Heracleum souliei de Boiss.Herb.的干燥根。10批康定独活药材来源如表2。
表2 康定独活药材样品产地
上述药材均已过三号筛，备用。
仪器与试剂：
万分之一电子天平(德国Sartorius BP121S)，十万分之一电子天平(德国Sartorius BP211D)，紫外分光光度计(日本岛津UV-1600型)，超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，KQ5200E型,功率200W，频率40KHZ)；欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110826-201214，纯度99.5％)；其他试剂均为分析纯。
实施例1本发明方法工艺参数的筛选
1、供试品制备方法考察
方法1：取白亮独活粉末1g，加甲醇10mL后超声15min，滤过。
方法2：取本品粉末1g，加乙醇20mL后回流1h，滤过，水浴蒸干，加2mL的乙醇溶解。
方法3：取本品粉末1g，加无水乙醇20mL后超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解。
三种提取分别点样量4μL于薄层硅胶G板上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，展距12cm，置于紫外光灯(365nm)下检视，结果见图1。
结果表明：三种方法展开的点情况差异不大，分离出的清晰斑点较多。其中，方法1提取简便，斑点圆润。故优选方法1提取白亮独活。
2、展开系统的考察
系统1：石油醚(60～90℃)-乙醚(8.5:1.5)；
系统2：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)；
系统3：石油醚(60～90℃)-甲苯-乙酸乙酯(8:2:2)。
取上述方法1提取溶液，分别点样量4μL于三块薄层硅胶G板上，以3种展开系统展开，展距12cm，置于紫外光灯(365nm)下检视，结果如图2、3、4。
结果表明：展开系统2斑点圆润，Rf值适中，各斑点之间分离效果最佳，故选择展开系统2石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)。
3、展开比例考察
比例1：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)；
比例2：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4:1)；
比例3：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9:1)；
比例4：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:2)。
取上述方法1提取溶液，分别点样量4μL于四块薄层硅胶G板上，以4种展开比例展开，展距12cm，置于紫外光灯(365nm)下检视，结果如图5、6、7、8。
结果表明：除比例3外，其余比例斑点展开均较完全。其中，比例1的Rf值最为适宜且最为圆润。故优选比例1即石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)作为白亮独活的展开剂。
4、点样量考察
2μL、4μL、6μL、8μL、10μL。
分别点样量2μL、4μL、6μL、8μL、10μL于薄层硅胶G板上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，展距12cm，置于紫外光灯(365nm)下检视，结果如图9。
结果表明：点样量4μL点圆润、清晰；点样量2μL点比较暗，点样量6μL、8μL、10μL点扩散，故优选4μL作为白亮独活的点样量。
5、展开距离考察
8cm、10cm、12cm、14cm。
点样量4μL于薄层硅胶G板上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，分别展开8cm、10cm、12cm、14cm。置于紫外光灯(365nm)下检视，结果如图10～13。
结果表明：展距为10cm以上时均能取得较好的分离效果，故展距选择10cm以上。
6、不同检测波长考察
302nm、365nm。
点样量4μL于薄层硅胶G板上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，分别展开12cm。分别置于紫外光灯(302nm、365nm)下检视，结果如图14、15。
结果表明：于365nm下检视比302nm的清晰，故选择检视波长为365nm。7、不同薄层板考察
自制硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板、市售硅胶G板。
点样量4μL分别于薄层硅胶G、硅胶GF254板、硅胶H板、市售硅胶G板上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，分别展开12cm，置于紫外光灯(365nm、254nm)下检视。
结果表明：各类吸附剂和硅胶板均能有比较好的分离度和斑点，故选择常用的硅胶G板和分离度最好硅胶GF254板作为吸附剂。
8、不同温湿度的考察
温度：T＝16℃，RH＝50％；T＝10℃，RH＝50％；T＝26℃，RH＝50％。
湿度：T＝26℃，RH＝30％；T＝26℃，RH＝50％；T＝26℃，RH＝80％
点样量4μL分别于薄层硅胶G上，以展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)展开，分别在T＝16℃，RH＝50％；T＝10℃，RH＝50％；T＝26℃，RH＝50％；T＝26℃，RH＝30％；T＝26℃，RH＝50％；T＝26℃，RH＝80％环境中展开12cm，置于紫外光灯(365nm)下检视。结果如图16～20。
结果表明：温度及湿度对样品及对照品的展开并没有太大的影响
实施例2白亮独活不同批次样品的检测
样品前处理方法，取本品粉末1g，加甲醇10mL后超声15min，滤过，取滤液，作为供试品溶液。
欧前胡素对照品溶液制备取欧前胡素标准品，用甲醇配成1mL溶液含1mg欧前胡素。
吸附剂硅胶G板、硅胶254板；
展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)；
显色条件置于紫外光灯(365nm或254nm)下检视；
点样量4μL；
温湿度于10℃条件展开最好，点小，圆润。
结果：按上述条件操作，取不同产地白亮样品与对照品在对应位置均显示相同颜色的斑点。
8批样品在365nm下的检视结果如图21所示，硅胶G薄层色谱图(T＝20℃；RH＝60％)。
