CN105021762A - 一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，2种不同的检视条件下检视了酸枣仁提取物的多信息薄层鉴别图，各斑点清晰，相互交错，但又互不干扰。与常规的单信息薄层相比，不但提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

Description

一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法

技术领域

本发明涉及一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。

背景技术

酸枣仁为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子，含大量油脂。具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津之功效。临床上用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴。因含大量油脂，其薄层鉴别一般都要先进行除油脂处理，又因所含的指标性有效成分酸枣仁皂苷A和斯皮诺素含量太低，其各自含量仅有万分之几，经过水提取的制剂，折合上提取率就更低了。尤其在提取制剂中的薄层鉴别，仅样品的前处理，就要花费近一天的时间，有机溶剂数百ml，效率低、环境污染严重、危害操作人员的身体健康。所以在不少制剂中都放弃了对酸枣仁的薄层鉴别，也就无法对酸枣仁的投料情况进行监督。以中国药典2010年版药典一部为例，就其制剂的薄层鉴别方法，随机摘录列举3例：

A.安神宝颗粒中酸枣仁薄层鉴别

取本品28g或20g(无蔗糖)，研细，加甲醇60ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取三次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，弃去氨洗涤液，再用水洗涤2次，每次40ml，分取正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用水5ml溶解，通过D101型大孔树脂柱(内径0.9cm，柱高为10cm)，用水40ml和40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，再用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液2μl、供试品溶液5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照，鉴别一批样品，仅样品前处理就要花费7小时、有机溶剂260ml。5％香草醛硫酸溶液属于浓酸，腐蚀性强，安全性欠佳。展开剂为正丁醇体系，展开速度非常缓慢，展距10cm约花费时间最少2小时。

B.健脑胶囊中酸枣仁的薄层鉴别

取本品内容物10g，加乙醚60ml，超声处理30分钟，弃去乙醚液，残渣挥干，加甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，通过D101型大孔树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)，用水70ml洗脱，弃去洗脱液，再用20％乙醇70ml洗脱，弃去洗脱液，继用60％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml使溶解，取水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15ml，正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照，鉴别一批样品，仅样品前处理就要花费7小时、有机溶剂360ml。2％香草醛硫酸溶液属于浓酸，腐蚀性强，安全性欠佳。展开剂为正丁醇，展开速度非常缓慢，展距10cm约花费时间最少2小时。

C.健脑丸中酸枣仁的薄层鉴别

取本品内容物10g，研细，加乙醚60ml，超声处理30分钟，弃去乙醚液，取药渣，挥干，加甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，通过D101型大孔树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)，先后用水和20％乙醇各70ml洗脱，弃去洗脱液，再用60％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15ml，正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照，鉴别一批样品，仅样品前处理就要花费时间7小时、有机溶剂360ml。2％香草醛硫酸溶液属于浓酸，腐蚀性强，安全性欠佳。展开剂为正丁醇，展开速度非常缓慢，展距10cm约花费时间最少2小时。

由上述酸枣仁制剂中的薄层鉴别实例，印证了目前为止，其鉴别的繁琐性、复杂性、费时性、对周围环境的污染性以及高成本、低效率。所以提高检测效率、降低检测成本、减少环境污染，创建酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，成了检测人员刻不容缓的奋斗目标，我们就是在该背景条件下，发明了酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。

酸枣仁药材水提取物或配方颗粒的制备方法酸枣仁饮片13500-14800g，分别加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小时，滤过，滤液70℃减压浓缩，浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥，得各水提取物干膏粉；或加糊精适量，混匀，制粒，分别制成1000g，分装，得其水提取配方颗粒。

