CN110579560B - 一种杨树花药材的梯度多信息薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种杨树花药材的梯度多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用甲醇超声，上清液直接作为供试品与对照药材溶液；采用同该供试品溶液，以5种不同极性的展开剂，在5块普通的薄层板上，多种检视条件下，检视了杨树花药材不同极性成分的斑点30余个。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，均能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。完成该薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、提取溶剂4ml、展开剂50ml、时间1.5小时。首次提供了一套杨树花药材从脂溶性到水溶性梯度多信息薄层鉴别图谱和鉴别方法。方法简便、快捷、高效，为不同工艺制备的杨树花制剂，提供了薄层参考，提升了杨树花质量评价监督指标。
Description
技术领域
本发明涉及一种杨树花药材的梯度多信息薄层鉴别方法。即，以5种不同极性的展开剂，在5块薄层板上，多种检视条件下，检视了杨树花药材的30余个信息斑点。完成该薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、提取溶剂4ml、展开剂50ml、时间1.5小时。
背景技术
所谓的中药材梯度全信息薄层鉴别，顾名思义就是将高效液相梯度洗脱的内涵，引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解定律，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中具有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能全的斑点信息图谱，由此组成一套从脂溶性到水溶性成分的全信息薄层色谱图和鉴别方法，提供不同工艺制备的多种制剂，作为质量评价的检测指标；或提供不同来源、不同采收季节的杨树花药材，进行整体质量评价与监督。
中药杨树花为中国兽药典历版所收载品种，为杨柳科植物白毛杨、加拿大杨或同属数种植物干燥雄花序。具有清热解毒，化湿止泻之功效，用于湿热下痢，幼畜泄泻。主要含黄酮、有机酸、氨基酸、酚类、糖类和生物碱等。杨树花提取物中黄酮类成分能有效抑制病原体核酸的合成，从而达到迅速杀灭病原体的目的，对痢疾杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、巴氏杆菌、绿脓杆菌、副嗜血杆菌有明显的抑制杀灭作用，总有效率在95％以上，疗效优于氟苯尼考和头孢类。是一种常用的兽用治疗痢疾和肠炎的主要药材。其化学成分既有脂溶性的，又有中极性的，还有水溶性的。其薄层鉴别中国兽药典杨树花项下收载的方法是：
取杨树花药材1g，加水15ml，加热回流1小时，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，弃去乙酸乙酯层，取下层溶液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取杨树花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-水(6.5∶4∶0.8∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，105℃加热1分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。以此看到，该方法还是具有一定的繁琐性，检测一批样品需花费时间2.5小时，有机溶剂44ml，展开剂10ml，仅检测了偏水溶性黄酮类主斑点。
查阅了不少文献，目前不论是口服液，还是片剂，基本都是采用2015年版兽药典收载的方法，检测的都是偏水溶性的黄酮类，还未查阅到其他方法。检测指标匮乏，方法单一，不利于药材的整体质量评价与监督。
为改善杨树花药材目前薄层鉴别的现状，提供简便、快捷，大众化、多信息的梯度薄层鉴别方法，对杨树花药材进行了专题薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的梯度多信息薄层鉴别方法及图谱。
发明内容
用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，以5种不同极性的展开剂，在5块普通的薄层板上，多种检视条件下，检视了杨树花药材的30余个不同极性的信息斑点。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，均能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。完成该薄层鉴别只需药材和对照药材各0.3g、提取溶剂4ml、展开剂50ml、时间1.5小时。首次提供了一套杨树花药材从脂溶性到水溶性梯度多信息薄层鉴别图谱和鉴别方法。方法简便、快捷、高效，为不同工艺制备的杨树花制剂，提供了薄层参考，提升了杨树花质量监督信息指标。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)杨树花药材脂溶性成分薄层鉴别取杨树花药材和对照药材各0.3g，研细，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品和杨树花对照药材溶液；吸取对照药材溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为20∶1∶0.1的环己烷烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(2)杨树花药材偏脂溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(3)杨树花药材中极性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个棕褐色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(4)杨树花药材偏水溶性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶3∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(5)杨树花药材水溶性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4.5∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显2个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至黄色斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显1个相同的亮蓝绿色荧光主斑点；再继续加热至斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，从非极性到极性连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.杨树花药材以体积比20∶1∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，在紫外光灯365nm和254nm下无任何斑点信息，但喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后紫外光灯365nm下检视到1个亮淡蓝色荧光主斑点和2个蓝色的Rf值较低的斑点(图1)，主斑点在目光下为淡粉色的，2个Rf值较低的荧光斑点不太清晰(图2)。所以在脂溶性成分中仅检视主斑点。
2.杨树花药材以体积比8∶2∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，在紫外光灯365nm下检视到4个荧光斑点，一个红色的，一个绿色的，两个蓝色的(图3)；在紫外光灯254nm下检视到的2个棕褐色斑点，从Rf值看，与荧光斑点不在同一位置，不是同一成分(图4)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到6个斑点，其中2个淡粉色荧光斑点、2个淡黄绿色荧光斑点、1个蓝色荧光斑点、还有1个棕褐色无荧光斑点(图5)，再置暗室内透过灯光检视，呈现了5个不同颜色斑点(图6)；在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，共检出偏脂溶性成分斑点10个。
3.杨树花药材以体积比2∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，在紫外光灯365nm下检视到3个不同颜色荧光斑点，其中2个黄绿色的，一个蓝紫色的(图7)；在紫外光灯254nm下检视到的2个棕褐色斑点，从Rf值看，与荧光斑点不在同一位置，不是同一成分(图8)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到3个荧光斑点，其中2个黄绿色，1个亮蓝色(图9)；再置暗室内透过灯光检视，呈现了3个颜色斑点(图10)，从Rf值看，与显色后的荧光斑点不是同一种成分；在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，共检出中极性成分斑点9个。
4.杨树花药材以体积比2∶3∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的为展开剂，展开后，在紫外光灯365nm下检视到4个荧光斑点，1个绿色的，3个亮蓝紫色的(图11)；在紫外光灯254nm下检视到4个棕褐色斑点，其中3个斑点，从Rf值看，与荧光斑点不在同一位置，不是同一种成分(图12)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到5个荧光斑点，其中4个黄绿色，1个亮蓝色(图13)；再置暗室内透过灯光检视，呈现了6个颜色斑点(图14)，从Rf值看，其中3个与显色后的荧光斑点不是同一种成分；在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，共检出偏水溶性成分斑点9个。
