CN111060647A - 一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与六神曲药材溶液。同一供试品溶液，以3种不同极性的展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，共检视到六神曲的约35种信息斑点，归属10余种化学成分，既有呈现荧光的，又有遇10％硫酸乙醇溶液，激发与增强其斑点荧光的和显色的颜色斑点，它们相互交错，但各自的检视条件下，互不干扰，发挥了信息斑点互补作用。该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各2g、提取溶剂24ml、展开剂30ml、时间2小时。适用于六神曲药材的多信息快速质量监督与评价；并为其组方的复方制剂提供了不同极性成分的薄层鉴别参考。

Description

一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法
技术领域
本发明涉及一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法。即，按脂溶性、中极性和水溶性的梯度顺序，以薄层鉴别的形式，检视六神曲药材中从脂溶性到水溶性全部信息成分斑点。
背景技术
所谓的中药材梯度全信息薄层鉴别，顾名思义就是将高效液相梯度洗脱的内涵，引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解定律，按脂溶性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中具有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能全的斑点信息图谱，由此组成一套从脂溶性到水溶性成分的全信息薄层色谱图和鉴别方法，提供不同来源的六神曲药材进行整体质量评价与监督；以及多种工艺制备的复方制剂，作为不同极性成分的薄层鉴别参考。
所谓的全信息系指在脂溶性成分的检测部分，其薄层板的最前沿，已经无任何信息斑点呈现，而在水溶性成分的检测部分，在薄层板的基线处，也不再有明显的斑点残痕，说明所有的信息斑点都已经包括在梯度的薄层展开范围内，再配合多种检视条件，使能检视到的信息斑点，在不同的展开剂与检视条件下全部都呈现出来，获取到从脂溶性到水溶性全信息量。
六神曲为常用中药，有健脾和胃，消食调中的功效。多用于脾胃虚弱，饮食停滞，胸痞腹胀，呕吐泻利，小儿食积。但六神曲有多个质量标准，处于不统一状态，即，除卫生部药品标准(中药成方制剂)第19册外，全国还有7个省市的中药材标准或中药材炮制规范收载六神曲。六神曲的处方虽不统一，但基本上是大同小异，均有辣蓼、青蒿、苍耳草以及赤小豆、苦杏仁等药材，区别在辅料的选用上，有的用面粉或麦麸，有的加入甘草、酒曲、酵母等。其制备工艺均是经发酵，干燥，而制成样品。
所以在众多标准中，选择了级别较高，权威性较大，涉及面较广的部颁标准为依据，进行详细阐述与研究。
收载在卫生部药品标准《中药成方制剂》第十九册上六神曲，由辣蓼500g，青蒿500g，苍耳子500g，赤小豆100g，苦杏仁100g，麦麸5000g，面粉2500g组成。也是所有标准处方的共有药材，所以选择该标准也最具有代表性。其质量标准项下，只收载了制法、性状和曲剂的常规检查，既无显微鉴别，也无薄层鉴别，更无含量测定。也就是说标准是无法监督控制六神曲的质量的。
曾有人【1】依据六神曲中的辣蓼含有芦丁、槲皮素等；苦杏仁含有苦杏仁苷、脂肪、纤维素、蛋白质、糖类、油脂等；青蒿含有苦味质、挥发油和青蒿碱、黄酮成分如芦丁等；采用薄层色谱，以苦杏仁苷和芦丁为检测指标，甲醇为提取溶剂，分别以乙酸乙酯-甲醇-水(8∶1∶1)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，对六神曲的质量进行了分析，结果表明：供试品色谱中，在与苦杏仁苷和芦丁对照品色谱相应的位置上，均未出现相同的斑点。以此揭示了中药材经生物发酵后，其化学成分发生了变化，再以原生药材的化学成分或原药材为对照，进行检测，是不合适的。也有人申报了《六神曲的薄层鉴别方法》专利，专利公开号是CN 105403653 A，该专利也仅仅是以青蒿和其有效成分东莨菪碱内酯为指标，进行鉴别的，从公开的薄层色谱图发现信息斑点少，而且模糊不清，斑点的对应性也很差。同样是发酵产品，以原药材和其有效成分为对照，进行鉴别存在一定弊端。
那么，又没有发酵的相对药材作对照，如何进行，才能有效控制六神曲的质量呢？经再三斟酌，采用了以部颁标准的处方和工艺为基础，发酵制备的六神曲为研究对象，探讨出一套梯度全信息薄层鉴别方法，多指标控制六神曲药材质量，并为不同提取工艺制备的复方制剂提供薄层鉴别参考方法，本着简便、快捷、低成本、高效率、无环境污染的宗旨，对六神曲药材进行了专题多信息梯度薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的六神曲全息薄层鉴别方法及图谱。
发明内容
用简便、快捷的前处理方法得到供试品与六神曲药材溶液。用同一供试品溶液，以3种不同极性的展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，共检视到六神曲的约35种信息斑点，归属10余种化学成分，既有呈现荧光的，又有遇10％硫酸乙醇溶液，激发与增强其斑点荧光的和显色的颜色斑点，它们相互交错，但各自的检视条件下，互不干扰，发挥了信息斑点互补作用。该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各2g、提取溶剂24ml、展开剂30ml、时间2小时。适用于六神曲药材的多信息快速质量监督与评价；并为其组方的复方制剂提供了不同极性成分的薄层鉴别参考。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)六神曲药材脂溶性成分薄层鉴别取六神曲药材2g，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加甲醇2ml，使溶解，作为供试品溶液；另取六神曲对照药材2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶2.5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以5％香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶7)的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(2)六神曲药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为9∶6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以5％香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶7)的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(3)六神曲药材水溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为4∶4∶2.6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，从非极性到极性连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.创建了一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与六神曲药材溶液。同一供试品溶液，以3种不同极性的展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，共检视到六神曲的约35种信息斑点，归属10余种化学成分，既有呈现荧光的，又有遇10％硫酸乙醇溶液，激发与增强其斑点荧光的和显色的颜色斑点，它们相互交错，但各自的检视条件下，互不干扰，发挥了信息斑点互补作用。适用于六神曲药材的多信息快速质量监督与评价；并为其组方的复方制剂提供了不同极性成分的薄层鉴别参考。