发明内容

本发明就是针对酸枣仁在复方制剂中薄层鉴别繁琐、费时、方法污染环境和高成本的弊端，发明了一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。即，用最简便、快捷、无污染的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，获得酸枣仁水提取物在紫外光灯254nm、以及喷雾体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液显色后日光、2种检视条件下的多信息薄层鉴别图，斑点清晰，相互交错，但又互不干扰(见图1、2)。使酸枣仁水提取物不再沿用传统的繁琐、费时、高成本、低效率的方法，既提高了酸枣仁提取物的质量可控性，而利于质量监督，还提高了检测效率、节约了成本，减少了环境污染。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

取酸枣仁水提取物适量，研细，称取0.2～0.3g，加70％甲醇4ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，加水50ml，小火煎煮30分钟，滤过，滤液蒸干，残留物加70％甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液与对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比1∶2∶4.2∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；再喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色主斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再通过展开剂的移动，各成分在薄层板上的吸附、解吸附能力的不同，使其斑点得以分离。又借助各成分极性大小，选取极性近似的有效成分，在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，获得多信息的薄层色谱图。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.酸枣仁水提取物的前处理方法：简便、快捷、样品只需含水甲醇超声提取，滤液即为供试品溶液；对照药材用水煎煮后，滤液蒸干，残渣以含水甲醇定容即可；共花费前处理时间1小时、有机溶剂5ml。与报道方法相比，每检测一批样品，节约时间6小时、有机溶剂255-355ml。

2.检测的信息量是紫外光灯(254nm)下的2-3个棕褐色斑点和显色后日光下的红色斑点。该二种检视条件下的信息斑点，从其Rf值分析，不是同一种成分，有效提高了检测信息量。而且日光下的红色斑点，颜色鲜亮，不容易被其他斑点覆盖，可以作为复方制剂中的特征点。

3.酸枣仁对照药材，采用水煎煮、含水甲醇定容的方法，取代传统的有机溶剂脱脂、柱色谱洗脱和正丁醇萃取除杂的方法，简便，快捷，成本低、无污染、既保证了药材与提取物薄层图谱的一致，又为含油脂的种子类药材提供了薄层样品前处理新思路。

4.本发明显色剂中硫酸的浓度大约在14％左右，86％是乙醇溶液，腐蚀性低，比重轻，雾化均匀，显色效果清晰；而报道文件的显色剂中硫酸为浓硫酸，浓度高、腐蚀性强，比重大，雾化不好，影响显色效果。

5.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：本鉴别的展开剂是体积比1∶2∶4.2∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨，属于碱性展开剂，而已报道方法是正丁醇-冰醋酸-水或水饱和的正丁醇，属于酸性和中性展开剂，且展开速度非常缓慢，刺激性气味大，一般展距10cm，要花费时间1.5-2小时。本鉴别展开剂展开速度快，一般展距10cm，约花费时间0.5小时，而且可以将一些酸性的物质，拖在原点，使其不随展开剂移动或移动缓慢，克服薄层板的背景干扰，实现样品和对照药材不经纯化处理，也能获得清晰的薄层色谱图。

附图说明

图1为酸枣仁提取物在紫外光灯254nm下的薄层TLC图。

图2为酸枣仁提取物显色后，日光下的薄层TLC图。

图1、2为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.5为酸枣仁水提取物；4.为酸枣仁对照药材

本发明具体实施方式如下：

取酸枣仁水提取物适量，研细，称取0.2g，加70％甲醇4ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，加水50ml，小火煎煮30分钟，滤过，滤液蒸干，残留物加70％甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液与对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比1∶2∶4.2∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；再喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色主斑点。

Claims (3)

1.本发明涉及一种酸枣仁水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于：

(1)取酸枣仁水提取物适量，研细，称取0.2～0.3g，加70％甲醇4ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，加水50ml，小火煎煮30分钟，滤过，滤液蒸干，残留物加70％甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液与对照药材溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比1∶2∶4.2∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；再喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色主斑点。

2.根据权利要求1所述的一种酸枣仁药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于所述的酸枣仁水提取物每1g相当原生药材13.5～14.8g。

3.根据权利要求1所述的一种酸枣仁药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于所述水提取物也可以是其水提取的配方颗粒。