CN105181847A - 一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，以极性、中极性、非极性三种不同的展开剂，在三薄层板上，8种检视条件下，共检出互不重合的信息斑点17种，斑点清晰，分离度好。且方法之简便、快捷、无污染，检测信息之多，是目前已报道方法都不具备的。为半枝莲药材原粉入药、乙醇提取以及水提取入药的复方制剂，提供了脂溶性、中极性以及水溶性成分的多信息梯度薄层色谱图与鉴别方法，用以评价药品质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法。
背景技术
所谓的中药材多信息梯度薄层鉴别，顾名思义就是将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解原则，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能多的斑点信息图谱，由此组成一套从水溶性到脂溶性成分的全息薄层色谱图，提供不同工艺制备的多种制剂，作为质量评价的检测指标。
中药半枝莲为中国药典历版所收载品种，具清热解毒，化瘀利尿的功效，用于疔疮肿毒，咽喉肿痛，跌扑伤痛，水肿，黄疸，蛇虫咬伤。是一种临床上的常用药材。主含黄酮类成分，如黄芩素、汉黄芩素、芹菜素、木犀草素、柚皮素、野黄芩苷、7-羟基-5，8二甲氧基黄酮、7-羟基-5，8二甲氧基黄酮-7-0-β-D-葡萄糖苷、5、7、8、2-四羟基黄酮-7-0-β-D-葡萄糖苷等，还含有一些二萜和三萜内酯类等。这些成分从结构分析，既有脂溶性的，又有中极性的，还有水溶性的。但在中国药典2010年版一部半枝莲药材项下还未收载薄层鉴别项目。查阅文献，有一些报道，但多数都是以野黄芩苷为指标，展开剂有乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)，正丁醇-丙酮-水(4∶5∶1)和乙酸乙酯-甲酸-水(20∶2∶0.5)；其检视条件，按前述的3种展开剂顺序，分别是喷以1％三氯化铁乙醇溶液，日光下检视墨绿色斑点；喷以a一萘酚-硫酸液，加热显色，观察颜色斑点；喷1％三氯化铝乙醇溶液显色后，检视荧光斑点。还查阅到一项发明专利，题目是《鉴别半枝莲药材成分的方法》，专利号：03117343.8，专利方法如下.
取被鉴别药材粉末1g，研细，加乙醚20ml，回流30分钟，滤过，弃乙醚液，药渣挥发去乙醚，加甲醇30ml，加热回流30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加水5ml使其溶解，将其置已处理好的D-101净品型大孔吸附树脂柱上，用40ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20％甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取标准半枝莲对照药材1g，按上述方法制成对照药材溶液；再取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg野黄芩苷的溶液，作为对照品溶液；按照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10ul，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水，其重量份比例为5∶3∶1∶1，为展开剂，预平衡20分钟，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，当供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并且在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗绿色斑点时，即鉴别为含有半枝莲药材成分。
按专利方法的操作程序计算，该鉴别仅供试品溶液、对照药材溶液与野黄芩苷对照品溶液制备就要花费时间约4小时、有机溶剂163ml。且检测信息单一，仅是能和三氯化铁呈现颜色的酚羟基化合物，属于中极性化合物。
为给半枝莲药材及其不同工艺制备的多种制剂，提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息鉴别方法，对半枝莲药材及其水取物，进行了专题多信息梯度薄层鉴别研究。
半枝莲药材水提取物或配方颗粒的制备方法取半枝莲饮片13000-14000g，分别加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小时，滤过，滤液70℃减压浓缩，浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥，得水提取物干膏粉；或加糊精适量，混匀，制粒，制成1000g，分装，得水提取物配方颗粒。
发明内容
本发明就是针对半枝莲还没有法定薄层鉴别方法，以及虽有一些文献与专利方法，但方法前处理繁琐，检测信息量少，无法检测药材中所含的大部分成分。参照高效液相有效成分的梯度测定，尝试了半枝莲及其水提取物的梯度薄层鉴别，通过展开剂的不同组合与其比例、显色剂、薄层载体以及检测条件等参数研究，获得以极性、中极性、非极性三种不同的展开剂，在三薄层板上，8种检视条件下，共检出互不重合的信息斑点17种，斑点清晰，分离度好。且方法之简便、快捷、无污染，检测信息之多，是目前已报道方法都不具备的。为半枝莲药材原粉入药、乙醇提取以及水提取入药的复方制剂，提供了脂溶性、中极性及水溶性成分的多信息梯度薄层色谱方法，作为质量评价指标。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)半枝莲药材脂溶性成分薄层鉴别取半枝莲药材与半枝莲对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，取上清液作为供试品与对照药材溶液。吸取供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比6∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)半枝莲药材中极性成分薄层鉴别吸取鉴别(1)项下的供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶2∶3.5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以2％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热1-2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(3)半枝莲药材及其水提取物或半枝莲颗粒的水溶性成分薄层鉴别取半枝莲水提取物或半枝莲颗粒适量，研细，称取0.2g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。吸取供试品溶液与鉴别(1)项下对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.5∶0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，按极性大小连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.半枝莲药材以体积比6∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，获得紫外光灯254nm下检视到的2个棕褐色斑点；紫外光灯365nm下检视到的6个红色荧光信息斑点(可能为叶绿素类成分)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后紫外光灯365nm下检视到的6个荧光斑点，其中3个为红色荧光，2个为天兰色荧光，1个为兰绿色荧光；透过灯光检视到的5个清晰的颜色斑点，其中2个为暗红色，1个为棕色，2个为棕绿色；同一块薄层板，在4种不同的检视条件下，共检出互不重合的脂溶性信息斑点10个，最少为10种化学成分。为以半枝莲药材原粉入药的多种制剂，提供了可供选择的脂溶性成分的多信息薄层色谱图与其鉴别方法。
