CN115097058A - 南酸枣的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

南酸枣的薄层色谱鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法，属于中药材鉴别技术领域。该薄层色谱鉴别方法是以南酸枣苷为对照品，并配合南酸枣对照药材对南酸枣样品进行鉴别；具体包括供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液的制备，薄层色谱鉴别试验，以及将供试品色谱分与对照药材色谱和对照品色谱进行对比等步骤。采用该方法对南酸枣药材样品进行检测分析，得到的薄层色谱，分离效果好，斑点圆整清晰，重现性好；且该方法操作方便、耐用性良好、适用性强，显色容易，展开速率快，结果易于判断。采用本发明方法能对南酸枣药材进行快速准确的鉴别，填补了南酸枣薄层色谱鉴别技术的空缺，为南酸枣的鉴别提供依据。

Description

南酸枣的薄层色谱鉴别方法
技术领域
本发明属于中药材鉴别技术领域，具体涉及一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法。
背景技术
南酸枣（Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill.），又名五眼果、酸枣、鼻子树（云南、广西、贵州），棉麻树、醋酸树（广东）等，系漆树科南酸枣属植物，主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、海南、广西、贵州、云南、西藏等地。生于海拔300-2000m的山坡、丘陵或沟谷林中，喜光，速生，适应性强。南酸枣为较好的速生造林树种，树皮和叶可提栲胶，果可生食或酿酒，果核可作活性炭原料，茎皮纤维可作绳索。南酸枣以其树皮和果入药，有消炎解毒、止血止痛之效，外用治大面积水火烧烫伤。树皮主治疮疡、汤火伤、阴囊湿疹；鲜果则消食滞，治食滞腹痛；果核醒酒解毒，治风毒起疙瘩成疮或疡痈。《浙江民间常用草药》、《广西中草药》、《全国中草药汇编》、《福建药物志》等书都对其功能主治、药理药性等药用价值和地域分布以及来源进行了简要讲述。
南酸枣树皮药材为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris (Roxb.)Burttet Hill.的干燥树皮，全年可采收，清洗，晒干或熬膏。性味： 酸涩，凉。功能主治：解毒，收敛，止痛，止血；用于烧烫伤，外伤出血，牛皮癣。归脾、胃经，在壮族里常认为其具有清热解毒、祛湿、杀虫并主疮疡、烫火伤、阴囊湿疹、痢疾、白带、疮癣。临床上将南酸枣树皮应用于治疮疡，烫火伤，阴囊湿疹；内服清热解毒，祛湿，杀虫。民间用于治疗烧烫伤，有特效。南酸枣以树皮和果入药，但目前国内外对南酸枣果研究较多,对其树皮研究甚少。有关南酸枣树皮的现代研究报道主要集中在化学成分研究和抗菌、抗心肌缺血、抗缺氧等方面的报道，而对于南酸枣树皮药材的鉴别方法却鲜有报道。南酸枣树皮具有较高的药用价值，而一种能对南酸枣药材进行快速准确鉴别的方法对于保障南酸枣的用药安全具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供的一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法，所述南酸枣为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill.的干燥树皮，该薄层色谱鉴别方法是以南酸枣苷为对照品，并配合南酸枣对照药材对南酸枣样品进行鉴别。采用该方法对南酸枣药材样品进行分析，得到的薄层色谱，分离效果好，斑点圆整清晰，同时展开速率快，结果易于判断，能对南酸枣进行快速准确的鉴别。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法，该鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液和对照药材溶液的制备：取待检南酸枣树皮样品粉末1g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加正丁醇饱和的水25ml使其溶解，加水饱和的正丁醇25ml振摇提取，分取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次25ml，弃去水液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取南酸枣树皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
（2）对照品溶液的制备：取南酸枣苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；
（3）鉴别：照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各
2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5∶10∶1∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
上述南酸枣的薄层色谱鉴别方法，步骤（1）中所述的正丁醇饱和的水和水饱和的正丁醇的配制方法为：将正丁醇与水按照体积比为1:1的比例放入分液漏斗，充分摇匀，静置至完全分层，分取上下层溶液；上层溶液为：水饱和的正丁醇，下层溶液为：正丁醇饱和的水。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法，该薄层色谱鉴别方法是以南酸枣苷为对照品，并配合南酸枣对照药材对南酸枣样品进行鉴别。采用该方法对南酸枣树皮药材样品进行分析，得到的薄层色谱，分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性好；且该方法操作方便、设备简单、显色容易，同时展开速率快，结果易于判断。而且本发明进行了耐用性实验考察，结果显示本发明建立的南酸枣的薄层色谱鉴别方法对不同展开湿度、不同品牌薄层板等均具有良好的耐用性，适用性强，分离效果好。采用本发明方法能对南酸枣树皮药材进行快速准确的鉴别，填补了南酸枣薄层色谱鉴别技术的空缺，为南酸枣的鉴别提供了依据，为南酸枣的用药安全提供了可靠保障。