10批样品在254nm下的检视结果如图22所示，GF254薄层色谱图(T＝22℃；RH＝50％)。
实施例3白亮独活和康定独活的鉴别
用本发明的白亮独活薄层鉴别方法提取康定独活药材，并于同一硅胶GF254板上对比两种独活斑点；结果两种独活在斑点的数目、对应程度及色度均有较大的差异，与欧前胡素对照品的对应斑点也有明显的色度区分；故用此薄层鉴别方法能明显地区分两种独活。
GF254薄层色谱图对比(T＝25℃；RH＝64％)，检视波长254nm，结果如图23所示。
本发明薄层色谱检测方法，简便易行，可以分离出白亮独活中的多个成分，各成分分离良好，可以有效区分白亮独活与其近伪品康定独活，为全面监控白亮独活的真伪和质量提供了有效保障。
Claims (10)
1.一种白亮独活的薄层检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：
a、制备供试品溶液：取待测样品，加入甲醇或乙醇，超声或回流提取，过滤，得供试品溶液；
b、制备对照品溶液；
c、检测供试品溶液和对照品溶液：分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，以体积比(1.5-4)：1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开后取出检视，将供试品溶液薄层板上各斑点与对照品溶液上斑点进行比对，可检测出待测样品的真伪或是质量情况；
所述对照品溶液选自白亮独活对照品溶液或/和欧前胡素对照品溶液。
2.根据权利要求1所述的薄层检测方法，其特征在于：所述白亮独活对照品溶液是按照下述步骤制备得到的：取白亮独活药材，以步骤a的相同方法制备得到白亮独活对照品溶液；
所述欧前胡素对照品溶液是按照下述步骤制备得到的：取欧前胡素对照品，加入与供试品溶液相同的溶剂，得欧前胡素对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的薄层检测方法，其特征在于：所述步骤a包括以下步骤：
取待测样品，加入甲醇，待测样品与甲醇的重量体积比为1:10g/mL，超声提取，过滤，即得供试品溶液；
或步骤a包括以下步骤：
取待测样品，加入乙醇A，待测样品与乙醇A的重量体积比为1:20g/mL，回流提取，过滤，蒸干，残渣加乙醇B溶解，待测样品与乙醇B的重量体积比为1:2g/mL，即得供试品溶液；
或步骤a包括以下步骤：
待测样品，加入无水乙醇C，待测样品与无水乙醇C的重量体积比为1:20g/mL，超声提取，过滤，蒸干，残渣加无水乙醇D溶解，待测样品与无水乙醇D的重量体积比为1:2g/mL，即得供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的薄层检测方法，其特征在于：所述展开剂为体积比7:3的石油醚-乙酸乙酯。
5.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于：步骤c的点样中，点样的量为4μL。
6.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于：步骤c的展开中，展距大于等于10cm。
7.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于：步骤c的展开中，温度为10℃。
8.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于；步骤c的检视中，检视波长为365nm或254nm。
9.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于：步骤c的检测中，所述薄层板为硅胶GF254板。
10.根据权利要求1-4任一项所述的薄层检测方法，其特征在于：所述欧前胡素对照品溶液的制备中，欧前胡素对照品与溶剂的重量体积比为1mg/mL。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106324120A (zh) * | 2016-08-09 | 2017-01-11 | 西藏藏医学院 | 一种藏药材裂叶独活挥发性成分的测定方法 |
| CN112051353A (zh) * | 2020-09-23 | 2020-12-08 | 浙江金大康动物保健品有限公司 | 一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008156325A (ja) * | 2006-12-26 | 2008-07-10 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤および美白剤 |
| CN102838611A (zh) * | 2012-09-20 | 2012-12-26 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种从白亮独活中提取独活素的方法 |
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2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008156325A (ja) * | 2006-12-26 | 2008-07-10 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤および美白剤 |
| CN102838611A (zh) * | 2012-09-20 | 2012-12-26 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种从白亮独活中提取独活素的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 高必兴 等: "白亮独活( 藏药珠噶) 的质量标准研究", 《中药材》, vol. 38, no. 5, 31 May 2015 (2015-05-31), pages 962 - 965 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106324120A (zh) * | 2016-08-09 | 2017-01-11 | 西藏藏医学院 | 一种藏药材裂叶独活挥发性成分的测定方法 |
| CN112051353A (zh) * | 2020-09-23 | 2020-12-08 | 浙江金大康动物保健品有限公司 | 一种前胡药材的梯度全信息薄层鉴别方法 |
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