CN110221015B - 一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，以3种不同极性的展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，检视了石榴皮药材的约十七种成分。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.5g、提取溶剂4ml、展开剂40ml、时间1小时。简便、快捷、高效，是目前已报道方法都不具备的。为石榴皮的多信息快速质量监督，提供了方法，这些以碱性展开剂展开的新鉴别特征点为初次报道。

Description

一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法
技术领域
本发明涉及一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法。即，以非极性、中极性和极性的梯度形式，以薄层鉴别检视石榴皮药材中的全部能呈现信息的成分。
背景技术
所谓的中药材梯度全信息薄层鉴别，顾名思义就是将高效液相梯度洗脱的内涵，引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解定律，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中具有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能全的斑点信息图谱，由此组成一套从脂溶性到水溶性成分的全信息薄层色谱图和鉴别方法，提供不同工艺制备的多种制剂，作为质量评价的检测指标；或提供不同来源、不同采收季节的石榴皮药材，进行整体质量监督。
中药石榴皮为中国药典历版所收载品种，具有涩肠止泻，止血，驱虫之功效，用于久泻，久痢，便血，脱肛，崩漏，带下，虫积腹痛。是一种临床上止泻常用药材。主含鞣质类和黄酮类的化合物，如没食子酸、鞣花酸等；黄酮类有木犀草素、山奈酚、槲皮素、芹菜素和柚皮素及其与糖结合成的苷类等。这些成分从结构分析，既有脂溶性的，又有中极性的，还有水溶性的。但其薄层鉴别却报道的很少，目前多是以鞣酸类成分为指标，进行检测的。如中国药典2015年版一部石榴皮药材项下收载了总鞣质的分光光度法定量与鞣花酸的HPLC 法定量以及以没食子酸为对照指标的薄层鉴别。其方法是：取石榴皮药材3g，用无水乙醇30ml回流提取后，再将乙醇蒸干，残渣加水，用石油醚脱脂萃取2次，每次20ml，弃去石油醚液，再用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，将乙酸乙酯液蒸干，加甲醇溶解后，作为供试品溶液。以没食子酸作为对照指标，以聚酰胺薄膜为载体，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1) 为展开剂，三氯化铁乙醇溶液显色后，观察颜色斑点。方法比较繁琐、费时，仅供试品溶液的制备，就需花费时间3小时、有机溶剂110ml。有机溶剂的蒸干，严重污染环境，而且检测信息单一，不利于质量监督。
另有文献报道，取石榴皮药材0.5g，加甲醇10ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干甲醇后，用水溶解，用石油醚萃取两次，萃取过的水溶液，作为供试品溶液。另取granatin B加甲醇制成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。以乙酸乙酯-甲酸-水(9∶2∶2)为展开剂，上行展开9cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铁-铁氰化钾试液，日光下检视。结果见图 10。如图10所示，在鞣酸聚合物不排除的情况下，以酸性展开剂展开的薄层图谱，都会呈现部分斑点拖尾的现象，原因就是大分子的鞣酸聚合物造成，如不反复的纯化处理或不水解鞣酸聚合物，是很难获得所有斑点都分离良好的色谱图的。
为给石榴皮药材及其不同工艺制备的多种制剂，提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息鉴别方法，从不同产地、不同药店采购了十批石榴皮药材，进行了专题多信息梯度薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的全息石榴皮薄层鉴别方法及图谱。
发明内容
本发明就是针对石榴皮薄层鉴别方法繁琐、费时，且都是以没食子酸为指标进行鉴别的，或虽有个别文献报道的简便方法，但薄层图谱却因大分子鞣酸聚合物的干扰，部分斑点呈现拖尾的情况。参照高效液相有效成分的梯度测定，尝试了石榴皮梯度薄层鉴别，通过展开剂的不同组合与其比例、显色剂、薄层载体以及检测条件等参数研究，获得以简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，以3种不同极性的碱性展开剂，在3块薄层板上，多种检视条件下，检视了石榴皮药材的约十七种成分。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.5g、提取溶剂4ml、展开剂40ml、时间1小时。简便、快捷、高效，是目前已报道方法都不具备的。这些以碱性展开剂展开的新鉴别特征点也未见相同报道。为石榴皮药材原粉入药、乙醇提取以及水提取入药的复方制剂，提供了脂溶性、中极性及水溶性成分的多信息梯度薄层色谱方法，以利于更好地进行质量评价与监督。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)石榴皮药材脂溶性成分薄层鉴别取石榴皮药材0.5g，研细，加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品溶液；另取石榴皮对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为5∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再在日光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)石榴皮药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液， 105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(3)石榴皮药材极性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液， 105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，从非极性到极性连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.石榴皮药材以体积比5∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的1个深蓝色荧光斑点；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后紫外光灯365nm下检视到的1亮蓝色荧光斑点；但其显色前和显色后的两个荧光斑点，Rf值不同，不是同一化合物；日光下检视到2个清晰的颜色斑点。同一块薄层板，在3种不同的检视条件下，共检出脂溶性信息斑点3个。为以石榴皮药材原粉入药的多种制剂，提供了可供选择的脂溶性成分的多信息薄层色谱图与其鉴别方法。