附图说明
图1 南酸枣原植物图。
图2 南酸枣腊叶标本图。
图3 南酸枣树皮药材图。
图4 不同产区的南酸枣树皮样品TLC图，图中，1、 NSZ-1，2、 NSZ-2，3、NSZ-3，4、NSZ-4，5、 NSZ-5，6、 NSZ-6，7、 NSZ-7，8、 NSZ-8，9、NSZ-9 ，10、NSZ-10，11、南酸枣对照药材，12、南酸枣苷对照品，A、B、C、D均呈红棕色条状斑点。
图5 不同提取方法下南酸枣树皮样品TLC图，图中，1、NSZ-1加热回流30分钟，2、NSZ-1加热回流60分钟，3、NSZ-1超声60分钟，4、NSZ-1超声30分钟，5、南酸枣苷对照品， A、B、C均呈红棕色斑点。
图6 按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在展开温度为4℃的条件下检测得到的南酸枣树皮样品TLC图，图中，1、NSZ-1，2、NSZ-2，3、NSZ-3，4、NSZ-4，5、NSZ-5，6. NSZ-6，7、NSZ-7，8、NSZ-8，9、NSZ-9，10、NSZ-10，11、南酸枣对照药材，12、南酸枣苷对照品，A、B、C、D均呈红棕色条状斑点。
图7 按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在相对湿度为90RH%的条件下展开得到的南酸枣树皮样品TLC图，图中，1、NSZ-1，2、NSZ-2，3、NSZ-3，4、NSZ-4，5、NSZ-5，6.NSZ-6，7、NSZ-7，8、NSZ-8，9、NSZ-9，10、NSZ-10，11、南酸枣对照药材，12、南酸枣苷对照品，A、B、C、D均呈红棕色斑点。
图8南酸枣树皮样品TLC图（耐用性-青岛硅胶G薄层板），图中，1、NSZ-1，2、NSZ-2，3、NSZ-3，4、NSZ-4，5、NSZ-5，6. NSZ-6，7、NSZ-7，8、NSZ-8，9、NSZ-9，10、NSZ-10，11、南酸枣对照药材，12、南酸枣苷对照品，A、B、C、D均呈红棕色条状斑点。
图9 南酸枣树皮样品TLC图（耐用性-烟台银龙板），图中，1、NSZ-1，2、NSZ-2，3、NSZ-3，4、NSZ-4，5、NSZ-5，6. NSZ-6，7、NSZ-7，8、NSZ-8，9、NSZ-9，10、NSZ-10，11、南酸枣对照药材，12、南酸枣苷对照品，A、B均呈红棕色斑点。
具体实施方式
为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。
实施例1
【来源】漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill.的干燥树皮。
1、样品收集情况：共收到南酸枣树皮样品11批，详细信息见表1。南酸枣原植物图和南酸枣腊叶标本图见图1和图2。
Figure 179897DEST_PATH_IMAGE001
备注：南酸枣树皮样品NSZ-11同时制成腊叶标本，经广西中医药大学韦松基教授鉴定，确定为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill.的干燥茎皮。实验中以该样品作为南酸枣树皮的对照药材与其他样品进行对比；完成样品收集后，将所有10份样品进行粉碎处理，并统一过80目筛，备用。
南酸枣树皮的性状：本品呈不规则块片状、槽状或半卷筒状，长宽不一，厚3～8mm。外表面粗糙，灰棕色或灰褐色，有片状剥落，内表面类白色或淡黄色。质硬，不易折断，断面呈层片状，易剥离成薄片，每层薄片均可见极细的网纹。无臭，味淡。（南酸枣树皮药材图见图3）。
2、南酸枣的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤：
（1）供试品溶液和对照药材溶液的制备：取待检南酸枣树皮样品粉末1g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加正丁醇饱和的水25ml使其溶解，加水饱和的正丁醇25ml振摇提取，分取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次25ml，弃去水液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取南酸枣树皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；正丁醇饱和的水和水饱和的正丁醇的配制方法为：将正丁醇与水按照体积比为1:1的比例放入分液漏斗，充分摇匀，静置至完全分层，分取上下层溶液；上层溶液为：水饱和的正丁醇，下层溶液为：正丁醇饱和的水；
（2）对照品溶液的制备：取南酸枣苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；
（3）鉴别：照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各
2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
采用上述南酸枣的薄层色谱鉴别方法对表1中的10批样品进行薄层色谱鉴别，以南酸枣树皮样品NSZ-11作为对照药材，结果显示，10批样品的供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。且薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，重现性较好。