2.半枝莲药材以体积比8∶2∶3.5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨的下层溶液为展开剂，展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的3个红色荧光斑点；喷雾2％三氯化铝乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视到的2个荧光信息斑点，其中1个为红色的，1个为亮兰色的；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后紫外光灯365nm下检视到的7个荧光斑点，其中4个为兰色的，1个为红色的，1个为黄色的，一个为浅红色的；同一块薄层板，在3种不同的检视条件下，共检出互不重合的中极性信息斑点7个，最少为7种化学成分。为以半枝莲药材及乙醇提取入药的多种制剂，提供了中极性成分的多信息薄层图谱与鉴别方法。
3.半枝莲药材及其水提取物或配方颗粒以体积比8∶3∶1∶0.5∶0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的1个亮兰色荧光主斑点，是一种含量比较高的水溶性成分。为以水提取入药的多种制剂，提供了水溶性成分的薄层鉴别图与鉴别方法。
4.用三种极性不同的展开剂，在3块薄层板上，8种检视条件下，共检出互不重合的信息斑点17种，至少是17种不同的化学成分。这种半枝莲及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法，还未见相同报道。
5.方法简便、快捷、样品与对照药材，只需甲醇超声，滤液或上清液点样，展开，检视，即可。共需样品处理溶剂9ml，处理时间20分钟，对照药材取用量是专利方法的1/3，仅0.3g，充分说明了检测技术创新的必要性。
6.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：中极性成分的展开剂是碱性展开剂，而已报道方法是酸性或偏酸性展开剂。本鉴别利用了展开剂的碱性，使一些酸性的物质成盐，以离子体形式存在，克服了多酚羟基化合物的斑点拖尾现象，使各斑点收缩、集中，才呈现出分离良好的中极性多信息薄层色谱图。
附图说明
图1为半枝莲药材脂溶性成分在紫外光灯254nm下的薄层TLC图。
图2为半枝莲药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图3为半枝莲药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图4为半枝莲药材脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC图。
图5为半枝莲中极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图6为半枝莲中极性成分喷雾2％三氯化铝乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图7为半枝莲中极性成分喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图8为半枝莲与水提取物的水溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图1、2、3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.5.6.7为半枝莲药材；4.为半枝莲对照药材。
图5、6、7为另一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.5.6.7为半枝莲药材；4.为半枝莲对照药材。
图8为一块薄层板其中，1.2.3.5.6.7为半枝莲药材；4.为半枝莲对照药材。
本发明具体实施方式如下：
(1)半枝莲药材脂溶性成分薄层鉴别取半枝莲药材与半枝莲对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，取上清液作为供试品与对照药材溶液。吸取供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比6∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；再透过灯光检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)半枝莲药材中极性成分薄层鉴别吸取鉴别(1)项下的供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶2∶3.5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以2％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热1-2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；
(3)半枝莲药材及其水提取物或配方颗粒的水溶性成分薄层鉴别取半枝莲水提取物或配方颗粒适量，研细，称取0.2g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。吸取供试品溶液与鉴别(1)项下对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.5∶0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点。
Claims (3)
1.本发明涉及一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)半枝莲药材脂溶性成分薄层鉴别取半枝莲药材与半枝莲对照药材各0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，取上清液作为供试品与对照药材溶液；吸取供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比6∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；透过灯光检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
(2)半枝莲药材中极性成分薄层鉴别吸取鉴别(1)项下的供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶2∶3.5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；喷以2％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热1-2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与半枝莲对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；
(3)半枝莲药材及其水提取物或配方颗粒的水溶性成分薄层鉴别取半枝莲水提取物或配方颗粒适量，研细，称取0.2g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。吸取供试品溶液与鉴别(1)项下对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.5∶0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水(8∶3∶1∶0.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法，其特征在于所述的半枝莲水提取物每1g相当原生药材13～14g。
3.根据权利要求1所述的一种半枝莲药材及其水提取物的多信息梯度薄层鉴别方法，其特征在于所述水提取物也可以是其水提取的配方颗粒。
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