5.杨树花药材以体积比1∶2∶4.5∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液的为展开剂，展开后，在紫外光灯365nm下检视到3个荧光斑点，1个绿色的，2个亮蓝紫色的(图15)；在紫外光灯254nm下检视到2个棕褐色斑点，从Rf值看，与荧光斑点不在同一位置，不是同一种成分(图16)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到1个非常亮的蓝绿色荧光主斑点(图17)；再置暗室内透过灯光检视，呈现了1个棕褐色斑点(图18)，从Rf值看，与荧光斑点不是同一种成分；在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，共检出水溶性成分5个。
6.用5种极性不同的展开剂，在5块薄层板上，4种检视条件下，共检出互不重合的脂溶性、中极性与水溶性信息斑点34个，形成了一套杨树花全信息梯度薄层鉴别方法，并提供了参考图谱。该系统研究还未见相同报道，具有创新性、新颖性和实用性。
7.方法简便、快捷、药材与对照药材，只需甲醇超声，上清液点样，展开，即可。显色剂是极常用的10％硫酸乙醇溶液，为一种共用显色剂，可与大多数有机化合物反应，呈呈现荧光斑点或不同的颜色斑点，便宜、易得，利于方法的普及推广。
8.本鉴别方法只需药材和对照药材各0.3g、提取溶剂4ml、展开剂50ml、时间1.5小时。与兽药典方法相比，检测一批药材可节约时间1小时，但检测到的信息斑点，至少是兽药典的10倍。若以单一薄层板的信息斑点相比，也比兽药典信息斑点多。
附图说明
图1为杨树花药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图2为杨树花药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的薄层TLC图。
图3为杨树花药材偏脂溶性成分紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图4为杨树花药材偏脂溶性成分紫外光灯254nm下检视的薄层TLC图。
图5为杨树花药材偏脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图6为杨树花药材偏脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图7为杨树花药材中极性成分在紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图8为杨树花药材中极性成分在紫外光灯254nm下检视的薄层TLC图。
图9为杨树花药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图10为杨树花药材中极性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图11为杨树花药材偏水溶性成分在紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图12为杨树花药材偏水溶性成分在紫外光灯254nm下检视的薄层TLC图。
图13为杨树花药材偏水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图14为杨树花药材偏水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图15为杨树花药材水溶性成分在紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图16为杨树花药材水溶性成分在紫外光灯254nm下检视的薄层TLC图。
图17为杨树花药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图18为杨树花药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图1、2为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.5杨树花对照药材；2.3.4为杨树花药材。
图3、4、5、6为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.5杨树花对照药材；2.3.4为杨树花药材。
图7、8、9、10为一块薄层板不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.5杨树花对照药材；2.3.4为杨树花药材。
图11、12、13、14为一块薄层板不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.4杨树花对照药材；2.3为杨树花药材。
图15、16、17、18为一块薄层板不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.5杨树花对照药材；2.3.4为杨树花药材。
本发明具体实施方式如下：
(1)杨树花药材脂溶性成分薄层鉴别取杨树花药材和对照药材各0.3g，研细，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品和杨树花对照药材溶液；吸取对照药材溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为20∶1∶0.1的环己烷烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(2)杨树花药材偏脂溶性成分薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(3)杨树花药材中极性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个棕褐色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(4)杨树花药材偏水溶性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶3∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点。
(5)杨树花药材水溶性成分的薄层鉴别吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4.5∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显2个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至黄色斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显1个相同的亮蓝绿色荧光主斑点；再继续加热至斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
Claims (2)
1.一种杨树花药材的梯度多信息薄层鉴别方法，其特征在于：由以下步骤组成：(1)杨树花药材脂溶性成分薄层鉴别，(2)杨树花药材偏脂溶性成分薄层鉴别，(3)杨树花药材的中极性成分薄层鉴别，(4)杨树花药材偏水溶性成分的薄层鉴别，(5)杨树花药材水溶性成分的薄层鉴别；
(1)杨树花药材脂溶性成分薄层鉴别：取杨树花药材和对照药材各0.3g，研细，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为供试品和杨树花对照药材溶液；吸取对照药材溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为20∶1∶0.1的环己烷烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)杨树花药材偏脂溶性成分薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点；
(3)杨树花药材的中极性成分薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个棕褐色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点；
(4)杨树花药材偏水溶性成分的薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为2∶3∶4∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点；
(5)杨树花药材水溶性成分的薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4.5∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色荧光斑点；置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显2个相同颜色斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至黄色斑点呈现，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显1个相同的蓝绿色荧光主斑点；再继续加热至斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种杨树花药材的梯度多信息薄层鉴别方法，其特征在于按非极性、中极性、极性的排列顺序，以5种极性不同展开剂，在5块薄层板上共检出特征性斑点30余个，总花费时间1.5小时、提取溶剂4ml、展开剂50ml。
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