10批不同产区的南酸枣树皮样品TLC图见图4，色谱条件：硅胶G薄层板，生产厂家：Merck公司；批号：HX16958826；规格：10cm×20cm；条状点样，点样量：2μl；温度：30℃；相对湿度：70RH%；展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)；显色：喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。从10批不同产区的南酸枣树皮的薄层鉴别图谱可以看到，各批次与NSZ-11对照药材在相同的位置具相同颜色斑点。
3、实验考察：对不同极性的展开系统进行对比，如环己烷-甲苯-乙酸乙酯（5∶4∶1）、环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1∶1）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）和三氯甲烷-甲醇-甲酸（6∶1∶1）等，最终以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)为展开剂，展开效果比较好，斑点得到很好的分离且相对清晰，因此选用该展开系统作为本发明薄层鉴别的展开剂，并确定在日光下检视。
4、对本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法进行耐用性实验：按《中国药典》2020年版四部要求，分别对不同提取方式、不同提取溶剂、不同浓度展开剂、不同品牌薄层板、不同展开温度及湿度、不同点样方式等因素条件进行薄层层析行为的考察。具体如下：
（1）不同提取方式的考察：按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在其它条件相同的情况下分别对加热回流30分钟，加热回流60分钟、超声60分钟、超声30分钟及不同提取方法进行层析考察。结果：上述四种提取方法下TLC分离效果均良好，前三种方式提取效率比较高。不同提取方法下南酸枣树皮样品TLC图见图5。
（2）不同展开温度的考察：按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在其它条件相同的情况下在4℃展开。结果：上述温度条件下TLC分离效果良好，见图6，具体色谱条件为：硅胶G薄层板，生产厂家：青岛海洋化工有限公司；批号：20181220；规格：10cm×20cm ；条状点样，点样量：2μl；温度：4℃（±2℃）；相对湿度：70RH%（±4%） 展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)。
（3）不同展开湿度的考察：按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在其它条件相同的情况下在相对湿度90RH%展开。结果：上述湿度条件下TLC分离效果良好，见图7，具体色谱条件为：硅胶G薄层板，生产厂家：青岛海洋化工有限公司；批号：20181220；规格：10cm×20cm ；点状点样，点样量：2μl；温度：30℃（±2℃）；相对湿度：90RH%（±4%） 展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)。
（4）不同品牌薄层板的考察：按照本发明南酸枣的薄层色谱鉴别方法，在其它条件相同的情况下分别对烟台市化学工业研究所（批号20210531，100×200mm）和青岛海洋化工有限公司（批号20181220，100×200 mm)两个品牌的硅胶G预制薄层板进行层析考察。结果：两个品牌的硅胶G预制板TLC均能达到分离效果。
采用青岛海洋化工有限公司品牌的硅胶G薄层板进行检测得到的南酸枣树皮样品TLC图见图8，色谱条件：硅胶G薄层板，生产厂家：青岛海洋化工有限公司；批号：20181220；规格：10cm×20cm ；条状点样，点样量：2μl；温度：30℃（±2℃）；相对湿度：70RH%（±4%）展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)。采用烟台市化学工业研究所品牌的硅胶SG薄层板进行检测得到的南酸枣树皮样品TLC图见图9，色谱条件：硅胶SG薄层板，生产厂家：烟台市化学工业研究所；批号：20210531；规格：10cm×20cm ；点状点样，点样量：5μl；温度：30℃（±2℃）；相对湿度：70RH%（±4%）展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5∶10∶1∶1)。
从耐用性实验结果可见，本发明建立的南酸枣的薄层色谱鉴别方法耐用性良好，适用性强，分离效果好。

Claims (1)

1.一种南酸枣的薄层色谱鉴别方法，其特征在于，该鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液和对照药材溶液的制备：取待检南酸枣树皮样品粉末1g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加正丁醇饱和的水25ml使其溶解，加水饱和的正丁醇25ml振摇提取，分取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次25ml，弃去水液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取南酸枣树皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
（2）对照品溶液的制备：取南酸枣苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液；
（3）鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5∶10∶1∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
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