2.石榴皮药材以体积比8∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的为展开剂，展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的4个亮蓝色和蓝色荧光斑点；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到的3个不同颜色荧光信息斑点，其中1个橙黄色的，2个为浅粉色的；再置暗室内透过灯光检视，呈现了6～7个颜色斑点；为以石榴皮药材及乙醇提取入药的多种制剂，提供了中极性成分的多信息薄层图谱与鉴别方法。
3.石榴皮药材以体积比1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的为展开剂，展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的4个荧光主斑点，其中一个亮蓝色的，3个蓝色的；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到5个荧光斑点，其中一个亮蓝绿色的，3个兰绿色的，1个淡粉红色的。显色前的亮蓝色荧光斑点与显色后的亮蓝绿色荧光斑点，形状和Rf值不同，不是同一化合物；再置暗室内透过灯光检视，呈现5个不同颜色的斑点。为以水提取入药的多种制剂，提供了水溶性成分的薄层鉴别图与鉴别方法。
4.用三种极性不同的展开剂，在3块薄层板上，各自3种检视条件下，共检出互不重合的信息斑点17个，至少是17种不同的化学成分，经确认17种斑点，都不是没食子酸。这种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法，还未见相同报道。
5.方法简便、快捷、药材与对照药材，只需含水甲醇超声，上清液点样，展开，在不同检视条件下检视，即可。共需药材与对照药材前处理溶剂4ml，时间20分钟，样品即处理完毕。与中国药典2015年版一部收载的石榴皮薄层鉴别需药材3g、提取溶剂110ml、加上对照药材的提取，总提取溶剂就是220ml、时间3小时、且斑点单一相比，该薄层鉴别的新颖性、创造性和实用价值是不言而喻的。
6.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：非极性、中极性和极性成分的展开剂都是碱性的，而已报道方法都是酸性或偏酸性的。碱性展开剂使一些酸性的物质的酯键水解或成盐，以离子体形式存在，克服了多酚羟基化合物或其聚合体的拖尾现象，使各斑点收缩、集中，而呈现出各成分虽相互交叉，但在不同的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点的有益效果。
附图说明
图1为石榴皮药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图2为石榴皮药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图3为石榴皮药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，日光检视的薄层TLC图。
图4为石榴皮药材中极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图5为石榴皮药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图6为石榴皮药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC 图。
图7为石榴皮药材极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图8为石榴皮药材极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图9为石榴皮药材极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图10为文献报道的石榴皮药材喷雾1％三氯化铁-铁氰化钾试液，日光下检视的薄层TLC图。
图1、2、3为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1石榴皮对照药材；2.3.5.6.7.8.9为石榴皮药材。
图4、5、6为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1石榴皮对照药材；2.3.5.6.7.8.9为石榴皮药材。
图7、8、9为一块薄层板不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1石榴皮对照药材；2.3.5.6.7.8.9为石榴皮药材。
图10中，1.石榴皮对照药材；2.Granatin B对照品；3.市售石榴皮
本发明具体实施方式如下：
(1)石榴皮药材脂溶性成分薄层鉴别取石榴皮药材0.5g，研细，加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品溶液；另取石榴皮对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为5∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)石榴皮药材中极性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液， 105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(3)石榴皮药材极性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液， 105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；在置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
参考文献
【1】刘延泽，李海霞.石榴皮中单宁类成分的薄层色谱鉴别[J]，时珍国医国药，2003，14(8) 481。

Claims (2)

1.一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)石榴皮药材脂溶性成分薄层鉴别：取石榴皮药材0.5g，研细，加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品溶液；另取石榴皮对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为5∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)石榴皮药材中的中极性成分薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(3)石榴皮药材极性成分的薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各6～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种石榴皮药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于以3种不同的展开剂，在3块薄层板上共检出特征性斑点约17个，共花费时间约1小时、提取溶剂4ml、展开剂40ml。
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