2.六神曲药材以体积比10∶2.5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，将脂溶性成分展开后，将薄层板置紫外光灯365nm下检视到1个蓝绿色荧光斑点(图1)；喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，呈现出7个不同颜色斑点(图2)；对比图1、图2中的斑点大小和形状，荧光斑点与相应位置上的显色斑点，不是同一化学成分。这样，在同一块薄层板上，同时检视到8种脂溶性成分，目前还未见相关报道。
3.六神曲药材以体积比为9∶6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开中极性成分，置紫外光灯365nm下检视到2个荧光斑点，1个是蓝绿色的，1个是蓝紫色的(图1)；喷雾10％硫酸乙醇溶液增荧光后，置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品都深浅不一的8个荧光斑点(图2)；再喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，呈现出颜色不一、深浅不一的12个斑点(图3)；在不同的检视条件下，共检视到22个信息斑点，归属于约13种化学成分。做到了在不同检视条件下的成分斑点的互补。
4.六神曲药材以体积比为4∶4∶2.6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开水溶性成分，置紫外光灯365nm下检视到3个荧光斑点(图6)；喷雾10％硫酸乙醇溶液增荧光后，置紫外光灯365nm下检视，除了展开剂前沿处的3个荧光强度很大的斑点外，在薄层板的近原点处又呈现出1个蓝色荧光斑点(图7)；再将显色的薄层板置暗室内透过灯光检视，除了展开剂前沿处的3个颜色明显的斑点外，在薄层板的近原点处还呈现出1个颜色斑点斑点(图8)；该颜色斑点与增荧光的蓝色斑点Rf值不同，不是同一成分。这样，同一块薄层板上，在不同的检视条件下，共检出水溶性成分斑点5个。
5.采用同一供试品溶液和对照药材溶液，以3种不同极性的展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，共检视到六神曲药材的信息斑点35个。除去板与板之间，在衔接时重叠的成分斑点，在3块薄层板上共检出的不同成分斑点约为13个。
6.13种不同成分的信息斑点，基本涵盖了经发酵的六神曲从脂溶性到水溶性的全部信息量，以发酵六神曲为对照，检测不同的六神曲产品，具有较好的可比性，能较全面的对六神曲做出质量评价，而且操作简便、快捷、高效，无环境污染，经济实用。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各2g、提取溶剂24ml、展开剂30ml、时间2小时。六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法还未见相同报道，具有新颖性、创造性和实用性。
附图说明
图1为六神曲药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图2为六神曲药材脂溶性成分用香草醛硫酸乙醇溶液显色后，暗室内透过灯光检视的薄层TLC图。
图3为六神曲药材中极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图4为六神曲药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图5为六神曲药材中极性成分用香草醛硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图6为六神曲药材水溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图7为六神曲药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图8为六神曲药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图1、2为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1、2.3为六神曲药材；4.5为六神曲对照药材。
图3.4.5为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1、2.3为六神曲药材；4.5为六神曲对照药材。
图6.7.8为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1、2为六神曲对照药材；4、5、6为六神曲药材。
本发明具体实施方式如下：
(1)六神曲药材脂溶性成分薄层鉴别取六神曲药材2g，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加甲醇2ml，使溶解，作为供试品溶液；另取六神曲对照药材2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶2.5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以5％香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶7)的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(2)六神曲药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为9∶6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以5％香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶7)的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(3)六神曲药材水溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为4∶4∶2.6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
参考文献
【1】任巧玲，宋潇潇.六神曲的质量情况分析[J].中国现代药物应用，2010,4(10):113-114页。

Claims (2)

1.一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)六神曲药材脂溶性成分薄层鉴别取六神曲药材2g，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加甲醇2ml，使溶解，作为供试品溶液；另取六神曲对照药材2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比10∶2.5∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(2)六神曲药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为9∶6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
(3)六神曲药材水溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为4∶4∶2.6∶0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种六神曲药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于以3种极性不同的展开剂，在3块薄层板上共检出特征性斑点约35个，归属互不重叠的化学成分约13种，总花费时间约2小时、提取溶剂24ml、展开剂30ml。
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